ПРЕПАРАТ, ОБЛАДАЮЩИЙ БАКТЕРИЦИДНОЙ И АНТИМЕТАСТАТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2012 года по МПК A61K36/06 A61K36/185 A61P31/04 A61P35/00 

Изобретение относится к области медицины, в частности к области фармакологии и патофизиологии, и может быть использовано в качестве средства, обладающего противовоспалительным и иммуностимулирующим действием.

Известно использование отваров березовых почек и листьев в качестве противовоспалительного средства при простудных заболеваниях, а также при лечении туберкулеза (В.П.Махлаюк. Лекарственные растения в народной медицине. - Саратов: Приволжское книжное изд-во, 1993 г. - С.58).

Однако данный отвар обладает слабым бактерицидным действием.

Известна композиция ингредиентов, обладающая биологической активностью (варианты), содержащая культуральную жидкость чайного гриба и настоя чаги (патент РФ №2280394, опубл. 16.12.04.).

Однако данный препарат обладает слабой антиметастатической активностью и предназначен для приемения в качестве пищевой добавки при производстве различного рода напитков.

Задачей изобретения является разработка препарата, обладающего повышенной бактерицидной и антиметастатической активностью.

Указанная задача решается тем, что препарат, обладающий бактерицидной и антиметастатической активностью на основе водного экстракта растительного сырья, содержит водный экстракт (вытяжку) чаги и березовой коры, взятых в весовом соотношении 1:4.

Изобретение поясняют описание препарата и результаты лабораторных исследований его бактерицидных и антиметастических свойств.

Препарат получают по известной технологии, используя любые типы установок для получения водных экстрактов (вытяжек) из растительного сырья. В качестве последнего используют чагу и березовую кору, взятые в весовом соотношении 1:4. Полученный экстракт (препарат) представляет собой жидкость светло-коричневого цвета, который может быть использован как прямо - при наружном, так и в виде водных и спиртовых растворов необходимой концентрации - при внутреннем применении.

Определение бактерицидной активности препарата проводилось методом вертикальной диффузии на плотной питательной среде «НОВАЯ» (Г.Г.Мордовской, 1972 г.) с использованием лабораторного штамма МБТ Н37Rv.

В ходе исследования навеску культуры лабораторного штамма H37Rv поместили в стерильную фарфоровую ступку, растерли до гомогенной массы постепенно добавляя стерильный физиологический раствор. Полученную суспензию культуры стандартизировали по бактериальному стандарту мутности, соответствующему 1 млрд. микробных тел (10 единиц ГКИ). В пробирки с питательной средой засеяли по 0,1 мл взвеси МБТ, после чего их поместили в горизонтальном положении в термостат на 24 часа при температуре 37°С.

Были приготовлены водные растворы исследуемого препарата в концентрации: 100; 50; 25; 12,5; 6,25%.

В каждую пробирку, засеянную штаммом H37Rv, вносили исследуемый препарат соответствующей концентрации и помещали в термостат при температуре 37°С.

Действие препарата каждой концентрации на МБТ изучали на трех параллельных рядах. Для сравнения в качестве контроля использовали изониазид в аналогичных концентрациях. Регистрацию полученных результатов проводили через 10 дней, учитывая величину зон задержки роста МБТ (в мм). Результаты представлены в таблице.

Таблица 1 Результаты исследования бактерицидных свойств препарата Препараты Концентрация препарата, %   100 50 25 12,5 6,25 Исследуемый препарат (Водный экстракт чаги и березовой коры) 58 50 40 35 27 55 50 40 30 25 52 46 43 30 27 55±2 48,7±1,8 41±1,3 31,7±2,2 26,3±0,9   Концентрация изониазида, мкг/мл Изониазид             25,0 12,5 6,25 3,12 1,5   >70 60 60 45 40   >70 58 60 40 40   >70 55 45 40 37   >70 57,7±1,8 55±6,7 45±3,3 39±1,3

Из представленных в таблице 1 данных следует, что по своим бактерицидным свойствам предложенный препарат (водный экстракт (вытяжка) чаги и березовой коры), в том числе в 50% концентрации, соответствует бактерицидным свойствам изониазида в концентрации 25,0 мкг/мл.

Для определения антиметастатической активности препарата опыты проведены на мышах с подкожно трансплантированными опухолями, входящими в состав панели опухолевых штаммов для скрининга МБР противоопухолевой активности: аденокарциномы молочной железы Са755, лимфолейкоза Р388 и меланомы В16. Опухолевые штаммы вводили в объеме: Р388 - по 1 млн. кл/мышь, Са755 и В16 - по 40 мг опухолевой ткани на мышь в 0,3-4 мл питательной среды 199.

В опыте с Са755 из 6 групп по 8 мышей 5 групп получали лечение предложенным препаратом и одной группе - контрольная - вводили физиологический раствор. Препарат использовали в 100% и 20% концентрации после разведения стерильным физиологическим раствором путем введения в брюшную полость в разовой дозе 0,1-0,5-1,0 мл на мышь. Введение препарата начали через 72 часа после трансплантации опухолевого штамма и осуществляли ежедневно в течение 5-ти дней. Суммарная доза препарата составила соответственно 0,5-2,5-5,0 мл/мышь.

