СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ НАРАСТАНИИ В НИХ ПЕРЕКИСЕЙ ЖИРНЫХ КИСЛОТ И ОБОСТРЕНИИ ВО ВРЕМЯ ГЕСТАЦИИ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ Российский патент 2012 года по МПК G01N33/48 

Цель исследования - разработка прогноза устойчивости мембран эритроцитов в периферической крови беременных в случае обострения во время гестации герпес-вирусной инфекции.

Мембраны эритроцитов при нарушениях метаболизма в организме подвергаются воздействию продуктов перекисного окисления липидов. При этом возникает угроза нарушения их привычного плана строения.

Установлено, что при эндогенной интоксикации, вызванной дерматозами (Н.А.Добротина, Т.В.Копытова, Н.А.Шелчкова, 2010), сахарном диабете (С.Г.Дзучкоев, З.О.Карсанова, А.Е.Гурина, 2011), генерализованном парадонтите, ассоциированном с грибами рода Candida (В.Н.Цараев, Р.В.Ушаков, А.С.Ушакова, Л.В. Николаева, 2011), происходит модификация липидного бислоя клеточных мембран, что проявляется значительным снижением содержания фракции фосфатидилэтаноламина и возрастает фракция лизофосфатидилхолина (Е.Е.Дубинина, А.В.Пустыгина, 2008).

Таким образом, глубину мембранных повреждений определяют конформационные перестройки активных центров мембранно-связанных ферментов, структура и свойства рецепторных белков и, наконец, функция эритроцитов, что является одной из причин проявления нарушения кислородтранспортной работы организма.

Недостатком проведенных исследований является отсутствие конкретности изучаемых процессов. Не описываются механизмы взаимодействия перекисей жирных кислот с теми или иными составляющими мембран эритроцитов. Нет данных, в которых указывалась индукция вирусов герпеса на усиление активности перекисного окисления липидов в мембранах эритроцитов и конкретно влияние их на микровязкость.

В качестве прототипа мы избрали исследование М.Т.Луценко и И.А.Андриевской «Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных» (Медицинская информатика, 2009, №1 (19), С.27-30). Однако в отличие от прототипа, в котором авторы рассматривают, что устойчивость мембран эритроцитов зависит от изменения содержания белка полосы-3 и лизофосфатидилхолина, в представленном способе предлагается принять за основу повреждающего действия на структуру мембран эритроцитов у беременных в третьем триместре гестации действие перекисного окисления, нарастающего под влиянием герпес-вирусной инфекции. Это приводит к увеличению в периферической крови беременных процентного содержания дегенеративных форм эритроцитов, что вызывает опасности развития гипоксии.

Заявленный способ имеет следующие приемы.

1. Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения, клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН учреждения Российской академии медицинских наук. Обследовано 25 беременных в третьем триместре гестации с обострением герпес-вирусной инфекции с титром антител 1:12800 и 20 беременных, не болевших на протяжении всего периода гестации.

Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.

2. Изменение микровязкости мембран эритроцитов проводили методом латеральной диффузии гидрофобного флюоресцентного зонда пирена. Определение микровязкости основано на образовании эксимеров (активных димеров) пирена в липидном окружении (Т.Е.Добрецов, 1989). Флюоресценцию пирена измеряли на спектрофотометре «Hitachi». Для определения микровязкости липидного бислоя находили интенсивность флюоресценции или свечение пирена при длине волны возбуждения 286 нм, длина волны мономеров - 395 нм, длина волны эксимеров - 470 нм. Оценка микровязкости основывается на вычислении коэффициента эксимеризации пирена (К_экс=F₄₇₀/F₃₉₅), который равен отношению интенсивности флюоресценции эксимеров к интенсивности флюоресценции мономеров. Коэффициент эксимеризации находится в обратной зависимости от микровязкости и обозначается как F_экс/F_мон.

3. Титр антител к вирусу герпеса определяли иммуноферментным методом на спектрофотометре «Stat Fax - 2100» (USA).

4. Мазки периферической крови изготовлялись на предметных стеклах SL 72 (USA) с помощью центрифуги Stat Spin модели № М700-10 (USA).

5. Анализ процентного содержания эритроцитов выполнялся на автоматизированной цитофотометрической установке «Mekos» (Россия). Регистрационное удостоверение МЗ РФ 29/10010198/1282-01.

6. Перекисное окисление определяли с помощью тиобарбитуровой кислоты по методу И.Д.Стальной, Т.Г.Гаришвили.

Исследования показали, что при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных в третьем триместре гестации до титра 1: 12800 в мембранах эритроцитов нарастает уровень перекисного окисления липидов до 26,0±1,7 мк моль/мл (контроль - 14,5±1,95 мк моль/мл), что приводит к повышению микровязкости мембран эритроцитов. Белок-липидные контакты снизились до 0,87±0,004 F_э/F_м (контроль - 1,21±0,005 F_э/F_м; р<0,01).

