ВАКЦИНА "БИОВАК" ПРОТИВ ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ, ПАРВОВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА, ИНФЕКЦИОННОГО ГЕПАТИТА, АДЕНОВИРОЗА И ЛЕПТОСПИРОЗА СОБАК Российский патент 2000 года по МПК A61K39/295 

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к средствам специфической профилактики, и может быть использовано в ветеринарии для профилактики инфекционных заболеваний собак.

Известна вакцина против чумы, инфекционного гепатита, аденовироза, парвовирусного энтерита и лептоспироза плотоядных, содержащая сухую вирусную суспензию штамма ЭПМ с титром инфекционной активности 10³ -10⁴ ТЦД₅₀/0,5 см³, инактивированную вирусную суспензию штамма Mammaliadenovirus Adenovirus canis-2 "Ада" с титром инфекционной активности 10^4,5 - 10^5,0 ТЦД₅₀/см³, инактивированную адсорбированную вирусную суспензию штамма Virus panleucopenia felline "Ганнибал" с титром инфекционной активности 10⁴-10⁵ ИД₅₀/см³ и с активностью в РГА 1:64-1:256 ГАЕ/см³, смесь антигенов из штаммов лептоспир серогрупп Canicola ВГНКИ-3 и Icterohaemorrhagiae ВГНКИ-2, взятых в равном соотношении при общей концентрации 300-500 млн.кл./0,2 см³ фосфатного буфера и добавки (RU N 2045960, 1992).

Однако известная вакцина недостаточно термостабильна.

Целью изобретения является стабилизация иммуногенных свойств вакцины.

Технический результат - повышение термостабильности вакцины - получают за счет использования в составе вакцины новых вакцинных штаммов вируса чумы плотоядных ЭПММ и парвовируса плотоядных "Геркулес" и технологии их подготовки.

Штамм вируса чумы плотоядных ЭПММ получен пассированием исходного штамма ЭПМ через организм хорька и на фибробластах перепела, хранится в коллекции ТОО "Биоцентр" под названием "ЭПММ" и характеризуется следующими признаками:
- полиморфная частица размером от 140 до 220 нм;
- относится к семейству Paramyxoviridae, род Morbillivirus;
- лимфотропный;
- гемагглютинирующие свойства отсутствуют;
- имеет выраженное цитопатогенное действие в отношении культуры клеток ЭП;
- содержит уменьшенное на порядок по сравнению с исходным вирусом ЭПМ дефектных интерферирующих частиц (ДИЧ) (вирусных капсидов, не содержащих РНК):
Иммуногенная активность:
- при введении хорькам в титре не ниже 10^2,2 ТЦД вызывает полную невосприимчивость к заражению 1000 ЛД₅₀ вируса чумы плотоядных штамм Snyder Hill.

Титр культурального вируса 10^2,5 - 10^4,5 ТЦД₅₀/0,5 мл в культуре клеток ЭП.

Хранение в среде высушивания при pH 6,8-7,2 и температуре минус 20^oC. Допустимая длительность хранения без освежения - 2 года.

Сохраняет иммуногенность и стабильное значение титров на протяжении 10 пассажей в культуре клеток ЭП.

Иммуногенная активность сохраняется в течение 2 лет. Генетические свойства стабильные.

Штамм парвовируса плотоядных "Геркулес" выделен от больного тигра, хранится в коллекции ТОО "Биоцентр" под названием "Геркулес" и характеризуется следующими признаками:
- икосаэдр размером 20-24 нм;
- относится к семейству Parvoviridae, вид Parvovirus Carmivorum:
- эпителиотропный:
- агглютинирует эритроциты свиньи;
- активен в РГА - не ниже 1:4096 ГАЕ₅₀/0,1 мл;
- титр культурального вируса 1:64 ГАЕ₅₀/0,5 мл в культуре CRFK;
- клеточная культура - первично-трипсинизированная почка котенка, перевиваемая линия CRFK.

Хранение - нативный, замороженный, pH среды 6,8-7,4,температура минус 56^oC.

После инактивации обладает иммуногенной активностью. Сохраняет иммуногенные свойства после 2 пассажей в культуре клеток CRFK.

Сохранение иммуногенной активности - не менее 5 лет.

Данные штаммы используют для приготовления ассоциированной вакцины "Бионор".

Приготовление вакцины иллюстрируется следующим примером.

Пример
Стадия А. Подготовка штамма вируса чумы ЭПММ для приготовления вакцины.

Вирус ЭПММ культивируют в роллерных бутылях с площадью культивирования не менее 800 см³ на монослое фибробластов эмбриона перепела (ЭП). При получении вируссодержащей жидкости (ВСЖ) с титром не менее 10^3,0 ТЦЦ ее пулируют, разливают во флаконы емкостью 100 мл по 30 мл и лиофилизируют в среде высушивания, содержащей буферные соли, полимерные сахара и аминокислоты.

Контролируют специфическую активность после сушки, стерильность, безвредность, иммуногенность и термостабильность.

Для контроля термостабильности отбирают 10 ампул, прогревают при 37^oC в течение 7 дней, затем вновь проводят контроль специфической активности. Падение активности не должно превышать 0,5 lg.

Стадия Б. Подготовка штамма парвовируса "Геркулес" для приготовления вакцины.