В опыте с Р388 было 2 группы по 10 мышей: одной группе вводили препарат 20% концентрации, полученной в результате его разведения физиологическим раствором, а другой - контрольной - физиологический раствор. Введение препарата производили в брюшную полость в разовой дозе 0,5 мл/мышь и осуществляли ежедневно в течение 5 дней, начав через 72 часа после трансплантации опухолевого штамма. Суммарная доза составила 2,5 мл/мышь.

В опыте с В16 из 3 групп мышей две группы получали препарат 20% концентрации и одной - контрольной - вводили физиологический раствор. Введение препарата осуществляли в брюшную полость ежедневно также в течение 5 дней, начиная через 72 часа после трансплантации опухолевого штамма. Разовые дозы составляли 0,25 и 0,5 мл на мышь, суммарные дозы соответственно 1,25 и 2,5 мл/мышь.

После окончания опыта опухоли измеряли, определяли средние объемы и рассчитали стандартный показатель эффективности - торможения роста опухоли (ТРО), который выражали в процентах к показателям контрольной группы. При оценке исходили из того, что показатель эффективности при первичном исследовании (скрининг) - ТРО≥50%. Достоверность результата оценивали по стандартному методу Стьюдента с расчетом доверительного интервала в сравниваемых группах. Различия считались достоверными при p≤0,05.

При анализе результатов опытов установлено нижеследующее.

По опыту с Са755. В группе мышей, которым вводили препарат 100% концентрации все мыши погибли в течение первых суток после второй инъекции. В брюшной полости павших мышей найден введенный препарат, который не всасывался в организм. Причина гибели - местно-раздражающее действие введенного препарата на стенку брюшной полости. В группах, получавших разведенный препарат 20% концентрации, его переносимость была хорошей. Достоверный противоопухолевый эффект ТРО=68-69-72% (последнее значение достоверно, p<0,05), соответствующий минимальному критерию, получен при введении 20% раствора в разовой дозе 0,5 мл на мышь, суммарная доза 2,5 мл/мышь. Сводные данные представлены в таблице 2.

Таблица 2 Антиметастатическая эффективность препарата в отношении Са755 Группа n=10 Разовая доза (мл/мышь), режим введения Сутки после перевивки опухоли 10 14 18 Vcp, мм³ ТРО % Vcp, мм³ ТРО % Vcp, мм³ ТРО % Контроль, физ. р-р 0,5×5 раз 1070±600* - 6308±3946 - 12673±5172 - Препарат (Водный экстракт чаги и березовой коры, 100% коонцентрации) 1,0×2 раза 10 мышей пали от токсичности на 2 сутки 0,5×2 раза 9 из 10 мышей пали от токсичности на 2 сутки, у одной выжившей мыши размеры не отличались от контроля 0,1×5 раз 1001±714 6 2517±1577 60 5252±4403 54 Препарат (Водный экстракт чаги и березовой коры, 20% коонцентрации) 1,0×5 раз 546±374 49 35639±2843 42 5425±4123 57 0,5×5 раз 339 б. разброс 68 1918±1477 69 3369±2697 72** Примечания: все растворы вводили внутрибрюшинно ежедневно на 3-7 дня после трансплантации опухоли;
ТРО определяли на 3, 7 и 11 сутки после окончания лечения; * - доверительный интервал; ** - p<0,05

В опыте с В16 группа мышей, которым вводили препарат 20% концентрации, перенесла его хорошо. Отмечен длительный достоверный противоопухолевый эффект, соответствующий минимальному критерию, ТРО=95-96-94% (p<0,05) на 2-6-12 сутки после окончания опыта. Сводные данные представлены в таблице 3.

Таблица 3 Антиметастатическая эффективность препарата в отношении штамма В16 Группа n-10 Разовая доза (мл/мышь), режим введения Сутки после перевивки опухоли 9 13 19 Vcp, мм³ ТРО % Vcp, мм³ ТРО % Vcp, мм³ ТРО % Контроль, физ. р-р - 601±174* - 2137±682 - 6299±1862 - Препарат (Водный экстракт чаги и березовой коры 20% концентрации) 0,5×5 раз 63±56 90** 246±682 88** 938±429 85* 0,25×5 раз 32±31 95** 74±63 96** 409±283 94** Примечания: все растворы вводили внутрибрюшинно ежедневно на 3-7 дня после трансплантации опухоли;
ТРО определяли на 2, 6 и 12 сутки после окончания лечения; * - доверительный интервал; ** - p<0,05

В опыте с Р388, в группе мышей, получавшей препарат 20% концентрации, отмечен достоверный кратковременный противоопухолевый эффект на 4 сутки ТРО=52% (p<0,05), соответствующий минимальному критерию.

В целом, проведенные исследования показали что предложенный препарат обладает высокой бактерицидной и антиметастатической активностью.

Препарат, обладает повышенной бактерицидной и антиметастатической активностью, что обеспечивается содержанием водного экстракта (вытяжки) чаги и березовой коры, взятых в весовом соотношении 1:4. В целом проведенные исследования показали, что препарат обладает высокой бактерицидной и антиметастатической активностью. 3 табл.

Препарат, обладающий бактерицидной и антиметастатической активностью на основе водного экстракта растительного сырья, отличающийся тем, что содержит водный экстракт (вытяжку) чаги и березовой коры, взятых в весовом соотношении 1:4.