ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫЕ СОЛИ (S)-N-[4-(1-АДАМАНТИЛ)БЕНЗОИЛ]-α-АМИНОКИСЛОТ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2011 года по МПК C07D233/66 C07D233/64 C07D209/14 C07C233/87 C07C323/29 

Настоящее изобретение относится к миметикам пептидов, а именно к фармацевтически приемлемым солям (S)-N-[4-(1-адамантил)бензоил]-α-аминокислот, обладающим противовоспалительными, противоболевыми, противопаркинсоническими, антигипоксическими, актопротекторными и иммуномодулирующими свойствами, маловыраженным ульцерогенным действием, низкой токсичностью и не вызывающих лекарственной зависимости, а также к их способу получения.

В настоящее время миметики пептидов достаточно хорошо известны в фармакологии, благодаря чему используются в клинической практике в качестве диагностических, профилактических и терапевтических средств. Несмотря на это продолжаются исследования в области поиска миметиков, обладающих новыми свойствами при низкой токсичности, низких побочных эффектах и являющихся легко доступными с точки зрения синтеза.

Миметик пептида - это химически синтезированное соединение, которое является «функциональным эквивалентом» по отношению к пептиду и имитирует его структуру, но обладает измененными свойствами. Одним из подходов к созданию структуры миметика является введение в известный пептид или аминокислоту какого-либо липофильного фрагмента, в результате чего увеличивается способность соединения проникать через клеточные мембраны и накапливаться в определенных тканях и органах.

Одним из таких липофильных фрагментов является адамантановый фрагмент, который имеет жесткую, пространственно определенную структуру и обладает способностью эффективно адсорбироваться на клеточных мембранах. Однако на различных примерах было показано, что в результате введения в молекулу адамантана измененяется не только ее липофильность. При этом также наблюдается пролонгирование фармакологических эффектов соединений [1], повышается их устойчивость к метаболическим превращениям в организме и меняется характер взаимодействия соединений с рецепторами мембран [2-4]. Таким образом, введение адамантанового фрагмента в молекулу может приводить к появлению новых видов биологической активности.

Данный подход к синтезу миметиков был применен и описан на примере эндогенного пептида энкефалина и его аналогов, обладающих противоболевой активностью [5]. В структуру энкефалина, содержащего пять аминокислотных остатков, и его аналогов вводили фрагмент адамантана, в результате чего получали миметики с улучшенной проницаемостью через гемато-энцефалический барьер и повышенной устойчивостью к метаболическим превращениям. Основной недостаток указанных соединений заключается в том, что по механизму действия они являются агонистами-антагонистами опиатных рецепторов, что обуславливает наличие выраженных побочных эффектов, одними из которых могут быть лекарственная зависимость и развитие депрессивного состояния. К недостаткам можно также отнести сложность строения миметиков энкефалина.

Кроме этого, известны N-адамантилзамещенные амиды тетрапептидов и их соли, обладающие противоболевой активностью [6]. Данные соединения, как и в приведенном выше примере, являются аналогами энкефалина и, следовательно, могут иметь аналогичные побочные эффекты.

Задачей настоящего изобретения является получение новых эффективных миметиков пептидов, обладающих высокой способностью проникать через клеточные мембраны и низкой токсичностью, а также не проявляющих побочных эффектов и не вызывающих лекарственной зависимости.

В настоящем изобретении поставленная задача была решена с помощью новых соединений, описываемых общей формулой (1)

где А⁺ представляет собой ион щелочного металла, аммония и N⁺(C_1-4алкил)₄;

R² при условии, что R¹ представляет собой атом водорода, представляет собой атом водорода, радикалы -СН₃, -СН(СН₃)₂, -CH₂CH(СН₃)₂, -СН(СН₃)СН₂СН₃, , , -CH₂-CH₂-SH, -CH₂-CH₂-S-CH₃, , ;

R¹ и R² вместе представляют собой бирадикал -СН₂-СН₂-СН₂-, замкнутый в пирролидиновый цикл.

Способ получения соединений формулы (1) в литературе не описан.

В соответствии с настоящим изобретением способ получения соединений по п.1 заключается в превращении 4-(1-адамантил)бензойной кислоты в соответствующий хлорангидрид, дальнейшей реакции ацилирования (S)-α-аминокислоты в присутствии растворителя, представляющего собой смесь воды и 1,4-диоксана, выделении (S)-N-[4-(1-адамантил)бензоил]-α-аминокислоты и ее нейтрализации водным раствором основания в присутствии этилового спирта с образованием соли.

Способ получения соединений формулы (1) осуществляют следующим образом.

4-(1-Адамантил)бензойную кислоту при взаимодействии с избытком хлористого тионила и каталитических количеств N,N-диметилформамида превращают в соответствующий хлорангидрид, после чего избыточный хлористый тионил отгоняют. Хлорангидрид 4-(1-адамантил)бензойной кислоты может быть также получен при взаимодействии с пятихлористым фосфором или другим хлорирующим агентом.

Последующую реакцию ацилирования проводят добавлением раствора хлорангидрида 4-(1-адамантил)бензойной кислоты в 1,4-диоксане к раствору (S)-α-аминокислоты, представляющему собой смесь воды и 1,4-диоксана в объемном соотношении 1:(0,5-5), при рН, равном 8-10 единиц, и при комнатной температуре. При этом соотношение исходной (S)-α-аминокислоты и общего количества растворителя составляет 1:(10-30) по массе. В рассматриваемом процессе на стадии ацилирования (S)-α-аминокислоты образуются продукты, плохо растворимые в воде, что затрудняет течение реакции. Использование смеси растворителей воды и 1,4-диоксана позволяет предотвратить это явление.

Выделение (S)-N-[4-(1-адамантил)бензоил]-α-аминокислоты осуществляют путем добавления к реакционной смеси охлажденной воды и подкислением до рН, равного 3-4 единицы, после чего выпавший осадок отфильтровывают и переосаждают.

На последней стадии растворяют (S)-N-[4-(1-адамантил)бензоил]-α-аминокислоту при комнатной температуре в этиловом спирте в качестве растворителя и нейтрализуют водным раствором основания или соли, после чего отфильтровывают выпавший осадок соединения формулы (1).

Ниже приводятся примеры получения соединений, заявленных в настоящем изобретении. Для подтверждения структуры указанных соединений снимались ¹Н-ЯМР спектры в диметилсульфоксиде на приборе Bruker DRX 500 с рабочей частотой 500 МГц.

