СПОСОБ РЕГУЛЯЦИИ ТКАНЕВОГО КРОВОТОКА ПУТЕМ ИНДУКЦИИ И СИНТЕЗА ЭНДОГЕННЫХ ВАЗОТРОПНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ ГРУППЫ ЭЙКОЗАНОИДОВ Российский патент 2011 года по МПК A61M1/34 

Изобретение относится к области биологии и медицины, направлено на создание управляемой технологии, позволяющей изменять баланс вазоконстрикторов и вазодилятаторов в перфузируемом органе или сосудистом регионе, и может быть использовано для воздействия на механизмы коррекции гомеостаза при различных видах дизрегуляционной патологии и лечения всевозможных заболеваний, патогенез и саногенез которых связан с развитием процессов на уровне микроциркуляции.

Кровоснабжение любого органа и любого сосудистого региона в организме прежде всего зависит от тонуса сосудов. Сосудистый тонус, в свою очередь, определяется суммарным эффектом действия биологически активных сосудотропных веществ (БАВ). Баланс между количеством всех генерированных вазоконстрикторов и вазодилятаторов, а также количество и качество различных типов рецепторов, экспрессированных на мембранах эндотелиальных и гладкомышечных клеток, создают необходимый в данный момент сосудистый тонус в конкретном сосудистом регионе и играют ведущую роль в его регуляции. При исследовании сосудотропных эффектов БАВ следует помнить об антагонистическом принципе регуляции, который свидетельствует о том, что генерация сосудорасширяющих факторов параллельно ведет к появлению молекул с противоположно направленным действием, то есть вазоконстрикторов и наоборот. Сосудотропные вещества могут быть продуктами различных систем: медиаторами нервной системы (ацетилхолин, адреналин и др.), производными ферментативных каскадных систем плазмы (брадикинин, каллидин, Т-кинин, ангиотензин-II и др.), продуктами клеток крови (пуриновые основания, эйкозаноиды и др.) и клеток других органов (кардиомиоциты и нейроны головного мозга - натрийуретические пептиды и др.). Но основным источником вазоактивных молекул являются клетки эндотелия, выстилающие кровеносные сосуды. К основным эндотелиальным факторам, влияющим на тонус сосудов, можно отнести следующие вазоконстрикторы: эндотелин-1, тромбоксан A₂, 20-НЕТЕ (20 гидроксиэйкозотетраеновая кислота), ангиотензин-II. Список основных вазодилятаторов несколько больше: оксид азота (NO°), эндотелиальный гиперполяризующий фактор (EDHF), простациклин, адреномедуллин, моноокись углерода (СО), натрийуретический пептид-С, анандамид, АТФ, АДФ, кинины. Дисбаланс в концентрации данных веществ либо изменение напряжения сдвига приводит к изменению сосудистого тонуса, что влияет на кровоснабжение тканей и доставку к ним необходимых ингредиентов для нормального функционирования.

К изменению спектра БАВ в крови, в том числе и сосудотропных, ведет контактное взаимодействие крови с твердофазными препаратами, о чем свидетельствует принцип твердофазной контактной гемомодуляции [1, 2, 3, 4]. Суть принципа сводится к запуску и цепному развитию активационных процессов в гуморальных и клеточных системах крови при ее контактном взаимодействии. Образовавшиеся в крови биоактивные вещества передают свой активационный потенциал на клетки сосудистого русла, индуцируя в клетках эндотелия синтетические и секреторные процессы, которые, в свою очередь, влияют на спектр сосудотропных факторов, регулируя состояние сосудистого тонуса. Надо полагать, что значительный вклад в создание оптимального сосудистого тонуса вносят и эйкозаноиды - метаболиты арахидоновой кислоты, которые, в зависимости от характера активационного стимула, могут быть представлены преимущественно как вазоконстрикторами, так и вазодилятаторами, оказывая соответствующее влияние на тонус сосудов и микроциркуляцию.

