Штамм соматических структур макроскопического гриба РLеURотUS оSтRеатUS (JаSт. F @ )КUммеR Советский патент 1992 года по МПК A01G1/04 

Изобретение относится к микологии и биотехнологии и может быть использовано в сельском хозяйстве, в подсобных хозяйствах предприятий ткацкой, горнодобывающей, металлургической и других отраслей промышленности.

Штамм Pleurotusostreatus -481 ВНР ВТ (1975) (Ветеринарный университет, ВНР, Будапешт). Плодовое тело - 6-11 см высотой, 3-6 см шириной, шляпка яйцевидна. Ножка 3-9 см длиной, 2-3 см толщиной, округлая, беловатая. Споры 18-20x10-12 мкм, цилиндрические, гладкие, одноклеточные. рН близок к нейтральному, оптимальная температура - 24-26°С.

Недостатками штамма являются: необходимость холодового стресса, высокая светочу вствительность. Оба эти недостатки влекут за собой повышенную энергоемкость технологии производства. Для осуществления холодового цикла в культивационном сооружении необходимо устанавливать перманентно включающиеся холодильные

агрегаты большой мощности, что технически трудно выполнимо и экономически нецелесообразно. , Для инициации плодоношения требуется освещенность в пределах 7-8 тыс. люкс, то есть светолюбив штамма сопоставимо со светолюбием овощных растений закрытого грунта, в то время, как штамм KB № 1017 способен формировать плодовые тела при освещенности 400 люкс/час, то есть требования к свету у этого штамма в 20 раз ниже, чем у известных.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является штамм макромицета Pleurotus ostreatus (Fr) Kummer ВКМР-2465Д - продуцент плодовых тел съедобных грибов на отходах лесной и лесоперерабатывающей промышленности.

Штамм ВКМГ-2465Д в интенсивном производстве не используется. Не способен плодоносить без холодового шока. Чувствителен к недостатку освещения. В качестве субстрата штамм ВКМГ-2465Д использует древесину - ценное сырье.

СП

VI ы ел

Целью изобретения явилось получение нового высокоурожайного штамма соматических структур макроскопического гриба Pleurotus ostreatus (Jasg: Fr) Kummer, отличающегося от прототипа повышенной стойкостью к неблагоприятным факторам, способностью плодоносить без холодового стресса.

Штамм вешенки обыкновенной Pleurotus ostreatus (Jasg: Fr) Kummer KB №1017 выделен из естественной популяции методом отбора с учетом показателей урожайности на отходах производства при интенсивном выращивании, габитуса плодовых тел и вкусовых качеств гриба. Штамм депонирован в коллекции Института ботаники АН УССР им. И.Г. Холодного под номером 1017.

Культуральноморфологические прмзна- ки.

От места внесения инокулюма в чашки Петри мицелий начинает распространяться равномерно, причем вначале развиваются субстратные, а затем воздушные гифы. Край колонии при рассмотрении сверху-бахромчатый. Окраска колонии семиднейной культуры на картофельно-глюкозном агаре снежно-белая, текстура ее ватная, шерстистая, высота воздушного мицелия до 3 мм, колония обладает грибным аром атом. По мере появления многочисленных пряжек и тяжей начинают формироваться примордми, обнаруживающие положительную фототропическую реакцию. Микроскопические исследования показывают, что гифы бесцветны, их апексы характеризуются гомогенной структурой протоплазмы. С возрастом в клетках мицелия появляются вакуоли и жировые включения. Ветвление гиф вначале дихотомическое, впоследствии с дифференцмров- кой клеток возникают многочисленные пряжки. Формирование примордиев сопровождается появлением желто-оранжевой окраски. Ширина гиф варьирует в пределах 3-8 мкм, длина клеток 16-80 и более мкм соответственно. Перегородки закладываются как в местах появления пряжек, так и между- клетками, не имеющими пряжки. Бесполое плодоношение представлено хламидоспорами и анаморфами. Наличие многочисленных анаморф является характерной особенностью микроморфологиче; ского строения колоний штамм КАВ 1017.

