ВОДОРАСТВОРИМОЕ ПРОИЗВОДНОЕ САЛИЦИЛМОРФОЛИДА, ОБЛАДАЮЩЕЕ НООТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ В СОЧЕТАНИИ С АНТИДЕПРЕССИВНЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2013 года по МПК C07D295/192 A61K31/5375 

Изобретение относится к новым водорастворимым производным салицилморфолида (а именно, солям) и его применению как ноотропного препарата с антидепрессивным действием.

В современном обществе наблюдается прогрессирующий рост частоты органических поражений головного мозга разного генеза с когнитивными расстройствами. Вместе с тем, в связи с многократно возросшим ритмом жизни достаточно широко распространена проблема психоэмоционального напряжения, повышенной утомляемости, вследствие чего наблюдается резкое снижение умственной деятельности [Кудашов В.И. Когнитивные технологии усиления интеллекта и их биоэтическая оценка. Сибирское медицинское обозрение. 2009. Т.59. №5. С.98-102]. В связи с этим актуальна проблема поиска новых психофармакологических средств, свободных от нежелательных эффектов, безопасных, эффективных, надежных, экономичных.

Салицилморфолид (N-салицилоилморфолин, CAS 3202-84-4) обладает противовоспалительным действием (US 3265575), однако в медицинской практике не применяется. В медицинской практике среди используемых салициламидов известны отдаленные аналоги заявляемого соединения, такие как салициламид (CAS 65-45-2), который назначают внутрь в качестве болеутоляющего и жаропонижающего средства, оксафенамид (CAS 526-18-1) усиливает образование и выделение желчи, оказывает спазмолитическое действие и снимает или уменьшает спазмы желчевыводящих путей, тиаприд и султоприд оказывают антидофаминергическое действие, которые применяются наружно в качестве обезболивающих и противовоспалительных средств, натриевая соль салициловой кислоты (энтерсалил, диуретин, натрия салицилат, CAS 54-21-7) оказывает аналгезирующее, жаропонижающее и противовоспалительное действие [Машковский М.Д. Лекарственные средства: пособие для врачей. - Т.1. -М.: Новая волна. - 2002. - С.74, 167, 318, 504]. К побочным действиям салицилатов относят тошноту, гастралгию, аллергические реакции, нарушения функции печени, синдром Рейе и др. [Машковский М.Д. Лекарственные средства: пособие для врачей. - Т.1. -М.: Новая волна. - 2002. - С.165].

Наряду с перечисленными терапевтическими эффектами, которые проявляются практически во всех физиологических системах организма, салициловая кислота и ее производные оказывают также нейротропное воздействие. Так, в исследованиях было выявлены особенности нейротропного действия салицилата кобальта и салицилата цинка на нейронах виноградной улитки [Коренюк И.И. Влияние салициловой кислоты и ее солей на электрическую активность нейронов виноградной улитки / И.И.Коренюк, Д.Р.Хусаинов, В.Ф.Шульгин // Нейрофизиология. - 2005. - Т.37, №2.-С.142-150].

Однако в медицинской практике отсутствуют препараты СК, которые обладали бы ноотропным действием.

Лития карбонат (седалит) применяют в маниакальной фазе и для профилактики обострений биполярного аффективного расстройства, шизоаффективные расстройства, маниакальные состояния различного генеза, аффективные расстройства при хроническом алкоголизме, лекарственная зависимость, сексуальные отклонения, синдром Меньера, мигрень [Машковский М.Д. Лекарственные средства: пособие для врачей. - Т.1. -М.: Новая волна. - 2002. - С.108].

Эталонным ноотропом, который используется для восстановления нарушений интеллектуальных функций у больных при нарушении мозгового кровообращения, является пирацетам (2-оксо-1-пирролидинацетамид, С AS 932-17-2). Недостатком пирацетама как эталонного препарата является его низкая активность: уровень эффективных доз действия составляет 200-500 мг/кг, эффект пирацетама часто плохо воспроизводим [RU 2050851]. Другой лекарственный препарат "Мексидол" (этилметилгидроксипиридина сукцинат) проявляет ноотропную, нейропротекторную, анксиолитическую, противогипоксическую, антистрессорную, антиалкогольную, противопаркинсоническую и противосудорожную активность и др. [Воронина Т.А. Отечественный препарат нового поколения мексидол: основные эффекты, механизм действия, применение. -М.: 2004. - 248 с.].

