Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям для контролируемого и замедленного высвобождения активного вещества, включающим биоразлагаемый полимер или сополимер. Кроме того, изобретение относится к фармацевтическим композициям для контролируемого и замедленного высвобождения по меньшей мере одного активного вещества, такого как пептиды или гормоны и их аналоги, и способу получения таких фармацевтических композиций.
Более конкретно, изобретение относится к фармацевтическим композициям в форме малых имплантатов, которые включают по меньшей мере одно активное вещество, такое как аналоги гонадотропин-высвобождающего гормона (GnRH), такие как трипторелин или его соли, в сополимерном рукаве или полимере.
GnRH, также известный как LHRH, представляет собой декапептидный гормон, отвечающий за секрецию фолликулстимулирующего гормона (FSH) и лютеинизирующего гормона (LH). Аналоги GnRH представляют собой синтетические пептидные лекарственные средства, смоделированные на основе GnRH. Аналоги могут быть как агонистами, так и антагонистами. Агонисты активируют рецептор GnRH, что приводит к увеличению высвобождения FSH и LH. Антагонисты, наоборот, блокируют рецептор GnRH, уменьшая высвобождение FSH и LH.
Трипторелин, также известный как [D-Trp6], LHRH, является активным компонентом лекарственного средства DECAPEPTYL® и может применяться для лечения заболеваний, включая рак простаты, в частности распространенный метастатический рак простаты, эндометриоз, женское бесплодие, и обычно сочетается с другими гормонами при in vivo оплодотворении (IVF), преждевременном половом созревании; фиброзных опухолях и эндометриозе.
Пептиды, такие как аналоги GnRH, обычно вводятся парентерально, например, посредством подкожной инъекции. Одной из причин для такого введения является то, что они обычно разлагаются в желудочно-кишечном тракте. Лечение аналогом GnRH требует или постоянного, или повторяющегося введения пациенту в течение длительного периода времени.
Однако повторяющиеся инъекции приводят к неудобству и дискомфорту пациента. Составы с замедленным высвобождением для пролонгированной доставки аналогов GnRH без использования повторяющихся инъекций теперь разработаны. Такие составы обладают рядом преимуществ, включая улучшение точности дозирования и соблюдение пациентами схемы лечения.
Такая проблема многих имеющихся на данный момент составов с замедленным высвобождением в течение длительного периода не рассматривалась в уровне техники. Тем более что для лечения многими аналогами GnRH требуется введение пациенту в течение шести месяцев или больше.
Получение многих существующих составов относительно сложно, поскольку в соответствующих методиках требуется добавление одного или более вспомогательных веществ или дополнительных стадий, таких как сплавление и прессование.
Добавление дополнительных вспомогательных веществ часто требуется для обеспечения гомогенности, стабильности и улучшения прессуемости или затвердевания смеси, поэтому существует потребность в получении требуемых свойств без добавления вспомогательных веществ.
Сплавление и прессование в формах могут применяться для формирования ядра с активным компонентом. Прессование в формах может быть необходимым, поскольку смесь должна принять твердое состояние до включения в ядро. Проблема способов получения, используемых на этих стадиях, заключается в том, что они относительно сложные и трудно воспроизводимы в промышленном масштабе.
В международной патентной публикации номер 2005117934 раскрывается устройство с замедленным высвобождением, включающее по меньшей мере один имплантат. Имплантат включает основу и фармацевтическую композицию, включающую компонент агониста и/или антагониста гормона, высвобождающего лютеинизирующий гормон (LHRH). Имплантат может иметь двуслойную структуру с наружным слоем, образованным из силиконового материала. Имплантат с одним открытым концом может быть приготовлен путем погружения одного конца препарата в раствор для растворения вещества наружного слоя.
Недостаток использования силикона заключается в том, что он разлагается после введения. Это может оказывать неблагоприятное воздействие на профиль высвобождения компонента агониста и/или антагониста LHRH и приводить к тому, что нежелательный отработанный силиконовый материал остается внутри субъекта после завершения высвобождения.
В европейском патенте номер 1001743 раскрывается ядро, содержащее действующее начало и покрытие, которое полностью окружает ядро. Ядро с покрытием, которое полностью его окружает, ухудшает свойства так, что концентрация активного компонента, высвобожденного вскоре после введения, оказывается низкой из-за покрытия, препятствующего высвобождению. Такой имплантат также имеет второй недостаток, заключающийся в сложности способа получения.
В патенте США номер 5851547 раскрывается состав лекарственного средства с контролируемым высвобождением, который включает набухающий внутренний слой и водонепроницаемый наружный слой, который контролирует набухание внутреннего слоя. Лекарственное средство высвобождается исключительно через по меньшей мере один открытый торец внутреннего слоя и внутренний слой не разрушается, при этом первоначальная форма сохраняется в течение периода высвобождения лекарственного средства. Проблема таких составов заключается в том, что высвобождение лекарственного средства может контролироваться только одним параметром: количеством лекарственного средства, которое может быть высвобождено через открытый торец. Это происходит потому, что внутренний слой не распадается, и это ограничивает период высвобождения.
В одном конкретном аспекте, изобретение обеспечивает контролируемое и замедленное высвобождение аналога GnRH трипторелина из поли(лактид-со-гликолид)кислоты (PLGA), покрытого биоразлагаемым полимерным или сополимерным рукавом.
Поэтому задачей настоящего изобретения является создание способа, который устраняет по меньшей мере один недостаток, обеспечивая, например:
- длительное высвобождение,
- улучшенный контроль высвобождения,
- более полное высвобождение,
- относительно простой способ производства, и/или
- улучшение биоразлагаемости.
В одном аспекте, изобретение обеспечивает удлиненный имплантат для контролируемого и замедленного высвобождения по меньшей мере одного аналога GnRH, где имплантат включает:
- полимерный или сополимерный рукав, и
- полимерное или сополимерное ядро, расположенное в рукаве, включающее по меньшей мере один аналог GnRH,
характеризующийся тем, что
- по меньшей мере один торец рукава открыт, и
- рукав разрушается при замедленном высвобождении.
В другом аспекте изобретение обеспечивает способ получения удлиненного имплантата, включающий стадии
- приготовления биоразлагаемого полимерного или сополимерного рукава,
- объединения аналога GnRH и полимера или сополимера с получением полимерного или сополимерного ядра, и затем,
- размещения ядра в рукаве.
