ПРОИЗВОДНОЕ АМИДА САЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ, ПРОТИВОГРИБКОВОЙ И АНТИЛИЗОЦИМНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2014 года по МПК C07C233/83 A61K31/609 A61P31/04 A61P31/10 

Описание патента на изобретение RU2504536C1

Изобретение относится к новым водорастворимым производным амида салициловой кислоты (СК) с этиловым эфиром глицина (аминоуксусная кислота), а именно натриевой соли этилового эфира N-салицилоилглицина (2-[(2-этокси-2-оксоэтил)карбомоил]фенолят натрия) и его применению в качестве антибактериального и противогрибкового средства, проявляющего антилизоцимную активность.

Поиски новых антибактериальных препаратов, несмотря на большое число уже синтезированных антибактериальных веществ, до сих пор являются одной из важнейших задач и проблем химиотерапии бактериальных инфекций. Осложнениями в терапии известными препаратами являются случаи тяжелых форм бактериальных инфекций, вызванные штаммами бактерий, устойчивыми к применяющимся средствам, в том числе штаммами с множественной лекарственной устойчивостью. Важное значение приобретают поиски хорошо растворимых и малотоксичных соединений, которые могли бы применяться парентерально. Известны антибактериальные лекарственные средства, относящиеся по химическому строению к производным β-лактамов (пенициллины, цефалоспорины, цефамицины), аминогликозидов (канамицин, гентамицин, неомицин, стрептомицин), тетрациклинов, сульфамидным препаратам, фторхинолонам (Лоуренс Д.П. Бенитт Клиническая фармакология. - М.: Медицина, 1991. - Т.1. - С.364). Однако все они имеют побочные реакции: аллергии разного типа, лейкопения (цефалоспорины, сульфамидные препараты), нефротоксичность, вестибулотоксичность (аминогликозиды), нейротоксичность и подавление функций костного мозга, гемолитическая анемия (стрептомицин).

Что касается грибковых заболеваний, то в последние десятилетия отмечается их значительный рост. Это связано со многими факторами и, в частности, с широким применением в медицинской практике антибиотиков широкого спектра действия, иммунодепрессантов и других групп лекарственных средств. В связи с тенденцией к росту грибковых заболеваний (в том числе ассоциированных с ВИЧ-инфекцией, онкогематологическими заболеваниями), развитием устойчивости возбудителей к имеющимся лекарственным средствам, возросла потребность в эффективных противогрибковых средствах. Хотя токсичность последних поколений этих препаратов значительно меньше, большое количество побочных эффектов остается нерешенной проблемой противогрибковых медикаментов. Они являются токсичными для печени и почек, вызывают расстройства пищеварительного тракта, кожную сыпь, неврологические нарушения, расстройства вкуса. При применении препарата могут отмечаться местные реакции, такие как болезненность, жжение и зуд.

Салициловую кислоту (CAS 69-72-7) в настоящее время используют как кератолитическое, антисептическое, местнораздражающее и противовоспалительное средство. Вследствие плохой растворимости в воде и высокой кислотности применяют СК только местно и наружно в виде мазей и 1-2% спиртовых растворов. При применении СК возможны местные реакции в виде зуда, жжения, кожной сыпи, аллергические реакции [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Т.2. - М.: Новая волна. - 2002. - С.377].

Так как в структуре нового производного имеется амидная группа, то нужно отметить, что в медицинской практике среди используемых амидов СК известны: салициламид (CAS 65-45-2), который назначают внутрь в качестве болеутоляющего и жаропонижающего средства, оксафенамид (CAS 526-18-1) усиливает образование и выделение желчи, оказывает спазмолитическое действие и снимает или уменьшает спазмы желчевыводящих путей, тиаприд и султоприд оказывают антидофаминергическое действие которые применяют наружно в качестве обезболивающих и противовоспалительных средств [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - T.1. - М.: Новая волна. - 2002. - С.74]. Натриевая соль салициловой кислоты (энтерсалил, диуретин, натрия салицилат, CAS 54-21-7) оказывает аналгезирующее, жаропонижающее и противовоспалительное действие [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Т.1. - М.: Новая волна. - 2002. - С.167].

Целью изобретения является новое водорастворимое малотоксичное производное амида салициловой кислоты. Поставленная цель достигается структурой нового антибактериального и противогрибкового средства, обладающего антилизоцимной активностью, а именно натриевой соли этилового эфира N-салицилоилглицина (2-[(2-этокси-2-оксоэтил)карбомоил]фенолят натрия) формулы

и использования ее в качестве антибактериального и противогрибкового средства.

Заявляемое водорастворимое соединение в связи с установленной нами его высокой антибактериальной, противогрибковой и антилизоцимной активностью и низкой токсичностью представляет интерес как новый антибактериальный и противогрибковый препарат для применения перорально (таблетки, капсулы) и парентерально (внутримышечно, под кожу, внутривенно).

