СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИМЕТИЛТЕРЕФТАЛАТА В МОЧЕ МЕТОДОМ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ Российский патент 2011 года по МПК G01N33/50 G01N30/02 

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения диметилтерефталата (диметилового эфира терефталевой кислоты) в моче, для оценки риска здоровью человека и разработки мероприятий по обеспечению химической безопасности.

Из уровня техники известен ряд методик определения количества подобных веществ. Так, из источника [1] известен способ определения диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) в воде. Согласно известному способу измерение выполняют на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором. Температура испарителя 280°С, температура детектора и колонок 165°С, расход газа-носителя (аргона) 40 см³/мин. Определению не мешают п-ксилол, ацетальдегид, дифенил, дифенилоксид, муравьиная, уксусная, бензойная, п-толуиловая, терефталевая и изофталевая кислоты, а также метиловые эфиры этих кислот при содержании их в воде до 10 ПДК.

Концентрирование из воды проводят методом жидкостной экстракции: в делительную воронку, вместимостью 100 см³ помещают 50 см³ анализируемой воды, вносят 10 г натрия хлорида, подкисляют хлористо-водородной кислотой до рН 3, добавляют внутренний стандарт - 0,1 см³ раствора дипропиладипината в этиловом спирте (0,05 мг) и экстрагент - 2 см³ хлороформа. Экстрагируют в течение 2 мин, и через 15 мин нижний хлороформный слой помещают в бюкс. Экстракт упаривают в токе воздуха в вытяжном шкафу до объема 0,2-0,3 см³ и хроматографируют 1-2 мм³ экстракта. Диапазон измеряемых концентраций составляет 0,15-3 мг/дм³. Недостаток известного способа - низкая чувствительность определения.

Также известен способ определения в моче 16 моноэфиров фталевой кислоты [2] с использованием твердофазной экстракции и высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией. Согласно этому способу, образцы мочи обрабатывают ультразвуком в течение 5 минут и перемешивают встряхиванием. Затем к 100 мм³ мочи добавляют 25 мм³ ферментативного раствора и проводят реакцию деглюкуронизации при температуре 37°С в течение 90 мин. Затем реакцию деглюкуронизации останавливают, добавляя к пробе 50 мм³ уксусной (ледяной) кислоты и 200 мм³ 5%-ного водного раствора ацетонитрила. Анализ проводят на жидкостном хроматографе Agilent серии 1100, соединенном с квадрупольным масс-спектрометром с электроионизационным распылителем. Подвижная фаза - 0,1% уксусная кислота в ацетонитриле, оптимизированная в градиентном режиме, скорость движения элюента 0,35 см³/мин. Погрешность определения составляет 21,0%. Предел обнаружения моноэфиров фталевой кислоты составляет 0,00011-0,0043 мг/дм³. По данной известной методике анализируются лишь моноэфиры о-фталевой кислоты. Диметиловый эфир терефталевой кислоты не определяется описанным выше способом. Кроме того, длительная пробоподготовка и дорогостоящее оборудование не приемлемы для использования известного способа при проведении массового анализа.

Из источника информации [3] известен метод определения диэтилгексилфталата в образцах мочи газовой хроматографией/масс-спектрометрией. Проба мочи в количестве 0,5 см³ подкислялась до рН=2-3 и извлекалась дважды 1,5 см³ этилацетата до и после ферментативного гидролиза с бета-глюкуронидазой. Объединенные экстракты высушивали под струей азота и проводили реакцию дериватизации с диазометаном для перевода исследуемых веществ в соответствующие метиловые эфиры. Количественный анализ диэтилгексилфталата и продуктов его гидролиза выполнен газовой хроматографией/масс-спектрометрией на капиллярной колонке с массовым спектрометром (Германия). Температура детектора 280°С, температура термостата колонки запрограммирована следующим образом: 40°С (1 минута), повышение до 80°С со скоростью 20°С/мин, повышение до 320°С со скоростью 10°С/мин, выдержка (5 минут). Газ-носитель - гелий. Предел определения 0,01 мг/дм³.