Пример 1

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]этановая кислота

К 5,0 г (0,02 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты добавляют 19,7 мл (0,10 моль) хлористого тионила и 2-3 капли N,N-диметилформамида. Полученную смесь кипятят в течение 3 ч, после чего отгоняют под вакуумом избыток хлористого тионила. Получают 5,1 г хлорангидрида 4-(1-адамантил)бензойной кислоты, который используют без предварительной очистки в реакции ацилирования.

Для проведения реакции ацилирования 1,5 г (0,02 моль) глицина растворяют в 10,0 мл (0,02 моль) 2 н. NaOH и добавляют 5,0 мл 1,4-диоксана. В полученный раствор при перемешивании вносят порциями раствор полученного ранее 5,1 г (0,02 моль) хлорангидрида 4-(1-адамантил)бензойной кислоты в 30,0 мл 1,4-диоксана. По мере протекания реакции для поддержания первоначального значения рН 9-10 в смесь добавляют 4 н. водный раствор NaOH. Время добавления хлорангидрида 1 ч. После этого продолжают перемешивание еще 1 ч при 20°С, а затем реакционную смесь разбавляют в 2 раза водой и подкисляют HCl до рН, равного 3. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой до нейтрального значения рН. Очистка проводится переосаждением через натриевую соль, после чего продукт высушивают и получают 4,9 г (85%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]этановой кислоты с т.пл. 245-246°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,15 (д, 1Н, J=6,4 Гц), 7,80 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,38 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,60 (м, 2Н), 2,12 (м, 3Н), 1,93 (м, 6Н), 1,79 (м, 6Н).

4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а)

1,0 г (3,2·10^-3 моль) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]этановой кислоты растворяют в 10 мл этилового спирта и добавляют 0,8 мл (3,2·10^-3 моль) 4 н. NaOH. Выпавшую в осадок соль отфильтровывают и промывают на фильтре этиловым спиртом. Получают 0,96 г (90%) (4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидоацетата натрия. Т.пл. 208-210°С. Рассчитано для C₁₉H₂₂NO₃Na, %: С 68,12; Н 6,57; N 4,18. Найдено, %: С 68,00; Н 6,41; N 4,10.

Пример 2

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]пропионовая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 0,7 г (7,8·10^-3 моль) (S)-аланина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 1,9 г (75%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]пропионовой кислоты с т.пл. 203-205°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,15 (д, 1Н, J=6,4 Гц), 7,80 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,38 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,45 (м, 1Н), 2,12 (м, 3Н), 1,93 (м, 6Н), 1,79 (м, 6Н), 1,43 (д, 3Н, J=8,0 Гц).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]пропионат натрия (1б)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]пропионовой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,9 г (85%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]пропионата натрия. Т.пл. 195-197°С. Рассчитано для C₂₀H₂₄NO₃Na, %: С 68,79; Н 6,87; N 4,01. Найдено, %: С 68,65; Н 6,90; N 4,08.

Пример 3

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутановая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 0,9 г (7,8·10^-3 моль) (S)-валина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,5 г (90%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутановой кислоты с т.пл. 215-218°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 7,80 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,74 (м, 1Н), 7,37 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,40 (дд, 1Н, J=6,7, J=6,4 Гц), 2,22 (м, 1Н), 2,12 (м, 3Н), 1,92 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н), 1,00 (д, 6Н, J=6,0 Гц).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутановой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,9 г (82%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутирата натрия. Т.пл. 169-172°С. Рассчитано для C₂₂H₂₈NO₃Na, %: С 70,05; Н 7,42; N 3,71. Найдено, %: С 70,10; Н 7,53; N 3,69.

Пример 4

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилпентановая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,0 г (7,8·10^-3 моль) (S)-лейцина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,3 г (80%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилпентановой кислоты с т.пл. 113-114°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,20 (м, 1Н), 7,82 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,38 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,50 (м, 1Н), 2,12 (м, 3Н), 1,92 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н), 1,75 (м, 2Н), 1,65 (м, 1Н), 0,95 (д, 6Н, J=9,3 Гц).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилпентаноат натрия (1 г)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилпентановой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,8 г (78%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилпентаноата натрия. Т.пл. 151-153°С. Рассчитано для C₂₃H₃₀NO₃Na, %: С 70,61; Н 7,67; N 3,58. Найдено, %: С 70,40; Н 7,73; N 3,51.

Пример 5

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилпентановая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,0 г (7,8·10^-3 моль) (S)-изолейцина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,2 г (76%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилпентановой кислоты с т.пл. 154-155°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,20 (м, 1Н), 7,82 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,38 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,50 (м, 1Н), 2,12 (м, 3Н), 1,92 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н), 1,65 (м, 1Н), 1,55 (м, 2Н), 0,95 (д, 3Н, J=9,0 Гц), 0,85 (м, 3Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилпентаноат натрия (1д)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилпентановой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,8 г (78%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилпентаноата натрия. Т.пл. 141-142°С. Рассчитано для C₂₃H₃₀NO₃Na, %: С 70,61; Н 7,67; N 3,58. Найдено, %: С 70,49; Н 7,75; N 3,52.

Пример 6

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-фенилпропионовая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,3 г (7,8·10^-3 моль) (S)-β-фенилаланина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,5 г (80%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-фенилпропионовой кислоты с т.пл. 108-110°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,12 (м, 1Н), 7,73 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,36 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,23 (м, 2Н), 7,28 (м, 2Н), 7,15 (м, 1Н), 4,65 (м, 1Н), 3,20 (дд, 1Н, J=14,8 Гц, J=4,6 Гц), 3,10 (дд, 1Н, J=14,8 Гц, J=10,0 Гц), 2,12 (м, 3Н), 1,93 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-фенилпропионат натрия (1е)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-фенилпропионовой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,9 г (86%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-фенилпропионата натрия. Т.пл. 205-207°С. Рассчитано для C₂₆H₂₈NO₃Na, %: С 73,43; Н 6,58; N 3,29. Найдено, %: С 73,55; Н 6,63; N 3,31.

