СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗВАННЫХ ВИРУСОМ ГРИППА С ТИПОМ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА H5N1, И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗВАННЫХ ВИРУСОМ ГРИППА С ТИПОМ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА H5N1 Российский патент 2013 года по МПК A61K39/395 A61P31/16 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для эффективного лечения и профилактики инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1, у детей и взрослых, домашних животных и птиц.

Из уровня техники известен способ лечения гриппа путем использования препарата «Интерферон таблетки 4000 ME» (RU 2005132848 A, А61К 39/395, 2008). Однако этот способ малоэффективен при лечении инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1.

Известно также противовирусное лекарственное средство препарат «Тамифлю» (международное непатентованное название действующего вещества: озельтамивира фосфат), производитель: F.HOFFMANN-LA ROCHE Ltd., рекомендованное Всемирной Организацией Здравоохранения для лечения гриппа А с типом поверхностного антигена H5N1 (см.. Птичий грипп. Информационный бюллетень. ВОЗ. Февраль 2006; http://www.who.int/mediacentre/factsheets/avian_influenza/ru/). К недостаткам данного препарата можно отнести наличие побочных эффектов.

Также известно противовирусное лекарственное средство в виде капель потенцированного водного раствора моноклональных антител к гамма-интерферону С 12, которое может быть использовано для лечения ОРВИ (RU 2181297 С2, А91К 39/395, 2002), но его эффективность для лечения гриппа с типом поверхностного антигена H5N1 как у человека, так и у домашних животных и птиц, не очевидна.

Кроме того, из уровня техники также известно лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний домашних животных и способ лечения (RU 2326694 C1, A61K 39/395, 2008). Однако данное решение при сложности приготовления лекарственного средства малоэффективно при лечении инфекционных заболеваний у животных, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1, а его пригодность для лечения человека не очевидна.

Изобретение направлено на создание универсального, эффективного и безопасного способа лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа А с типом поверхностного антигена H5N1, и препарата с противовирусной и иммуномодулирующей активностью, обеспечивающего эффективное лечение и профилактику инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа А с типом поверхностного антигена H5N1 как у детей и взрослых, так и у домашних животных и птиц.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе лечения и профилактики инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1, у человека, домашних животных и птиц, согласно изобретению используют действующую субстанцию, в виде гомеопатически активированной - потенцированной формы, полученной путем многократного последовательного разведения матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека и промежуточного внешнего воздействия.

Кроме того в способе лечения используют активированную - потенцированную форму действующей субстанции, которая получена из матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека с концентрацией 0,3÷5,0 мг/мл.

При этом действующая субстанция включает смесь различных гомеопатических разведении, предпочтительно, сотенных С 12, С 30, С 50 или С 12, С 30, С 200.

Кроме того, решение поставленной задачи обеспечивается также тем, что лекарственное средство для лечения и профилактики инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1, согласно изобретению включает действующую субстанцию в виде гомеопатически активированной - потенцированной формы аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека.

При этом гомеопатически активированная - потенцированная форма действующей субстанции лекарственного средства получена из матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека с концентрацией 0,3÷5,0 мг/мл.

Причем лекарственное средство может включать смесь различных гомеопатических разведении, предпочтительно, сотенных С 12, С 30, С 50. или С 12, С 30, С 200.

Терапевтическая эффективность заявленного решения в отношении вирусов гриппа с типом поверхностного антигена H5N1 как для лечения человека, так и для лечения животных и птиц, обусловлена иммуномодулирующим и противовирусным действием гомеопатически активированной - потенцированной формы аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека. При этом лекарственное средство заявленного состава снижает концентрацию вируса в пораженных тканях, влияет на систему эндогенных интерферонов и сопряженных с ними цитокинов, индуцирует образование эндогенных «ранних» интерферонов (ИФН α/β) и гамма-интерферонов (ИФН γ). Кроме того, препарат стимулирует гуморальный и клеточный иммунный ответ, повышает продукцию антител (включая секреторный IgA), активирует функции Т-эффектов, Т-хелперов (Tx), нормализует их соотношение, повышает функциональный резерв Tx и других клеток, участвующих в иммунном ответе, является индуктором смешанного Tx1 и Tx2-типа иммунного ответа: нормализует выработку цитокинов Tx1 (ИФН γ, ИЛ-2) и Tx2 (ИЛ-4, 10), нормализует (модулирует) баланс Tx1/Tx2 активностей., повышает активность фагоцитов и естественных клеток-киллеров (ЕК клеток), что обуславливает противовирусную активность препарата в отношении вирусов гриппа с типом поверхностного антигена H5N1.

