ИНЪЕКЦИОННАЯ ФОРМА 5α АНДРОСТАН-3β,5,6β-ТРИОЛА И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2014 года по МПК A61K31/568 A61K9/08 A61K9/14 A61K9/19 A61K47/40 A61P25/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение представляет собой изобретение в области фармацевтики и относится к инъекционной форме 5α-андростан-3β,5,6β-триола и способу ее получения.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

5α-андростан-3β,5,6β-триол (далее - YC-6) представляет собой недавно открытое нейропротекторное соединение. В настоящее время острый ишемический инсульт (ОИИ) в основном лечат с помощью тромболитической или нейропротекторной терапии. Нейропротекторные агенты могут уменьшать область инфаркта мозга и предотвращать геморрагические осложнения, которые могут возникать во время тромболитической или антикоагулянтной терапии. Кроме того, данное соединение можно применять даже в отсутствие какого-либо этиологического диагноза, что позволяет проводить раннее лечение. Поэтому нейропротекторные агенты привлекают все большее внимание при исследовании ОИИ.

Однако на сегодняшний день нейропротекторные агенты с доказанной безопасностью и эффективностью отсутствуют. Большое количество соединений, имеющих потенциальную ценность для клинического применения, находятся на стадии клинических испытаний, включая блокаторы кальциевых каналов (БКК), модуляторы кальциевых каналов, ингибиторы высвобождения глутамата, агонисты рецепторов γ-аминомасляной кислоты (ГАМК), ловушки свободных радикалов, антитела к факторам межклеточной адгезии и так далее.

Среди большого числа соединений все более привлекательными становятся нейроактивные стероиды благодаря их широкому спектру действия в отношении защиты нейронов. В частности, действие недавно открытого нейропротекторного химического соединения YC-6 не ограничивается защитой нейронов. Данное соединение эффективно не только против ишемии головного мозга, но также и против ишемии спинного мозга при ежедневной дозе 50-100 мг.

YC-6 нерастворим в воде. Хотя его растворимость возрастает в традиционных неводных растворителях или их смесях, эти растворители вызывают раздражение, а при разбавлении водой YC-6 может выпадать в осадок. Это негативно сказывается на эффективности и безопасности инъекций YC-6 и ограничивает возможность их применения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для преодоления недостатков, обсуждаемых выше, согласно настоящему изобретению предложены инъекционные формы YC-6 и способы их получения. Согласно настоящему изобретению применяют гидроксипропил-β-циклодекстрин в качестве солюбилизирующего агента для приготовления инъекционных форм YC-6. Раздражение, вызываемое неводными растворителями, успешно снижается при одновременном повышении растворимости YC-6.

Для достижения этого предложены инъекционные формы YC-6 в жидкой или твердой форме. Инъекционные формы содержат по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество, включая гидроксипропил-β-циклодекстрин. Указанное по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество может также содержать агент, регулирующий изотоничность, или наполнитель для сублимационной сушки.

Предпочтительно, YC-6 присутствует в массовом отношении 1~20:40~500 к гидроксипропил-β-циклодекстрину.

Инъекционные формы также могут быть получены с применением следующих компонентов (по массе): 1~20 частей YC-6, 40~500 частей гидроксипропил-β-циклодекстрина, 1~100 частей агента, регулирующего изотоничность, 0~200 частей наполнителя для сублимационной сушки и 0~2000 частей растворителя.

Агент, регулирующий изотоничность, выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, глюкозы, маннита, лактозы, ксилита, сорбита, мальтита и их смесей.

Наполнитель для сублимационной сушки выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, глюкозы, маннита, лактозы, ксилита, сорбита, мальтита и их смесей.

Для приготовления жидкой инъекционной формы растворитель выбран из группы, состоящей из пропандиола, этанола, полиэтиленгликоля 400, полиэтиленгликоля 200, глицерина, воды и их смесей.

