СПОСОБ КОРРЕКЦИИ L-NAME ИНДУЦИРОВАННОГО ДЕФИЦИТА ОКСИДА АЗОТА КОМБИНАЦИЕЙ ТАДАЛАФИЛА И L-НОРВАЛИНА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2013 года по МПК G09B23/28 A61K31/198 A61K31/4985 A61P9/08 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является «Способ коррекции эндотелиальной дисфункции тадалафилом при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота» (Патент на изобретение №2364395), который заключается в использовании селективного ингибитора фосфодиэстеразы (ФДЭ5) недлительного действия тадалафила в дозе 0,9 мг/кг для восстановления вазорелаксирующей функции на фоне блокады эндотелиальной NO-синтазы.

Основным недостатком способа является то, что монотерапия тадалафилом в дозе 0,9 мг/кг является менее безопасной с точки зрения возникновения побочных эффектов, а также направлена только на одно звено патогенетического механизма развития эндотелиальной дисфункции - активность пути NO/цГМФ. В то же время не учитывается возможность фармакологического воздействия на другую точку приложения в патогенезе эндотелиальной дисфункции - блокады фермента аргиназы, снижающей биодоступность оксида азота.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции L-NAME индуцированного дефицита оксида азота in vivo, включающий использование комбинации тадалафила и L-норвалина.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится ее коррекция внутрижелудочным введением малой дозы тадалафила 0,09 мг/кг и L-норвалина в дозе 10 мг/кг однократно в сутки.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах-самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин-метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Biopac". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных: для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 сек после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток, внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин-метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и комбинации тадалафила (0,09 мг/кг с L-норвалином 10 мг/кг приводило к снижению показателей исходных значений АД (САД - 174,4±1,9, ДАД - 111,2±0,7 мм рт.ст.) (таблица 1).

Таблица 1 Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции комбинацией тадалафила с L-норвалином Группы животных Функциональные пробы САД, мм рт.ст. ДАД, мм рт.ст. ЧСС, уд. в мин. Интактные Исходные 137,7±3,7 101,9±4,3 420,0±9,0 ЭЗВ с АХ 84,3±4,5 38,7±2,8 416,0±14,0 ЭНЗВ с НП 83,0±3,7 42,1±4,4 415,0±10,0 Получавшие L-NAME (25 мг/кг) Исходные 190,3±6,7* 145,0±3,9* 428,0±11 ЭЗВ с АХ 110,6±5,2* 82,8±6,6* 426,0±14,0 ЭНЗВ с НП 88,7±4,7 50,8±4,2 426,0±13,0 L-NAME (25 мг/кг) + тадалафил (0,09 мг/кг) + L-норвалин (10 мг/кг) Исходные 174,4±1,9** 111,2±0,7** 449,1±34,8 ЭЗВ с АХ 72,6±4,5** 51,5±3,2** 444,2±39,4* ЭНЗВ с НП 93,9±3,6 55,2±3,6 467,5±35,5* * - p<0,05 в сравнении с группой интактных, ** - p<0,05 в сравнении с группой L-NAME

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ использовано это отношение как показатель коррекции дефицита оксида азота. Так в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводилась комбинация тадалафила с L-норвалином, это отношение соответствовало значению 1,8±0,1, при этом концентрация нитрит-ионов (NOx) увеличивалась до 4,8±0,2 мкМ/л (таблица 2).

Таблица 2 Показатели, отражающие коррекцию L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота комбинированным введением L-норвалина и тадалафила Группы животных Функциональные пробы Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) Время сосудистой реакции (сек.) Площадь сосудистой реакции (усл. ед.) NOx (мкМ/л) Отношение площадей сосудистой реакции АХ кНП Интактные АХ 59,9±2,9 42,2±0,8 1268,0±74,8 7,2±0,6 1,1±0,1 НП 61,0±3,0 45,1±1,0 1375,3±93,7 L-NAME АХ 68,0±4,1 20,0±1,4* 695,3±87,6* 2,3±0,6* 5,4±0,6* НП 98,0±2,0* 67,4±1,4* 3322,7±116,7* L-NAME + тадалафил + L-норвалин АХ 87,0±7,7** 30,2±4,7* 1205,7±121,4** 4,8±0,2** 1,8±0,1** НП 69,0±6,0** 62,0±2,5* 2128,1±197,4** * - p<0,05 в сравнении с группой интактных, ** - p<0,05 в сравнении с группой L-NAME

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать эффективную коррекцию L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота комбинацией тадалафила и L-норвалина.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции дефицита оксида азота. Для этого в эксперименте моделируют дефицит оксида азота ежедневным, в течение 7 дней, внутрибрюшинным введением крысам-самцам линии Wistar N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. Коррекцию дефицита оксида азота осуществляют одновременным, также в течение 7 дней, внутрижелудочным введением комбинации тадалафила в дозе 0,09 мг/кг и L-норвалина в дозе 10 мг/кг и 1 раз в сутки. Способ обеспечивает эффективное устранение дефицита оксида азота на данной модели при впервые установленном для этого лекарственном взаимодействии препаратов. 1 пр., 2 табл.

Способ коррекции L-NAME индуцированного дефицита оксида азота, отличающийся тем, что на фоне его моделирования белым крысам самцам линии Wistar с индуцированным дефицитом оксида азота внутрижелудочно вводят тадалафил 0,09 мг/кг и L-норвалин 10 мг/кг ежедневно в течение 7 суток.