ПРОИЗВОДНОЕ ГАММА-АМИНОМАСЛЯНОЙ КИСЛОТЫ, ОБЛАДАЮЩЕЕ НООТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ В СОЧЕТАНИИ С ТРАНКВИЛИЗИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2013 года по МПК C07C235/52 C07C235/60 A61P25/00 

Изобретение относится к новым производным гамма-(N-салицилоиламино)масляной (4-салицилоиламинобутановой) кислоты (US 6344213, CID 10307985), а именно ее дилитиевой соли, и его применению как ноотропного средства, обладающего и транквилизирующим действием.

Гамма-аминомаслянная кислота (ГАМК, CAS 56-12-2) является основным медиатором, участвующим в процессах центрального торможения. Улучшает кровоснабжение головного мозга, активирует энергетические процессы, повышает дыхательную активность тканей, улучшает утилизацию глюкозы и удаление токсических продуктов обмена. Улучшает динамику нервных процессов в головном мозге, повышает продуктивность мышления, улучшает память, оказывает умеренное психостимулирующее, антигипоксическое и противосудорожное действие. Способствует восстановлению речевых и двигательных функций после нарушения мозгового кровообращения. Применяются препараты ГАМК при поражении сосудов головного мозга, цереброваскулярной недостаточности и дисциркуляторной энцефалопатии, нарушении памяти, внимания, речи, головокружениях, головной боли, последствий инсульта и черепно-мозговой травмы, алкогольной энцефалопатии, алкогольного полиневрита, умственной отсталости у детей, слабоумии и пр. Усиливает эффект лекарственных средств, улучшающих функции ЦНС. Принимают ГАМК взрослые по 1,5-3,75 г/сут, дети - от 0,5 г/сут, суточную дозу делят на 3 приема [Регистр лекарственных средств России РЛС Энциклопедия лекарств. - 18-ый вып. / Гл. ред. Г.Л. Вышковский. - М.: РЛС-МЕДИА, 2009. - С.233]. Эталонным ноотропом, который используется для восстановления нарушений интеллектуальных функций у больных при нарушении мозгового кровообращения, является пирацетам (2-оксо-1-пирролидинацетамид, CAS 932-17-2). Недостатком пирацетама как эталонного препарата является его низкая активность: уровень эффективных доз действия составляет 200-500 мг/кг, эффект пирацетама часто плохо воспроизводим. Другой лекарственный препарат "Мексидол" (этилметилгидроксипиридина сукцинат) проявляет ноотропную, нейропротекторную, анксиолитическую, противогипоксическую, антистрессорную, антиалкогольную, противопаркинсоническую и противосудорожную активность и др. [Воронина, Т.А. Отечественный препарат нового поколения мексидол: основные эффекты, механизм действия, применение. - М.: 2004. - 248 с.]. Лития карбонат (седалит) применяют при маниакально-депресивном психозе [Машковский М.Д. Лекарственные средства: пособие для врачей. - T.1. - М., Новая волна. - 2002. - С.108].

Цель изобретения заключается в получении высокоэффективного производного гамма-(N-салицилоиламино)масляной (4-салицилоиламинобутановой) кислоты, сочетающего основные эффекты, присущие ноотропным средствам и характеризующегося низкой токсичностью и действующего в малых дозах.

Сущность изобретения заключается в синтезе дилитиевой соли гамма-N-салицилоиламинобутановой кислоты (4-(N-салицилоиламино)бутират дилития) формулы

и использовании ее в качестве ноотропного средства.

В исследованиях ноотропного эффекта соединения использовались дозы 10 и 50 мг/кг разведенных в изотоническом 0,9% растворе NaCl при комнатной температуре. Все вещество вводилось однократно за 60 минут до начала эксперимента. Результаты проведенных исследований подвергнуты статистической обработке, достоверность различий оценивали с помощью критерия Стьюдента.

Пример 1. Дилитиевая соль 4-салицилоиламинобутановой кислоты. 4-салицилоиламинобутановая кислота может быть получена по методике, представленной в патенте US 6344213. Для получения дилитиевой соли 20,0 г (200 ммоль) фенолята лития, 70 г толуола или бензола и 22,3 г (100 ммоль) 4-салицилоиламинобутановой кислоты смешивают и при перемешивании нагревают при температуре 100°C в течение 60 минут. После охлаждения продукт отделяют фильтрованием, промывают небольшим количеством растворителя и сушат. Получают белое кристаллическое вещество (22,8 г, 97%) с температурой плавления выше 270°C.