Физиологически активные эйкозаноиды образуются преимущественно из арахидоновой кислоты, которая способна высвобождаться из мембранных фосфолипидов клеток под действием фосфолипазы А₂. Освободившаяся арахидоновая кислота включается в метаболические циклы с участием различных ферментативных систем. Эта ферментная система цитохром Р-450, которая является неспецифической монооксигеназой, представляет собой группу гем-тиолатных белков и является наиболее разносторонней из известных ферментных систем по количеству катализируемых реакций и по числу участвующих субстратов эндогенного происхождения, включая жирные кислоты и эйкозаноиды, и ксенобиотиков [5]. Однако основной метаболизм арахидоновой кислоты осуществляется с участием циклооксигеназ (ЦОГ-1 и ЦОГ-2) и липооксигеназ (5-ЛОГ, 12-ЛОГ, 15-ЛОГ), причем при низких концентрациях арахидоновой кислоты начинают функционировать циклооксигеназы, а по мере возрастания концентрации присоединяются и липооксигеназы. Метаболитами арахидоновой кислоты по ЦОГ-пути являются простагландины и тромбоксаны (PG: G₂, H₂, А₂, E₂, F_2a, D₂, I₂ и ТХА₂, B₂). С участием липооксигеназы образуются гидроксиэйкозатетраеновые кислоты (НЕТЕ), лейкотриены (LTA₄, C₄, D₄, Е₄, F₄, В₄), липоксины (LXA₄, В₄), гепоксилины (YXA₃, В₃), триоксилины (TRХА₃, В₃). Все перечисленные метаболиты имеют различные периоды полужизни, различную тропность к рецепторному аппарату клеток, и, следовательно, вызывают различный по силе, продолжительности и направленности биологический эффект. Физиологическое действие метаболитов арахидоновой кислоты проявляется в различных направлениях. Они способствуют развитию тромборезистентных и прокоагулянтных свойств сосудистой стенки, модулируют взаимодействие между клетками как одного типа (агрегация), так и разных типов (адгезия), вмешиваются в процессы плазменного звена гемостаза, изменяют фибринолитический потенциал крови и влияют на гемодинамические характеристики [6]. Именно гемодинамические свойства эйкозаноидов, баланс которых в крови обеспечивает определенный уровень кровотока и микроциркуляции в тканях, интересует нас в контексте данной заявки. Среди перечисленных выше метаболитов арахидоновой кислоты можно выделить соединения как с выраженными вазоконстрикторными свойствами (Тромбоксан A₂, лейкотриены C₄, D₄, Е₄), так и преимущественные вазодилятаторы (Простагландин Е₂, простациклин). Отслеживая данные вещества в крови можно косвенно судить о состоянии микроциркуляции при различных воздействиях на организм.

В качестве аналогов данной работы могут быть рассмотрены исследования, в которых изучены влияния различных воздействий на состояние сосудистого русла и микроциркуляцию. Прежде всего, это относится к различным вариантам гемосорбции. Начиная с классических работ по гемосорбции [7] и заканчивая исследованиями гемоциркуляторных показателей при различных заболеваниях [8, 9, 10] с использованием прямых и косвенных методов оценки микроциркуляции и метаболизма было однозначно доказано, что экстракорпоральная гемоперфузия с применением различных гемосорбентов приводит к улучшению тканевого кровотока. Улучшение микроциркуляции происходит, по-видимому, как за счет улучшения реологических свойств крови, так и за счет увеличения количества функционирующих капилляров. В обоих случаях эти изменения тканевого кровотока, очевидно, связаны с изменениями баланса вазотропных соединений и, не в последнюю очередь, эйкозаноидов крови, возникающих в следствие гемоконтактной процедуры.

Другим аналогом данного исследования можно считать работу, в которой на модели классического варианта гемосорбции у крыс было измерено изменение показателей системного, органного и тканевого кровотока с применением радиоактивных индикаторов: макроагрегаты альбумина, меченные I¹³¹ (MAA I¹³¹) и хлорид рубидия (Rb⁸⁶) [11]. К системе гемоциркуляции животных подключали экстракорпоральный контур по схеме артерия → вена, который содержал колонку с гемосорбентом объемом 2,0 мл. Скорость гемоперфузии составляла 15 мл/час, время - 60 мин. Следовательно, объем крови, прошедший через колонку с сорбентом, составлял около 15 мл, что при перерасчете на массу крови у животного составляет приблизительно 1 ОЦК. Делается заключение, что суммарный гемодинамический эффект сорбционной процедуры зависит от изменения баланса вазотропных соединений, которые могут как сорбироваться из кровотока, так и индуцироваться в результате гемоконтактной активации на гранулах сорбента.

