КОМБИНАЦИЯ, ВКЛЮЧАЮЩАЯ КОМБРЕТАСТАТИН И ПРОТИВОРАКОВЫЕ СРЕДСТВА Российский патент 2010 года по МПК A61K31/167 A61K39/395 A61P35/00 

Настоящее изобретение относится к терапевтическим комбинациям, включающим производное стильбена и противораковое средство, такое как ингибитор VEGF.

Ингибиторы VEGF, являющиеся ингибиторами фактора роста сосудистого эндотелия, в большинстве случаев представляют собой биологические продукты, выбранные из растворимых рецепторов, антигенов, РНК-аптамеров и антител.

Изобретение относится к лечению злокачественных опухолей, особенно солидных опухолей, с использованием комбинаций производных стильбена и ингибитора VEGF; к применению таких комбинаций для улучшенного лечения злокачественных опухолей и к применению этих эффективных ингредиентов для лечения, подавления и улучшения состояния опухолей и т.п.

В настоящий момент для лечения и подавления опухолей, особенно злокачественных солидных опухолей, используют большое разнообразие химиотерапевтических средств. Хотя эти средства могут обладать эффектом, уменьшающим опухоль, часто эти средства не способны приводить к выздоровлению, ввиду приобретения злокачественной опухолью резистентности к средству, рецидива опухоли и т.п. Поэтому необходимы дополнительные противоопухолевые средства лучшего качества.

Несмотря на то, что известны производные стильбена, с цис-стильбеном в качестве основной структуры, проявляющие сильную активность в подавлении митоза и цитотоксичность, большинство производных стильбена до сих пор недоступны в качестве фармацевтических средств ввиду их слабой растворимости в воде.

Недавно было обнаружено, что некоторые производные стильбена, обладающие ингибирующей полимеризацию тубулинов активностью, также обладают улучшенной растворимостью в воде. Они включают фосфорилированное пролекарственное средство комбретастатина-А4 (см. патент США №5561122) и производные стильбена, описанные в патенте США №5674906. Кажется, что клиническое применение этих производных стильбена является многообещающим.

Целью настоящего изобретения является разработка противоопухолевых средств лучшего качества, в частности, разработка фармацевтического препарата, способного улучшить эффективность производного стильбена и, в особенности, раскрытие и представление противоопухолевых средств, проявляющих лучшую безопасность применения и эффективность при лечении злокачественных опухолей.

Обнаружено, что производные стильбена, введенные вместе с другим противораковым средством, таким как ингибитор VEGF, проявляют лучшие терапевтические эффекты в подавлении роста опухолей.

Описание и производство ингибитора VEGF, используемого предпочтительно в изобретении, который представляет собой химерный белок VEGF-Trap, описаны в заявке на патент WO 00/75319. Существует несколько форм реализации химерного белка. Форма реализации, соответствующая VEGF-Trap, представлена на фигуре 24 (последовательность, см. указанную заявку). VEGF-Trap, используемая в изобретении, является связывающим белком, обладающим сигнальной последовательностью VEGFR1, связанной с доменом Ig D2 рецептора VEGFR1, связанной с доменом Ig D3 рецептора VEGFR2, связанной в свою очередь с доменом Fc рецептора IgG1, называемой еще VEGFR1R2-FcΔC1 или Flt1D2.Flk1D3.FcΔC1.

В настоящее время обнаружено, что это новое противораковое средство в комбинации с производным стильбена является особенно эффективным в лечении солидных опухолей. Среди эффективных производных стильбена находится комбретастатин А-4 и производное соединения (Z)-1-(3-амино-4-метоксифенил)-2-(3,4,5-триметоксифенил)этилена, которое обозначено как продукт формулы II. Оба из данных соединений проявляют сильную активность в подавлении митоза, цитотоксичность и ингибируют полимеризацию тубулинов.

