Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарной вирусологии и касается средств специфической профилактики и лечения болезней плотоядных, в частности, к средствам специфической профилактики чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита.
Возбудители этих болезней играют ведущую роль в этиологии инфекционных заболеваний собак и пушных зверей. Указанные инфекции возникают у плотоядных как в виде моноинфекций, так и смешанных вирусных инфекций.
Для профилактики чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и гепатита плотоядных используют моновалентные и ассоциированные вакцины.
Известна вакцина для профилактики чумы плотоядных, содержащая культуральную суспензию аттенуированного штамма "ЭПМ" (патент РФ N 2067002, А 61 К 39/175, 1996).
Известна вакцина для профилактики аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита, содержащая инактивированный штамм аденовируса "Ада", обладающего антигенным родством с вирусом инфекционного гепатита собак, и адъювант - гидроокись алюминия (патент РФ N 1568520, C 12 N 7/00, 1995).
Известна также вакцина против парвовирусной инфекции плотоядных на основе штамма панлейкопении кошек "Ганнибал" (авторское свидетельство СССР N 1413752, А 61 К 39/33, 1986).
Однако известные моновалентные вакцины требуют проведения профилактических обработок против каждой инфекции в отдельности, не достаточно эффективны и не обеспечивают максимального профилактического эффекта, т.к. все чаще встречается смешанное течение инфекционных заболеваний.
Известна также ассоциированная вакцина для профилактики чумы, инфекционного гепатита, аденовирусных инфекций и парвовирусного энтерита у собак "Тетравак", содержащая инактивированную вирусную суспензию штамма аденовируса "Ада", инактивированную вирусную суспензию штамма панлейкопении кошек "Ганнибал", вирусный материал штамма вируса чумы ЭПМ, гидроокись алюминия, сорбит-желатозный стабилизатор, раствор Хенкса и воду дистиллированную (патент РФ N 2030917, А 61 К 39/295, 1995).
Недостатком известной ассоциированной вакцины является невысокая иммуногенная активность.
Задачей изобретения является получение штамма вируса чумы плотоядных и вакцин на его основе, обладающих широким антигенным спектром и высокой иммуногенной активностью, тем самым обеспечивающих защиту плотоядных от вирусных заболеваний, вызываемых различными ассоциациями возбудителей.
Технический результат изобретения заключается в повышении иммуногенной активности и расширении иммуногенного спектра вакцин на основе штамма вируса чумы плотоядных, способных обеспечить длительный и надежный иммунитет против вирусных заболеваний, вызываемых различными ассоциациями возбудителей.
Сущность изобретения заключается в следующем: аттенуированный высокоактивный новый штамм вируса чумы плотоядных Virus distemper canis "Владимир" получен из селезенки байкальской нерпы и многократно пассирован в перевиваемой культуре клеток Vero. Штамм депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно- исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) и имеет регистрационный номер "Владимир-18-ДЕП".
Штамм вируса чумы плотоядных "Владимир" характеризуется следующими свойствами:
Морфология. Капсид сферической формы, окруженный двуслойной оболочкой, размером 200 нм в диаметре. Семейство Paramyxoviridae, род Morbilivirus.
Антигенные свойства. В реакции нейтрализации (РН) нейтрализует специфические сыворотки, полученные на данный штамм вируса и штаммы вируса "Вакчум" и "ЭПМ".
Культуральные свойства. Штамм размножается в культуре клеток.
Vero с титром не выше 4,0 lg ТЦД 50/мл.
Имуногенная активность. Обладает антигенной активностью для собак, кроликов, свиней, лошадей, мелкого и крупного рогатого скота.
Преобладающий тропизм. Эпителиотропный.
Серологическая характеристика штамма. Активен в реакции нейтрализации (РН).
Безвредность штамма. Не контагиозен для собак. При внутривенном, внутримышечном и подкожном заражении собак и хорьков не вызывает заболевания.
Стабильность. Штамм стабилен, при длительном хранении и поддержании сохранение титра в течение 2 лет, антигенная активность сохраняется не менее 2 лет и на протяжении не менее 20 пассажей.
Штамм поддерживается путем заражения перевиваемой культуры клеток Vero один раз в 2 года.
