КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РИЗЕДРОНАТА В МОЧЕ ПО ТФЭ/ЖХ-МС/МС Российский патент 2012 года по МПК G01N33/52 G01N30/00 B01D15/36 

Описание патента на изобретение RU2467332C2

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении представлен способ ТФЭ/ЖХ-МС/МС для количественного определения ризедроната в пробе мочи.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Бисфосфонаты ингибируют резорбцию костей и являются эффективными средствами лечения метаболических заболеваний костей, в том числе остеопороза и болезни Педжета (I. Elomaa, C. Blomqvist, L. Porkka, T.Holmstrom, T.Taube, C.Lamberg-Allardt, G.H. Borgstrom. Lancet 1985; i:1155; J.P. Kosonen, J. Pharm Biomed Anal. 1992; 10:881; J.A. Cantril, H.M. Buckler, D.C. Anderson, Ann. Rheumatol. Dis. 1986; 45:1012; H.Fleisch, Horm. Metab. Res. 1997; 29:145). Предупреждение резорбции костной ткани является следствием ингибирующего воздействия на функции зрелых остеокластов. Известно несколько биоаналитических методов для бифосфонатов. Как правило, эти методы в основном опираются на ионообменную и ион-парную хроматографию с детектированием по УФ, флуоресценцию (с получением производных до или после колонки), проводимости, селективным по фосфору пламенно-фотометрическим детектором, по показателю преломления и светорассеянию (V. Virtanen, L.H.J. Lajunen, J. Chromatogr. 1993; 617:291; V. Virtanem, L.H.J. Lajunen, Talanta 1993; 40: 661; S.E. Meek, D.J. Pietrzyk Anal. Chem. 1988; 60:1397; M.J. Lovdahl, D.J. Pietrzyk, J. Chromatogr. A 1999; 850:143; R. Niemi, H. Taipale, M. Ahlmark, J. Vepsalainen, T. Jarvinen, J. Chromatogr. B 1997; 701:97; T.L. Chester, Anal. Chem. 1980; 52:1621).

Для определения ризедроната в моче человека использовалась методика ГХ/МС в сочетании с ацилированием и силилированием (D.Y. Mitchell, R.A. Eusebio, L.E. Dunlap, K.A. Pallone, J.D. Nesbitt, D.A. Russell, M.E. Clay, P.J. Bekker, Pharm. Res. 1998; 15:228). Более чувствительный метод для анализа ризедроната в моче человека был разработан на основе твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) (D.Y. Mitchell, M.A. Heise, K.A. Pallone, J.D. Nesbilt, M.E. Clay, J.D. Nesbitt, D.A. Russell, C.W. Melson, J. Clin. Pharmacol. 1999; 48:536). Сообщалось также о количественном определении ризедроната в моче человека с помощью ион-парной ВЭЖХ с переключением колонок и УФ-детектированием (P.T. Vallano, S.B. Shugars, W.F. Kline, E.J. Woolf, B.K. Matuszewski, J. Chromatogr. B 1003; 794:23). Несмотря на то что некоторые из этих методов обеспечивали весьма высокую чувствительность, все они очень сложны и трудоемки.

В последнее время более активно разрабатывались методы ЖХ-МС/МС для ризедроната с последующей экстракцией или получением производных на колонке (L.S. Zhu, V.N. Lapko, J.W. Lee, Y.J. Basir, C. Kafonek, R. Olsen, C. Briscoe, Rapid commun. Mass Spectrom. 2006, 20: 3421; S.Turcotte, J. Couture, F. Vallee, AAPS PharmSci Vol. 5, No. 4, Abstract M1357 (2003).

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к способу количественного определения ризедроната в пробе мочи, включающему:

a) добавление внутреннего стандарта к пробе мочи;

b) нанесение пробы мочи на колонку Oasis HLB, предварительно обработанную метанолом;

c) промывку колонки примерно 1% (об.) TEA в воде и примерно 1% (об.) муравьиной кислоты в метаноле;

d) элюирование ризедроната, по крайней мере однократное, смесью примерно 60% (об.) метанола и примерно 40% (об.) воды, содержащей около 3 мМ EDTA, в вакууме;

e) упаривание элюированного раствора и разбавление смесью 10% (об.) метанола и 90% (об.) 0,05 M NH4Ac-NH4OH буфера, чтобы получить образец в виде смеси ризедроната и внутреннего стандарта; и

f) анализ образца смеси в системе ЖХ-МС/МС.

