СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ОТЕКА КАПСУЛ БОЛЬШИХ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ Российский патент 2009 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной морфологии. Оно может быть использовано для изучения патоморфологии больших слюнных желез белых крыс, для разработки лекарственных средств - термопротекторов и определения эффективности их терапевтического действия на доклиническом этапе исследования данных фармацевтических средств.

Методы моделирования отека капсул больших слюнных желез в доступной литературе не обнаружены.

Сущность способа моделирования отека капсул больших слюнных желез состоит в том, что экспериментальных животных подвергают острой внешней гипертермии при температуре 45°С в течение 9-36 минут.

В зависимости от времени перегревания получают модель отека капсул исследуемых органов разной степени выраженности.

В результате проведенного эксперимента на макроскопическом уровне был установлен отек названных структур. Большие слюнные железы ярко-розового цвета и находятся в прозрачной, бесцветной жидкости.

Предложенный способ осуществляется следующим образом.

Половозрелых белых крыс самцов весом от 180 до 200 г помещали в тепловую камеру с температурой воздуха +45°С. Температура в камере регулировалась автоматически по контрольному термометру. Точность поддержания температуры - не менее ±0,75°С. Отклонение температуры любой точки рабочего объема от заданной температуры по контрольному термометру - ±1,5°С.

В качестве камеры использовали отечественный термостат для парафиновых заливок с электроподогревом и водяной рубашкой (Ц-1281). Размеры внутренней рабочей камеры термостата - 250 мм × 250 мм × 400 мм, объем - 0,025 м³.

Экспериментальных животных перегревали всегда в утренние часы суток (с 9.00 до 12.00). Длительность пребывания крысы в термостате зависела от задач эксперимента и состояния животного и составила 9-36 минут. По общему состоянию подопытных крыс (физиологии поведения животного) и повышению их ректальной температуры судили о степени гипертермии животных. Всех использованных в работе подопытных животных подразделили на 6 групп: контрольная группа (Ко), включающая 15 животных, и 5 экспериментальных групп, каждая из которых состоит из 17 животных: животные, выведенные из эксперимента на стадии безразличия (Ст.Б, в термокамере находились 9-10 минут), стадии возбуждения (Ст.В, в термокамере находились 14-18 минут), начальной стадии теплового удара (НТУ, в термокамере находились 21-25 минут), разгаре теплового удара (РТУ, в термокамере находились 28-32 минуты), и крысы, погибшие от теплового удара (ТУ, в термокамере находились 34-36 минут). Градацию стадий эксперимента проводили на основании литературных данных (Фаращук Н.Ф., Рахманин Ю.А., 2004) и физиологии поведения животного. Животных выводили из эксперимента с учетом правил проведения работ с использованием экспериментальных животных (приказ Минздрава №724 от 13 ноября 1984 г.).

Фотографировали субмандибулярную область шеи, затем препарировали шкурку этой области и снова фотографировали эту область с помощью цифрового аппарата «Nikon coolpix 4600». Далее удаляли фасцию шеи и обнажали субмандибулярный комплекс желез. Фотографировали и изучали его с помощью лупы. После удаления кожи в субмандибулярной области обнаружили отек подлежащей соединительной ткани. После удаления этой ткани и поверхностной фасции был выявлен резко выраженный отек соединительнотканных структур больших слюнных желез и особенно их субмандибулярного комплекса: а - контроль; б - стадия безразличия; в - стадия возбуждения, г - начальная стадия ТУ; д - разгар ТУ; е - смерть от ТУ (фиг.1). Производили экстирпацию всего блока слюнных желез, затем разрезали этот блок в продольном и поперечном направлениях, стараясь, чтобы в одном кусочке были фрагменты всех трех БСЖ. Это хорошо получалось на поперечных разрезах. Кусочки слюнных желез одновременно фиксировали в жидкости Буэна, жидкости Карнуа. Срезы окрашивали гематоксилином Бемера - эозином; гематоксилином Ганзена - эозином; альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми; импрегнировали серебром по Гомори.

Морфометрические исследования проводили с помощью окуляр-микрометра (MOB 1-15*): измеряли толщину капсул больших слюнных желез (в микрометрах) в местах их наибольших и наименьших размеров (контрольная выборка n=90; экспериментальные выборки n=102).

Предложенным способом произведена качественная и количественная морфометрическая оценка динамики морфологических изменений в капсулах больших слюнных желез белых крыс на разных стадиях острого перегревания организма.