В источнике информации [4] описан способ определения концентрации фталевой кислоты и ее изомеров (изофталевой и терефталевой кислот), а также их производных, в том числе диметилтерефталата, в микробиологическом субстрате, используемом для биодеградации, методом высокоэффективной жидкостной хроматографиии (ВЭЖХ) с УФ-детектором. Образцы субстрата центрифугируют 3 минуты со скоростью 10000 об/мин, разбавляют до концентраций, меньше, чем 50 мг/дм³, и анализируют аликвоты объемом 10 мкл. Разделение смеси достигается при использовании колонки (100×3 мм), заполненной фазой Chromospher 5C₁₈. В качестве элюирующей жидкости используется смесь метанола и 1%-ного водного раствора уксусной кислоты в соотношении 40:60, расход подвижной фазы 0,3 мл/мин. Обнаружение отдельных компонентов смеси проводится ультрафиолетовым детектором (Spectroflow 773) при длине волны 230 нм. Недостаток известного метода - низкая чувствительность определения.

Также известен способ количественного определения фталатов (диэтилфталата, дибутилфталата, дигексилфталата и диоктилфталата) в поверхностных и питьевых водах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с предварительным проведением процедуры твердофазной экстракции [5]. Согласно известному способу концентрирование проб воды методом твердофазной экстракции проводят путем пропускания 250 см³ анализируемой пробы воды со скоростью 10-20 см³/мин через картридж марки Diapak П, который предварительно конденционируют 12 см³ метанола и промывают 18 см³ дистиллированной воды. После нанесения на сорбент Diapak П исследуемой пробы воды картридж промывают 6 см³ дистиллированной воды и сушат под вакуумом в течение 7 мин. Затем элюируют фталаты 1,5 см³ метанола, упаривают растворитель в токе азота и растворяют остаток в 100 мм³ метанола. Аликвотную часть экстракта анализируют на жидкостном хроматографе «Agilent серии 1100» с диоидно-матричным детектором при длине волны детектирования 220 нм. Нижний предел определения указанных фталатов в воде составляет 0,0005-0,024 мг/дм³. Данной методикой не определяется диметиловый эфир терефталевой кислоты.

Указанный известный способ неприменим для определения диметилтерефталата в моче с нижним пределом определения 0,0005 мг/дм³, т.к. при анализе мочи необходимо проводить 2 параллельных определения одного образца и поэтому потребуется объем пробы мочи в количестве 500 мл, что не всегда выполнимо при неинвазивном отборе пробы. Кроме того, в силу мешающего влияния матрицы, снижающей аналитический сигнал, нижний предел определения диметилтерефталата в моче будет выше указанного нижнего предела определения для воды, как в этом известном способе.

Технический результат, обеспечиваемый предлагаемым изобретением, заключается в обеспечении высокой чувствительности способа определения диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) в моче, в том числе в многокомпонентных пробах, при одновременном обеспечении селективности и его доступности для серийных анализов.

Указанный технический результат достигается предлагаемым способом количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии, согласно которому производят отбор пробы мочи, подвергают ее центрифугированию, осуществляют твердофазную экстракцию на сорбенте Oasis HLB с использованием для извлечения диметилтерефталата экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, при этом указанную твердофазную экстракцию проводят путем последовательного пропускания через сорбент 100%-ного ацетонитрила, дистиллированной воды, пробы мочи после центрифугирования, дистиллированной воды, 20%-ного водного раствора ацетонитрила и экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, затем полученный экстракт анализируют методом жидкостной хроматографии, используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме, который осуществляют при хроматографии путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об.%, затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин, а количество диметилтерефталата устанавливают по градуировочному графику.

Центрифугирование проводят в течение 5 мин со скоростью 2000 об/мин.

Скорость потока подвижной фазы составляет 1,0 см³/мин.

Объемное соотношение пробы мочи и экстрагента составляет 3:1 соответственно.

Хроматографию проводят на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором при длине волны возбуждения 246 нм и длине волны эмиссии 330 нм.

Указанный технический результат достигается за счет следующего.

Благодаря тому, что отобранную пробу мочи подвергают центрифугированию, обеспечивается денатурация белка, что исключает его влияние на точность определения.

