СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩИЕ ГЕМОРЕОЛОГИЧЕСКОЙ, АНТИАГРЕГАНТНОЙ И АНТИТРОМБОГЕННОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2009 года по МПК A61K31/05 A61K31/135 A61P7/02 A61P7/06 

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средств, обладающих антирадикальной, гемореологической, антитромбоцитарной и антитромбогенной активностью.

Известны средства, обладающие антирадикальной активностью: ионол (ди-бунол), аскорбиновая кислота, токоферола ацетат, эмоксипин, β-каротин [1]. Наиболее близким средством (прототипом) является 4-метил-2,6-диизобутилфенол (ионол), как соединение близкое по структуре, относящееся к пространственно-затрудненным фенолам и обладающее выраженной антирадикальной активностью [2].

Известны средства, обладающие гемореологической активностью пентоксифиллин, дигидрокверцетин, танакан [3, 4, 5, 6]. Известны средства, обладающие антитромбоцитарной активностью: пентоксифилин, ацетилсалициловая кислота, тиклопидин, дипиридамол [3, 7]. Известны средства, обладающие антитромбогенной активностью: пентоксифиллин, ингибиторы циклооксигеназы и витамин С [8, 9, 10]. По этим трем видам активности наиболее близким (прототипом) является пентоксифиллин, обладающий гемореологической, антитромбоцитарной и антитромбогенной активностью [3, 11, 12].

Задачей изобретения является расширение номенклатуры средств, обладающих антирадикальной, гемореологической, антитромбоцитарной и антитромбогенной активностью.

Поставленная задача достигается использованием ряда производных о-изоборнилфенола: 2-метил-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола, 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида в качестве антирадикальных, гемореологических, антитромбоцитарных и антитромбогенных средств.

Использование 2-метил-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола и 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида, в качестве антирадикальных, гемореологических, антитромбоцитарных и антитромбогенных средств в литературе не описано [20, 21, 22, 23].

Принципиально новым в предлагаемом изобретении является то, что в качестве антирадикальных, гемореологических, антитромбоцитарных и антитромбогенных средств используются 2-метил-6-изоборнилфенол, 4-метил-2,6-диизоборнилфенол и 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорид. Данные виды активности соединений явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники. Производные о-изоборнилфенола: 2-метил-6-изоборнилфенол, 4-метил-2,6-диизоборнилфенол и 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорид можно использовать для лечения больных с сердечно-сосудистыми и другими заболеваниями для уменьшения повышенной вязкости крови, спонтанной агрегации эритроцитов, а также снижения агрегационной способности тромбоцитов и внутрисосудистого тромбообразования.

Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения: "новизна", "изобретательский уровень", "промышленно применимо".

Исследования антирадикальной активности 2-метил-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола и 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида проводили с использованием метода, основанного на способности веществ с антирадикальной активностью нейтрализовать свободные радикалы [13]. Донором свободных радикалов выступал 2,2-дифенил-1-пикрилгидразил (ДФПГ). Регистрацию изменений оптической плотности проводили на спектрофотометре СФ-46 (Россия) в течение 60 минут с интервалом пять минут при длине волны 520 нм в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм.

Антирадикальную активность соединений оценивали по уровню снижения оптической плотности, выраженного в процентах, для конечной точки периода измерения (60 минут) относительно исходного значения оптической плотности и показателю эффективного времени. Показатель эффективного времени ЕТ_50% - это значение времени, выраженное в минутах, при котором происходит уменьшение исходной оптической плотности (концентрации свободных радикалов) на 50%. Данный показатель является одной из определяющих характеристик антирадикальной активности и обратно пропорционален ей.

Растворы исследуемых соединений: 2-метил-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола и 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида, раствор ионола и раствор ДФПГ использовали в эквимолярных концентрациях, равных 0,25·10^-3 ммоль/л. Во всех случаях в качестве растворителя использовался 95% спирт этиловый. Измерение оптической плотности исследуемых соединений проводили каждые пять минут в течение часа после смешивания 1,5 мл 0,25·10^-3 ммоль/л растворов исследуемых соединений и 1,5 мл 0,25·10^-3 ммоль/л раствора ДФПГ. В качестве контроля выступал раствор, состоящий из 1,5 мл 0,25·10^-3 ммоль/л раствора ДФПГ и 1,5 мл 95% спирта этилового.