В патенте США (US 7842696) имеются данные о способе получения и ингибирующей активности этилового эфира (2-гидроксибензоиламино)уксусной кислоты (CAS 5853-89-4) по отношению к десатуразе Ко-А жирных кислот - фермента, катализирующего превращение одинарной связи между атомами углерода в ацильных цепях в двойные связи (C=C). Никаких данных об антибактериальной и/или противогрибковой активности в описании изобретения не приводится. Какие-либо указания на возможность получения водорастворимого производного этого соединения в патенте также отсутствуют.

Водорастворимая натриевая соль этилового эфира N-салицилоилглицина (2-[(2-этокси-2-оксоэтил)карбомоил]фенолят натрия) получена нами впервые.

Кроме того, одним из факторов, способствующих персистенции микроорганизмов, является способность бактерий деградировать лизоцим - антилизоцимная активность (АЛА), которая сообщает микроорганизмам устойчивость к внутриклеточному перевариванию, действию внеклеточного лизоцима в условиях макроорганизма или создает селективные преимущества в биоценозах с микробами-антагонистами, продуцентами лизоцима. В связи с вышеизложенным представлялось актуальным изучить АЛА для заявляемого соединения.

Пример 1. Натриевая соль этилового эфира N-салицилоилглицина (2-[(2-этокси-2-оксоэтил)карбомоил]фенолят натрия). Этиловый эфир N-салицилоилглицина может быть получен по известной методике, указанной в патенте US 7842696. Для получения натриевой соли этилового эфира салицилоилглицина 4,6 г (100 ммоль) этилата натрия, 35 г толуола и 22,3 г (100 ммоль) этилового эфира N-салицилоилглицина смешивают и при перемешивании нагревают при температуре 100°C в течение 15 минут. После охлаждения продукт отделяют фильтрованием, промывают небольшим количеством бензола и сушат. Получают белое кристаллическое вещество (23,03 г, 94%) с температурой плавления выше 270°C. Натриевая соль этилового эфира N-салицилоилглицина: в спектре ЯМР 1H (ДМСО-d6) отсутствует сигнал фенольного гидроксила (1H, Ph-OH).

Пример 2. Определение антимикробной (Staphylococcus aureus, Escherichia coli) и противогрибковой (Candida albicans) активности. Для исследования противомикробной активности химических веществ нами был использован метод прямой иммунодиффузии. Микробные культуры смывали со сред 3 мл физиологического раствора и готовили взвесь, содержащую 500 млн микробных тел в 1 мл по стандарту мутности. Делали посев сплошным газоном на поверхности мясо-пептонного агара и среде Сабуро в чашки Петри. Нами использовались стерильные диски фильтровальной бумаги, стандартного образца для качественного определения чувствительности бактерий. Далее соблюдая стерильность, диски пропитывали 2% раствором вещества (в физиологическом растворе) и накладывали на среду, согласно правилам методики. Чашки Петри инкубировали в термостате при 37°C. Делали не менее пяти исследований. Через 24-48 часа вокруг дисков измерялись диаметры зоны задержки роста (ДЗЗР) в миллиметрах и заносили в таблицы. Статистическая обработка экспериментального материала и анализ достоверности различий по t-критерию Стьюдента были проведены с помощью программы Excel ХР (таблица 1).

Пример 3. Определение антилизоцимной активности.

Антилизоцимную активность определяют чашечным методом, для этого готовят разведение лизоцима: взвешивают 10 мг лизоцима, добавляют 10 мл физиологического раствора. К 0,5 мл полученного разведения добавляют 9,5 мл физиологического раствора (50 мкг/мл). Готовят разведения лизоцима: к 0,1 мл полученного разведения добавляют 0,9 мл физиологического раствора (1 мкг/мл); к 0,2 мл - 0,8 мл физиологического раствора (2 мкг/мл); к 0,3 мл разведения лизоцима - 0,7 мл физиологического раствора (3 мкг/мл) и т.д. Заливают чашки Петри, добавляя к каждому разведению 4 мл 1,5% питательного агара. Готовят контроль, добавляя 1 мл физиологического раствора к 4 мл 1,5% питательного агара. Чашки подсушивают в термостате при 37°C в течение 10-15 минут. Готовят 1 млрд взвесь исследуемых культур в физиологическом растворе и наносят в виде бляшек на поверхность приготовленных сред. Чашки помещают в термостат при 37°C на 18-24 часа. Выросшие макроколонии обрабатывают парами хлороформа, наливая его в крышку чашки Петри (в течение 10 минут). Готовят 1 млрд взвесь суточной агаровой культуры Micrococcus luteus в физиологическом растворе, разливают по 0,1 мл в пробирки и заливают каждую чашку вторым слоем, добавляя к индикаторной культуре микрококка 3 мл 0,7% питательного агара. Чашки помещают в термостат на 24 часа при 37°C и проводят учет результатов опыта по наличию роста микрококка вокруг колоний исследуемых культур. Учитывают уровень выраженности признака по принятой градации: 0 мкг/мл, 1 мкг/мл, 2 мкг/мл, 3 мкг/мл, 4 мкг/мл, 5 мкг/мл. За уровень антилизоцимной активности исследуемых культур принимают максимальное значение концентрации лизоцима в среде, при которой еще наблюдается рост индикаторного штамма (таблица 2, 3).

