СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГИДРОКСИМЕТИЛХИНОКСИЛИНДИОКСИДА И ЕГО ПРИМЕСЕЙ МЕТОДОМ ВЭЖХ Российский патент 2014 года по МПК G01N30/34 

Описание патента на изобретение RU2517761C1

Предлагаемое изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в медицинских, ветеринарных и других исследованиях для качественного и количественного определения гидроксиметилхиноксилиндиоксида и его примесей.

В настоящее время к лекарственным субстанциям и препаратам предъявляются три требования: эффективность, безопасность, качество. Качество лекарственной субстанции и лекарственного препарата определяется установлением его подлинности, определением его чистоты и количественным содержанием чистого вещества в препарате. Присутствие в лекарственных субстанциях примесей может не только снижать терапевтический эффект, но и вызывать нежелательное побочное действие лекарственного препарата, включающего такую субстанцию.

Проблема определения примеси в лекарственной субстанции гидроксиметилхиноксилиндиоксида связана с проблемами разделения активного вещества и примесей. Решить данную проблему можно с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Известен способ определения гидроксиметилхиноксилиндиоксида в водном растворе методом ВЭЖХ в изократическом режиме с использованием хроматографической колонки размером 300×4,0 мм, заполненной сорбентом µ Bondapak CN, в качестве подвижной фазы используют смесь 0,05 М фосфатно-аммиачный буфер (рН 2,5) с ацетонитрилом, минимальная определяемая концентрация 0,05 мг/л (ГОСТ Р ИСО 10993.13-99* Оценка биологического действия медицинских изделий).

Известен способ определения гидроксиметилхиноксилиндиоксида в крови и моче с помощью ВЭЖХ. Определение проводят на хроматографической колонке размером 600×2,0 мм, заполненной носителем марки Bio-SilA с размером частиц 25-35 мкм, в качестве подвижной фазы используют дистиллированную воду в изократическом режиме, минимальная определяемая концентрация 0,15 мкг/мл при пробе 20 мкл («Метод количественного определения диоксидина (гидроксиметилхиноксилиндиоксида) в крови и моче с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии». Химико-фармацевтический журнал, 1977, №9).

Известен способ определения гидроксиметилхиноксилиндиоксида в тканях рыб с помощью ВЭЖХ. Определение проводят на хроматографической колонке размером 2,1×50 мм, заполненной сорбентом BEN С18 с размером частиц 1,7 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь метанола (А) с 0,3% водным раствором муравьиной кислоты (В), в градиентном режиме: 0-2 мин, 10-63% А; 2-3 мин, 63% А, при температуре 40°С, для детектирования используют тройной квадрупольный масс-спектрометр (Journal of Separation Science, 2011, №34, p.469-474).

Известен способ определения примесей в гидроксиметилхиноксилиндиоксиде методом ТСХ. Определение проводят на хроматографических пластинках Силуфол УФ 254 или Кизельгель 60 F 254, используя в качестве подвижной фазы смесь хлороформа с этанолом 96% в соотношении 19:1 (ФСП 42-0144717605).

Известные способы хорошо себя зарекомендовали и пригодны для качественного и количественного определения или гидроксиметилхиноксилиндиоксида, или его примесей, однако ни один из известных способов не позволяет одновременно и за короткий промежуток времени определить гидроксиметилхиноксилиндиоксид и его примеси в лекарственной субстанции или лекарственном препарате.

В гидроксиметилхиноксилиндиоксиде присутствует как идентифицированная примесь хиноксидин, так и неидентифицированные примеси. Количественный контроль идентифицированной и неидентифицированных примесей является важным для определения качества лекарственной субстанции или лекарственного препарата.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа одновременного определения за короткий промежуток времени содержания гидроксиметилхиноксилиндиоксида (ГХМД) и его примесей в субстанции ГХМД методом ВЭЖХ.

Поставленная задача решается предлагаемым способом определения содержания ГХМД и его примесей в субстанции ГХМД, включающим приготовление испытуемого раствора субстанции; приготовление стандартных растворов ГМХД и примесей; хроматографирование приготовленных растворов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с разделением на колонке С18 размером 50×3,0 мм, заполненной носителем с зернением 3,0 мкм, или размером 150×4,6 мм, заполненной носителем с зернением 5,0 мкм, с использованием в качестве подвижной фазы смеси воды с ацетонитрилом в соотношении от 90:10 до 95:5 или смеси 0,3% раствора муравьиной кислоты с ацетонитрилом в соотношении от 90:10 до 95:5 и ацетонитрила в режиме линейного градиента на хроматографе с использованием ультрафиолетового детектора; идентификацию ГХМД и его примесей на полученных хроматограммах по временам удерживания; расчет содержания ГХМД и его примесей в лекарственной субстанции ГХМД на основании расчетных формул.