Комбретастатин А-4 имеет следующую формулу:

Продукт формулы (II) имеет следующую формулу:

Эти комбретастатины слабо растворимы в воде, и их можно использовать в виде соли, примерами которой служат гидрохлорид, ацетат, фосфат, метансульфонат и соли аминокислот.

Производство производных стильбена, которые могут находиться в виде фармацевтически приемлемых солей, гидратов и сольватов, и производство пероральной и/или парентеральной фармацевтической композиции, содержащей указанное выше соединение, его (или их) фармацевтически приемлемый(ые) носитель(и) и/или разбавитель(и) для продукта формулы (II) и его предшественника описаны в патентах США №5525632, 5731353 и 5674906. В этих патентах, которые включены в этот документ посредством ссылки, раскрыто, что производные стильбена, включающие продукт формулы (II) комбретастатина, при применении по отдельности, обладают канцеростатическими эффектами in vivo.

Недавно открыто, что комбинация соли серина комбретастатина формулы (II) и VEGF Trap существенно уменьшает развитие объема опухоли по сравнению с тем, что предсказано на основании введения инфицированным опухолью животным каждого соединения по отдельности.

Таким образом, предполагается, что настоящее изобретение относится к новому противоопухолевому средству, например химиотерапевтическому лекарственному средству против злокачественной опухоли (химиотерапевтическое средство против злокачественной опухоли), включающему вместе или раздельно два типа активных ингредиентов, а именно производное стильбена и VEGF Trap.

Настоящее изобретение также включает комбинированное лечение, где производное стильбена и VEGF Trap получают как два раздельных фармацевтических препарата и вводят нуждающемуся в этом пациенту одновременно, близко к одновременному, отдельно или с разделенным промежутком времени.

Опухоль, против которой вводят противоопухолевое средство по настоящему изобретению, включает все виды опухолей, встречающиеся у млекопитающих, особенно у человека. Предпочтительно противоопухолевые средства по настоящему изобретению можно применять для ингибирования пролиферации опухолевых клеток у человека. Противоопухолевые средства по настоящему изобретению представляют собой фармацевтические препараты, где по меньшей мере два соединения применяют для излечения (лечения) или сдерживания роста опухоли.

Конкретных ограничений на способ введения противоопухолевых средств нет. Стандартным способом введения противораковых средств является внутривенный, парентеральный и пероральный. Настоящее изобретение также включает противоопухолевое средство, содержащее комбинацию двух соединений с различной формой введения.

Производное стильбена, используемое в настоящем изобретении, представляет собой цис-стильбен в качестве основной структуры и проявляет активность в отношении подавления полимеризации тубулинов и/или противоопухолевую активность in vivo. Производные стильбена по настоящему изобретению также включают пролекарственные средства, которые in vivo могут превращаться в производное стильбена. В качестве производных стильбена по настоящему изобретению можно использовать все формы их подходящих фармацевтически допустимых производных, таких как соли, сложные эфиры, амиды, сольваты (продукты сольватации) и их гидраты, при условии, что производные проявляют противоопухолевую активность при применении in vivo.

Пролекарственные средства продукта формулы (II) предпочтительно представляют собой соли аминокислот.

Аминокислоты можно выбрать из α-аминокислот, β-аминокислот и γ-аминокислот. Примеры предпочтительных аминокислот включают глицин, аланин, лейцин, серин, лизин, глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, треонин, валин, изолейцин, орнитин, глутамин, аспарагин, тирозин, фенилаланин, цистеин, метионин, аргинин, аланин, триптофан, пролин, гистидин и т.д. Особенно предпочтительными являются треонин и серин, принимая во внимание фармацевтические эффекты и безопасность. Хотя любая из данных аминокислот может находиться в L-, D- или DL-форме, L-форма является предпочтительной.