Пример 2. Метод изучения спонтанно-двигательной активности «открытое поле». Этот метод позволяет изучить спонтанную двигательную активность, ориентировочно-исследовательское поведение и уровень эмоционального реагирования животных. В течение трех минут наблюдения за животным регистрировали следующие показатели: число пересеченных квадратов (горизонтальная активность), число вставаний на задние лапы и заглядываний в отверстия (ориентировочно-исследовательская активность), количество выходов в центральную зону, число актов груминга и количество фекальных болюсов (эмоциональный фактор).

Пример 3. Метод изучения ноотропной активности выработка условной реакции пассивного избегания. Для изучения ноотропной активности соединений была использована методика выработки условной реакции пассивного избегания (УРПИ). В работе использовали модификацию этой методики, специально разработанную для крыс. Выработку условной реакции избегания затемненного отсека производили в экспериментальной камере, которая состояла из двух смежных отсеков, большого освещенного (60×40 см) и малого затемненного (15×15 см), снабженного электродным полом. Крыса считалась обученной, если в течение 30 секунд после сеанса обучения она не заходила в темный отсек экспериментальной камеры. Тест на воспроизведение памятного следа осуществлялся через 24 часа после обучения. Животное помещали в светлый отсек камеры и в течение 3 минут регистрировали 3 показателя: латентный период первого захода в темный отсек, количество заходов и общее время пребывания в темной камере. Ноотропный эффект исследуемого вещества выражался в увеличении латентного периода первого захода животного в темный отсек, уменьшении количества заходов в этот отсек и времени пребывания в нем по сравнению с животными контрольной группы.

Пример 4. Оценка антидепрессивной активности новых производных оксибензойных кислот с аминокислотами в тесте форсированного плавания Порсольта. Наличие или отсутствие антидепрессивной активности изучаемых соединений определяли с помощью плавательного теста (тест «выученной беспомощности» или «поведенческого отчаяния»), предложенного Porsolt R.D. в 1978 году. Эта модель считается одной из наиболее адекватных для выявления антидепрессантов с различными механизмами действия [Q.J. Huang, H. Jiang, X.L. Hao, T.R. Minor Brain IL-1 beta was involved in reserpine-induced behavioral depression in rats / Acta. Pharmacol. Sin. - 2004. - Vol.25, №3. - P.293-296]. Основным показателем этого метода служит время иммобилизации, которое расценивается как отказ животного от поиска выхода из аверсивной ситуации при повторном помещении в сосуд с водой. Исходя из этого сокращение длительности иммобилизации у животных и увеличение количества прыжков из воды характеризовалось нами как проявление антидепрессивного действия вещества. По мнению ряда авторов, если под влиянием веществ, сокращающих длительность иммобилизации в тесте принудительного плавания, не отмечается увеличения психомоторной активности в тесте «открытого поля», подобный факт свидетельствует о наличии у соединений специфической антидепрессивной, а не общей психостимулирующей активности.

Пример 5. Определение острой токсичности. Острую суточную токсичность при однократном введении изучали на мышах-самках массой 25-30 г. Соединение в изотоническом растворе хлорида натрия вводили животным внутрибрюшинно в различных возрастающих дозах однократно. Наблюдение за животными проводили в течение суток, отмечая количество погибших животных. Расчет ЛД₅₀ проводили по методу Литчфилда и Уилкоксона. Исследования острой токсичности заявляемого соединения показали, что по классификации опасности (вредности) веществ дилитиевая соль 4-салицилоиламинобутановой кислоты при внутрибрюшинном введении мышам относятся к классу умеренно токсичным соединениям [Саноцкий И.В., Уланова И.П. Критерий вредности в гигиене и токсикологии при оценке опасности химических соединений. - М.: Медицина, 1975. - 328 с.] (таблица 4).

Так, заявляемое соединение в дозе 50 мг/кг вызывало достоверные однонаправленные изменения в тесте УРПИ - увеличивался латентный период первого захода в темный отсек в 9 раз и уменьшалось общее время пребывания в нем в 160 раз. В связи с этим можно говорить об антиамнестических свойств заявляемого соединения. Это же соединение в дозах 10 и 50 мг/кг проявило однонаправленный эффект в тесте форсированного плавания Порсольта, заключающийся в уменьшении времени иммобилизации (в отсутствии увеличения психомоторной активности в тесте «открытого поля»), что свидетельствует о его транквилизирующем (антидепрессивном) эффекте.