Аттенуированный штамм вируса Vims distemper canis ВГНКИ N "Владимир 18-ДЕП" используют для изготовления вакцины "Владивак" против чумы плотоядных и ассоциированных вакцин "Владивак 2" против чумы и парвовирусного энтерита и "Владивак-3" против чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита собак.
Вакцина "Владивак" против чумы плотоядных содержит в качестве антигена культуральную вирусную суспензию штамма Virus distemper canis ВГНКИ N "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5-4,0 Ig ТЦД 50/мл и любой известный стабилизатор.
Ассоциированная вакцина "Владивак-2" против чумы и парвовирусного энтерита плотоядных содержит в качестве антигена чумы культуральную вирусную суспензию штамма Virus distemper canis ВГНКИ N 18-ДЕП с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл, в качестве антигена парвовируса - культуральную вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log2 ТЦД 50/мл и любой известный стабилизатор.
Ассоциированная вакцина "Владивак 3" против чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита плотоядных "Владивак-3" содержит в качестве антигена чумы культуральную вирусную суспензию штамма Virus distemper canis N "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл, в качестве антигена парвовируса - культуральную вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log2, в качестве антигенов аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита - Hepatitis adenovirus canine "Адель" с титром инфекционной активности не менее 2 log и любой известный стабилизатор.
Для изготовления ассоциированных вакцин "Владивак-2" и "Владивак-3" используют высокоактивные новые аттетуированные штаммы Canine parvovirus "Риэль" и Hepatitis adenovirus canine "Адель".
Аттенуированный штамм Canine parvovirus "Риэль" получен путем проведения 48 пассажей в культуре клеток почек котенка вирулентного штамма парвовируса собак и депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.
Штамм Canine parvovirus "Риэль" характеризуется следующими свойствами:
Морфология. Безоболочечный икосаэдр диаметром 20-24 нм, семейство Parvoviridae, род Parvovirus.
Иммуногенные свойства. Обладает антигенной активностью для собак, кроликов, свиней, лошадей, мелкого и крупного рогатого скота.
Безвредность штамма. При внутривенном, оральном, подкожном, внутримышечном и внутрибрюшинном введении не вызывает заболевания собак.
Преобладающий тропизм. Эпителиотропный.
Гемагглютинирующие свойства. Агглютинирует эритроциты свиньи и зеленой мартышки.
Серологические свойства. Активен в РН и реакции торможения гемагглютинации (РТГА).
Культуральные свойства. Штамм размножается в первичной и субкультуре клеток почек котят с титром 5,67 lg ТЦД 50/мл, перевиваемой культуре клеток CrFK, MDCK, KF.
Стабильность штамма. Антигенная активность сохраняется не менее 1 года на протяжении не менее чем 20 пассажей. Сохранение титра - в течение 1 года, активности в РТГА - 9 log в течение года.
Штамм поддерживается путем заражения первичной или субкультуры клеток почек котенка один раз в год.
Аттенуированный штамм вируса Hepatitis adenovirus canine "Адель" получен путем проведения 12 пассажей в культуре клеток MDCK вирулентного штамма аденовируса собак тип 2 и депонирован в коллекции вирусов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.
Штамм "Адель" характеризуется следующими свойствами:
Морфология. Безоболочечный капсид кубической симметрии, несущий 12 фибрилл. Размер вириона 70-80 нм в диаметре. Штамм отнесен к семейству Adenoviridae, роду Adenovirus.
Преобладающий тропизм-эпителиотропный.
Антигенные свойства. В РН нейтрализует специфические сыворотки, полученные на данный штамм и штамм вируса "Ада".
Культуральные свойства. Штамм размножается в первичной и субкультуре клеток почек собак, перевиваемой культуре клеток MDCK, в культуре клеток почек котенка с титром 2 lg ТЦД 50/мл.
Безвредность штамма. При оральном, подкожном и внутримышечном введении не вызывает распространения и заболевания собак.
Серологические свойства. Активен в РН и реакции диффузной преципитации (РДП).
Иммуногенная активность. Обладает антигенной активностью для собак, кроликов, свиней, лошадей, мелкого и крупного рогатого скота.