Как описано выше, производное стильбена по настоящему изобретению представляет собой соединение, основную структуру которого составляет цис-стильбен, и проявляет активность в отношении подавления полимеризации тубулинов и/или противоопухолевую активность. Примером таких производных стильбена служит комбретастатин А-4 и продукт формулы (II), описанные ранее в публикациях в данной области, таких как патенты США №4996237, 5561122 и 5430062. Известные из уровня техники производные стильбена, описанные в этих публикациях, комбретастатин формулы (II), описанный в патентах США №5525632 и 5731353, можно использовать как производные стильбена по настоящему изобретению, поскольку они соответствуют определению производных стильбена по настоящему изобретению.

Ранее указанные производные стильбена можно получать обычными способами, включая способ, описанный в указанных выше известных публикациях.

Среди производных стильбена по настоящему изобретению имеются соли, сложные эфиры и другие производные стильбена, которые могут превращаться in vivo в производные стильбена, поскольку производные стильбена проявляют указанные выше виды активности в теле животного.

Среди соединений, представленных указанной выше общей формулой (II), находятся соединения, представленные следующей формулой (IIa):

Соединение формулы (IIa) растворимо в воде и может находиться в форме соли, примерами которой являются гидрохлорид, ацетат, метансульфонат и т.п.

Как результат, комбинации по настоящему изобретению не ограничиваются исключительно комбинациями, которые получают посредством физического сочетания составляющих, а также включают комбинации, которые допускают раздельное введение, которое может быть одновременным или разделенным некоторым промежутком времени.

Одним из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения является применение соединения IIa в количестве, достаточном для подавления роста опухоли, в комбинации с VEGF Trap.

Противоопухолевые средства по настоящему изобретению можно вводить парентерально, как обсуждалось выше. В данном случае противоопухолевое средство в форме болюса или приготовленное в резервуаре для внутривенного вливания, можно ввести внутривенно, вместе с фармацевтически приемлемыми носителями различными способами, известными специалисту в данной области. Предпочтительно фармацевтическое средство изготавливают обычным способом, например, в стандартной лекарственной форме и в форме лиофилизированного препарата и разводят в воде или другой подходящей жидкости для инфузии перед введением.

Соотношение двух ингредиентов для фармацевтического препарата для противоопухолевого средства по настоящему изобретению может варьировать в широком диапазоне в зависимости от ряда факторов, таких как желательное количество для введения и употребляемого фармацевтически приемлемого носителя. Что касается количеств или комбинации для введения производного стильбена в фармацевтическом препарате как противоопухолевого средства по настоящему изобретению, производное стильбена предпочтительно используют в количестве приблизительно от 0,01 до 100 и особенно в количестве приблизительно от 0,1 до 10 мас.ч. производного стильбена на 1 мас.ч. VEGF Trap, присутствующего в фармацевтическом препарате. Таким образом, когда фармацевтический препарат по настоящему изобретению, содержащий два активных ингредиента, необходимо ввести пациенту, его вводят в таком количестве, которое даст определенный выше диапазон для введения.

Если фармацевтический препарат необходимо ввести постепенно, определенный выше диапазон для введения можно установить как среднее соотношение для отдельных фармацевтических препаратов.

Далее настоящее изобретение раскрывается боле подробно в отношении его предпочтительных вариантов осуществления. Необходимо отметить, что эти варианты осуществления изобретения приводятся только в качестве примера и не предназначены для ограничения изобретения.

Эффективность комбинации можно продемонстрировать посредством определения ее терапевтического синергизма. Комбинация проявляет терапевтический синергизм, если она терапевтически превосходит лучшее средство, применяемое в его оптимальной дозе (T.H. Corbett et al., Cancer Treatment Reports, 66, 1187 (1982).