Физиолого-биохимические признаки. На агаризованных средах рост мицелия отмечен в интервале температур 3,.,5...40°С. Интенсивный рост мицелия отмечен при температуре 24 и 25°С. При температуре 27°С прирост мицелия штамма на картофельно-глюкозном агаре составил 11,4±0,1 мм/сутки. Скорость роста мицелия в чашках Петри на сусло агаре при оптимальной температуре составляет 11,80±0,2 мм/сутки.

Отношение к углеводам. Наибольшее накопление биомассы штаммом УВ 1017 имело место на среде, содержащей лактозу, мальтозу, маннит и галактозу.

Отношение к источникам азота. На среде с мочевиной, нитратом аммония, сульфатом и нитратом развивается достаточно интенсивно. По результатам накопления биомассы лучшими для культуры штамма оказались глютаминовая и аспарагиновая

кислоты.

Отношение к спиртам. Хорошо усваивает маннит.

Оптимум рН для накопления биомассы штаммом КА 1017 находится в области 6,55

единиц.

Цветные реакции на тирозиназу, ликта- зу, пероксилазу положительны.

Примеры конкретного выполнения. Интенсивная технология выращивания предполагает возможность использования недорогостоящих субстратов, высокопродуктивных, устойчивых к неблагоприятным факторам штаммов, наиболее качественно посевного мицелия.

Солому подвергают увлажнению и последующей термической обработке паром от котельной в течение одного часа. Температура пара 160-180°С. Процесс стерилизации может быть заменен пастеризацией.

При этом субстрат заливаюткипящейводой в сварных металлических ваннах и выдерживают при этой температуре в течение 3-4 часов. После охлаждения воды субстрат извлекают из ванны и укладывают в

цилиндрические контейнеры, выполненные из проволоки сечение 6-8 мм. Контейнеры покрывают перфорированной полиэтиленовой оболочкой. После охлаждения субстрата до 23-25°С его инокулируют зерновым посевным материалом через отверстия в полиэтиленовой оболочке. Норму высева рассчитывают с учетом габаритов контейнера. В контейнер диаметром 33 см и высотой 100 см помещается около 30 кг субстрата.

Для инокуляции субстрата в таком контейнере расходуется 650 г зернового мицелия. Разрастание мицелия в субстрате при температуре помещения 21-22°С продолжается около 20 дней. Температура внутри при

этом на выше, что соответствует температурному оптимуму вегетативной фазы развития гриба. С появлением зачатков тел (шляпок и ножек) гриба полиэтиленовые оболочки с контейнеров снимают, а температуру в помещении снижают до 12-15°С, Условия увлажнения регулируются таким образом. Первые 5-6 дней следят за тем, чтобы капельная вода не попадала на блоки. В последующие дни все блоки довольно ча- сто поливают водой из шланга с распылителем, но так, чтобы на полу не образовывались лужи. При 12-15°С для поддержания относительной влажности около 95% число поливов увеличивается до 4-5 раз. Относительную влажность можно поддерживать автоматически, используя для увлажнения воздуха конусные распылители. В период плодоношения помещение проветривается в целью удаления избыточ- ного количества углекислого газа. В первые 5-6 дней освещение не обязательно. С момента массового появления плодовых тел создают оптимальную силу света 700-800 лк/ч. При использовании остеклен- ных и пленочных теплиц освещение не обязательно.

Габитус плодовых тел штаммов BKMF- 2465Д и KB 1017 приведен в табл. 1.

Производственные испытания по уро- жайности штамма KB № 1017 проводились на базе совхоза Красносельский Артемов- ского района.

