СРЕДСТВО, ПОВЫШАЮЩЕЕ АКТИВНОСТЬ КИСЛОЙ ЛИПАЗЫ ТРОМБОЦИТОВ Российский патент 2011 года по МПК A61K31/185 A61K31/205 A61P3/06 A61P7/02 

Изобретение относится к медицине, фармакологии и биологии и, конкретно, может быть использовано, например, для повышения устойчивости сосудистой системы к холестерину при развитии атеросклеротического процесса.

Известно, что нарушения липидного обмена в виде атерогенных гиперхолестеринемий сопровождаются повышением свертываемости крови, что оправдывает применение в этих условиях препаратов с антикоагулянтным и липолитическим действием, например гепарина. В свою очередь, коагуляционный гемостаз и липидный профиль в значительной мере определяются состоянием тромбоцитов, их ферментативными реакциями. В этом плане заслуживают внимания исследования и разработки средств, изменяющих активность липаз тромбоцитов, в частности - кислой липазы тромбоцитов. Этот фермент с оптимумом pH 4,0-5,0 отличается широкой субстратной специфичностью и осуществляет гидролиз триглицеридов (ТГ), диглицеридов, моноглицеридов и эстерифицированного холестерина ЛПНП в лизосомах различных клеток, а также является маркером активности атеросклеротического процесса и эффективности проводимого лечения как больных атеросклерозом, так и больных с осложнениями атеросклероза, в частности - больных ишемической болезнью сердца - ИБС (стенокардией напряжения II ФК) [2].

В литературе имеются сведения о возможности активации кислой липазы различными химическими соединениями [Coates P.M., Brown S.A., Junawan J., Koldovaky О., 1977, 1979, С.К.Евтушенко, Т.М.Морозова, И.Н.Голубева, 2007]. Однако существует потребность в поиске и внедрении в практику новых диагностических и лекарственных средств, обладающих указанной активностью.

В качестве ближайшего аналога может быть указан источник: М.А.Самсонов, А.В.Васильев, А.В.Погожева, С.Н.Бобкова. Сравнительная оценка гиполипидемического действия ПНЖК w-3 и липостабила // Вопр. питания, 1996, №4. с.12-16. [3].

Задачей изобретения является разработка нового средства, повышающего активность кислой липазы.

Поставленная задача решается тем, что в качестве активатора кислой липазы применяют новый отечественный препарат трекрезан, что позволяет расширить область его применения.

Трекрезан обладает широким спектром терапевтического действия и отвечает формуле:

[2-CH₃C₆H₄OCH₂COO]^-[NH(CH₂CH₂OH)₃]⁺

Известно применение трекрезана как препарата, повышающего иммунитет и адаптивные свойства организма [1]. Применение трекрезана по новому назначению стало возможным благодаря выявленным нами его новым свойствам. Впервые показано, что введение трекрезана повышает активность лизосомального липолитического фермента из класса гидролаз (КФ 3.1.1) - кислой липазы (КФ 3.1.1.3) (КЛ).

Свойство трекрезана повышать активность кислой липазы в литературе не описано.

Возможность осуществления изобретения может быть проиллюстрирована ниже представленными данными.

Методика. В исследование включены 27 больных ИБС: стенокардией напряжения II ФК (17 мужчин и 10 женщин), средний возраст - 55,4±6,7 лет. Диагноз верифицировали на основании рекомендаций ААК/ААС/ЕОК, 2003 и Канадской классификации СтН в модификации ВКНЦ.

В исследование не включались больные с нестабильной стенокардией, инфарктом миокарда давностью менее 3 месяцев, с тяжелой и злокачественной артериальной гипертензией, с хронической сердечной недостаточностью ФК III-IV по NYHA, со стойкой артериальной гипотензией (САД<100 мм рт.ст.), с AV-блокадой II-II-III степени, синдромом слабости синусового узла, с выраженной почечной и печеночной недостаточностью, а также с заболеваниями или состояниями, которые могли повлиять на объективность исследования.