Стабильность. Основных свойств штамма. Сохраняет титр в течение года, активность в РДП - 2 lg в течение года, антигенная активность сохраняется не менее 1 года на протяжении не менее чем 20 пассажей.
Штамм поддерживают путем заражения перевиваемой культуры клеток MDCK один раз в год.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Для изготовления вакцины "Владивак" против чумы плотоядных используют штамм вируса Virus distemper canis ВГНКИ N"Владимир 18-ДЕП". При этом монослой культуры клеток Vero заражают вирусом в дозе 0,01-0,001 ТЦД/на клетку. Для культивирования вируса в качестве поддерживающей питательной среды используют среду 199. Культивируют 5-7 суток до проявления характерного ЦПД при 37oC. После чего собирают вируссодержащую жидкость во флаконы и добавляют стабилизатор, например сухое обезжиренное молоко.
После розлива вакцины в ампулы или флаконы ее подвергают лиофилизации и контролю на стерильность, антигенную активность и специфичность, безвредность и иммуногенность.
Вакцина "Владивак" содержит вирус чумы в титре 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл.
Вакцина имеет вид сухой мелкопористой массы желто- или розово-коричневого цвета. Растворителем является дистиллированная вода.
Вакцину "Владивак" выпускают в ампулах или флаконах по 1,0-20,0 мл (1-20 доз). Вакцину вводят подкожно, предварительно разводят стерильной дистиллированной водой из расчета 1 мл на 1 дозу.
Вакцину "Владивак" применяют для иммунизации клинически здоровых животных с профилактической целью. Щенят прививают начиная с 8-недельного возраста. Собак до 4-месячного возраста рекомендуется вакцинировать дважды с интервалом 3 недели. Дальнейшую иммунизацию проводят в 6-8- месячном возрасте, а затем один раз в год.
Не подлежат вакцинации беременные, а также больные, подозрительные по заболеванию, и истощенные животные. Рекомендуется проведение вакцинации сук не позднее чем за 1 месяц до вязки.
Вакцину нельзя применять с лечебной целью.
Вакцина "Владивак" против чумы плотоядных испытана на 1500 собаках разных пород и тхорзофретках.
В результате обследования иммунизированных животных получены данные, свидетельствующие об отсутствии патологических реакций за счет снижения реактогенности, и установлено, что через 21 сутки формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий 100%-ную защиту привитых животных от заражения вирулентным вирусом.
Пример 2. Получение ассоциированной вакцины "Владивак 2" против чумы и парвовирусного энтерита плотоядных осуществляют путем раздельного приготовления культуральной вирусной суспензии штаммов Virus distemper canis "Владимир 18-ДЕП" и Canine parvovirus "Риэль".
Для получения вируссодержащего материала чумы плотоядных используют штамм вируса Virus distemper canis ВГНКИ N "Владимир 18-ДЕП". При этом монослой культуры клеток Vero заражают вирусом в дозе 0,01-0,001 ТЦД/на клетку. Для культивирования вируса в качестве поддерживающей питательной среды используют среду 199. Культивируют 5-7 суток до проявления характерного ЦПД при 37oC. После чего собирают вируссодержащую жидкость.
Для получения вируса парвовирусного энтерита используют культуру клеток K.F. Культуру клеток KF заражают вирусом Canine parvovirus "Риэль" в дозе 32 ГАЕ/мл одновременно с ее посевом в суспензию. В качестве питательных сред используют среду ДМЕМ с добавлением 5%-ной сыворотки плодов коров и культивируют 5-7 суток при 37oC. После чего собирают вируссодержащую жидкость.
Полученные вируссодержащие материалы объединяют и в смесь добавляют стабилизатор для лиофилизации, например, на основе сорбита и желатозы. Смесь охлаждают, расфасовывают в стерильные флаконы или ампулы и лиофилизируют.
После лиофилизации вакцину подвергают контролю на стерильность, антигенную активность и специфичность, безвредность и иммуногенность.
Вакцина имеет вид сухой мелкопористой массы желто- или розово-коричневого цвета. Растворителем является дистиллированная вода.
Вакцину "Владивак 2" выпускают в ампулах или флаконах по 1,0-20,0 мл (1-20 доз). Вакцину вводят подкожно, предварительно разводят стерильной дистиллированной водой из расчета 1 мл на 1 дозу.