Предпочтительно, чтобы ацетонитрил представлял собой ацетонитрил для хроматографии.

Предпочтительно, что носитель представляет собой обращенно-фазовый носитель.

Предпочтительно, что определение содержания ГХМД и его примесей проводят в лекарственной субстанции и лекарственном препарате.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в создании эффективного способа, позволяющего с высокой точностью одновременно определить содержание ГХМД и его примесей в субстанции ГХМД. Кроме того, данный способ прост в исполнении и экономичен.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом:

готовят раствор испытуемого препарата и раствор стандартного образца (СО), последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе фирмы Waters, США с УФ-детектором при длине волны 260 нм и 240 нм с использованием хроматографической колонки С18 размером 50×3,0 мм, заполненной обращенно-фазным носителем с зернением 3,0 мкм, или размером 150×4,6 мм, заполненной обращенно-фазным носителем зернением 5,0 мкм, в режиме линейного градиента с использованием в качестве подвижной фазы (ПФ):

- смеси воды с ацетонитрилом для хроматографии в соотношении от 90:10 до 95:5 или смеси 0,3% раствора муравьиной кислоты с ацетонитрилом для хроматографии в соотношении от 90:10 до 95:5 - фаза А;

- ацетонитрила для хроматографии - фаза В, получая не менее трех хроматограмм каждого раствора. Находят площади пиков определяемых веществ на хроматограммах испытуемого и стандартного растворов и по формуле рассчитывают их содержание в анализируемой лекарственной субстанции.

Примеры конкретного применения предлагаемого способа

Способ определения содержания ГХМД и его примесей в лекарственной субстанции

Пример 1

Для приготовления испытуемого раствора образца лекарственной субстанции берут около 50 мг (точная навеска) ГХМД, растворяют в 50 мл воды в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 2 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата.

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) ГХМД берут около 50 мг (точная навеска) его СО, растворяют в 50 мл воды в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 2 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата (раствор А).

1,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (90:10) до метки и перемешивают (раствор Б).

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) идентифицированной примеси хиноксидина берут около 4 мг (точная навеска) его СО, помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, растворяют в 50 мл метанола, затем доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (раствор 1).

2,5 мл раствора 1 СО хиноксидина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (90:10) до метки и перемешивают (раствор 2).

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) ГХМД и хиноксидина берут 1,0 мл раствора Б и 2 мл раствора 2, помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата.

По 20 мкл испытуемого раствора лекарственной субстанции ГХМД, раствора А СО ГХМД и раствора СО ГХМД и хиноксидина последовательно хроматографируют при температуре 25°С на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой размером 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем YMC-Triart С18 с размером частиц 5,0 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве подвижной фазы смеси воды с ацетонитрилом для хроматографии (90:10) и ацетонитрила для хроматографии. Получают не менее 3-х хроматограмм каждого раствора.

Состав подвижной фазы в течение анализа изменяется по следующей схеме:

Время, мин Скорость потока, мл/мин Смесь воды с ацетонитрилом, % Ацетонитрил, % 0 1,0 100 0 30,0 1,0 80 20

Скорость потока подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны УФ-детектора 260 нм и 240 нм.

Рассчитывают площади пиков ГХМД и находят его количество в анализируемой субстанции ГХМД по формуле, %:

X = S 1 α 0 2 100 25 P S 0 α 1 100 25 2 = S 1 α 0 P S 0 α 1

где S1 - среднее значение площади пика ГХМД на хроматограммах испытуемого раствора;

S0 - среднее значение площади пика ГХМД на хроматограммах раствора А СО;

α1 - навеска субстанции ГХМД в миллиграммах;

α0 - навеска СО ГХМД в миллиграммах;

Р - содержание активного вещества в СО ГХМД в процентах.