Пример 7

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-2-фенилэтановая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,2 г (7,8·10^-3 моль) (S)-фенилглицина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,7 г (89%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-2-фенилэтановой кислоты с т.пл. 180-185°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,40 (м, 1Н), 7,86 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,49 (м, 2Н), 7,38 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,33 (м, 2Н), 7,27 (м, 1Н), 5,58 (д, 1Н, J=5,0 Гц), 2,12 (м, 3Н), 1,92 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-2-фенилацетат натрия (1ж)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-2-фенилэтановой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,97 г (92%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-2-фенилацетата натрия. Т.пл. 208-210°С. Рассчитано для C₂₅H₂₆NO₃Na, %: С 73,01; Н 6,32; N 3,40. Найдено, %: С 73,11; Н 6,40; N 3,46.

Пример 8

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-сульфанилбутановая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 0,9 г (7,8·10^-3 моль) (S)-цистеина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,3 г (83%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-сульфанилбутановой кислоты с т.пл. 166-167°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,20 (м, 1Н), 7,80 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,40 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,55 (м, 1Н), 2,56 (м, 2Н), 2,12 (м, 3Н), 2,10 (м, 2Н), 1,92 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-сульфанилбутират натрия (1з)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-сульфанилбутановой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,9 г (86%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-сульфанилбутирата натрия. Т.пл. 201-203°С. Рассчитано для C₂₁H₂₆NO₃SNa, %: С 63,81; Н 6,58; N 3,54. Найдено, %: С 63,70; Н 6,61; N 3,46.

Пример 9

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутановая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,2 г (7,8·10^-3 моль) (S)-метионина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,7 г (88%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутановой кислоты с т.пл. 139-140°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,20 (м, 1H), 7,80 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,40 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,55 (м, 1Н), 2,56 (м, 2Н), 2,12 (м, 3Н), 2,10 (м, 2Н), 2,08 (с, 3Н), 1,92 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутановой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,95 г (90%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутирата натрия. Т.пл. 174-177°С. Рассчитано для C₂₂H₂₈NO₃SNa, %: С 64,56; Н 6,84; N 3,42. Найдено, %: С 64,70; Н 6,71; N 3,46.

Пример 10

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-3-индолил)пропионовая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,6 г (7,8·10^-3 моль) (S)-триптофана, следуя методике, описанной в примере 1, получают 3,1 г (91%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-3-индолил)пропионовой кислоты с т.пл. 160-162°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 10,60 (с, 1Н), 8,05 (д, 1Н, J=6,4 Гц), 7,74 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,58 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,34 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,30 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,13 (д, 1Н, J=1,0 Гц), 7,03 (дд, 1Н, J=8,7 Гц, J=8,4 Гц), 6,95 (дд, 1Н, J=8,7 Гц, J=8,4 Гц), 4,72 (м, 1Н), 3,32 (дд, 1Н, J=14,8 Гц, J=4,6 Гц), 3,22 (дд, 1Н, J=14,8 Гц, J=10,0 Гц), 2,12 (м, 3Н), 1,90 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-3-индолил)пропионат натрия (1к)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-3-индолил)пропионовой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 1,0 г (95%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-3-индолил)пропионата натрия. Т.пл. 210-211°С. Рассчитано для C₂₈H₂₉N₂O₃Na, %: С 72,43; Н 6,25; N 6,03. Найдено, %: С 72,30; Н 6,21; N 6,06.

Пример 11

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-5-имидазолил)пропионовая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,2 г (7,8·10^-3 моль) (S)-гистидина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,7 г (88%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-5-имидазолил)пропионовой кислоты с т.пл. 277-279°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,60 (с, 1Н), 7,96 (с, 1Н), 7,88 (д, 1Н, J=6,4 Гц), 7,79 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,42 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,00 (с, 1Н), 4,64 (м, 1Н), 3,12 (м, 2Н), 2,12 (м, 3Н), 1,93 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-5-имидазолил)пропионат натрия (1л)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-5-имидазолил)пропионовой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,9 г (86%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-5-имидазолил)пропионата натрия. Т.пл. 212-214°С. Рассчитано для C₂₃H₂₆N₃O₃Na, %: С 66,52; Н 6,26; N 10,11. Найдено, %: С 66,69; Н 6,21; N 10,16.

Пример 12

1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоновая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 0,9 г (7,8·10^-3 моль) (S)-пролина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,5 г (90%) 1-[4-(1-адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоновой кислоты с т.пл. 222-224°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 12,20 (с, 1Н), 7,45 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,38 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,41…4,30 (м, 1Н), 3,60 (м, 2Н), 2,30 (м, 1Н), 2,12 (м, 3Н), 2,0 (м, 2Н), 1,92 (м, 6Н), 1,85 (м, 1Н), 1,78 (м, 6Н).

1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1 м)

Исходя из 1,0 г 1-[4-(1-адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоновой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 1,05 г (97%) 1-[4-(1-адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилата натрия. Т.пл. 175-178°С. Рассчитано для C₂₂H₂₆NO₃Na, %: С 70,42; Н 6,93; N 3,73. Найдено, %: С 70,42; Н 6,91; N 3,76.

Пример 13

4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат аммония (1н)

1,0 г (3,2·10^-3 моль) (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]этановой кислоты, полученной согласно примеру 1, растворяют в 10 мл этилового спирта и добавляют 0,26 мл (3,5·10^-3 моль) раствора аммиака с массовой долей 25%. Полученный раствор частично упаривают до образования осадка соли, который отфильтровывают и сушат. Получают 0,85 г (80%) (4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидоацетата аммония. Т.пл. 149-150°С. Рассчитано для C₁₉H₂₆N₂O₃, %: С 69,11; Н 7,87; N 8,48. Найдено, %: С 69,00; Н 7,81; N 8,39.

Пример 14

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират аммония (1о)

1,0 г (2,8·10^-3 моль) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутановой кислоты, полученной согласно примеру 3, растворяют в 10 мл этилового спирта и добавляют 0,23 мл (3,1·10^-3 моль) раствора аммиака с массовой долей 25%. Полученный раствор частично упаривают до образования осадка соли, который отфильтровывают и сушат. Получают 0,86 г (82%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутирата аммония. Т.пл. 139-141°С. Рассчитано для C₂₂H₃₂N₂O₃, %: С 70,98; Н 8,60; N 7,52. Найдено, %: С 70,85; Н 8,61; N 7,44.

