ВАКЦИНА И СПОСОБ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ПАРВОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ ГУСЕЙ Российский патент 2011 года по МПК C12N7/00 A61K39/23 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к производству вакцин для специфической профилактики парвовирусной инфекции гусей (вирусного энтерита гусей), а также к способам лечения и профилактики этого заболевания.

Парвовирусная инфекция гусей (вирусный энтерит гусей) - острая контагиозная болезнь молодняка гусей и мускусных уток, характеризующая поражением желудочно-кишечного тракта, печени, сердца, поджелудочной железы и других паренхиматозных органов, и сопровождается высокой смертностью (от 30 до 100%). Возбудителем является парвовирус, который относится к семейству Parvoviridae.

Болезнь широко распространена в европейских странах (Германия, Франция, Англия, Венгрия, Чехословакия) и на других континентах. В Российской Федерации она зарегистрирована во многих хозяйствах различных зон.

Наиболее эффективным способом борьбы против ПВИ гусей является вакцинопрофилактика наряду с применением цитратной крови и сыворотки крови гусей реконвалесцентов и гипериммунных сывороток, полученных на различных биологических моделях.

Известна вакцина против вирусного энтерита гусей и способ профилактики вирусного энтерита гусей (1).

Вакцина содержит культуральную жидкость, штамм вируса Goosa parvovirus ВГНКИ №71, клон 6 с биологической активностью 10^6,0-10⁷ ТЦД₅₀ и защитную среду высушивания при соотношении культуральной жидкости и защитной среды 1:1-1,0:1,5. Способ профилактики заболевания предусматривает введение предлагаемой вакцины гусятам 1-2-суточного возраста в дозе 50-70 тыс. ТЦД₅₀ в 0,50-0,75 см³ или взрослым гусям двукратно, за 50-30 суток до начала яйцекладки в дозе 75-100 тыс. ТЦД₅₀ в 0,75-1,00 см³.

Однако эта вакцина даже при двукратном применении не создает длительного напряженного иммунитета у птиц на весь репродуктивный период.

Известна разработанная в Институте птицеводства УААН инактивированная вакцина против вирусного энтерита гусей (2). Однако данная вакцина содержит патогенный штамм парвовируса ХМ-99, выделенный в Украине. К тому же, при разработке схемы вакцинации родительских стад гусей с использованием данного инактивированного биопрепарата его испытывали как в сочетании с живой вакциной (через 14 дней после прививки живой вакциной), так и самостоятельно, применяя однократно или двукратно с интервалом в 14 дней. Однако для подтверждения иммунизаторного эффекта от применения одно- или двукратной прививки инактивированной вакциной необходимы, по мнению авторов, дальнейшие исследования.

Известна вакцина против вирусного заболевания гусей, вызываемого парвовирусом, являющаяся прототипом заявленного изобретения, которая содержит патогенный вирус, инактивированный β-пропиолактоном, что не исключает возможности его реактивации (3).

Задачей, решаемой в рамках заявленной группы изобретений, является создание инактивированной вакцины против парвовирусной инфекции гусей, применяемой в условиях промышленного гусеводства, фермерских хозяйств, создающей длительный напряженный иммунитет у гусей родительского стада на весь репродуктивный период, а также экономичного и технологичного способа вакцинации против парвовирусной инфекции гусей, сокращающего количество вакцинаций с целью уменьшения стрессов и нагрузки на иммунную систему птицы при одновременном сохранении безвредности, антигенной активности и длительности хранения вакцинного препарата.

Поставленная задача решена путем создания вакцины, содержащей инактивированный димерэтиленимином антиген парвовируса гусей Штамма Goosa Parvovirus ВГНКИ №71, клон 6 с активностью 6,5-7,5 lg ТЦД_50/см³ в смеси с масляным адъювантом Монтанид ISA-70, взятых в соотношении 1:1-1:4, причем концентрация димерэтиленимина составляет не менее 0,1%.

Способ вакцинации против парвовирусной инфекции гусей включает внутримышечное введение заявленного вакцинного препарата птице родительского стада однократно за 30 суток до предполагаемой яйцекладки в дозе 2,5·10⁴-2,5·10⁵ ТЦД₅₀/см³. Как правило, показанием к применению вакцины является неблагополучие в хозяйствах по парвовирусной инфекции гусей.