В дополнительном аспекте изобретение обеспечивает удлиненный имплантат для контролируемого и замедленного высвобождения ацетата трипторелина, аналога GnRH, где имплантат включает
- полимерный или сополимерный рукав, имеющий по меньшей мере один открытый торец, и
- где в рукаве располагается ядро, включающее ацетат трипторелина.
В еще одном аспекте изобретение обеспечивает способ получения удлиненного имплантата, включая стадии
- приготовления полимерного или сополимерного рукава,
- приготовления раствора ацетата трипторелина между 40 и 80% (масс./об.) в воде,
- размещение раствора в рукаве,
- выдерживание раствора в течение 2-48 часов при 20-30ºC, и
- сушку в течении 6-24 часов под вакуумом.
В еще одном аспекте изобретение дополнительно обеспечивает способ получения удлиненного имплантата "двойной экструзией", включающий стадии:
- введения пеллет, выполненных из биоразлагаемого полимера или сополимера и активного вещества, в экструдер ядра;
- экструзии ядра, выполненного из биоразлагаемого полимера или сополимера и активного вещества (аналога GnRH), и последующего охлаждения;
- нанесения покрытия из биоразлагаемого полимера или сополимера.
Описание фигур
Фигура 1: сравниваются профили растворения in vitro имплантата, включающего полимерное ядро с ацетатом трипторелина и PLGA в полимерном рукаве из PLGA, полученного по примеру 5 (представлен закрашенными квадратами), и полимерного ядра с ацетатом трипторелина и PLGA, полученного по примеру 2 (представлен закрашенными кругами).
Фигура 2: показано изменение концентрации трипторелина во времени у шести собак после инъекции имплантата, полученного по примеру 5 (полимерное ядро с 5,9 мг ацетата трипторелина в рукаве 1,1 мм).
Фигура 3: показано изменение концентрации трипторелина во времени у шести собак после инъекции имплантата, полученного по примеру 6 (полимерное ядро с 6,4 мг ацетата трипторелина в рукаве 0,85 мм).
Фигура 4: показано изменение концентрации трипторелина во времени у шести собак после инъекции имплантата, полученного по примеру 7 (полимерное ядро с 9,1 мг ацетата трипторелина в рукаве 1,1 мм).
Фигура 5: показано изменение концентрации трипторелина во времени после инъекции имплантата по примеру 13 (ядро с 6,3 мг ацетата трипторелина в рукаве 0,85 мм) у шести собак.
Фигура 6: показано изменение концентрации трипторелина во времени после инъекции имплантата по примеру 14 (ядро с 10,0 мг ацетата трипторелина в рукаве 1,10 мм) у шести собак.
Нижеследующие определения приведены для пояснения и уточнения значения и объема различных терминов, использованных здесь для раскрытия изобретения.
Используемый здесь термин "контролированное и замедленное высвобождение" означает высвобождение активного вещества у пациента таким образом, что пациент получает эффективную дозу активного вещества в течение по меньшей мере одного месяца.
Используемый в отношении GnRH "аналог" означает природный, рекомбинантный или синтетический пептид или производное или фрагмент пептидов, которые проявляют по существу такую же агонистическую или антагонистическую активность, как немодифицированные или природные пептиды.
Термин "конформационное изменение" в отношении конформационных изменений ацетата трипторелина означает изменение пространственной структуры ацетата трипторелина, когда его смешивают с водой. Такое изменение может быть вызвано, например, изменением температуры или концентрации.
Термин "двойная экструзия" означает получение на одной производственной линии цилиндрического центрального тела или ядра, выполненного из сополимера и/или активного фармацевтического ингредиента (API), и полимерного покрытия или оболочки в форме трубки, нанесенных на ядро после его затвердевания.
Подходящие для композиций, раскрытых в настоящем изобретении, аналоги GnRH включают лейпрорелин, бусерелин, нафарелин, гистрелин, гозерелин, деслорелин, гонадорелин, аворелин, трипторелин и их солевые формы.
В соответствии с настоящим изобретением предпочтительным аналогом GnRH является соль трипторелина. Более предпочтительно, аналог GnRH представляет собой ацетат трипторелина или памоат трипторелина. Даже более предпочтительно, аналог GnRH представляет собой ацетат трипторелина.
В настоящей заявке "ацетат трипторелина" означает ацетатную солевую форму трипторелина, которая содержит больше чем 95% по массе чистого ацетата трипторелина, и предпочтительно больше чем 97 или 98% по массе чистого ацетата трипторелина. Это соответствует процентному содержанию, соответственно, от приблизительно 80, 84 или 85% по массе чистого трипторелина.
В соответствии с изобретением, если аналог GnRH представляет собой ацетат трипторелина, то количество ацетата трипторелина в полимерном ядре находится в диапазоне от 30 до 90% по массе относительно общей массы полимерного ядра. Предпочтительно, количество трипторелина в полимерном ядре находится в диапазоне от 35 до 65% по массе относительно общей массы полимерного ядра.
В дополнительном аспекте настоящего изобретения замедленное высвобождение активного вещества может происходить посредством по меньшей мере двух механизмов, которые обеспечивают улучшенный контроль высвобождения. Во-первых, аналог гормона может высвобождаться через по меньшей мере один открытый торец рукава. Во-вторых, гормональный аналог может высвобождаться через рукав, поскольку рукав и ядро разрушаются. Удлиненный имплантат может включать полость между рукавом и ядром, которая может способствовать замедленному высвобождению.
Указанные полимеры или сополимеры предпочтительно используются в очищенной форме или форме без остаточной мономерной фракции. Полимеры или сополимеры такого типа описаны, например, в патенте США номер 4728721.
В соответствии с предпочтительным вариантом изобретения полимерное или сополимерное ядро может быть в форме цилиндра с малым диаметром, предпочтительно менее чем 1,5 мм, более предпочтительно менее чем 1 мм и даже более предпочтительно между 0,6 и 0,9 мм.
Предпочтительно, полимер или сополимер образованы из молочнокислой и/или гликолевой кислот. Более предпочтительно, полимер или сополимер представляет собой полимолочную кислоту (PLA), полимер, образованный из молочной кислоты. Более предпочтительно, полимер или сополимер представляют собой поли(лактид-со-гликолид), который представляет собой сополимер молочной кислоты и гликолевой кислоты.
Сополимер PLGA разлагается при гидролизе его сложных эфирных связей в присутствии воды. Время, требуемое для разложения полимера PLGA, в общем случае, зависит от соотношения мономеров, использованных для его получения, так, что чем выше количество остатков молочной кислоты, тем больше время разложения.
