СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНТИЛИТОГЕННЫМ ДЕЙСТВИЕМ, АНТИЛИТАЛ Российский патент 2013 года по МПК A61K35/23 A61P13/04 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и касается средства для лечения мочекаменной болезни в эксперименте.

По статистике в среднем 10-12% населения развитых стран мира, в том числе Российской Федерации, страдают мочекаменной болезнью (МКБ). Учитывая, что население в РФ, по данным Росстата, составляет более 140 млн человек, приблизительное количество больных МКБ в РФ может превышать 14 миллионов человек.

Проблема эффективного лечения МКБ на настоящий момент далека от эффективного решения, в связи с чем крайне актуальна. Основной метод лечения МКБ сегодня - литотрипсия. Данный метод малоэффективен и опасен для здоровья человека. При этом арсенал эффективных и безопасных лекарственных средств для лечения МКБ весьма ограничен.

Известно лекарственное средство для лечения мочекаменной болезни, а именно натрия цитрат (Вощула В.И. - Мн.: ВЭВЭР, 2006. - 268 с.). Натрия цитрат относится к группе хелатирующих средств. Антилитогенное действие натрия цитрат оказывает вследствие связывания ионов кальция в моче путем образования хелатного комплекса.

Известное лекарственное средство широко применяют в терапии мочекаменной болезни, однако известен ряд существенных недостатков, ограничивающих его применение: ощелачивание мочи, повышающее риск образования фосфатных камней в почках, и узкий спектр фармакологической активности, затрагивающий только одно звено патогенеза мочекаменной болезни.

Известно лекарственное средство для лечения мочекаменной болезни - гидрохлортиазид, обладающее антилитогенным эффектом (Вощула В.И. - Мн.: ВЭВЭР, 2006. - 268 с.). Гидрохлортиазид относится к группе тиазидных диуретиков. Антилитогенный эффект гидрохлортиазид оказывает за счет стимуляции тока мочи и усилении реабсорбции ионов кальция в петле Генле и дистальных канальцах, что приводит к ослаблению гиперкальциурии.

Гидрохлортиазид широко применяют в терапии мочекаменной болезни, однако он имеет ряд существенных недостатков: усиление реабсорбции ионов кальция в указанных отделах нефрона приводит к пересыщению электролитом интерстициального пространства, что является одним из пусковых факторов кристаллизационного процесса; гипокалиемия, гиперурикемия, гипергликемия и др. (Брюханов В.М., Зверев Я.Ф. - Новосибирск: Церис, 2003. - 224 с.).

Техническим результатом заявляемого средства является расширение арсенала средств для лечения мочекаменной болезни.

Технический результат достигается тем, что в качестве средства для лечения мочекаменной болезни используют средство из свиных почек - Антилитал. Средство Антилитал, обладающее антилитогенным действием, получено методом лиофильного высушивания свежезамороженных свиных почек.

Для подтверждения эффективности средства Антилитал приведены таблицы.

В таблице 1 приведена динамика мочевой концентрации оксалат-иона и иона кальция в моче крыс контрольной группы, группы сравнения и опытной группы.

В таблице 2 приведена динамика активности маркерных ферментов в моче крыс контрольной группы, группы сравнения и опытной группы.

В таблице 3 приведено сравнение показателей оксидантного и антиоксидантного статусов в контрольной группе, группе сравнения и опытной группе.

В таблице 4 приведено сравнение количества и размеров кальциевых депозитов в контрольной группе, группе сравнения и опытной группе.

Заявляемое средство Антилитал представляет собой средство, полученное путем лиофильной сушки свежезамороженных свиных почек.

Средство Антилитал получают путем лиофильного высушивания свежезамороженных свиных почек. Процесс лиофильного высушивания свежезамороженных свиных почек состоит из следующих этапов:

1. Подготовка биологического материала - разморозка сырых свиных почек при комнатной температуре; удаление поверхностного жира; гомогенизация на лабораторном гомогенизаторе при 10 тыс. оборотов в минуту в течение 5 минут: взвешивание и распределение полученного гомогенизата на тарированные поддоны ровным слоем толщиной не более 0,5 см.

2. Заморозка (стеклование) полученного гомогенизата при температуре -45°С в течение 4 часов.

3. Первичная сушка - высушивание полученного гомогенизата в вакуумной камере при температуре -40°С и давлении 10 Па на протяжении 48 часов.

