СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ РЕГЕНЕРАЦИИ ПЕЧЕНИ ПРИ ФИБРОЗНЫХ ИЗМЕНЕНИЯХ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2012 года по МПК G09B23/28 A61M37/00 A61K35/48 A61P1/16 A61P41/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии: к способу стимуляции регенерации печени при фиброзных изменениях в ткани печени различного генеза.

Известен способ лечения фиброзных изменений при хронических гепатитах и циррозах печени за счет медикаментозной стимуляции регенерации печени. До операции экспериментальным животным вводили «Тамерит», относящийся к группе иммуномодуляторов, в дозе 2 мг/кг [1]. Также известна стимуляция препаратом «Мексидол» - синтетический антигипоксант с мембраностабилизирующими свойствами [2].

Данный способ имеет ряд недостатков:

1) низкий эффект вследствие малого накопления препарата в печени, из-за наличия нарушений тканевого кровообращения, свойственных хроническим гепатитам и циррозам;

2) недостаточная биодоступность препаратов для ткани печени, так как препарат не вводили интрапаренхиматозно;

3) отсутствие значимых положительных морфологических признаков регенерации.

Наиболее близким по технической сущности является способ стимуляции регенераторных процессов в печени электрокоагуляцией [3].

Но и этот способ имеют ряд недостатков:

1) не оказывает стимулирующее действие на метаболическую активность гепатоцитов, что в условиях нарушения метаболизма при ХГ и ЦП не дает возможности адекватной регенерации печеночной ткани;

2) механическое повреждение без медикаментозной коррекции функции гепатоцитов не приводит к полному восстановлению архитектоники органа в зоне воздействия.

Задачей предлагаемого способа является снижение фиброзного перерождения в ткани печени посредством усиления пролиферации клеток печени и резорбции внеклеточного матрикса.

Поставленную задачу достигают за счет того, что лапароскопически с помощью иглы-инжектора вводят препарат «EMBRYOBLASTE» на глубину до 0,1 см по передней поверхности печени в каждую долю по 2 инъекции до образования папулы, объем одной инъекции 0,3 мл.

Способ осуществляют следующим образом.

Экспериментальным животным (беспородным собакам весом 7-10 кг) цирроз моделировали путем подкожного введения 50% раствора четыреххлористого углерода (CCl₄) на растительном масле, в дозе 0,4 мл на 100 г массы животного, 2 раза в неделю в течение 4 недель [4], с последующим забором морфологического материала.

На 60-е сутки беспородным собакам весом 7-10 кг лапароскопически с помощью иглы-инжектора вводили препарат «EMBRYOBLASTE» на глубину до 0,1 см по передней поверхности печени в каждую долю (1, 2, 3, 4, 5 доли) по 2 инъекции до образования папулы, объем одной инъекции 0,3 мл.

Эксперимент проводили на 15 беспородных собаках весом от 7 до 10 кг. Сроки наблюдения составили 10, 30 и 60 дней. Все собаки были разделены на три группы по 5 собак в каждой: контрольную группу составили собаки без изменений в ткани печени, в I исследуемую группу включены собаки с моделированным циррозом печени без стимуляции регенерации, II исследуемая группа представлена собаками с моделированным циррозом печени со стимуляцией регенерации печени препаратом «EMBRYOBLASTE».

Для оценки эффективности регенерации печеночной ткани изучена морфологическая картина стромально-паренхиматозных взаимоотношений печени животных, в норме и после моделирования цирроза печени на 60 сутки от начала эксперимента (таблица 1).

Таблица 1 Сравнительная оценка морфологических изменений в печени при моделированном циррозе печени у собак Объем, в % Контрольная группа, n=5 Исследуемая группа I, n=5 Жировые клетки 2,49±0,49 15,33±0,47* Содержание гликогена 76,02±2,21 11,83±0,22* Волокна 11,22±0,31 38,21±0,36* Гепатоциты 59,21±1,24 39,56±1,15* Ацинусы 29,11±0,43 17,41±0,59* Перипортальные тракты 6,02±0,42 16,31±0,29* Примечание: *p<0,05 при сравнении с показателями до операции, где n - число экспериментальных животных в данной группе