Упомянутый выше способ ТФЭ/ЖХ-МС/МС для количественного определения ризедроната в пробах мочи относительно прост, обладает высокой чувствительностью, является точным и достоверным и более полно обсуждается ниже с помощью приведенных фигур и подробного описания.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1 - ИЭ/МС спектр ризедроната.

Фиг. 2 - ИЭ/МС спектр дезоксиризедроната.

Фиг. 3 - хроматограмма ризедроната в моче мышей (НПКО 10 нг/мл), где интенсивность пика со временем удерживания 2,27 минуты более чем в три раза больше интенсивности того же пика на хроматограмме ВЭЖХ контрольного образца мочи мышей. Это означает, что данный способ позволяет количественно определять концентрацию ризедроната в моче мышей на уровне 10 нг/мл.

Фиг. 4 - хроматограмма мочи мышей контрольной группы.

Фиг. 5 - типичная хроматограмма ризедроната и дезоксиризедроната.

Фиг. 6 - типичная калибровочная кривая для ризедроната в моче мышей.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Определения и сокращения

Используемые выше и во всем тексте описания изобретения следующие сокращения, если не указано иначе, имеют следующие значения:

аем - атомная единица массы

имп/с - импульсов в секунду

КВ% - коэффициент вариации в процентах

Разн% - разница между теоретической и измеряемой концентрацией в процентах

EDTA - этилендиаминтетрауксусная кислота

ИЭ - ионизация электрораспылением

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ЖХ/МС - жидкостная хроматография высокого давления/масс-спектрометрия

НПКО - нижний предел количественного определения

КНР - контроль нескольких реакций

МС - масс-спектрометрия

m/z - отношение массы к заряду

NH4Ac - ацетат аммония

NH4OH - гидроксид аммония

СО - стандартное отклонение

ТФЭ - твердофазная экстракция

TEA - триэтиламин

об. - объемное соотношение

Используемые выше и во всем тексте описания изобретения следующие термины, если не указано иначе, имеют следующие принятые значения.

«Дезоксиризедронат» означает (1-фосфоно-2-пиридин-3-илэтил)-фосфоновую кислоту, имеющую следующую химическую структуру:

«Колонка Inertsil Phenyl-3 для ВЭЖХ» производится и продается компанией Varian, Inc.

«Внутренним стандартом» называют химическое соединение, которое добавляется в постоянных количествах к образцам, контрольным и калибровочным стандартам для анализа. Данное химическое соединение используется для калибровки посредством построения графика отношения сигнала анализируемого вещества к сигналу внутреннего стандарта как функции от концентрации анализируемого вещества в стандартах. Эта процедура используется для измерения и корректировки с учетом потери анализируемого вещества в процессе подготовки и ввода образца. В частности, внутренним стандартом является соединение, которое по своей химической структуре подобно, но не совпадает с анализируемым веществом.

«Колонка Oasis HLB» производится и продается компанией Waters Corporation. Размер колонки зависит от концентрации ризедроната в пробе мочи. Чем меньше концентрация ризедроната в пробе мочи, тем больше размер колонки, и тем больший объем пробы мочи и раствора для промывки колонки и элюирования ризедроната следует использовать.

«Ризедронат» означает (1-гидрокси-1-фосфоно-2-пиридин-3-илэтил)фосфоновую кислоту, имеющую следующую химическую структуру:

Под «пробой мочи» подразумевают пробу мочи млекопитающих, в том числе пробу мочи человека.

КОНКРЕТНЫЕ ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Одним из конкретных осуществлений настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, причем под пробой мочи подразумевается проба мочи мыши или крысы.

Еще одним конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, где внутренним стандартом является дезоксиризедронат.

Еще одним конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, где в качестве колонки Oasis HLB используется колонка Oasis HLB на 30 мг.

Еще одним конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, где внутренним стандартом является дезоксиризедронат, который добавляется в виде водного раствора, более точно, в виде водного раствора концентрацией примерно 10 мкг/мл.

Еще одним конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, причем объем пробы мочи составляет примерно 0,4 мл.

