[001] Фосфоинозитид-3-киназы (PI3-киназы или PI3K) представляют собой семейство ферментов, которые могут быть вовлечены в такие клеточные функции, как рост, пролиферация, дифференцировка, подвижность, выживаемость клеток и внутриклеточная миграция, которые, в свою очередь, могут быть вовлечены в развитие ракового заболевания.
[002] Семейство PI3K может включать четыре различных класса, отличающихся по структурным и функциональным характеристикам и называемых Классами I-IV. Наиболее полно изученным классом является Класс I-PI3K. Класс I включает три α-изоформы класса I - PI3Kα, PI3Kβ и PI3Kδ. По-видимому, PI3Kα играет важную роль в раковых заболеваниях и злокачественных опухолях у человека. При раковых заболеваниях у человека может иметь место избыточная экспрессия PI3Kα.
[003] Мишень рапамицина у млекопитающих (mTOR) представляет собой находящуюся ниже по каскаду киназу семейства PI3K. Ингибирование mTOR может ингибировать активность PI3K. Таким образом, путь PI3K/mTOR можно использовать для обнаружения новых лекарственных средств для лечения раковых заболеваний.
[004] Согласно настоящему изобретению предложено по меньшей мере одно соединение формулы 1:
и/или по меньшей мере одна фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, где
А1 представляет собой N или СН;
А4 и А5 независимо представляют собой N или CR2;
А2 и А3 совместно с кольцом В представляют собой 5-членный гетероарил или гетероцикл, содержащий от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, О и S, и указанный 5-членный гетероарил или гетероцикл может быть замещен одной или более группами, независимо выбранными из алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, оксо, -С(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -С(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, галогеналкила, гетероарила и гетероцикла;
при условии, что А2 и А3 совместно с кольцом B не являются
;
представляет собой одинарную связь или двойную связь;
R1 представляет собой гетероарил, возможно замещенный одной или более группами, независимо выбранными из алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, оксо, -C(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -C(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, галогеналкила, гетероарила и гетероцикла;
R и R2 независимо выбраны из Н, алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, -C(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -C(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -OC(O)Ra, -OC(O)NRcRd, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, галогеналкила, гетероарила и гетероцикла;
и каждый из вышеуказанных алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, галогеналкила, гетероарила и гетероцикла может быть замещен одной или более группами, независимо выбранными из возможно замещенного алкила, возможно замещенного алкенила, возможно замещенного алкинила, возможно замещенного арила, возможно замещенного циклоалкила, -ОН, оксо, -C(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -C(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, возможно замещенного галогеналкила, возможно замещенного гетероарила и возможно замещенного гетероцикла;
каждый Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf и Rg независимо выбран из Н, возможно замещенного алкила, возможно замещенного алкенила, возможно замещенного алкинила, возможно замещенного арила, возможно замещенного циклоалкила, возможно замещенного галогеналкила, возможно замещенного гетероарила и возможно замещенного гетероцикла,
или Ra и Rc, и/или Rc и Rd и/или Rc и Re, и/или Rc и Rf и/или Rd и Re, и/или Rg и Rf совместно с атомом (атомами), к которым они присоединены, образуют 3-10-членное возможно замещенное гетероциклическое кольцо; и
в каждом случае n независимо равен 0, 1 или 2;
где каждая возможно замещенная группа, указанная выше, может быть незамещена или независимо замещена одним или более, например, одним, двумя или тремя заместителями, независимо выбранными из C1-C4алкила, циклоалкила, оксо, арила, гетероцикла, гетероарила, арил-C1-C4алкил-, гетероарил-C1-C4 алкил-, C1-C4галогеналкил-, -OC1-C4алкила, OC1-C4алкилфенила, -C1-C4алкил-ОН, -C1-C4алкил-O-С1-С4 алкила, -OC1-C4 галогеналкила, галогена, -ОН, -NH2, -C1-C4 алкил-NH2, -N(C1-C4алкил)(C1-C4алкила), -NH(C1-C4алкила), -N(C1-C4алкил)(С1-С4 алкилфенила), -NH(C1-C4 алкилфенила), циано, нитро, оксо, -CO2H, -C(O)OC1-C4 алкила, -С(O)Oциклоалкила, -С(O)Oарила, С(O)Oгетероарила, -С(O)Oгетероцикла, -CON(C1-C4 алкил)(С1-С4 алкила), CONR'R'', где R' и R'' совместо с атомом N, к которому они присоединены, образуют гетероцикл, -CON(циклоалкил)(циклоалкил), CON(гетероцикл)(гетероцикл), -CONH(C1-C4 алкил), -CONH(циклоалкил), CONH(гетероцикл), -CONH2, -NHC(O)(C1-C4 алкил), -NHC(O)(циклоалкил), -NHC(O)(гетероцикл), -NHC(O)(арил), такой как -NHC(O)(фенил), NHC(O)(гетероарил), -N(C1-C4 алкил)С(O)(С1-С4 алкил), -N(C1-C4 алкил)С(O)(циклоалкил), N(C1-C4 алкил)С(O)(гетероцикл), N(C1-C4 алкил)С(O)(арил), такой как -N(C1-C4 алкил)С(O)(фенил), N(C1-C4 алкил)С(O)(гетероарил), -C(O)C1-C4 алкил, -С(O)(циклоалкил), С(O)(гетероцикл), -С(O)(арил), такой как -С(O) фенил, -С(O)(гетероарил), -C(O)C1-C4 галогеналкил, -OC(O)C1-C4 алкил, -ОС(O)(циклоалкил), ОС(O)(гетероцикл), - -ОС(O)(гетероарил), ОС(O)(арил), такой как -ОС(O)фенил, -SO2(C1-C4 алкил), - SO2(циклоалкил), -SO2(гетероцикл), -SO2(арил), такой как SO2(фенил), -SO2(гетероарил), -SO2(C1-C4 галогеналкил), -SO2NH2, -SO2NR'R'', где R' и R'' совместно с атомом N, к которому они присоединены, образуют гетероцикл, -SO2NH(C1-C4алкил), -SO2NH(циклоалкил), -SO2NH(гетероцикл), -SO2NH(арил), такого как -SO2NH(фенил), -SO2NH(гетероарил), NHSO2(C1-C4 алкил), NHSO2(циклоалкил), NHSO2(гетероцикл), NHSO2(арил), такой как -NHSO2(фенил), NHSO2(гетероарил) и -NHSO2(C1-C4 галогеналкил), где каждый алкил, фенил, арил, циклоалкил, гетероцикл и гетероарил может быть замещен одной или более группами, независимо выбранными из -ОН, галогена, циклоалкила, гетероцикла, C1-C4 алкила, C1-C4 галогеналкил-, -OC1-C4 алкила, C1-C4 алкил-ОН, -C1-C4 алкил-O-С1-С4 алкила, -OC1-C4 галогеналкила, циано, нитро, -NH2, -CO2H, -C(O)OC1-C4 алкила, -CON(C1-C4алкил)(С1-С4 алкила), -CONH(C1-C4 алкила), -CONH2, -NHC(O)(C1-C4 алкила) и -N(C1-C4алкил)С(O)(С1-С4 алкила).
