СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ СЪЕДОБНЫХ ГРИБОВ ИЗ РОДА PLEUROTUS Российский патент 2012 года по МПК C12N1/16 C12N1/14 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для выращивания съедобных грибов.

Предшествующий уровень техники

Известны способы культивирования видов рода вешенка на субстратах растительного происхождения. Традиционно компонентами таких субстратов являются отходы лесного и сельского хозяйства, легкой и пищевой промышленности: подсолнечная лузга, солома злаков, солома бобовых, опилки и щепа лиственных пород деревьев, очесы хлопка, отходы кофе, отходы сахарного тростника (Poppe J. Use of agricultural waste materials in the cultivation of mushrooms. // Science and cultivation of edible fungi. Van Griensven (ed.) Balkema, Rotterdam, 2000; Stamets P. Growing Gourmet and Medicinal Mushrooms. Third Edition. Ten Speed Press, Berceley. Toronto, 2000. - 574 p.). Однако субстраты растительного происхождения, в частности древесины, бедны питательными веществами, особенно азотом, и поэтому мицелий гриба развивается медленно, что приводит к низкой урожайности плодовых тел. Подобные субстраты зарастают мицелием две-три недели и позволяют за 40-45 суток получить от 18 до 25% грибной биомассы с единицы субстрата (Заикина Н.А., Коваленко А.Е., Галынкин В.А., Дьяков Ю.Т., Тишенков А.Д. Основы биотехнологии высших грибов. - СПб: «Проспект Науки», 2007. - 336 с.).

Для ускорения роста мицелия и повышения урожайности плодовых тел съедобных грибов растительные субстраты культивирования обогащают различными добавками, например отходами растительного и животного происхождения (пивной дробиной; пшеничными или рисовыми отрубями; соевым и подсолнечным шротом; рыбной, костной, мясокостной или кукурузной мукой), биоорганической добавкой (прототип) и другими материалами.

Известен способ выращивания съедобного гриба вешенки обыкновенной (Р. ostreatus) на субстрате, содержащем солому и лузгу в соотношении 1:1 с добавлением свежей пивной дробины в количестве 15% к массе субстрата (Оренбургский научно-исследовательский институт сельского хозяйства. Субстрат для выращивания съедобного гриба вешенки обыкновенной. 2003. RU 2204236 C2). Изобретение позволяет повысить урожай грибов вешенки обыкновенной на 69% по сравнению с контролем.

Недостатком способа является ограниченность ресурсов обогатителя в связи с использованием пивной дробины на кормовые цели в животноводстве. Пивная дробина (отход пивоваренного производства) является ограниченным источником сырья с небольшим сроком хранения (до двух суток).

Известен способ приготовления добавки для выращивания гриба вешенка, включающий приготовление смеси растительного и животного происхождения в соотношении 2:1, и после стериализации ее смешивают с зерном, который инокулируют спорами Pleurotus ostreatus и выдерживают до развития мицелия. Метод повышает выход плодовых тел на 5-10% (Стрельников В.В., Кудря A.M., Кудря А.А. Способ приготовления добавки для выращивания гриба вешенка. 2005. RU 2310317 С2).

Недостатком данного способа является ограниченное использование для культивирования вешенки обыкновенной и незначительное повышение выхода плодовых тел.

Наиболее близким аналогом к заявляемому способу является способ для выращивания гриба вешенки обыкновенной на питательной среде, содержащей отходы хвойных деревьев (опилки, стружку и кору) и биоорганическую добавку, состоящую из гидроокиси кальция и крахмала в количестве 1,0-1,5%. Питательная среда позволяет увеличить выход плодовых тел грибов, то есть урожайность на 25-30% и в 2-3 раза снизить расход мицелия (Уфимцев А.Е. Питательная среда для выращивания гриба вешенки обыкновенной (Pleurotus ostreatus). 1997. RU 2140730 C1).

Недостатком способа выращивания гриба вешенки на питательной среде, содержащей биоорганическую добавку, является трудоемкость в подготовке смеси и ограниченные возможности в ее использовании исключительно для культивирования вешенки обыкновенной. Способ обеспечивает продолжительный цикл культивирования грибов от 21 до 27 суток и прибавку урожайности плодовых тел на 25-30%.