Еще одним конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, при этом колонку предварительно обрабатывают примерно 1 мл метанола.

Еще одним конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, при этом колонку предварительно обрабатывают примерно 1 мл метанола, а затем примерно 0,5 мл 1% (об.) ТЕА в воде.

Еще одним конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, при этом колонку промывают примерно 0,5 мл примерно 1% (об.) TEA в воде и примерно 0,5 мл примерно 1% (об.) муравьиной кислоты в метаноле.

Еще одним конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, причем объем смеси примерно 60% (об.) метанола и примерно 40% (об.) воды, содержащей около 3 мМ EDTA, составляет около 1,5 мл.

Еще одним конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, причем ризедронат элюируют дважды примерно 0,75 мл смеси примерно 60% (об.) метанола и примерно 40% (об.) воды, содержащей около 3 мМ EDTA.

Еще одним конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, причем объем смеси примерно 10% (об.) метанола и примерно 90% (об.) 0,05 M NH4Ac-NH4OH буфера составляет около 100 мкл.

Еще одним конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, причем внутренним стандартом является дезоксиризедронат, и анализ смеси образца в системе ЖХ-МС/МС включает разделение ризедроната и дезоксиризедроната посредством ВЭЖХ на колонке Inertsil Phenyl-3 градиентным элюированием смесью раствора A и раствора B, при этом объем раствора A увеличивается примерно с 10% (об.) до примерно 95% (об.), и где раствор A представляет собой примерно 90% (об.) метанола в воде, а раствор B представляет собой примерно 10 мМ буфера ацетат аммония-уксусная кислота с 2% (об.) триэтиламина.

Другим конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, причем под пробой мочи подразумевается проба мочи мыши или крысы, включающий:

a) добавление примерно 100 мкл примерно 10 мкг/мл водного раствора дезоксиризедроната к примерно 0,4 мл пробы мочи мыши или крысы;

b) нанесение пробы мочи мышей или крыс на колонку Oasis HLB 30 мг, предварительно обработанную примерно 1 мл метанола, а затем примерно 0,5 мл 1% (об.) ТЕА в воде;

c) промывку колонки примерно 0,5 мл 1% (об.) TEA в воде и примерно 0,5 мл 1% (об.) муравьиной кислоты в метаноле;

d) элюирование ризедроната примерно 1,5 мл смеси примерно 60% (об.) метанола и примерно 40% (об.) воды, содержащей около 3 мМ EDTA, в вакууме;

e) упаривание элюированного раствора и разбавление примерно 100 мкл смеси примерно 10% (об.) метанола и примерно 90% (об.) примерно 0,05 M NH4Ac-NH4OH буфера, чтобы получить образец в виде смеси ризедроната и дезоксиризедроната; и

f) анализ смеси образца в системе ЖХ-МС/МС, где ризедронат и дезоксиризедронат разделяют посредством ВЭЖХ на колонке Inertsil Phenyl-3 градиентным элюированием смесью раствора A и раствора B, при этом объем раствора A увеличивается примерно с 10% (об.) до примерно 95% (об.), и где раствор A представляет собой примерно 90% (об.) метанола в воде, а раствор B представляет собой примерно 10 мМ буфера ацетат аммония-уксусная кислота с 2% (об.) триэтиламина.

Другим конкретным осуществлением настоящего изобретения является способ количественного определения ризедроната в пробе мочи мыши или крысы, включающий:

a) добавление примерно 100 мкл примерно 10 мкг/мл водного раствора дезоксиризедроната к примерно 0,4 мл пробы мочи мышей или крыс;

b) нанесение пробы мочи мышей или крыс на колонку Oasis HLB 30 мг, предварительно обработанную примерно 1 мл метанола, а затем примерно 0,5 мл 1% (об.) ТЕА в воде;

c) промывку колонки примерно 0,5 мл 1% (об.) TEA в воде и примерно 0,5 мл 1% (об.) муравьиной кислоты в метаноле;

d) элюирование ризедроната два раза примерно 0,75 мл смеси примерно 60% (об.) метанола и примерно 40% (об.) воды, содержащей около 3 мМ EDTA, в вакууме;