Цель изобретения заключается в получении высокоэффективного производного СК, сочетающего основные эффекты, присущие ноотропным средствам в сочетании с антидепрессивным эффектом и характеризующегося низкой токсичностью и действующего в малых дозах.

Сущность изобретения заключается в синтезе литиевой соли салицилморфолида формулы

и использования ее в качестве ноотропного и антидепрессивного средства.

В исследованиях психотропного эффекта соединения использовались дозы 10 и 50 мг/кг разведенных в изотоническом растворе 0,9% NaCl при комнатной температуре. Все вещество вводилось однократно за 60 минут до начала эксперимента. Результаты проведенных исследований подвергнуты статистической обработке, достоверность различий оценивали с помощью критерия Уитни-Манна (табл.1, табл.2).

Пример 1. Литиевая соль N-салицилоилморфолина. Для синтеза литиевой соли 10,0 г (100 ммоль) фенолята лития, 35 г толуола или бензола и 20,7 г (100 ммоль) N-салицилоилморфолина смешивают и при перемешивании нагревают при температуре 100°С в течение 60 мин. После охлаждения продукт отделяют фильтрованием, промывают небольшим количеством растворителя и сушат. Получают белое кристаллическое вещество (20,61 г, 96,7%) с температурой плавления выше 270°С. В спектре ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆) отсутствует сигнал фенольного гидроксила (1Н, Ph-OH).

Пример 2. Тест «принудительного» плавания Порсольта. Метод изучения антидепрессивной активности соединений был предложен почти 30 лет назад [Porsolt R.D., Le Pichon М., Jalfre М. Depression: a new animal model sensitive to antidepressant treatments // Nature. - 1977. - Vol.266, №21. - P. 730-732], тем не менее не потерял актуальности. Крыс на 15 мин помещали в стеклянный бассейн диаметром 32 см и высотой 50 см, на 20 см заполненный водой (температурой 1-19°С). Через 24 часа процедуру повторяли, регистрируя в течение 300 секунд общее время нахождения крысы в состоянии иммобилизации (животное пассивно плавает в воде со слегка поднятой головой) и количество прыжков из воды (попытка избежать аверсивного воздействия среды). Уменьшение общей продолжительности периода иммобилизации и увеличение количества прыжков расценивали как проявление антидепрессивной активности соединений.

Пример 3. Метод выработки условной реакции пассивного избегания (УРПИ).

В работе при изучении ноотропной активности соединений использовалась модификация этого метода, специально разработанная для крыс [Bures J., Buresova О. Cortical spreading depression as a memory diedurbing factor // J.Physiol and Psychol, - 1963. - Vol.56. - P.268-72]. Выработку условной реакции избегания затемненного отсека производили в экспериментальной камере, которая состояла из двух смежных отсеков - большого освещенного (60×40 см) и малого затемненного (15×15 см), снабженного электродным полом. Отсеки соединялись между собой с помощью четырехугольного отверстия (8×8 см). Крысу помещали в светлый отсек, хвостом к темному отсеку, и в течение 3 минут регистрировали латентный период первого захода животного в темный (опасный) отсек. Крысы, предпочитавшие светлый отсек, из дальнейшего эксперимента исключались. По прошествии трех минут в темном отсеке животное получало через электродный пол однократное электроболевое раздражение (40 В), состоящее из трех импульсов длительностью 1 секунда, следующих с интервалом 0.5 секунд. Крыса считалась обученной, если в течение 30 секунд после сеанса обучения она не заходила в темный отсек экспериментальной камеры. Тест на воспроизведение памятного следа осуществлялся через 24 ч после обучения. Животное помещали в светлый отсек камеры и в течение 3 мин регистрировали те же показатели, что и при обучении. Ноотропный эффект исследуемых соединений проявлялся при воспроизведении УРПИ и выражался в увеличении латентного периода первого захода животного в темный отсек, уменьшении количества заходов в этот отсек и времени пребывания в нем по сравнению с животными контрольной группы.

