СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ВЕНОЗНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ Российский патент 2012 года по МПК A61K36/15 A61K31/385 A61K31/352 A61P9/14 

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средств, применяемых для лечения хронической венозной недостаточности (ХВН).

ХВН - синдром, характеризующийся нарушением кровотока в венозном бассейне, повышенным венозным давлением, нарушением работы венозных клапанов, снижением дренажной функции лимфатической системы, развитием отека, нарушением микроциркуляции, повышением проницаемости капиллярной системы, развитием воспаления [4].

Известно применение средства «Геспередин+диосмин» (Детралекс, Servier, Франция) в терапии ХВН, которое оказывает антиоксидантное, венотонизирующее действие, улучшает лимфотонический дренаж, улучшает микроциркуляцию, повышает резистентность капилляров [1, 4].

Известно применение средства «Троксерутин» (Троксевазин, Balranpharma, Болгария) при лечении ХВН в качестве антиоксидантного, противоотечного, противовоспалительного, венотонизирующего и ангиопротекторного средства [1, 4].

Известно применение средства «Эсцин» (Эскузан, Schering, Германия) в терапии ХВН, который оказывает противоотечное, противовоспалительное, венотонизирующее и ангиопротекторное действие [1, 4].

Наиболее близким «прототипом» к заявляемому является «Детралекс», представляющий собой комплекс двух активных веществ, обладающих антиоксидантной активностью: диосмина и гесперидина.

Задачей изобретения является расширение номенклатуры средств для лечения ХВН.

Поставленная задача решается созданием средства, содержащего дигидрокверцетин и липоевую кислоту в следующем соотношении 1:1 (вес. ч.).

Дигидрокверцетин обладает антиоксидантной, гиполипидемической, гепатопротекторной, капилляропротекторной и противовоспалительной активностью [2].

Липоевая кислота обладает антиоксидантной активностью, участвует в регулировании липидного и углеводного обмена, проявляет липотропный эффект, влияет на обмен холестерина, улучшает функцию печени, оказывает детоксицирующее действие при различных интоксикациях [1].

Использование смеси дигидрокверцетина и липоевой кислоты в качестве средства для лечения ХВН в литературе не описано.

Ранее данное средство не использовалось.

Принципиально новым в предлагаемом изобретении является то, что в качестве флеботропного средства используют смесь дигидрокверцетина и липоевой кислоты. Данное свойство явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники.

Смесь дигидрокверцетина и липоевой кислоты можно использовать для лечения хронической венозной недостаточности, варикозной болезни, посттромбофлебической болезни.

Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения: "новизна", "изобретательский уровень", "промышленно применимо".

Новые свойства смеси дигидрокверцетина и липоевой кислоты были обнаружены экспериментально.

Эксперименты по изучению антиоксидантной и противоотечной активности проведены на 15 крысах-самцах Вистар массой 250-350 г. Хроническую венозную недостаточность создавали путем ограничения кровотока в полой вене. Для этого у животных под эфирным наркозом проводили лапаротомию, выделяли участок каудальной полой вены проксимальнее правой почечной вены и подводили под него лигатуру. После чего в бедренную вену вводили гепарин в дозе 250 ЕД/кг и осуществляли частичную окклюзию каудальной полой вены (на 2/3). У ложнооперированных животных полностью повторяли оперативное вмешательство, исключая этап окклюзии сосуда. Животным опытной группы ежедневно внутрижелудочно в течение 14 суток вводили смесь дигидрокверцетина (50 мг/кг) и липоевой кислоты (50 мг/кг) в виде взвеси в 1% крахмальной слизи; крысам контрольной и ложнооперированной групп внутрижелудочно вводили 1% крахмальную слизь в эквиобъемном количестве. Первое введение осуществляли через сутки после оперативного вмешательства, последнее - за час до измерения параметров.

Измерение венозного давления, забор образцов крови для получения плазмы и последующего измерения ХЛ и забор мышц голени для последующего приготовления гистологических препаратов проводили на 14-е сутки, через 1 ч после последнего введения смеси дигидрокверцетина и липоевой кислоты.