e) упаривание элюированного раствора и разбавление примерно 100 мкл смеси примерно 10% (об.) метанола и примерно 90% (об.) примерно 0,05 M NH4Ac-NH4OH буфера, чтобы получить образец в виде смеси ризедроната и дезоксиризедроната; и

f) анализ смеси образца в системе ЖХ-МС/МС, где ризедронат и дезоксиризедронат разделяют посредством ВЭЖХ на колонке Inertsil Phenyl-3 градиентным элюированием смесью раствора А и раствора B, при этом объем раствора А увеличивается примерно с 10% (об.) до примерно 95% (об.), и где раствор А представляет собой примерно 90% (об.) метанола в воде, а раствор B представляет собой примерно 10 мМ буфера ацетат аммония-уксусная кислота с 2% (об.) триэтиламина.

Должно быть понятно, что изобретение относится ко всем соответствующим комбинациям конкретных упомянутых при этом вариантов осуществлений.

Осуществления настоящего изобретения будут более очевидны из следующих примеров, которые приводятся только в качестве иллюстрации и не должны рассматриваться как ограничивающие охват изобретения.

ПРИМЕР

Стадия 1: Приготовление стандартных растворов ризедроната в моче с использованием мочи мышей или крыс

Исходный раствор ризедроната 1 мг/мл готовили растворением ризедроната в воде для ВЭЖХ. Стандартные растворы ризедроната в концентрации 250 мкг/мл, 100 мкг/мл и 50 мкг/мл готовили разбавлением 250 мкл, 100 мкл и 50 мкл исходного 1 мг/мл раствора ризедроната до 1 мл водой для ВЭЖХ, соответственно. Соответствующие разбавления стандартных растворов ризедроната 250 мкг/мл, 100 мкг/мл и 50 мкг/мл проводили для того, чтобы получить рабочие растворы ризедроната с концентрацией 25 мкг/мл, 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2,5 мкг/мл и 1 мкг/мл. Стандартные растворы ризедроната в моче с концентрациями от 10 нг/мл до 2500 нг/мл готовили добавлением 4 мкл каждого рабочего раствора к 0,4 мл мочи контрольных мышей или крыс (то есть мочи мышей или крыс, которые не получали ризедронат).

Стадия 2: Приготовление образца

0,4 мл мочи мыши или крысы, получавшей ризедронат, переносили в стеклянную пробирку размерами 10×75 мм для культивирования тканей. 100 мкл раствора внутреннего стандарта, то есть 10 мкг/мл водного раствора дезоксиризедроната, и 100 мкл 5% ТЕА в воде добавляли ко всем стандартам мочи с ризедронатом и пробам мочи, соответственно.

Экстракцию образца осуществляли на колонке Oasis HLB 30 мг (1 мл, которую производит и продает компания Waters Corporation, № по каталогу: WAT094225). Колонки обрабатывали 1 мл метанола, а затем 0,5 мл 1% TEA в воде. На колонку наносили пробу мочи. Колонку промывали 0,5 мл 1% TEA в воде и 0,5 мл 1% муравьиной кислоты в метаноле, а затем анализируемый раствор и внутренний стандарт элюировали в две последовательные стадии элюирования 0,75 мл смеси 60% метанола в воде, содержащей 3 мМ EDTA. В ходе экстракции образцов для создания потока жидкости через колонки на каждой стадии использовали вакуум (5-15 фунтов на кв. дюйм). Элюированный раствор сушили в атмосфере азота при 37°C в течение 70 минут, а затем остаток разбавляли в 100 мкл смеси 10% метанола/90% 0,05 M NH4Ac-NH4OH буфера (pH 9,26).

Стадия 3: ЖХ-МС/МС анализ

Анализ ризедроната проводили с помощью системы ЖХ-МС/МС API 4000 (продаваемой MDS Sciex), включающей насос Shimadzu LC-10AD, системный контроллер SCL-10A VP, автоматическое устройство ввода пробы Leap Technologies HTS PAL и квадрупольный масс-спектрометр с тройной линзой API 4000.