Описываемое изобретение направлено на решение задач увеличения урожайности и сокращения продолжительности технологического процесса выращивания съедобных грибов из рода Pleurotus за счет ускоренной колонизации субстрата для плодоношения.

Сущность изобретения

Для решения поставленных задач предлагается способ выращивания съедобных грибов из рода Pleurotus, включающий приготовление субстрата на основе лузги подсолнечника, пшеничной соломы, соломы зонтичных растений, обогащенного суспензией дрожжей Cryptococcus albidus, Hanseniaspora uvarum и Saccharomyces cerevisiae, и получение плодовых тел путем посева мицелия на субстрат, причем перед посевом мицелия к субстрату плодоношения добавляют суспензию дрожжей в концентрации 10⁴-10⁷ жизнеспособных клеток в 1 мл на 100 г субстрата.

Кроме того, предлагаемый способ отработан на нескольких видах рода Pleurotus, что значительно расширяет сферу его применения в грибоводстве.

Внесение клеток дрожжей является экологически чистым и экономически выгодным способом стимуляции роста мицелия по сравнению с химическими добавками. В предлагаемом способе культивирования мицелий гриба использует дрожжевые клетки как дополнительный источник питания в течение всего цикла выгонки, т.е. в фазе вегетативного роста и в фазе плодоношения.

Способ обеспечивает сокращение сроков культивирования на неделю и увеличение урожайности на 58,8-108% к массе субстрата.

Далее настоящее изобретение иллюстрируется примерами, которые никоим образом не ограничивают области охвата настоящего изобретения и приводятся в качестве иллюстрации.

Пример 1. Получение плодовых тел гриба Pleurotus djamor сортовой штамм Santana RP на субстрате из пшеничной соломы с добавлением суспензии дрожжей на водной основе

Отход сельскохозяйственного производства пшеничную солому запаривают в кипятке на 1,5 часа, затем воду сливают и солому вносят в 9 стеклянных банок объемом 450 мл по 150 г субстрата в каждую банку (масса сухого субстрата 50 г). Банки закрывают герметичными стальными крышками с отверстием, заткнутым ватной пробкой, и автоклавируют дважды в режиме 1 атм/30 мин.

В банки вносят водную суспензию пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae штамм Moment в количестве 10 мл с титром 10⁶-10⁷ клеток в 1 мл. Суспензия готовится следующим образом: 1 г сухих дрожжей «САФ-Moment» разводят в 1 л стерильной воды. Во все банки вносится посевной материал в виде 5 г зернового мицелия Р. djamor (вешенки розовой). Зарастание субстрата происходит в термостате при 22-26°С.

На 13 сутки субстрат в банках полностью зарастает, и банки помещают в термостатируемую камеру для выгонки. Режим выгонки плодовых тел: температура 20°С, влажность 85-95%.

Средняя сырая биомасса плодовых тел в банках: 20,4±1,5 г грибов с одной банки. Урожаность плодовых тел Р. djamor в двух волнах плодоношения в образцах, выращенных с применением дрожжей, составила 81,4% (Таблица).

Пример 2. Получение плодовых тел гриба Pleurotus djamor сортовой штамм Santana RP на субстрате из подсолнечной лузги в условиях грибоводческого предприятия с добавлением суспензии дрожжей на водной основе

Отход сельскохозяйственного производства подсолнечную лузгу, предварительно запаренную в «бочке», помещают в 6 полипропиленовых пакетов по 6 кг субстрата в каждый блок. Перед помещением в блоки лузгу перемешивают в пластиковой емкости вместе с 175 мл водной суспензии клеток пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae штамм 3809 (с титром 10⁴-10⁵ клеток в 1 мл). Пакеты герметично закрывают скотчем и помещают в камеру для зарастания субстрата. Блоки инкубируют в камере в режиме влажность 60-65%, температура 16-18°С в течение 10-12 суток. Далее блоки переносят в камеру для выгонки; режим выгонки плодовых тел в камере: влажность 60-65%, температура 16-18°С.