Пример 15

4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат тетраэтиламмония (1п)

1,0 г (3,2·10^-3 моль) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]этановой кислоты, полученной согласно примеру 1, растворяют в 10 мл этилового спирта и добавляют 2,09 мл (3,2·10^-3 моль) раствора гидроксида тетраэтиламмония с массовой долей 25%. Полученный раствор частично упаривают до образования осадка соли, который отфильтровывают и сушат. Получают 1,06 г (75%) (4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидоацетата тетраэтиламмония. Т.пл. 129-131°С. Рассчитано для C₂₇H₄₂N₂O₃, %: С 73,32; Н 9,50; N 6,33. Найдено, %: С 73,18; Н 9,61; N 6,39.

Технический результат заключается в получении новых эффективных миметиков пептидов, обладающих высокой способностью проникать через клеточные мембраны и низкой токсичностью, а также не проявляющих побочных эффектов и не вызывающих лекарственной зависимости.

Согласно настоящему изобретению соединения формулы (1) могут примененяться в качестве эффективных противовоспалительных, противоболевых, противопаркинсонических, антигипоксических, актопротекторных и иммуномодулирующих средств. Преимуществом данных соединений является то, что они обладают более широким фармакологическим профилем по сравнению с приведенными аналогами, а также обладают маловыраженным ульцерогенным действием, низкой токсичностью и не вызывают лекарственной зависимости.

Исследование фармакологической активности соединений, заявляемых в настоящем изобретении, проводилось методом биологического тестирования. В работе использовались 500 белых беспородных крыс-самцов весом 180-200 г и 765 белых беспородных мышей-самцов весом 18-20 грамм.

С лабораторными животными работали в соответствии с действующими "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных" и "Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных" [7]. Все животные содержались в виварии в одинаковых условиях обитания и кормления (стандартный брикетированный корм). Количество животных в каждой экспериментальной группе в зависимости от модели колебалось в пределах от 10 до 23 особей.

Соединения формулы (1) вводились животным в дозе 20 мг/кг, если это не указано особо. Дозы препаратов сравнения в каждом случае рассчитывались с помощью коэффициента Т.А.Гуськовой, равного 5,9 для крыс и 11,8 для мышей [8]. Животным контрольной группы в эквивалентном объеме вводилась дистиллированная вода (0,5 мл).

Ниже приводятся примеры биологического тестирования соединений формулы (1), иллюстрирующие их фармакологические свойства.

Пример 16

Острая токсичность

Для соединений формулы (1) по методике Тейтнера-Миллера определяли LD₅₀ при тестировании на мышах-самцах [9]. Для этого готовился водный раствор соединения, который затем вводился внутрижелудочно и внутрибрюшинно животному. LD₅₀ рассчитывалась путем оценки смертности животных в течение последующих двух недель. Полученные данные для заявляемых соединений и известного препарата диклофенака натрия, который далее использовался в качестве препарата сравнения при исследовании противовоспалительной и противоболевой активности, приведены в таблице 1.

Таблица 1 LD₅₀ при внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении Соединение LD₅₀ при внутрижелудочном введении, мг/кг LD₅₀ при внутрибрюшинном введении, мг/кг Диклофенак натрия 350* 74* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и), аммония (1н), тетраэтиламмония (1п) 1490±285 345±82 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к) 1870±313 304±64 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в), аммония (1о) 460±137 410±77 1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1 м) 1810±281 375±76 4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а) 1790±340 680±110 * - [12]

Результаты токсикологического исследования свидетельствуют о том, что согласно ГОСТу 12.1.007-76 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности" [10] соединения формулы (1) относятся к третьему классу опасности, то есть являются малоопасными соединениями, так как их среднесмертельные дозы при внутрижелудочном введении входят в интервал от 151 до 5000 мг/кг. При внутрибрюшинном введении заявляемые соединения обладают более низкой токсичностью в 5-9 раз по сравнению с известным противовоспалительным препаратом диклофенаком натрия.

Пример 17

Противовоспалительная активность

Противовоспалительную активность соединений формулы (1) исследовали на моделях острой экссудативной реакции у мышей и формалинового отека у крыс [11]. В качестве препарата сравнения был выбран диклофенак натрия.

Острую экссудативную реакцию (уксуснокислый перитонит) у мышей вызывали внутрибрюшинным введением 1% раствора уксусной кислоты. Раствор уксусной кислоты вводили из расчета 1 мл на 100 г массы тела животного через час после внутрижелудочного введения исследуемого соединения или препарата сравнения. Через 3 ч животных забивали, вскрывали брюшную полость и собирали экссудат. Выраженность антиэкссудативного эффекта соединений определяли по проценту снижения средней массы экссудата по сравнению с контролем.

Результаты экспериментов по определению антиэкссудативной активности заявляемых соединений на модели уксуснокислого перитонита у мышей свидетельствуют о том, что все они обладали антиэкссудативным действием, выраженность которого составляет от 33% до 70% (таблица 2). Наиболее эффективные соединения 1к и 1в достоверно снижали экссудативную реакцию на 55,0% и 69,6% соответственно, превосходя по эффективности препарат сравнения диклофенак натрия, уменьшавший экссудацию на 45,6%.

Таблица 2 Влияние исследуемых соединений на среднее количество экссудата у мышей и средний объем лапы у крыс Соединение Среднее количество экссудата, мг Отечность лап, мл Контроль 701,67±88,00 0,417±0,025 Диклофенак 381,85±68,33* 0,219±0,065* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и), аммония (1н), тетраэтиламмония (1п) 383,93±34,81* 0,205±0,032* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к) 315,94±82,80* 0,206±0,035* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в) 213,49±43,85* 0,183±0,045* 1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м) 470,21±74,82* 0,223±0,107* 4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а) 465,04±70,02* 0,178±0,04* * - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05

Метод формалинового отека у крыс использовался в качестве дополнительного метода оценки противовоспалительной активности. Формалиновый отек моделировался путем субплантарного введения 0,1 мл 2% раствора формалина. Исследуемые соединения вводились внутрижелудочно за час до проведения эксперимента. В таблице 2 представлены данные по угнетению воспалительной реакции, которое оценивали через 3 ч после индукции воспаления по изменению объема лапы и рассчитывали по формуле (1):

где Jк и Jo - объем лапки крысы в контрольной и опытной группах [12-14].

Результаты тестирования на обеих моделях показали наличие у соединений формулы (1) выраженной противовоспалительной активности, сопоставимой или превосходящей активность диклофенака натрия, при более низкой токсичности в 5-9 раз.