В качестве аналога следует рассмотреть еще одно экспериментальное исследование, в котором на модели ишемии - реперфузии конечности с применением стандартного гемосорбента (СКН-1К) и СКН-1К, модифицированного гипохлоритом натрия, изучали возможность повышения эффективности лечения и в качестве маркеров эффективности использовали оценку процессов пероксидации липидов, а также содержание в плазме крови вазоактивных эйкозаноидов [12]. Эксперименты выполнены на 12-15 кг собаках. Использовали модель ишемии - реперфузии по В.Д.Пасечникову (1996). Ишемию моделировали в течение 4 часов. Через 3 часа после начала реперфузии проводили гемокарбоперфузию по вено-венозному контуру на стандартном или модифицированном гемосорбенте СКН-1К продолжительностью 1 час трижды в течение 72 часов. Для гемокарбоперфузии использовали аппарат УАГ-01, объем сорбента 75 мл, скорость 80-92 мл/мин. Оценка вазотропных соединений при карбогемоперфузии на стандартном гемосорбенте СКН-1К показала следующее: вазоконстрикторы - суммарный уровень лейкотриенов C₄, D₄, Е₄ (Leuk C₄, D₄, Е₄) остался без изменений, эндотелин уменьшился, а тромбоксан несколько возрос; вазодилятаторы - простагландин E₂ (PGE₂) остался без изменений, простациклин (6-кето-PGF_1α) достоверно возрос. Более впечатляющие результаты были получены при гемокарбоперфузии через модифицированный СКН-1К. Исследования показали, что данная процедура приводит к уменьшению концентраций всех вазоконстрикторов, незначительному снижению концентрации вазодилятатора простагландина Е₂ и существенному повышению концентрации простациклина. Получается, что гемоперфузия позволяет воздействовать на компенсаторные процессы на уровне метаболизма вазотропных соединений, в том числе и из группы эйказаноидов, что приводит к стабилизации процессов перекисного окисления и состояния гемодинамики и микроциркуляции.

За прототип предлагаемого изобретения можно принять экспериментальное исследование, оформленное в виде патента РФ №2203098, 2003 «Способ улучшения кровоснабжения тканей активированными гуморальными и клеточными элементами крови» [14]. В экспериментах на крысах с использованием радиоактивных индикаторов МАА I¹³¹ и Rb⁸⁶ было показано, что малообъемная перфузия конечности кровью, прошедшей через гемоконтактный препарат, приводит к улучшению кровоснабжения тканей перфузируемой конечности как на уровне перераспределения фракций сердечного выброса, так и на уровне изменения микроциркуляции в регионе. Параметры гемоперфузии составляли: 0,5 мл крови на 100 г массы животного, скорость гемоперфузии - 0,5 мл/мин, объем гемоконтактного препарата - 30% от объема перфузируемой крови. Расчеты показывают, что для 180-200-граммовых крыс такое количество перфузируемой крови составляет 6,7-7,4% ОЦК [15]. В пересчете на 80 кг человека данный процент ОЦК будет составлять примерно 400 мл крови, что лишь условно можно считать малым объемом.

Предлагаемый способ улучшения кровоснабжения в органах и тканях позволяет избежать данного недостатка, снизив объем перфузируемой крови в 4-37 раз.

Исследования проводили на больных с воспалительными заболеваниями пальцев и кисти. Пациентам пунктировали локтевую вену, забирали кровь через коммуникационную систему в специальную колонку, содержащую гемоконтактный препарат (угольный гемосорбент СКТ-6А-ВЧ, разрешенный к применению в клинике), активировали кровь путем ротации и, не выходя из сосуда, возвращали в гемоциркуляцию через ту же иглу.

В отличие от прототипа, способ позволяет работать как с артериальной, так и венозной кровью. В последнем случае для создания в перфузируемом регионе повышенных концентраций биоактивных субстанций с вазотропными свойствами предполагается ограничение кровотока в перфузируемой конечности путем наложения жгута. Общий объем перфузируемой крови - от 15 до 100 мл, что составляет 0,2-2,0% ОЦК (в прототипе - 6,7-7,4% ОЦК). Объем гемоконтактного препарата составляет 10-70% от объема перфузируемой крови. Скорость перфузии составляет 5-10 мл/мин. Лечебный курс включает 4 гемоперфузии с интервалом 2-3 суток.

