СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СОПУТСТВУЮЩЕЙ ОПИСТОРХОЗНОЙ ИНВАЗИИ У БОЛЬНЫХ С ЦИРРОЗОМ ПЕЧЕНИ Российский патент 2012 года по МПК G01N33/50 G01N33/52 G01N33/49 

Изобретение относится к области медицины, в частности паразитологии, и может быть использовано для диагностики описторхоза.

В настоящее время вследствие значительного распространения описторхозной инвазии в Сибири (90-100% взрослого населения) и преимущественного поражения паразитами гепатобилиарной системы крайне актуальной становится проблема диагностики сочетанного поражения печени: вирусами гепатитов, особенно в стадии цирроза печени, с данным гельминтозом [1, 2, 5].

Как правило, в данной ситуации необходима не только диагностика цирроза печени и его этиологии, но и дополнительная диагностика сопутствующей описторхозной инвазии [1, 2. 7].

Известен способ диагностики описторхоза, включающий забор кала, анализ его на содержание яиц гельминта методом Калантаряна и методом толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като. Недостатком известного способа является трудоемкость, невозможность установления инвазии в острой стадии болезни, недостаточная эффективность [1, 2, 5].

Известен также способ диагностики описторхоза, включающий дуоденальное зондирование, определение в дуоденальном содержимом яиц гельминта. Недостатком известного способа является его техническая сложность, инвазивность, неудобство для пациента, невозможность установления инвазии в острой стадии болезни. Кроме того, пациентам с циррозом печени в стадии суб- и декомпенсации по Чайлд-Пью данная процедура противопоказана в связи с высоким риском возникновения кровотечения из варикозно расширенных вен пищевода [2, 5, 6, 7].

Наиболее близким к предлагаемому (прототип) [8] является способ диагностики описторхоза, включающий забор крови из пальца пациента, получение сыворотки крови, определение реакции сыворотки крови на антиген, выделенный из возбудители описторхоза Opisthorchis felineus, определение острой или хронической стадии болезни.

Недостатком известного способа является его недостаточная эффективность при диагностике хронической стадии заболевания (60-70%). Отчасти недостаточная эффективность обусловлена зависимостью результатов диагностики от иммунного статуса больного - способ менее эффективен у лиц с иммунодефицитами различной этиологии [3, 4, 8].

Задача изобретения - повышение точности диагностики сопутствующей описторхозной инвазии у пациентов с циррозом печени.

Для решения поставленной задачи в способе диагностики сопутствующей описторхозной инвазии у больных с циррозом печени в одном и том же образце сыворотке крови определяют показатели коагуляционного гемостаза такие, как антитромбин-III и фактор Виллебранда.

Для пациентов с циррозом печени при наличии сопутствующей описторхозной инвазии характерны следующие одновременные значения показателей: антитромбин-III - 50-75%, фактор Виллебранда - 140-160%.

У больных с циррозом печени без хронического описторхоза определяются: антитромбин-III более 75%, фактор Виллебранда более 160%.

Новыми, ранее неизвестными признаками заявленного способа диагностики сопутствующей описторхозной инвазии у больных циррозом печени являются:

1. использование комбинации показателей лабораторных тестов, одновременное изменение каждого из которых характерно для поражения печени описторхами у больных циррозом печени;

2. разработаны и предложены уровни одновременного содержания показателей коагуляционного гемостаза, при которых диагностируют сопутствующую описторхозную инвазию у больных циррозом печени.

Значения показателей подобраны опытным путем.

В настоящее время установлено, что печень активно участвует в гемостазе, в ней синтезируются многие факторы свертывания и фибринолиза, в том числе и антитромбин-III. Самостоятельное значение при болезнях печени имеет количественное определение фактора Виллебранда, уровень которого в плазме при тяжелых токсических и некротических поражениях этого органа резко возрастает - до 300-900% нормы и более [6, 7].

Белоксинтезирующая функция печени при хроническом описторхозе согласно данным большинства авторов также часто бывает нарушена. Основными факторами в развитии гипопротеинемии при хроническом описторхозе являются ассоциированные вирусные инфекции (гепатиты B и C). Исследование функционального состояния печени показало большее его нарушение у больных с вирусным гепатитом в сочетании с описторхозом, чем при изолированных моноинфекциях. Тяжело протекающий описторхоз осложняет течение вирусного гепатита и даже иногда играет определенную роль в неблагоприятном исходе. Поэтому изменения показателей системы гемостаза, таких как антитромбин-III, более выражены у пациентов с циррозом печени и сопутствующей описторхозной инвазией [1, 2, 5].

Существенные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники и неочевидные для специалиста. Идентичной совокупности признаков в проанализированной научно-медицинской и патентной литературе не обнаружено. Предлагаемый в качестве изобретения способ может быть широко использован в практическом здравоохранении для повышения точности диагностики и качества лечения.

