ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 2012 года по МПК A61K38/05 A61K31/4704 A61P31/12 

Заявляемое изобретение относится к медицине, а именно к лекарственным препаратам на основе пептидов, и, в частности, к препаратам, используемым при лечении вирусных заболеваний, таких как грипп и острое респираторное вирусное заболевание (ОРВИ). Эти заболевания, достаточно тяжелые сами по себе (особенно грипп), часто вызывают постинфекционные осложнения, такие как пневмония, бронхиты различной этиологии, воспаление гайморовых или лобных пазух и т.д.

Известно средство для лечения гриппа и ОРВИ, которое сокращает продолжительность заболевания и снижает число постинфекционных осложнений, а именно - рекомбинантный (экзогенный) интерферон-альфа, который применяют в виде инъекций не менее 40000 единиц по 2 раза в день в течение 10 дней [Н.Г.Перминов и др. Реаферон. Кольцово, 1993, с.69-71].

Недостатком препарата является риск возникновения побочных эффектов, среди которых наиболее частыми являются озноб, лихорадка, головная боль, снижение массы тела, аллергические реакции, лейко- и тромбоцитопения. Кроме того, при назначении экзогенного интерферона существует риск формирования специфических противоинтерфероновых антител, которые могут полностью нейтрализовать введенный экзогенный препарат [Лечение интерфероном. Доклад научной группы ВОЗ. Серия технических докладов 676. Женева. 1984; Hoshino. А., et al. // Antiviral Res. 1983, vol.3. P.59-65].

Также известны химические соединения, способные индуцировать синтез эндогенного интерферона у пациента. Эти соединения - дипептиды, такие как альфа-глутамил-триптофан (α-glu-trp) и альфа-лизил-глутамин (α-lys-glu). Эндогенный интерферон более эффективен при лечении вирусных инфекций, чем экзогенный, так как введение индуктора интерферона не вызывает избыточного образования интерферона, вследствие чего отсутствуют побочные явления, связанные с возможной передозировкой, а также у пациента не образуются противоинтерфероновые антитела к постороннему интерферону. Пептидные индукторы безопасны при терапевтическом применении [Морозов В.Г. и др. Пептидные тимомиметики. СПб, «Наука», 2000, с.19, 33].

A-glu-trp способен восстанавливать показатели иммунитета, сниженные при миксовирусных (вызывающих грипп) инфекциях [Смирнов B.C., Селиванов А.А. Регуляторы в профилактике и лечении гриппа. СПб, «Наука», 196 с.]. Он обладает профилактическим эффектом, который имеет продолжительность не более 2 месяцев, после чего восприимчивость к вирусу не только восстанавливается, но может увеличиться. На фоне уже развившейся инфекции применение α-glu-trp не оказывает существенного влияния на течение и исход патологического процесса.

Дипептид γ-glu-trp по своим биологическим свойствам является близким аналогом α-glu-trp и проявляет равную с ним эффективность [Li Kam Wa T.G. et al. / Brit. J. Clin. Pharmacol., 1996, 42, p.365-370].

Дипептид α-lys-glu, содержащийся в молекуле тимозина-альфа [Caldarella J. et al. Proc. Nati. Acad. Sei. USA, 1983, 80, p.7424-7427] также обладает иммуномодулирующими свойствами.

Известна фармацевтическая композиция для парентерального введения, включающая 0,001-0,01% масс γ-glu-trp в форме ацетата и фармакологически приемлемую добавку, например 5% водный раствор глицина, 6% раствор полиглюкина в физиологическом растворе, и т.п. [RU патент №2120298, М. кл. A61K 38/05, 1998]. Указанная композиция использовалась для коррекции иммунодефицита у онкологических больных; однако при лечении вирусных заболеваний, таких как грипп и ОРВИ, она малоэффективна.

Наиболее близкой к заявляемой композиции по совокупности существенных признаков является фармацевтическая композиция «Цитовир-3», включающая 0,001-0,01% масс дипептида, а также гидрохлорид-2-бензилбензимидазол и аскорбиновую кислоту [RU патент №2165254, М. кл. A61K, 1991]. В качестве дипептида композиция содержит мононатриевую соль α-glu-trp, который вызывает индукцию эндогенного интерферона-альфа, наиболее эффективного в начале инфекционного вирусного заболевания. Гидрохлорид-2-бензилбензимидазол, являющийся коиндуктором интерферона, поддерживает иммуностимулирующую функцию α-glu-trp. Аскорбиновая кислота, взятая в количестве 0,02-0,050 г на дозу, является субстратом терминального звена митохондриального дыхательного комплекса и оптимизирует действие первых двух компонентов.