Вирус "Геркулес" культивируют в роллерных бутылях с площадью культивирования не менее 800 см³ на монослое клеток перевиваемой линии почки котенка CRFK. При получении ВСЖ с титром не менее 1:64 в РГА с эритроцитами свиньи ее инактивируют формальдегидом и адсорбируют на гидроокиси алюминия.

Полученный компонент вакцины жидкой консистенции.

Стадия В. Приготовление ассоциированной вакцины "Биовак" (одна прививочная доза объемом 2 мл).

Полученный на стадии Б адсорбированный парвовирусный компонент вакцины в количестве 6 log₂ ГАЕ объединяют с известными препаратами - 4 lg ТЦД₅₀ инактивированной вируссодержащей жидкости аденовируса плотоядных штамм "Ада" и инактивированной вакциной против лептоспироза - суспензией двух штаммов лептоспир Canicola ВГНКИ-3 и Icterohaemorrhagiae ВГНКИ-2, взятых в равном соотношении микробных клеток при общей концентрации 200-400 млн.кл.

В полученную смесь компонентов вакцины вводят стабилизаторы, адъювант, антибиотики до общего объема 1 прививочной дозы.

Сухой компонент вакцины против чумы плотоядных, полученный на стадии А, смешивают с остальными жидкими компонентами вакцины (стадия В) из расчета 2,2 lg ТЦД₅₀ мл непосредственно перед использованием ассоциированной вакцины.

Приведенные концентрации компонентов вакцины являются минимально допустимыми.

Применяют ассоциированную вакцину для профилактики инфекционных заболеваний собак по известной схеме.

Проверку термостабильности сухого компонента вакцины осуществляют следующим образом: 150 флаконов используют для опыта и 300 флаконов - контроль. Хранение - в условиях предприятия.

Опытные флаконы прогревают при 37^oC в течение 7 дней. Каждые три месяца проводят контроль активности (ЦПД в культуре клеток) и каждый год - контроль иммуногенности на животных (хорьках) с пробойником Snyder Hill. Исходная активность вакцины - 3,5 lg. После прогревания наблюдалось падение активности на 0,5 lg. За 2,5 года наблюдения (с ноября 1995 года) активность снизилась до 2,5 lg (допустимая активность). В контроле (без прогрева) за тот же срок наблюдения активность составила 3,0 lg.

В известной вакцине сухой компонент сохраняет активность в течение 1 года при условии ее хранения строго при плюс 2-8^oC.

Таким образом, использование новых вакцинных штаммов обеспечивает вакцине в целом высокую иммуногенность и термостабильность в процессе ее хранения.

Изобретение относится к средствам специфической профилактики заболеваний собак, в частности к вакцине "Биовак" против чумы плотоядных, парвовирусного энтерита, инфекционного гепатита, аденовироза и лептоспироза собак. Ассоциированная вакцина "Биовак" содержит в одной прививочной дозе (2 мл) сухую вируссодержащую жидкость штамма вируса чумы плотоядных ЭПММ со стабилизатором в титре - не менее 2.2 lg ТЦД₅₀, суспензию адсорбированной инактивированной культуры штамма парвовируса плотоядных "Геркулес" - не менее 6 log₂ ГАЕ (до инактивации), инактивированную вирусную суспензию штамма Mammaliadenovirus Adenovirus canis - 2 "Ада" - не менее 4 lg ТЦД₅₀ и смешанную суспензию лептоспир серогрупп Canicola-3 и lcterohaemorrhagiae ВГНКИ-2, взятых в равном соотношении микробных клеток, 200 - 400 млн.м.кл. в дозе. Ассоциированная вакцина предложенного состава обладает высокой иммуногенностью и термостабильностью в процессе длительного хранения.

Вакцина против чумы плотоядных, парвовирусного энтерита, инфекционного гепатита, аденовироза и лептоспироза собак, содержащая лиофилизированную вируссодержащую жидкость штамма вируса чумы плотоядных со стабилизатором, суспензию адсорбированной инактивированной культуры штамма вируса энтерита, инактивированную вирусную суспензию штамма Mammaliadenovirus Adenovirus canis-2 "Ада", смешанную суспензию лептоспир серогрупп Canicola ВГНКИ-3 и Icterohaemorrhagiae ВГНКИ-2, взятых в равном соотношении микробных клеток, стабилизатор, адъювант и антибиотики, отличающаяся тем, что в качестве вируса чумы плотоядных она содержит штамм вируса чумы плотоядных ЭПММ, а в качестве вируса энтерита - штамм парвовируса плотоядных "Геркулес" при следующем количественном соотношении компонентов из расчета на 1 прививочную дозу (2 мл):
Лиофилизированная вируссодержащая жидкость штамма вируса чумы плотоядных ЭПММ - Не менее 2,2 lg ТЦД₅₀
Суспензия адсорбированной инактивированной культуры штамма парвовируса плотоядных "Геркулес" - Не менее 6 log₂ ГАЕ (до инактивации) с эритроцитами свиньи
Инактивированная вирусная суспензия штамма Mammaliadenovirus Adenovirus canis-2 "Ада" - Не менее 4 lg ТЦД₅₀
Смешанная суспензия лептоспир серогрупп Canicola ВГНКИ-3 и Icterohaemorrhagiae ВГНКИ-2, взятых в равном соотношении микробных клеток - 200 - 400 млн.м.кл.