Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, может быть использовано при разработке средств специфической профилактики и, в частности, для получения вакцины против бешенства животных.
Одним из наиболее важных факторов борьбы с бешенством является оральная вакцинация диких плотоядных, являющихся природным резервуаром болезни.
Известен способ получения антирабической вакцины, согласно которому репродуцированный в роллерном монослое культуры перевиваемых клеток ВНК-21 вирус бешенства подвергают термической обработке до сохранения им в обрабатываемой популяции 0,001-0,0001% интрацеребральных мышиных ЛД50, затем термообработанный вирус вновь размножают в названной клеточной системе и полученную вируссодержащую культуральную жидкость используют в качестве производственного посевного материала для заражения производственной роллерной расплодки клеток ВНК-21. Инфицированные клетки производственной расплодки вновь высевают на примерно учетверенное количество бутылей, где они культивируются в течение 5-6 суток, с проведением трех сборов вируссодержащей культуральной жидкости, пригодной для изготовления сухих и жидких антирабических вакцин с иммуногенностью 2,3-2,5 МЕ/мл. Этот способ исключает возможность включения в состав конечного продукта мозговой ткани овец и, следовательно, возбудителя скрейпи. Этим он выгодно отличается от предыдущего аналога (патент РФ 2191600, зарегистрирован 27 октября 2002 г.).
Недостатком аналога является сложность процесса получения целевого продукта, поскольку промышленная реализация сопровождается очень трудоемкими и многочисленными операциями, связанными с раздельным получением вирусного и клеточного производственного посевного материала в роллерных бутылях, а также с мойкой и подготовкой большого количества сосудов культивирования и индивидуальной боксовой работой с каждым из них. Многократное манипулирование с бутылями, содержащими незараженные клетки и клетки, инфицированные вирусом бешенства, увеличивает вероятность бактериального загрязнения вакцинного сырья и обусловливает необходимость тщательного контроля каждого сбора вируса из каждого сосуда культивирования. Все это приводит к удорожанию конечного продукта и затрудняет производство препарата на должном качественном уровне, в необходимых для ветеринарной практики количествах.
Известен также способ получения антирабической вакцины для животных, включающий приготовление посевного материала из штамма вируса бешенства, инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей жидкости с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме (патент РФ №2287343, «Способ получения антирабической вакцины», бюл. №26, 31.05.2005, МКИ А61K 39/205).
Наиболее близким техническим решением является вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающая вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток и пищевые и формообразующие компоненты (патент РФ 2311924, МКИ А61K 39/205, бюл. 16, 2007.12.10), в частности, содержит лиофилизированный вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства с защитными компонентами, молоко сухое обезжиренное, лактозу, порошок яичный, мел тонкодисперсный Т-60, мел тонкодисперсный Т-90 и стеарат кальция при определенном соотношении компонентов.
Недостатки этого технического решения состоят в том, что полученная вакцина имеет низкое качество целевого продукта, выявляемое при оральном введении животным, обладает низкой иммуногенностью, обуславливающей не высокую защиту организма диких животных. Она не является гомогенной, брикеты не стандартизованы, не устойчивы к воздействию влаги и могут крошиться при хранении.
Технический результат от использования изобретения заключается в повышении эффективности за счет увеличения антигенной и иммуногенной активности и безвредности вакцины.
Поставленная задача достигается тем, что вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающая вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток и пищевые и формообразующие компоненты, отличается тем, что содержит в качестве вакцинного штамма культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU50/см3, в качестве пищевых и формообразующих компонентов содержит рыбную муку, говяжий жир, парафин или пищевой полимер и неочищенное зерно хлебных злаков, дополнительно содержит маркер-тетрациклин, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Поставленная задача достигается также тем, что вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.1, отличается тем, что в качестве авирулентного штамма вируса бешенства содержится авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 или ERA G333.
Поставленная задача достигается также тем, что в вакцине против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных в качестве неочищенного зерна хлебных злаков содержится зерно пшеницы, ржи, ячменя, овса.