Штамм Goosa parvovirus ВГНКИ №71, клон 6 используется для приготовления вакцинных препаратов против вирусного энтерита гусей (4).

Штамм депонирован в коллекции ВГНКИ ветеринарных препаратов под номером 71. Вакцинный штамм №71 получают методом селекции. Штамм имеет следующие морфологические, физиологические и культуральные характеристики.

Вирионы являются мелкими сферическими с размером 20±2 нм, нуклеокапсид содержит ДНК. В культуре клеток под агаровым покрытием индуцируется образование бляшек с ровными краями размером 1-2 мм. Вирус репродуцируется в культуре клеток гусиных эмбрионов, вызывая острую форму инфекции с выраженным цитопатическим эффектом через 3-4 суток в титрах 6,5-7,0 логарифма ТЦД₅₀/05 мл. Штамм апатогенен для развивающихся гусиных эмбрионов, гусят, лабораторных млекопитающих при парэнтеральном введении в дозах, в 100 раз превышающих вакцинальную, не обладает гемагглютинирующей и гемадсорбирующей активностью, устойчив к воздействию эфира и хлороформа, выдерживает температуру 60°C в течение 60 минут, имеет полное антигенное родство с вирулентным вирусом, вызывающим заболевание в гусеводческих хозяйствах.

Содержание и количественное соотношение ингредиентов в вакцине диктуется ее функциональными особенностями.

Изменение соотношения антигена и адъюванта в сторону увеличения количества антигена влечет за собой сокращение срока хранения вакцины и перерасход антигена, что экономически не выгодно. При большем содержании адъюванта по отношению к антигену снижается активность вакцины и вырабатывается недостаточный для защиты от заболевания иммунитет.

Для получения вакцины компоненты, входящие в ее состав, смешивают в гомогенизаторе в течение 5-10 минут при скорости 3000 об/мин.

Вакцина представляет собой однородную эмульсию розовато-беловатого цвета с высокой стабильностью в процессе хранения при t=+(2-8)°C.

Заявленный способ вакцинации птиц заключается во введении вышеупомянутой инактивированной вакцины в организм птицы внутримышечно однократно в дозе 2,5·10⁴-2,5·10⁵ ТЦД₅₀/см³.

Как правило, показанием к применению вакцины является неблагополучие по парвовирусной инфекции гусей. Вакцинируют всю клинически здоровую птицу родительского стада за 30 сут перед началом репродуктивного периода. Препарат вводят внутримышечно в объеме 0,5 см³/голову.

Сущность и практическая применимость заявленной группы изобретений иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1: Приготовление инактивированной вакцины в различных соотношениях 1:4; 1:2,33; 1:1,5; 1:1

Вакцину против парвовирусной инфекции гусей готовят по стандартной методике получения инактивированных эмульсионных препаратов. К 100 объемам инактивированного антигена добавляют 400, 233, 150 и 100 объемов масляного адъюванта Монтанид ISA-70 соответственно. Полученная смесь тщательно перемешивается и разливается во флаконы, хранится при температуре +(2-8)°C.

Вакцину использовали для профилактики парвовирусной инфекции гусей в условиях опытной базы ГНУ ВНИВИП.

Иммуногенную активность контролировали путем выявления специфических антител к парвовирусу гусей в реакции нейтрализации и методом иммуноферментного анализа согласно Методическим указаниям по лабораторной диагностике вирусного энтерита (парвовирусной инфекции) гусей методом иммуноферментного анализа (5, 6).

Полученные результаты испытаний представлены в таблице 1.

Таблица 1 Влияние соотношения Аг:Ад на иммунологические показатели вакцины (титр антител в ИФА) № п/п Кол-во птиц Соотношение Аг:Ад Титр антител до вакцинации Титр антител после вакцинации на (сут) Иммунная птица, % 28 42 1 10 1:4 414±31 3521±67 3476±136 80 2 10 1:2,33 414±31 11299±92 10220±61 100 3 10 1:1,5 414±31 12050±132 11825±125 100 4 10 1:1 414±31 1200±142 10382±252 100 5 5 контроль 414±31 414±31 414±31 0 Примечание: Аг - антиген; Ад - адъювант

Как следует из приведенных результатов, оптимальным является соотношение антигена и адъюванта 1:2,33. Препарат безвреден для птицы, обладает выраженной антигенной и иммуногенной активностью.