Эксперименты по изучению гемореологической, антитробоцитарной и антитромбогенной активностей проводили на крысах Вистар.

Эксперименты по изучению гемореологических свойств 2-метил-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола и 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида проводили на 25 крысах-самцах Вистар массой 250-300 г. Животные были разделены на 5 групп: 5 животных получили внутрижелудочно крахмальную слизь (контроль), 5 животных получали внутрижелудочно пентоксифиллин (400 мг/кг) (группа I); 5 животных получили внутрижелудочно 2-метил-6-изоборнилфенол (100 мг/кг) (группа II), 5 животных получили внутрижелудочно 4-метал-2,6-диизоборнилфенола (100 мг/кг) (группа III) и 5 животных получили внутрижелудочно 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорид (100 мг/кг) (группа IV). Соединения и эквиобъемное количество крахмальной слизи (1 мл) вводили внутрижелудочно через зонд за один час до забора крови. Влияние соединений на вязкость крови оценивали с использованием модели гипервязкости крови in vitro. Кровь забирали из общей сонной артерии под эфирным наркозом. В качестве стабилизатора использовали 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении с кровью 1:9. Вязкость крови измеряли на ротационном вискозиметре АКР-2 в диапазоне скоростей сдвига от 5 до 300 с^-1 до и после инкубации образцов при температуре 20,0±0,4°С в течение 60 минут.

В этой же серии экспериментов было исследовано влияние соединений на агрегацию эритроцитов. Спонтанную агрегацию эритроцитов исследовали с помощью силлектометрического метода [3] в нашей модификации [14]. Для установления интенсивности фотометрического сигнала использовали микроколориметр МКМФ-1 с графической регистрацией на графопостроителе Н306. Критерием агрегационной активности эритроцитов служил полупериод агрегации Т_1/2 - время, за которое величина фотометрического сигнала снижается в два раза.

Эксперименты по изучению антитромбоцитарной активности 2-метил-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола и 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида проводили на 25 крысах-самцах Вистар массой 250-280 г. Животные были разделены на 5 групп: 5 животных получили внутрижелудочно крахмальную слизь (контроль), 5 животных получили внутрижелудочно пентоксифиллин (400 мг/кг) (группа V); 5 животных получили внутрижелудочно 2-метил-6-изоборнилфенол (100 мг/кг) (группа VI), 5 животных получили внутрижелудочно 4-метил-2,6-диизоборнилфенол (100 мг/кг) (группа VII) и 5 животных получили внутрижелудочно 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорид (100 мг/кг) (группа VIII). Соединения и эквиобъемное количество крахмальной слизи (1 мл) вводили внутрижелудочно через зонд за один час до забора крови. Кровь забирали из общей сонной артерии под эфирным наркозом. В качестве стабилизатора использовали 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении с кровью 1:9.

Агрегацию тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазме (БТП) определяли нефелометрическим методом по Born [15]. Получение богатой (БТП) и бедной (БеТП) тромбоцитами плазмы и подсчет числа тромбоцитов проводили по стандартному методу [16]. Из проб крови получали БТП и БеТП методом центрифугирования при 400 g и 1800 g соответственно на центрифуге РС-6. В полученной БТП подсчитывали количество тромбоцитов микроскопическим методом при фазовом контрасте в камере Горяева.

Так как в норме число тромбоцитов в крови у крысы колеблется в широких пределах - от 430000 до 1 млн в 1 мм³ - после определения числа тромбоцитов в БТП проводили стандартизацию числа тромбоцитов, для чего БПТ разводили необходимым количеством БеТП до 400±30 тыс.тромбоцитов в 1 мм³ в пробе [17, 18].

Агрегацию тромбоцитов оценивали в стандартизованной плазме на приборе АТ-02, агрегатограммы регистрировали с помощью самописца Recorder 2210.

После добавления индуктора агрегации регистрировали изменение уровня оптической плотности БТП. В качестве критерия агрегационной активности тромбоцитов использовали показатель степени агрегации (в %), характеризуемый изменением оптической плотности БТП после добавления в кювету индуктора агрегации. При этом за 100% принимали величину оптической плотности БеТП, а за 0% - величину оптической плотности БТП.