Для оценки влияния контактного взаимодействия крови с твердофазными препаратами на индукцию и состояние пула сосудотропных соединений исследовали производные арахидоновой кислоты, два соединения из которых обладают дилятаторным эффектом (простагландин Е₂ и простациклин) и два - констрикторными свойствами (тромбоксан А₂ и пул лейкотриенов C₄/D₄/E₄). Концентрацию эйкозаноидов регистрировали в плазме крови больных с помощью иммуноферментного анализа (ИФА), используя специализированные наборы для ИФА, выпускаемые фирмой «Amersham». Тромбоксан А₂ является лабильным компонентом с периодом полужизни порядка 30 секунд. Поэтому в плазме крови регистрировали его стабильную производную субстанцию, которая биологически неактивна и обозначается как тромбоксан В₂. Подобным образом обстоят дела и с простациклином (простагландином I₂). Он также представляет собой нестабильное вещество, которое спонтанно подвергается гидролизу и превращается в относительно стабильный метаболит 6-кето-PGF_1α, период полужизни которого возрастает до 9-23 минут. Таким образом, для определения баланса сосудотропных эйкозаноидов регистрировали вазодилятаторы (простагландин Е₂ и 6-кето-PGF_1α) и вазоконстрикторы (лейкотриены C₄/D₄/E₄ и тромбоксан В₂).

Для исследования в динамике баланса вазотропных соединений из группы эйкозаноидов заборы крови из локтевой вены больных делали до начала первой процедуры гемоперфузии, через 20 мин перед снятием жгута с предплечья и спустя 60 мин после снятия жгута. В последующем исследовали пробы крови, полученные до начала второй и третьей процедур и через 80 мин после завершения четвертой гемоперфузии.

Результаты проведенного исследования иллюстрируются следующими примерами.

Пример №1. Изменение спектра вазотропных метаболитов арахидоновой кислоты в процессе курса лечения больных с воспалительными заболеваниями пальцев и кисти методом малообъемной гемоперфузии (РМОГ) (фиг.1).

Концентрации различных эйкозаноидов в плазме крови пациентов до начала лечения малообъемной гемоперфузией приняты за точку отсчета и выражены диаграммой в виде круга, разделенного на 4 равных сектора, каждый из которых обозначает одно из изученных веществ и составляет 25%. Суммарная концентрация всех эйкозаноидов принята за 100%. Соотношение вазоконстрикторов (К) и вазодилятаторов (D) соответствует в процентном отношении 50/50. Диаметр круга прямо пропорционален суммарной концентрации исследуемых эйкозаноидов в пробах.

Через 20 мин после завершения процедуры баланс исследуемых эйкозаноидов несколько изменился. Во-первых, возросла общая концентрация метаболитов арахидоновой кислоты на 11,8%. Во-вторых, в общем спектре сосудотропных соединений произошло смещение в сторону вазодилятаторов (44/56), причем внутри этой группы доля простациклина снизилась с 25 до 19,1%, зато доля PG Е₂ возросла значительно - с 25 до 36,9%. Изменилось и соотношение констрикторов: Тромбоксана В₂ (Thr B₂) - с 25 до 27,7%; лейкотриенов C₄/D₄/E₄ - с 25 до 16,3%.

Спустя 80 мин после окончания гемоперфузии состояние метаболизма арахидоновой кислоты осталось практически без изменений. Осталась увеличенной на 11,0% концентрация эйкозаноидов. Сохранилось смещение спектра метаболитов в сторону дилятаторов (45/55). Внутри группы вазоконстрикторов соотношение тромбоксана В₂ и лейкотриенов C₄/D₄/E₄ практически сравнялось (23,2 и 21,8% соответственно). Зато внутри группы вазодилятаторов резко выросла доля PGE₂ (до 46,7%) и снизилась доля 6-кето-PGF_1α (до 8,3%).

Перед началом 2-ой процедуры общая концентрация метаболитов еще больше возросла и составила 137,6% от ее исходных значений до начала первой гемоперфузии. Сохранилось и даже увеличилось преобладание вазодилятаторов (36,5/64,5). Доли Thr B₂ и Leuk C₄/D₄/E₄ составили 23,2 и 12,3% соответственно, а 6-кето-PGF_1α и PGE₂ - 20,8 и 43,7%.