Рассчитывают площади пиков идентифицированной примеси хиноксидина и находят ее количество в анализируемой субстанции ГХМД по формуле, %:

X х и н . = S 1 α 0 2 2,5 100 25 P 100 S 0 α 1 200 25 2 10 100 = S 1 α 0 P S 0 α 1 8

где S1 - среднее значение площади пика примеси хиноксидина на хроматограммах испытуемого раствора;

S0 - среднее значение площади пика хиноксидина на хроматограммах растворов СО ГХМД и хиноксидина;

α1 - навеска субстанции ГХМД в миллиграммах;

α0 - навеска СО хиноксидина в миллиграммах;

Р - содержание активного вещества в СО хиноксидина в процентах.

Рассчитывают площади пиков неидентифицированных примесей и находят их количество в анализируемой субстанции ГХМД по формуле, %:

X i = S 1 α 0 2 1 1 100 25 P 100 S 0 α 1 100 25 10 10 2 100 = S 1 α 0 P S 0 α 1 100

где S1 - среднее значение площади пика неидентифицированной примеси на хроматограммах испытуемого раствора;

S0 - среднее значение площади пика ГХМД на хроматограммах растворов СО ГХМД и хиноксидина;

α1 - навеска субстанции ГХМД в миллиграммах;

α0 - навеска СО ГХМД в миллиграммах;

Р - содержание активного вещества в СО ГХМД в процентах.

Хроматограммы испытуемого раствора лекарственной субстанции ГХМД, раствора А СО ГХМД и раствора СО ГХМД и хиноксидина, полученные с использованием колонки размером 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем YMC-Triart С18 с размером частиц 5,0 мкм, представлены на фиг.1, 2, 3.

Пример 2

Для приготовления испытуемого раствора образца лекарственной субстанции берут около 50 мг (точная навеска) ГХМД, растворяют в 50 мл воды в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (95:5) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата.

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) ГХМД берут около 50 мг (точная навеска) его СО, растворяют в 50 мл воды в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 2 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (95:5) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата (раствор А).

1,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (95:5) до метки и перемешивают (раствор Б).

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) хиноксидина берут 4 мг (точная навеска) его СО, помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, растворяют в 50 мл метанола, затем доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (раствор 1).

2,5 мл раствора 1 СО хиноксидина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (95:5) до метки и перемешивают (раствор 2).

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) ГХМД и хиноксидина берут 1,0 мл раствора Б и 1 мл раствора 2, помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (95:5) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата.

По 10 мкл испытуемого раствора лекарственной субстанции ГХМД, раствора А СО ГХМД и раствора СО ГХМД и хиноксидина последовательно хроматографируют при температуре 25°С на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой размером 50×3,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-Triart С18 с размером частиц 3,0 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве подвижной фазы смеси воды с ацетонитрилом для хроматографии (95:5) и ацетонитрила для хроматографии. Получают не менее 3-х хроматограмм каждого раствора.

Состав подвижной фазы в течение анализа изменяется по следующей схеме:

Время, мин Скорость потока, мл/мин Смесь воды с ацетонитрилом, % Ацетонитрил, % 0 0,6 100 0 5,0 0,6 50 50

Скорость потока подвижной фазы 0,6 мл/мин. Длина волны УФ-детектора 260 нм и 240 нм.

Рассчитывают площади пиков ГХМД и находят его количество в анализируемой субстанции ГХМД по формуле, %:

X = S 1 α 0 1 100 25 P S 0 α 1 100 25 1 = S 1 α 0 P S 0 α 1

где S1 - среднее значение площади пика ГХМД на хроматограммах испытуемого раствора;

S0 - среднее значение площади пика ГХМД на хроматограммах раствора А СО;

α1 - навеска субстанции ГХМД в миллиграммах;

α0 - навеска СО ГХМД в миллиграммах;

Р - содержание активного вещества в СО ГХМД в процентах.

Рассчитывают площади пиков примеси хиноксидина и находят его количество в анализируемой субстанции ГХМД по формуле, %:

X х и н = S 1 α 0 2,5 1 100 25 P 100 S 0 α 1 200 25 10 1 100 = S 1 α 0 P S 0 α 1 8

где S1 - среднее значение площади пика примеси хиноксидина на хроматограммах испытуемого раствора;

S0 - среднее значение площади пика хиноксидина на хроматограммах растворов СО ГХМД и хиноксидина;

α1 - навеска субстанции ГХМД в миллиграммах;

α2 - навеска СО хиноксидина в миллиграммах;

Р - содержание активного вещества в СО хиноксидина в процентах.

