СПОСОБ ПОВЕРХНОСТНОЙ СТЕРИЛИЗАЦИИ ЭКСПЛАНТОВ И АПИКАЛЬНЫХ ПОЧЕК ЗЕМЛЯНИКИ САДОВОЙ, ВИНОГРАДА, ХУРМЫ СОРТА "КОРОЛЕК" IN VITRO Российский патент 2013 года по МПК A01H4/00 

Описание патента на изобретение RU2490871C1

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию тканей и органов растений, и может быть использовано в садоводстве для повышения коэффициента размножения, оздоровления посадочного материала, а также в селекционной практике для создания новых и улучшения уже известных сортов растений.

Известен способ оздоровления плодовых и цветочных (в частности, гладиолуса) эксплантов и апикальных почек растений. Способ включает замачивание водопроводной водой в течение 24 ч клубнелуковиц диаметром 5-6 мм с последующей поверхностной их стерилизацией 6%-ным раствором гипохлорида натрия в течение 15 мин и промыванием 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч, повторную стерилизацию 90%-ным эгаполом в течение 10 мин и трехкратное промывание, затем клубнелуковицы освобождают от туники и стерилизуют последовательно 70%-ным этанолом в течение 5-7 мин и 90%-ным - в течение 1 мин (RU 2180165 С2, 7 А01Н 4/00, 10.03.2002).

Недостатком данного способа является длительность обработки и применение токсичного стерилизатора - гипохлорита натрия, который, кроме того, сложно приобрести в России.

Известен способ получения оздоровленного посадочного материала путем проведения термо- и химиотерапии в зависимости от вируса, включенного в клетки экспланта и апикальных почек (Лутова Л.А. Биотехнология высших растений: Учебник. - СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2003. - С.212-215).

Недостаток данного способа - использование раздельного применения термо- и химиотерапии, что занимает достаточно длительное время, и, кроме того, данный способ не позволяет полностью удалить вредные микрооргазмы.

Известен также способ обработки эксплантов и апикальных почек такими стерилизаторами, как диацид 0,1%-ный, сулема 0,1%-ная и перекись водорода 10-12%-ная (Егорова Т.А. Основы биотехнологии: учеб. пособие для высш. пед. учеб заведений / Т.А. Егорова, С.М. Клунова, Е.А. Живухина. - 3-е изд., стер. - М.: Издательский центр «Академия», 2006. - С.160-161). Это наиболее близкий и распространенный способ.

Недостатком данного способа является применение токсичных веществ, требующих специальных условий работы с ними.

Задача изобретения - повышение коэффициента размножения генетически стабильных и свободных от инфекций растений в условиях in vitro, что дает возможность повышать урожайность сельскохозяйственных культур.

Это достигается техникой микроклонирования, которая сокращает продолжительность развития плодовых растений в несколько раз по сравнению с жизненным циклом в естественных условиях, а коэффициент размножения повышает на порядки.

Микроклонирование включает стерилизацию, потому что растительные ткани служат серьезным источником заражения, так как на их поверхности всегда находится эпифитная микрофлора. Поэтому необходима поверхностная стерилизация, которую проводят следующим образом. Предварительно часть растения, из которой будет извлечен эксплант, промывают водой с мылом и споласкивают чистой водой. Затем экспланты и апикальные почки обрабатывают 0,5%-ным спиртовым раствором хлоргексидина в течение пяти минут и промывают 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч. После из эксплантов вырезают листовые пластинки размером более 4 мм и делают надсечки для увеличения площади соприкосновения ткани растения с питательной средой. Апикальные почки очищают от поврежденных тканей и для определения чистоты стерильности их помещают на агаризованную питательную среду, которая содержит 1/2 концентраций макро- и микросолей по Murashige and Skoog (MS), полный состав витаминов и органических добавок среды MS, 1,0-2,0% сахарозы, 0,50-0,70 рМ 1-нафтилуксусной кислоты (НУК).

Пример 1

Экспланты и апикальные почки земляники садовой обрабатывают 0,5%-ным спиртовым раствором хлоргексидина в течение пяти минут и промывают 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч.

Образующийся каллюс имеет очень низкий процент инфицированности, который составляет 1-3%. Формирующиеся при этом растения имеют хорошо развитую корневую систему с многочисленными боковыми корешками. Длина главного корня составляет 5-6 мм. Утолщенный стебель имеет длину 5-8 мм. Проросток обладает насыщенной зеленой окраской. Побеги, достигшие 5-10 миллиметров, отделяют от каллюса и переносят на среду для укоренения. Оценка состояния проростка - пять баллов. Спустя месяц розетки земляники имеют 10-15 см в высоту, листочки обладают интенсивной зеленой окраской. Корневая система хорошо развита (табл., фиг.1, 2).