До начала выполнения 3-ей процедуры гемоперфузии состояние метаболизма арахидоновой кислоты практически не изменялось по сравнению с предыдущим исследованием, только несколько возросла общая концентрация эйкозаноидов до 143,3% по сравнению с исходными значениями. Соотношение констрикторы/дилятаторы составило 37,2/62,8. Процентные соотношения в группах констрикторов и дилятаторов изменились незначительно и составили единичные проценты.

После завершения 4-ой процедуры получены максимальные значения увеличения общей концентрации эйкозаноидов, что более чем в 1,5 раза превышает исходные концентрации (155,1%). Отношение вазоконстрикторов к вазодилятаторам осталось приблизительно такое же, как в двух предыдущих исследованиях (36,2/63,8). Сохранилось и соотношение в группе вазоконстрикторов (Thr В₂/ Leuk C₄/D₄/E₄ - 23,1/13,1). Зато существенно поменялся спектр вазодилятаторов: доля простагландина Е₂ снизилась в 2 раза и составила 23,2%, в то время как доля простациклина (6-кето-PGF_1α) возросла более чем вдвое по сравнению с предыдущим исследованием и достигла 40,6%.

Таким образом, малообъемная гемоперфузия региона влияет на состояние метаболизма арахидоновой кислоты в этом регионе. Это выражается в увеличении концентрации метаболитов по мере проведения курса лечения, в смещении спектра эйкозаноидов в сторону преобладания метаболитов с дилятационными свойствами и, на заключительном этапе, инверсии вазодилятаторов.

Пример №2. Изменение спектра вазотропных метаболитов арахидоновой кислоты в процессе курса лечения больных с воспалительными заболеваниями пальцев и кисти с использованием гелий-неонового лазера ЛГН-303 (фиг.2).

В исследованиях использовали постоянный (30-35 мВт) гелий-неоновый лазер ЛГН-303, работающий в диапазоне 620-850 нм с длиной волны 0,83 мкм. Время экспозиции - 10 минут. Курс лечения состоял из 10 ежедневных процедур на фоне стандартной терапии. Забор крови из локтевой вены проводили: до начала первой процедуры, через 20 мин после ее завершения и через 60 мин после предыдущего взятия крови, а также перед 3-ей и 5-ой процедурами, через 80 мин после завершения 8-ой и 10-ой процедур. Кровь обрабатывали для получения сыворотки и замораживали до проведения ИФА на определение метаболитов арахидоновой кислоты. Оценку результатов осуществляли как и в предыдущем исследовании, выражая изменения концентраций эйкозаноидов в процентах.

Результаты исследования до проведения 1-ой процедуры приняты за 100%, выражены в виде круга, разделенного на 4 равных сектора по 25%, каждый из которых соответствует одному из метаболитов. Соотношение вазоконстрикторы/вазодилятаторы соответствует 50/50.

Через 20 мин после завершения воздействия лазером на рану, суммарное воздействие метаболитов арахидоновой кислоты составило 76,4% от исходного уровня, при этом равновесие констрикторов и дилятаторов сдвинулось в сторону последних (43/57), среди которых преобладал 6-кето-PGF_1α (36,3% против 20,7% PGE₂).

Спустя 80 мин после облучения лазером суммарное количество эйкозаноидов несколько возросло по сравнению с 20-минутной пробой, но не достигло исходного уровня (88,4%). Баланс констрикторов и дилятаторов практически восстановился (49,7/50,3), но спектр метаболитов изменился. Среди констрикторов преобладал тромбоксан B₂ (30,3%), среди дилятаторов повышенное процентное соотношение сохранил 6-кето-PGF_1α (36,0%).

Перед началом 3-го сеанса облучения суммарное количество метаболитов составило 75,1% его исходного значения, процентный баланс констрикторы/дилятаторы представлен в соотношении 48/52, среди которых также преобладали Thr 82 (27,6%) и 6-кето-PGF_1α (38,2%).

В пробе крови, полученной до проведения 5-ой процедуры, суммарная концентрация метаболитов арахидоновой кислоты превысила исходные значения и составила 105,4%. При этом сохранилось преобладание вазодилятаторов над констрикторами (K/D=40,9/59,1). Структура спектра метаболитов сохранилась: среди констрикторов преобладал Thr В₂ (24,2%), среди дилятаторов - 6-кето-PGF_1α (37,2%).