Рассчитывают площади пиков неидентифицированных примесей и находят их количество в анализируемой субстанции ГХМД по формуле, %:

X i = S 1 α 0 2 1 1 100 25 P 100 S 0 α 1 100 25 10 10 1 100 = S 1 α 0 P S 0 α 1 100

где S1 - среднее значение площади пика неидентифицированной примеси на хроматограммах испытуемого раствора;

S0 - среднее значение площади пика ГХМД на хроматограммах растворов СО ГХМД и хиноксидина;

α1 - навеска субстанции ГХМД в миллиграммах;

α2 - навеска СО ГХМД в миллиграммах;

Р - содержание активного вещества в СО ГХМД в процентах.

Хроматограммы испытуемого раствора лекарственной субстанции ГХМД, раствора А СО ГХМД и раствора СО ГХМД и хиноксидина, полученные с использованием колонки размером 50×3,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-Triart С18 с размером частиц 3,0 мкм, представлены на фиг.4, 5, 6.

Способ определения содержания ГХМД и его примесей в мази

Пример 3

Для приготовления испытуемого раствора навеску мази массой около 1 г (точная навеска) помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл воды, перемешивают до полного распределения препарата и фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл. Коническую колбу и воронку с ватой обмывают 40 мл воды, собирая промывные воды в той же мерной колбе, затем доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и центрифугируют не менее 15 мин при 8000 мин-1. 2 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата.

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) ГХМД берут около 50 мг (точная навеска) его СО, растворяют в 50 мл воды в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 2 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата (раствор А).

1,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (90:10) до метки и перемешивают (раствор Б).

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) хиноксидина берут около 4 мг (точная навеска) его СО, помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, растворяют в 50 мл метанола, затем доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (раствор 1).

2,5 мл раствора 1 СО хиноксидина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (90:10) до метки и перемешивают (раствор 2).

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) ГХМД и хиноксидина берут 1,0 мл раствора Б и 2 мл раствора 2, помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата.

По 20 мкл испытуемого раствора мази ГХМД, раствора А СО ГХМД и раствора СО ГХМД и хиноксидина последовательно хроматографируют при температуре 25°С на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой размером 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем YMC-Triart С18 с размером частиц 5,0 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве подвижной фазы смеси воды с ацетонитрилом для хроматографии (90:10) и ацетонитрила для хроматографии. Получают не менее 3-х хроматограмм каждого раствора.

Состав подвижной фазы в течение анализа изменяется по следующей схеме:

Время, мин Скорость потока, мл/мин Смесь воды с ацетонитрилом, % Ацетонитрил, % 0 1,0 100 0 30,0 1,0 80 20

Скорость потока подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны УФ-детектора 260 нм и 240 нм.

Рассчитывают площади пиков ГХМД и находят его количество в анализируемой мази по формуле, %:

X = S 1 α 0 2 100 25 P S 0 α 1 100 25 2 1000 = S 1 α 0 P S 0 α 1 1000

где S1 - среднее значение площади пика ГХМД на хроматограммах испытуемого раствора;

S2 - среднее значение площади пика ГХМД на хроматограммах раствора А СО;

α1 - навеска мази ГХМД в граммах;

α0 - навеска СО ГХМД в миллиграммах;

Р - содержание активного вещества в СО ГХМД в процентах.

Рассчитывают площади пиков примеси хиноксидина и находят его количество в анализируемой субстанции ГХМД по формуле, %:

X х и н = S 1 α 0 2,5 2 100 25 P 100 S 0 α 1 200 25 10 2 N 100 1000 = S 1 α 0 P S 0 α 1 8000

где S1 - среднее значение площади пика примеси хиноксидина на хроматограммах испытуемого раствора;

S0 - среднее значение площади пика хиноксидина на хроматограммах растворов СО ГХМД и хиноксидина;

α1 - навеска мази в граммах;

α0 - навеска СО хиноксидина в миллиграммах;

N - содержание ГХМД в граммах в 1 г препарата;

Р - содержание активного вещества в СО хиноксидина в процентах.