Вакцину "Владивак 2" применяют для иммунизации клинически здоровых животных с профилактической целью. Щенят прививают начиная с 8-недельного возраста. Собак до 4-месячного возраста рекомендуется вакцинировать дважды с интервалом 3 недели. Дальнейшую иммунизацию проводят в 6-8- месячном возрасте, а затем один раз в год.
Не подлежат вакцинации беременные, а также больные, подозрительные по заболеванию, и истощенные животные. Рекомендуется проведение вакцинации сук не позднее чем за 1 месяц до вязки.
Вакцину нельзя применять с лечебной целью.
Вакцина "Владивак 2" против чумы плотоядных и парвовирусного энтерита испытана на 500 собаках разных пород.
В результате обследования иммунизированных животных установлено, что через 21 сутки формируется напряженный иммунитет к вирусам чумы и парвовирусам плотоядных.
Ассоциированная вакцина "Владивак 2" против чумы и парвовирусного энтерита плотоядных имеет следующий компонентный состав:
вирусная суспензия аттенуированного штамма Virus distemper canis ВГНКИ N "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл
вирусная суспензия аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log2 ТЦД 50/мл
стабилизатор - до 1 л.
Вакцина имеет вид сухой мелкопористой массы желто- или розово-коричневого цвета. Растворителем является дистиллированная вода.
Вакцину "Владивак -2" выпускают в ампулах или флаконах по 1,0-20,0 мл (1-20 доз). Вакцину вводят подкожно, предварительно разводят стерильной дистиллированной водой из расчета 1 мл на 1 дозу.
Вакцину "Владивак -2" применяют для иммунизации клинически здоровых животных с профилактической целью. Щенят прививают начиная с 8-недельного возраста. Собак до 4-месячного возраста рекомендуется вакцинировать дважды с интервалом 3 недели. Дальнейшую иммунизацию проводят в 6-8-месячном возрасте, а затем один раз в год.
Не подлежат вакцинации беременные, а также больные, подозрительные по заболеванию, и истощенные животные. Рекомендуется проведение вакцинации сук не позднее чем за 1 месяц до вязки.
Вакцину нельзя применять с лечебной целью.
Пример 3. Получение ассоциированной вакцины "Владивак 3" против чумы, парвовирусного энтерита, инфекционного гепатита и аденовирусной инфекции плотоядных осуществляют путем раздельного приготовления культуральной вирусной суспензии штаммов Virus distemper canis ВГНКИ N Владимир 18-ДЕП", Canine parvovirus "Риэль" и Hepatitis adenovirus canine "Адель".
Для получения вируссодержащего материала чумы плотоядных используют штамм вируса Virus distemper canis ВГНКИ N "Владимир 18-ДЕП". При этом монослой культуры клеток Vero заражают вирусом в дозе 0,01-0,001 ТЦД/на клетку. Для культивирования вируса в качестве поддерживающей питательной среды используют среду 199. Культивируют 5-7 суток до проявления характерного ЦПД при 37oC. После чего собирают вируссодержащую жидкость.
Для получения вируса парвовирусного энтерита используют культуру клеток KF. Культуру клеток KF заражают вирусом Canine parvovirus "Риэль" в дозе 32 ГАЕ/мл одновременно с ее посевом в суспензию. В качестве питательных сред используют среду ДМЕМ с добавлением 5%-ной сыворотки плодов коров и культивируют 5-7 суток при 37oC. После чего собирают вируссодержащую жидкость.
Для получения вируса аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита собак используют штамм Hepatitis adenovirus canine "Адель". Монослой культуры клеток MDCK заражают вирусом в дозе 0,01-0,001 ТЦД на клетку. Для культивирования вируса в качестве поддерживающей питательной среды используют среду 199 и культивируют 5-7 суток до появления характерного ЦПД при 37oC. После чего собирают вируссодержащую жидкость.
Полученные вируссодержащие материалы объединяют и в смесь добавляют стабилизатор для лиофилизации, например, на основе сорбита и желатозы. Смесь охлаждают, расфасовывают в стерильные флаконы или ампулы и лиофилизируют.