Исходя из вышеизложенного следует считать предлагаемый способ соответствующим условиям патентоспособности "Новизна", "Изобретательский уровень", "Промышленная применимость".

Способ осуществляется следующим образом:

Забор венозной крови у больных проводили однократно натощак в объеме 10 мл.

Уровень антитромбина-III в сыворотке крови определяют с использованием хромогенного субстрата. Принцип определения антитромбина-III основан на его способности в разведенной исследуемой плазме в присутствии гепарина быстро инактивировать тромбин. Остаточная активность тромбина определяется по скорости гидролиза хромогенного субстрата фотометрически. Регистрировали изменение оптической плотности на биохимическом фотометре при длине волны 405 нм после добавления уксусной кислоты. Перед проведением анализа исследуемую плазму разводили, смешивая в пробирке 0,05 мл плазмы с 3,0 мл физиологического раствора хлорида натрия и 0,05 мл буфера. Результаты анализа выражали в процентах к норме.

Определение активности фактора Виллебранда в исследуемом образце оценивалось путем исследования агрегации тромбоцитов с помощью двухканального лазерного анализатора Биола LA 220 (Россия). Агрегация тромбоцитов представляет собой простой лабораторный тест, в котором конгломерация одиночных тромбоцитов в группы или агрегаты большого размера определяется количественно по степени пропускания света через тромбоцитсодержащую плазму. Тромбоцитарный агрегометр состоит из небольшой прозрачной кюветы, в которую помещают пробу тромбоцитов пациента в стандартной концентрации. Через кювету пропускают свет от калиброванного источника, поступающий на фотоэлемент. Фотоэлемент связан с регистрирующим устройством, измеряющим светопрохождение (или оптическую плотность) с учетом времени. Если тромбоциты представляют собой суспензию (т.е. до агрегации), то пропускание света минимально. С увеличением агрегации плазма, содержащая тромбоциты, становится все светлее, а пропускание света возрастает. Использовали 25 мкл исследуемой плазмы, формализованные тромбоциты и ристомицин в качестве индуктора агрегации. Величину агрегатов и светопропускания регистрировали в течение 5-15 минут, в зависимости от времени агглютинации тромбоцитов. Процентное содержание фактора Виллебранда в исследуемой плазме определяли по максимальной скорости агрегации с помощью калибровочного графика.

Критерии включения:

1. Мужчины и женщины от 25 до 65 лет (50 человек) с подтвержденным диагнозом цирроза печени с помощью инструментальных методов исследования (ультразвуковое исследование органов брюшной полости, эзофагогастродуоденоскопия, статическая сцинтиграфия печени);

2. определение антигенов вирусов и антитела к ним методом иммуноферментного анализа (ИФА); рибонуклеиновой (РНК) и дезоксирибонуклеиновой (ДНК) кислоты вирусов гепатитов B (HBV) и C (HCV) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР);

3. проведение 3-кратного копроовоскопического исследования кала для выявления сопутствующей описторхозной инвазии.

Критерии исключения:

1. Пациенты с сопутствующей очаговой патологией печени не вирусного генеза.

2. Пациенты с декомпенсированными сердечно-сосудистыми заболеваниями, онкологическими заболеваниями внепеченочной локализации.

3. Пациенты в стадии декомпенсации цирроза печени.

Пример №1. Больная З., 55 лет, направлена в инфекционное отделение с диагнозом: цирроз печени вирусной этиологии (HBV), стадия компенсации. Диагноз подтверждался данными ультразвукового исследования (УЗИ), гепатосцинтиграфии. В крови были обнаружены маркеры вирусного гепатита B (HbS антиген и антитела), а также выявлена положительная ПЦР к данному вирусу. Пациентка ранее на хронический описторхоз не обследовалась, речную рыбу употребляет редко и в малом количестве. Тем не менее, при копроовоскопическом исследовании выявлены яйца Opisthorchis felineus. Показатели коагулограммы: антитромбин-III равен 62%, фактор Виллебранда - 149%.

В данном клиническом случае проведенное исследование показателей плазменного гемостаза выявило их соответствие таковым у больных циррозом печени с сопутствующей описторхозной инвазией, что дополнило выставленный ранее диагноз.

Пример №2. Больной Д., 48 лет, поступил в инфекционное отделение с диагнозом цирроза печени неуточненной этиологии. При обследовании пациента (УЗИ органов брюшной полости, статическая гепатосцинтиграфия, ИФА на маркеры вирусных гепатитов, ПЦР) был диагностирован цирроз печени вирусной этиологии HCV в стадии субкомпенсации. Пациент отрицает наличие хронической описторхозной инвазии в анамнезе, но является жителем сельской местности и любителем рыбалки. При обследовании 3-кратно копроовоскопическим методом данных за хронический описторхоз не обнаружено. При исследовании свертывающей системы крови выявлены следующие результаты: антитромбин-III равен 82%, фактор Виллебранда - 197%. Таким образом, данные развернутой коагулограммы не противоречили полученным ранее клиническим и параклиническим данным.