Поставленная задача достигается также тем, что в вакцине против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных в качестве пищевого полимера содержится коллаген или крахмал или целлюлоза.
Поставленная задача достигается также тем, что в способе получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающем вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток, и пищевые и формообразующие компоненты, вакцинный штамм вируса бешенства выращивают в перевиваемых монослойно-суспензионных сублиниях клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/13-02 или почки сайги, полученную культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU50/см3, замораживают при минус 20-40°С, далее тетрациклин, парафин, неочищенное зерно хлебных злаков, рыбную муку, говяжий жир перемешивают в течение 25-30 минут при температуре 55-60°С, полученную массу разливают в пластиковые формы при температуре 40-45°С, в каждую ячейку формы помещают культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, и замораживают при температуре минус 20-40°С.
Поставленная задача достигается также тем, что в способе получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, помещают в контейнеры.
Поставленная задача достигается также тем, что в способе получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных в качестве контейнера для культуральной жидкости, содержащего авирулентный штамм вируса бешенства, используют пакеты из полиэтилена или блистеры из желатина.
Тетрациклин (химическое название [4S-(4альфа,4а альфа,5а альфа,6бета,12а альфа)]-4-(Диметиламино)-1,4,4а,5,5а,6,11,12а-октагидро-3,6,10,12,12а-пентагидрокси-6-метил-1,11-диоксо-2-нафтаценкарбоксамид (и в виде гидрохлорида или тригидрата) /Брутто-формула C22H24N2O8/) - антибактериальное вещество широкого спектра, бактериостатическое. Нарушает образование комплекса между транспортной РНК и рибосомой, что приводит к нарушению синтеза белка. Активен в отношении грамотрицательных бактерий. Используется в предложении в качестве маркера (при заглатывании вакцины тетрациклин накапливается в зубах животных и по его количеству определяют, какое количество вакцины потребляло животное).
Известно использование перевиваемой монослойно-суспензионной сублинии клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/13-02 для изготовления противовирусных вакцин против ящура и бешенства (патент РФ №2300562, МКИ C12N 5/06, бюл. №, 2007.06.10)
Известно использование клеток почки сайги для культивирования вируса ящура (патент РФ №2311924, МКИ А61K 39/205, Бюл. №16, 2007.12.10), однако нет сведений о возможности культивирования на них вируса бешенства РВ-97 или ERA G333.
Использование неочищенного зерна хлебных злаков позволяет нарушать целостность слизистой ротовой полости животных, что увеличивает эффект их вакцинирования.
В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие признаки, аналогичные заявляемым, т.е. предложение соответствует критерию «новизна».
Предложение осуществимо в лабораторных и промышленных условиях, направлено на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».
Изобретение иллюстрируется на следующих примерах.
Пример 1
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 6,0 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 30-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1×105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 30-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 lg FFU50/см3, которую замораживают при температуре минус 20°С по 1 г. Далее смешивают: 0,3 г тетрациклина, 5 г парафина, 5 г неочищенного овса, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 lg FFU50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 2
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 7,0 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 30 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 lg FFU50/см3, которую замораживают при температуре минус 40°С по 4 г. Далее смешивают: 1,2 г тетрациклина, 10 г парафина, 15 г неочищенного овса, 40 г рыбной муки и 29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 lg FFU50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 3
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 6,3 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 40-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1×105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU50/см3, которую замораживают при температуре минус 20°С по 1 г. Далее смешивают: 0,3 г тетрациклина, 5 г парафина, 5 г неочищенного зерна пшеницы, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 4
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 7,0 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 30-100 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1×105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU50/см3, которую замораживают при температуре минус 40°С по 4 г. Далее смешивают: 1,2 г тетрациклина, 10 г парафина, 15 г неочищенного зерна пшеницы, 40 г рыбной муки и 29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 5
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 6,3 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1×105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 lg FFU50/см3, которую замораживают при температуре минус 20 С по 1 г. Далее смешивают: 0,3 г тетрациклина, 5 г коллагена, 5 г неочищенного зерна ржи, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 lg FFU50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 6