Ассоциированная вакцина "Владивак 3" против чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита плотоядных имеет следующий компонентный состав:
вирусная суспензия аттенуированного штамма Virus distemper canis ВГНКИ N "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл
вирусная суспензия аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log2 ТЦД 50/мл
вирусная суспензия аттенуированного штамма Hepatitis adenovirus canine "Адель" с титром инфекционной активности не менее 2 log2 ТЦД 50/мл
стабилизатор - до 1 л.
После розлива вакцины в ампулы или флаконы ее подвергают лиофилизации и контролю на стерильность, антигенную активность и специфичность, безвредность и иммуногенность.
Вакцина имеет вид сухой мелкопористой массы желто- или розово-коричневого цвета. Растворителем является дистиллированная вода.
Вакцину "Владивак-3" выпускают в ампулах или флаконах по 1,0-20,0 мл (1-20 доз). Вакцину вводят подкожно, предварительно разводят стерильной дистиллированной водой из расчета 1 мл на 1 дозу.
Вакцину "Владивак-3" применяют для иммунизации клинически здоровых животных с профилактической целью. Щенят прививают начиная с 8-недельного возраста. Собак до 4-месячного возраста рекомендуется вакцинировать дважды с интервалом 3 недели. Дальнейшую иммунизацию проводят в 6-8- месячном возрасте, а затем один раз в год.
Не подлежат вакцинации беременные, а также больные, подозрительные по заболеванию, и истощенные животные. Рекомендуется проведение вакцинации сук не позднее чем за 1 месяц до вязки.
Вакцину нельзя применять с лечебной целью.
Вакцина "Владивак-3" испытана на 2500 собаках разных пород и тхорзофретках.
В результате обследования иммунизированных животных установлено, что вакцина "Владивак-3" индуцирует иммунитет высокой напряженности к вирусу чумы, адено- и парвовирусам плотоядных.
Изобретение предназначено для производства средств специфической профилактики и лечения чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита плотоядных. Аттенуированный новый штамм Virus distemper canis ВГНКИ "Владимир 18-ДЕП" используют для изготовления вакцины против чумы плотоядных и ассоциированных вакцин против болезней плотоядных. Вакцина "Владивак" против чумы плотоядных содержит культуральную вирусную суспензию штамма Virus distemper canis ВГНКИ "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл и любой известный стабилизатор. Ассоциированная вакцина "Владивак-2" против чумы и парвовирусного энтерита плотоядных содержит культуральную вирусную суспензию штамма Virus distemper canis ВГНКИ 18-ДЕП с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл, культуральную вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log ТЦД 50/мл и любой известный стабилизатор. Ассоциированная вакцина "Владивак-3" против чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита плотоядных содержит культуральную вирусную суспензию штамма Virus distemper canis ВГНКИ "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл, культуральную вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log2, культуральную вирусную суспензию штамма Hepatitis adenovirus canine "Адель" с титром инфекционной активности не менее 2 log2 и любой известный стабилизатор. Изобретение повышает иммуногенную активность и расширяет иммуногенный спектр вакцин на основе штамма вируса чумы плотоядных, способных обеспечить длительный и надежный иммунитет против вирусных заболеваний, вызываемых различными ассоциациями возбудителей. 4 с.п. ф-лы.
| ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЧУМЫ, ИНФЕКЦИОННОГО ГЕПАТИТА, АДЕНОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ И ПАРВОВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА У СОБАК И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ЧУМЫ, ИНФЕКЦИОННОГО ГЕПАТИТА, АДЕНОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ И ПАРВОВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА У СОБАК | 1991 |
|
RU2030917C1 |
| ЖИВАЯ КУЛЬТУРАЛЬНАЯ ВАКЦИНА ЭПМ ПРОТИВ ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ | 1994 |
|
RU2067002C1 |
| ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЧУМЫ, ИНФЕКЦИОННОГО ГЕПАТИТА, АДЕНОВИРОЗА, ПАРВОВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА И ЛЕПТОСПИРОЗА СОБАК | 1992 |
|
RU2045960C1 |
| ШТАММ ADENOVIRUS CANIS 2 ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ И КОНТРОЛЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ АДЕНОВИРОЗА СОБАК | 1988 |
|
RU1568520C |