Способ разработан на основе определения в одном и том же образце сыворотки крови уровня таких показателей коагуляционного гемостаза, как антитромбин-III и фактор Виллебранда, у больных циррозами печени с сопутствующей описторхозной инвазией и сравнения их с показателями аналогичных фракций у пациентов с циррозом печени без описторхозной инвазии. Данные по содержанию показателей в сыворотке крови получены от 17 больных с циррозом печени и сопутствующим хроническим описторхозом и 33 пациентов с циррозом без хронического описторхоза. Результаты исследования изложены в таблице 1.

Таблица 1 Вид цирроза печени (ЦП) Антитромбин-III (75-140%) Фактор Виллебранда (75-140%) ЦП с хроническим описторхозом 50-75 140-160 ЦП без хронического описторхоза >75 >160

Техническим результатом является: расширение арсенала способов, повышение точности, а также обеспечение неинвазивности диагностики сопутствующей описторхозной инвазии у больных с циррозом печени.

Таким образом, заявляемый способ диагностики прост в исполнении, не обладает токсическим действием на пациента, является неинвазивным. Данный способ диагностики с высокой точностью позволяет диагностировать сложное сочетанное поражение печени, а именно цирроза печени и хронического описторхоза, с которым приходится сталкиваться на практике наиболее часто, учитывая, что Сибирь является эндемическим районом по данному гельминтозу. Комбинированное воздействие вирусной инфекции и паразитарной инвазии неизбежно приводит к более тяжелому течению болезни, требует отличных подходов к лечению и организации жизни больного. Путем рекомендаций по прекращению употребления речной рыбы и проведения плановой дегельментизации врач имеет возможность удалить хронический описторхоз как один из важных факторов в развитии цирроза печени, и, таким образом, продлить жизнь пациенту.

Источники информации

1. Белозеров Е.C., Шувалова Е.П. Описторхоз. Л.: Медицина, 1981, с.89-102.

2. Яблоков Д.Д. Описторхоз человека. Томск: издательство Томского университета, 1979, с.38-95.

3. Клебановская И.А., Старостина О.Ю., Баллад Н.Е., Иващенко Е.А. Иммуноферментный тест в диагностике описторхоза и сероэпидемиологических исследованиях. Медицинская паразитология, 1990, N6, с.45-47.

4. Менявцева Т.А., Ратнер Г.М., Колмакова М.В. с соавт. Диагностика острого и хронического описторхоза методом твердофазного ИФА. Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии, 1995, №1, с.48.

5. Лепехин А.В., Мефодьев В.В., Филатов В.Г., Бужак Н.С. Эпидемиология, клиника и профилактика описторхоза. Томск: издательство Томского университета, 1992, с.121-148.

6. Майер Г.П. Гепатит и последствия гепатита. М.: ГЭОТАР-Медицина, 2004, с.491-503.

7. Сорисон С.Н. Вирусные гепатиты. СПб.: Медицина, 1998, с 128-133.

8. Патент РФ №2143838: Способ диагностики описторхоза и средство его осуществления, Дарянина С.А, Дедкова Л.М., опубл. 01.2000, бюллетень №6, 2003.

Изобретение относится к области медицины, в частности паразитологии, и может быть использовано для диагностики описторхоза у больных циррозом печени. Сущность способа заключается в том, что в одном и том же образце сыворотки крови определяют показатели коагуляционного гемостаза, такие как антитромбин-III и фактор Виллебранда. При выявлении антитромбина-III - 50-75% и фактора Виллебранда - 140-160% диагностируют сопутствующий хронический описторхоз у больных циррозом печени. При выявлении антитромбина-III более 75% и фактора Виллебранда более 160% диагностируют цирроз печени без сопутствующей описторхозной инвазии. Использование способа позволяет с высокой точностью диагностировать сложное сочетанное поражение печени, а именно цирроза печени и хронического описторхоза. 1 табл.

Способ диагностики сопутствующей описторхозной инвазии у больных циррозом печени путем исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что в одном и том же образце сыворотки крови дополнительно определяют значение уровня антитромбина-III и фактора Виллебранда и при одновременном значении этих показателей: уровня антитромбина-III 50-75%, фактора Виллебранда 140-160% выявляют у пациента с циррозом печени сопутствующий хронический описторхоз, а при значении уровня антитромбина-III более 75%, фактора Виллебранда более 160% диагностируют у больного цирроз печени без сопутствующей описторхозной инвазии.