АНТИТЕЛА К GDF8 И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2012 года по МПК C07K16/22 C12N5/10 C12N15/13 C12N15/63 G01N33/53 A61K39/395 A61P21/00 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Предложены: моноклональное антитело или его фрагмент, которое специфически связывается с GDF8 и не связывается с BMP 11, кодирующий его полинуклеотид, вектор экспрессии и клетка-хозяин для экспрессии антитела. Рассмотрены: способ получения GDF8-специфичного антитела, способ определения присутствия GDF8 в образце, способ лечения GDF8-ассоциированного расстройства. Использование изобретения обеспечивает новые GDF8-специфичные антитела, что может найти дальнейшее применение в терапии GDF8-опосредованных заболеваний. 9 н. и 13 з.п. ф-лы, 33 ил., 8 табл., 7 пр.

1. Моноклональное антитело или его фрагмент, которое(ый) специфически связывается с GDF8, но не связывается специфически с BMP11, содержащее(ий)
определяющую комплементарность область 1 (CDR1) вариабельного домена тяжелой цепи (VH), выбранную из SEQ ID NO:19 или SEQ ID NO:25, VH CDR2, выбранную из SEQ ID NO:20 или SEQ ID NO:26, и VH CDR3, выбранную из SEQ ID NO:21 или SEQ ID NO:27; и
определяющую комплементарность область 1 (CDR1) вариабельного домена легкой цепи (VL), выбранную из SEQ ID NO:22 или SEQ ID NO:28, VL CDR2, выбранную из SEQ ID NO:23 или SEQ ID NO:29, и VL CDR3, выбранную из SEQ ID NO:24 или SEQ ID NO:30.

2. Моноклональное антитело или его фрагмент по п.1, содержащее(ий) тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:14 и аминокислотной последовательности SEQ ID NO:17.

3. Моноклональное антитело или его фрагмент по п.1, содержащее(ий) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:16 и аминокислотной последовательности SEQ ID NO:18.

4. Моноклональное антитело или его фрагмент по п.1, содержащее(ий) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14.

5. Моноклональное антитело или его фрагмент по п.1, содержащее(ий) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:18, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:17.

6. Моноклональное антитело или его фрагмент по любому из пп.2, 4 или 5, где указанная тяжелая цепь также содержит константный домен тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из константных доменов тяжелой цепи IgA1, IgA2, IgE, IgD, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 и IgM.

7. Моноклональное антитело или его фрагмент по любому из пп.3, 4 или 5, где указанная легкая цепь также содержит константный домен легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из константных доменов легкой цепи лямбда и каппа.

8. Моноклональное антитело или его фрагмент по любому из пп.1-7, которое(ый) является полностью гуманизированным.

9. Выделенный полинуклеотид, кодирующий антитело или его фрагмент по любому из пп.1-8.

10. Выделенный полинуклеотид по п.9, содержащий нуклеиновокислотную последовательность SEQ ID NO:13, кодирующую вариабельный домен тяжелой цепи (VH) RK22.

11. Выделенный полинуклеотид по п.9, содержащий нуклеиновокислотную последовательность SEQ ID NO:15, кодирующую вариабельный домен легкой цепи (VL) RK22.

12. Вектор экспрессии, содержащий регуляторную последовательность, функциональным образом связанную с полинуклеотидом по п.9.

13. Клетка-хозяин млекопитающего для экспрессии GDF8-специфичного моноклонального антитела или его фрагмента, содержащая вектор по п.12.

14. Способ получения GDF8-специфичного моноклонального антитела или его фрагмента, включающий культивирование клетки-хозяина по п.13 и выделение GDF8-специфичного моноклонального антитела или его фрагмента, экспрессируемого указанной клеткой-хозяином.

15. Выделенное GDF8-специфичное моноклональное антитело или его фрагмент, полученное(ый) способом по п.14.

16. Способ определения присутствия GDF8 в образце от субъекта, включающий стадии:
(а) приведения в контакт образца с GDF8-специфичным антителом для захвата;
(б) приведения в контакт образца с GDF8-специфичным антителом для детекции; и
(в) детекции специфического связывания антитела для детекции с GDF8, специфически связанным с антителом для захвата,
где либо антитело для захвата, либо антитело для детекции, но не оба, представляет собой антитело по п.1; и
где детекция специфического связывания указывает на присутствие GDF8 в образце.

17. Способ по п.16, где альтернативное антитело, которое не является антителом по п.1, является антителом RK35 или его антиген-связывающим фрагментом.

18. Способ по п.16 или 17, где стадию (а) приведения в контакт образца с GDF-специфичным антителом для захвата проводят в кислотных условиях.

19. Способ по п.18, где стадию (а) проводят при рН ниже примерно 3,0.

20. Способ по п.16 или 17, который дополнительно включает стадию количественного определения уровня специфического связывания антитела для детекции с GDF8, посредством чего определяют количество GDF8 в указанном образце.

21. Способ лечения GDF8-ассоциированного расстройства у млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему количества GDF8-специфичного моноклонального антитела или его фрагмента по любому из пп.1-8, эффективного для лечения данного расстройства.

22. Применение фармацевтической композиции в изготовлении лекарственного средства для лечения GDF8-ассоциированного расстройства у млекопитающего, где указанная фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель и GDF8-специфичное моноклональное антитело или его фрагмент по любому из пп.1-8.