Инъекционная форма согласно настоящему изобретению может быть получена способом, включающим стадии, согласно которым последовательно растворяют в воде для инъекций гидроксипропил-β-циклодекстрин, YC-6 и по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество с получением исходного раствора; далее указанный исходный раствор последовательно подвергают обесцвечиванию, фильтрации и стерилизации с получением инъекционной формы согласно настоящему изобретению.

Лиофильно высушенный порошок получают путем наполнения ампул фильтратом, полученным на стадии фильтрации выше, и проведением сублимационной сушки.

Стерильный порошок получают путем распылительной сушки фильтрата, полученного на стадии фильтрации выше, с последующей фасовкой.

Обесцвечивание может быть осуществлено при помощи 0,1~0,3% активированного угля, а стерилизация может быть осуществлена при температуре 115°C в течение 30 мин или при 121°C в течение 15 мин.

Следует отметить, что YC-6 также может быть приготовлен в виде YC-6 для инфузий путем смешивания инъекционной формы YC-6 с традиционными растворами для инфузий без лекарственных средств, такими как глюкоза для инфузий, натрия хлорид для инфузий или глюкоза и натрия хлорид для инфузий.

Настоящее изобретение обеспечивает преимущества по сравнению с традиционными методиками. Применение гидроксипропил-β-циклодекстрина или неводных растворителей/смешанных растворителей повышает растворимость YC-6 таким образом, что YC-6 может быть получен в виде раствора для инъекций, стерильного порошка, лиофилизированного порошка, YC-6 для инфузий на основе глюкозы, хлорида натрия или глюкозы и хлорида натрия, что обеспечивает возможность внутривенного введения YC-6 в случае необходимости. Кроме того, при приготовлении в инъекционной форме согласно настоящему изобретению YC-6 имеет достаточную растворимость и эффективность, не вызывая раздражения. Процесс получения также прост и широко доступен.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Пример 1. Получение 200 ампул с инъекционной формой YC-6 (спецификация 5 мл: 50 мг)

Состав:

YC-6 10 г 2-Гидроксипропил-β-циклодекстрин 200 г Натрия хлорид 1,25 г Вода для инъекций до 1000 мл

Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют хлорид натрия и растворяют его при перемешивании, затем добавляют воду для инъекций до объема 1000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат собирают и разливают с получением 5 мл инъекционной формы, затем стерилизуют при 121°C в течение 15 мин.

Пример 2. Получение 200 ампул YC-6 для инъекций (спецификация 10 мл: 80 мг)

Состав:

YC-6 16 г 2-Гидроксипропил-β-циклодекстрин 400 г Глюкоза 13,9 г Вода для инъекций до 2000 мл

Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют глюкозу и растворяют ее при перемешивании, затем добавляют воду для инъекций до объема до 2000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат собирают и разливают с получением 10 мл инъекционной формы, затем стерилизуют при 121°C в течение 15 мин.

Пример 3. Получение 200 ампул YC-6 для инъекций (спецификация 5 мл: 100 мг)

Состав:

YC-6 20 г 2-Гидроксипропил-β-циклодекстрин 400 г Вода для инъекций до 1000 мл

Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют воду для инъекций до объема 1000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат собирают и разливают с получением 5 мл инъекционной формы, затем стерилизуют при 115°C в течение 30 мин.

Пример 4. Получение 200 ампул со стерильным порошком YC-6 (спецификация 80 мг/ампула)

Состав:

YC-6 16 г 2-Гидроксипропил-β-циклодекстрин 400 г Натрия хлорид 2,5 г Фасовка в 200 ампул

Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют хлорид натрия и растворяют его при перемешивании, затем добавляют воду для инъекций до объема 2000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат сушат путем распылительной сушки и затем расфасовывают в 200 ампул.