Экспериментальным путем было установлено, что высокая чувствительность и точность определения диметилтерефталата в пробе мочи достигается лишь при строго определенной последовательности осуществления твердофазной экстракции на сорбенте Oasis HLB с использованием в качестве экстрагента - 100%-ного ацетонитрила. При этом пропускание (конденционирование) сорбента 100%-ным ацетонитрилом и 1 см³ дистиллированной воды обеспечивает очистку сорбента от возможного присутствия посторонних примесей и увлажнение сорбента перед пропусканием пробы мочи (в целом - это подготовка сорбента к анализу), а промывка сорбента после пробы мочи дистиллированной водой и 20%-ным водным раствором ацетонитрила необходима для цели удаления с сорбента слабоудерживаемых компонентов матрицы и повышения селективности извлечения. Использование водного раствора ацетонитрила именно такой концентрации обеспечивает хорошее удаление ненужных компонентов, и в то же время не производится экстракция.

Проведение последующего анализа экстракта методом жидкостной хроматографии с особыми режимами, а именно: используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме (градиентное элюирование), который осуществляют путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об%, затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин, соответствует оптимизации элюирования, а значит, обеспечивает высокую чувствительность способа. Следует пояснить, что изменение объемного соотношения ацетонитрила и воды в подвижной фазе осуществляется за счет работы 4-канального градиентного насоса Agilent 1200, смешивающего до 4 компонентов подвижной фазы.

Скорость потока подвижной фазы 1,0 см³/мин является оптимальной при проведении исследований.

Объемное соотношение пробы мочи и экстрагента 3:1 соответственно выбрано исходя из результатов экспериментальных исследований по изучению полноты экстракции диметилтерефталата с картриджей Oasis HLB 3сс в диапазоне определяемых концентраций 0,001-1,0 мг/дм³ в моче. Для степени извлечения, равной 99,3% от дозы, введенной в пробу мочи, не содержащей диметилтерефталат, достаточно пропустить через картридж 1 см³ 100%-ного ацетонитрила, причем сначала пропускают 0,5 см³ 100%-ного ацетонитрила в первую виалу, а затем следующие 0,5 см³ ацетонитрила во вторую виалу. Содержимое виал анализируют отдельно, а конечный результат выдают, суммируя обнаруженные количества диметилтерефталата в первой и второй виалах.

Исследование экстракта на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором при длине волны возбуждения 246 нм и длине волны эмиссии 330 нм обусловлено достижением максимального сигнала флуориметрического детектора, что влияет на чувствительность и точность определения.

Для осуществления предлагаемого способа проводят следующие операции в нижеуказанной последовательности:

- производят отбор пробы мочи в количестве 10 см³;

- переносят указанную пробу в центрифужную пробирку и центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 5 мин;

- отбирают 6 см³ верхнего слоя мочи и проводят твердофазную экстракцию, последовательно пропуская под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 1 см³ 100%-ного ацетонитрила, 1 см³ дистиллированной воды, 3 см³ мочи (пропускают только 3 см³, потому что проводят 2 параллельных определения одного образца, результат представляют как среднеарифметическое двух параллельных определений), 3 см³ дистиллированной воды, 2 см³ 20%-ного водного раствора ацетонитрила со скоростью потока 1 см³/мин. Затем переносят патрон с сорбентом в накопительный сосуд (бюкс) и пропускают через сорбент 1,0 см³ экстрагента - 100%-ного ацетонитрила;

- аликвотную часть полученного экстракта в количестве 10 мм³ анализируют на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором, используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме, который осуществляют при хроматографии путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об.% (т.е. 25 об. ч. ацетонитрила и 75 об. ч. воды), затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% (т.е. 90 об. ч. ацетонитрила и 10 об. ч. воды) и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин;

- количественное содержание диметилтерефталата устанавливают по градуировочному графику, который строится посредством использования отобранных у контрольной группы детей проб мочи и стандартных растворов диметилтерефталата.

Для построения градуировочного графика в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 50,0 мг диметилтерефталата (диметилового эфира терефталевой кислоты) и доводят метанолом до метки. Концентрация диметилтерефталата в исходном растворе (раствор №1) составляет 0,5 мг/см³. Затем 0,1 см³ раствора №1 вносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят метанолом до метки. Концентрация диметилтерефталата в разбавленном растворе (раствор №2) составляет 0,5 мг/дм³. Используют свежеприготовленный раствор.

Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм²) от концентрации диметилтерефталата в моче (мг/дм³) и строится по 6 сериям рабочих стандартных растворов. Каждую серию, состоящую из 3 стандартных растворов, готовят в мерных колбах объемом 25 см³. Для этого в каждую колбу вносят растворы для градуировки №1 и 2 в соответствии с таблицами 1 и 2, доводят объем колбы до метки мочой и перемешивают. По 10 см³ свежеприготовленных стандартных растворов переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 5 мин. Отбирают 6 см³ верхнего слоя мочи и проводят твердофазную экстракцию на сорбенте Oasis HLB 3сс как в предлагаемом способе. Полученные экстракты хроматографируют на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором.

Таблица 1 Стандартные растворы для установления градуировочной характеристики при определении диметилтерефталата в моче в диапазоне концентраций 0,001-0,020 мг/дм³ Номер раствора 1 2 3 4 5 6 Объем раствора №2, см³ 0,05 0,10 0,15 0,25 0,50 1,00 Количество диметилтерефталата в градуировочном растворе, мкг 0,025 0,050 0,075 0,125 0,250 0,500 Массовая концентрация диметилтерефталата в моче, мг/дм³ 0,001 0,002 0,003 0,005 0,010 0,020

Таблица 2 Стандартные растворы для установления градуировочной характеристики при определении диметилтерефталата в моче в диапазоне концентраций 0,020-1,0 мг/дм³ Номер раствора 1 2 3 4 5 6 Объем раствора №2, см³ 1,0 2,5 5,0 - - - Объем раствора №1, см³ - - - 0,005 0,012 0,025 Количество диметилтерефталата в градуировочном растворе, мкг 0,50 1,25 2,5 5,0 12,0 25,0 Массовая концентрация диметилтерефталата в моче, мг/дм³ 0,020 0,05 0,1 0,2 0,48 1,0

Отработка оптимальных жидкостно-хроматографических параметров для определения диметилтерефталата в моче предлагаемым способом осуществлялась с использованием жидкостного хроматографа «Agilent 1200», оснащенного термостатом колонок, градиентным насосом и флуориметрическим детектором.

Полнота разделения диметилтерефталата в присутствии диметиловых эфиров фталевой и изофталевой кислот, монометиловых эфиров фталевой, изофталевой и терефталевой кислот, а также фталевой, изофталевой и терефталевой кислот достигнута на колонке 4,6×150 мм с сорбентом Eclipse XDB-C₁₈ при температуре колонки 27°С, при использовании в качестве подвижной фазы вначале смеси ацетонитрила и воды в объемном соотношении 25:75 со скоростью потока 1,0 см³/мин и оптимизации элюирования в градиентном режиме (10 мин подача подвижной фазы 25 об.% ацетонитрила и 75 об.% воды, увеличение ацетонитрила с 25 об.% до 90 об.% в течение 5 мин, 5 мин подача 90%-ного ацетонитрила, затем снижение ацетонитрила до 25 об.% в течение 5 мин и подача 25%-ного ацетонитрила в течение 10 мин до уравновешивания колонки). Максимальный сигнал флуориметрического детектора получен при длине волны возбуждения 246 нм и длине волны эмиссии 330 нм. В случае, если не был применен градиентный режим элюирования чувствительность способа резко изменялась.

В процессе исследований по выбору оптимальных условий проведения твердофазной экстракции диметилтерефталата из мочи, включающей конденционирование сорбента Oasis HLB растворителем - 100%-ным ацетонитрилом и дистиллированной водой, промывку картриджа от мешающих компонентов мочи дистиллированной водой и 20%-ным водным раствором ацетонитрила после нанесения анализируемой пробы мочи на указанный сорбент и последующую десорбцию диметилтерефталата 100%-ным ацетонитрилом, в качестве экстрагента были апробированы следующие растворители: метанол, этанол, ацетонитрил и их водные растворы. Данные, полученные в ходе испытаний, приведены в таблице 3.