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 7,0 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1×105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 lg FFU50/см3, которую замораживают при температуре минус 40°С по 4 г. Далее смешивают: 1,2 г тетрациклина, 10 г коллагена, 15 г неочищенного зерна ржи, 40 г рыбной муки и 29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 lg FFU50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 7
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 6,3 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1×105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU50/см3, которую замораживают при температуре минус 20°С по 1 г. Далее смешивают: 0,3 г тетрациклина, 5 г крахмала, 5 г неочищенного зерна ячменя, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 8
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 7,0 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU50/см3, которую замораживают при температуре минус 40°С по 4 г. Далее смешивают: 1,2 г тетрациклина, 10 г крахмала, 15 г неочищенного зерна ячменя, 40 г рыбной муки и 29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°C, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 9
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 6,3 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1×105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU50/см3, которую замораживают при температуре минус 20°С по 1 г. Далее смешивают: 0,3 г тетрациклина, 5 г целлюлозы, 5 г неочищенного зерна ячменя, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 10
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 7,0 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1×105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU50/см3, которую замораживают при температуре минус 40°С по 4 г. Далее смешивают: 1,2 г тетрациклина, 10 г целлюлозы, 15 г неочищенного зерна ячменя, 40 г рыбной муки и 29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 11
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 6,3 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость - вируссодержащий материал с содержанием авирулентного штамма вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 lg FFU50/см3, который разливают в контейнеры - полиэтиленовые пакетики, по 1 г и замораживают при температуре минус 20°С. Далее смешивают: 0,3 кг тетрациклина, 5 кг парафина, 5 кг неочищенного овса, 30 кг рыбной муки и 58,7 кг говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С. На металлические столы помещают формы пластиковые для розлива массы и наполняют их по 99 г в каждую ячейку формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно) помещают контейнер (полиэтиленовый пакетик) с замороженным вируссодержащим материалом массой 1 г и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты пищевой массой. Заполненную форму по транспортерной ленте помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 12
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 7,0 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1×105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость - вируссодержащий материал с содержанием авирулентного штамма вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 lg FFU50/см3, который разливают в контейнеры - полиэтиленовые пакетики, по 4 г и замораживают при температуре минус 40°С. Далее смешивают: 1,2 кг тетрациклина, 10 кг парафина, 15 кг неочищенного овса, 40 кг рыбной муки и 29,8 кг говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С. На металлические столы помещают формы пластиковые для розлива полученной смеси по 96 г в каждую ячейку формы и распределяют ее шпателем по всей площади формы так, чтобы все ячейки формы были заполнены массой. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно) помещают контейнер (полиэтиленовый пакетик) с замороженным вируссодержащим материалом массой 4 г и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты пищевой массой. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно) помещают контейнер с замороженным вируссодержащим материалом и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты массой для приманок. Заполненную форму по транспортерной ленте помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 13
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 6,3 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1×105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость - вируссодержащий материал с содержанием авирулентного штамма вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU50/см3, который разливают в контейнеры - желатиновые блистеры, по 1 г и замораживают при температуре минус 20°С. Далее смешивают: 0,3 кг тетрациклина, 5 кг парафина, 5 кг неочищенного овса, 30 кг рыбной муки и 58,7 кг говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С. На металлические столы помещают формы пластиковые для розлива массы и наполняют их по 99 г в каждую ячейку формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно) помещают контейнер (желатиновый блистер) с замороженным вируссодержащим материалом массой 1 г и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты пищевой массой. Заполненную форму по транспортерной ленте помещают морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 14
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 7,0 lg FFU50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1×105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.