Пример 4. Амнезия, вызванная скополамином. Амнезию УРПИ вызывают внутрибрюшинным введением скополамина в дозе 1 мг/кг непосредственно после сеанса обучения. Воспроизведение УРПИ производят через 24 ч после обучения. Исследуемые вещества вводятся за 1 ч до воспроизведения УРПИ. Регистрируют латентный период захода в темный отсек и время пребывания в нем. Ноотропный эффект выражается в устранении скополаминовой амнезии, что характеризуется увеличением латентного периода захода и уменьшением времени пребывания в нем при воспроизведении УРПИ.

Пример 5. Изучение влияния на физическую работоспособность. Изучение адаптогенных свойств изучаемых соединений проводили на модели плавания с грузом, сопровождающейся циркуляторной гипоксией вследствие нарастания лактата в крови по мере утомления (Воронина Т.А., Неробкова Л.Н. Методические указания по изучению противосудорожной активности фармакологичесих веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. -М.: 2000. - С.138-147). Дополнительная нагрузка составляла 15% от собственного веса подопытной крысы. Плавание осуществляли в емкости с предварительно отстоянной (для уменьшения содержания растворенного газа) водой при температуре 24-26°С. Груз фиксировали на туловище. Учитывалась длительность плавания до утопления животных. Увеличение времени плавания до утопления расценивали как увеличение физической работоспособности. Исследуемое вещество вводили внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг в течение 7 дней до эксперимента (таблица 5).

Пример 6. Определение острой токсичности. Острую суточную токсичность при однократном введении изучали на мышах обоего пола массой 25-30 г. Соединение в изотоническом растворе хлорида натрия вводили животным внутрибрюшинно в различных возрастающих дозах однократно. Наблюдение за животными проводили в течение суток, отмечая количество погибших животных. Расчет ЛД₅₀ проводили по методу Литчфилда и Уилкоксона. Исследования острой токсичности заявляемого производного показали, что по классификации опасности (вредности) веществ литиевой соли N-салицилоилморфолина при внутрибрюшинном введении мышам (ЛД₅₀=1473,62 мг/кг) относятся к классу умеренно токсичных соединений [Саноцкий И.В., Уланова И.П. Критерий вредности в гигиене и токсикологии при оценке опасности химических соединений. -М.: Медицина, 1975-328 с.] (таблица 6).

Патентуемое соединений в обеих дозах вызывало достоверные однонаправленные изменения в тесте УРПИ - увеличивался латентный период первого захода в темный отсек (на 586,4% в дозе 10 мг/кг и на 840,9% в дозе 50 мг/кг) и уменьшалось общее время пребывания в нем (на 67,7% в дозе, 10 мг/кг и на 100% в дозе 50 мг/кг). В связи с этим можно говорить о проявлении антиамнестических свойств. Это же соединение в обеих дозах проявило однонаправленный эффект в тесте форсированного плавания Порсольта, заключающийся в уменьшении времени иммобилизации, что, несмотря на недостоверность большинства данных, свидетельствует о его незначительном антидепрессивном эффекте. В дозе 50 мг/кг в тесте «открытое поле» достоверно увеличивалась горизонтальная активность в 2 раза по сравнению с контролем, что указывает на возможное психостимулирующее действие этого соединения (таблица 3).

Введение литиевой соли салицилморфолида в дозе 50 мг/кг устранило скополаминовую амнезию, вызывая статистически достоверное увеличение латентного периода захода в темный отсек и уменьшение времени пребывания в нем, как и введение пирацетама. Однако по сравнению с пирацетамом, заявляемое соединение действует в дозе, которая меньше дозы пирацетама в 4 раза (таблица 4).

В этой же дозе (50 мг/кг) заявляемое соединение статистически достоверно увеличивало физическую работоспособность (время плавания до утопления увеличивалось по сравнению с показателем контрольной группы на 112%). В группе животных, получавших пирацетам (200 мг/кг), работоспособность увеличилась на 110% (таблица 5).