Причем в отличие от действия терапевтических доз известных препаратов, в том числе и на основе интерферона, применение сверхмалых доз разведении активированной - потенцированной формы антител к гамма-интерферону человека не вызывает побочных эффектов, к заявленному препарату не развивается резистентность, что обуславливает возможность его использования для длительной безопасной и эффективной противовирусной профилактики. Кроме того, заявленный препарат характеризуется отсутствием побочных эффектов при сохранении терапевтического действия, экологической чистотой и низкой себестоимостью и расширяет арсенал лекарственных средств, предназначенных для лечения гриппа с типом поверхностного антигена H5N1 у человека, животных и птиц.

Лекарственный препарат может быть приготовлен на основе поликлональных или моноклональных антител к гамма-интерферону человека, полученным по известным методикам.

Методика получения поликлональных и моноклональных антител описана, например, в книге: Иммунологические методы/ под ред. Г. Фримеля, М., Медицина, 1987, с.9-33, или, например, в статье Laffly Е., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55.

Методика получения рекомбинантных антител описана, например, в статье Laffly Е., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55. Методика получения антител к гамма-интерферону человека описана, например, в статье Monoclonalantibodies to human-γ: production, affinity, purification and radioimmunoassay. - The EMBO Journal, Vol.2, No. 9, p.1527-1530, 1983.

Для получения поликлональных иммунных антител, а также в гибридомной технологии для получения рекомбинантных моноклональных антител в качестве иммуногена для иммунизации лабораторных животных может быть использован гамма-интерферон человека, в том числе рекомбинантный, или фрагмент или смесь различных фрагментов гамма - интерферона человека.

Полученные по известным методикам антитела к гамма-интерферону человека очищают, преимущественно, методом аффинной хроматографии.

Для реализации заявленного решения, например, для исследовательских целей могут быть также использованы готовые антитела к гамма-интерферону человека, производимые различными фирмами, например:

- Anti-Interferon-gamma antibody produced in goat; species reactivity: human (см. Каталог «Продукты для исследований в области естественных наук» (SIGMA) на 2008-2009 гг., стр.2153);

- Rabbit polyclonal antibodies to Interferon gamma (Immunogen: Highly pure (>98%) recombinant human Interferon-gamma (см. http://www.abcam.com/Interferon-gamma-antibody-ab9657.html);

- Mouse monoclonal antibodies to Interferon gamma (Immunogen: Recombinant full length protein (Human)) (см. http://www.abcam.comnnterferon-gamma-antibody-ab9658.html);

- Chicken Anti-Human Interferon gamma Polyclonal Antibody, Unconjugated (см. http://www.biocompare.com/ProductDetails/1269192/Chicken-Anti-Human-Interferon-gamma-Polyclonal-Antibody,-Unconjugated.html);

- Rabbit Anti-Human Interferon gamma Monoclonal Antibody, Unconjugated, Clone EP1109Y (см. http://www.biocompare.com/ProductDetails/880680/Rabbit-Anti-Human-Interferon-gamma-Monoclonal-Antibody.-Unconjugated,-Clone-EP1109Y.html) и др.

Предпочтительным для приготовления заявленного лекарственного препарата является использование поликлональных антител к гамма-интерферону человека.

Полученные после очистки методом аффинной хроматографии антитела в фосфатно-солевом буферном растворе с концентрацией 0,3÷5,0 мг/мл (предпочтительно 0,5÷3,0 мг/мл) используют в качестве матричного раствора для приготовления действующей субстанции в виде гомеопатически активированной - потенцированной формы, которую получают путем многократного последовательного разведения матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека и промежуточного внешнего воздействия, предпочтительно по гомеопатической технологии (см., например, Гомеопатические лекарственные средства. Руководство по описанию и изготовлению, В. Швабе, Москва, 1967, с.12-38).

При этом производят равномерное уменьшение концентрации путем последовательного разведения 1 объемной части матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека в 9 объемных частях (для десятичного разведения D) или в 99 объемных частях (для сотенного разведения С) или в 999 объемных частях (для тысячного разведения) нейтрального растворителя с многократным вертикальным встряхиванием каждого полученного разведения и использованием преимущественно отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой сверхмалой дозы (потенции). Причем первое гомеопатическое разведение производят на нейтральном растворителе: предпочтительно на 10÷15% водном растворе этилового спирта или дистиллированной воде, следующие разведения на 20÷30% водном растворе этилового спирта и конечные (последние два - три) разведения производят на 35÷75% водном растворе этилового спирта или дистиллированной воде.