Получена культуральная жидкость - вируссодержащий материал с содержанием авирулентного штамма вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU50/см3, который разливают в контейнеры - желатиновые блистеры, по 4 г и замораживают при температуре минус 40°С. Далее смешивают: 1,2 кг тетрациклина, 10 кг парафина, 15 кг неочищенного овса, 40 кг рыбной муки и 29,8 кг говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С. На металлические столы помещают формы пластиковые для розлива массы и наполняют их по 96 г в каждую ячейку формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно) помещают контейнер (желатиновый блистер) с замороженным вируссодержащим материалом массой 4 г и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты пищевой массой. Заполненную форму по транспортерной ленте помещают морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Готовые вакцины, полученные по примерам 1-14, испытывают на прочность (при свободном падении с высоты 10 м вакцина оставалась целой), влагоустойчивость в деминерализованной воде (при экспозиции в течение 24 часов при 20°С вакцина сохраняла форму), контаминацию грибной и бактериальной микрофлорой (количество микробных тел в 1 см3 приманки не превышает 500), стабильность вируссодержащего материала (инфекционная активность вакцинного вируса, помещенного в приманки, не изменялась в течение 15 дней при температуре 4°С и в течение 10 дней при 20°С), безвредность (пятикратные дозы, скормленные 6-месячным щенкам лис, не вызывали видимых клинических изменений в течение 60 суток, интрацеребральное введение 6,0 lg FFU50/см3 5 лисам и 5 песцам не вызывало клинических признаков бешенства, и все животные оставались клинически здоровыми в течение 90 дней). Через 60 суток после иммунизации 7 из 11 лис, иммунизированных 1 дозой вакцины, имели титры вируснейтрализующих антител выше минимально допустимого предела в 0,5 ME, и 10 из 11 лис (91%) выжили после контрольного заражения вирулентным вирусом бешенства.
Вакцина для орального применения сохраняла свои иммунобиологические характеристики в течение 6 месяцев при минус 20°С.
Представленные данные показывают, что предлагаемая технология изготовления предлагаемой вакцины позволяет получить безвредную и стабильную вакцину против бешенства с высокой иммунологической эффективностью при оральной иммунизации плотоядных животных, обладающую привлекательностью для диких плотоядных животных и высокой поедаемостью.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| АНТИРАБИЧЕСКАЯ ВАКЦИНА ДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОЙ ИММУНИЗАЦИИ ДИКИХ И БРОДЯЧИХ ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЕЕ | 2014 |
|
RU2563542C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ | 2005 |
|
RU2287343C1 |
| Ассоциированная вакцина против чумы плотоядных, парвовирусного и коронавирусного энтеритов, аденовирусной инфекции и бешенства собак | 2023 |
|
RU2817255C1 |
| Ассоциированная вакцина против чумы плотоядных, парвовирусного и коронавирусного энтеритов, аденовирусной инфекции собак | 2022 |
|
RU2806164C1 |
| ШТАММ ВИРУСА VIRUS DISTEMPER CANIS "ВЛАДИМИР" ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ И ВАКЦИНЫ "ВЛАДИВАК" ПРОТИВ ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ПЛОТОЯДНЫХ НА ЕГО ОСНОВЕ | 1998 |
|
RU2147441C1 |
| СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВИРУСВАКЦИНЫ ПРОТИВ БЕШЕНСТВА ДЛЯ ОРАЛЬНОЙ ИММУНИЗАЦИИ ДИКИХ ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ | 2003 |
|
RU2250781C2 |
| Вакцина антирабическая инактивированная эмульсионная культуральная для профилактической иммунизации домашних плотоядных и сельскохозяйственных животных | 2019 |
|
RU2722868C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ВИРУСА БЕШЕНСТВА | 2023 |
|
RU2816765C1 |
| ВАКЦИНА ПРОТИВ ЧУМЫ, АДЕНОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ, ПАРВОВИРУСНОГО И КОРОНАВИРУСНОГО ЭНТЕРИТОВ, ЛЕПТОСПИРОЗА И БЕШЕНСТВА СОБАК | 2013 |
|
RU2546247C2 |
| ПРИМАНКА ДЛЯ ОРАЛЬНОЙ ИММУНИЗАЦИИ ДИКИХ ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРОТИВ БЕШЕНСТВА | 2019 |
|
RU2704970C1 |