Пример 18

Противоболевая активность

Противоболевую активность соединений формулы (1) оценивали по их способности уменьшать число специфических болевых реакций, «корчей» у мышей при внутрибрюшинном введении 0,75% раствора уксусной кислоты (1 мл на 100 г массы тела животного) [9]. Соединения формулы (1) вводились внутрижелудочно за час до проведения эксперимента. Количество «корчей» подсчитывали в течение последующих 15 минут после инъекции раствора уксусной кислоты для каждого животного. Противоболевую активность оценивали по проценту угнетения болевой реакции по сравнению с контрольной группой [12, 15].

Эксперименты по изучению противоболевой активности обнаружили, что исследуемые соединения обладали примерно одинаковым противоболевым действием, уменьшая «корчи» у мышей на 58,6%-72,6% (таблица 3). Их активность сопоставима с активностью препарата сравнения диклофенака натрия, но заявляемые соединения обладают более низкой токсичностью в 5-9 раз.

Таблица 3 Влияние исследуемых соединений на среднее количество «корчей» у мышей Соединение Среднее количество «корчей»,ед. Изменение среднего количества «корчей» относительно контроля, % Контроль 49,17±4,49 - Диклофенак 17,32±3,06* -64,78 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и) 20,36±1,49* -58,59 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к) 19,27±3,17* -60,81 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в) 17,20±2,99* -65,02 1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1 м) 13,48±2,34* -72,58 4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а) 15,34±4,50* -68,80 * - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05

Анализировалось влияние соединений, заявляемых в настоящем изобретении, на опиатные рецепторы. Для этого на модели уксуснокислых «корчей» оценивалась выраженность их анальгетических свойств на фоне введения животным налоксона - антагониста µ-опиатных рецепторов в дозе 1 мг/кг [16].

На фоне введения налоксона не наблюдалось снижение выраженности анальгетической активности, то есть исследуемые вещества уменьшали среднее количество «корчей» на 54,3%-93,3% по сравнению с интактным контролем (таблица 4). Это свидетельствует об отсутствии активирующего влияния соединений формулы (1) на опиатные рецепторы, а значит они не могут вызывать наркотической зависимости и депрессивных состояний.

Таблица 4 Влияние исследуемых соединений на среднее количество «корчей» у мышей на фоне введения налоксона Соединение Среднее количество «корчей», ед. Изменение среднего количества «корчей» относительно интактного контроля, % Контроль 49,17±2,4 - Налоксон 47,66±2,8 -3,07 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и) 22,74±1,8*# -53,75 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к) 5,50±1,4*# -88,81 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в) 12,10±0,8*# -75,39 1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м) 13,53±2,0*# -72,48 4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а) 11,00±4,2*# -77,63 * - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05 # - достоверно относительно налоксона, Р<0,05

Пример 19

Жаропонижающее действие

Жаропонижающее действие соединений формулы (1) исследовали на модели дрожжевой лихорадки у крыс, которую вызывали путем подкожного введения 20% суспензии пекарских дрожжей одновременно с внутрибрюшинным введением исследуемых соединений [9]. Препаратом сравнения был выбран метамизол натрия. Оценку выраженности жаропонижающего действия проводили, сравнивая изменение температуры на фоне введения исследуемых соединений через 1 и 2 ч после их введения с контрольной, интактной группами и группой препарата сравнения. Далее для веществ, обладающих наиболее выраженным жаропонижающим действием, оценивалась их способность снижать температуру на протяжении 6 ч после введения пирогена, и по этим данным строились температурные кривые.

На модели дрожжевой лихорадки у крыс было установлено, что под воздействием пирогена их температура тела достоверно повышалась во всех группах по сравнению с температурой тела интактных животных - на 0,6°С в течение 1 ч и на 1,11°С в 2 ч эксперимента (таблица 5). Препарат сравнения снижал лихорадочную реакцию крыс на 0,88°С в течение 1 ч и на 1,25°С в течение 2 ч после введения суспензии пекарских дрожжей. Среди исследуемых соединений достоверное выраженное уменьшение ректальной температуры по сравнению с контрольной группой на протяжении 2 ч наблюдалось при введении субстанции 1а, которая угнетала лихорадочную реакцию на 1,28°С в течение 1 ч и на 1,71°С в течение 2 ч.

Таблица 5 Влияние исследуемых соединений на ректальную температуру у крыс через 1 и 2 ч после введения пирогена Соединение Изменение температуры через 1 ч Изменение температуры через 2 ч Контроль +0,60±0,27 +1,11±0,47 Метамизол натрия -0,28±0,21* -0,15±0,40* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и) -0,08±0,19* +0,45±0,48 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-3-индолил)пропионат натрия (1к) +0,44±0,47 +0,70±0,35 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в) +0,35±0,27 +0,60±0,42 1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м) +0,13±0,65 +0,37±0,47 4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а) -0,68±0,38* -0,70±0,46* * - достоверно относительно интактного контроля Р<0,05

Для соединения 1а, обладающего наиболее выраженной жаропонижающей активностью среди изучаемых веществ, ниже приведена температурная кривая, показывающая его влияние на развитие дрожжевой лихорадки у крыс в течение семи часов после введения суспензии пекарских дрожжей в сравнении с контролем и эталонным препаратом метамизолом натрия (чертеж).

В контрольной группе на фоне введения суспензии пекарских дрожжей ректальная температура крыс поднималась в течение 7 ч. Через 1 ч после введения пирогена она повысилась на 0,72°С, а к 7 ч наблюдения достигла 37,45°С. У животных, которым вводили соединение 1а и метамизол натрия, в течение первых 2 ч после введения суспензии пекарских дрожжей температура тела не превышала измеренной перед введением пирогена температуры (Р<0,05). В течение последующего времени она постепенно поднималась и к концу эксперимента достигла уровня контрольной группы (±0,3°С).

Пример 20

Ульцерогенное действие

Ульцерогенное действие соединений формулы (1) исследовалось на крысах, лишенных пищи за 16 ч до опыта, при однократном внутрижелудочном введении соединений в дозе 0,2 LD₅₀ [9]. Оценку его выраженности проводили через 3 ч после введения опытных субстанций по 4-балльной шкале:

0 - отсутствие повреждений;

0,5 - гиперемия;

1 - единичные незначительные повреждения (1 или 2 точечных кровоизлияния);

2 - множественные повреждения (эрозии, точечные кровоизлияния);

3 - значительные и множественные повреждения слизистой (эрозии, кровоизлияния);

4 - грубые повреждения, охватывающие всю поверхность слизистой (массивные кровоизлияния, эрозии, перфорации).

