СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ РЕКОМБИНАНТНЫМ ЭРИТРОПОЭТИНОМ ПРИ L-NAME ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА Российский патент 2011 года по МПК G09B23/28 A61K38/18 A61P9/14 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ лечения ишемии центральной нервной системы, включающий введение терапевтически эффективной дозы рекомбинантного эритропоэтина, описанный Голд Майкл, Рензи Майкл и др. патент на изобретение RU 2341284 С2. Изобретение позволяет стимулировать функциональное восстановление центральной нервной системы, ингибировать апоптоз и воспаление в центральной нервной системе при отсроченном начале лечения.

Однако данный способ не охватывает оценку функционального состояния сосудистого русла в условиях целостного организма и влияние малых доз рекомбинантного эритропоэтина на эндотелиальную дисфункцию при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте.

Задачей изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота, включающий использование рекомбинантного эритропоэтина.

Поставленная задача достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно проводится ее коррекция путем подкожного введения рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 180-200 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно ежедневно в дозе 25 мг/кг/сут. Рекомбнантный эритропоэтин («Эпокрин» эпоэтин альфа; ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых препаратов» Федерального медикобиологического агентства г. Санкт-Петербург, РОССИЯ) вводили подкожно в дозе 50 МЕ/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента в утренние часы. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Biopac". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелий независимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 с приводило к резкому падению артериального давления достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 с развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 с после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 с. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и рекомбинантного эритропоэтина привело к оптимальному снижению показателей исходных значений АД, так как исходные цифры АД были ниже: САД - 132,3±6,4, ДАД - 103,0±6,6 мм рт.ст. Также отмечалось потенциирование снижения показателей артериального давления в ответ на введение АХ (таблица 1).

Таблица 1. Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции рекомбинантным эритропоэтином. Группы животных Функциональные пробы САД, мм рт.ст. ДАД, мм рт.ст. ЧСС, уд. в мин Интактные Исходные 137,7±3,7 101,9±4,3 420,0±9,0 ЭЗВ с АХ 84,3±4,5 38,7±2,8 416,0±14,0 ЭНЗВ с НП 83,0±3,7 42,1±4,4 415,0±10,0 Получавшие L-NAME (25 мг/кг) Исходные 190,3±6,7* 145,0±3,9* 428,0±11 ЭЗВ с АХ 110,6±5,2* 82,8±6,6* 426,0±14,0 ЭНЗВ с НП 88,7±4,7 50,8±4,2 426,0±13,0 L-NAME (25 мг/кг) + эритропоэтин (50 МЕ/кг) Исходные 132,3±6,4** 103,0±6,6** 350,0±16,2 ЭЗВ с АХ 84,3±3,7** 48,6±1,3** 322,0±12,8 ЭНЗВ с НП 94,3±7,1 53,6±2,7 355,9±14,9 * - р<0,05 в сравнении с группой интактных ** - р<0,05 в сравнении с группой животных, получавших L-NAME

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился рекомбинантный эритропоэтин, это отношение соответствовало значению - 1,8±0,2 (таблица 2).

Таблица 2. Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME рекомбинантным эритропоэтином. Группы животных Функцио-нальные пробы Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) Время сосудистой реакции (с) Площадь сосудистой реакции (усл. ед.) Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП Интактные АХ 59,9±2,9 42,2±0,8 1268,0±74,8 1,1±0,1 НП 61,0±3,0 45,1±1,0 1375,3±93,7 L-NAME АХ 68,0±4,1 20,0±1,4 695,3±87,6* 5,4±0,6* НП 98,0±2,0 67,4±1,4 3322,7±116,7* L-NAME + эритропоэтин 50 МЕ/кг АХ 60,5±1,8 42,6±3,6** 1141±168,2** 1,8±0,2** НП 67,1±3,6 72,7±4** 1934,9±259,3** * - р<0,05 в сравнении с группой интактных ** - р<0,05 в сравнении с группой животных, получавших L-NAME

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию эндотелиальной дисфункции рекомбинантным эритропоэтином на фоне введения L-NAME.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции. Для этого лабораторным животным моделируют эндотелиальную дисфункцию, внутрибрюшинным введением N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно, в течение семи суток. При этом степень развития дисфункции оценивают по отношению показателей эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации. Коррекцию эндотелиальной дисфункции проводят подкожным введением рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг на первый, третий и пятый дни эксперимента в утренние часы. Способ обеспечивает коррекцию эндотелиальной дисфункции при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота. 2 табл.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, отличающийся тем, что в эксперименте белым крысам самцам линии Wistar с эндотелиальной дисфункцией, моделируемой внутрибрюшинным введением ингибитора эндотелиальной синтазы N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно, в течение 7 суток, оценивая степень развития дисфункции по отношению показателей эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации, подкожно вводят рекомбинантный эритропоэтин в дозе 50 МЕ/кг на первый, третий и пятый дни эксперимента в утренние часы.