Ризедронат и внутренний стандарт разделяли на колонке Inertsil Phenyl-3 для ВЭЖХ (3 мкл, 50×030 мм, которую производит и продает компания Varian, Inc., № по каталогу: 0408-050x030) посредством градиентного элюирования смесью раствора A и раствора B в течение 6 минут, при этом объем раствора A увеличивался с 10% до 95%. Раствор A представляет собой 90% метанола в воде, а раствор B - 10 мМ буфер ацетат аммония-уксусная кислота (pH 5,0) с 2% триэтиламина. Расход поддерживали на постоянном уровне 0,2 мл/мин. Образец (10 мкл разбавленного раствора) напрямую вводили в колонку для ВЭЖХ. Масс-спектрометр запрограммирован отслеживать переход m/z 281,9→63,1 для ризедроната в режиме определения отрицательных ионов с энергией столкновения -58 В. Переход m/z 265,8→79,2 используют для измерений внутреннего стандарта дезоксиризедроната. Температура источника установлена на уровне 350°C. Используемое время прогона для анализа составляет 6 минут.

Результаты

Линейность

Зависимость для стандартов ризедроната в моче мышей или крыс является линейной в интервале от 10 до 2500 нг/мл при НПКП 10 нг/мл. Определенная точность при НПКП составляет 14,8% с разбросом 17,8% (n=3). В таблице 1 приводятся параметры регрессии, полученные в ходе проверки. При сопоставлении результатов ежедневного анализа для ризедроната получены коэффициенты корреляции 0,98 или выше. На фиг. 6 приводится характерная калибровочная кривая.

Специфичность

Небольшой пик со временем удерживания 2,27 был зарегистрирован в моче контрольных мышей, но интенсивность пика при НПКП (10 нг/мл) более чем в три раза превышает интенсивность пика в моче контрольных мышей (см. фиг. 3 и фиг. 4). Таким образом, есть возможность количественного определения концентрации ризедроната на уровне 10 нг/мл.

Разброс

Разброс определяется как процент коэффициента вариации измеряемых концентраций для каждого контрольного уровня в ходе исследования. Коэффициент вариации для контрольных образцов мочи мышей в течение одного дня менялся в пределах от 2,2 до 9,6%. Ежедневный разброс для контрольных образцов при 3 уровнях концентрации менялся от 5,2 до 10,3%. Значения разброса для стандартов в течение одного дня и нескольких дней менялись в пределах от 0,3 до 26%.

Точность

Точность анализа выражается как разница в процентах между средней определяемой концентрацией контроля качества и теоретическим значением.

Точность для контрольных образцов мочи мышей в течение одного дня находилась в пределах от -5,3 до 4,4%. Точность в период нескольких дней определяли в течение трех дней анализа с использованием контрольных образцов на 3 уровнях концентрации. Точность в период нескольких дней менялась от -4,0 до 6,0%. Точность обратно рассчитываемых концентраций в стандартах мочи мышей находится в пределах ±15%.

Таблица 2
Точность и разброс стандартов калибровки ризедроната
в моче мышей
Пробег или дата Номинальная концентрация (нг/мл) 10 25 50 100 250 500 1000 2500 В течение дня №1 7,93 20,7 49,4 100 237 422 995 2460 №2 13,3 22 42,8 91,6 238 388 868 2470 №3 9,94 25,4 50,6 97 253 476 976 2500 Среднее 10,39 22,7 47,6 96,2 243 429 946 2477 СО 2,71 2,43 4,20 4,26 8,96 44,38 68,50 20,82 КВ% 26,1 10,7 8,8 4,4 3,7 10,4 7,2 0,8 Разн% 3,9 -9,2 -4,8 -3,8 -2,9 -14,3 -5,4 -0,9 По дням День 1 13,8 24,7 46,9 93,5 237 532 1120 2610 День 2 10,7 21,5 50,6 107 248 501 1010 2640 День 3 9,94 25,4 50,6 97 253 476 976 2500 Среднее 11,48 23,9 49,4 99,2 246 503 1035 2583 СО 2,04 2,08 2,14 7,01 8,19 28,05 75,27 73,71 КВ% 17,8 8,7 4,3 7,1 3,3 5,6 7,3 2,9 Разн% 14,8 -4,5 -1,3 -0,8 -1,6 0,6 3,5 3,3