Плодовые тела во всех блоках появлялись на 4-6 сутки после перенесения блоков в камеру для выгонки. Урожайность плодовых тел Р. djamor в образцах, выращенных с применением дрожжей, составила 70% (Таблица).

Пример 3. Получение плодовых тел гриба Pleurotus citrinopileatus сортовой штамм Santana 304P на субстрате из подсолнечной лузги с добавлением суспензии дрожжей на водной основе

Отход сельскохозяйственного производства подсолнечную лузгу запаривают в кипятке на 1,5 часа, затем воду сливают и лузгу вносят в банки объемом 450 мл по 150 г субстрата в каждую банку (масса сухого субстрата 50 г). Банки закрывают герметичными стальными крышками с отверстием, заткнутым ватной пробкой, и автоклавируют в режиме 1 атм/30 мин дважды.

В банки вносят водную суспензию дрожжей Cryptococcus albidus 1628 в количестве по 10 мл в каждую банку с титром 10⁶-10⁷ клеток в 1 мл. Суспензия готовится следующим образом: в пробирку со скошенным сусло-агаром, на котором выращены дрожжи, добавляют 10 мл стерильной воды; пробирку помещают на роторную качалку на 30 мин в режиме 200 об/мин для смыва клеток в воду. Во все банки вносится посевной материал в виде 5 г зернового мицелия Р. citrinopileatus (вешенки лимонно-шляпковой). Зарастание субстрата происходит в термостате при 22-26°С.

На 14 сутки банки помещают в термостатируемую камеру для выгонки. Режим выгонки плодовых тел: температура 20°С, влажность 85-95%.

На 6-8 сутки начинается формирование плодовых тел во всех банках. При этом с опытных банок урожай собирали на 6-8 сутки после постановки банок на выгонку. Урожайность плодовых тел Р. citrinopileatus в двух волнах плодоношения в образцах, выращенных с применением дрожжей, составила 108% (Таблица).

Пример 4. Получение плодовых тел гриба Pleurotus eryngii сортовой штамм Santana CP на субстрате из смеси подсолнечной лузги и соломы зонтичных растений 5:1 с добавлением суспензии дрожжей на водной основе

Отход сельскохозяйственного производства подсолнечную лузгу смешивают с соломой зонтичных растений в соотношении 5:1 и запаривают в кипятке на 1,5 часа, затем воду сливают и лузгу вносят в 9 стеклянных банок объемом 450 мл по 150 г субстрата в каждую банку (масса сухого субстрата 50 г). Банки закрывают герметичными стальными крышками с отверстием, заткнутым ватной пробкой, и автоклавируют дважды в режиме 1 атм/30 мин.

В банки вносят водную суспензию дрожжей Saccharomyces cerevisiae Moment в количестве по 10 мл в каждую банку с титром 10⁵-10⁶ клеток в 1 мл. Суспензия готовится следующим образом: 1 г сухих дрожжей «САФ-Moment» разводят в 1 л стерильной воды.

Во все банки вносится посевной материал в виде 5 г зернового мицелия Р. eryngii (вешенки королевской). Зарастание субстрата происходит в термостате при +22+26°С.

На 14 сутки банки помещают в термостатируемую камеру для выгонки. Режим выгонки плодовых тел: температура +20°С, влажность 85-95%.

Субстрат зарастает полностью через 12 суток в банках. На 16-22 сутки начинается формирование плодовых тел во всех банках. Средняя сырая биомасса плодовых тел в банках 29,4±5,5 г. Урожайность плодовых тел Р. eryngii в образцах, выращенных с применением дрожжей, составила 58,8% (Таблица).

Пример 5. Получение плодовых тел гриба Pleurotus ostreatus сортовой штамм НК-35 на субстрате из подсолнечной лузги с добавлением суспензии дрожжей на водной основе

Отход сельскохозяйственного производства подсолнечную лузгу запаривают в кипятке на 1,5 часа, затем воду сливают и лузгу вносят в банки объемом 450 мл по 150 г субстрата в каждую банку (масса сухого субстрата 50 г). Банки закрывают герметичными стальными крышками с отверстием, заткнутым ватной пробкой, и автоклавируют дважды в режиме 1 атм/30 мин.