В качестве индуктора агрегации использовали АДФ в конечной концентрации 4·10^-6 M.

Эксперименты по изучению антитромбогенной активности 2-метил-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола и 2-(дибуталамино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида проводили на 25 крысах-самцах Вистар массой 220-240 г. Животные были разделены на 5 групп: 5 животных получили внутрижелудочно крахмальную слизь (контроль), 5 животных получили внутрижелудочно пентоксифиллин (400 мг/кг) (группа IX); 5 животных получили внутрижелудочно 2-метал-6-изоборнилфенол (100 мг/кг) (группа X), 5 животных получили внутрижелудочно 4-метил-2,6-диизоборнилфенол (100 мг/кг) (группа XI) и 5 животных получили внутрижелудочно 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенол гидрохлорид (100 мг/кг) (группа XII). Соединения и эквиобъемное количество крахмальной слизи (1 мл) вводили внутрижелудочно через зонд в течение трех суток. На третьи сутки эксперимента - через 1 час после последнего введения - животных наркотизировали (тиопентал натрия в дозе 60 мг/кг, внутрибрюшинно), выделяли левую общую сонную артерию и воспроизводили модель внутрисосудистого тромбоза [19]. На отпрепарированную сонную артерию накладывали манжеточные датчики и регистрировали величину кровотока по сосуду с помощью электромагнитного расходомера крови MFV-1100 (Nihon Kohden, Япония). Затем под сонную артерию подкладывали полоску фильтровальной бумаги и полоску полиэтиленовой пленки. Сверху на эту артерию накладывали полоску фильтровальной бумаги, на которую наносили 1 каплю 10% раствора FeCl₂. Измеряли величину кровотока в артерии, время от момента нанесения хлорида железа на левую сонную артерию до полной остановки кровотока в ней (время образования тромба). Кроме того, производили расчет снижения кровотока относительно исходной величины кровотока в процентах. Массу тромба оценивали гравиметрическим методом.

Статистическую обработку проводили с помощью пакета программного обеспечения "Statistica 6.0". Рассчитывали среднее значение, стандартную ошибку, для выявления межгрупповых различий использовали t-критерий Стьюдента.

Результаты исследований антирадикальной активности 2-метил-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола, 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида представлены в примерах 1-5.

Пример 1. Определение исходной оптической плотности раствора ДФПГ.

К 1,5 мл 0,25·10^-3 ммоль/л раствора ДФПГ добавляли 1,5 мл 95% спирта этилового. В качестве контрольного раствора использовали 95% спирт этиловый. Измеренное значение оптической плотности далее в расчетах принимали за 100%.

Пример 2. Определение изменения оптической плотности ДФПГ под действием радикалсвязывающего агента ионола.

Снижение оптической плотности на 60 минуте составило 70% относительно исходного, и ЕТ_50% было равно 26,56±1,64 мин (табл.1).

Пример 3. Определение изменения оптической плотности ДФПГ под действием 2-метил-6-метилизоборнилфенола.

Снижение значения оптической плотности на 60 минуте составило 82% относительно исходного, и ЕТ_50% было равно 5,89±1,22 мин. 2-Метил-6-метилизоборнилфенол вызвал снижение значения оптической плотности на 60 минуте на 12% больше, чем прототип, и значение показателя ЕТ_50% было на 20,67 минут меньше, чем у прототипа. Полученные данные свидетельствуют о наличии высокой антирадикальной активности 2-метил-6-метилизоборнилфенола, превышающей активность прототипа (табл.1).

Пример 4. Определение изменения оптической плотности ДФПГ под действием 4-метил-2,6-диизоборнилфенола.

Снижение значения оптической плотности на 60 минуте составило 89% относительно исходного, и ET_50% было равно 3,88±0,87 мин. 4-Метил-2,6-диизоборнилфенол вызвал снижение значения оптической плотности на 60 минуте на 19% больше, чем прототип, и значение показателя ЕТ_50% было на 22,68 минут меньше, чем у прототипа. Полученные данные свидетельствуют о наличии высокой антирадикальной активности 2-метил-6-метилизоборнилфенола, превышающей активность прототипа (табл.1).