Спустя 80 мин после завершения 8-ой процедуры показатели, отражающие концентрации метаболитов, резко снизились и составили 68,2% от исходного значения. Баланс K/D приблизился к исходным величинам (49,3/50,7). Среди дилятаторов сохранилось преобладание 6-кето-PGF_1α, а процент констрикторов Leuk C₄/D₄/E₄ возрос почти в 2 раза и достиг 32,1%.

В результате последнего исследования через 80 мин после 10 процедуры получены наименьшие значения суммарной концентрации эйкозаноидов, которые составили только 44,4% от их исходного значения (до 1-ой процедуры). Увеличился процент дилятаторов (57,5%) по сравнению с констрикторами (42,5%), при этом сохранился спектр метаболитов как в предыдущей пробе: преобладание у дилятаторов 6-кето-PGF_1α (40,6%) и Leuk C₄/D₄/E₄ (29,6%) у констрикторов.

Таким образом, воздействие лазерного излучения на раневую поверхность приводит к изменению концентрации и спектра метаболитов арахидоновой кислоты в пробах крови, полученных в динамике на протяжении курса лечения. В отличие от малообъемной гемоперфузии, суммарная концентрация исследованных эйкозаноидов во всех пробах крови была ниже исходных значений, за исключением пробы до 5-ой процедуры. Лазерное воздействие смещало спектр метаболитов в сторону вазодилятаторов, но в меньшей степени, чем малообъемная гемоперфузия. Среди дилятаторов во всех пробах преобладал 6-кето-PGF_1α, среди констрикторов - сначала Тромбоксан В₂, а в 2-х последних пробах (после 8-ой и 10-ой процедур) произошла инверсия и на первое место вышли лейкотриены C₄/D₄/E₄.

Пример №3. Изменение спектра вазотропных метаболитов арахидоновой кислоты в процессе курса лечения больных с воспалительными заболеваниями пальцев и кисти с использованием лампы «Биоптрон» (Zepter, Швейцария) (фиг.3).

Использовали систему светотерапии «Биоптрон» (Zepter, Швейцария) с удельной мощностью света 40 мВт/см² при воздействии на раневую поверхность с расстояния 10 см в течение 10 мин. Данная система представляет собой такую комбинацию инфракрасного и видимого света, которая считается наиболее рациональной для лечения различных повреждений. Курс лечения также состоял из 10 ежедневных процедур на фоне стандартной терапии. Для оценки влияния света лампы на патологический процесс регистрировали состояние метаболизма арахидоновой кислоты в венозной крови, оттекающей от очага поражения, которую забирали из локтевой вены в те же сроки, что и при лечении лазером: до проведения 1-ой процедуры (исходное состояние), через 20 и 80 мин после ее окончания, до выполнения 3-ей и 5-ой процедуры, а также спустя 80 мин после окончания 8-ой и 10-ой процедуры. В сыворотке крови с помощью ИФА определяли те же метаболиты, что и в двух предыдущих примерах: вазоконстрикторы (Thr B₂ и Leuk C₄/D₄/E₄) и вазодилятаторы (6-кето-PGF_1α и PGE₂).

Исходное состояние метаболизма арахидоновой кислоты выражено графически как и в предыдущих исследованиях в процентах (100%), причем на каждый из 4-х метаболитов приходится по 25%. Соотношение K/D составляет 50/50.

Спустя 20 мин после завершения процедуры суммарная концентрация метаболитов снизилась более чем в 2 раза и составила 44,6% от исходного значения, причем соотношение метаболитов сместилось в сторону преобладания вазоконстрикторов (K/D=61,2/38,8), из которых ведущее положение заняли Leuk C₄/D₄/E₄ (41,5%).

Через 80 мин после окончания облучения суммарный пул эйкозаноидов несколько возрос, но по отношению к исходным значениям составил только 61,9%. Отношение констрикторов и дилятаторов составило 57,6/42,4, причем, если вазодилятаторы индуцировались приблизительно в равных соотношениях (20,4 и 22,0%), то среди констрикторов преобладающими остались Leuk C₄/D₄/E₄.