Объем стопы задних конечностей определяли онкометрическим методом у бодрствующих крыс. Затем крыс наркотизировали диэтиловым эфиром и внутривенно вводили гепарин в дозе 250 ЕД/кг. Давление в каудальной полой вене измеряли прямым методом на уровне впадения в нее подвздошной вены. Доступ осуществлялся через бедренную вену. Забор проб цельной крови проводили из общей сонной артерии крыс. Для этого у животных под эфирным наркозом выделяли общую сонную артерию, сосуд перевязывали и проксимально вставляли тефлоновый катетер. Плазму получали методом центрифугирования при 1800 g на центрифуге РС-6.

Антиоксидантную активность оценивали по хемилюминесценции плазмы крови. Приготовление смеси для регистрации реакции ХЛ проводили в следующей последовательности: в кювету хемилюминометра Lumat LB9507 (Berthold Technologies, Швеция) наливали 2 мл дистиллированной воды, затем добавляли 100 мкл плазмы крови, тщательно перемешивали и затем, непосредственно, перед регистрацией свечения пробы в кювету добавляли 250 мкл 0,01Н раствора люминола в фосфатном буфере. ХЛ плазмы крови регистрировали в течение десяти минут и вычисляли по формуле: ХЛ=J·n/t, где J - количество регистрируемых единиц RLU ("relative light units"- относительная единица света, равна 10 фотонам), n - разведение пробы в кювете хемилюминометра, t - время экспозиции. ХЛ выражали в (КШ/мл)/сек. Антиоксидантная активность плазмы обратно пропорциональна величине ее хемилюминесценции.

После эвтаназии (передозировка эфирного наркоза) у животных забирали часть мышцы голени. Для гистологического исследования кусочки мышц фиксировали в 10% нейтральном формалине, затем обезвоживали в серии спиртов восходящей концентрации, заливали в парафин и изготавливали поперечные срезы толщиной 5 мкм. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином и эозином. На гистологических препаратах мышцы голени с помощью программы «Adobe Photoshop CS2» оценивали площадь интерстициального пространства по отношению к стандартной площади ткани (в %) в полях зрения при десятикратном увеличении.

Результаты исследования антиоксидантной и противоотечной активности смеси дигидрокверцетина и липоевой кислоты представлены в примерах 1-6, таблицах 1-3 и на чертеже 1.

Эксперименты по изучению лимфокинетической активности выполнены на 12 крысах-самцах Вистар массой 250-300 г. Животные были разделены на 3 групп по 6 животных в каждой группе. Вещества в виде взвеси в 1% крахмальной слизи или эквиобъемное количество 1% крахмальной слизи вводили однократно внутрижелудочно через зонд за один час до забора лимфы. Крысы группы контроля получали 1% крахмальную слизь, животные опытной группы - смесь дигидрокверцетина (50 мг/кг) и липоевой кислоты (50 мг/кг).

Для оценки лимфокинетического эффекта у исследуемых веществ использовали методику определения количества лимфы, поступающей из катетеризированной млечной цистерны крыс (cisterna chili). Забор лимфы осуществляли под тиопенталовым наркозом (60 мг/кг, внутрибрюшинно).

Лимфу стабилизировали гепарином в конечной концентрации 50 ЕД/мл. Определяли количество лимфы, оттекающей из млечной цистерны на единицу массы за единицу времени. Скорость лимооттока выражали в мкл/кг·мин [3].

Результаты исследования лимфокинетической активности смеси дигидрокверцетина и липоевой кислоты представлены в примерах 7, 8 и таблице 4.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ «Statistica 8.0». Данные представлены в виде где - среднее значение, s - стандартная ошибка среднего значения. Для оценки достоверности межгрупповых различий использовали непараметрический критерий Mann-Whitney U test.

Пример 1. В группе ложнооперированных животных на 14-е сутки венозное давление составило 40,8±2,9 мм вод.ст. Объем стоп задних конечностей составил 1,89±0,01 мл. Площадь интерстициального пространства к стандартной площади ткани составила 32,2±1,3% (таблица 1-3).