Препаратами сравнения были выбраны диклофенак натрия и индометацин, которые вводились животным в дозе 0,2 LD₅₀.

При оценке ульцерогенного действия в качестве препаратов сравнения были выбраны индометацин как обладающее сильным ульцерогенным влиянием лекарственное средство (Индекс ингибирования ЦОГ-1/ЦОГ-2=30) и диклофенак натрия, для которого характерно более слабое повреждающее действие (Индекс ингибирования ЦОГ-1/ЦОГ-2=2,2). Результаты исследования показали, что соединения формулы (1) обладают маловыраженным или практически отсутствующим в случае соединений 1и и 1к ульцерогенным действием по сравнению с диклофенаком натрия и индометацином (таблица 6).

Таблица 6 Выраженность ульцерогенного действия у животных на фоне введения им исследуемых соединений Соединение Изъязвленность слизистой желудка, баллы Контроль 0,0±0,0 Индометацин 3,0±0,0*# Диклофенак 2,0±0,0*^ (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и) 0,0±0,0^^# (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к) 0,0±0,0^^# (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в) 0,25±0,2^# 1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м) 0,17±0,2^# 4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а) 0,09±0,1^^# * - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05 ^ - достоверно относительно индометацина, Р<0,05 # - достоверно относительно диклофенака, Р<0,05

Пример 21

Противопаркинсоническая активность

Противопаркинсоническая активность веществ изучалась по двум методикам: галоперидоловой каталепсии у крыс и амфетаминовой стереотипии у мышей [9].

Галоперидоловую каталепсию у крыс вызывали внутрибрюшинным введением галоперидола в дозе 1 мг/кг. В качестве препаратов сравнения, используемых в опытах по изучению противопаркинсонической активности, были выбраны: леводопа, более эффективная в отношении акинето-ригидной формы паркинсонического синдрома, и циклодол, являющийся холинолитиком центрального действия и преимущественно используемый на ранних стадиях заболевания и в комплексной терапии при ригидно-дрожательной форме. Исследуемые соединения и препараты сравнения вводили внутрибрюшинно одновременно с галоперидолом. Для определения продолжительности каталепсии использовался метод оценки каталепсии с использованием параллельных стенок по времени пребывания крысы в неподвижном состоянии при помещении животного на параллельные стенки таким образом, чтобы спина оставалась прямой. Длительность каталептогенного состояния отмечали через 90, 120 и 180 мин. Также оценивался промежуток времени, спустя который после введения галоперидола у крыс наблюдается каталепсия.

Оценка степени ригидности, возникшей на фоне введения галоперидола, производилась с использованием симптома «горбатости», выраженность которого определялась по укорочению расстояния от шеи до хвоста за счет сгорбленности животного и измерялась в сантиметрах через 30, 60 и 90 минут после введения галоперидола.

Среди исследуемых соединений сопоставимой с леводопой антикаталептогенной активностью обладали вещества 1и, 1к, 1в и 1м. Наиболее выраженное противопаркинсоническое действие проявляли соединения 1к и 1в, которые с 60 по 180 мин наблюдения достоверно снижали продолжительность каталептогенного состояния животных по сравнению с контрольной группой (таблица 7).

Было обнаружено, что исследуемые соединения и препараты сравнения обладали способностью влиять на время, спустя которое после введения галоперидола начиналась каталепсия (таблица 8). Изучаемые соединения 1и, 1к, 1м и 1а достоверно отдаляли начало проявления данного симптома в 1,3-2,7 раза.

Таблица 8 Влияние исследуемых соединений на время, спустя которое после введения галоперидола развивается каталепсия Соединение Время, спустя которое начинается каталепсия, мин Контроль 3,0±0,1 Леводопа 10,0±0,1* Циклодол 11,0±0,4* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и) 7,7±0,6*^# (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к) 5,0±0,1*^# (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в) 3,0±0,1^# 1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м) 4,0±0,1*^# 4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а) 8,2±0,6*^# * - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05 ^ - достоверно относительно леводопы, Р<0,05 # - достоверно относительно циклодола, Р<0,05

Нейротоксическое действие галоперидола проявлялось не только наличием каталепсии, но и развитием у животных мышечной ригидности, о которой судили по выраженности симптома «горбатости». Соединения 1и, 1к и 1м снижали степень его проявления, при этом наибольшую эффективность, превосходящую эффективность препаратов сравнения, обнаружило вещество 1м (таблица 9).

Таблица 9 Влияние исследуемых соединений на выраженность ригидности тела крыс, возникающей на фоне введения галоперидола Соединение Выраженность ригидности тела крыс, см 30 мин 60 мин 90 мин Контроль 6,83±1,3 6,67±1,2 5,33±0,8 Леводопа 3,00±0,1* 2,50±0,5*# 3,17±0,4* Циклодол 2,08±0,5* 5,33±0,1^ 3,50±0,2 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и) 4,5±0,2*# 4,50±0,5 3,17±0,5* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к) 3,67±0,4* 2,73±0,6*# 3,00±0,5* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в) 3,50±0,6* 9,17±0,2*^^# 3,50±0,2 1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м) 0,50±0,1*^ 1,17±0,3*# 2,33±0,3* 4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а) 7,48±0,6^# 8,85±0,5^# 6,96±0,6^# * - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05 ^ - достоверно относительно леводопы, Р<0,05 #- достоверно относительно циклодола, Р<0,05

Стереотипное поведение животных моделировалось по методике потенцирования эффектов амфетамина. Стереотипию у мышей вызывали подкожным введением амфетамина в дозе 5 мг/кг. Исследуемые вещества и препараты сравнения - леводопу и циклодол - вводили за 30 мин до введения амфетамина внутрибрюшинно. Интенсивность и выраженность стереотипии оценивали каждые 5 мин в течение 15 мин через 15 мин после введения амфетамина в баллах:

- 1 балл - отдельные стереотипные движения (например, непостоянные принюхивания);

- 2 балла - интенсивная непродолжительная стереотипия (в том числе лизание, грызение);

- 3 балла - постоянная интенсивная стереотипия.