Таблица 3
Точность и разброс образцов контроля качества ризедроната в моче мышей
Дата Номинальная концентрация (нг/мл) 25 250 2500 День 1 28,2 257 2900 30 290 2580 26,1 236 2870 День 2 28,9 226 2650 27,2 208 2800 25,5 238 2470 День 3 27,1 244 2650 24,1 246 2670 24,4 231 2520 23,8 204 2600 20,6 259 2610 В течение дня (День 3) Среднее 24,0 237 2610 СО 2,31 20,8 57,9 КВ% 9,6 8,8 2,2 Разн% -4 -5,28 4,4 По дням Среднее 26,0 240 2665 СО 2,69 24,1 138 КВ% 10,3 10,1 5,2 Разн% 4,0 -4,0 6,6

Выход

Выход ризедроната в экстрагированной моче мышей по сравнению с экстрагированным контролем мочи мышей с добавленным чистым веществом составляет около 51,3%.

Таблица 4
Выход ризедроната из проб мочи мышей (250 нг/мл)
Пробег Экстрагированная проба мочи (площадь пика) Экстрагированная контрольная проба мочи
Площадь пика пробы с добавленным чистым веществом
№1 12400 30400 №2 18000 28800 №3 16600 29800 №4 18100 36000 №5 14500 30300 Среднее 15920 31060 СО 2447 2833 КВ% 15,4 9,1 Выход (%) 51,3

Осуществления настоящего изобретения могут принимать другие конкретные формы, которые не будут затрагивать сущности изобретения или его основных положений.

Похожие патенты RU2467332C2

название год авторы номер документа
Способ подготовки пробы мочи для определения монометилфталата, моноэтилфталата, монобутилфталата, монобензилфталата, моноэтилгексилфталата методом высокоэффективной жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии 2019
  • Зайцева Нина Владимировна
  • Уланова Татьяна Сергеевна
  • Карнажицкая Татьяна Дмитриевна
  • Пермякова Татьяна Сергеевна
RU2687738C1
ВЫСОКОЧУВСТВИТЕЛЬНЫЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА КОМПОНЕНТОВ, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ТРАВ 2011
  • Судзуки Каёко
  • Судзуки Цунехару
  • Цукахара Митико
  • Харута Юко
  • Хатта Акира
  • Хамада Юдзи
  • Иноэ Хидэо
RU2558042C2
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИМЕТИЛТЕРЕФТАЛАТА В МОЧЕ МЕТОДОМ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ 2010
  • Зайцева Нина Владимировна
  • Уланова Татьяна Сергеевна
  • Карнажицкая Татьяна Дмитриевна
  • Кислицина Анастасия Витальевна
RU2425380C1
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕНЗ(А)ПИРЕНА В МОЧЕ МЕТОДОМ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ 2011
  • Зайцева Нина Владимировна
  • Уланова Татьяна Сергеевна
  • Карнажицкая Татьяна Дмитриевна
  • Кислицина Анастасия Витальевна
  • Пшеничникова Екатерина Олеговна
  • Пермякова Татьяна Сергеевна
RU2466406C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ФУМАРОВОЙ И МАЛЕИНОВОЙ КИСЛОТ В ПЛАЗМЕ КРОВИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ 2018
  • Зайцева Нина Владимировна
  • Уланова Татьяна Сергеевна
  • Карнажицкая Татьяна Дмитриевна
RU2677341C1
Способ количественного определения антигипертензивных лекарственных веществ в плазме крови 2022
  • Мыльников Павел Юрьевич
  • Щулькин Алексей Владимирович
  • Селезнёв Сергей Владимирович
  • Попова Наталья Михайловна
  • Якушин Сергей Степанович
  • Якушева Елена Николаевна
RU2803887C1
СПОСОБ ОДНОВРЕМЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОМПЛЕКСА АНТИБИОТИКОВ (ТЕТРАЦИКЛИНОВАЯ ГРУППА, ЛЕВОМИЦЕТИН, БАЦИТРАЦИН) В МЯСЕ И МЯСНЫХ ПРОДУКТАХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ 2019
  • Галяутдинова Гульнара Габитовна
  • Босяков Владимир Игоревич
  • Егоров Владислав Иванович
  • Семенов Эдуард Ильясович
  • Сайфутдинов Александр Маратович
  • Балымова Мария Викторовна
  • Маланьев Андрей Валериянович
RU2729620C1
Способ количественного определения дисульфирама в биологических средах 2019
  • Фоменко Владислав Викторович
  • Салахутдинов Нариман Фаридович
  • Рогачев Артем Дмитриевич
  • Сергеевичев Давид Сергеевич
RU2701524C1
Способ количественного определения малонового диальдегида методом ВЭЖХ-МC/МС 2022
  • Мыльников Павел Юрьевич
  • Щулькин Алексей Владимирович
  • Абаленихина Юлия Владимировна
  • Попова Наталья Михайловна
  • Якушева Елена Николаевна
RU2789058C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАЦИТРАЦИНА В МЯСЕ И МЯСНЫХ ПРОДУКТАХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ 2018
  • Галяутдинова Гульнара Габитовна
  • Босяков Владимир Игоревич
  • Егоров Владислав Иванович
  • Семенов Эдуард Ильясович
  • Папуниди Константин Христофорович
  • Сайфутдинов Александр Маратович
RU2696010C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 467 332 C2