Таблица 1 Влияние курсового (14 дней) внутрижелудочного введения смеси дигидрокверцетина (50 мг/кг) и липоевой кислоты (50 мг/кг) на венозное давление (Р) у крыс с хронической венозной недостаточностью. Группы животных Р, мм вод.ст. Ложнооперированные (n=5) 40,8±2,9 Контроль (n=5) 112,0±3,7* Дигидрокверцетин и липоевая кислота (n=5) 103,2±4,0^# * - р<0,05 по сравнению со значениями у ложнооперированных животных; - р-0,1 по сравнению со значениями у контрольных животных.

Таблица 2 Влияние курсового (14 дней) внутрижелудочного введения смеси дигидрокверцетина (50 мг/кг) и липоевой кислоты (50 мг/кг) на объем стоп задних конечностей у крыс с хронической венозной недостаточностью. Группы животных Исходный объем, мл Объем на 14-е сутки, мл Ложнооперированные (n=5) 1,91±0,02 1,89±0,01 Контроль (n=5) 1,88±0,04 2,01±0,03^* Дигидрокверцетин и
липоевая кислота (n=5) 1,89±0,03 1,91±0,02^{+ *} - р<0,05 по сравнению со значениями у ложнооперированных животных; ^п - р<0,05 по сравнению с исходными значениями; ⁺- р<0,05 по сравнению со значениями у контрольных животных.

Таблица 3 Влияние курсового (14 дней) внутрижелудочного введения смеси дигидрокверцетина (50 мг/кг) и липоевой кислоты (50 мг/кг) на отношение площади интерстициального пространства (%) к стандартной площади ткани на гистологических препаратах мышцы голени у крыс с хронической венозной недостаточностью. Группы животных Площадь интерстициального пространства по отношению к стандартной площади ткани, % Ложнооперированные (n=5) 32,2±1,3 Контроль (n=5) 40,0±1,2^* Дигидрокверцетин и липоевая кислота (n=5) 36,2±1,3^*+ - р<0,05 по сравнению со значениями ложнооперированных животных; - р<0,05 по сравнению со значениями у контрольных животных.

Пример 2. В группе контрольных животных на 14-е сутки венозное давление составило 112,0±3,7 мм вод.ст., что было в 2,7 раза больше чем у ложнооперированных животных. Объем стоп задних конечностей составил 2,03±0,03 мл, что было на 7,4% больше, чем у ложнооперированных животных. Площадь интерстициального пространства к стандартной площади ткани составила 40,0±1,2%, что было в 1,2 раза больше, чем у ложнооперированных животных (таблица 1-3). Таким образом, у животных с перевязкой полой веной развивает хроническая венозная недостаточность, характеризующаяся увеличением объема задних конечностей, отеком в мышечной ткани и повышенным венозным давлением.

Пример 3. В группе животных, получавших смесь дигидрокверцетина (50 мг/кг) и липоевой кислоты (50 мг/кг), на 14-е сутки венозное давление составило 103,2±4,0 мм вод.ст., что было ниже значений контроля на 8% (р=0,1) (таблица 1). Объем стоп задних конечностей составил 1,91±0,02 мл, что было на 6,0% меньше (р<0,05), чем у контрольных животных (таблица 2). Площадь интерстициального пространства к стандартной площади ткани составила 36,2±1,3%, что было на 4% меньше (р<0,05), чем у контрольных животных (таблица 3).

Таким образом, смесь дигидрокверцетина (50 мг/кг) и липоевой кислоты (50 мг/кг) на модели хронической венозной недостаточности снижает проявляет противоотечную активность, что выражалось в уменьшении объема задних конечностей и снижении интерстициального пространства. При введении исследуемой смеси также отмечена тенденция к снижению венозного давления в опытной группе животных по сравнению с контролем.

Изобретение будет понятно из следующего описания и приложенному к нему чертежу. На чертеже изображено влияние курсового (14 дней) внутрижелудочного введения смеси дигидрокверцетина (50 мг/кг) и липоевой кислоты (50 мг/кг) на хемилюминесценцию (ХЛ, (RLU/мл)/сек) плазмы крови у крыс с хронической венозной недостаточностью. По оси ординат - величина ХЛ, по оси абсцисс - время. 1 - ложнооперированные животные; 2 - контрольные животные; 3 - животные, получавшие смесь дигидрокверцетина и липоевой кислоты.