Пример 4. Определение острой токсичности. Острую суточную токсичность при однократном введении изучали на мышах (самках и самцах) массой 25-30 г. Соединение в изотоническом растворе хлорида натрия вводили животным внутрибрюшинно в различных возрастающих дозах однократно. Наблюдение за животными проводили в течение суток, отмечая количество погибших животных. Расчет ЛД50 проводили по методу Литчфилда и Уилкоксона. Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета Microsoft Open Office и Biostatics 4.03 с использованием однофакторного дисперсионного анализа, критериев множественного сравнения Стьюдента с поправкой Бонферрони (таблица 1).

Исследования острой токсичности заявляемого водорастворимого производного амида СК показали, что по классификации опасности (вредности) веществ натриевая соль этилового эфира N-салицилоилглицина при внутрибрюшинном введении мышам (ЛД50=1729,62 мг/кг) относится к классу умеренно токсичных соединений [Саноцкий И.В. Уланова И.П. Критерий вредности в гигиене и токсикологии при оценке опасности химических соединений. - М.: Медицина, 1975. - 328 с.]. А анализ данных по антибактериальной, противогрибковой и антилизоцимной активности заявляемого соединения и вещества сравнения - салицилата натрия, показал, что заявляемое соединение - натриевая соль этилового эфира N- салицилоилглицина - проявляет выраженный антибактериальный и противогрибковый эффект в сочетании с антилизоцимной активностью.

Таблица 1 Антибактериальная и противогрибковая активность и острая суточная токсичность (ЛД50) Вещества ЛД50, мг/кг Диаметр зон задержки роста, мм Staphylococcus aureus Escherichia coli Candida albicans Физиологический раствор, 0,9% NaCl 4000 - - - Раствор салицилата натрия 540 - - - Натриевая соль этилового эфира N-салицилоилглицина 1729,56* (1579,57÷1893,80) 7±0,412* 7±0,523* 14±2,506* * - данные статистически достоверны p<0,05

Таблица 2 Выраженность антилизоцимной активности натриевой соли этилового эфира салицилоилглицина Виды микроорганизмов АЛА, баллов Низкая (1-2 мкг/мл) Средняя (3-4 мкг/мл) Высокая (5-6 мкг/мл) M±m мкг/мл Candida albicans 2 4 - 3±0,6 Staphyllococcus aureus 2 - - 2±0,3 Escherichia coli 2 3 - 2±0,6 * - данные статистически достоверны p<0,05

Таблица 3 Выраженность антилизоцимной активности салицилата натрия Виды микроорганизмов АЛА, баллов Низкая (1-2 мкг/мл) Средняя (3-4 мкг/мл) Высокая (5-6 мкг/мл) M±m мкг/мл Candida albicans 1 - - 1±0,4 Staphyllococcus aureus - - - - Escherichia coli 1 - - 1±0,3 * - данные статистически достоверны p<0,05

