СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОЙ ВАКЦИНЫ Российский патент 2010 года по МПК A61K39/00 C12N1/00 A61P31/04 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к изготовлению анатоксин-вакцины для профилактики сальмонеллеза телят, поросят, плотоядных и птиц.

Известные способы получения инактивированных бактерийных и вирусных вакцин, анатоксинов основаны на использовании 0,8±0,2% раствора формалина (Воробьев А.А. Микробиология и иммунология. - М.: Медицина, 1999. - С.256-268).

Получение сальмонеллезной вакцины включает выращивание сальмонелл на питательной среде, стерилизацию, детоксикацию токсинов 0,8±0,2% раствором формалина, сорбцию на гидроксиде алюминия и внесение мертиолята. Из-за канцерогенных свойств формалина, мертиолята и неполноты детоксикации энтеротоксинов с определенным успехом были испытаны перекись водорода, тирозин, антибиотики, фенол, УФЛ, фотоокисление, однако в отношении инактивированных сальмонеллезной и колибактериозной вакцин они были неэффективны.

За прототип взят способ получения сальмонеллезной вакцины, включающий выращивание сальмонелл на питательной среде, стерилизацию и детоксикацию токсинов 0,8±0,2% раствором формалина, сорбцию на гидроксиде алюминия с последующим внесением консерванта-мертиолята (Осидзе Д.Ф., Борисович Ю.Ф., Кириллов Л.В. Ветеринарные препараты. - М.: Колос, 1981. - С.217-227).

Недостатком известного способа является проведение детоксикации 0,8±0,2% раствором формалина, так как формалин проявляет канцерогенные свойства, вследствие чего использование его в такой концентрации небезопасно. В вакцину также вводится токсичный консервант - мертиолят.

Один из путей решения проблемы - уменьшение концентрации формалина. Но при этом снижается его эффективность, что приводит к неполной детоксикации сальмонеллезной вакцины.

Изучение ряда детоксикаторов выявило эффективность бисчетвертичных аммониевых соединений, в частности, этония (1,2-этилен-бис-(N-диметилкарбдецилоксиметил) аммония дихлорид). Безвредность и эффективность этония подтверждена применением его в гуманной медицине в качестве мазей, паст и растворов при дерматитах, кератитах, стоматите для ускоренного заживления ран и пр.

Целью предлагаемого изобретения является повышение эффективности и безопасности сальмонеллезной анатоксин-вакцины.

Поставленная цель достигается посредством необратимой и полной детоксикации комплекса сальмонеллезных токсинов последовательно двумя детоксикаторами, уменьшения концентрации формалина до 0,2% путем внесения второго детоксикатора этония в концентрации 0,5±0,1% для заключительной детоксикации при 40±1°С в течение 6-7 суток, изъятием мертиолята.

При этом исходные концентрации формалина снижаются до 0,003-0,05%, а этония - с 0,5% до 0,2-0,3% из-за связывания их с белковыми молекулами токсинов и микроорганизмов.

В патентной и научно-технической литературе не обнаружены технические решения, аналогичные заявляемому с использованием этония, что свидетельствует о новизне предлагаемого решения.

Использование 0,5±0,1% этония при уменьшении концентрации формалина с 0,8±0,2% до 0,2% в предложенном способе позволяет достичь стабильной детоксикации и полимеризации всего комплекса сальмонеллезных токсинов и получения безвредной и эффективной сальмонеллезной анатоксин-вакцины.