Перед третьей процедурой получена единственная проба крови, в которой суммарная концентрация эйкозаноидов превысила исходные значения и составила 111,3%. Во всех последующих пробах наблюдали нарастающее снижение суммарного пула метаболитов: на 5-ый день - 69,7% от исходного, на 8-ой день - 44,3%, на 10-ый - 38,3%. Анализ спектра метаболитов показал преобладание вазоконстрикторов, процент которых все время возрастал: до 3-ей процедуры - K/D=54,6/45,4, до 5-ой процедуры - 62,8/37,2, после 8-ой - 67,9/32,1, после 10-ой процедуры - 68,1/31,9. При этом среди вазоконстрикторов на протяжении исследования, начиная с 3-го дня, все время возрастал и процент Leuk C₄/D₄/E₄ (до 3-ей процедуры - 27,6%, до 5-ой - 30,3%, после 8-ой - 43,7% и после 10-ой - 56,7%).

Таким образом, исследование лампы «Биоптрон» как источника облучения раневой поверхности в качестве лечебного пособия приводило к снижению суммарного пула метаболитов арахидоновой кислоты в пробах крови, за исключением пробы до 3-ей процедуры. Под воздействием лампы, в отличие от лечения лазером или малообъемной гемоперфузией, спектр сосудотропных эйкозаноидов в процессе проведения курса лечения смещался в сторону преобладания вазоконстрикторов, ведущими метаболитами которых становился суммарный пул Leuk C₄/D₄/E₄.

Приведенные примеры свидетельствуют, что любой из апробированных способов лечения оказывает определенное влияние на метаболизм арахидоновой кислоты, в результате которого образуются продукты с разнонаправленным действием на функциональное состояние сосудов. Воздействие облучения лампой «Биоптрон» на раневой процесс сопровождался снижением концентрации эйкозаноидов (за исключением одной пробы) в крови, оттекающей от пораженного участка кисти. Во всех исследованных пробах преобладающей составляющей были метаболиты с вазоконстрикторными свойствами, в которых суммарный пул Leuk C₄/D₄/E₄ колебался от 27,6% до 56,7%. Воздействие лазером аналогичным образом снижало концентрацию эйкозаноидов в крови (также за исключением одной из 6-ти проб), но в значительно меньшей степени. При этом спектр метаболитов находился ближе к исходным значениям с незначительным преобладанием вазодилятаторных продуктов. Наиболее выраженное воздействие на метаболизм эйкозаноидов оказывала малообъемная гемоперфузия, т.е. контактное взаимодействие крови с твердофазным препаратом. В процессе лечения гемоперфузией наблюдали прогрессивное возрастание уровня исследуемых метаболитов арахидоновой кислоты, среди которых от 55 до 64,5% составляли субстанции с выраженными сосудорасширяющими свойствами. Следует отметить, что на последнем этапе лечения преобладающим эйкозаноидом, который индуцировался в крови больной конечности, был 6-кето-PGF_1α (стабильное производное простациклина).

Таким образом, учитывая количество и спектр образующихся при малообъемной гемоперфузии эйкозаноидов, можно полагать, что проведенный курс лечения будет способствовать усилению кровоснабжения тканей конечности и улучшению в них микроциркуляции, что является одним из основных моментов в процессе саногенеза болезни и регенерации тканей. Помимо регуляции кровотока, система эйкозаноидов модулирует многие процессы, включая гемостаз и тромбоз, транспорт ионов через мембраны, проницаемость сосудов и сокращение гладких мышц, хемотаксис и адгезию лейкоцитов, физиологическую активность тучных клеток. Функции системы эйкозаноидов не ограничиваются лишь внутриклеточной передачей сигнала активации, а изменения связанных с ней регуляторных реакций лежат в основе многих видов сосудистой и тромбоцитарной патологии. Предлагаемый способ воздействия на систему эйкозаноидов и управления этими регуляторными реакциями может представлять собой один из перспективных путей направленной коррекции нарушений при различных видах патологии.

Литература

1. Кузнецов С.И. Эффекторные механизмы гемоперфузии.// Эфферентная терапия, 1998. - Т.4, №4. - С.28-31.

2. Кузнецов С.И. Твердофазная контактная гемомодуляция (иммуномодуляция).//Аллергология и иммунология, 2001.- Т.2, №2. - С.17-18.