Сравнивая изменения, развившиеся у животных на 60-е сутки затравки, пришли к заключению: морфологическая картина ткани печени соответствует сформированному компенсированному циррозу. Из таблицы видно, что в ткани печени отмечено увеличение объема перипортальных трактов до 16,31±0,29% за счет увеличения диаметра центральных вен и уменьшения диаметра портальных вен, что свидетельствует о внутрипеченочном венозном шунтировании, гемо- и лимфостазе. Преимущественно встречаются гепатоциты небольших размеров, объем их по сравнению с контрольной группой снижен до 39,56±1,15%, в то же время содержание жировых клеток увеличивается до 15,33±0,47% (умеренная жировая инфильтрация). Содержание гликогена снижается до 11,83±0,22%. Наряду с дистрофически-воспалительной реакцией значительно увеличен объем волокон до 38,21±0,36% по сравнению с контрольной группой.

После проведения стимуляции регенерации печени препаратом «EMBRYOBLASTE» экспериментальная оценка эффективности стимуляции регенерации ткани печени проводилась в динамике на 10, 30 и 60 сутки после операции (таблицы 2, 3, 4).

Таблица 2 Сравнительная оценка морфологических изменений в печени после проведения стимуляции регенерации на 10 сутки. Объем, в % Контрольная группа, n=5 Исследуемая группа I, n=5 Исследуемая группа II, n=5 Жировые клетки 2,49±0,49 15,33±0,47* 12,33±0,24* Гликоген 76,02±2,21 11,83±0,22* 28,42±0,36* Волокна 11,22±0,31 38,21±0,36* 25,81±1,01* Гепатоциты 59,21±1,24 39,56±1,15* 47,31±1,42* Перипортальные тракты 6,02±0,42 16,31±0,29* 12,34±0,16* Примечание: *p<0,05 при сравнении с показателями до операции.
где n - число экспериментальных животных в данной группе

Из вышеприведенной таблицы видно, что уже на 10 сутки происходит снижение объема перипортальных трактов до 12,34±0,16% за счет снижения диаметра печеночных клеток. Объем гепатоцитов увеличился до 47,31±1,42%, а количество жировых клеток снизилось до 12,33±0,24%. Напротив, количество гликогена возрастает до 28,42±0,36%. А объем волокон снижается до 25,81±1,01%.

Таблица 3 Сравнительная оценка морфологических изменений в печени после проведения стимуляции регенерации на 30 сутки Объем, в % Контрольная группа, n=5 Исследуемая группа I, n=5 Исследуемая группа II, n=5 Жировые клетки 2,49±0,49 15,33±0,47* 8,41±0,14* Гликоген 76,02±2,21 11,83±0,22* 59,51±1,25* Волокна 11,22±0,31 38,21±0,36* 12,44±1,03* Гепатоциты 59,21±1,24 39,56±1,15* 62,42±1,26* Перипортальные тракты 6,02±0,42 16,31±0,29* 10,26±0,39* Примечание: *p<0,05 при сравнении с показателями до операции,
где n - число экспериментальных животных в данной группе

На 30 сутки отмечаются выраженные компенсаторно-регенераторные процессы за счет продолжающегося увеличения объема гепатоцитов и, как следствие, кумулирование гликогена, удельный вес которого к 30 суткам составляет 59,51±1,25%. Количество жировых клеток составляет 8,41±0,14%. Объем волокон снижается до 12,44±1,03%.

Таблица 4 Сравнительная оценка морфологических изменений в печени после проведения стимуляции регенерации на 60 сутки Объем, в % Контрольная группа, n=5 Исследуемая группа I, n=5 Исследуемая группа II, n=5 Жировые клетки 2,49±0,49 15,33±0,47* 4,07±0,33* Гликоген 76,02±2,21 11,83±0,22* 78,02±2,14* Волокна 11,22±0,31 38,21±0,36* 7,54±0,81* Гепатоциты 59,21±1,24 39,56±1,15* 65,32±0,98* Перипортальные тракты 6,02±0,42 16,31±0,29* 5,94±0,23* Примечание: *p<0,05 при сравнении с показателями до операции,
где n - число экспериментальных животных в данной группе