Похожие патенты RU2504536C1

название год авторы номер документа
СРЕДСТВО АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЕ НА ОСНОВЕ ЭКСТРАКТА МХА СФАГНУМА 2017
  • Пименова Алена Александровна
  • Ананьина Ирина Викторовна
  • Самохвалова Наталья Викторовна
  • Отшамов Дмитрий Юрьевич
  • Леонов Вадим Вячеславович
RU2706218C1
ШТАММ БАКТЕРИЙ Staphylococcus aureus, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ ТЕСТ-КУЛЬТУРЫ ДЛЯ ОТБОРА АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ СРЕДСТВ 2014
  • Карташова Ольга Львовна
  • Уткина Татьяна Михайловна
  • Попова Лидия Петровна
RU2568058C2
ВОДОРАСТВОРИМОЕ ПРОИЗВОДНОЕ АМИДА САЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ, ОБЛАДАЮЩЕЕ ТРАНКВИЛИЗИРУЮЩЕЙ, НООТРОПНОЙ И АНАЛЬГЕЗИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ 2012
  • Брель Анатолий Кузьмич
  • Петров Владимир Иванович
  • Лисина Светлана Викторовна
  • Ковалёв Дмитрий Геннадьевич
  • Саломатина Юлия Николаевна
  • Мягкова Ирина Алексеевна
RU2540464C2
ПРОИЗВОДНЫЕ ЦИКЛИЧЕСКИХ 5-НИТРОПИРИДИН-2-ИЛ-ТИОАЛКЕНИЛ-4-ДИТИОКАРБАМАТОВ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОГРИБКОВОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ 2012
  • Макаров Вадим Альбертович
  • Суровцев Виктор Васильевич
RU2487132C1
Фармацевтическая комбинированная композиция для местного и наружного применения на основе диоксидина 2016
  • Межбурд Евгений Вольфович
  • Блатун Леонид Александрович
  • Аринбасаров Михаил Утевлевич
  • Коган Владимир Ильич
RU2667974C2
СПОСОБ РАННЕГО ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ У ДЕТЕЙ, ПЕРЕНЕСШИХ ОСТРЫЙ ПИЕЛОНЕФРИТ 2001
  • Васильева Л.И.
  • Набока Ю.Л.
  • Клюка И.В.
  • Васильев А.Г.
  • Брагина Л.Е.
RU2194281C1
ЗУБНАЯ ПАСТА, СОДЕРЖАЩАЯ СТИМУЛЯТОРЫ РЕГЕНЕРАЦИИ 2013
  • Иванов Владимир Николаевич
  • Улитовский Сергей Борисович
  • Яременко Андрей Ильич
RU2535045C1
МЕДИЦИНСКИЕ ИЗДЕЛИЯ С ОДНОРОДНОЙ ПЛОТНОСТЬЮ ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО ЗАРЯДА И МЕТОДЫ ИХ ИЗГОТОВЛЕНИЯ 2012
  • Джордж Эрик
  • Махадеван Шивкумар
  • Венкатасуббан Куниси
  • Мэджио Томас
  • Фадли Зохра
  • Скейлс Чарльз
  • Джослин Скотт Л.
  • Форд Джеймс Д.
  • Дэвис Кэрри Л.
  • Хансен Лиа
RU2601454C2
КОСМЕТИЧЕСКИЙ КРЕМ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГРИБКОВЫХ ПОРАЖЕНИЙ КОЖИ "РАДА-ПЛЮС" 1996
  • Децина А.Н.
  • Родионов В.И.
  • Селиванов Б.А.
  • Бачинский А.Г.
  • Казаринова Н.В.
  • Музыченко Л.М.
  • Шургая А.М.
  • Кузнецова И.Ю.
RU2118152C1
АНТИСЕПТИЧЕСКОЕ ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО 2017
  • Штырлин Юрий Григорьевич
  • Штырлин Никита Валерьевич
  • Стрельник Алексей Дмитриевич
  • Сапожников Сергей Витальевич
  • Иксанова Альфия Габдулахатовна
  • Казакова Рената Рувшановна
  • Агафонова Мария Николаевна
RU2641309C1

Реферат патента 2014 года ПРОИЗВОДНОЕ АМИДА САЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ, ПРОТИВОГРИБКОВОЙ И АНТИЛИЗОЦИМНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Изобретение относится к водорастворимому производному амида салициловой кислоты, а именно к натриевой соли этилового эфира N-салицилоилглицина (2-[(2-этокси-2-оксоэтил)карбомоил]феноляту натрия), и может быть использовано в химико-фармацевтической промышленности. Технический результат - натриевая соль этилового эфира N-салицилоилглицина, обладающая антибактериальной, противогрибковой и антилизоцимной активностью. 3 табл., 4 пр.

Формула изобретения RU 2 504 536 C1

Водорастворимое производное амида салициловой кислоты формулы

обладающее антибактериальным, противогрибковым действием и антилизоцимной активностью.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2014 года RU2504536C1

ЛИСИНА С.В
Синтез и исследование свойств производных салициловой кислоты: Автореферат
- Волгоград, 2009
ДИАЛКИЛ-БЕТА-(О-САЛИЦИЛОИЛ)ЭТИЛФОСФОНАТЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ЖАРОПОНИЖАЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ 2009
  • Брель Анатолий Кузьмич
  • Лисина Светлана Викторовна
  • Спасов Александр Алексеевич
  • Мазанова Людмила Степановна
RU2420532C1
Tzofin E.A., Chkhikvadze K.A.: "The monoamide of salicylacetic acid", Zhurnal Obshchei Khimii, 1933, 3, 17-20
Способ приготовления мыла 1923
  • Петров Г.С.
  • Таланцев З.М.
SU2004A1

RU 2 504 536 C1

Авторы

Брель Анатолий Кузьмич

Крамарь Олег Григорьевич

Лисина Светлана Викторовна

Саломатина Юлия Николаевна

Бугаева Любовь Ивановна

Арзамаскова Екатерина Александровна

Четвертнова Галина Андреевна

Даты

2014-01-20Публикация

2012-08-20Подача