СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ ПИКАМИЛОНОМ ПРИ L-NAME ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА Российский патент 2009 года по МПК A61K31/197 A61K31/198 A61P9/10 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции ГАМК-ергическими производными, описанный И.Н.Тюренковым, А.В.Воронковым, А.И.Робертус в статье «Фармакологическая коррекция эндотелиальной дисфункции, вызванной гормональной недостаточностью», Психофармакология и биологическая наркология, 2007, т.7, спец. выпуск, часть 2, с.1983, который заключается в введении ГАМК-ергических средств - РГПУ-189 (15 мг/кг), РГПУ-147 и РГПУ-38 (50 мг/кг) при моделировании экспериментального сахарного диабета и при недостаточности половых гормонов. Эндотелиальная функция тестировалась введением ацетилхолина с регистрацией кровотока в коре мозга.

Основным недостатком способа является коррекция эндотелиальной дисфункции ГАМК-ергическими производными в условиях снижения биодоступности оксида азота и гормональной недостаточности, вызванной введением стрептозоцина и кастрацией животных, а также отсутствие оценки функционального состояния сосудистого русла в условиях целостного организма при моделировании дефицита оксида азота. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при повреждении в системе L-аргининNO, которое связано в основном с недостаточностью эндотелиальной NO-синтазы, с помощью ГАМК-ергических средств неудовлетворительны.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота, включающий использование ГАМК-ергического средства - пикамилона. Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным ежедневным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг, проводится ее коррекция путем ежедневного

внутрижелудочного введения пикамилона в дозе 30 мг/кг.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ. Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. ГАМК-ергическое средство - пикамилон вводится одновременно с L-NAME в дозе 30 мг/кг/сут. На 8 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедреную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Biopac". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при р<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных: для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 сек после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и пикамилона приводило к достоверному снижению показателей исходных значений АД (таблица 1).

Таблица 1

Динамика показателей АД и ЧСС при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции пикамилоном

Группы животных Функциональные пробы САД, мм рт.ст. ДАД, мм рт.ст. ЧСС, уд. в мин Интактные Исходные 137,7±3,7 101,9±4,3 420,0±9,0 ЭЗВ с АХ 84,3±4,5 38,7±2,8 416,0±14,0 ЭНЗВ с НП 83,0±3,7 42,1±4,4 415,0±10,0 Получавшие L-NAME (25 мг/кг) Исходные 190,3±6,7* 145,0±3,9* 428,0±11 ЭЗВ с АХ 110,6±5,2* 82,8±6,6* 426,0±14,0 ЭНЗВ с НП 88,7±4,7 50,8±4,2 426,0±13,0 L-NAME (25 мг/кг)+пикамилон 30 мг/кг Исходные 153,5±12,4** 109,4±14,2** 387,3±17,9** ЭЗВ с АХ 105,0±6,3 54,4±3,9** 380,1±16,1 ЭНЗВ с НП 100,5±3,8 39,4±2,5 389,9±12,9 * - р<0,05 в сравнении с группой интактных; ** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привела нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME. Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился пикамилон, это отношение соответствовало значению 1,8±0,3 (таблица 2).

Таблица 2

Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота

Группы животных Функциональные пробы Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) Время сосудистой реакции (сек) Площадь сосудистой реакции(усл. ед.) Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП Интактные АХ 59,9±2,9 42,2±0,8 1268,0±74,8 1,1±0,1 НП 61,0±3,0 45,1±1,0 1375,3±93,7 L-NAME АХ 68,0±4,1 20,0±1,4 б95,3±87,6* 5,4±0,6* НП 98,0±2,0 67,4±1,4 3322,7±11б,7* L-NAME+пикамилон 30 мг/кг АХ 65,4±11,3 39,0±2,7** 1258,2±247,9** 1,8±0,3** НП 84,5±14,7 68,7±8,9 2955,2±553,7 * - р<0,05 в сравнении с группой интактных, ** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию эндотелиальной дисфункции пикамилоном на фоне L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиологии и фармакологии. Для этого в эксперименте белым крысам самцам линии Wistar моделируют эндотелиальную дисфункцию путем ежедневного внутрибрюшинного введения в течение 7 суток N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг. Затем в течение последующих 7 суток ежедневно вводят пикамилон в дозе 30 мг/кг внутрижелудочно. Способ обеспечивает эффективную коррекцию эндотелиальной дисфункции в специфических условиях моделирования. 2 табл.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, отличающийся тем, что в эксперименте белым крысам самцам линии Wistar с эндотелиальной дисфункцией на фоне ее моделирования внутрибрюшинным введением ингибитора эндотелиальной синтазы N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно, в течение 7 сут, оценивая степень развития дисфункции по отношению показателей эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилятации, внутрижелудочно вводят пикамилон (30 мг/кг) ежедневно, в течение 7 сут.