Пример 5. Определение изменения оптической плотности ДФПГ под действием 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенол гидрохлорида.

Снижение значения оптической плотности на 60 минуте составило 52% относительно исходного, и ЕТ_50% было равно 57,02±6,74 мин. 4-Метил-2,6-диизоборнилфенол вызвал снижение значения оптической плотности на 60 минуте на 18% меньше, чем прототип, значение показателя ЕТ_50% было на 30,46 минут больше, чем у прототипа. Полученные данные свидетельствуют о наличии выраженной антирадикальной активности 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола, но уступающей прототипу (табл.1).

Результаты исследований гемореологической активности 2-метал-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола, 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида представлены в примерах 6-15.

Пример 6. Инкубирование крови в течение 60 мин при температуре 20,0±0,4°С приводило к значимому повышению вязкости крови при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1 и 300 с^-1 на 31%, 19%, 27%, 26% и 14% соответственно (табл.2, контроль).

Таким образом, на модели гипервязкости крови in vitro в контрольной группе отмечено достоверно возрастание вязкости в широком диапазоне скоростей сдвига.

Пример 7. У опытных крыс в группе I вязкость крови до инкубации была достоверно ниже, чем в контроле при скоростях сдвига 5, 10 и 50 с^-1 на 9%, 16% и 6% соответственно. Инкубирование крови крыс этой группы в течение 60 мин при температуре 20,0±0,4°С приводило к повышению вязкости крови при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1 и 300 с^-1 на 10%, 14%, 12%, 9% и 7% соответственно. После инкубации вязкость крови при скоростях сдвига 5 с^-1,10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1, 300 с^-1 была ниже, чем в контроле, на 24%, 17%, 17%, 15% и 8% соответственно (табл.2, группа I).

Таким образом, на модели гипервязкости крови in vitro пентоксифиллин ограничивает возрастание вязкости крови в широком диапазоне скоростей сдвига.

Пример 8. У опытных крыс в группе II исходные значения вязкости крови при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1 были ниже на 13%, 10% и 6% соответственно, чем в контроле. Инкубирование крови крыс этой группы в течение 60 мин при температуре 20,0±0,4°С приводило к повышению вязкости крови во всем диапазоне исследуемых скоростей сдвига на 11-26%. После инкубирования вязкость крови крыс группы II была ниже, чем в контроле при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1 и 300 с^-1 на 16%, 8%, 15%, 10% и 2% соответственно (табл.2, группа II).

Таким образом, на модели гипервязкости крови in vitro 2-метил-6-изоборнилфенол ограничивает возрастание вязкости крови в широком диапазоне скоростей сдвига. Выраженность гемореологической активности 2-метил-6-изоборнилфенола сопоставима с таковым у прототипа - пентоксифиллина.

Пример 9. У опытных крыс в группе III до инкубации вязкость крови была ниже, чем в контроле при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1 и 50 с^-1 на 14%, 10% и 6% соответственно. Инкубирование крови крыс этой группы в течение 60 мин при температуре 20,0±0,4°С приводило к повышению вязкости крови при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1 и 300 с^-1 на 14%, 12%, 12%, 11% и 7% соответственно. После инкубирования вязкость крови была ниже, чем в контроле, при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1 и 300 с^-1 на 25%, 14%, 17%, 14% и 6% соответственно (табл.2, группа III).

Таким образом, на модели гипервязкости крови in vitro 4-метил-2,6-диизоборнилфенол ограничивает возрастание вязкости крови в широком диапазоне скоростей сдвига. Выраженность гемореологической активности 4-метил-2,6-диизоборнилфенола сопоставима с таковой у прототипа - пентоксифиллина.

Пример 10. У опытных крыс в группе IV до инкубации вязкость крови была ниже, чем в контроле, при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1 и 100 с^-1 на 15%, 10%, 6% и 2% соответственно. Инкубирование крови крыс этой группы в течение 60 мин при температуре 20,0±0,4°С приводило к повышению вязкости крови при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1 и 300 с^-1 на 15%, 11%, 10%, 7% и 7% соответственно. После инкубирования вязкость крови была ниже, чем в контроле, при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1 и 300 с^-1 на 25%, 15%, 18%, 17% и 6% соответственно (табл.2, группа IV).

