Способ диагностики рассеянного склероза Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

i

СП

Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики рассеянного склероза. Целью изобретения является повышение точности.1 Способ диагностики рассеянного склероза осуществляется путем забора крови у пациента до и через 30 мин после введения раствора резерпина и определения числа иммунных розеток лимфоцитов крови с эритроцитами барана, нагруженными серотонином в обеих пробах. При неизменном значении показателя по сравнению с исходным диагностируют рассеянный склероз.Точность диагностики повышается на 17 - 22%.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике заболеваний, может быть использовано для распознавания рассеянного склероза (PC).

Цель изобретения - повышение точности диагностики рассеянного склероза.

Способ осуществляют следующим образом.

Забирают 0,05-0,1 мл крови из пальца больного PC в 0,05-0,1 мл 5%-ного раствора цитрата натрия для предупреждения свертывания крови. Вводят больному подкожно 0,5 мл 2,5%-ного раствора резерпина.Через 30 мин повторно забирают кровь,как описано ранее. После тщательногоt встряхивания пробирки в нее добавляют для дозирования эритроцитов 0,8-0,9 мл дистиллированной воды на 30 с, а потом доливают до 9-10 мл

среды 199 для восстановления рН 7,0. Пробирки центрифугируют 5-10 мин при 1500 об/мин, после чего надосадочную жидкость сливают, а осадок лейкоцитов ресуспендируют в 0,1-0,2 мл изотонического раствора хлорида натрия или среды 199. К полученной взвеси добавляют 0,1-0,2 мл 0,5%-ной взвеси глютаризированных эритроцитов барана, нагруженных серотонином, смесь инкубируют 10-15 мин при +37,0-37,5°С, после чего центрифугируют при 1500 об/мин 5-10 мин. Надосадочную жидкость удаляют пипеткой, осадок ресуспендируют в капле любой интакт- ной сыворотки (бычьей, лошадиной, человеческой). Из полученной суспензии клеток делают мазок, фиксируют в метиловом или этиловом спирте,высушивают, окрашивают по Романовскому- Гимза. Лод микроскопом рассматривают iOO лимфоцитов, отмечая среди них

05 4ь

о о сп

со

число (%) клеток, фиксировавших на себе три и более эритроцитов (РОК). Зная содержание в крови больного лимфоцитов (%) и общее количество лей- коцитов, высчитывают абсолютное содержание РОК в 1 мл крови.

Обработку эритроцитов барана в глютаровом альдегиде производят следующим образом: соединяют 1 мл 5%-ной взвеси тщательно отмытых нативных бараньих эритроцитов с 0,25%-ным раствором глютарового альдегида в соотношении 1:1. Смесь выдерживают при 37,0 С в течение 15 мин, после чего эритроциты дважды отмывают от альдегида забуференным изотоническим раствором хлорида натрия рН 7,2 и доводят до первоначального объема этим же раствором (5%-ная взвесь). Для сенсибилизации эритроцитов готовят раствор серотонина с концентрацией 0,1 мг/мл на забуференном физиологическом растворе рН 6,4. 1 мл 5%-ной взвеси глютаризированных эритроци- тов центрифугируют, надосадочную жидкость удаляют, а к осадку эритроцитов приливают 1 мл раствора серотонина. Смесь тщательно встряхивают и выдерживают при комнатной температу- ре 25-30 мин, после чего эритроциты дважды отмывают центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 мин изотоническим раствором хлорида натрия и им же доводят до 0,5%-ной взвеси.

Спос.об иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Больной ГО.,33 года повторно поступил в клинику нервных болезней с жалобами на слабость в ногах, пошатывание при ходьбе, головокружение, нарушение функции тазовых органов. Из анамнеза известно, что болен с 18 лет, течение заболе- вания ремитирующее, обострения отмечались в 1976, 1979, 1982, 1986 гг.

При осмотре отмечено: патологии со стороны внутренних органов нет, пульс 68 уд. в 1 мин, АД 120/80 мм рт.ст.

Неврологически: горизонтальный нистагм в обе стороны, речь несколько дизартрична. Спастический тетра- парез с патологическими рефлексами. Брюшные рефлексы не вызываются. Выраженная статическая и динамическая атаксия. На обзорной краниограмме патологии нет. Глазное дно: деколорация височных половин дисков зрительных нервов. Установлен диагноз: рассеянный склероз, цереброспинальная форма.

Клинический диагноз рассеянного склероза подтвержден иммунологичес- ки. Резерпиновая проба положительная число серотониновых розеток (9%) практически не увеличилось (2%) после введения резерпина. Это свидетельствует о том, что иммунная система не дала обычной, характерной для здоровых лиц реакции на эндогенный серотонин в виде увеличения числа иммунных розеток.

П р и м е р 2. Больной В., 27 лет поступил в клинику нервных болезней впервые 7.V.37 с жалобами на снижение зрения, слабость в правой ноге, онемение пальцев рук, шаткую походку. В январе 1987 г. лечился в клинике глазных болезней с диагнозом рет робульбарный неврит. Спустя три недели зрение частично восстановилось, но присоединилась слабость в ногах, более выраженная в правой, пошатывание при ходьбе. При осмотре: патологии со стороны внутренних органов не выявлено; пульс 72 уд. в 1 мин, АД 20/75 мм рт.ст. Неврологически: больной эйфоричен, критика снижена. Походка атактическая, сила в ногах снижена - 3,5 балла. Сухожильные рефлексы оживлены справа выше, чем слева. Патологические рефлексы с двух сторон. Брюшные рефлексы не вызываются. Статическая и динамическая атаксия. На краниограмме патологии нет. Глазное дно: побледнение височных половин дисков зрительных нервов Установлен диагноз: рассеянный склероз, цереброспинальная форма, дебют первая атака. Клинический диагноз подтвержден иммунологически. Резерпиновая проба положительна: число серотониновых розеток (7%) не увеличилось после введения резерпина (2%) Иммунологический диагноз: рассеянный склероз.

Проведение резерпиновой пробы у 1 больных рассеянным склерозом (цереброспинальная и стволово-мозжечковая формы) показало, что у всех введение резерпина не увеличило число иммунных к серотонину РОК: до введения вреднее 135±13, после введения 39,7 ±13,7, ,01 .

51640

Постановка резерпиновой пробы на пациентах с другими видами поражений нервной системы подтвердила специфичность способа.

РОК до введения резерпина 9,1±0,9, после введения 44,3±2,7, ,01 .

Здоровые доноры (20 человек) реагировали на введение резерпина резким увеличением в крови числа иммун- ных к серотонину РОК,%: до введения 6,7±0,3, после введения резерпина 37,3±2,1.

Таким образом, точность диагности- ки по предлагаемому способу достигала 100%, в то время как точность диагностики по аутоантителам к ткани мозга составляла 77-82%.

Формула изобретени-я

Способ диагностики рассеянного склероза путем забора крови с последующим ее иммунологическим анализом, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики, после забора крови пациенту вводят резерпин и через 30 мин осуществляют повторный забор крови, к обеим пробам добавляют 0,1-0,2 мл 0,5%-ной суспензии эритроцитов барана, нагруженных серотонином,инкубируют смесь в течение 10-15 мин при 37,С, подсчитывают в мазке число ро- зеткообразующих лимфоцитов и при отсутствии достоверного увеличения показателя между обеими пробами диагностируют рассеянный склероз.