В соответствии с изобретением соотношение молочной кислоты и гликолевой кислоты в PLGA находится в диапазоне от 70:30 до 90:10. Предпочтительно, соотношение молочной кислоты и гликолевой кислоты в PLGA составляет 85:15. Соотношение молочной кислоты и гликолевой кислоты в PLGA, составляющие 85:15, например, означает, что полимер PLGA включает 85% остатков молочной кислоты и 15% остатков гликолевой кислоты. Чистые полимеры молочной кислоты также могут быть использованы, и особенно подходят для обеспечения высвобождения в течение более трех месяцев.
Предпочтительно, полимерный или сополимерный рукав и полимерное или сополимерное ядро выполнены из одинаковых полимеров или сополимеров. Полимерный или сополимерный рукав и полимерное или сополимерное ядро могут быть выполнены из PLGA, приготовленного с соотношением молочной кислоты и гликолевой кислоты, составляющим 85:15.
Если полимер или сополимер включают PLGA, то его молекулярная масса составляет по меньшей мере 60 кДа. Более предпочтительно, молекулярная масса PLGA составляет по меньшей мере 100 кДа. Наиболее предпочтительно, молекулярная масса PLGA находится в диапазоне от 120 кДа до 170 кДа. Если полимер включает PLA, то молекулярная масса PLA предпочтительно находится между 15 кДа или 20 кДа и 30 кДа или 40 кДа, или более предпочтительно 25 кДа.
Имплантат высвобождает аналог GnRH в течение по меньшей мере 3 месяцев, предпочтительно в течение по меньшей мере 6 месяцев.
Если аналог GnRH включает ацетат трипторелина, то он предпочтительно присутствует в количестве в диапазоне от 0,5 до 50 мг. Более предпочтительно ацетат трипторелина присутствует в диапазоне от 2 до 20 мг. Наиболее предпочтительно, ацетат трипторелина присутствует в количестве приблизительно 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мг.
Кроме того, длина по оси имплантата составляет между 1 и 4 см. Предпочтительно, длина по оси имплантата составляет между 2 и 3 см. Более предпочтительно, длина по оси имплантата составляет приблизительно 2,5, 2,6, 2,7 или 2,8 см. Наиболее предпочтительно, длина по оси имплантата составляет 2,6 см.
Предпочтительно, внешний диаметр удлиненного имплантата находится в диапазоне от 0,70 мм до 1,2 мм, более предпочтительно в диапазоне от 0,80 мм до 1,1 мм. Даже более предпочтительно, внешний диаметр удлиненного имплантата составляет 0,85, 0,90, 0,95, 1,0 или 1,1 мм.
Предпочтительно, соотношение диаметра и длины по оси имплантата находится между 1:20 и 1:40. Более предпочтительно, соотношение диаметра и длины по оси имплантата находится между 1:22 и 1:30. Даже более предпочтительно, соотношение диаметра и длины по оси имплантата составляет 1:23, 1:25, 1:28 или 1:30.
Оптимальный размер имплантата может быть определен на основании объема дозы, которая будет включена, и усиления дискомфорта пациента, который возникает при увеличении размера имплантата.
Кроме того, процентное содержание аналога GnRH, высвобожденного из удлиненного имплантата при замедленном высвобождении, составляет больше чем 60%. Предпочтительно, больше чем 80% аналога GnRH в виде ацетата трипторелина высвобождается из удлиненного имплантата при замедленном высвобождении. Более предпочтительно, больше чем 90% ацетата трипторелина высвобождается из имплантата при замедленном высвобождении. Наиболее предпочтительно, 100% ацетата трипторелина высвобождаются из имплантата при замедленном высвобождении.
В еще одном аспекте изобретение относится к способу лечения пациента, которому требуется постоянное введение по меньшей мере одного аналога GnRH, где указанный способ состоит из введения имплантата, описанного выше, пациенту путем инъекции.
Как упоминалось выше, в дополнительном аспекте изобретение обеспечивает способ получения удлиненного имплантата, включающего стадии
- приготовления биоразлагаемого полимерного или сополимерного рукава,
- объединения аналога GnRH и полимера или сополимера с получением полимерного ядра, и
- последующего размещения ядра в рукаве.
Преимущества этого аспекта изобретения заключается в упрощении путем исключения добавления других вспомогательных веществ, кроме PLGA, к гормональному аналогу.
Полимерный рукав и полимерное ядро могут быть приготовлены, например, экструзией или литьем. Предпочтительно полимерный рукав и полимерное ядро приготовлены экструзией из расплава. Предпочтительно, первая стадия получения полимерного рукава и полимерного ядра представляет собой формирование пеллет экструзией PLGA. Получение пеллет экструзией предпочтительно выполняется при температуре приблизительно между 130±10°C до 155±10°C, предпочтительно при 145±10°C, и при скорости вращения экструдера приблизительно от 25±10 об/мин до 45±10 об/мин, предпочтительно при 35±10 об/мин. Затем полученные пеллеты могут быть измельчены в криогенной мельнице для получения порошка. Размер частиц порошка предпочтительно составляет менее чем 1 мм, и более предпочтительно менее чем 500 мкм.
Предпочтительно, рукав получают путем экструзии полимерных пеллет. Такая экструзия предпочтительно выполняется при температуре в диапазоне от 130 до 160°C, более предпочтительно от 142 до 156°C. Скорость вращения экструдера предпочтительно составляет между 1 и 30 об/мин, более предпочтительно 2 и 6 об/мин, и наиболее предпочтительно 4 об/мин.
Чтобы приготовить полимерное ядро, смешивают порошок и аналог GnRH, предпочтительно в течение приблизительно 30 минут при 42 об/мин. Формирование полимерного ядра из порошка предпочтительно происходит двумя экструзиями. На первой экструзии смесь экструдируют при температуре предпочтительно в диапазоне от 110 до 130°C, более предпочтительно от 116 до 124°C, и наиболее предпочтительно приблизительно 120°C, получают пеллеты. Скорость вращения экструдера предпочтительно составляет между 1 и 40 об/мин, более предпочтительно 15 и 25 об/мин, и наиболее предпочтительно 21 об/мин. Первая экструзия способствует улучшению реологических свойств смеси за счет постоянной скорости подачи во время второй экструзии и, следовательно, получению экструдата однородного диаметра.