Реферат патента 2012 года КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РИЗЕДРОНАТА В МОЧЕ ПО ТФЭ/ЖХ-МС/МС

Изобретение касается способа ТФЭ/ЖХ-МС/МС для количественного определения ризедроната в пробе мочи. Способ включает: a) добавление раствора внутреннего стандарта к пробе мочи; b) нанесение пробы мочи на обработанную хроматографическую колонку, элюирование ризедроната в вакууме; e) упаривание элюированного раствора и разбавление для получения образеца в виде смеси ризедроната и внутреннего стандарта; f) анализ образца смеси в системе жидкостная хроматография высокого давления - масс-спектрометрия/масс-спектрометрия (ЖХ-МС/МС). 3 н. и 13 з.п. ф-лы, 4 табл., 6 ил.

Формула изобретения RU 2 467 332 C2

1. Способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, включающий:
a) добавление раствора внутреннего стандарта к пробе мочи;
b) нанесение пробы мочи на колонку Oasis® HLB, предварительно обработанную метанолом;
c) промывку колонки примерно 1 об.% триэтаноламина (TEA) в воде и примерно 1 об.% муравьиной кислоты в метаноле;
d) элюирование ризедроната, по крайней мере однократное, смесью примерно 60 об.% метанола и примерно 40 об.% воды, содержащей около 3 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA), в вакууме;
e) упаривание элюированного раствора и разбавление смесью 10 об.% метанола и 90 об.% 0,05 М NH4Ac-NH4OH буфера, чтобы получить образец в виде смеси ризедроната и внутреннего стандарта; и
f) анализ образца смеси в системе жидкостная хроматография высокого давления - масс-спектрометрия/масс-спектрометрия (ЖХ-МС/МС).

2. Способ по п.1, в котором пробой мочи является проба мочи мыши или крысы.

3. Способ по п.1, в котором внутренним стандартом является дезоксиризедронат.

4. Способ по п.1, в котором внутренним стандартом является дезоксиризедронат, который добавляется в виде водного раствора.

5. Способ по п.1, в котором внутренним стандартом является дезоксиризедронат, который добавляется в виде водного раствора с концентрацией примерно 10 мкг/мл.

6. Способ по п.1, в котором в качестве колонки Oasis® HLB используется колонка Oasis® HLB на 30 мг.

7. Способ по п.1, в котором объем пробы мочи составляет примерно 0,4 мл.

8. Способ по п.1, в котором колонку предварительно обрабатывают примерно 1 мл метанола.

9. Способ по п.1, в котором колонку предварительно обрабатывают примерно 1 мл метанола, а затем примерно 0,5 мл 1 об.% TEA в воде.

10. Способ по п.1, в котором колонку промывают примерно 0,5 мл 1 об.% TEA в воде и примерно 0,5 мл 1 об.% муравьиной кислоты в метаноле.

11. Способ по п.1, в котором объем смеси примерно 60 об.% метанола и примерно 40 об.% воды, содержащей около 3 мМ EDTA, составляет около 1,5 мл.

12. Способ по п.1, в котором ризедронат элюируют дважды примерно 0,75 мл смеси примерно 60 об.% метанола и примерно 40 об.% воды, содержащей около 3 мМ EDTA.

13. Способ по п.1, в котором объем смеси примерно 10 об.% метанола и примерно 90 об.% 0,05 М NH4Ac-NH4OH буфера составляет около 100 мкл.