Пример 2

Экспланты и апикальные почки винограда также обрабатывают 0,5%-ным спиртовым раствором хлоргексидина в течение пяти минут и промывают 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч.

Каллюс, образующийся из эксплантов и апикальных почек, имеет низкий процент инфицированности, примерно 3-5%. Растеньица также имеют хорошо развитую корневую систему с многочисленными боковыми корешками. Длина главного корня составляет 8-10 мм. Утолщенный стебель имеет длину 10-15 мм. Проросток обладает насыщенной зеленой окраской. Оценка состояния проростка - пять баллов. Растения после пересадки на торфяную смесь очень быстро укореняются и интенсивно растут. Спустя два-три месяца растения винограда имеют до 20 см в высоту. Стебель несет 5-6 настоящих листочков, они обладают интенсивной зеленой окраской. Корневая система хорошо развита (табл., фиг.3, 4).

Пример 3

Экспланты и апикальные почки хурмы сорта «Королек» обрабатывают 0,5%-ным спиртовым раствором хлоргексидина в течение 5 минут и промывают 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч.

После воздействия 0,5%-ного спиртового раствора хлоргексидина в течение 5 минут экспланты хурмы имеют небольшой процент инфицированности, примерно 8-10%. Каллюс образуется достаточно быстро, в течение пять-семь дней, растеньица формируются сильными, здоровыми. Длина главного корня составляет 10-15 мм. Утолщенный стебель имеет длину до 20 мм. Проросток обладает насыщенной зеленой окраской. Оценка состояния проростка - пять баллов. Растения после пересадки на торфяную смесь быстро укореняются и интенсивно растут. Через два месяца растения хурмы имеют до 15 см в высоту, утолщенный стебель несет до 8 настоящих листочков, они плотные и обладают интенсивной зеленой окраской. Длина главного корня составляет 25-30 см, боковые корни хорошо развиты (табл., фиг.5).

Таблица Влияние 0,5%-ного спиртового раствора хлоргексидина на обеззараживание посадочного материала в условиях in vitro Пример Образцы Кол-во введенных эксплантов, шт. Неинфицированные растения, % Развитие регенерантов в баллах 1 Земляника садовая 50 97-99 5 2 Виноград 50 95-97 5 3 Хурма сорта «Королек» 50 90-92 5

Таким образом, способ получения оздоровленного посадочного материала в условиях in vitro отличается более эффективной обработкой эксплантов и апикальных почек для повышения коэффициента размножения генетически стабильных и свободных от инфекций растений в условиях in vitro, является более быстрым и доступным. Кроме того, данный способ позволяет обеспечить промышленные и любительские садовые хозяйства высококачественным посадочным материалом плодово-ягодных культур местного производства и повысить урожайность сельскохозяйственных растений.

Источники информации

1. RU 2180165 С2, 7 А01Н 4/00, 10.03.2002.

2. Лутова Л.А. Биотехнология высших растений: Учебник. - СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2003. - С.212-215.

3. Егорова Т.А. Основы биотехнологии: учеб. пособие для высш. пед. учеб заведений / Т.А. Егорова, С.М. Клунова, Е.А. Живухина. - 3-е изд., стер. - М.: Издательский центр «Академия», 2006. - С.160-161.