Пример 5. Получение 200 ампул с лиофильно высушенным порошком YC-6 (спецификация 5 мл: 60 мг)

Состав:

YC-6 12 г 2-Гидроксипропил-β-циклодекстрин 200 г Глюкоза 7 г Вода для инъекций до 1000 мл

Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют глюкозу и растворяют ее при перемешивании, затем добавляют воду для инъекций до объема до 1000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат разливают в 5 мл ампулы и затем лиофильно сушат.

Пример 6. Совместная стабильность инъекционной формы YC-6 и общепринятых растворов для инфузий.

Две ампулы инъекционной формы YC-6 (5 мл Х 2) из примера 1 добавляют в общепринятый раствор для инфузий для оценки совместной стабильности YC-6 в течение 8 часов. Показатели для оценки совместной стабильности включают цветность, прозрачность, pH и содержание YC-6. Результаты представлены в следующих таблицах.

Таблица 1 Тесты на совместимость инъекционной формы YC-6 и общепринятых растворов для инфузий Обозначение Тесты на совместимость (25-30°C) A Инъекционная форма YC-6 5 мл Х 2+5% раствор глюкозы для инъекций 250 мл B Инъекционная форма YC-6 5 мл Х 2+0,9% раствор натрия хлорида для инъекций 250 мл C Инъекционная форма YC-6 5 мл Х 2+раствор глюкозы и NaCl для инъекций 250 мл D Инъекционная форма YC-6 5 мл Х 2+состав с NaCl для инъекций 500 мл E Инъекционная форма YC-6 5 мл Х 2+5% раствор натрия бикарбоната для инъекций 250 мл

Таблица 2 Изменения в цветности и прозрачности общепринятых растворов для инфузий Обозначение Перед добавлением После добавления (ч) 0 2 4 8 А Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, прозрачный прозрачный прозрачный прозрачный прозрачный В Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, прозрачный прозрачный прозрачный прозрачный прозрачный С Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, прозрачный прозрачный прозрачный прозрачный прозрачный D Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, прозрачный прозрачный прозрачный прозрачный прозрачный Е Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, Бесцветный, прозрачный прозрачный прозрачный прозрачный прозрачный

Таблица 3 Изменение рН в общепринятых растворах для инфузий Обозначение Перед добавлением Послe добавления (ч) 0 2 4 8 А 4,05 4,06 4,05 4,02 4,08 В 5,60 5,62 5,58 5,46 5,58 С 4,02 4,04 4,03 4,00 4,04 D 5,64 5,62 5,60 5,59 5,59 Е 7,99 7,94 7,90 8,04 8,00

Таблица 4 Изменение концентрации YC-6 в традиционных растворах для инфузий Обозначение 0 ч 2 ч 8 ч 24 ч А 375,4 364,7 367,7 363,4 В 379,2 373,5 380,4 386,1 С 385,6 387,6 383,4 384,5 D 382,0 383,7 387,2 380,8 Е 386,7 375,1 381,3 376,5

Пример 7. Предварительная оценка безопасности YC-6

Мышей Куньмин помещали в клетку по массе и случайным образом делили на 5 групп. Каждая группа состояла из 10 мышей, половина самцов и половина самок. Инъекционную форму YC-6, полученную согласно примеру 3 (20 мг/мл), вводили внутривенно в хвостовую вену в различных дозах. Всех мышей умерщвляли после одной недели наблюдения. Токсическую реакцию и количество умерших животных регистрировали каждый день. Рассчитывали ЛД₅₀ и 95% доверительный интервал. ЛД₅₀ YC-6 составила более чем 400±121 мг/кг.

Клетки крови получали в соответствии с общепринятыми методами из свежей крови, полученной от новозеландских кроликов. Клетки крови разводили физиологическим раствором с получением 2% суспензии. Инъекционную форму YC-6, полученную согласно примеру 1, затем добавляли к 2% суспензии и инкубировали при 37°C в течение 3 часов. Коэффициент гемолиза определяли колориметрическим методом. Коэффициент гемолиза YC-6 для инъекций составил менее 1%.