Остаточная влажность пеллет ацетата трипторелина и PLGA, полученных после первой экструзии, предпочтительно составляет менее чем 5% по массе воды относительно общей массы. Однако точная влажность зависит от содержания аналога GnRH, который является главным источником влаги. В этом отношении, остаточная влажность пеллет, полученных первой экструзией, более предпочтительно составляет менее чем приблизительно 1,5%, если концентрация трипторелина составляет приблизительно 35%, и менее чем приблизительно 2%, если концентрация трипторелина составляет приблизительно 50%. Пеллеты предпочтительно сушат под вакуумом перед второй экструзией для снижения влажности ниже требуемого предела.
После сушки пеллеты подвергаются второй экструзии при температуре предпочтительно в диапазоне от 120 до 160°C, более предпочтительно от 130 до 150°C, и наиболее предпочтительно приблизительно 140°C.
Расплавленное или жидкое состояние пептида в полимере делает возможным процесс смешивания, минуя дорогие предварительные стадии обработки, на которых используются носители для продуктов, которые затем удаляются.
Температура может быть подобрана в зависимости от используемого полимера или сополимера; например, она будет приблизительно на 10°C ниже в случае приблизительно PLGA с более низкой внутренней вязкостью или приблизительно на 10°C выше в случае PLGA с более высокой внутренней вязкостью.
В соответствии с таким вариантом получения полимерного ядра, действия выполняются без предварительной обработки смеси c использованием водных или органических растворителей, которые затем удаляются. Способ также позволяет исключить необходимость лиофилизации смесей и отдельного предварительного нагревания для прессования перед экструзией.
Твердая смесь порошка ацетата трипторелина и полимера PLGA может быть расплавлена при температуре, достаточной для получения нетвердого состояния этих двух компонентов, для того чтобы их смешать и затем выполнить экстрадицию или формование до уменьшения температуры и возвращения к твердому состоянию.
Устройство для выполнения экструзии может работать при температуре окружающей среды на выходе экструдера.
Такой сплошной экструдат может быть нарезан для получения полимерных ядер требуемого размера. Таким образом, требуемая доза может быть получена до размещения полимерного ядра в рукаве.
В зависимости от формы, дозы и требуемого профиля высвобождения, способ получения полимерного ядра также может быть использован для форм с малой нагрузкой активного компонента. Показатели, приведенные выше в терминах остаточной влажности и количества активного компонента, а также природы полимера, например, могут быть применены к композициям с нагрузкой менее 50%, так же как и к тем с большей нагрузкой. Необходимая адаптация может быть выполнена специалистом в данной области с учетом указаний, приведенных выше, а также примеров получения.
В одном варианте осуществления проверка размеров полимерного рукава и полимерного ядра, и помещение ядра в рукав выполняется вручную или механически. Затем имплантат может быть размещен в инъекционном устройстве и обработан гамма-излучением до введения.
В зависимости от размера имплантата лечащий врач для осуществления введения может использовать такие инъекционные устройства, как описаны в заявке PCT WO2006/058745, или шприцы стандартного размера.
Специалист в данной области может использовать другие полимеры или также смесь полимеров, или другие соотношения соли трипторелина и полимера PLGA; в этом случае молекулярная масса полимера PLGA и масса полимерного ядра должны быть адаптированы для достижения требуемого профиля высвобождения.
В дополнительном аспекте изобретение обеспечивает способ получения удлиненного имплантата, включающего стадии
- объединения аналога GnRH и полимера или сополимера, и
- последующей совместной экструзии комбинации и биоразлагаемого полимера или сополимера,
для получения имплантата, включающего аналог GnRH и полимерного или сополимерного ядра в биоразлагаемом полимерном или сополимерном рукаве.
Предпочтительно, если комбинируют аналог GnRH и полимер, то получают пеллеты.
Температура совместной экструзии и скорость экструзии могут выбираться, исходя из температуры точки размягчения комбинации, образующей ядро, и полимера, образующего рукав. Предпочтительно, совместную экструзию проводят при условиях, указанных выше для одинарной экструзии.
В другом аспекте изобретение обеспечивает описанный выше имплантат, который получен описанным выше способом.
Изобретение обеспечивает другой способ получения удлиненного имплантата, включающий стадии
- введения пеллет, выполненных из биоразлагаемого полимера или сополимера и активного вещества в шнековый экструдер,
- экструдирования ядра, выполненного из биоразлагаемого полимера или сополимера и активного вещества, и последующего охлаждения,
- нанесения покрытия из биоразлагаемого полимера или сополимера.
Расстояние между экструзионной головкой и головкой покрытия/осаждения может быть увеличено, и расплавляющий желоб размещается после основной экструзионной головки для того, чтобы ядро охлаждалось и затвердевало до подачи в канал нанесения покрытия.
Расстояние между основной экструзионной головкой и покрытием/осаждением необязательно регулируют до приблизительно от 130 мм до 160 мм, предпочтительно до приблизительно 150 мм, для получения имплантата с покрытым ядром. От выбора расстояния зависит период охлаждения.
В соответствии со способом, адгезия ядра и покрытия могут регулироваться параметрами способа, такими как температура, скорость экструзии и покрытия. Регулирование этих параметров может привести к перманентному связыванию или подвижной посадке, допускающей небольшой воздушный зазор между ядром и покрытием.
Конечный продукт, полученный этим способом, представляет собой цилиндрический удлиненный имплантат, состоящий из ядра, выполненного из смеси сополимера и активного вещества, и покрытия. Покрытие выполнено из чистого полимера или сополимера и может быть необязательно из такого же или другого материала, как и сополимер в композиции для ядра.
Конечный полученный продукт представляет собой ядро, покрытое прозрачным покрытием: эти две части образуют один продукт.
В этом аспекте изобретения и посредством такого способа становится возможным получить структурированный имплантат, подобный таковому, полученному физической вставкой цилиндрического ядра в трубку.
Значительным преимуществом описанного выше способа является отсутствие физической сборки ядра имплантата в покрытие.
Как отмечалось ранее, в дополнительном аспекте изобретение обеспечивает удлиненный имплантат для контролируемого и замедленного высвобождения ацетата трипторелина, аналога GnRH, где имплантат включает
- полимерный или сополимерный рукав, имеющий по меньшей мере один открытый торец, и
- ядро, расположенное в рукаве, включающее ацетат трипторелина.
Предпочтительно, ацетат трипторелина подвергается конформационному изменению, что приводит к увеличению вязкости ядра.
Предпочтительно, рукав разрушается во время высвобождения.
Полимерный рукав может быть получен согласно способу, описанному выше.
Предпочтительно, влажность удлиненного имплантата по этому аспекту изобретения составляет менее чем 1%.