Похожие патенты RU2490871C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ СТЕРИЛИЗАЦИИ ЗЕЛЕНЫХ РАСТИТЕЛЬНЫХ ЭКСПЛАНТОВ ПЕРЕД ВВОДОМ В КУЛЬТУРУ IN VITRO 2019
  • Ребров Антон Николаевич
  • Трофимова Мария Сергеевна
RU2720916C1
Способ многоступенчатой поверхностной стерилизации верхних частей генеративных побегов Beta vulgaris L. перед введением в культуру in vitro 2022
  • Колесникова Елена Олеговна
  • Бердников Роман Владимирович
  • Донских Евгения Игоревна
RU2796463C1
СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ГЛАДИОЛУСА 2000
  • Гапоненко А.К.
  • Абукамель А.А.
  • Бабаева Сима Ага Гусейн
RU2180165C2
Способ микроклонального размножения кирказона маньчжурского (Aristolochia manshuriensis Kom.) 2023
  • Наконечная Ольга Валерьевна
  • Гафицкая Ирина Викторовна
  • Михеева Анастасия Валентиновна
RU2807740C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ ЗЕМЛЯНИКИ (IN VITRO) 2012
  • Тихомирова Людмила Ивановна
RU2516341C2
Питательная среда для микроклонального размножения рододендрона и способ микроклонального размножения рододендрона 2018
  • Гафицкая Ирина Викторовна
  • Михеева Анастасия Валентиновна
  • Орловская Ирина Юрьевна
RU2679835C1
СПОСОБ КРИОКОНСЕРВАЦИИ ПАЗУШНЫХ ПОЧЕК IN VITRO РАСТЕНИЙ ОСИНЫ 2013
  • Видягина Елена Олеговна
  • Шестибратов Константин Александрович
RU2565803C2
Способ микроклонального размножения картофеля 2018
  • Павловская Нинэль Ефимовна
  • Гнеушева Ирина Алексеевна
  • Полякова Марина Александровна
  • Солохина Ирина Юрьевна
RU2702765C2
СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ КАРТОФЕЛЯ IN VITRO СОРТА ХОЗЯЮШКА 2022
  • Киргизова Ирина Васильевна
  • Иордан Юлия Вячеславовна
  • Турпанова Рауза Масгутовна
  • Гаджимурадова Айсарат Махмудовна
RU2789460C1
Питательная среда для микроклонального размножения аралии континентальной Aralia continentalis Kitag 2020
  • Михеева Анастасия Валентиновна
  • Гафицкая Ирина Викторовна
RU2751913C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 490 871 C1

Реферат патента 2013 года СПОСОБ ПОВЕРХНОСТНОЙ СТЕРИЛИЗАЦИИ ЭКСПЛАНТОВ И АПИКАЛЬНЫХ ПОЧЕК ЗЕМЛЯНИКИ САДОВОЙ, ВИНОГРАДА, ХУРМЫ СОРТА "КОРОЛЕК" IN VITRO

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта «Королек» in vitro. Способ включает стерилизацию эксплантов и апикальных почек 0,5%-ным спиртовым раствором хлоргексидина в течение пяти минут и промыванием 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч. Затем из эксплантов вырезают листовые пластинки размером более 4 мм и делают надсечки для увеличения площади соприкосновения ткани растения с питательной средой. После чего апикальные почки очищают от поврежденных тканей и для определения чистоты стерильности их помещают на агаризованную питательную среду. Среда содержит 1/2 концентраций макро- и микросолей по Murashige and Skoog (MS), полный состав витаминов и органических добавок среды MS, 1,0-2,0% сахарозы, 0,50-0,70 мМ 1-нафтилуксусной кислоты (НУК). Способ позволяет повысить коэффициент размножения генетически стабильных и свободных от инфекций растений в условиях in vitro. 5 ил., 1 табл., 3 пр.

Формула изобретения RU 2 490 871 C1

Способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта «Королек» in vitro, включающий стерилизацию эксплантов и апикальных почек растений 0,5%-ным спиртовым раствором хлоргексидина в течение пяти минут и промыванием 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч, затем из эксплантов вырезают листовые пластинки размером более 4 мм и делают надсечки для увеличения площади соприкосновения ткани растения с питательной средой, апикальные почки очищают от поврежденных тканей и их помещают на агаризованную питательную среду, которая содержит 1/2 концентраций макро- и микросолей по Murashige and Skoog (MS), полный состав витаминов и органических добавок среды MS, 1,0-2,0% сахарозы, 0,50-0,70 µМ 1-нафтилуксусной кислоты (НУК).

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2013 года RU2490871C1

СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ГЛАДИОЛУСА 2000
  • Гапоненко А.К.
  • Абукамель А.А.
  • Бабаева Сима Ага Гусейн
RU2180165C2
СМИРНОВ И.А
Модельные ассоциации на основе базидиальных грибов и фототрофных микроорганизмов, автореферат диссертации
- М., 2010, с.8, 13
ТИХОМИРОВА Л.А
Особенности индуцированного морфогенеза и регенерации у различных типов эксплантов in vitro культиваров видов рода Iris L., автореферат диссертации
- Барнаул, 2011, с.8.

RU 2 490 871 C1

Авторы

Холопцов Владимир Федорович

Простенко Александр Николаевич

Навальнева Ирина Алексеевна

Даты

2013-08-27Публикация

2012-04-06Подача