Все пациенты в течение 30 дней до начала исследования получали стандартную терапию СтН, которая при необходимости включала нитраты (изосорбида динитрат 40-80 мг/сут), β-адреноблокаторы (атенолол 25-50 мг/сут), дезагреганты (аспирин 125 мг/сут), ингибиторы АПФ (каптоприл 25-50 мг/сут), а затем в составе комплексного лечения трекрезан, по 600 мг в сутки в течение 30 дней. Реологические свойства крови (РСК) исследовали на вискозиометре ротационного типа АКР-2 (МП “Комед”, Россия) [4], оценивали вязкость крови (ВКр), индекс агрегации эритроцитов (ИАЭ) и индекс деформируемости эритроцитов (ИДЭ), вязкость плазмы (ВПл). Фибриноген плазмы крови (ФБПл) определяли по методике Клаусса [5]. Эуглобулиновым методом (ЭуЛ) оценивали активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время (ПВ), тромбиновое время (ТВ), фибринолитическую активность крови [5]. Агрегационную активность тромбоцитов изучали методом, рекомендованным [4]. Содержание холестерина (ХС) и триглицеридов (ТГ) определяли ферментативным способом на анализаторе FP-900 (Финляндия), ХС липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) - в супернатанте после преципитации липопротеидов других классов хлоридом магния. ХС липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) рассчитывали по формуле W.Friedwald [6]. Индекс атерогенности (ИА) определяли методом [5]. Исследования проводили до начала лечения и через 1,5 месяца комплексного лечения. Тромбоциты выделяли из крови путем последовательного центрифугирования в градиенте фиколлверографии методом [7]. Активность кислой липазы определяли спектрофотометрически [8]. Результаты обрабатывали статистически.

Результаты. При сравнении исходных показателей РСК и гемостаза, отмечено превышение верхних границ нормы исходных средних значений: вязкость крови при скоростях сдвига 200 с^-1 (ВКр200) - в 1,1 раза, вязкость крови при скоростях сдвига 100 с^-1 (BKp100) - в 1,1раза, вязкость крови при скоростях сдвига 20 с^-1 (ВКр20) - в 1,4 раза. Среднее значение ИДЭ составило -1,093+0,057, что меньше нормы в 1,10 раза, и свидетельствовало о повышенной жесткости эритроцитов и их меньшей доступности для капиллярной зоны микроциркуляции (табл.1). После применения в течение месяца стандартного лечения отмечено некоторая положительная, но не достоверная динамика показателей РСК и гемостаза. При добавлении трекрезана в дозе 600 мг в сутки к стандартной терапии в течение 1 месяца наблюдались достоверные положительные изменения РСК: снижение ВКр200, BKp100, ВКр20, ИАЭ, ВПл, ФБПл, ИАТр, укорочение времени ЭуЛ и удлинение ТВ (табл.1). Не выявлено значимых побочных эффектов или осложнений, связанных с приемом трекрезана, требовавших его отмены.

Вместе с тем, на фоне проводимого стандартного лечения наблюдалось снижение уровня активности КЛ тромбоцитов, которые, как известно, являются составной частью атеросклеротического процесса, особенно на ранних стадиях повреждений. Изменения тромботической формации включают активацию тромбоцитов с последующей адгезией к субэндотелиальному коллагену [9]. Все это свидетельствует о нарушении липидного обмена и не противоречит результатам других исследований [2, 10]. После добавления к стандартизованному лечению СтН трекрезана, у больных ИБС отмечалось достоверное повышение активности КЛ в Тц на 32% по сравнению с активностью этого фермента до начала лечения и снижение уровня ХС, ЛПНП, ТГ, ИА (табл.2).