Рассчитывают площади пиков неидентифицированных примесей и находят их количество в анализируемой мази ГХМД по формуле, %:

X i = S 1 α 0 2 1 1 100 25 P 100 S 0 α 1 100 25 10 10 2 N 100 1000 = S 1 α 0 P S 0 α 1 N 100000

где S1 - среднее значение площади пика неидентифицированной примеси на хроматограммах испытуемого раствора;

S0 - среднее значение площади пика ГХМД на хроматограммах растворов СО ГХМД и хиноксидина;

α1 - навеска мази в граммах;

α0 - навеска СО ГХМД в миллиграммах;

N - содержание ГХМД в граммах в 1 г препарата;

Р - содержание активного вещества в СО ГХМД в процентах.

Хроматограмма испытуемого раствора мази, полученная с использованием колонки размером 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем YMC-Triart С18 с размером частиц 5,0 мкм, представлена на фиг.7.

Пример 4

Для приготовления испытуемого раствора навеску мази массой около 1 г (точная навеска) помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл воды, перемешивают до полного распределения препарата и фильтруют через вату в мерную колбу вместимостью 100 мл. Коническую колбу и воронку с ватой обмывают 40 мл воды, собирая промывные воды в той же мерной колбе, затем доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и центрифугируют не менее 15 мин при 8000 мин-1. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (95:5) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр.

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) ГХМД берут около 50 мг (точная навеска) его СО, растворяют в 50 мл воды в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (95:5) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр (раствор А).

1,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (95:5) до метки и перемешивают (раствор Б).

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) хиноксидина берут около 4 мг (точная навеска) его СО, помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, растворяют в 50 мл метанола, затем доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (раствор 1).

2,5 мл раствора 1 СО хиноксидина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (95:5) до метки и перемешивают (раствор 2).

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) ГХМД и хиноксидина берут 1,0 мл раствора Б и 1 мл раствора 2, помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора смесью воды с ацетонитрилом (95:5) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата.

По 20 мкл испытуемого раствора А лекарственной субстанции ГХМД и раствора СО гидроксиметилхиноксилиндиоксида и хиноксидина последовательно хроматографируют при температуре 25°С на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой размером 50×3,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-Triart С18 с размером частиц 3,0 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве подвижной фазы смеси воды с ацетонитрилом для хроматографии (95:5) и ацетонитрила для хроматографии, дегазированный. Получают не менее 3-х хроматограмм каждого раствора.

Состав подвижной фазы в течение анализа изменяется по следующей схеме:

Время, мин Скорость потока, мл/мин Смесь воды с ацетонитрилом, % Ацетонитрил, % 0 0,6 100 0 5,0 0,6 50 50

Скорость потока подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны УФ-детектора 260 нм и 240 нм.

Рассчитывают площади пиков гидроксиметилхиноксилиндиоксида и находят его количество в анализируемой мази по формуле, %:

X = S 1 α 0 2 100 25 P S 0 α 1 100 25 2 1000 = S 1 α 0 P S 0 α 1 1000

где S1 - среднее значение площади пика ГХМД на хроматограммах испытуемого раствора;

S0 - среднее значение площади пика ГХМД на хроматограммах раствора А СО;

α1 - навеска мази ГХМД в граммах;

α0 - навеска СО ГХМД в миллиграммах;

Р - содержание активного вещества в СО ГХМД в процентах.

Рассчитывают площади пиков примеси хиноксидина и находят его количество в анализируемом лекарственном препарате ГХМД по формуле, %:

X х и н = S 1 α 0 2,5 2 100 25 P 100 S 0 α 1 200 25 10 2 N 100 1000 = S 1 α 0 P S 0 α 1 8000

где S1 - среднее значение площади пика примеси хиноксидина на хроматограммах испытуемого раствора;

S0 - среднее значение площади пика хиноксидина на хроматограммах растворов СО ГХМД и хиноксидина;

α1 - навеска мази в граммах;

α0 - навеска СО хиноксидина в миллиграммах;

N - содержание ГХМД в граммах в 1 г препарата;

Р - содержание активного вещества в СО хиноксидина в процентах.

