СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ТРОКСЕРУТИНА, ДЕКСПАНТЕНОЛА, БЕНЗОКАИНА И МЕТИЛПАРАГИДРОКСИБЕНЗОАТА В ЛЕКАРСТВЕННОМ ПРЕПАРАТЕ МЕТОДОМ ВЭЖХ Российский патент 2013 года по МПК G01N30/22 

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в медицинских, ветеринарных и других исследованиях для определения троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственных препаратах.

В фармацевтической промышленности продолжает развиваться тенденция к производству лекарственных препаратов, содержащих несколько действующих веществ. Преимущество таких лекарственных препаратов заключается в том, что они вызывают значительный лечебный эффект при отсутствии или минимуме отрицательных влияний на организм. Это свойство обусловлено введением в препарат малых доз отдельных ингредиентов. Проблема обеспечения и контроля качества таких препаратов связана, с одной стороны, с малыми дозами, с другой - с различной химической природой входящих ингредиентов. Решить данную проблему можно с помощью эффективных способов определения количественного состава. К таким способам относится метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Известен способ определения декспантенола в лекарственных препаратах методом ВЭЖХ в изократическом режиме с использованием хроматографической колонки размером 250×4,0 мм, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, со стационарной фазой С₄, в качестве подвижной фазы используют смесь 0,01 М раствор ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом в соотношении 90:10 (ФСП 8444-07 ЛСР-001794/08-170308).

Известен способ определения декспантенола и метилпарагидроксибензоата (нипагина) в аэрозольном препарате «Декспантенол» методом ВЭЖХ (Ж. Аналитическая химия, 2008, том 63, №9, с.962-968). Декспантенол и метилпарагидроксибензоат (нипагин) в известном способе определяют в изократическом режиме, используя для определения декспантенола в качестве подвижной фазы смесь метанола и 0,01 М ортофосфорной кислоты (10:90), а для определения метилпарагидроксибензоата (нипагина) - смесь ацетонитрила и воды (40:60).

Известен способ определения троксерутина и метилпарагидроксибензоата (нипагина) в фармацевтической композиции методом ВЭЖХ (патент США №7026360).

Однако ни один из известных способов не позволяет количественно определить троксерутин, декспантенол, бензокаин и метилпарагидроксибензоат при одновременном их присутствии в лекарственных препаратах.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа одновременного определения троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в составе лекарственного препарата.

Поставленная задача решается предлагаемым способом определения содержания троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственном препарате, включающим извлечение троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата из анализируемого лекарственного препарата, хроматографирование извлечения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с разделением на колонке С18 размером 50×2,0 мм, заполненной носителем зернением 2,0 мкм, или размером 150×4,6 мм, заполненной носителем зернением 5,0 мкм, с использованием в качестве подвижных фаз смеси 0,05% раствора кислоты ортофосфорной с ацетонитрилом для хроматографии в соотношении от 90:10 до 95:5 (pH 2,4) и ацетонитрила в режиме линейного градиента, на хроматографе с использованием ультрафиолетового детектора, после чего на основании расчетных формул определяют содержания троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственном препарате.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в создании эффективного способа, позволяющего с высокой точностью определить содержание троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственном препарате. Кроме того, данный способ прост в исполнении и экономичен.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом:

раствор испытуемого лекарственного препарата и раствор стандартного образца (СО) последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе фирмы Waters, США с УФ-детектором при длинах волн 206 нм, 256 нм, и 288 нм и хроматографической колонкой С18 размером 50×2,0 мм, заполненной обращенно-фазным носителем зернением 2,0 мкм, или размером 150×4,6 мм, заполненной обращенно-фазным носителем зернением 5,0 мкм, в режиме линейного градиента с использованием в качестве подвижной фазы (ПФ):

- смеси 0,05% раствора кислоты ортофосфорной pH 2,4 с ацетонитрилом для хроматографии в соотношении от 90:10 до 95:5 - фаза А;

- ацетонитрила для хроматографии - фаза В;

получая не менее трех хроматограмм каждого раствора.

Находят площади пиков определяемых веществ на хроматограммах испытуемого и стандартного растворов и по формуле рассчитывают их содержание в анализируемом препарате.

Примеры конкретного применения предлагаемого способа.

Количественное определение троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственном препарате, выполненном в виде геля

Пример 1

Для приготовления испытуемого раствора около 2,5 г (точная навеска) геля помещают в коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 100 мл, прибавляют 35 мл смеси раствора кальция хлорида с ацетонитрилом (3:2), интенсивно перемешивают до растворения основы при нагревании в водяной бане при температуре 60°C в течение 3 мин, охлаждают и фильтруют через фильтр «синяя лента» в мерную колбу вместимостью 50 мл. Коническую колбу и фильтр обмывают 10 мл смеси раствора кальция хлорида с ацетонитрилом (3:2), собирая промывные воды в ту же мерную колбу, доводят объем раствора той же смесью до метки и перемешивают. 5 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора кислоты ортофосфорной с ацетонитрилом (95:5), перемешивают и фильтруют через фильтр «синяя лента», отбрасывая первые порции (около 10 мл) фильтрата (испытуемый раствор).