В качестве модели, позволяющей оценить влияние соединений на дрожательную форму паркинсонического синдрома, использовалась методика потенцирования эффектов амфетамина. Из снижающих выраженность стереотипии веществ 1и, 1к, 1в и 1м максимальную активность проявляли соединения 1и и 1в, чья эффективность была сопоставима с эффективностью препарата сравнения циклодола (таблица 10).

Таблица 10 Влияние исследуемых соединений на выраженность амфетаминовой стереотипии у мышей Соединение Выраженность стереотипии после введения амфетамина, баллы через 15 мин через 20 мин через 25 мин через 30 мин Контроль 2,00±0,18 3,00±0,18 3,00±0,18 3,00±0,18 Леводопа 2,00±0,18 2,67±0,02 2,50±0,02* 2,50±0,18 Циклодол 2,00±0,18 2,50±0,18 2,00±0,18* 2,00±0,18* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и) 2,00±0,18 2,25±0,18* 2,25±0,18* 2,25±0,018* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к) 2,00±0,18 2,33±0,18* 2,75±0,18# 2,50±0,18* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в) 2,00±0,18 2,33±0,18* 2,33±0,18* 2,33±0,18* 1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м) 2,00±0,18 2,75±0,2 2,75±0,2# 2,00±0,18* 4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо ацетат натрия (1а) 2,00±0,18 2,75±0,18 2,75±0,18# 2,50±0,18# * - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05 # - достоверно относительно циклодола, Р<0,05

Результаты исследований по обеим методикам показали наличие противопаркинсонической активности у соединений формулы (1).

Пример 22

Антйгипоксическая и актопротекторная активность

Антигипоксические свойства соединений исследовали на модели нормобарической нормокапнической гипоксической гипоксии помещением крыс в гермокамеру объемом 1,5 л [17; 18]. Сопротивляемость организма к действию предельных мышечных нагрузок (актопротекторная активность) исследовали на модели принудительного плавания крыс с грузом, равным 10% от массы тела до полного утомления [19]. Изучаемые соединения вводились однократно внутрибрюшинно за 1 ч до проведения экспериментов.

По антигипоксической активности наиболее эффективным было соединение 1а, которое повышало продолжительность жизни крыс в условиях гипоксии на 26,0% (таблица 11). При введении субстанций 1к, 1м и 1а наблюдалось увеличение продолжительности переносимости мышечных нагрузок в 1,4, 1,8 и 3,0 раза соответственно.

Таким образом, наиболее эффективными актопротекторными средствами являются соединения 1к, 1м и 1а. Соединение 1а проявляет антигипоксическую активность.

Пример 23

Иммунологическая активность

Соединения формулы (1) тестировались на способность влиять на фагоцитарную активность нейтрофилов in vitro и in vivo как на компонент неспецифического клеточного иммунитета и на активность лизоцима in vitro и in vivo как на компонент неспецифического гуморального иммунитета. Для экспериментов in vivo все изучаемые субстанции вводились мышам в виде водных растворов внутрижелудочно ежедневно в течение двух недель.

Оценку фагоцитарной активности нейтрофилов in vitro и in vivo проводили микрометодом [20]. Учет результатов осуществлялся микроскопически. В мазке при увеличении 90 с иммерсионной системой подсчитывали процент фагоцитирующих нейтрофилов - процент фагоцитоза и среднее количество поглощенных бактерий в каждом из ста нейтрофилов пробы - фагоцитарный индекс.

Исследование влияния изучаемых соединений на ферментативную (антибактериальную) активность лизоцима in vitro и in vivo проводилось нефелометрическим методом определения активности лизоцима по В.Г.Дорофейчук [21; 22].

Исследование соединений in vitro показало, что субстанции 1и, 1к и 1в вызывали повышение интенсивности фагоцитоза, достоверно увеличивая в течение первого часа опыта фагоцитарный индекс в 2,7-4,0 раза (таблица 12). К двадцать четвертому часу наблюдения фагоцитарный индекс на фоне введения изучаемых соединений 1к, 1в и 1м также был достоверно выше в 1,5-2,2 раза, чем значение данного параметра в контрольной группе.

При исследовании влияния опытных соединений на фагоцитарную активность in vivo было обнаружено, что вещество 1к достоверно увеличивало процент фагоцитоза на 23,3% (таблица 13).

Таблица 13 Влияние исследуемых соединений на фагоцитарную активность нейтрофилов in vivo Соединение Процент фагоцитоза, % Фагоцитарный индекс, ед. Контроль 40 3,0±0,3 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и) 46,6 2,8±0,4 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к) 63,3* 3,3±0,4 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в) 53,3 3,0±0,3 1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м) 46,7 3,0±0,4 * - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05

Стимулирующее действие изучаемых веществ на функциональную активность лизоцима in vitro было наиболее выражено на начальных этапах эксперимента. Достоверное усиление лизоцимной активности наблюдалось при введении соединений 1в и 1м, которые увеличивали ее на 8,3% и 56,0% соответственно (таблица 14). При исследовании влияния изучаемых субстанций на данный параметр неспецифического иммунитета in vivo только субстанция 1к, не проявившая таковой активности в эксперименте in vitro, увеличивала активность лизоцима в 2,2 раза.

Таблица 14 Влияние исследуемых соединений на функциональную активность лизоцима in vitro и in vivo Соединение Лизоцимная активность in vitro, мг/мл Лизоцимная активность in vivo, мг/мл Контроль 16,43±0,21 2,8±0,04 (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и) 16,63±0,34 0,63±0,03* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к) 16,00±0,28 6,20±0,13* (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в) 17,80±0,22* 1,38±0,03* 1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м) 25,63±0,31* 0,3±0,01* * - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05

Результаты исследований показывают, что исследуемые соединения способствуют усилению клеточного и гуморального иммунитета.

Таким образом, весь комплекс использованных экспериментальных моделей свидетельствует о значительной противовоспалительной, противоболевой, противопаркинсонической, антигипоксической, актопротекторной и иммуномодулирующей активности соединений общей формулы (1), обладающих также маловыраженным ульцерогенным действием, низкой токсичностью в отличие от использованных препаратов сравнения и не вызывающих лекарственной зависимости.

Список использованной литературы

1. Морозов И.С. Фармакология адамантанов. / И.С.Морозов, В.И.Петров, С.А.Сергеева. - Волгоград: Волгоградская медицинская академия, 2001. - 320 с.