Рассчитывают площади пиков неидентифицированных примесей и находят их количество в анализируемом лекарственном препарате ГХМД по формуле, %:

X i = S 1 α 0 2 1 1 100 25 P 100 S 0 α 1 100 25 10 10 2 N 100 1000 = S 1 α 0 P S 0 α 1 N 100000

где S1 - среднее значение площади пика неидентифицированной примеси на хроматограммах испытуемого раствора;

S0 - среднее значение площади пика гидроксиметилхиноксилиндиоксида на хроматограммах растворов СО гидроксиметилхиноксилиндиоксида и хиноксидина;

α1 - навеска мази в граммах;

α0 - навеска СО гидроксиметилхиноксилиндиоксида в миллиграммах;

N - содержание гидроксиметилхиноксилиндиоксида в граммах в 1 г препарата;

Р - содержание активного вещества в СО гидроксиметилхиноксилиндиоксида в процентах.

Хроматограмма испытуемого раствора мази, полученная с использованием колонки размером 50×3,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-Triart С18 с размером частиц 3,0 мкм, представлена на фиг.8.

Статистическую обработку результатов, полученных при использовании предлагаемого способа, проводили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи СССР, XI изд.

Таблица 1 Результаты испытаний субстанции ГХМД (для примера 1) Компонент Содержание в субстанции, % (n=6; Р=0,95) Норма Хср. S2 S ΔX ε, % ГХМД 99,0-100,5 100,14 0,1512 0,3888 0,408 0,41

Таблица 2 Результаты испытаний субстанции ГХМД (для примера 2) Компонент Содержание в субстанции, % (n=6; Р=0,95) Норма Хср. S2 S ΔХ ε, % ГХМД 99,0-100,5 99,945 0,18295 0,4277 0,449 0,45

Таблица 3 Результаты испытаний мази с ГХМД (для примера 3) Компонент Содержание в мази, % (n=6; Р=0,95) Норма Хср. S2 S ΔX ε, % ГХМД 4,75-5,25 5,03 0,0004523 0,06725 0,0706 1,4

Таблица 4 Результаты испытаний мази с ГХМД (для примера 4) Компоненты Содержание в мази, % (n=6; Р=0,95) Норма Хср. S2 S ΔX ε, % ГХМД 4,75-5,25 4,90 0,0074 0,0860 0,0903 1,8

Как видно из полученных результатов, предлагаемый способ позволяет с высокой точностью определить содержание примесей в субстанции ГХМД и в лекарственном препарате, его содержащем.

Похожие патенты RU2517761C1

название год авторы номер документа
Способ определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственных средствах 2020
  • Антонова Наталия Петровна
  • Шефер Елена Павловна
  • Калинин Артем Михайлович
  • Семенова Наталья Евгеньевна
  • Прохватилова Светлана Степановна
  • Моргунов Игорь Михайлович
RU2744231C1
Способ хроматографического разделения гидрокортизона ацетата, кортизона ацетата, метилпарагидроксибензоата, пропилпарагидроксибензоата методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии 2017
  • Алексенко Павел Владимирович
  • Сорокин Александр Анатольевич
RU2653191C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ЭСТРОГЕНА И ДЕКСПАНТЕНОЛА В ДВУХКОМПОНЕНТНОМ ЛЕКАРСТВЕННОМ ПРЕПАРАТЕ МЕТОДОМ ВЭЖХ 2011
  • Моругина Людмила Валентиновна
  • Рудько Александр Иосифович
RU2476873C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ТРОКСЕРУТИНА, ДЕКСПАНТЕНОЛА, БЕНЗОКАИНА И МЕТИЛПАРАГИДРОКСИБЕНЗОАТА В ЛЕКАРСТВЕННОМ ПРЕПАРАТЕ МЕТОДОМ ВЭЖХ 2011
  • Моругина Людмила Валентиновна
  • Чумачева Евгения Алексеевна
RU2475733C1
АНТИГИПОКСИЧЕСКОЕ И ГИПОЛИДЕМИЧЕСКОЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО, УЛУЧШАЮЩЕЕ КОРОНАРНЫЙ И МОЗГОВОЙ КРОВОТОК 2013
  • Сидорин Дмитрий Николаевич
  • Рогова Наталья Викторовна
  • Акишин Михаил Александрович
RU2536275C1
СПОСОБ ОДНОВРЕМЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРИМЕСЕЙ ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ, ДИМЕТИЛСУЛЬФОКСИДА И N-ЭТИЛМАЛЕИМИДА В ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ СУБСТАНЦИЯХ МЕТОДОМ ОБРАЩЕННО-ФАЗОВОЙ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ 2016
  • Купцов Василий Николаевич
  • Ефимова Ирина Сергеевна
  • Белякова Ольга Валерьевна
  • Иванов Александр Викторович
RU2621645C1
СОСТАВ, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИРЕТРОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО 2020
  • Бровченко Богдан Витальевич
  • Ларионов Алексей Максимович
  • Лыкова Елена Олеговна
  • Смирнов Антон Андреевич
RU2753518C1
СОСТАВ, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИРЕТРОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО 2020
  • Бровченко Богдан Витальевич
  • Ларионов Алексей Максимович
  • Лыкова Елена Олеговна
  • Смирнов Антон Андреевич
RU2806172C1
Способ количественного определения 2,2,6,6-тетраметил-N-{ 1-[5-(4-метил-3-хлоранилино)-1,2,4-тиадиазол-3-ил]пропан-2-ил} пиперидин-4-амина дигидрохлорида в биологических средах 2016
  • Тетерин Игорь Юрьевич
  • Поздняков Евгений Геннадьевич
RU2636231C1
Способ количественного определения 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия в биологических объектах 2021
  • Сипкина Надежда Юрьевна
  • Генералова Юлия Эдуардовна
  • Яковлев Игорь Павлович
RU2780870C1