Для приготовления раствора CO бензокаина и метилпарагидроксибензоата берут около 0,05 г (точная навеска) CO бензокаина и около 0,075 г (точная навеска) CO метилпарагидроксибензоата, растворяют в смеси раствора кальция хлорида с ацетонитрилом (3:2) в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора той же смесью до метки и перемешивают (раствор А).

Для приготовления раствора CO троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата берут около 0,01 г (точная навеска) троксерутина и около 0,05 г (точная навеска) декспантенола, растворяют в смеси 0,05% раствора кислоты ортофосфорной с ацетонитрилом (95:5) в мерной колбе вместимостью 100 мл, прибавляют 1 мл раствора А, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора кислоты ортофосфорной с ацетонитрилом (95:5) до метки, перемешивают и фильтруют через фильтр «синяя лента», отбрасывая первые порции (около 10 мл) фильтрата (раствор Б).

По 20 мкл испытуемого раствора и раствора Б СО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем Purospher® STAR RP-18е с размером частиц 5,0 мкм в режиме линейного градиента, с использованием в качестве ПФ смеси фазы А (с pH 2,4) и фазы В (ацетонитрил для хроматографии). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Состав ПФ в течение анализа изменяется по следующей программе:

Время в мин Длина волны в нм Фаза А, % Фаза В, % 0 206 100 0 4,5 -//- 100 0 5,0 -//- 60 40 6,0 256 60 40 9,5 288 60 40 11,5 -//- 60 40

Скорость потока подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны УФ-детектора - 206 нм для декспантенола; 256 нм для троксерутина и метилпарагидроксибензоата; 288 нм для бензокаина.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемом лекарственном препарате по формуле:

где S_K и S_CT - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и СО соответственно;

V₁ - объем раствора А CO, взятый для приготовления раствора Б CO, в миллилитрах;

V₂ - объем раствора А CO в миллилитрах;

m_ст и m_н - массы стандарта определяемого вещества в растворе CO и навески лекарственного препарата, взятой для приготовления испытуемого раствора, соответственно, в граммах.

Хроматограмма испытуемого раствора лекарственного препарата, выполненного в виде геля, содержащего троксерутин, декспантенол, бензокаин и метилпарагидроксибензоат, с использованием колонки 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем Purospher® STAR RP-18e с размером частиц 5 мкм представлена на фиг.1.

Пример 2

Для приготовления испытуемого раствора около 2,5 г (точная навеска) геля помещают в коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 100 мл, прибавляют 35 мл смеси раствора кальция хлорида с ацетонитрилом (3:2), интенсивно перемешивают до растворения основы при нагревании в водяной бане при температуре 60°C в течение 3 мин, охлаждают и фильтруют через фильтр «синяя лента» в мерную колбу вместимостью 50 мл. Коническую колбу и фильтр обмывают 10 мл смеси раствора кальция хлорида с ацетонитрилом (3:2), собирая промывные воды в ту же мерную колбу, доводят объем раствора той же смесью до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора кислоты ортофосфорной с ацетонитрилом (95:5), перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции (около 5 мл) фильтрата (испытуемый раствор).

Для приготовления раствора CO бензокаина и метилпарагидроксибензоата берут около 0,05 г (точная навеска) CO бензокаина и около 0,075 г (точная навеска) CO метилпарагидроксибензоата, растворяют в смеси раствора кальция хлорида с ацетонитрилом (3:2) в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора той же смесью до метки и перемешивают (раствор А).

Для приготовления раствора CO троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата берут около 0,01 г (точная навеска) троксерутина и около 0,05 г (точная навеска) декспантенола, растворяют в смеси 0,05% раствора кислоты ортофосфорной с ацетонитрилом (95:5) в мерной колбе вместимостью 100 мл, прибавляют 1 мл раствора А, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора кислоты ортофосфорной с ацетонитрилом (95:5) до метки и перемешивают (раствор Б).

5 мл раствора Б помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (95:5) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первую порцию (около 5 мл) фильтрата (раствор В).