При исследовании препаратов больших слюнных желез на первой стадии перегревания, стадии безразличия выявлен незначительный отек капсулы: например, в капсуле околоушной слюнной железы и междолевой соединительной ткани на препарате, окрашенном альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, - незначительный отек, увеличение 7×8 (фиг.2). Определяется разволокнение коллагеновых волокон, истончение эластических и ретикулиновых волокон, наиболее выраженное в наружном и внутреннем слоях капсулы. На последующих стадиях перегревания наблюдается усиление всех вышеописанных морфологических изменений в строении капсул больших слюнных желез, которое максимально проявляется у животных, погибших от теплового удара. Так, в околоушной слюнной железе в разгар теплового удара определяется резкий отек капсулы, который представлен на микрофотографии препарата, окрашенного альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, увеличение 7×40 (фиг.3)

Отек ведет к достоверному увеличению толщины капсулы: как минимального, так и максимального размеров. Количественные данные изменения толщины капсул в местах их наибольших и наименьших размеров рассчитаны с помощью определения статистических показателей результативного признака для каждой группы животных: среднее значение (М), дисперсия (σ²), стандартная ошибка среднего (m), 95% доверительный интервал для среднего значения, коэффициент вариации (CV %) (Автандилов Г.Г., 2002), проводили дисперсионный анализ, вычисляли F-критерий (Медик В.А., Токмачев М.С., Фишман Б.Б., 2000).

Пример 1

Крыса №19, вес - 190 г, перегрета до стадии безразличия, находилась в термокамере в течение 9 минут, вела себя спокойно, ректальная температура до перегревания - 36,8°С, после перегревания - 39,5°С. После выведения животного из эксперимента определен слабовыраженный отек субмандибулярного комплекса слюнных желез (фиг.1, б), на препаратах, окрашенных гематоксилином Ганзена-эозином, гематоксилином Бемера-эозином, альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, импрегнированных серебром, - незначительный отек капсул больших слюнных желез: околоушной слюнной железы (ОКЖ), подчелюстной слюнной железы (ПЧЖ), подъязычной слюнной железы (ПЯЖ). На стадии безразличия при остром перегревании организма имеет место начинающийся отек и разволокнение капсул больших слюнных желез и соединительной ткани, окружающей эти органы, особенно их субмандибулярный комплекс (фиг.1б, 2), проявляющийся увеличением максимального и минимального размеров толщины капсул больших слюнных желез (табл.1).

Пример 2

Крыса №1, вес - 180 г, перегрета до смерти от теплового удара, находилась в термокамере в течение 36 минут, ректальная температура до перегревания - 36,6°С, после перегревания - 44°С. Определен резкий отек субмандибулярного комплекса слюнных желез (фиг.1е), на препаратах, окрашенных гематоксилином Ганзена-эозином, гематоксилином Бемера-эозином, альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, импрегнированных серебром, - значительный отек капсул больших слюнных желез. У животных, погибших от теплового удара, имеет место резкий отек и разволокнение капсул больших слюнных желез и соединительной ткани, окружающей эти органы, особенно их субмандибулярный комплекс, проявляющийся увеличением максимального и минимального размеров толщины капсул больших слюнных желез (табл.2).

Результаты оценки количественных параметров толщины капсул контрольной и экспериментальных групп представлены в таблицах 3-8. Они свидетельствуют, что острое перегревание организма приводит к отеку капсул больших слюнных желез и соединительной ткани, окружающей их. Степень выраженности этого отека нарастает по мере перегревания организма и достигает максимальной величины у животных, погибших от теплового удара.

Таким образом, острое внешнее перегревание организма может использоваться в качестве способа моделирования отека капсул больших слюнных желез белых крыс и соединительной ткани, окружающей эти органы, особенно их субмандибулярного комплекса.

Табл.1 ОКЖ №19 Min, мкм Max, мкм ПЧЖ №19 Min, мкм Max, мкм ПЯЖ №19 Min, мкм Max, мкм поле зрения 1 34,89 192,04 поле зрения 1 25,23 167,66 поле зрения 1 21,65 144,13 2 33,05 192,38 2 25,65 166,34 2 20,56 144,25 3 33,58 190,67 3 27,18 166,87 3 21,72 144,89 4 31,08 193,67 4 27,56 166,03 4 21,71 145,12 5 32,17 189,99 5 29,45 166,07 5 21,84 145,11 6 31,43 189,06 6 29,34 165,99 6 21,45 145,01