Группа изобретений относится к области ветеринарной вирусологии. Вакцина включает вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток, и пищевые и формообразующие компоненты. При этом вакцина содержит в качестве вакцинного штамма культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU50/см3. В качестве пищевых и формообразующих компонентов вакцина содержит рыбную муку, говяжий жир, парафин или пищевой полимер и неочищенное зерно хлебных злаков, дополнительно содержит маркер-тетрациклин, при следующем соотношении компонентов, мас.%: культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU50/см3, - 1,0-4,0, тетрациклин - 0,3-1,2, парафин или пищевой полимер - 5,0-10,0, неочищенное зерно хлебных злаков - 5,0-15,0, рыбная мука - 30,0-40,0, говяжий жир - остальное. Способ получения вакцины заключается в том, что вакцинный штамм вируса бешенства выращивают в перевиваемых монослойно-суспензионных сублиниях клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/13-02 или почки сайги. Полученную культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU50/см3, замораживают при минус 20-40°С. Далее тетрациклин, парафин, неочищенное зерно хлебных злаков, рыбную муку, говяжий жир перемешивают в течение 25-30 минут при температуре 55-60°С. Полученную массу разливают в пластиковые формы при температуре 40-45°С. В каждую ячейку формы помещают культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, и замораживают при температуре минус 20-40°С. Вакцина обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью, безвредна, стабильна при хранении, привлекательна для диких плотоядных животных. 2 н. и 5 з.п. ф-лы.
1. Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающая вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток, и пищевые и формообразующие компоненты, отличающаяся тем, что содержит в качестве вакцинного штамма культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU50/см3, в качестве пищевых и формообразующих компонентов содержит рыбную муку, говяжий жир, парафин или пищевой полимер и неочищенное зерно хлебных злаков, дополнительно содержит маркер - тетрациклин при следующем соотношении компонентов, мас.%:
2. Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.1, отличающаяся тем, что в качестве авирулентного штамма вируса бешенства содержится авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 или ERA G333.
3. Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.1, отличающаяся тем, что в качестве неочищенного зерна хлебных злаков содержится зерно пшеницы, ржи, ячменя, овса.
4. Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.1, отличающаяся тем, что в качестве пищевого полимера содержит коллаген, или крахмал, или целлюлозу.
5. Способ получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающий вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток, и пищевые и формообразующие компоненты, отличающийся тем, что вакцинный штамм вируса бешенства выращивают в перевиваемых монослойно-суспензионных сублиниях клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/13-02 или почки сайги, полученную культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU50/см3, замораживают при минус 20-40°С, далее тетрациклин, парафин, неочищенное зерно хлебных злаков, рыбную муку, говяжий жир перемешивают в течение 25-30 мин при температуре 55-60°С, полученную массу разливают в пластиковые формы при температуре 40-45°С, в каждую ячейку формы помещают культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, и замораживают при температуре минус 20-40°С.
6. Способ получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.5, отличающийся тем, что культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, помещают в контейнеры.
7. Способ получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.6, отличающийся тем, что в качестве контейнера для культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства, используют пакеты из полиэтилена или блистеры из желатина.
| ВИРУС-ВАКЦИНА ПРОТИВ БЕШЕНСТВА ДЛЯ ОРАЛЬНОЙ ИММУНИЗАЦИИ ДИКИХ ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ЕЕ ИЗГОТОВЛЕНИЯ | 2005 |
|
RU2311924C2 |
| СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВИРУСВАКЦИНЫ ПРОТИВ БЕШЕНСТВА ДЛЯ ОРАЛЬНОЙ ИММУНИЗАЦИИ ДИКИХ ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ | 2003 |
|
RU2250781C2 |
| US 4014991 A, 29.03.1977 | |||
| СПОСОБ УСКОРЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА АЗОТА В СТАЛЯХ | 1954 |
|
SU100752A1 |
| CN 101757619 A, 30.06.2010. | |||