Эффективность комбинации также можно продемонстрировать посредством сравнения максимально переносимой дозы комбинации с максимально переносимой дозой каждого из раздельных составляющих, рассматриваемых в исследовании. Эту эффективность можно определить, например, как log₁₀ гибели клеток, который определяют по следующей формуле:

Log₁₀ гибели клеток=T-C(сутки)/3,32×T_d,

где Т-С представляет время задержки роста опухоли, которое представляет собой среднее время в сутках для опухолей группы, подвергнутой воздействию (Т), для достижения предопределенного значения (например, 1 г) и опухолей контрольной группы (С) для достижения того же значения, а T_d представляет время в сутках, необходимое для удвоения объема опухолей в контрольной группе. Во время экспоненциального роста опухоли (T.H. Corbett et al., Cancer, 40, 2660.2680 (1977); F.M. Schabel et al., Cancer Drug Development, Part B, Methods in Cancer Research, 17, 3-51, New York, Academic Press Inc. (1979)). Считается, что продукт является активным, если log₁₀ гибели клеток выше или равен 0,7. Считается, что продукт является очень активным, если log₁₀ гибели клеток выше чем 2,8.

Комбинация, используемая в ее максимально переносимой дозе, в которой каждый из составляющих будет присутствовать в дозе, как правило, не превосходящей его максимально переносимой дозы, будет проявлять терапевтическую синергию в том случае, когда log₁₀ гибели клеток выше по меньшей мере 1 log₁₀, при сравнении его со значением log₁₀ гибели клеток лучшего составляющего при его самостоятельном введении.

Подавление роста опухоли происходит в результате лечения, включающего введение эффективного количества комбретастатина и эффективного количества второго противоракового соединения, как описано ниже, человеку, страдающему раком. В приемлемом случае это введение сдерживает рост опухоли и, следовательно, уменьшает измеряемый размер опухоли. В оптимальном случае опухоль подвергается регрессии полностью.

Как описано выше, на способ введения противоопухолевых средств по настоящему изобретению млекопитающему, подлежащему лечению, не существует конкретного ограничения. Их можно вводить перорально или парентерально, например внутривенным, подкожным или внутримышечным путем. Для быстрого эффекта предпочтительным является парентеральное введение комбретастатина, такое как внутривенное, в болюсе или посредством инфузии. В способе для введения фармацевтического препарата по настоящему изобретению комбретастатин можно вводить одновременно с другим противораковым средством или оба можно последовательно вводить в определенном порядке. Специалист в данной области с помощью обычного способа и информации, содержащейся в настоящем описании, может легко выбрать оптимальные способ и последовательность введения комбретастатина и второго противоракового средства.

Эффективное количество комбинации комбретастатина с VEGF Trap, ингибирующее рост опухоли, означает лечебную единицу, которую можно ввести человеку, страдающему пролиферацией опухолевых клеток, чувствительных к компонентам данной комбинации. Практически желательная лечебная единица варьирует в зависимости от индивидуальных форм дозирования применяемого комбретастатина, индивидуальных форм дозирования применяемого вспомогательного противоракового средства, индивидуальных опухолевых клеток, подлежащих лечению, и индивидуальных хозяев, подлежащих лечению. Специалист в данной области с помощью тестовых лечебных единиц и информации, содержащейся в настоящем описании, для заданных данных условий может легко выбрать оптимальные лечебные единицы.

Противоопухолевое средство по настоящему изобретению представляет собой фармацевтический препарат, содержащий по меньшей мере комбретастатин и VEGF Trap, как описано выше, так что фармацевтический препарат может содержать два активных ингредиента в виде смеси. Однако два активных ингредиента по настоящему изобретению можно содержать отдельно в различных фармацевтических препаратах, которые можно использовать последовательно или в комбинации. Следует отметить, что такой фармацевтический препарат, который содержит другие средства (третий и четвертый медицинские ингредиенты и т.п.), такие как другие противоопухолевые средства, естественно можно включить в настоящее изобретение, поскольку этот фармацевтический препарат содержит эффективные ингредиенты, применяющиеся в настоящем изобретении. Кроме того, это возможно для носителей, разбавителей и других веществ, фармацевтически приемлемых для любого из фармацевтических препаратов по настоящему изобретению (единый фармацевтический препарат, содержащий оба ингредиента по настоящему изобретению, и отдельные фармацевтические препараты, раздельно содержащие один из двух ингредиентов для использования в комбинации), которые должны содержаться в противоопухолевом средстве по настоящему изобретению.