14. Способ по п.1, в котором внутренним стандартом является дезоксиризедронат, и анализ смеси образца в системе ЖХ-МС/МС включает разделение ризедроната и дезоксиризедроната посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на колонке Inertsil Phenyl-3 градиентным элюированием смесью раствора А и раствора В, при этом объем раствора А увеличивается примерно с 10 об.% до примерно 95 об.%, и где раствор А представляет собой примерно 90 об.% метанола в воде, а раствор В представляет собой примерно 10 мМ буфера ацетат аммония-уксусная кислота с 2 об.% триэтиламина.

15. Способ количественного определения ризедроната в пробе мочи мыши или крысы, включающий:
a) добавление примерно 100 мкл примерно 10 мкг/мл водного раствора дезоксиризедроната к примерно 0,4 мл пробы мочи мышей или крыс;
b) нанесение пробы мочи мышей или крыс на колонку Oasis® HLB 30 мг, предварительно обработанную примерно 1 мл метанола, а затем примерно 0,5 мл 1 об.% TEA в воде;
c) промывку колонки примерно 0,5 мл 1 об.% TEA в воде и примерно 0,5 мл 1 об.% муравьиной кислоты в метаноле;
d) элюирование ризедроната примерно 1,5 мл смеси примерно 60 об.% метанола и примерно 40 об.% воды, содержащей около 3 мМ EDTA, в вакууме;
e) упаривание элюированного раствора и разбавление примерно 100 мкл смеси примерно 10 об.% метанола и примерно 90 об.% примерно 0,05 М NH4Ac-NH4OH буфера, чтобы получить образец в виде смеси ризедроната и дезоксиризедроната; и
f) анализ смеси образца в системе ЖХ-МС/МС, где ризедронат и дезоксиризедронат разделяют посредством ВЭЖХ на колонке Inertsil Phenyl-3 градиентным элюированием смесью раствора А и раствора В, при этом объем раствора А увеличивается примерно с 10 об.% до примерно 95 об.%, и где раствор А представляет собой примерно 90 об.% метанола в воде, а раствор В представляет собой примерно 10 мМ буфера ацетат аммония-уксусная кислота с 2 об.% триэтиламина.

16. Способ количественного определения ризедроната в пробе мочи мыши или крысы, включающий:
a) добавление примерно 100 мкл примерно 10 мкг/мл водного раствора дезоксиризедроната к примерно 0,4 мл пробы мочи мышей или крыс;
b) нанесение пробы мочи мышей или крыс на колонку Oasis® HLB 30 мг, предварительно обработанную примерно 1 мл метанола, а затем примерно 0,5 мл 1 об.% TEA в воде;
c) промывку колонки примерно 0,5 мл 1 об.% TEA в воде и примерно 0,5 мл 1 об.% муравьиной кислоты в метаноле;
d) элюирование ризедроната два раза примерно 0,75 мл смеси примерно 60 об.% метанола и примерно 40 об.% воды, содержащей около 3 мМ EDTA, в вакууме;
e) упаривание элюированного раствора и разбавление примерно 100 мкл смеси примерно 10 об.% метанола и примерно 90 об.% примерно 0,05 М NH4Ac-NH4OH буфера, чтобы получить образец в виде смеси ризедроната и дезоксиризедроната; и
f) анализ смеси образца в системе ЖХ-МС/МС, где ризедронат и дезоксиризедронат разделяют посредством ВЭЖХ на колонке Inertsil Phenyl-3 градиентным элюированием смесью раствора А и раствора В, при этом объем раствора А увеличивается примерно с 10 об.% до примерно 95 об.%, и где раствор А представляет собой примерно 90 об.% метанола в воде, а раствор В представляет собой примерно 10 мМ буфера ацетат аммония-уксусная кислота с 2 об.% триэтиламина.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2012 года RU2467332C2

WO 2006127973 A2, 30.11.2006
FABRIZIO BRUNER
The science of chromatography: lectures
Urbino, May 27-31, 1985, p.224-225
Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов 1917
  • Гордон И.Д.
SU2A1

RU 2 467 332 C2

Авторы

Шэнь Лидо

Лу Юни

Даты

2012-11-20Публикация

2008-03-05Подача