В банки вносят водную суспензию дрожжей Hanseniaspora uvarum 3435 в количестве по 10 мл в, каждую банку с титром 10⁴-10⁵ клеток в 1 мл. Суспензия готовится следующим образом: в пробирку со скошенным сусло-агаром, на котором выращены дрожжи, добавляют 10 мл стерильной воды; пробирку помещают на роторную качалку на 30 мин в режиме 200 об/мин для смыва клеток в воду.

Во все банки вносится посевной материал в виде 5 г зернового мицелия Р. ostreatus (вешенки обыкновенной). Зарастание субстрата происходит в термостате при 22-26°С.

На 14 сутки банки помещают в термостатируемую камеру для выгонки. Режим выгонки плодовых тел: температура 20°С, влажность 85-95%.

На 11-13 сутки начинается формирование плодовых тел во всех банках. Средняя сырая биомасса плодовых тел в банках 36,9±3,8 г. Урожайность плодовых тел Р. ostreatus в образцах, выращенных с применением дрожжей Н. uvarum, составила 94,8% (Таблица).

Таким образом, заявляемая технология позволяет сократить продолжительность культивирования съедобных ксилотрофных грибов из рода Pleurotus и увеличить урожайность грибов.

  Влияние дрожжей на время зарастания субстрата плодоношения и урожайность видов рода Pleurotus Гриб и дрожжи Волны плодоношения Время зарастания субстрата (сутки) Масса плодовых тел с 1 банки/1 блока (г) Урожайность (в % по отношению к сухой массе субстрата) P. djamor и Saccharomyces cerevisiae (климатическая камера) 1-я волна 13 26,2±1,5   2-я волна - 14,5±1,5 81,4 Р. djamor и Saccharomyces cerevisiae 1-я волна 11 1055±145   (грибоводческое предприятие) 2-ая волна - 425±105 70 Р. citrinopileatus и Cryptococcus 1-я волна 12 37,5±6,0   albidus (климатическая камера) 2-я волна - 16,5±4,5 108 Р. eryngii и Saccharomyces         cerevisiae (климатическая камера) 1-я волна 12 29,4±5,5 58,8 Р. ostreatus и Hanseniaspora uvarum 1-я волна 11 36,9±3,8   (климатическая камера) 2-я волна - 10,5±4,5 94,8 Прототип - 14-21 - 25-30

Способ выращивания съедобных грибов Pleurotus djamor или Pleurotus citrinopileatus предусматривает приготовление субстрата на основе лузги подсолнечника или пшеничной соломы, обогащенного суспензией дрожжей Cryptococcus albidus, Hanseniaspora uvarum или Saccharomyces cerevisiae. Плодовые тела получают путем посева мицелия на субстрат. Перед посевом мицелия к субстрату плодоношения добавляют суспензию дрожжей в концентрации 10⁴-10⁷ жизнеспособных клеток в 1 мл на 100 г субстрата. Изобретение обеспечивает увеличение урожайности и сокращение продолжительности процесса выращивания съедобных грибов рода Pleurotus. Формирование плодовых тел в образцах наступает на 11-13 сутки культивирования, а урожайность плодовых тел составляет 70-108%. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Способ выращивания съедобных грибов из рода Pleurotus, включающий приготовление субстрата на основе лузги подсолнечника или пшеничной соломы, обогащенного суспензией дрожжей Cryptococcus albidus, Hanseniaspora uvarum или Saccharomyces cerevisiae, и получение плодовых тел путем посева мицелия на субстрат, причем перед посевом мицелия к субстрату плодоношения добавляют суспензию дрожжей в концентрации 10⁴-10⁷ жизнеспособных клеток в 1 мл на 100 г субстрата.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что выращивают грибы видов Pleurotus djamor или Pleurotus citrinopileatus.