4. Вторичная сушка - досушивание полученного гомогенизата при положительной температуре 20°С в течение 6 часов.

5. Расфасовка полученного средства порциями по 100 г в специальные полиэтиленовые пакеты с последующей их запайкой.

В результате процесса лиофильного высушивания произходит удаление 80% влаги из полученного из свежезамороженных свиных почек гомогенизата при сохранении его структурной и функциональной целостности. Полученное средство представляет собой нерастворимый в воде порошок коричневого цвета с характерным запахом.

Авторы предлагают использование средства Антилитал, обладающего антилитогенным эффектом, в качестве средства для лечения мочекаменной болезни.

Фармакологические свойства средства Антилитал найдены экспериментальным путем.

Эксперименты по изучению эффективности средства Антилитал в отношении мочекаменной болезни были проведены на 45 самцах крыс Wistar массой 180-220 г. На протяжении эксперимента животные находились в индивидуальных клетках, приспособленных для сбора мочи, в условиях стандартного лабораторного рациона. По условиям эксперимента крысы были разбиты на 3 группы по 15 животных в каждой. В первой (контрольная группа) с целью моделирования экспериментальной мочекаменной болезни на протяжении 6 недель крысам предоставлялся в качестве питья в свободном доступе 1%-ный раствор этиленгликоля. Во второй (группа сравнения) крысы также 6 недель получали в свободном доступе 1%-ный раствор этиленгликоля, но при этом, начиная с 4-й недели вплоть до конца эксперимента им ежедневно вводился внутрь через зонд раствор натрия цитрата в дозе 300 мг/кг. В третьей (подопытная группа) также осуществлялось моделирование мочекаменной болезни по аналогичной методике и, начиная с 4-й недели вплоть до конца эксперимента крысы ежедневно получали средство Антилитал в дозе 1 г. Каждые 7 дней проводилось измерение концентрации в моче ионов оксалата и кальция; активности маркерных ферментов повреждения почечного эпителия: лактатдегидрогеназы (ЛДГ), γ-глютамилтрансферазы (ГГТ) и N-ацетил-β-D-глюкозаминидазы (НАГ); показателей оксидантного статуса (содержание в почках тиобарбитуратреактивных продуктов, ТБРП, и общей прооксидантной активности, ОПА) и активности антиоксидантных ферментов: глутатионпероксидаза (ГПО), супероксиддисмутаза (СОД) и каталаза (КАТ). По окончании эксперимента часть крыс декапитировали и мофометрически определяли количество и размер кальциевых депозитов, формирующихся в области почечного сосочка.

Статистическую обработку проводили с помощью программы «Statistica for Windows 6.0». Рассчитывали среднее значение, стандартную ошибку, для выявления достоверности различий использовали критерий Манна-Уитни.

Результаты исследований представлены в примерах 1, 2 и 3.

Пример 1. Установлено, что в результате проведенных экспериментов в контрольной группе у крыс, длительного употреблявших в качестве питья раствор этиленгликоля, происходит развитие экспериментальной мочекаменной болезни. При этом выявлены характерные биохимические и морфологические признаки заболевания. Оказалось, что с первых дней применения этиленгликоля в моче подопытных животных фиксировалось появление значительного количества оксалат-иона, чего не наблюдалось до начала опыта (Табл.1). Кроме того, отмечались признаки выраженного повреждения почечной ткани, о чем наглядно свидетельствовал последовательный рост ферментативной активности в моче (Табл.2). Параллельно было установлено, что в почках крыс, длительно получавших этиленгликоль, развивался мощный оксидативный стресс, сопровождавшийся многократным увеличением концентрации ТБРП и ослаблением активности антиоксидантных ферментов (Табл.3). Наконец, в результате морфологического исследования было установлено, что в области почечного сосочка фиксировались многочисленные кальциевые депозиты довольно крупного размера (Табл.4).

Пример 2. У животных, получавших натрия цитрат, происходило облегчение протекания экспериментальной мочекаменной болезни, что выражалось в характерных биохимических и морфологических проявлениях. Так, длительное введение препарата обусловило снижение мочевой концентрации ионов кальция относительно исходного уровня, в результате чего величина этого показателя была существенно меньше, чем в контроле заболевания (Табл.1). Наряду с этим, в группе сравнения наблюдалось уменьшение активности маркерных ферментов повреждения ренального эпителия в моче крыс с экспериментальной мочекаменной болезнью (Табл.2). Кроме того, у крыс группы сравнения фиксировалось снижение активность процесса СРО в почках, о чем свидетельствовало уменьшение относительно контроля показателей оксидантного статуса и восстановление антиоксидантной защиты нефроцитов до уровня интактной группы (Табл.3). В итоге проведенного лечения в группе сравнения количество кальциевых депозитов в области почечного сосочка уменьшилось относительно контроля заболевания в 3,4 раза, а их средний размер - в 1,9 раза (Табл.4).