Предпочтительно, гель ацетата трипторелина и воды вводится непосредственно в рукав, и поэтому способ позволяет исключить необходимость формования литьем или экструзии ядра.
В одном варианте осуществления способа изобретению по меньшей мере 40% ацетата трипторелина смешивают с водой и помещают в рукав. Предпочтительно, по меньшей мере 50 или 60, или 70, или 80 или 90% ацетата трипторелина смешивают с водой и помещают в рукав.
Предпочтительные способы получения ядра выполняют смешиванием от 40 до 80% (масс./масс.) ацетата трипторелина и воды, предпочтительно от 50 до 70% (масс./масс.) ацетата трипторелина или более предпочтительно 55, 60 или 65% (масс./масс.) ацетата трипторелина. Предпочтительная концентрация ацетата трипторелина должна обеспечивать достаточное содержание ацетата трипторелина в конечном удлиненном имплантате.
В одном предпочтительном способе ацетат трипторелина и воду размещают в отдельных емкостях, соединенных клапаном, и создают вакуум в емкости с ацетатом трипторелина. Открытие клапана приводит к тому, что вода поступает в контейнер с ацетатом трипторелина и заполняет зазоры в порошке ацетата трипторелина. Гель, образованный из воды и ацетата трипторелина, затем может быть гомогенизирован.
В альтернативном предпочтительном способе, ацетат трипторелина и воду смешивают при аккуратном перемешивании.
Предпочтительно, для получения ядра используют воду в форме воды для инъекций.
Температуру при смешивании ацетата трипторелина и воды предпочтительно поддерживают ниже 25°C, более предпочтительно ниже 15°C и более предпочтительно между 5 и 10°C. Относительно низкая температура замедляет кристаллизацию или конформационное изменение.
Затем ацетат трипторелина и воду легко размещают в рукаве.
Как только полутвердый материал оказывается в пробирке, гель может подвергаться конформационному изменению и кристаллизоваться.
Первая стадия в этом двухстадийном способе может включать инкубацию в течение 2-48 часов при 20°C-40°C, предпочтительно при 20-30°C, и атмосферном давлении для получения полутвердой композиции ацетата трипторелина и воды. Инкубация ядра может привести к конформационному изменению ацетата трипторелина. Затвердевающая таким образом композиция способствует удерживанию композиции в рукаве и облегчает сушку композиции на второй стадии.
Вторая стадия может включать сушку под вакуумом в течение 6-24 часов при комнатной температуре для уменьшения влажности.
В варианте осуществления имплантат может быть размещен вручную в устройстве для введения инъекцией. Имплантат и устройство предпочтительно обрабатывают гамма-облучением перед введением инъекции. Альтернативно, можно исключить конечную стерилизацию, если имплантаты будут получены в асептических условиях.
В еще одном аспекте изобретение относится к способу лечения пациента, которому требуется периодическое введение по меньшей мере одного аналога GnRH, где указанный способ состоит из введения имплантата, описанного выше, пациенту путем инъекции.
Фармацевтические композиции по изобретению могут применяться парентеральным путем, таким как подкожная или внутримышечная инъекция.
Предпочтительно, введение фармацевтической композиции в форме удлиненного имплантата, содержащего 6, 9 или 10 мг ацетата трипторелина, посредством подкожной инъекции, повторяющейся каждые 6 месяцев.
Предпочтительно, применение трипторелина в удлиненном имплантате, как раскрывается в настоящем изобретении, адаптировано для лечения заболеваний, включая рак простаты, в частности распространенный метастатический рак простаты, эндометриоз, женское бесплодие, и обычно ассоциируется с другими гормонами при оплодотворении in vivo (IVF), преждевременном половом созревании; фиброзных опухолях и эндометриозе.
Все публикации, патентные заявки, все патенты и все другие ссылки, указанные здесь, включены посредством указания ссылки.
Следующие примеры служат иллюстрацией изобретения и никоим образом не огранивают его.
Пример 1
Способ получение полимерного ядра
Примеры 1-12 относятся к получению имплантата в соответствии с изобретением, включающего полимерное ядро ацетата трипторелина и PLGA в полимерном рукаве из PLGA в форме трубки.
Чтобы использовать для получения обоих рукавов и полимерных ядер, PLGA подвергали стадии начальной подготовки. Стадия включает экструзию PLGA при 145±10°C и 35±10 об/мин и размалывание полученных пеллет в криогенной мельнице для получения порошка PLGA с размером частиц менее чем 500 мкм для получения имплантата.
Для получения полимерного ядра последовательно взвешивали аналог GnRH в форме ацетата трипторелина и порошок PLGA. Ацетат трипторелина пропускали через сито для удаления комков из смеси. Затем смесь перемешивали в течение 30 минут и затем экструдировали при 120±4°C и 21±1 об/мин.
Пеллеты сушили под вакуумом перед второй экструзией для уменьшения влажности до менее 2% или 1,5%. Гранулы экструдировали из расплава при 138±2°C и 9±2 об/мин.
Экструдат нарезали во время второй экструзии и получали отдельные полимерные ядра.
Пример 2
Результаты получения полимерного ядра
Полимерное ядро получали в соответствии с общей методикой, приведенной в примере 1.
Полимерное ядро содержало дозу 6 мг, измеренные размеры составили 0,85 мм в диаметре и приблизительно 26 мм в длину, и включало 40% по массе ацетата трипторелина (чистота>97,5%) и 60% по массе 85:15 PLGA (внутренняя вязкость iv в хлороформе: 1,2 дл/г <iv <1,7 дл/г).
Пример 3
Способ получения полимерного рукава
Для получения рукава порошок PLGA, после стадии начальной подготовки по примеру 1, экструдировали из расплава при 149±7°C и 4±2 об/мин и экструдированную трубку разрезали для получения рукавов.
Пример 4
Способ получения полимерного ядра в полимерном рукаве
Большое количество полимерных ядер и полимерных рукавов получали в соответствии с примерами 1 и 3 соответственно. Проверяли размеры полимерных ядер и рукавов, и ядра помещали в рукава. Полученные имплантаты помещали в инъекционное устройство и обрабатывали гамма-излучением более 25 кГр перед введением.
Пример 5
Результаты 1 получения полимерного ядра в полимерном рукаве
Выбирали шесть имплантатов, полученных по примеру 4, соответствующих параметрам, изложенным в таблице 1 ниже.
Полимерное ядро с 5,9 мг трипторелина ацетата в рукаве 1,1 мм
Пример 6
Результаты получения полимерного ядра в полимерном рукаве 2
Выбирали шесть имплантатов, полученных по примеру 4, соответствующих параметрам, изложенным в таблице 2 ниже.