«Цитовир-3» показал свою высокую эффективность при проведении профилактических мероприятий в период эпидемий ОРВИ и гриппа [Шипицын К.С. и др. Эпидемиологические инфекционные болезни. 2010, №1, с.57-61]. Однако, если «Цитовир-3» применяют после начала клинической манифестации заболевания, его эффективность значительно ниже. Кроме того, повышенная доза аскорбиновой кислоты может провоцировать обострение гастрита и, в исключительных случаях, почечную колику у больных мочекаменной болезнью.

Технический результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в формировании продолжительной противовирусной резистентности, необходимой и достаточной для быстрой и эффективной элиминации вируса-возбудителя и устранения симптомов заболевания.

Указанный технический результат достигается тем, что фармацевтическая композиция, включающая индуктор эндогенного интерферона дипептид на основе глутаминовой кислоты и коиндуктор эндогенного интерферона, в качестве последнего содержит глицирризиновую кислоту в форме натриевой или аммонийной соли, а в качестве дипептида - дипептид, выбранный из группы, включающей α-glu-trp, γ-glu-trp и α-lys-glu, при следующем соотношении компонентов в композиции (в мг на одну дозу):

дипептид на основе   глутаминовой кислоты - 0,01-0,03 глицирризиновая кислота - 10-500.

Фармацевтическая композиция может дополнительно включать 50-500 мг/дозу фумарата или сукцината натрия, как вещества, оптимизирующего действие первых двух компонентов.

Глицирризиновая кислота C₄₂H₆₂O₁₆ представляет собой тритерпеновое соединение общей формулы

где X=Н, Na, NH₄,

выделенное из глицирризина - гликозида, полученного из корней солодки.

Глицирризиновая кислота обладает противовирусной активностью в отношении вируса герпеса и папилломы [Толстиков Г.А. и др. Солодка: биоразнообразие, химия, применение в медицине. Новосибирск, «Гео», 2007, с.305-207]. Описан также содержащий глицирризиновую кислоту лекарственный препарат «Фосфоглив», применяющийся в комплексной терапии вирусного гепатита C [Ипатова О.М. Фосфоглив: механизм действия и применение в клинике. М., 2005, 318 с.].

Известно [Utsunomiya Т. et al. Antimicrob. Agents Chemother., 1997, v.4, N3, p.551-556], что глицирризиновая кислота способна снизить заболеваемость и смертность животных, инфицированных смертельной дозой вируса гриппа; однако по нашим данным лечебная эффективность глицирризиновой кислоты, вводимой животным на фоне уже развившейся инфекции, оказалась достаточно низкой.

Соединение в одной фармацевтической композиции глицирризиновой кислоты и дипептида на основе глутаминовой кислоты, в частности альфа-глутамилтриптофана (тимогена), представлялось проблематичным по следующей причине.

Глицирризиновая кислота близка по структуре к кортикостероидам, то есть гормонам надпочечников. Тимоген является функциональным аналогом гормона тимуса. Известно, что гормоны тимуса и надпочечников находятся между собой в антагонистических отношениях. Так, на фоне введения тималина (экстракта тимуса) наблюдалось достоверное снижение концентрации кортизола [Г.М.Яковлев и др. Механизмы биорегуляции. СПб, «Наука», 1992, с.20]. Поэтому отсутствие антагонизма между указанными веществами и выраженная суммация лечебных свойств композиции, включающей эти вещества, оказались неожиданными и не вытекающими из известных свойств компонентов.

Глицирризиновая кислота плохо растворяется в воде и в желудочном соке. В силу этого ее взяли в форме тринатриевой или триаммониевой соли (их свойства идентичны), хорошо растворимых и в воде, и в желудочном соке.

Заявляемая фармацевтическая композиция предназначена для перорального употребления и может выпускаться в форме таблеток, капсул или сиропа.

Компоненты композиции не вступают в химическое взаимодействие друг с другом; композиция может быть получена смешением на обычном фармацевтическом оборудовании и таблетирована или капсулирована с последующей расфасовкой. Композиция может содержать обычные фармацевтически приемлемые добавки.

Эффективность заявляемой композиции была изучена на модели выживаемости животных, зараженных смертельной дозой вируса гриппа A/H3N2/ на фоне 5-дневного перорального введения заявляемой композиции.

В качестве животных использовались беспородные мыши-самцы массой 16-18 г, полученные из питомника «Рапполово» РАМН. Перед опытом животных выдерживали в виварии на карантине в течение одной недели. Все животные содержались на сбалансированных кормах в стандартизированном температурно-влажностном режиме.