Пример 3. У животных, получавших средство Антилитал, было зафиксировано существенное облегчение протекания экспериментальной мочекаменной болезни, признаками которого явились:

1. Ослабление пересыщения мочи оксалат-ионом и ионом кальция (Табл.1).

2. Уменьшение активности маркерных ферментов повреждения нефроцитов относительно контрольной группы и группы сравнения (Табл. 2).

3. Ослабление оксидативного стресса и усиление антирадикальной защиты нефроцитов за счет снижения концентрации ТБРП и ОПА и ростом активности ГПО, СОД и КАТ (Табл.3).

4. Уменьшение количества кальциевых депозитов (Табл.4), формирующихся в области почечного сосочка, относительно контроля заболевания в 12,5 раза, а относительно группы сравнения - в 3,6 раза, и их размера: относительно контроля заболевания в 1,9 раза, а относительно группы сравнения - в 1,7 раза (для всех - р<0,001).

Заявляемое средство Антилитал в эксперименте проявило выраженное терапевтическое действие при мочекаменной болезни, по силе которого оно превосходит аналоги. При этом средство Антилитал является средством биологического происхождения - получено из свиных почек; оказывает мощный лечебный эффект в эксперименте при мочекаменной болезни, не вызывая побочных эффектов.

Таблица 1   Мочевая концентрация оксалат-иона (мг/мл) Группа крыс Исходный уровень             7 дней 14 дней 21 день 28 дней 35 дней 42 дня             Контрольная группа               - 1,2±0,14 1,4±0,13 1,3±0,13 1,6±0,16 1,3±0,12 1,3±0,14               Группа сравнения - 0,9±0,04 0,7±0,09 1,0±0,14 0,8±0,09 1,1±0,12 0,7±0,06 Опытная группа - 1,8±0,19 1,6±0,12 1,5±0,11 1,0±0,07 1,1±0,05 1,0±0,08   Мочевая концентрация иона кальция (мкмоль/мл) Контрольная группа               1,8±0,10 1,3±0,09 1,6±0,22 1,9±0,23 1,5±0,10 1,6±0,06 1,6±0,17               Группа сравнения 2,6±0,07 2,3±0,14 2,5±0,15 2,2±0,11* 2,6±0,23 2,0±0,30* 1,1±0,11* Опытная группа 2,2±0,10 1,4±0,13* 1,8±0,17* 2,0±0,21 2,4±0,16 1,5±0,09* 1,3±0,06* Примечание: здесь и далее: * - р<0,05 по сравнению с исходным уровнем;

Таблица 3 Показатель ТБРП (мкмоль) ОПА (%) ГПО (%) СОД (%) КАТ (%) Интактные крысы 2,9±0,18 75,5±2,71 37,4±1.88 14,9±1,61 11,9±0,79 Контрольная группа 24,1±0,62* 78,2±2,24 29,9±2,45* 11,6±1,26 13,6±1,50 Группа сравнение 8,2±0,52* 68,6±3,15* 37,9±1,33 13,0±0,99 16,3±0,62 Опытная группа 6,5±0,64* 73,0±2,24 39,7±1,80 23,4±1,03* 28,5±2,66*

Таблица 4.   Количество кальциевых депозитов (в поле зрения) Средний размер кальциевых депозитов (мкм) Группа животных         Контрольная группа 27,4±3,23 12,0±0,62             Группа сравнения 8,0±1,36 6,2±0,27             Опытная группа 2,2±2,0 3,7±3,55      

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству, обладающему антилитогенным действием. Применение средства из лиофильно высушенных, гомогенизированных, свежезамороженных свиных почек, в качестве средства, обладающего антилитогенным действием. Вышеописанное средство эффективно для лечения мочекаменной болезни. 4 табл., 3 пр.

Применение средства из лиофильно высушенных, гомогенизированных, свежезамороженных свиных почек, в качестве средства, обладающего антилитогенным действием.