По 10 мкл испытуемого раствора и раствора В СО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 50×2,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-UltraHT Pro C18 с размером частиц 2,0 мкм в режиме линейного градиента, с использованием в качестве ПФ смеси фазы А (с pH 2,4) и фазы В (ацетонитрил для хроматографии). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора. Состав ПФ в течение анализа изменяется по следующей программе:

Время в мин Длина волны в нм Фаза А, % Фаза В, % 0 206 100 0 1,0 256 -//- -//- 1,7 288 -//- -//- 2,00 -//- 50 50

Скорость потока подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны УФ-детектора - 206 нм для декспантенола; 256 нм для троксерутина и метилпарагидроксибензоата; 288 нм для бензокаина.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемом лекарственном препарате по формуле:

где S_K и S_CT - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и CO соответственно;

V₁ - объем раствора А CO, взятый для приготовления раствора Б СО, в миллилитрах;

V₂ - объем раствора А СО в миллилитрах;

m_ст и m_н - массы стандарта определяемого вещества в растворе СО и навески лекарственного препарата, взятой для приготовления испытуемого раствора, соответственно, в граммах.

Хроматограмма испытуемого раствора лекарственного препарата, выполненного в виде геля, содержащего троксерутин, декспантенол, бензокаин и метилпарагидроксибензоат, с использованием колонки 50×2,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-UltraHT Pro С18 с размером частиц 2,0 мкм представлена на фиг.2.

Статистическую обработку результатов, полученных при использовании предлагаемого способа, проводили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи СССР, XI изд.

Таблица 1 Результаты испытаний лекарственного препарата, выполненного в виде геля, содержащего троксерутин, декспантенол, бензокаин и метилпарагидроксибензоат (пример 1) Компоненты Содержание в одном грамме геля, г (n=9; Р=0,95) Норма Х_ср. S² S ΔХ ε, % Троксерутин 0,018-0,022 0,0192 0,1619×10^-6 0,4024×10^-3 0,1423×10^-3 0,7 Декспантенол 0,09-0,11 0,1007 3,7061×10^-6 1,9251×10^-3 0,6806×10^-3 0,7 Бензокаин 0,0009-0,0011 9,70×10^-4 6,0203×10^-10 2,4536×10^-5 8,6749×10^-6 0,9 Метилпарагидроксибензоат 0,0012-0,0018 0,00148 1,2758×10^-9 3,5718×10^-5 1,2628×10^-5 0,9

Таблица 2 Результаты испытаний лекарственного препарата, выполненного в виде геля, содержащего троксерутин, декспантенол, бензокаин и метилпарагидроксибензоат (пример 2) Компонен-ты Содержание в одном грамме геля, г (n=9; Р=0,95) Норма Х_ср. S² S ΔХ ε, % Троксерутин 0,018-0,022 0,0205 0,2875×10^-6 0,5362×10^-3 0,1896×10^-3 0,9 Декспантенол 0,09-0,11 0,0981 2,4094×10^-6 1,5522×10^-3 0,5488×10^-3 0,6 Бензокаин 0,0009-0,0011 9,85×10^-4 9,7125×10^-10 3,1165×10^-5 1,102×10^-5 1,1 Метилпарагидроксибензоат 0,0012-0,0018 0,00148 1,1465×10^-9 3,3860×10^-5 1,1971×10^-5 0,8

Как видно из полученных результатов, предлагаемый способ позволяет с высокой точностью определить содержание троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственном препарате.

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в медицинских, ветеринарных и других исследованиях для определения троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственных препаратах. Способ определения содержания троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственном препарате включает извлечение троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата из анализируемого лекарственного препарата. Также способ включает хроматографирование извлечения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с разделением на колонке С18 размером 50×2,0 мм, заполненной носителем зернением 2,0 мкм, или размером 150×4,6 мм, заполненной носителем зернением 5,0 мкм, с использованием в качестве подвижных фаз смеси 0,05% раствора кислоты ортофосфорной с ацетонитрилом для хроматографии в соотношении от 90:10 до 95:5 (pH 2,4) и ацетонитрила, в режиме линейного градиента на хроматографе с использованием ультрафиолетового детектора. После чего на основании расчетных формул определяют содержание троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственном препарате. Техническим результатом изобретения является повышение определения содержания троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственном препарате. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 2 пр.

1. Способ определения содержания троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственном препарате, включающий извлечение троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата из анализируемого лекарственного препарата, хроматографирование извлечения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с разделением на колонке С18 размером 50×2,0 мм, заполненной носителем зернением 2,0 мкм, или размером 150×4,6 мм, заполненной носителем зернением 5,0 мкм, с использованием в качестве подвижных фаз смеси 0,05%-ного раствора кислоты ортофосфорной с ацетонитрилом для хроматографии в соотношении от 90:10 до 95:5 (pH 2,4) и ацетонитрила, в режиме линейного градиента на хроматографе с использованием ультрафиолетового детектора, после чего на основании расчетных формул определяют содержание троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственном препарате.

2. Способ по п.1, где носитель представляет собой обращенно-фазовый носитель.