Таким образом, на модели гипервязкости крови in vitro 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенол гидрохлорид ограничивает возрастание вязкости крови в широком диапазоне скоростей сдвига. Выраженность гемореологической активности 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида сопоставима с таковой у прототипа - пентоксифиллина.

Пример 11. Полупериод агрегации эритроцитов у крыс контрольной группы составил 18,6±1,1 с. Инкубирование крови в течение 60 мин при температуре 20,0±0,4°С приводило к уменьшению полупериода агрегации эритроцитов на 35% (табл.3, контроль).

Таким образом, на модели гипервязкости крови in vitro в контрольной группе установлено уменьшение полупериода агрегации эритроцитов, что свидетельствовало об усилении агрегации эритроцитов.

Пример 12. Полупериод агрегации эритроцитов у крыс группы I составил 19,6±2,1 с. Инкубирование крови в течение 60 мин при температуре 20,0±0,4°С не вызывало значимых сдвигов в значении полупериода агрегации эритроцитов. После инкубации полупериод агрегации эритроцитов был выше на 52% по сравнению с показателем контрольной группы (табл.3, группа I).

Таким образом, на модели гипервязкости крови in vitro пентоксифиллин предотвращает усиление агрегации эритроцитов.

Пример 13. Полупериод агрегации эритроцитов у крыс группы II составил 16,9±2,2 с. Инкубирование крови в течение 60 мин при температуре 20,0±0,4°С не вызывало существенных сдвигов в значении полупериода агрегации эритроцитов. После инкубации полупериод агрегации эритроцитов был выше на 31% по сравнению с показателем контрольной группы (табл.3, группа II).

Таким образом, на модели гипервязкости крови in vitro 2-метил-6-изоборнилфенол ограничивает усиление агрегации эритроцитов. Выраженность гемореологической активности 2-метил-6-изоборнилфенола сопоставима с таковой у прототипа - пентоксифиллина.

Пример 14. Полупериод агрегации эритроцитов у крыс группы III составил 18,5±1,8 с. Инкубирование крови в течение 60 мин при температуре 20,0±0,4°С не вызывало существенных сдвигов в значении полупериода агрегации эритроцитов. После инкубации полупериод агрегации эритроцитов был выше на 33% по сравнению с показателем контрольной группы (табл.3, группа III).

Таким образом, на модели гипервязкости крови in vitro 4-метил-2,6-диизоборнилфенол ограничивает усиление агрегации эритроцитов. Выраженность гемореологической активности 4-метил-2,6-диизоборнилфенола сопоставима с таковой у прототипа - пентоксифиллина.

Пример 15. Полупериод агрегации эритроцитов у крыс группы IV составил 16,5±1,1 с. Инкубирование крови в течение 60 мин при температуре 20,0±0,4°С не вызывало существенных сдвигов в значении полупериода агрегации эритроцитов. После инкубации полупериод агрегации эритроцитов был выше на 31% по сравнению с показателем контрольной группы (табл.3, группа IV).

Таким образом, на модели гипервязкости крови in vitro 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенол гидрохлорид ограничивает усиление агрегации эритроцитов. Выраженность гемореологической активности 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида сопоставима с таковой у прототипа - пентоксифиллина.

Результаты исследований антитромбоцитарной активности 2-метил-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола, 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида представлены в примерах 16-20.

Пример 16. В контрольной группе животных амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в стандартизованной плазме составила 28±1% (табл.4, контроль).

Пример 17. После однократного внутрижелудочного введения пентоксифиллина в дозе 400 мг/кг амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в стандартизированной плазме составила 19±1%, что на 32% ниже показателя у крыс контрольной группы (табл.4, группа V).

Таким образом, пентоксифиллин в дозе 400 мг/кг внутрижелудочно однократно обладает выраженной антиагрегантной активностью.

Пример 18. После однократного внутрижелудочного введения 2-метил-6-изоборнилфенола в дозе 100 мг/кг амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в стандартизованной плазме составила 17±1% (табл.4, группа VI). Амплитуда агрегации тромбоцитов была на 39% ниже, чем в контроле, и была близка к значению показателя у крыс в группе V.