3. Кузнецов С.И. Твердофазная контактная модуляция крови./I Съезд физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека», Сочи. Дагомыс, 2005. - Т.2. - С.14-15.

4. Кузнецов С.И. Практические аспекты принципа твердофазной контактной активации крови. // Успехи соврем, естествознания.- 2006.- №2.- С.31-32.

5. Иванов И.В., Гроза Н.В., Мягкова Г.Н. Цитохром Р-450-зависимый метаболизм арахидоновой кислоты. // Биохимия. - 1999. - Т.64, №7. - С.869-882.

6. Петрухина Г.Н., Макаров В.А. Природные эйкозаноиды в регуляции свертывания крови. // Биохимия - 1998. - Т.63, №1. - C.111-121.

7. Лопухин Ю.М., Молоденков М.Н. Гемосорбция. - М.: Медицина, 1985. - 287 с.

8. Атрощенко Е.С., Шагисултанов Э.Р. Влияние гемосорбции на состояние микроциркуляции у больных со стабильной стенокардией по данным радиоиндикации. // Кардиология. - 1991. - №10. - С.25-27.

9. Ротердамская О.М., Ашурметов Р.И., Гутникова А.Р. и др. Возможность нормализации микроциркуляции под воздействием гемосорбции при экспериментальном перитоните.// Анест. и реаним. - 1991. - №2. - С.62-63.

10. Фомичев В.И., Смирнов В.В., Федосеев А.Н., Жукова Н.А. Показатели центральной гемодинамики и микроциркуляции у больных стенокардией для оценки эффективности лечения плазмосорбцией. // Гематология и трансфузиология. - 1992. - №10. - С.19-21.

11. Кузнецов С.И., Тюкавин А.И., Буркова Н.В. и др. Реакции органного и тканевого кровотока на гемоперфузию через сорбенты. // Эфферентная терапия. - 1999. - Т.5, №3. - С.27-32.

12. Сергиенко В.И., Лайпанов Х.И. - Х.М., Петросян Э.А., Оноприев В.И. Оценка состояния прооксидантной системы и вазоактивного статуса организма при развитии и лечении ишемии - реперфузии конечности с применением модифицированных натрия гипохлоритом углеродных гемосорбентов. // Эфферентная терапия - 2006. - Т.12, №4. - С.21-25.

13. Пасечников В.Д., Таций Ю.Г., Ивашкин В.Т. и др. Оценка эффективности гемосорбции при реперфузионных повреждениях печени. // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - 1996. - №3. - С.66-69.

14. Патент РФ №2203098, 2003. «Способ улучшения кровоснабжения тканей активированными гуморальными и клеточными элементами крови».

15. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А., Западнюк Б.В. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. - Киев, 1983. - 382 с.

Изобретение относится к медицине, а именно к интенсивной терапии, и может быть использовано при лечении патологий, патогенез которых связан с нарушением процессов на уровне микроциркуляции. Для этого осуществляют перфузию органа или сосудистого региона активированными элементами крови, образующимися в результате ее взаимодействия с гемоконтактным препаратом через артериальное или венозное русло. При этом объем перфузируемой крови составляет от 0,2 до 2,0% ОЦК, объем гемоконтактного препарата составляет 10-70% от объема перфузируемой крови. Скорость гемоперфузии 5-10 мл/мин. Курс лечения включает 4 гемоперфузии с интервалом 2-3 суток. Способ позволяет обеспечить значительное усиление кровоснабжения в органах и тканях при одновременном снижении объема перфузированной крови за счет создания оптимального баланса метаболитов арахидоновой кислоты с преобладанием сосудорасширяющих соединений. 3 ил.

Способ улучшения кровоснабжения тканей путем перфузии органа или сосудистого региона активированными элементами крови, образующимися в результате ее взаимодействия с гемоконтактным препаратом, отличающийся тем, что перфузию органа или сосудистого региона проводят через артериальное или венозное русло, при этом объем перфузируемой крови составляет от 0,2 до 2,0% ОЦК, объем гемоконтактного препарата составляет 10-70% от объема перфузируемой крови, а скорость гемоперфузии 5-10 мл/мин, курс лечения включает 4 гемоперфузии с интервалом 2-3 суток.