Каждая группа животных в эксперименте составляла 30 особей.

Для моделирования экспериментальной гриппозной инфекции использовали адаптированный для мышей штамм вируса типа A/H3N2/Пуэрто-Рико-8/34, пассировавшийся на развивающихся куриных эмбрионах. Исходный титр вируса составлял 10³-10⁴ ЛД₅₀/мл. Животных заражали интраназально. Доза вируса составляла для одних групп 5 ЛД₅₀, для других 10 ЛД₅₀. В группах сравнения при заражении указанными дозами выживаемость мышей на 10-е сутки после заражения равна нулю, то есть исследуемые дозы являются смертельными.

Лечение зараженных мышей заявляемой композицией начинали через 24 часа после заражения. Композиции. Вводили внутрижелудочно с помощью специального атравматического металлического зонда в форме раствора в изотоническом растворе хлорида натрия. Доза лекарственного препарата рассчитывалась на 1 кг веса животного. Количество раствора составляло 0,2 мл. Лечение продолжали в течение пяти суток. Эффективность действия композиции оценивали по выживаемости животных на 21 сутки после заражения.

Результаты испытаний представлены в таблице. Для сравнения в таблице приведены данные об эффективности действия отдельных компонентов композиции: глицирризиновой кислоты (графа 8), α-glu-trp (графа 9) и α-lys-glu (графа 10).

В эксперименте отмечено, что в том случае, когда композиция включает дополнительно фумарат или сукцинат натрия, уровень миелопероксидазы в сыворотке крови был достоверно выше, чем у животных, получавших двухкомпонентную композицию, что свидетельствует об уменьшении выработки синглетного кислорода и вызванного им последующего повреждения клеток.

Из таблицы видно, что отдельные компоненты композиции, как глицирризиновая кислота, так и дипептиды, недостаточно или почти неэффективны при лечении животных, зараженных смертельной дозой вируса.

Лечение гриппа заявляемой композицией обеспечивает выживаемость животных даже в случае заражения дозой вируса (ЛД₅₀=10), вдвое превышающей смертельную дозу ЛД₅₀=5.

Таблица Выживаемость животных на фоне 5-дневного перорального введения заявляемой композиции Состав фармацевтической композиции, мг/доза Доза вируса, ЛД₅₀ Выживаемость на 21 сутки Графа α-glu-trp γ-glu-trp α-lys-glu Na соль глицирриз. кислоты NH4 соль глицирриз. кислоты 1 - - 0,01 - 100 5 100 10 83,3 2 - - 0,03 100 - 5 100 10 80 3 0,01 - - 10 - 5 100 10 83,3 4 - 0,01 - - 10 5 100 10 80 5 - - 0,01 - 500 5 100 10 83,3 6 0,01*       10 5 100 10 93,3 7 0,01**     10   5 100 10 90 8 - - - 100 - 5 30 10 30 9 0,01 - - - - 5 10 10 10 10 - - 0,01 - - 5 20 10 10 * Композиция включала также 500 мг фумарата натрия ** Композиция включала дополнительно 50 мг сукцината натрия

Изобретение относится к медицине и фармакологии, а именно к лекарственным препаратам на основе пептидов. Композиция включает 0,01-0,03 мг на одну терапевтическую дозу индуктора эндогенного интерферона - дипептида глутаминовой кислоты, выбранного из группы, включающей альфа-глутамилтриптофан, гамма-глутамилтриптофан и альфа-лизилглутамин. Композиция также содержит коиндуктор эндогенного интерферона - глицирризиновую кислоту, взятую в форме натриевой или аммонийной соли в количестве 50-500 мг на одну дозу. Изобретение обеспечивает формирование продолжительной противовирусной резистентности, необходимой для быстрой и эффективной элиминации вируса-возбудителя и устранения симптомов заболевания. 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Фармацевтическая композиция для лечения вирусных заболеваний, включающая индуктор эндогенного интерферона дипептид на основе глутаминовой кислоты и коиндуктор эндогенного интерферона, отличающаяся тем, что в качестве коиндуктора эндогенного интерферона она содержит глицирризиновую кислоту в форме натриевой или аммонийной соли, а в качестве дипептида - дипептид, выбранный из группы, включающей альфа-глутамилтриптофан, гамма-глутамилтриптофан и альфа-лизилглутамин при следующем соотношении компонентов (в мг на одну дозу):
дипептид на основе глутаминовой кислоты 0,01-0,03 глицирризиновая кислота 10,0-500,0

2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит фумарат натрия в количестве 50-500 мг на одну дозу.

3. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит сукцинат натрия в количестве 50-500 мг на одну дозу.