Морских свинок-альбиносов подвергали анафилактическим испытаниям в соответствии с общепринятыми методиками. Анафилактической реакции после внутривенного введения инъекционной формы YC-6, полученной согласно примеру 1, не наблюдалось.

Новозеландских кроликов использовали для теста на раздражение сосудов при внутривенном введении инъекционной формы YC-6, полученной согласно примеру 1. Результаты показали, что изменения тканей краевой ушной вены в тестируемой группе и контрольной группе аналогичны. У каждого кролика были целые стенки сосудов краевой ушной вены и нормальное строение вен. Каких-либо патологических изменений, таких как повреждение клеток эндотелия или отек окружающих тканей, не наблюдалось.

Изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой инъекционную форму 5α-андростан-3β,5,6β-триола, включая жидкую инъекционную форму, содержащую растворитель, или твердую инъекционную форму, содержащую по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество, причем указанное по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество включает гидроксипропил-β-циклодекстрин. Изобретение обеспечивает получение стабильной инъекционной формы 5α-андростан-3β,5,6β-триола. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 7 пр., 4 табл.

1. Инъекционная форма 5α-андростан-3β,5,6β-триола, включая жидкую инъекционную форму, содержащую растворитель, или твердую инъекционную форму, содержащая по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество, причем указанное по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество включает гидроксипропил-β-циклодекстрин.

2. Инъекционная форма по п.1, отличающаяся тем, что 5α-андростан-3β,5,6β-триол присутствует в массовом отношении 1~20:40~500 к гидроксипропил-β-циклодекстрину.

3. Инъекционная форма по п.1 или 2, отличающаяся тем, что растворимое вспомогательное вещество дополнительно содержит агент, регулирующий изотоничность, и/или наполнитель для сублимационной сушки.

4. Инъекционная форма по п.3, отличающаяся тем, что агент, регулирующий изотоничность, выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, глюкозы, маннита, лактозы, ксилита, сорбита, мальтита и их смесей.

5. Инъекционная форма по п.3, отличающаяся тем, что наполнитель для сублимационной сушки выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, глюкозы, маннита, лактозы, ксилита, сорбита, мальтита и их смесей.

6. Инъекционная форма по п.1 или 2, отличающаяся тем, что растворитель для жидкой инъекционной формы выбран из группы, состоящей из пропандиола, этанола, полиэтиленгликоля 400, полиэтиленгликоля 200, глицерина, воды и их смесей.

7. Инъекционная форма по п.3, отличающаяся тем, что указанная инъекционная форма состоит из (по массе): 1~20 частей 5α-андростан-3β,5,6β-триола, 4~500 частей гидроксипропил-β-циклодекстрина, 1~100 частей агента, регулирующего изотоничность, 0~200 частей наполнителя для сублимационной сушки и 0~2000 частей растворителя.

8. Способ получения инъекционной формы по п.1, включающий стадии, согласно которым:
(а) последовательно растворяют гидроксипропил-β-циклодекстрин, 5α-андростан-3β,5,6β-триол и дополнительные растворимые вспомогательные вещества в воде для инъекций с получением исходного раствора для инъекций, и
(b1) указанный исходный раствор для инъекций подвергают обесцвечиванию, депирогенизации, фильтрации и стерилизации с получением указанной инъекционной формы, или
(b2) указанный исходный раствор для инъекций подвергают обесцвечиванию, депирогенизации, фильтрации и помещению полученного фильтрата в ампулы с последующей сублимационной сушкой с получением лиофильно высушенного порошка, или
(b3) указанный исходный раствор для инъекций подвергают обесцвечиванию, депирогенизации, фильтрации и распылительной сушке фильтрата с последующей упаковкой.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что обесцвечивание обеспечивают путем применения активированного угля в количестве 0,05~0,3 масс.% от массы инъекционной формы.

10. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что стерилизацию осуществляют при 115°C в течение 30 минут или при 121°C в течение 15 минут.