Пример 4. В группе ложнооперированных животных на 14-е сутки ХЛ на 1, 2, 3, 4, 5 и 10 минуте составила 0,83·10^-5, 0,41·10^-5, 0,32·10^-5, 0,30-10^-5, 0,25-10^-5 и 0,21-10^-5 (RLU/мл)/сек соответственно (чертеж 1).

Пример 5. В группе контрольных животных на 14-е сутки ХЛ на 1, 2, 3, 4, 5 и 10 минуте составила 0,79·10^-5, 0,65·10^-5, 0,56·10^-5, 0,48·10^-5, 0,46·10^-5 и 0,38·10^-5 (RLU/мл)/сек соответственно (см. чертеж). Наблюдаемые изменения ХЛ свидетельствовали об увеличении свободнорадикальной активности плазмы у крыс с моделью хронической венозной недостаточностью.

Пример 6. В группе животных, получавших дигидрокверцетин и липоевую кислоту, на 14-е сутки ХЛ на 1, 2, 3, 4, 5 и 10 минуте составила 0,86·10^-5, 0,52·10^-5, 0,44·10^-5, 0,39·10^-5, 0,35·10^-5 и 0,27·10^-5 (RLU/мл)/сек соответственно (см. чертеж). Наблюдаемые значения ХЛ в данной группе были ниже контрольных значений, что свидетельствовало о способности смеси дигидрокверцетина и липоевой кислоты подавлять свободнорадикальные процессы, проявляя тем самым антиоксидантную активность.

Пример 7. В группе контрольных животных скорость лимфооттока составила 106±4 мкл/кг·мин (таблица 4).

Пример 8. В группе животных, получавших смесь дигидрокверцетина (50 мг/кг) с липоевой кислотой (50 мг/кг), скорость лимфооттока составила 146±8 мкл/кг·мин, что превышало значения в контрольной группе на 38% (р<0,05) (таблица 4).

Таким образом, смесь дигидрокверцетина с липоевой кислотой обладает выраженной лимфокинетической активностью.

Таблица 4 Влияние однократного внутрижелудочного введения смеси дигидрокверцетина (50 мг/кг) и липоевой кислоты (50 мг/кг) на скорость лимфооттока (мкл/кг·мин) из млечной цистерны у крыс. Группы животных, n=6 Скорость лимфооттока, мкл/кг-мин Контроль (n=6) 106±4 Дигидрокверцетин и липоевая кислота (n=6) 146±8⁺ Примечание: - достоверные различия по сравнению со значениями у контрольных животных (р<0,05).

Следовательно, смесь дигидрокверцетина с липоевой кислотой представляет собой средство для лечения ХВН, проявляющее антиоксидантую активность и уменьшающее отек конечностей на модели хронической венозной недостаточности у крыс, а также увеличивающее лимфотический дренаж.

Предлагаемое изобретение расширяет арсенал средств для лечения хронической венозной недостаточности.

Литература

1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: РИА «Новая волна»: Изд. Умеренков, 2008. - С.459, 460, 461, 642.

2. Колхир В.К., Тюкавкина Н.А., Быков В.А. и др. Диквертин - новое антиоксидантное и капилляропротекторное средство // Хим. - фарм. журн. - 1995. - №9. - С.61-64.

3. Кузнецов А.В. Новый способ забора лимфы у животных // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1993. - №9. - С.329-331.

4. Савельев B.C., Гологорский В.А., Кириенко А.И. и др. Флебология: Руководство для врачей. - М.: Медицина, 2004. - С.129-164, 409-438, 586-611 с.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к средству для лечения хронической венозной недостаточности. Средство для лечения хронической венозной недостаточности содержит дигидрокверцетин и липоевую кислоту в соотношении 1:1 (вес.ч.). Вышеописанное средство эффективно для лечения хронической венозной недостаточности. 1 ил., 4 табл.

Средство для лечения хронической венозной недостаточности, содержащее комплекс двух активных веществ, отличающееся тем, что в качестве активных веществ содержит смесь дигидрокверцетина и липоевой кислоты в соотношении 1:1 (вес.ч.).