Таким образом, 2-метал-6-изоборнилфенол в дозе 100 мг/кг внутрижелудочно однократно обладает выраженной антиагрегантной активностью, сравнимой по выраженности с пентоксифиллином в дозе 400 мг/кг.

Пример 19. После однократного внутрижелудочного введения 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в дозе 100 мг/кг амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в стандартизованной плазме составила 17±2% (табл.4, группа VII). Амплитуда агрегации тромбоцитов была на 39% ниже, чем в контроле и была близка к значению показателя у крыс в группе V.

Таким образом, 4-метил-2,6-диизоборнилфенол в дозе 100 мг/кг внутрижелудочно однократно обладает выраженной антиагрегантной активностью, сравнимой по выраженности с пентоксифиллином в дозе 400 мг/кг.

Пример 20. После однократного внутрижелудочного введения 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида в дозе 100 мг/кг амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в стандартизованной плазме составила 18±1% (табл.4, группа VIII). Амплитуда агрегации тромбоцитов была на 36% ниже, чем в контроле, и была близка к значению показателя у крыс в группе V.

Таким образом, 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенол гидрохлорид в дозе 100 мг/кг внутрижелудочно однократно обладает выраженной антиагрегантной активностью, сравнимой по выраженности с пентоксифиллином в дозе 400 мг/кг.

Результаты исследований антитромбогенной активности 2-метил-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола, 2-(дибутиламино)метил-4-метал-6-изоборнилфенола гидрохлорида представлены в примерах 21-25.

Пример 21. В контрольной группе животных после аппликации хлорида железа на поверхность сонной артерии у всех животных происходило полное прекращение кровотока по сосуду. Среднее время полной остановки кровотока до нуля составило 20±2 минуты. Масса тромба, определяемая через сутки после аппликации хлорида железа, составила 1,2±0,2 мг (табл.5, контроль).

Пример 22. У опытных крыс в группе IX к концу периода наблюдения (90 мин с момента аппликации хлорида железа) происходило снижение кровотока в сонной артерии на 31±12%. На следующие сутки в просвете сонной артерии не выявлено тромбов ни у одного животного (табл.5, группа IX).

Таким образом, пентоксифиллин в дозе 400 мг/кг внутрижелудочно обладает выраженной антитромбогенной активностью.

Пример 23. У опытных крыс группы к концу периода наблюдения (90 мин с момента аппликации хлорида железа) происходило снижение кровотока в сонной артерии на 20±8%. Через сутки у трех животных из пяти были обнаружены тромбы в просвете сонной артерии. Средняя масса тромба составила 0,33±0,24 мг, что было на 75% ниже, чем в контроле (табл.5, группа X).

Таким образом, 2-метил-6-изоборнилфенол в дозе 100 мг/кг внутрижелудочно обладает умеренной антитромбогенной активностью.

Пример 24. У опытных крыс группы XI к концу периода наблюдения (90 мин с момента аппликации хлорида железа) происходило снижение кровотока в сонной артерии на 13±9%. На следующие сутки в просвете сонной артерии не выявлено тромбов ни у одного животного (табл.5, группа XI).

Таким образом, 4-метил-2,6-диизоборнилфенол в дозе 100 мг/кг внутрижелудочно обладает выраженной антитромбогенной активностью.

Пример 25. У опытных крыс группы XII к концу периода наблюдения (90 мин с момента аппликации хлорида железа) происходило снижение кровотока в сонной артерии на 23±6%. Через сутки у двух животных из пяти были обнаружены тромбы в просвете сонной артерии. Средняя масса тромба составила 0,04±0,02 мг, что было на 97% ниже, чем в контроле (табл.5, группа XII).

Таким образом, 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорид в дозе 100 мг/кг внутрижелудочно обладает антитромбогенной активностью.

Предлагаемое изобретение расширяет арсенал средств, обладающих одновременно антирадикальной, гемореологической, антитромбоцитарной и антитромбогенной активностью.

Источники информации

1. Меньщикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К., Бондарь И.А. и др. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. - М.: Фирма «Слово», 2006. - С.193-196.