Полимерное ядро с 6,4 мг трипторелина ацетата в рукаве 0,85 мм
Пример 7
Результаты получения полимерного ядра в полимерном рукаве 3
Выбирали шесть имплантатов, полученных по примеру 4, соответствующих параметрам, изложенным в таблице 3 ниже.
Полимерное ядро с 9,1 мг трипторелина ацетата в рукаве 1,1 мм
Пример 8
Результаты получения полимерного ядра в полимерном рукаве 4
Выбирали шесть имплантатов, полученных по примеру 4, соответствующих параметрам, изложенным в таблице 4 ниже.
Полимерное ядро с 4,2 мг трипторелина ацетата в рукаве 0,87 мм
Пример 9
Результаты 5 получения полимерного ядра в полимерном рукаве
Выбирали шесть имплантатов, полученных по примеру 4, соответствующих параметрам, изложенным в таблице 5 ниже.
Полимерное ядро с 6,2 мг трипторелина ацетата в рукаве 1,08 мм
Пример 10
Результаты получения полимерного ядра в полимерном рукаве 6
Выбирали шесть имплантатов, полученных по примеру 4, соответствующих параметрам, изложенным в таблице 6 ниже.
Полимерное ядро с 4,1 мг трипторелина ацетата в рукаве 0,85 мм
Пример 11
Результаты получения полимерного ядра в полимерном рукаве 7
Выбирали шесть имплантатов, полученных по примеру 4, соответствующих параметрам, изложенным в таблице 7 ниже.
Полимерное ядро с 4,9 мг трипторелина ацетата в рукаве 0,85 мм
Пример 12
Способ получения рукава с трипторелиновым ядром
Примеры 12-16 относятся получению имплантата по изобретению, включающему ядро ацетата трипторелина в полимерном рукаве PLGA в форме трубки.
Сорок частей воды для инъекции и 60 частей ацетата трипторелина взвешивали в двух отделенных емкостях, соединенных между собой клапаном. Использовали насос для создания вакуума в емкости с ацетатом трипторелина. Распылительные устройства открывались, и вода поступала в свободное пространство между частицами порошка.
Гель, образованный из воды и ацетата трипторелина, гомогенизировали при перемешивании.
Полученным водным гелем ацетата трипторелина заполняли рукав, полученный в соответствии с примером 3. Рукав взвешивали до и после заполнения для подтверждения правильного количества ацетата трипторелина в воде при дозировании.
Ацетат трипторелина и воду, помещенные в трубку, сушили в две стадии. Смесь инкубировали в течение 2-48 часов при 20-30°C и атмосферном давлении для изменения конформации и затем сушили в течении 6 часов - 24 часов под вакуумом для уменьшения влажности.
Пример 13
Результаты получения рукава с трипторелиновым ядром 1
Выбирали шесть имплантатов, полученных по примеру 12, обладающих параметрами, изложенными в таблице 8 ниже.
Полимерное ядро с 6,3 мг трипторелина ацетата в рукаве 0,85 мм
Пример 14
Результаты получения рукава с трипторелиновым ядром 1
Выбирали шесть имплантатов, полученных по примеру 12, обладающих параметрами, изложенными в таблице 9 ниже.
Полимерное ядро с 10,0 мг трипторелина ацетата в рукаве 1,10 мм
Пример 15
Результаты получения рукава с трипторелиновым ядром 1
Выбирали шесть имплантатов, полученных по примеру 12, обладающих параметрами, изложенными в таблице 10 ниже.
Полимерное ядро с 10,0 мг трипторелина ацетата в рукаве 1,10 мм
Пример 16
Результаты получения рукава с трипторелиновым ядром 1
Выбирали шесть имплантатов, полученных по примеру 12, обладающих параметрами, изложенными в таблице 11, ниже.
Полимерное ядро с 7,2 мг трипторелина ацетата в рукаве 1,2 мм
Пример 17
Метод двойной экструзии
Сначала PLGA 85:15 в порошке экструдировали в пеллеты. Приблизительно 600 г порошка PLGA экструдировали и получали 586,88 г пеллет (соответствующий выход 86%). Пеллеты получали с различными свойствами.
Параметры экструзии были следующими:
Образцы были получены на отдельном комплекте оборудования размещенных последовательно в одной поточной линии экструдера для ядер и системы создания покрытия в форме трубки/нанесения покрытия.
Пример 18
Пеллеты ядра с PLGA/ацетат трипторелина, содержащие 34% ацетата трипторелина
Это исследование выполняли с пеллетами из PLGA и ацетата трипторелина (PLGA+активное вещество). Концентрация ацетата трипторелина в пеллетах составляла приблизительно 34%.
Параметры способа
Эти две части, ядро и покрытие, проявляли высокую адгезию и оставались соединенным вместе.
Пример 19
Методика высвобождения in vitro полимерного ядра и полимерного ядра в полимерном рукаве
Примеры 19 и 20 относятся к исследованиям in vitro полимерного ядра по примеру 2 и полимерного ядра в полимерном рукаве по примеру 6.
Следующую методику использовали для исследования высвобождения in vitro имплантата по примерам 2 и 6. Аппарат включал модифицированную камеру растворения I (c системой корзинок) по фармакопее США, соединенную с автоматическим прибором для отбора проб (MAXIMIZER™) с принтером для регистрации данных в оперативном режиме и спектрофотометром в УФ и видимой области с мультиклеточной системой, которая термостатируется программируемой оборотной камерой. Оборотный цикл этой камеры включает емкость на 2 л, в которой поддерживается среда высвобождения для второй части исследования. Спектрофотометр соединен с ПК с установленным программным обеспечением CHEMSTATION™, и во время исследования контролировали отбор проб, анализ и состояния камер.
Ниже показаны дополнительные условия.
- Температурный градиент: 56 часов при 37°C, с увеличением до 55°C через 24 часа и 55°C до конца.
- Среда высвобождения: PBS pH 7,4 в течение 44 часов. Затем восемь передач (по одной каждые 4 часа): состоящих из экстракции 25 мл среды PBS и введения 20 мМ предварительно подогретой молочной кислоты pH 3. Затем среду высвобождения поддерживали после этих подач. Обе среды были дегазированы до использования.
- Скорость перемешивания: 75 об/мин.
- Объем среды растворения: 100 мл.
- Продолжительность: 7 дней для имплантатов/10 дней для микротрубок (полностью не определенный).