Таблица 3 Средние значения степени экстракции диметилтерефталата из мочи в зависимости от природы растворителя № опыта Растворитель (экстрагент) Степень экстракции, % 1 5%-ный водный раствор метанола 0 2 100%-ный метанол 20,5 3 100%-ный этанол 6,3 4 60%-ный водный раствор ацетонитрила 51,0 5 100%-ный ацетонитрил 99,3

Данные, приведенные в таблице 3, показывают, что максимальная степень экстракции диметилтерефталата из проб мочи была достигнута при использовании в качестве экстрагента 100%-ного ацетонитрила, который применяли в дальнейших исследованиях.

Экспериментальным путем также были установлены, наряду с необходимостью применения в качестве экстрагента 100%-ного ацетонитрила, и другие характеристики и режимы предлагаемого способа, обеспечивающие эффективное и селективное извлечение диметилтерефталата и повышение чувствительности и точности определения, а именно: центрифугирование пробы мочи при 2000 об/мин, использование при твердофазной экстракции 1 см³ 100%-ного ацетонитрила и 1 см³ дистиллированной воды для конденционирования сорбента, промывании картриджа 3 см³ дистиллированной воды и 2 см³ 20%-ного водного раствора ацетонитрила после пропускания анализируемой пробы мочи и экстракции 1,0 см³ 100%-ного ацетонитрила.

Пример конкретного выполнения предлагаемого способа.

Анализируют пробы мочи (обследуемая группа детей). Каждую пробу мочи анализируют дважды. Свежеотобранную пробу мочи объемом 10 см³ центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 5 мин. Отбирают 3 см верхнего слоя и проводят твердофазную экстракцию, последовательно пропуская под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 3сс 1 см³ 100%-ного ацетонитрила, 1 см³ дистиллированной воды, 3 см³ мочи, 3 см³ дистиллированной воды, 2 см³ 20%-ного водного раствора ацетонитрила. Затем переносят патрон с сорбентом в накопительный сосуд (бюкс) и пропускают через сорбент 1,0 см³ 100%-ного ацетонитрила. Скорость экстракции (скорость потока) 1 см³/мин. Аликвотную часть полученного экстракта отбирают и хроматографируют на жидкостном хроматографе «Agilent серии 1200» с флуориметрическим детектором на колонке 4,6×150 мм с сорбентом Eclipse XDB-C₁₈ при температуре колонки 27°С, при использовании в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила и воды со скоростью потока 1,0 см³/мин и оптимизации элюирования в градиентном режиме (10 мин подача подвижной фазы 25 об.% ацетонитрила и 75 об.% воды, увеличение ацетонитрила с 25 об.% до 90 об.% в течение 5 мин, 5 мин подача 90%-ного ацетонитрила, затем снижение ацетонитрила до 25 об.% в течение 5 мин и подача 25%-ного ацетонитрила в течение 10 мин до уравновешивания колонки). При этом длина волны возбуждения флуориметрического детектора составляла 246 нм и длина волны эмиссии 330 нм.

По градуировочному графику определяют содержание диметилтерефталата в пробах 1-5. Полученные результаты приведены в таблице 4.

Таблица 4 Результаты исследования образцов мочи на содержание диметилтерефталата № образца Результаты параллельных определений, мкг/см³ Результат измерения, мкг/см³ Относительная погрешность, % 1 0,0035 0,00325±0,0008 24,6 0,0030 2 0,0052 0,0050±0,0012 24,0 0,0048 3 0,0062 0,0061±0,0015 24,6 0,0060 4 0,0100 0,0105±0,0026 24,7 0,0110 5 0,0074 0,0071±0,0018 25,7 0,0068

Чувствительность определения диметилтерефталата в анализируемом объеме пробы мочи (10 мм³) составила 0,01 нг (или 0,001 мг/дм³). Погрешность определения не превышает 26%.

Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в таблицах 5 и 6.