2. Зарудий Ф.С., Гульмутдинов Г.З., Зарудий Р.Ф. и др. 2,6-Ди-трет-бутил-4-метилфенол (дибунол, ионол, тонарол) классический антиоксидант (обзор) // Хим.-фарм. журнал. - 2001. - Т.35, № 3. - С.42-48.

3. Габриэлян Э.С., Акопов С.Э. Клетки крови и кровообращение. - Ереван: Айастан, 1985. - С.71, 326.

4. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Харьков: Торсинг, 1998. - Т.1. - С.196, 441.

5. Плотников М.Б.. Алиев О.И., Маслов М.Ю. и др. Коррекция синдрома повышенной вязкости крови в условиях ишемии мозга у крыс комплексом диквертина и аскорбиновой кислоты / Эксперим. и клинич. фармакология. - 1999. - № 6. - С.45-47.

6. Koltringer P., Eber O., Lind P. et al. Microzirkulation und Viscoelastizitat des Vullblutes unter Gingko biloba extrakt. Eine placebocontrollierte randomisierte Doppelblind-Studie // Perfusion. - 1989. - Bd.1. - S.28-30.

7. Носаль Р. Современное состояние и перспективы антитромбоцитарной терапии // Словакофарма ревю. - 2000. - № 1-2. - С.14-19.

8. Танашян М.М., Домашенко М.А. Трентал при ишемических цереброваскулярных заболеваниях (обзор литературы) // Нервные болезни. - 2005. - № 4. - С.21-24.

9. Taddei S., Virdis A., Mattei P. et al. Hypertension causes premature again of endothelial function in humans // Hypertension. - 1997. - Vol.29. - P.736-743.

10. Taddei S., Virdis A., Ghiadoni L. et al. Age-related reduction of NO availability and oxidative stress in humans // Hypertension. - 2001. - Vol.38. - P.274-279.

11. Hedrich H., Schlichting K., Ott М. Changes in blood viscosity due to pentoxifylline // IRCS Med. Sci. - 1976. - Vol.4. - P.368-375.

12. Sinzinger H. Pentoxifylline enhances formation of prostacyclin from rat vascular and renal tissue // Prostaglandins Leucotriens Med. - 1983. - Vol.12. - P.1230-1236.

13. Починок Т.В., Тараховский М.Л., Портягина В.А. и др. Экспресс-метод определения антиокислительной активности лекарственных веществ // Хим.-фарм. журн. - 1985. - № 5. - С.565-569.

14. Плотников М.Б., Алиев О.И., Попель Ф.В. Модификация микроколориметра МКМФ-1 для регистрации агрегации эритроцитов // Клинич. лабор. диагностика. - 1995. - № 3. - С 57-58.

15. Born G.V.R. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal // Nature. - 1962. - Vol.194, №4832. - P. 927-929.

16. Баркаган З.С., Момог А.П. Основные методы лабораторной диагностики нарушений системы гемостаза. - Барнаул, 1998. - С.10-11.

17.Закревская А.Л. Тромбоциты крыс как модель исследования ингибиторов агрегации // Патологическое функционирование системы гемостаза. - Л., 1990. - С.46-54.

18. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А. Лабораторные животные. - Киев, 1974. - 303 с.

19. Максименко А.В., Тищенко Е.Г. Антиоксидантная биотерапия для защиты сосудистой производными супероксиддисмутазы и каталазы // Цитология. - 1999. - Т.41, № 9. - С.821-822.

20. Кучин А.В., Чукичева И.Ю. Природные и синтетические терпенофенолы // Российский химический журнал. - 2004. - Т.XLVIII, № 3. - С.21-38.

21. Патент РФ № 2233262. "Способ получения орто-терпенофенолов". 2004.

22. Chukicheva I. Yu., Buravlev E.V., Spirikhin L.V. et al. Synthesis of new o-isobornylphenol derivatives // Russian Chemical Bulletin, International Edition. - 2006. - Vol.55, № 10. - P.1819-1823.

23. Ежегодник Института химии Коми НЦ УрО РАН. - Сыктывкар, 2007. - С.31, 33.