Из таблицы следует, что объем перипортальных трактов на 60-е сутки снижается до 5,94±0,23% также за счет снижения диаметра печеночных клеток, что способствует увеличению портального кровотока. Именно увеличение кровотока в системе внутрипеченочной микроциркуляции повышает проницаемость капилляров, уменьшается гемо- и лимфостаз, что важно для торможения фибриллогенеза и рассасывания соединительной ткани. К 60 суткам наблюдается увеличение объема гепатоцитов до 65,32±0,98%. Количество жировых клеток снижено до 4,07±0,33%. Гликоген имеет вид крупных зерен, распределенных по периферии клеток, и его чистый вес составляет 78,02±2,14%. Объем волокон уменьшился до 7,54±0,81%. Как следствие, уменьшается выраженность венулярного и перипортального фиброза.

Таким образом, при морфологическом исследовании определяется стойкая регенераторная реакция ткани печени на экспериментальное воздействие, результатом которой является компенсаторная гипертрофия - увеличение количества гепатоцитов в единице площади по сравнению с нормой на 10-12% (и на 60-65% по сравнению с циррозом) и адекватное снижение концентрации элементов стромы.

Пример конкретного применения

Собаке весом 10 кг в течение 28 дней проводилось моделирование цирроза печени путем подкожного введения четыреххлористого углерода 50% масляного раствора. Через 60 дней под наркозом лапароскопически с помощью иглы-инжектора вводили препарат «EMBRYOBLASTE» на глубину до 0,1 см по передней поверхности печени в каждую долю по 2 инъекции до образования папулы, объем одной инъекции 0,3 мл.

При последующем морфологическом изучении отдельных препаратов на 10, 30 и 60 сутки, определяется пролиферация клеток в дольке печени, где отмечается увеличение диаметра гепатоцитов и выявляются многоядерные клетки. Повысилось содержание гликогена, происходит нормализация локального кровотока, что приводит к увеличению объема ткани печени в среднем на 10-12% по сравнению с показателями нормы и на 60-65% по сравнению с циррозом, преимущественно за счет снижения волокнистых структур ацинусов.

Предлагаемый способ позволяет:

1) проводить стимуляцию лапароскопически либо под контролем УЗИ;

2) получить достоверное увеличением объема гепатоцитов без нарушения клеточной архитектоники органа;

3) уменьшить степень выраженности венулярного и перипортального фиброза, с уменьшением внутрипеченочного гемо- и лимфостаза, а также восстановить капилляризацию синусоидов печени.

Список литературы

1. Абидов М.Т., Караулов А.В. // Тамерит в эксперименте и клинике. - М., 2002. - С.22-23.

2. Н.Ф.Фаращук // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - №1. - 2006. - С.29-30.

3. Д.В.Усов. Регенерация печени и обратимость цирроза в клинической практике // Вектор Бук ЛТД. - Тюмень. - 1993. - 380 с.

4. Ажунова Т.А., Николаев С.М. // Моделирование и фармакотерапия органов пищеварения. Улан-Удэ, 1990. С.3-14.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и гепатологии, и касается стимуляции регенерации печени при фиброзных изменениях различного генеза. Для этого в условиях создания модели цирроза печени в эксперименте с помощью иглы-инжектора в ткань печени вводят препарат «EMBRYOBLASTE» на глубину до 0,1 см. Введение осуществляют по передней поверхности печени в каждую долю печени по 2 инъекции до образования папулы. Объем одной инъекции составляет 0,3 мл. Способ обеспечивает снижение фиброзного перерождения ткани печени посредством усиления пролиферации клеток печени и резорбции внеклеточного матрикса, при уменьшении степени выраженности венулярного и перипортального фиброза, уменьшении гемо- и лимфостаза, восстановлении капилляризации синусоидов печени без нарушения клеточной архитектоники органа. 4 табл., 1 пр.

Способ стимуляции регенерации печени при фиброзных изменениях в эксперименте, включающий воздействие на ткань печени, отличающийся тем, что воздействие осуществляют лапароскопически, с помощью иглы-инжектора вводят препарат «EMBRYOBLASTE» на глубину до 0,1 см по передней поверхности печени в каждую долю по 2 инъекции до образования папулы, объем одной инъекции 0,3 мл.