Установленная возможность полной и необратимой детоксикации всех видов сальмонеллезных токсинов, в том числе энтеротоксинов, путем использования на первой стадии детоксикации 0,2% раствора формалина вместо 0,8±0,2% и во второй стадии 0,5±0,1% этония, обладающего не только детоксицирующим, но и консервирующими, бактерицидными и фунгицидными свойствами, позволила предложить рациональную технологию изготовления эффективной и безвредной сальмонеллезной анатоксин-вакцины без ртутьсодержащего консерванта-мертиолята.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение сальмонеллезной анатоксин-вакцины (CAB). К полученной суспензии автоклавированных сальмонелл с концентрацией 60±10 млрд/мл микроорганизмов и растворимых токсинов с концентрацией 1,2±0,2 мг/мл был внесен формалин 0,2% концентрации для детоксикации при 40±1°С в течение 7 суток, а затем добавлен этоний 0,5% концентрации для завершения детоксикации при 41±1°С в течение 7 суток всех видов сальмонеллезных токсинов, в том числе и энтеротоксинов, которые формалин не способен детоксицировать. После сорбции анатоксин-вакцины на гидроксиде алюминия (3 мг/см³) проведена расфасовка препарата в 20,0 и 100,0 мл флаконы и его стерилизация при 1,0 атм в течение 20 минут.

Полученная анатоксин-вакцина испытана на безвредность и эффективность.

Пример 2. Испытание сальмонеллезной анатоксин-вакцины на безвредность проводили на 10 белых мышах, 20-60 дневного возраста телятах и поросятах, 12 бройлерах и 6 голубях путем подкожного введения препарата - мышам в объеме 0,3 мл, телятам и поросятам - 6-7 мл, бройлерам и голубям - 0,5 мл. При наблюдении в течение 12 суток все животные оставались клинически здоровыми, без видимых изменений в месте введения.

Пример 3. Испытание сальмонеллезной анатоксин-вакцины на активность проводили с использованием 14 голов поросят, 12 телят 20-3-дневного возраста и 8 голубей путем внутримышечного введения анатоксин-вакцины поросятам и телятам в дозе 4-5 мл, голубям в дозе 1 мл двукратно с интервалом 7 суток. Через 15 суток после второй вакцинации всем вакцинированным животным и невакцинированным трем поросятам, трем телятам, четырем голубям введена живая вирулентная культура S.cholerosius суточного выращивания в МПБ в дозе 200-300 тысяч микробных тел. Наблюдение за животными проводили в течение 20 суток. При этом установлено, что вакцинированные телята, поросята и шесть голубей из восьми не заболели сальмонеллезом, а все контрольные невакцинированные телята, поросята и голуби заболели в период 7-12 суток после заражения вирулентными сальмонеллами.

Всем заболевшим телятам и поросятам назначено специфическое лечение с помощью иммунной сыворотки с антибиотиками и солевые растворы.

Зараженные сальмонеллами голуби погибли в течение 10-15 суток.

Изобретение относится к производству вакцин для профилактики инфекционных заболеваний. Способ получения сальмонеллезной вакцины включает детоксикацию экзо- и эндотоксинов в суспензии с автоклавированными сальмонеллами последовательно двумя детоксикаторами - 0,2% раствором формалина при 40±1°С в течение 6-7 суток, а затем 0,5±0,1% раствором этония при 41±1°С в течение 7-8 суток с последующей стерилизацией при 1,0 атм в течение 20 мин. Полученные анатоксины сорбируют на гидроксиде алюминия и стерилизуют при 1 атм в течение 20 мин. Полученная анатоксин-вакцина с повышенной эффективностью и безопасностью используется для специфической профилактики сальмонеллеза поросят, телят, плотоядных и птиц.

Способ получения сальмонеллезной вакцины, включающий детоксикацию экзо- и эндотоксинов в суспензии с автоклавированными сальмонеллами, сорбцию полученных анатоксинов на гидроксиде алюминия, отличающийся тем, что детоксикацию токсинов проводят последовательно двумя детоксикаторами - 0,2%-ным раствором формалина при 40±1°С в течение 6-7 суток и 0,5±0,1%-ным раствором этония при 41±1°С в течение 7-8 суток и после сорбции на гидроксиде алюминия целевой продукт стерилизуют при 1,0 атм в течение 20 мин.