ЛИТИЕВАЯ СОЛЬ N-(4-АЦЕТОКСИБЕНЗОИЛ)ГЛИЦИНА, ОБЛАДАЮЩАЯ ТРАНКВИЛИЗИРУЮЩИМ И НООТРОПНЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2014 года по МПК A61K31/223 C07C233/00 A61P25/22 A61P25/28 

Изобретение относится к новым водорастворимым литиевым солям производного глицина (аминоуксусная кислота) с 4-гидроксибензойной кислотой и его применению как транквилизирующего и ноотропного средства.

Эталонным ноотропом, который используется для восстановления нарушений интеллектуальных функций у больных при нарушении мозгового кровообращения, является пирацетам (2-оксо-1-пирролидинацетамид, CAS 932-17-2). Недостатком пирацетама как эталонного препарата является его низкая активность: уровень эффективных доз действия составляет 200-500 мг/кг, эффект пирацетама часто плохо воспроизводим. Другой лекарственный препарат "Мексидол" (этилметилгидроксипиридина сукцинат) проявляет ноотропную, нейропротекторную, анксиолитическую, противогипоксическую, антистрессорную, антиалкогольную, противопаркинсоническую и противосудорожную активность и др. Однако, летальная доза мексидола, вызывающая гибель 50% животных (ЛД₅₀) составляет для крыс 820 (625÷1025) мг/кг и для мышей 475 (365÷617) мг/кг, а при введении внутрь - более 3000 мг/кг у крыс и 2010 (1608÷2513) мг/кг у мышей. Терапевтический индекс, вычисляемый по соотношению ЛД₅₀/ЭД₅₀ составляет 16,4 [Воронина, Т.А. Отечественный препарат нового поколения мексидол: основные эффекты, механизм действия, применение. - М.: 2004. - 248 с.].

Производные 4-гидрокисбензойной кислоты (парабены) применяются в промышленности в качестве консервантов (этилпарабен, Е-214, CAS 120-47-8, пропилпарабен, Е-216, CAS 94-13-3), проксиметакаин (2-(диэтиламино)этиловый эфир 3-амино-4-пропоксибензойной кислоты, CAS 499-67-2) местноанестезирующее [Регистр лекарственных средств России РЛС Энциклопедия лекарств. - 18-ый вып./Гл. ред. Г.Л. Вышковский. - М.: РЛС-МЕДИА, 2009. - С.681], нифуроксазид (гидразид [(5-нитро-2-фуранил)метилен]-4-гидроксибензойной кислоты) - антибактериальное средство - блокирует дегидрогеназы и угнетает дыхательные цепи, цикл трикарбоновых кислот и ряд других биохимических процессов в микробной клетке, разрушает микробную стенку или цитоплазматическую мембрану, снижает продукцию токсинов микроорганизмами [Машковский, М.Д. Лекарственные средства: пособие для врачей. - T.1. - М.: Новая волна. - 2002. - С.167]. Глицин (аминоуксусная кислота, CAS 56-40-6) как средство, повышающее умственную работоспособность и уменьшающее психоэмоциональное напряжение [Машковский, М.Д. Лекарственные средства: пособие для врачей. - Т.2. - М.: Новая волна. - 2002. - С.124]. Лития карбонат (седалит) применяют в маниакальной фазе и для профилактики обострений биполярного аффективного расстройства, шизоаффективные расстройства, маниакальные состояния различного генеза, аффективные расстройства при хроническом алкоголизме, лекарственная зависимость, сексуальные отклонения, синдром Меньера, мигрень [Машковский, М.Д. Лекарственные средства: пособие для врачей. - T.1. - М.: Новая волна. - 2002. - С.108].

Цель изобретения заключается в получении высокоэффективного водорастворимого производного глицина и 4-гидроксибензойной кислоты, сочетающего основные эффекты, присущие транквилизирующим и ноотропным средствам и характеризующегося низкой токсичностью и действующего в малых дозах.

Сущность изобретения заключается в синтезе N-(4-ацетоксибензоил)глицината лития формулы

и использования его в качестве транквилизирующего и ноотропного средства.

В исследованиях транквилизирующего и ноотропного эффекта соединения использовались дозы 10 и 50 мг/кг разведенных в изотоническом 0,9% NaCl при комнатной температуре. Вещество вводилось однократно за 60 минут до начала эксперимента. Результаты проведенных исследований подвергнуты статистической обработке, достоверность различий оценивали с помощью критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони.

Пример 1. Литиевая соль N-(4-гидроксибензоил)глицина. В реактор, снабженный мешалкой, помещают глицин и 50 мл ДМФА. По каплям приливают хлорангидрид 4-ацетоксибензойной кислоты в течение 1,5 часа. Реакцию проводят при охлаждении 1,5 часа. Затем, полученную реакционную смесь перемешивают еще 2,5 часа (при охлаждении), контролируя pH среды (pH>7). Для поддержания среды добавляют 6 н раствор гидроксида калия. Полученную смесь выливают в лед и подкисляют хлороводородной кислотой до pH=5, выпавшие кристаллы N-(4-ацетоксибензоил)глицина отфильтровывают и сушат. Выход 73%. Т_пл=194-197°C, Rf 0,569 (бутанол-1). М+ 237 (хроматомасс-спектрометр «Saturn-2100», Varian). Затем полученный N-(4-ацетоксибензоил)глицин смешивают с фенолятом лития (мольное соотношение 1:1) в среде толуола или бензола и при перемешивании нагревают при температуре 100°C в течение 60 минут. После охлаждения продукт отделяют фильтрованием, промывают небольшим количеством растворителя и сушат. Получают белое кристаллическое вещество (22,2 г, 97%) с температурой плавления выше 270°C, Rf 0,654 (н.-пропанол: вода в соотношении 7:3). М+ 243. Найдено: C (54,39%), H (4,09%), Li (2,85%), N (5,79%), O (32,88%), вычислено: C (54,34%), H (4,15%), Li (2,85%), N (5,76%), O (32,90%).