При использовании в качестве действующей биологически активной - потенцированной субстанции смеси различных, преимущественно, сотенных, разведении (потенций), каждый компонент состава (например, С 12, С 30, С 50 или С 200) приготовляют по отдельности по приведенной выше технологии до их предпоследнего разведения (соответственно, до получения С 11, С29, С49, или С 199) и затем вносят в соответствии с составом смеси в одну емкость по одной части и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения).

Внешнее воздействие в процессе уменьшения концентрации можно осуществлять как в виде многократного вертикального встряхивания, так и ультразвуком, электромагнитным или иным подобным физическим действием.

Заявленный диапазон концентрации матричного раствора является оптимальным для получения лекарственного препарата с повышенной противовирусной активностью и обусловлен тем, что при концентрации матричного раствора менее 0,5 мг/мл антитела к гамма-интерферону человека при их дальнейшей обработки - потенцировании резко снижают свою специфическую активность (эффективность), стабильность и срок хранения, а использование антител с концентрацией выше 5,0 мг/мл технологически сложно и дорого.

Приготовленная таким образом действующая субстанция в виде гомеопатически активированной - потенцированной формы, может быть использована в общепринятых лекарственных формах, как в виде водоспиртовых растворов, так и для приготовления твердых лекарственных форм.

Пример 1.

Кур инфицировали штаммом гриппа A (H5N1), выделенным во время эпизоотии гриппа среди кур в Новосибирской области, интраназально дозой ЛД90 ВПГ в объеме 0,1 мл. Предварительно (в течение двух соток до инфицирования) и в течение семи суток после инфицирования вводили два раза в сутки действующую субстанцию - смесь водоспиртовых разведений С 12, С30, С200 (1 группа) кроличных поликлональных антител к гамма-интерферону человека, которые приготовлены из матричного раствора с концентрацией 0,5 мг/мл и с конечными разведениями на дистиллированной воде, и дистиллированную воду (2 группа) внутрижелудочно в свободном доступе в поилках вместо воды. После заражения вирусом действующий компонент и дистиллированную воду вводили в свободном доступе в сочетании с интрагастральным введением 2 раза в сутки по 10 мл/курица. Препарат сравнения Тамифлю (группа 3) вводили внутрижелудочно в дозе 4 мг/кг интрагастрально дважды в день за 2 суток до заражения и в течение 5 суток после заражения. Эффективность препаратов оценивали по числу погибших кур и на основании этих данных рассчитывали среднюю продолжительность жизни для каждой группы. В результате эксперимента выявлено, что заявленный препарат и Тамифлю уменьшают падеж кур на четвертый день исследования. При этом количество выживших кур (в группе 1 и группе 3) больше, чем в группе 2, получавшей дистиллированную воду, что подтверждает терапевтическую эффективность заявленного препарата.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1. Для этого вводят лекарственное средство, включающее гомеопатически активированную потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека, полученную из матричного раствора аффинно-очищенных антител к гамма-интерферону человека с концентрацией 0,3÷5,0 мг/мл. 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 2 пр., 2 табл.

1. Способ лечения и профилактики инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1, у человека, домашних животных и птиц, характеризующийся тем, что используют действующую субстанцию, в виде гомеопатически активированной - потенцированной формы, полученной равномерным уменьшением концентрации путем последовательного разведения матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека в нейтральном растворителе с многократным встряхиванием каждого полученного разведения.

2. Способ лечения по п.1, характеризующийся тем, что используют лекарственное средство, включающее смесь различных гомеопатических разведений.

3. Способ лечения по п.1, характеризующийся тем, что используют лекарственное средство, включающее смесь гомеопатических разведений С 12, С 30, С 50 или С 12, С 30, С 200.

4. Способ лечения по п.1, характеризующийся тем, что используют активированную - потенцированную форму действующей субстанции, которая получена из матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

4. Способ лечения по п.1, характеризующийся тем, что используют активированную - потенцированную форму действующей субстанции, которая получена из матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

5. Лекарственное средство для лечения и профилактики инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1, характеризующееся тем, что включает действующую субстанцию в виде гомеопатически активированной - потенцированной формы аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека.

6. Лекарственное средство по п.5, характеризующееся тем, что гомеопатически активированная - потенцированная форма действующей субстанции получена из матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

7. Лекарственное средство по п.5, характеризующееся тем, что включает смесь различных гомеопатических разведений.

8. Лекарственное средство по п.5, характеризующееся тем, что включает смесь гомеопатических разведений С 12, С 30, С 50 или С 12, С 30, С 200.