Из сравнения доз, в которых дилитиевой соли 4-салицилоиламинобутановой кислоты проявляет ноотропные свойства (50 мг/кг) с ЛД₅₀ (1346,43 мг/кг), можно заключить, что препарат обладает более широким диапазоном терапевтического действия, чем пирацетам (в 1,4 раза), ГАМК (почти в 5 раз) и мексидол (в 1,68 раза) (таблица 4).

Таблица 1 Влияние нового производного дилитиевой соли 4-салицилоиламинобутановой кислоты на поведение крыс в «открытом поле», (M±m) Соединение Доза, мг/кг Вертикальная двигательная активность (число вставаний на задние лапы) Горизонтальная двигательная активность (число пересеченных квадратов) Количество заглядываний в отверстия Число актов груминга Количество выходов в центральную зону Количество болюсов Контроль 0 3,75±0,91 15,63±7,57 1,75±0,46 3,25±0,86 1,38±0,68 2,88±1,15 Дилитиевая соль 4-салицилоиламинобутановой кислоты 10 6,88±1,28 46,38±10,85* 3,25±1,18 6,13±1,14 0,75±0,29 1,88±0,60 50 1,13±0,54 14,13±3,02 0,27±0,23 2,75±0,68 0,13±0,12 2,50±0,66 * - данные статистически достоверны, p<0,05, критерий Уитни-Манна.

Таблица 2 Тест принудительного плавания по Porsolt дилитиевой соли 4-салицилоиламинобутановой кислоты Соединение Доза, мг/кг Время иммобилизации Количество прыжков Контроль 0 79,50±17,10 0,00±0,00 Дилитиевая соль 4-салицилоиламинобутановой кислоты 10 29,13±9,27* 1,50±0,50* 50 33,50±8,17* 0,13±0,12 * - данные статистически достоверны, p<0,05, критерий Уитни-Манна.

Таблица 3 Тест УРПИ дилитиевой соли 4-салицилоиламинобутановой кислоты Соединение Доза, мг/кг Латентный период захода в темный отсек, с Время пребывания в темном отсеке, с Контроль 0 19,13±3,20 160,88±3,20 Дилитиевая соль 4-салицилоиламинобутановой кислоты 10 85,29±26,74 94,71±26,74 50 180,±0,00* 0,00±0,00* * - данные статистически достоверны, p<0,05, критерий Уитни-Манна.

Таблица 4 Сравнительная характеристика эффективности дилитиевой соли 4-салицилоиламинобутановой кислоты с эффективностью пирацетама, ГАМК и мексидола   Токсичность Терапевтический индекс $$\frac{L{D}_{50}}{E{D}_{50}}$$ Дилитиевая соль 4-салицилоиламинобутановой кислоты 1346,43* (1199,16±1511,78) 26,93 Пирацетам 8000,0 20,0 ГАМК 2748,0** 5,496 Мексидол*** 475 (365÷617) 16,4 Отношение 1:5,94 1,34 $$\frac{соль}{пирацетам}$$ Отношение 1:2,04 4,90 $$\frac{соль}{ГАМК}$$ Отношение 2,8:1 1,68 $$\frac{соль}{Мексидол}$$ ** - * - данные статистически достоверны, p<0,05, критерий Уитни-Манна. ** Lightowler Jf, Maclean Ja. Studies on some analogues of gamma-aminobutyric acid. Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. Vol.145, Pg.233, 1963. *** Воронина Т.А. Отечественный препарат нового поколения мексидол: основные эффекты, механизм действия, применение. - М.: 2004. - 248 с.

Изобретение относится к новому производному гамма-(N-салицилоиламино)масляной (4-салицилоиламинобутановой) кислоты формулы которое обладает ноотропным действием в сочетании с транквилизирующим действием. Данное соединение может найти применение в химико-фармацевтической отрасли для получения эффективных ноотропных препаратов. 4 табл., 5 пр.

Производное гамма-(N-салицилоиламино)масляной (4-салицилоил-аминобутановой) кислоты формулы

обладающее ноотропным действием в сочетании с транквилизирующим действием.