Теперь настоящее изобретение раскрывается более подробно в отношении его предпочтительных вариантов осуществления. Необходимо отметить, что эти варианты осуществления изобретения приводят только в качестве примеров и они не предназначены для ограничения изобретения.

Фармацевтические препараты для инфузии получали в соответствии со следующей композицией, используя в качестве компонентов комбретастатины формулы (IIa) и А4, представленные соответственно следующими химическими формулами:

Компонент (I) (в виде фосфата) 10 мг Физиологический раствор 9,5 мл Компонент (IIa) (в виде гидрохлорида) 5 мг Физиологический раствор 9,5 мл

Противоопухолевый эффект и тесты

Эффективность комбинаций в случае солидных опухолей можно определить экспериментально следующим образом.

Животным, являющимся объектом эксперимента, мышам-самкам C₃H/HeN, имплантируют подкожно с двух сторон фрагмент опухоли типа аденокарциномы грудной железы МА13/С массой от 30 до 60 мг на 0 сутки. В случае лечения ранней стадии опухолей животных, несущих опухоль, случайным образом распределяют по различным группам на тех, которых подвергнут воздействию, и в контрольную группу. Здесь в случае лечения прогрессирующих опухолей у животных, несущих опухоли, достигающие предварительно определенного размера и больше 200 мг, распределяют по различным группам на тех, которых подвергнуты воздействиям, и в контрольную группу, таким образом, чтобы диапазон размера опухоли в одной группе был сравним с диапазоном размера опухоли в другой. Животных, не несущих опухолей, можно подвергать таким же воздействиям, как и животных, несущих опухоли, чтобы иметь возможность отличить токсический эффект от специфического воздействия на опухоль. Как правило, химиотерапию начинают от 3 до 22 суток после имплантации, в зависимости от типа опухоли и желательного размера опухоли. Животных обследовали и взвешивали ежедневно. Доза (средняя по группе), приводящая к потере веса, равной 20% или больше, на самом упадке сил или к смертности, равной 10 % или более, рассматривалась как токсичная.

Опухоли измеряли 2 или 3 раза в неделю, пока вес опухоли не достигал примерно 2 г или пока животное не умирало, если это происходило раньше, чем вес опухоли достигал 2 г. При умерщвлении проводили вскрытие животных.

Противоопухолевую активность определяли в соответствии с различными учетными параметрами, такими как доза (мг/кг), способ введения, время введения, токсичность и логарифм гибели клеток, являющийся функцией времени задержки роста опухоли, а также времени удвоения объема опухоли.

Изобретение относится к лекарственным средствам и касается фармацевтической комбинации, содержащей эффективное количество противоракового соединения, представляющего собой VEGF Trap, в комбинации с эффективным количеством производного комбретастатина, выбранного из комбретастатина А-4, продукта формулы (II) и производного комбретастатина формулы (IIa), для лечения солидных опухолей. Комбинации по изобретению обеспечивают существенное уменьшение развития объема опухоли по сравнению с введением каждого соединения по отдельности. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Фармацевтическая комбинация, содержащая эффективное количество противоракового соединения, представляющего собой VEGF Trap, в комбинации с эффективным количеством производного комбретастатина, выбранного из
комбретастатина А-4, имеющего следующую формулу:

и
продукта формулы (II), имеющего следующую формулу:

для лечения солидных опухолей.

2. Фармацевтическая комбинация, содержащая эффективное количество противоракового соединения, представляющего собой VEGF Trap, в комбинации с эффективным количеством производного комбретастатина следующей формулы (IIa):

для лечения солидных опухолей.

3. Комбинация по п.2, где указанное производное комбретастатина находится в виде гидрохлорида.