Таблица 5 Диапазон измерений, значения показателей точности, повторяемости, воспроизводимости предлагаемого способа Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мг/дм³ (мкг/см³) Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости),σ_r, % Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости) σ_R, % Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности Р=0,95), ±δ, % Диметилтерефталат, от 0,001 до 0,02 вкл. 10,3 11,0 25,0 Диметилтерефталат, от 0,02 до 1,0 вкл. 6,3 9,7 29,4

Таблица 6 Значения пределов повторяемости и воспроизводимости предлагаемого способа при доверительной вероятности Р=0,95 Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мг/дм³ Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r_n, % Предел внутрилабораторной воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории, но в разных условиях), % Диметилтерефталат, от 0,001 до 0,02 вкл. 29,0 31,0 Диметилтерефталат, от 0,02 до 1,0 вкл. 17,3 27,0

Применение предлагаемого способа позволяет повысить чувствительность определения диметилтерефталата (диметилового эфира терефталевой кислоты) как минимум в 3 раза, например, по сравнению со способом, описанным в источнике информации [4].

Способ прост и может быть рекомендован для серийных анализов.

Источники информации

1. МУК 4.1.745-99. Газохроматографическое определение диметилового эфира терефталевой кислоты в воде. Сб. методических указаний Определение концентраций химических веществ в воде централизованных систем питьевого водоснабжения. Вып.2. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999.

2. Kato К., Silva M.J., Needham L.L., Calafat A.M. Determination of 16 Phthalate Metabolites in Urine Using Automated Sample Preparation and Online Preconcentration/High-Performance Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry // J. Analytical Chemistry, Vol.77, No.9, May 1, 2005 2985-2991.

3. Mettang Т., Alscher D., Pauli-Magnus С. Dunst R., Kuhlmann U., Rettenmeier A. Phthalic Acid Is the Main Metabolite of the Plasticizer Di(2-ethylhexyl) Phthalate in Peritoneal Dialysis Patients // Adv. Perit. Dial. 1999. - 15. - p.229-33.

4. Kleerebezem R., Hulshoff P., Lettinga G. Anaerobic biodegradability of phthalic acid isomers and related compounds // J. Biodegradation. - 10. - 1999. - 63-73.

5. Турнаев В.А., Третьяков Н.Ю., Турнаева Е.А. Хроматографические методы определения фталатов в поверхностных и питьевых водах // Вестник Тюменского государственного университета. - 2007. - №3. - с.139-146.

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии. Способ характеризуется тем, что производят отбор пробы мочи, подвергают ее центрифугированию, осуществляют твердофазную экстракцию на сорбенте Oasis HLB с использованием для извлечения диметилтерефталата экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, при этом указанную твердофазную экстракцию проводят путем последовательного пропускания через сорбент 100%-ного ацетонитрила, дистиллированной воды, пробы мочи после центрифугирования, дистиллированной воды, 20%-ного водного раствора ацетонитрила и экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, затем полученный экстракт анализируют методом жидкостной хроматографии, используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме, который осуществляют при хроматографии путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об.%, затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин, а количество диметилтерефталата устанавливают по градуировочному графику. Достигается высокая чувствительность способа, в том числе в многокомпонентных пробах, при одновременном обеспечении селективности и его доступности для серийных анализов. 4 з.п. ф-лы, 6 табл.

1. Способ количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии, характеризующийся тем, что производят отбор пробы мочи, подвергают ее центрифугированию, осуществляют твердофазную экстракцию на сорбенте Oasis HLB с использованием для извлечения диметилтерефталата экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, при этом указанную твердофазную экстракцию проводят путем последовательного пропускания через сорбент 100%-ного ацетонитрила, дистиллированной воды, пробы мочи после центрифугирования, дистиллированной воды, 20%-ного водного раствора ацетонитрила и экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, затем полученный экстракт анализируют методом жидкостной хроматографии, используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме, который осуществляют при хроматографии путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об.%, затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин, а количество диметилтерефталата устанавливают по градуировочному графику.

2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что центрифугирование проводят в течение 5 мин со скоростью 2000 об/мин.

3. Способ по п.1, характеризующийся тем, что скорость потока подвижной фазы составляет 1,0 см³/мин.

4. Способ по п.1, характеризующийся тем, что объемное соотношение пробы мочи и экстрагента составляет 3:1 соответственно.

5. Способ по п.1, характеризующийся тем, что хроматографию проводят на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором при длине волны возбуждения 246 нм и длине волны эмиссии 330 нм.