- Оперативное исследование: ультрафиолетовая и видимая область спектра (280 нм).
Пример 20
Результаты in vitro высвобождения полимерного ядра и полимерного ядра в полимерном рукаве
Профиль высвобождения in vitro полимерного ядра по примеру 2 и имплантата по примеру 6 получали в соответствии с методикой по примеру 19. Профиль высвобождения in vivo показан на фигуре 1.
Профиль высвобождения in vitro заметно медленнее в случае, если полимерное ядро ацетата трипторелина и PLGA покрыто полимерным рукавом PLGA, чем без покрытия.
Пример 21
Исследование in vivo полимерного ядра в полимерном рукаве
Примеры 21-22 относятся к исследованиям in vivo имплантатов по изобретению, включающих полимерное ядро ацетата трипторелина и PLGA в полимерном рукаве PLGA в форме трубки.
Следующую методику использовали для исследования in vivo имплантата по изобретению.
Выбирали шесть самцов гончих и каждой собаке в заднюю часть шеи подкожно вводили по одному имплантату.
Имплантат, полученный в соответствии с примером 4, размещали вручную в устройстве для введения инъекцией. Имплантат и устройство обрабатывали гамма-излучением более 25 кГр. Устройство в форме шприца взвешивали до и после введения для подтверждения полного введения.
Образцы крови отбирали через головную вену. Расписание для отбора проб в течение 6 месяцев был следующим: до инъекции (момент времени 0), 15 и 30 минут, 1, 2, 4, 8 и 12 часов и затем 1, 2, 3, 7, 10, 15, 20, 24, 27, 30, 37, 44, 51, 60, 69, 76, 83, 90, 105, 120, 135, 150, 165, 180 день. Как только концентрацию трипторелина обнаруживали и собак кастрировали, образцы затем отбирали один раз каждые 14-16 дней до тех пор, пока количество трипторелина неоднократно не было ниже предела обнаружения концентрации, и содержание тестостерона было выше предела кастрации.
Образцы отбирали в шприц с коагулянтом и консервантом. Содержание каждого шприца аккуратно перемешивали. Образцы крови оставляли на холодной водяной бане перед центрифугированием (1600 g в течение 20 минут при 4°C). Наконец, 1 мл плазмы перемещали в полипропиленовые криопробирки для анализа тестостерона, и оставшуюся плазму переносили в полистироловые пробирки для анализа трипторелина. Их быстро замораживали до ниже -20°C, при этой температуре оставляли до анализа.
Концентрацию трипторелина в плазме определяли методом РИА. Этот метод, валидированный ранее, включает подготовку калибровочных стандартных кривых и добавление качественных контрольных образцов. Предел количественного определения составляет 20 пг·мл-1.
Кроме того, концентрацию тестостерона в образцах плазмы собак анализировали после твердофазной экстракции в оперативном режиме 0,3 мл образцов плазмы собак вместе с LC-MS/MS, используя тридейтериевый тестостерон в качестве внутреннего стандарта, и чистую плазму самки собаки, чтобы исключить взаимодействие с базальным тестостероном, который присутствует у здоровых самцов. Этот метод, валидированный ранее, включает подготовку калибровочных стандартных кривых и добавление качественных контрольных образцов чистой плазмы самки собаки, чтобы исключить взаимодействие с базальным тестостероном, который присутствует у здоровых самцов.
Имплантаты по примерам 6-8, описанные выше, вводили собакам в соответствии с примерами 22-24.
Введение осуществляли с использованием игл с наружным диаметром 1,2 или 1,4 мм или посредством Retroinjector.
Пример 22
Результаты in vivo для полимерного ядра в полимерном рукаве 1
Имплантаты по примеру 6 вводили шести собакам в соответствии с методикой по примеру 21. Профиль высвобождения in vivo показан на фигуре 2.
Концентрацию лекарственного средства в плазме после подкожного введения измеряли в течение по меньшей мере 8 месяцев у всех собак. Средняя ± S.D. концентрация трипторелина в плазме за 6 месяцев составила 0,34±0,08 нг/мл. На графике зависимости концентрации в плазме от времени отбора проб показан очень хороший контроль взрывного высвобождения (среднее ± SD Cmax 1,9±0,87 нг/мл) при медиане tmax 4 часа. Затем, после незначительного уменьшения концентрации трипторелина к 30 дню, наблюдали высвобождение нулевого порядка к 90 дню (округленное значение медианы C30-90d 0,127 нг/мл). Пиковые плазменные концентрации наблюдали у всех собак в период между 90 и 180 днями с концентрациями трипторелина в пределах от 0,379 до 1,395 нг/мл.
Пример 23
Результаты in vivo для полимерного ядра в полимерном рукаве 2
Имплантат по примеру 7 вводили шести собакам в соответствии с методикой по примеру 21. Профиль высвобождения in vivo показан на фигуре 3.
Концентрацию лекарственного средства в плазме после подкожного введения измеряли в течение по меньшей мере 7 месяцев у пяти из шести собак. Средняя ± S.D. концентрация трипторелина в плазме за 6 месяцев составила 0,13±0,11 нг/мл. На графике зависимости концентрации в плазме от времени отбора проб показан очень хороший контроль взрывного высвобождения (среднее ± SD Cmax 6,0±1,6 нг/мл) при медиане tmax 2,5 часов. Затем, после незначительного уменьшения концентрации трипторелина к 30 дню, наблюдали высвобождение псевдо нулевого порядка к 90 дню (округленное значение медианы C30-90d 0,341 нг/мл). Затем концентрация снижалась быстро к 105 дню (от среднего значения C90d 0,42 нг/мл до среднего значения C105d 0,10 нг/мл). Наконец, пиковую плазменную концентрацию наблюдали у всех собак в период между 105 и 150 дней с концентрацией трипторелина в пределах от 0,226 до 0,678 нг/мл.
Пример 24
Результаты in vivo для полимерного ядра в полимерном рукаве 3
Имплантат по примеру 8 вводили шести собакам в соответствии с методикой по примеру 21. Профиль высвобождения in vivo показан на фигуре 4.
Концентрацию лекарственного средства в плазме после подкожного введения измеряли в течение по меньшей мере 8 месяцев у пяти из шести собак. Средняя ± S.D. концентрация трипторелина в плазме за 6 месяцев составила 0,24±0,26 нг/мл. На графике зависимости концентрации в плазме от времени отбора проб показан очень хороший контроль взрывного высвобождения (среднее ± SD Cmax 7,4±1,7 нг/мл) при медиане tmax 4 часов. Затем, после незначительного уменьшения концентрации трипторелина к 20 дню, наблюдали высвобождение псевдо нулевого порядка к 150 дню (округленное значение медианы C20-150d 0,36 нг/мл).