Пример 2. Метод изучения спонтанно-двигательной активности «открытое поле» (таблица 1).

Этот метод позволяет изучить спонтанную двигательную активность, ориентировочно-исследовательское поведение и уровень эмоционального реагирования животных. В течение трех минут наблюдения за животным регистрировали следующие показатели: число пересеченных квадратов (горизонтальная активность), число вставаний на задние лапы и заглядываний в отверстия (ориентировочно-исследовательская активность), количество выходов в центральную зону, число актов груминга и количество фекальных болюсов (эмоциональный фактор).

Пример 3. Метод изучения ноотропной активности выработка условной реакции пассивного избегания (УРПИ).

Для изучения ноотропной активности соединений была использована методика выработки УРПИ. В работе использовали модификацию этой методики, специально разработанную для крыс. Выработку условной реакции избегания затемненного отсека производили в экспериментальной камере, которая состояла из двух смежных отсеков, большого освещенного (60×40 см) и малого затемненного (15×15 см), снабженного электродным полом. Крыса считалась обученной, если в течение 30 секунд после сеанса обучения она не заходила в темный отсек экспериментальной камеры. Тест на воспроизведение памятного следа осуществлялся через 24 часа после обучения. Животное помещали в светлый отсек камеры и в течение 3 минут регистрировали 3 показателя: латентный период первого захода в темный отсек, количество заходов и общее время пребывания в темной камере. Ноотропный эффект исследуемого вещества выражался в увеличении латентного периода первого захода животного в темный отсек, уменьшении количества заходов в этот отсек и времени пребывания в нем по сравнению с животными контрольной группы (таблица 3).

Пример 4. Метод определения анксиолитического эффекта «плюс» - лабиринт.

Метод позволяет оценить анксиолитическое (транквилизирующее, антифобическое) действие психотропных средств. Лабиринт поднят над уровнем пола на высоту 70 см и представляет собой квадратную площадку (10×10 см) с четырьмя крестообразно расположенными рукавами длиной 50 см и шириной 10 см. Два рукава имеют непрозрачные ограждения высотой 40 см, два рукава открыты. Крысу помещали на центральную площадку лабиринта хвостом к экспериментатору. В течение 2 минут наблюдения фиксировали число посещений открытых рукавов и время нахождения в них. Увеличение количества выходов в открытые рукава и времени пребывания в них по сравнению с таковыми показателями в контрольной группе оценивали как проявление анксиолитического (антифобического) действия вещества (таблица 2).

Пример 5. Определение острой токсичности. Острую суточную токсичность при однократном введении изучали на мышах-самках массой 25-30 г. Соединение в изотоническом растворе хлорида натрия вводили животным внутрибрюшинно в различных возрастающих дозах однократно. Наблюдение за животными проводили в течение суток, отмечая количество погибших животных. Расчет ЛД₅₀ проводили по методу Литчфилда и Уилкоксона. Исследования острой токсичности заявляемого производного показали, что по классификации опасности (вредности) веществ N-(4-ацетоксибензоил)глицината лития при внутрибрюшинном введении мышам относятся к классу малотоксичных соединений [Саноцкий, И.В. Критерий вредности в гигиене и токсикологии при оценке опасности химических соединений / И.В. Саноцкий, И.П. Уланова. - М.: Медицина, 1975 - 328 с.] (таблица 4).

Таким образом, ведение N-(4-ацетоксибензоил)глицината лития в дозе 10 мг/кг приводило к проявлению выраженной антиамнестической активности в тесте УРПИ, которая сопровождалась увеличением латентного периода захода в темный отсек и снижением времени пребывания в темном отсеке и транквилизирующему эффекту, выражавшемуся в увеличении времени пребывания в открытых рукавах в тесте «приподнятый плюс-лабиринт». Данные эффекты сопровождались снижением актов груминга в тесте «открытое поле», что подтверждает противотревожный эффект N-(4-ацетоксибензоил)глицината лития. Увеличение дозы до 50 мг/кг приводило к устранению антиамнестической активности этого соединения, при сохранении выраженной тенденции к проявлению антиамнестического эффекта, усилению исследовательской и двигательной активности животных в тесте «открытое поле» и появлению слабой транквилизирующей активности в тесте «+лабиринт».

Из сравнения доз, в которых N-(4-ацетоксибензоил)глицината лития (литиевая соль N-(4-ацетоксибензоил)глицина) проявляет транквилизирующие и ноотропные свойства (10 мг/кг) с ЛД₅₀ (3751,11 мг/кг), можно заключить, что препарат обладает широким диапазоном терапевтического действия и низкой токсичностью.

Таблица 4 Сравнительная характеристика эффективности N-(4-ацетоксибензоил)глицината лития с мексидолом   ЛД₅₀, мг/кг Терапевтический индекс N-(4-ацетоксибензоил)глицинат лития (внутрибрюшинно) 3751,11,400* (3638,84÷3866,85) 375,1   475   Мексидол (внутрибрюшинно) (365÷617) 16,4 Отношение 14,42 * - данные статистически достоверны, критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони, p<0,05

Описывается литиевая соль N-(4-ацетоксибензоил)глицина формулы I

обладающая транквилизирующим и ноотропным действием. 4 табл., 5 пр.

Водорастворимая литиевая соль N-(4-ацетоксибензоил)глицина формулы

обладающая транквилизирующим и ноотропным действием.