Посевной мицелий прототипа и заявляемого штамма получен на зерновой основе в одних и тех же условиях. Субстрат (свежесобранная, не зараженная посторонней микрофлорой, пастеризованная солома) с влажностью 68-70% от полной влагоемко- сти, рН - 6,6, инокулировался мицелием 21- дневного возраста.

Блоки, заросшие мицелием прототипа ВКМР-2465Д подвергались холодовому шоку. При отсутствии холодового шока штамм-прототип не плодоносит, поэтому сравнить урожайность прототипа и заявляемого штамма без холодового шока не представляется возможным.

Блоки, заявляемого штамма KB № 1017, начали плодоносить без холодово- го шока на 12 дней раньше, чем блоки с прототипом.

Выращивание грибов проводилось в одинаковых условиях согласно технологии.

Учет урожайности осуществлялся по трем волнам сбора продукции, с учетом габитусов (диаметра шляпки и длины ножки). Товарными плодовыми телами считали ве- шенку штамма KB №1017с размером шляп- ки не менее 4 см и с ножкой подрезанной на длину не более 4 см.

Результаты урожайности заявляемого штамма и прототипа на субстрате из соломы

в кг на 2 кг сухой соломы приведены в табл 2.

Результаты сравнения урожайности заявляемого штамма и прототипа по критерию Стьюдента приведены в табл. 3

Результаты проведенных испытаний показали следующее; на субстрате из пшеничной соломы в расчете на 100 кг воздушно-сухой массы урожайности заявляемого штамма KB 1017 составила 74,9 кг грибов, а урожайность прототипа KBMF- 2465Д - 50,6 кг грибов, что дает основание сделать вывод о более высокой урожайности заявляемого штамма.

Сильный антагонизм по отношению к вешенке обыкновенной проявляют представители родов Aspergjllus, Penlclllum, Trlchoderma. Изучалось взаимодействие в смешанной культуре на чашки Петри на КГА заявляемого штамма, прототипа и микроми- цетов.

Условия опыта: отсутствие освещения, температура 25°С.

Сравнивали скорость роста ксилотро- фов в чистой культуре и в присутствии мик- ромицрта. Для математической обработки использовали однофакторный дисперсионный анализ и критерий Даннета.

Результаты влияния микромицетов на скорость роста ксилотрофов в смешанной культуре приведены в табл. 4.

Из числа изучаемых ксилотрофов наибольшей устойчивостью и конкурентной способностью обладает штамм KB 11017, который резко отличается от прототипа своей активностью.

Полезным свойством штамма KB Мг 1017 является способность утилизировать хлопковые отходы ткацкого производства, стержни кукурузных початков солому злаковых культур и др. Использование штамма в подсобных хозяйствах предприятий ткацкой промышленности обеспечивает создание безотходной технологии производства. Преимуществом является также и то, что блоки, оставшиеся от плодоносившего субстрата могут использоваться для добавления к органическим удобрениям или в качестве белково-витаминных добавок к кормам крупного рогатого скота. Таким образом, наряду с возможностью получения достаточно высоких урожаев вешенки обыкновенной штамма КБ Мг 1017 одновременно решается проблема окружающей среды от загрязнения путем ее биологической трансформации.

Штамм KB ISfe 1017 пригоден для подачи в свежем виде, консервировании и сушки с целью приготовления грибного порошка.

Формула изобретения Штамм соматических структур макроскопического гриба Pleurotus ostreatus

(Last. Fr) Kummer KB № 10t7 - продуцент плодовых тел.

Использование: сельское хозяйство и биотехнология. Сущность изобретения: штамм получают на субстрате с зерновой основой и пересевают в твердый субстрат для культивирования до получения плодовых тел гриба. Использование штамма позволяет повысить урожай плодовых тел и исключить операцию охлаждения субстрата с выращиваемым грибом для стимуляции плодообразования, что упрощает технологию. Штамм обладает устойчивостью к посторонней микрофлоре. 4 табл.

Таблица 1

Таблица 2

Продолжение таблицы 2

Таблица 3

Таблица 4