Табл.2 ОКЖ №1 Min, мкм Max, мкм ПЧЖ №1 Min, мкм Max, мкм ПЯЖ №1 Min, мкм Max, мкм поле зрения 1 38,08 266,12 поле зрения 1 45,18 314,56 поле зрения 1 34,71 226,84 2 38,09 265,12 2 44,67 310,56 2 35,62 220,02 3 39,24 257,34 3 43,23 310,31 3 35,78 220,56 4 39,71 257,54 4 45,12 311,23 4 35,12 227,89 5 40,01 258,12 5 45,67 311,45 5 34,71 230,45 6 40,03 264,76 6 45,78 311,76 6 34,83 227,65

Табл.3 Стадия опыта ОКЖ, Min М±m, мкм Cv, % 95% доверительный интервал σ² Нижняя граница Верхняя граница Ко 30,81±0,16 4,92 30,49 31,13 2,29 Ст.Б 34,08±0,16* 4,62 33,78 34,39 2,48 Ст.В 35,87±0,05* 1,35 35,78 35,97 0,24 НТУ 37,03±0,09* 2,37 36,85 37,2 0,77 РТУ 38,29±0,08* 2,04 38,15 38,45 0,61 ТУ 39,45±0,08* 1,94 39,30 39,60 0,58 Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией

Табл.4 Стадия опыта ПЧЖ, Min М±m, мкм Cv, % 95% доверительный интервал σ² Нижняя граница Верхняя граница Ко 23,98±0,09 3,66 23,79 24,17 0,77 Ст.Б 27,46±0,16* 5,88 27,14 27,78 2,61 Ст.В 36,51±0,13* 3,47 36,26 36,76 1,61 НТУ 38,88±0,06* 1,48 38,77 38,99 0,33 РТУ 41,31±0,09* 2,37 41,12 41,50 0,33 ТУ 45,01±0,07* 1,55 44,87 45,15 0,49 Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией

Табл.5 Стадия опыта ПЯЖ, Min М±m, мкм Cv, % 95% доверительный интервал σ² Нижняя граница Верхняя граница Ко 20,16±0,08 3,78 19,99 20,32 0,58 Ст.Б 21,18±0,04* 1,83 21,10 21,26 0,15 Ст.В 25,13±0,03* 1,25 25,07 25,19 0,09 НТУ 30,98±0,06* 2,07 30,86 31,11 0,41 РТУ 33,49±0,06* 1,82 33,37 33,61 0,37 ТУ 34,97±0,04* 1,22 34,89 35,06 0,18 Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией

Табл.6 Стадия опыта ОКЖ, Мах М±m, мкм Cv, % 95% доверительный интервал σ² Нижняя граница Верхняя граница Ко 167,0±0,33 1,88 166,34 167,66 9,89 Ст.Б 187,57±0,38* 2,06 186,81 188,33 14,94 Ст.В 196,77±0,33* 1,69 196,12 197,42 11,03 НТУ 204,98±0,29* 1,45 204,39 205,57 8,84 РТУ 216,62±0,93* 4,33 214,77 218,46 88,05 ТУ 262,59±0,26* 1,02 262,06 263,11 7,10 Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией

Табл.7 Стадия опыта ПЧЖ, Мах М±m,мкм Cv, % 95% доверительный интервал σ² Нижняя граница Верхняя граница Ко 141,17±0,17 1,12 140,84 141,49 2,48 Ст.Б 166,53±0,11* 0,657 166,32 166,74 1,19 Ст.В 182,3±0,12* 0,686 182,06 182,55 1,56 НТУ 213,31±0,13* 0,61 213,05 213,56 1,69 РТУ 278,79±0,22* 0,79 278,36 279,22 4,86 ТУ 312,66±0,15* 0,477 312,37 312,95 2,22 Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией

Табл.8 Стадия опыта ПЯЖ, Мах М±m, мкм Cv, % 95% доверительный интервал σ² Нижняя граница Верхняя граница Ко 134,41±0,05 0,38 134,31 134,52 0,26 Ст.Б 144,94±0,07* 0,49 144,79 145,08 0,52 Ст.В 149,33±0,12* 0,82 149,09 149,57 1,51 НТУ 151,43±0,09* 0,61 151,25 151,61 0,85 РТУ 206,17±0,11* 0,53 205,95 206,39 1,18 ТУ 223,51±0,28* 1,27 222,95 224,06 8,02 Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной морфологии, и может быть использовано для моделирования отека капсул больших слюнных желез. Для этого белых крыс перегревают в термокамере с температурой воздуха 45°С в течение 9-36 минут. Способ обеспечивает получение модели отека капсул больших слюнных желез. 3 ил., 8 табл.

Способ моделирования отека капсул больших слюнных желез белых крыс путем перегревания экспериментального животного в термокамере с температурой воздуха 45°С в течение 9-36 мин.