Из сравнения доз, в которых литиевая соль N-салицилоилморфолина проявляет ноотропные свойства в сочетании с антидепрессивным действием (10 мг/кг) с ЛД₅₀ (1473,62 мг/кг), можно заключить, что препарат обладает широким диапазоном терапевтического действия и низкой токсичностью. Так терапевтический индекс заявляемого соединения почти в 9 раз превышает индекс мексидола и в 7,4 раза - пирацетама (таблица 6).

Таблица 1 Тест принудительного плавания по Porsolt литиевой соли салицилморфолида Соединение Доза, мг/кг Время иммобилизации Количество прыжков Контроль 0 79,50±17,10 0,00±0,00 литиевая соль салицилморфолида 10 52,63±15,40 0,75±0,34 50 17,00±5,44* 1,13±0,41 * - данные статистически достоверны, р<0,05, критерий Уитни-Манна

Таблица 2 Тест УРПИ литиевой соли салицилморфолида Соединение Доза, мг/кг Латентный период захода в темный отсек, с Время пребывания в темном отсеке, с Контроль 0 19,13±3,20 160,88±3,20 литиевая соль салицилморфолида 10 131,29±23,40* 48,71±23,40* 50 180,00±0,00* 0,00±0,00* * - данные статистически достоверны, р<0,05, критерий Уитни-Манна

Таблица 3 Влияние нового производного литиевой соли салицилморфолида на поведение крыс в «открытом поле», (М±т) Соедине-ние Доза, мг/кг Вертикальная двигательная активность (число вставаний на задние лапы) Горизонтальная двигательная активность (число пересеченных квадратов) Количество заглядываний в отверстия Число актов груминга Количество выхо-дов в центральную зону Коли-чест-во болю-сов Контроль 0 3,75±0,91 15,63±7,57 1,75±0,46 3,25±0,86 1,38±0,68 2,88±1,15 литиевая соль салицилморфолида 10 5,00±1,71 23,38±5,33 2,25±0,66 2,63±0,73 0,380±0,25 1,88±0,67   50 9,50±2,34 33,13±4,43* 3,25±0,93 5,50±1,10 0,25±0,15 1,25±0,49 * - данные статистически достоверны, р<0,05, критерий Уитни-Манна

Таблица 4 Изучение влияния литиевой соли салицилморфолида на скополаминовую амнезию   Латентный период захода в темный отсек, М±т, с Время пребывания в темном отсеке, М±т Контроль,
скополамин 1.0 мг/кг 21.38±3.88 158.63±3.88 Скополамин 1.0 мг/кг+
Литиевая соль салицилморфолида, 50 мг/кг 109.88±26.11* 70.1326.11* Скополамин 1.0 мг/кг+
Пирацетам, 200 мг/кг 107.25±25.75* 72.75±25.75* * - данные статистически достоверны, р<0,05, критерий Уитни-Манна

Таблица 5 Влияние на физическую работоспособность, (М±m) Вещество Доза, мг/кг Время плавания, с Физ. раствор 0 790,3±65,9 Пирацетам 200 1092,8±110,9 литиевая соль салицилморфолида 50 1151,5±94,4* *-р<0,05, критерий Крускалла-Уоллиса, Критерий Даннета

Таблица 6 Сравнительная характеристика эффективности литиевой соли салицилморфолида с пирацетамом и мексидолом   ЛД₅₀, мг/кг Терапевтический индекс $$\frac{Л{Д}_{50}}{Э{Д}_{50}}$$ литиевая соль салицилморфолида 1473,62* (1265,69÷1715,70) 147,36 Пирацетам 8000,0** 20,0 Отношение
$$\frac{соль}{пирацетам}$$ 1:5,4 7,4 Мексидол (внутрибрюшинно) 475***(365+617) 16,4 Отношение
$$\frac{соль}{мексидол}$$ 3,1 8,99 *данные статистически достоверны, р<0,05, критерий Уитни-Манна **RU 2050851 ***Воронина Т.А. Отечественный препарат нового поколения мексидол: основные эффекты, механизм действия, применение. -М.: 2004. - 248 с.

Изобретение относится к водорастворимому производному салицилморфолида формулы

Это производное обладает ноотропной активностью в сочетании с антидепрессивным действием. 6 табл., 6 пр.

Водорастворимое производное салицилморфолида формулы

обладающего ноотропной активностью в сочетании с антидепрессивным действием.