Таблица 1Снижение оптической плотности (в %) раствора ДФПГ под влиянием исследуемых соединенийИсследуемые соединенияВремя реакции, мин510152025303540455055602-метил-6-изоборнилфенол53,97±1,3341,70±0,4235,21±0,4829,12±1,9726,45±1,4224,40±0,9322,78±0,7021,54±0,6720,50±0,7119,74±0,9418,71±0,9518,15±1,114-метил-2,6-диизоборнилфенол48,71±1,7232,21±0,7223,54±0,8119,04±1,1117,09±1,7915,26±1,7413,76±1,7312,90±1,7712,39±1,7912,01±1,8311,42±1,811,13±1,782-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорид87,11±2,5778,39±2,1972,85±2,1468,10±1,4264,44±1,4461,22±1,2758,46±0,8655,99±0,8354,65±0,4553,86±1,9351,14±1,4148,22±0,07Ионол81,92±2,6071,43±2,4364,31±2,2158,31±1,6753,29±1,3648,92±1,0345,51±0,7642,47±0,6039,41±0,4936,97±0,4634,82±0,5133,01±0,79

Таблица 2Влияние однократного внутрижелудочного введения пентоксифиллина (400 мг/кг, группа I), 2-метил-6-изоборнилфенола (100 мг/кг, группа II), 4-метил-2,6-диизоборнилфенола (100 мг/кг, группа III) и 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида (100 мг/кг, группа IV) на вязкость крови до (1) и через 1 ч после инкубации при комнатной температуре (20,0±0,4°С) (2)Серия опытовВязкость крови, мПа·с5 с^-110 с^-150 с^-1100 с^-1300 с^-11212121212Контроль8,5±0,211,1±1,1^⊗7,3±0,28,6±0,4^⊗5,2±0,16,6±0,4^⊗4,7±0,15,9±0,3^⊗4,4±0,15,0±0,1^⊗Группа I7,8±0,4*8,5±0,4^⊗*6,3±0,4*7,2±0,3^⊗*4,9±0,15,5±0,1^⊗*4,6±0,15,0±0,1^⊗*4,3±0,14,6±0,1^⊗*Группа II7,4±0,3*9,3±0,5^⊗6,6±0,37,9±0,4^⊗4,9±0,25,6±0,2^⊗*4,5±0,15,3±0,2^⊗4,4±0,14,9±0,2^⊗Группа III7,3±0,3*8,3±0,3^⊗*6,6±0,2*7,4±0,3*4,9±0,15,5±0,2^⊗*4,6±0,25,1±0,1^⊗*4,4±0,14,7±0,1Группа IV7,2±0,38,3±0,4^⊗*6,6±0,37,3±0,3*4,9±0,25,4±0,2^⊗*4,6±0,14,9±0,1*4,4±0,14,7±0,1Примечание: ^⊗ - p<0,05 по сравнению с исходными значениями;* - p<0,05 по сравнению с группой контроля.

Таблица 5Влияние трехкратного внутрижелудочного введения пентоксифиллина (400 мг/кг, группа IX), 2-метил-6-изоборнилфенола (100 мг/кг, группа X), 4-метил-2,6-диизоборнилфенола (100 мг/кг, группа XI) и 2-(дибутиламино)метил-4-метал-6-изоборнилфенола гидрохлорида (100 мг/кг, группа XII) на снижение кровотока в сонной артерии в течение 90 минут и массу тромба через сутки после аппликации хлорида железаПрепаратСнижение кровотока, %Масса тромба, мгКонтроль1001,31±0,1Группа IX31±120Группа Х20±80,33±0,23*Группа XI13±90Группа XII23±60,04±0,02*Примечание: * - p<0,05 по сравнению с группой контроля.

Предложено использование 2-метил-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола или 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида в качестве средств, обладающих гемореологической, антиагрегантной и антитромбогенной активностью. Показано, что заявленные соединения ограничивали усиление агрегации эритроцитов на модели гипервязкости крови, проявляли выраженную антиагрегантную активность при АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов и снижали массу тромба на 75% или 97% по сравнению с контролем при снижении кровотока в артерии. 5 табл.

Применение 2-метил-6-изоборнилфенола, 4-метил-2,6-диизоборнилфенола или 2-(дибутиламино)метил-4-метил-6-изоборнилфенола гидрохлорида в качестве средств, обладающих гемореологической, антиагрегантной и антитромбогенной активностью.