Создается угроза нарушения структуры мембран эритроцитов. Исследуя периферическую кровь на автоматизированной цитофотометрической установке "Mekos", мы находим резкое увеличение в периферической крови беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции, количества дегенеративных форм эритроцитов до 15,0±1,1%. У беременных, не болевших на всем протяжении гестации, число дегенеративных форм эритроцитов было в пределах 3,5±0,3% (р<0,001).

Таким образом, обострение герпес-вирусной инфекции в третьем триместре гестации индуцирует накопление в мембранах эритроцитов перекисей жирных кислот, что нарушает устойчивость мембран эритроцитов, приводит к увеличению процентного содержания в крови дегенеративных форм эритроцитов.

Пример 1

Беременная Б., 21 год, беременность 34 недели. Титр антител к вирусу герпеса 1:12800. До обострения герпес-вирусной инфекции в мембранах эритроцитов содержание перекисей жирных кислот - 14,5 мк моль/мл; микровязкость мембран эритроцитов - 1,21 F_э/F_м. В периферической крови насчитывается 3,5% дегенеративных форм эритроцитов. После обострения герпес-вирусной инфекции содержание перекисей жирных кислот увеличилось до 27,6 мк моль/мл; микровязкость снизилась до 0,86 F_э/F_м, в периферической крови увеличилось содержание дегенеративных форм эритроцитов до 14,8%. Создается угроза снижения в периферической крови беременной процентного содержания эритроцитов с устойчивой мембраной, что препятствует насыщению их кислородом.

Пример 2

Беременная П., 24 года, беременность 32 недели. Титр антител к вирусу герпеса 1:12800. До обострения герпес-вирусной инфекции в мембранах эритроцитов содержание перекисей жирных кислот - 14,5 мк моль/мл; микровязкость мембран эритроцитов - 1,21 F_э/F_м. В периферической крови процент дегенеративных форм эритроцитов - 3,5%. После обострения герпес-вирусной инфекции содержание перекисей жирных кислот в мембранах эритроцитов увеличилось до 24,1 мк моль/мл. Микровязкость снизилась до 0,869 F_э/F_м, количество дегенеративных форм эритроцитов в периферической крови увеличилось до 13,0%. Создается угроза снижения в периферической крови эритроцитов с устойчивой мембраной, что препятствует насыщению их кислородом.

Литература

1. Дзучкоев С.Г., Карсанова З.О., Гурина А.Е. Перекисное окисление липидов и антиокислительная защита мембран клеток при сахарном диабете. // НИИ медико-биологических проблем ВНЦ РАН и Правительства Алании. - 2011. - Т.20, №36 - С.7-12.

2. Дубинина Е.Е., Пустыгина А.В. Окислительная модификация протеинов, ее роль при патологических состояниях. // Укр. биохим. журн. - 2008. - Т.80, №6 - С.8-10.

3. Копытова Т.В., Химкина Л.Н., Суздальцева И.В. Окислительный стресс, эндоксемия у больных тяжелыми распространенными дерматозами. // Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии. - 2009. - №2. - С.10-13.

4. Луценко М.Т., Андриевская И.А. Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных. // Медицинская информатика. - 2009. - №1(19). - С.27-30.

5. Рябов Г.А., Палечник И.Н., Азизов Ю.М. Активированные формы кислорода и их роль в некоторых патологических состояниях. // Анестезиология и реанимация. - 1991. - №1. - С.63-69.

6. Стальная И.Д., Гариашвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты. // Современные методы в биохимии. М.: «Медицина», 1977. - 389 с.

7. Субботина Т.Н., Титова Н.М., Савченко А.А. Перекисное окисление липидов и проницаемости мембран эритроцитов у детей и подростков с сахарным диабетом типа 1. // Клин. лаб. диагност. - 2004. - №5. - С.33-35.

8. Waltimo Т., Orstavik D., Meurman J. In vitro susceptibility of Candida albicans isolates from apical and marginal periodontis to common antifungal agents // J. Oral Microbiol Jmmuno. - 2000. - №15 (и). - Р.245-248.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки насыщения периферической крови кислородом у беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции. Способ характеризуется тем, что при наличии титра антител к вирусу герпеса 1:12800 и выявлении спектрофотометрическим методом увеличения уровней перекисей жирных кислот в мембранах эритроцитов до 26,0±1,7 мк моль/мл, увеличении микровязкости мембран до 0,87±0,004 F_э/F_м и нарастании числа дегенеративных форм эритроцитов в периферической крови до 15,0±1,1% прогнозируют угрозу нарушения структурно-функционального состояния мембран эритроцитов, что препятствует насыщению их кислородом. 2 пр.

Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов при нарастании в них перекисей жирных кислот и обострении в третьем триместре гестации герпес-вирусной инфекции, характеризующийся тем, что при наличии титра антител к вирусу герпеса 1:12800 и выявлении спектрофотометрическим методом увеличения уровней перекисей жирных кислот в мембранах эритроцитов до 26,0±1,7 мк моль/мл, увеличении микровязкости мембран до 0,87±0,004 F_э/F_м и нарастании числа дегенеративных форм эритроцитов в периферической крови до 15,0±1,1% прогнозируют угрозу нарушения структурно-функционального состояния мембран эритроцитов, что препятствует насыщению их кислородом.