Пример 2

Полученную вакцину использовали в условиях опытной базы ГНУ ВНИВИП. Для профилактики парвовирусной инфекции гусей вакцинный препарат вводили в объеме 0,5 см³/голову однократно в дозе 2,5·10⁴-2,5·10⁵ ТЦД₅₀/см³ внутримышечно в организм птицы родительского стада за 30 суток до начала репродуктивного периода. Полученные результаты испытаний представлены в таблице 2.

Таблица 2 Воздействие различных доз вакцины на иммунологические показатели № п/п Кол-во птиц Доза вакцины, ТЦД₅₀/0,5 см³ Титр антител в ИФА* Иммунная птица, % до вакцинации через 28 сут после вакцинации через 42 сут после вакцинации 1 10 2,5·10⁴ 414±31 7011±67 8671±41 100 2 10 2,5·10^4,5 414±31 9030±72 8390±82 100 3 10 2,5·10⁵ 414±31 11299±92 10220±61 100 4 10 контроль 414±31 414±31 414±31 0 Примечание: * - значение титров в обратных величинах

Как следует из приведенных данных, вакцина в испытанных дозах вызывает напряженный иммунитет у гусей.

Препарат в 5-кратной дозе (2,5 см³/гол.) безвреден для птицы. Однократное применение инактивированной вакцины по сравнению с живой вирусвакциной (1) более экономично и технологично и вызывает длительный иммунитет на весь период яйцекладки.

Источники информации

1. Патент Российской Федерации №2118539, 10.09.1998.

2. Разработка схемы вакцинации гусей против вирусного энтерита с использованием инактивированной вакцины /А.В.Белецкая и др. // Достижения в современном птицеводстве: исследования и инновации. Материалы XVI конференции ВНАП. Сергиев Посад, 2009. - С.336-337.

3. Патент Франции №7406981, 1974.

4. SU №1499917, 15.10.1994.

5. Методические указания для лабораторной диагностики вирусного энтерита (парвовирусной инфекции) гусей методом иммуноферментного анализа / Б.Б.Трефилов, Н.В.Никитина, Д.В.Маслов. - СПб., 2005. - С.12.

6. Патент Российской Федерации №2323743, 10.12.2007.

Изобретение относится к области ветеринарии и птицеводству. Предложена вакцина, содержащая инактивированный димерэтиленимином антиген парвовируса гусей Штамма Goosa Parvovirus ВГНКИ №71, клон 6 с активностью не менее 6,5-7,5 lg ТЦД₅₀/см³ в смеси с масляным адъювантом Монтанид ISA-70, взятые в соотношении 1:1-1:4, причем концентрация димерэтиленимина составляет не менее 0,1%. Способ вакцинации против парвовирусной инфекции гусей включает внутримышечное введение вакцинного препарата птице родительского стада однократно за 30 суток до предполагаемой яйцекладки в дозе 2,5·10⁴-1,5·10⁵ ТЦД₅₀/см³. Вакцинный препарат безвреден для птицы, обладает выраженной антигенной и иммуногенной активностью, вызывает напряженный длительный иммунитет у гусей на весь репродуктивный период, однократное применение инактивированного препарата более технологично и экономично, уменьшает стрессы и нагрузку на иммунную систему птицы. 2 н.п. ф-лы, 2 табл.

1. Вакцина против парвовирусной инфекции гусей, содержащая инактивированный парвовирусный антиген и адъювант, отличающаяся тем, что содержит инактивированный димерэтиленимином антиген парвовируса гусей Штамма «Goosa Parvovirus ВГНКИ №71 клон 6» с активностью 6,5-7,5 lg ТЦД₅₀/см³ в смеси с масляным адъювантом Монтанид ISA-70, взятые в соотношении 1:1-1:4, причем концентрация димерэтиленимина составляет не менее 0,1%.

2. Способ вакцинации против парвовирусной инфекции гусей путем введения вакцинного препарата в организм птице, отличающийся тем, что в качестве вакцинного препарата используют вакцину, полученную по п.1, которую вводят птице родительского стада однократно за 30 сут до предполагаемой яйцекладки внутримышечно в дозе 2,5·10⁴-2,5·10⁵ ТЦД₅₀/см³.