2. Бис-1-(N-адамантил)пиперазины алифатических дикарбоновых кислот и их фармакологическая активность. / Л.И.Дуракова [и др.]. // Хим.-фармац. журн. - 1980. - Т.14, №5. - С.26-30; 53.

3. Литвинов В.П. Гетериладамантаны: синтетические исследования последних лет, биологическая активность и другие аспекты практического использования (обзор). // Химия гетероцикл. соединений. - 2002. - №1. - С.12-39; 74.

4. О курареподобной активности четвертичных аммониевых соединений, содержащих 2-адамантильные радикалы. / Д.А.Харкевич [и др.]. // Фармакология и токсикология. - 1981. - №6. - С.670.

5. Pat. 5652335, US, C07C 103/52. Physiologically active substance well capable of permeating biomembrane / Kouki, K. [и др.]; Teikoku Seiyaku Kabushiki Kaisha (Japan). - №227997, заявл. 15.04.1994; опубл. 29.07.1997, Chem. Abstr. 117 (05), 049260h.

6. Pat. 4273704, US, C07C 103/52. N-Adamantane-substituted tetrapeptide amides / Mazur R.H.; Searle & Co (US). - №99765, заявл. 03.12.1979; опубл. 16.06.1981, Chem. Abstr. 096 (09), 069439z.

7. Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием животных. // Хроника ВОЗ. - 1985. - Т.39, №3. - С.3-9.

8. Гуськова Т.А. Оценка безопасности лекарственных средств на стадии доклинического изучения. / Т.А.Гуськова. // Хим.-фармац. журн. - 1990. - Т.24, №7. - С.10-15.

9. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / В.П.Фисенко [и др.]. - М.: Бионт, 2000. - 400 с.

10. ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. - М.: ИПК Изд-во стандартов, 1999. - 7 с.

11. Колла В.Э. Дозы лекарственных средств и химических соединений для лабораторных животных. / В.Э.Колла, Б.Я.Сыропятов. - М.: «Медицина», 1998. - 264 с.

12. Мусил Я. Основы биохимии патологических процессов. / Я.Мусил: пер. с англ. - М.: Медицина, 1985 - 432 с.

13. Наточкин Ю.В. Основы физиологии почек. / Ю.В.Наточкин. // В кн.: Диурез и диуретики. - Л.: Медицина, 1982. - С.116-120.

14. Тиклеева У.М. Экспериментальное исследование противогипоксической и антиоксидантной активности гетероциклических производных 3-оксипиридина. / У.М.Тиклеева, Т.А.Воронин, В.И.Кузьмин. // Фармакология и токсикология. - 1989. - №2, - С.79-83.

15. Koster, R. Acetic acid for analgetic screening / R.Koster, M.Anderson, E.J.De Beer // Fed. Proc. - 1959. - Vol.18, №1. - Р.412.

16. Женило В.М. Нейромедиаторные механизмы анальгетического действия некоторых анестетиков. / В.М.Женило, М.В.Женило. // Съезд фармакологов России (3; 2007; Санкт-Петербург): материалы… - СПб., 2007. - С.1-1692-1-1693.

17. Бобков Ю.Г. Методологические подходы к поиску фармакологических средств, эффективных при гипоксии и ишемии мозга. / Ю.Г.Бобков, И.А.Иванова. // Патол. физиология и эксперим. терапия. - 1987. - №6. - С.13-19.

18. Бобков Ю.Г. Методологические подходы к поиску фармакологических средств, эффективных при гипоксии и ишемии мозга. / Ю.Г.Бобков, И.А.Иванова. // Патол. физиология и эксперим. терапия. - 1987. - №6. - С.13-19.

19. Русин В.Я. Сопротивляемость организма к неблагоприятным воздействиям при нарушении функции некоторых желез внутренней секреции. / В.Я.Русин, С.С.Полтырев. // В сб.: Адапт. человека и животных в норме и патологии. - Ярославль, 1976. - С.3-13.

20. Иммунологические аспекты аллотрансплантации. / Ю.М.Зарецкая [и др.]. - M.: Медицина, 1974. - 236 с.

21. Баранов А.А. Лизоцим: теория и практика. / А.А.Баранов, В.Г.Дорофейчук. - М.: Нижний Новгород: Информсвязьиздат, 1999. - 126 с.

22. Дорофейчук В.Г. Определение активности лизоцима нефелометрическим методом. / В.Г.Дорофейчук. // Лаборатор. дело. - 1968. - №1. - С.28-30.

Изобретение относится к новым соединениям - фармацевтически приемлемым солям (S)-N-[4-(1-адамантил)бензоил]-α-аминокислот общей формулы (1), где А⁺ представляет собой ион щелочного металла, аммония и N⁺(C_1-4алкил)₄; R² при условии, что R¹ представляет собой атом водорода, представляет собой атом водорода, радикалы -СН₃, -СН(СН₃)₂, -СН₂СН(СН₃)₂, -СН(СН₃)СН₂СН₃, CH₂-CH₂-SH, -СН₂-СН₂-S-СН₃,

, , , ;

R¹ и R² вместе представляют собой бирадикал -СН₂-СН₂-СН₂-, замкнутый в пирролидиновый цикл, а также к способу их получения. 2 н.п. ф-лы, 14 табл., 1 ил.

1. Фармацевтически приемлемые соли (S)-N-[4-(1-адамантил)бензоил]-α-аминокислот общей формулы (I):

где A⁺ представляет собой ион щелочного металла, аммония и N⁺(C₁-C₄алкил)₄;
R² при условии, что R¹ представляет собой атом водорода, представляет собой атом водорода, радикалы -СН₃, -СН(СН₃)₂, -CH₂CH(СН₃)₂, -СН(СН₃)СН₂СН₃, -CH₂-CH₂-SH, -СН₂-СН₂-S-СН₃,
, , , ;
R¹ и R² вместе представляют собой бирадикал -СН₂-СН₂-СН₂-, замкнутый в пирролидиновый цикл.

2. Способ получения соединений по п.1, заключающийся в превращении 4-(1-адамантил)бензойной кислоты в соответствующий хлорангидрид, дальнейшей реакции ацилирования (S)-α-аминокислоты в присутствии растворителя, представляющего собой смесь воды и 1,4-диоксана, выделении (S)-N-[4-(1-адамантил)бензоил]-α-аминокислоты и ее нейтрализации водным раствором основания в присутствии этилового спирта с образованием соли.