Таблица 1 Реологические свойства крови и гемостаз у больных СтН ПФК при включении трекрезана в комплексное лечение(n=27) (M±m) Показатель Исходно Через 1 месяц станд. леч. Через месяц после вкл. трекрезана Вязкость крови при скоростях сдвига 200 с^-1 (ВКр200), (сП) 5,7±0,06 5,6±0,09 5,4±0,07* Вязкость крови при скоростях сдвига 100 с^-1 (BKp100), (сП) 6,2±0,08 6,0±0,11 5,8±0,08* Вязкость крови при скоростях сдвига 20 с^-1 (ВКр20), (сП) 8,6±0,09 8,3±0,06 7,9±0,06* Вязкость плазмы (ВПл), (сП) 1,9±0,02 1,86±0,04 1,7±0,01* Индекс агрегации эритроцитов (ИАЭ) 1,4±0,09 1,37±0,08 1,3±0,06* Индекс деформируемости эритроцитов (ИДЭ) 1,07±0,04 1,07±0,06 1,08±0,1 Гематокрит, (%) 41,8±3,7 41,5±2,4 41,5±3,2 Общий белок (ОБ), (г/л) 76,2±11,5 75,9±7,4 75,5±9,2 Фибриноген плазмы крови (ФБПл), (г/л) 345,4±14,8 341,9±13,7 301,9±12,3* Спонтанная агрегация тромбоцитов (САТр), (%) 6,8±0,2 6,8±0,3 6,6±0,3 Индуцированная-АДФ агрегация тромбоцитов (ИАТр), (%) 49,6±1,1 42,9±1,8 39,9±1,5* Активированное частичное тромбопластиновое время АЧТВ, (сек.) 38,5±1,2 40,2±1,9 43,8±2,7 Протромбиновое время (ПВ), (секунды) 16,1±2,2 16,5±2,8 17,3±3,2 Тромбиновое время (ТВ), (секунды) 17,6±1,9 18,4±1,7 23,5±1,6* Время эуглобулинового лизиса ЭуЛ, (секунды) 204,9±15,8 198,5±26,4 180,5±15,3* Примечание: * p<0,05

Таблица 2 Изменение активности кислой липазы в тромбоцитах (мкмоль/мин на 1 г белка) и уровня липидов у больных СтН ФК II при включении трекрезана в состав комплексной терапии (n=27) (M±SD) Показатель Исходно Через 1 месяц станд. лечения Через месяц после вкл. трекрезана КЛ (Тц) 0,25±0,01 0,27±0,05 0,33±0,03* ХС, ммоль/л 6,52±0,21 6,33±0,18 5,73±0,20* ЛПВП ммоль/л 0,97±0,13 0,98±0,10 1,17±0,11 ЛПНП ммоль/л 3,92±0,15 3,76±0,07 3,64±0,08 ЛПОНП ммоль/л 1,44±0,14 0,28±0,17 0,88±0,23* ТГ ммоль/л 2,32±0,17 2,17±0,14 1,77±0,11* ИА 5,72±0,34 5,45±0,28 3,89±0,28* Примечание: * - p<0,05

Литература

1. Воронков М.Г., Расулов М.М. Трекрезан - родоначальник нового класса адаптогенов и иммуномодуляторов // Хим.-фарм. Ж., 2007, №1, с.3-9

2. Anderson R.A., Bryson G.M., Parks J.S. // Methods in Molecular Biology (1999), Vol.68, №3, P.333-345.

3. Самсонов M.A., Васильев A.B., Погожева A.B., Бобкова С.Н.: Сравнительная оценка гиполидемического действия ПНЖК ω-3 и липостабила // Вопр. питания 1996, №4. с.12-16.

4. Захарченко В.Н. // В сб.: Реологические исследования в медицине, вып.I, М., Медицина, (1997), С.2.

5. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина. (1987), С.106-174.

6. Friedwald W.T., Levy R.I., Fredrickson D.S Estimation of plasma low density lipoprotein cholesterol concentration with use of the preparative ultracentri-fuge. // Clin Chem (1972); V.18, P.499-502.

7. Gmeling-Meyling F., Waldmann T. Separation of human blood monocytes and lymphocytes on a continuous percoll gradient. //, J. Immun. Methods, (1980). Vol.26, №1, P.308-603.

8. Булычев А.Г., Семенова Е.Г., Ассиновская О.А. Влияние аггрегации нейтрального красного, акридинового оранжевого и хлористого аммония клетками (сублинии) на активность лизосомальных гидролаз // Цитология. - (1986). Т.28, №7. С.703-711.

9. Packard R.R., Libby P. Inflammation in atherosclerosis: from vascular biology to biomarker discovery and risk prediction // Clin Chem. (2008). Vol.54, №1. P.24-38.

10. Coates P.M., Langer Т., Cortner J.A. Genetic variation of human mononuclear leukocyte lysosomal acid lipase activity relationship to aterosclerosis // Aterosclerosis, Vol.62. - P.11-20. (1986).

Изобретение относится к медицине, фармакологии и биологии и касается применения трекрезана в качестве активатора кислой липазы. Изобретение позволяет расширить арсенал лекарственных средств, снижающих уровень холестерина. 2 табл.

Применение трекрезана в качестве активатора кислой липазы тромбоцитов.