Реферат патента 2014 года СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГИДРОКСИМЕТИЛХИНОКСИЛИНДИОКСИДА И ЕГО ПРИМЕСЕЙ МЕТОДОМ ВЭЖХ

Предлагаемое изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в медицинских, ветеринарных и других исследованиях для определения в лекарственной субстанции гидроксиметилхиноксилиндиоксида количества активного компонента - гидроксиметилхиноксилиндиоксида (ГМХД) и примесей. Для этого определения проводят методом ВЭЖХ на колонке С18 размером 50×3,0 мм, заполненной носителем с зернением 3,0 мкм, или размером 150×4,6 мм, заполненной носителем с зернением 5,0 мкм, с использованием в качестве подвижной фазы смеси воды с ацетонитрилом в соотношении от 90:10 до 95:5 или смеси 0,3% раствора муравьиной кислоты с ацетонитрилом в соотношении от 90:10 до 95:5 и ацетонитрила в режиме линейного градиента на хроматографе с использованием ультрафиолетового детектора. Техническим результатом является повышение точности определения содержания гидроксиметилхиноксилиндиоксида и его примесей как в субстанции, так и в лекарственном препарате, его содержащем. 2 з.п. ф-лы, 8 ил., 4 табл.

Формула изобретения RU 2 517 761 C1

1. Способ определения в лекарственной субстанции гидроксиметилхиноксилиндиоксида количества активного компонента - гидроксиметилхиноксилиндиоксида (ГМХД) и примесей, включающий приготовление испытуемого раствора субстанции; приготовление стандартных растворов ГМХД и примеси; хроматографирование приготовленных растворов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с разделением на колонке С18 размером 50×3,0 мм, заполненной носителем с зернением 3,0 мкм, или размером 150×4,6 мм, заполненной носителем с зернением 5,0 мкм, с использованием в качестве подвижной фазы смеси воды с ацетонитрилом в соотношении от 90:10 до 95:5 или смеси 0,3% раствора муравьиной кислоты с ацетонитрилом в соотношении от 90:10 до 95:5 и ацетонитрила в режиме линейного градиента на хроматографе с использованием ультрафиолетового детектора; идентификацию ГХМД и его примеси на полученных хроматограммах по временам удерживания; расчет содержания ГХМД и его примесей в лекарственной субстанции ГХМД на основании расчетных формул.

2. Способ по п.1, где ацетонитрил представляет собой ацетонитрил для хроматографии.

3. Способ по п.1, где носитель представляет собой обращенно-фазный носитель.

4. Способ по п.1, где определение содержания ГХМД и его примесей проводят в лекарственном препарате.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2014 года RU2517761C1

Zhang, Xiaojun et al, Determination of marker residue of Olaquindox in fish tissue by ultra performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry, Journal of Separation Science, Volume 34, issue 4 (February 2011), p
Прибор для раскрывания парашюта на желаемом расстоянии от места спуска 1922
  • Граве И.П.
SU469A1
Барам Г.И и др., ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
В КОНТРОЛЕ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ,

RU 2 517 761 C1

Авторы

Моругина Людмила Валентиновна

Володина Татьяна Вячеславовна

Даты

2014-05-27Публикация

2012-11-08Подача