Пример 25
Результаты in vivo для ядра трипторелина в полимерном рукаве 1
Примеры 25 и 26 относятся к исследованию in vivo имплантатов по изобретению, включающих ядро трипторелина в полимерном рукаве в форме трубки из PLGA.
Имплантат по примеру 13 вводили шести собакам в соответствии с методикой по примеру 21. Профиль высвобождения in vivo показан на фигуре 5.
Концентрацию лекарственного средства в плазме после подкожного введения измеряли в течение по меньшей мере 6 месяцев у всех собак. Средняя ± S.D. концентрация трипторелина в плазме за 6 месяцев составила 0,09±0,05 нг/мл. На графике зависимости концентрации в плазме от времени отбора проб показан очень хороший контроль взрывного высвобождения (среднее ± SD Cmax 6,4±2,3 нг/мл) при медиане tmax 1 час. Затем, после быстрого уменьшения концентрации трипторелина в период с 1 часа до 12 часов, наблюдали высвобождение нулевого порядка к 40 дню (округленное значение медианы C0,5-40d 0,633 нг/мл). Две пиковых концентрации в плазме наблюдали у большинства собак в период между 40 и 90 днем и с 98 до 180 дня, с концентрациями трипторелина в пределах от 0,414 до 2,164 20 нг·мл-1 и от 0,307 до 1,311 нг/мл, соответственно.
Пример 26
Результаты in vivo для ядра трипторелина в полимерном рукаве 2
Имплантат по примеру 14 вводили шести собакам в соответствии с методикой по примеру 21. Профиль высвобождения in vivo показан на фигуре 6.
Концентрацию лекарственного средства в плазме после подкожного введения измеряли в течение по меньшей мере 6 месяцев у пяти из шести собак. Средняя ± S.D. концентрация трипторелина в плазме за 6 месяцев составила 0,12±0,15 нг/мл. На графике зависимости концентрации в плазме от времени отбора проб показан очень хороший контроль взрывного высвобождения (среднее ± SD Cmax 8,9±5,0 нг/мл) при медиане tmax 1 час. Затем, после быстрого уменьшения концентрации трипторелина в период с 1 часа до 1 дня, наблюдали высвобождение нулевого порядка к 30 дню (округленное значение медианы C0,5-30d значение 0,552 нг/мл). После этого две пиковых концентрации в плазме наблюдали у большинства собак в период между 30 и 90 днем и с 90 до 180 дня, с концентрациями трипторелина в пределах от 0,323 до 3,709 нг·мл-1 и от 0,457 до 2,247 нг/мл соответственно.
Группа изобретений относится к медицине и касается способа получения удлиненного имплантата, где соотношение диаметра к длине по оси имплантата составляет между 1:20 и 1:40, для контролируемого и замедленного высвобождения аналога GnRH ацетата трипторелина. Кроме того, группа изобретений касается удлиненного имплантата, полученного в соответствии с указанным способом. Группа изобретений обеспечивает хороший контроль высвобождения трипторелина из имплантата. 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 26 пр., 6 ил., 11 табл.
1. Способ получения удлиненного имплантата, где соотношение диаметра к длине по оси имплантата составляет между 1:20 и 1:40, для контролируемого и замедленного высвобождения аналога GnRH ацетата трипторелина, включающий стадии
- приготовления полимерного или сополимерного рукава,
- приготовления раствора между 40 и 80% (мас./мас.) ацетата трипторелина в воде,
- размещения раствора в рукаве,
- инкубирования раствора в течение 2-48 часов при 20-30°C и
- сушки в течение 6-24 часов под вакуумом.
2. Удлиненный имплантат, где соотношение диаметра к длине по оси имплантата составляет между 1:20 и 1:40, для контролируемого и замедленного высвобождения аналога GnRH ацетата трипторелина, полученный в соответствии со способом по п. 1, где имплантат включает
- полимерный или сополимерный рукав с по меньшей мере одним открытым торцом, и
- ядро, включающее ацетат трипторелина, расположенное в
рукаве.
3. Удлиненный имплантат, где соотношение диаметра к длине по оси имплантата составляет между 1:20 и 1:40, для контролируемого и замедленного высвобождения аналога GnRH ацетата трипторелина, полученный способом по п. 1.
4. Имплантат по п. 3, в котором полимерный или сополимерный рукав образованы из молочнокислой и/или гликолевой кислот.
5. Имплантат по п. 4, в котором полимерный или сополимерный рукав представляют собой сополимер молочной кислоты и гликолевой кислоты (PLGA).
6. Имплантат по п. 5, в котором соотношение молочной кислоты и гликолевой кислоты в PLGA находится в диапазоне от 70:30 до 90:10.
7. Имплантат по любому из пп. 2 или 3, который способен высвобождаться замедленно в течение по меньшей мере 3 месяцев, предпочтительно, в течение по меньшей мере 6 месяцев.
8. Имплантат по любому из пп. 2 или 3, где количество ацетата трипторелина находится в диапазоне от 0,5 до 50 мг, предпочтительно количество находится в диапазоне от 2 до 20 мг, более предпочтительно количество составляет 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мг.
9. Имплантат по любому из пп. 2 или 3, где длина по оси имплантата находится между 2 и 3 см, предпочтительно длина по оси имплантата составляет приблизительно 2,6 см.
10. Имплантат по любому из пп. 2 или 3, где соотношение диаметра к длине по оси имплантата составляет 1:30.
11. Имплантат по п. 5, где молекулярная масса PLGA составляет по меньшей мере 60 кДа, предпочтительно молекулярная масса PLGA составляет по меньшей мере 100 кДа.
| Способ обработки целлюлозных материалов, с целью тонкого измельчения или переведения в коллоидальный раствор | 1923 |
|
SU2005A1 |
| Пресс для выдавливания из деревянных дисков заготовок для ниточных катушек | 1923 |
|
SU2007A1 |
| Колосоуборка | 1923 |
|
SU2009A1 |
| WO 00/33809 A1, 15.06.2000 | |||
| AMBROSE J.D., et al., Influence of deslorelin (GnRH-agonist) implant on plasma progesterone, first wave dominant follicle and pregnancy in dairy cattle | |||
| Theriogenology | |||
| Способ и аппарат для получения гидразобензола или его гомологов | 1922 |
|
SU1998A1 |