[005] Также предложена фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно соединение и/или по меньшей мере одну фармацевтически приемлемую соль указанного соединения, описанные в настоящей заявке, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.
[006] Также предложен способ ингибирования активности PI3K и/или mTOR, включающий приведение фермента в контакт с эффективным количеством по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения, описанных в настоящей заявке.
[007] Также предложен способ лечения ракового заболевания, восприимчивого к ингибированию PI3K и/или mTOR, включающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении указанного ракового заболевания, эффективного количества по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения, описанных в настоящей заявке.
[008] Также предложено применение по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения, описанных в настоящей заявке, для получения лекарственного средства для ингибирования активности PI3K и/или mTOR.
[009] Также предложено применение по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения, описанных в настоящей заявке, для получения лекарственного средства для лечения ракового заболевания.
[010] Предполагается, что в настоящем описании следующие слова, фразы и символы имеют значения, указанные ниже, кроме случаев, когда в контексте, в котором они используются, указано иное. Следующие сокращения и термины имеют указанные значения во всем описании:
[011] Дефис («-»), находящийся не между двумя буквами или символами, используется для обозначения места присоединения заместителя. Например, -CONH2 присоединен через атом углерода.
[012] Термин «алкил» в настоящем описании относится к углеводороду с прямой или разветвленной цепью, содержащему 1-18, например, 1-12, например, 1-6 атомов углерода. Примеры алкильных групп включают, без ограничения, метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, изо-бутил и трет-бутил. «Низший алкил» относится к углеводороду с прямой или разветвленной цепью, содержащему 1-6, например, 1-4 атома углерода.
[013] Термин «алкокси» в настоящем описании относится к алкильной группе с прямой или разветвленной цепью с указанным количеством атомов углерода, соединенных кислородным мостиком, такой как, например, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, пентокси, 2-пентилокси, изопентокси, неопентокси, гексокси, 2-гексокси, 3-гексокси, 3-метилпентокси и подобные. Алкоксигруппы обычно содержат от 1 до 6 атомов углерода, соединенных кислородным мостиком. «Низший алкокси» относится к алкокси с прямой или разветвленной цепью, в которой алкильная часть содержит 1-4 атома углерода.
[014] Термин «алкенил» в настоящем описании относится к углеводороду с прямой или разветвленной цепью, содержащему одну или более двойных С=С связей и 2-10, например, 2-6 атомов углерода. Примеры алкенильных групп включают, без ограничения, винил, 2-пропенил и 2-бутенил.
[015] Термин «алкинил» в настоящем описании относится к углеводороду с прямой или разветвленной цепью, содержащему одну или более тройных С≡С связей и 2-10, например, 2-6 атомов углерода. Примеры алкинильных групп включают, без ограничения, этинил, 2-пропинил и 2-бутинил.
[016] Термин «циклоалкил» относится к насыщенным и частично ненасыщенным циклическим углеводородным группам, содержащим 3-12, например, 3-8 атомов углерода. Примеры циклоалкильных групп включают, без ограничения, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклогексил, циклогексенил, циклогептил и циклооктил. Кольцо может быть насыщенным или содержать одну или более двойных связей (т.е. быть частично ненасыщенным), но не полностью сопряженным и не ароматическим, как определено в настоящем описании.
[017] «Арил» включает:
5- и 6-членные карбоциклические ароматические кольца, например, фенил;
бициклические системы колец, в которых по меньшей мере одно кольцо является карбоциклическим и ароматическим, например, нафталин, индан и 1,2,3,4-тетрагидрохинолин; и
трициклические системы колец, в которых по меньшей мере одно кольцо является карбоциклическим и ароматическим, например, флуорен.
[018] Например, арил включает 5 и 6-членные карбоциклические ароматические кольца, конденсированные в 5-7-членное циклоалкильное или гетероциклическое кольцо, содержащее 0 или более гетероатомов, выбранных из N, О и S при условии, что место присоединения находится на карбоциклическом ароматическом кольце в случае, когда карбоциклическое ароматическое кольцо конденсировано с гетероциклическим кольцом, и что место присоединения может находиться на карбоциклическом ароматическом кольце или на циклоалкиле, когда карбоциклическое ароматическое кольцо конденсировано с циклоалкилом. Бивалентным радикалам, образованным из замещенных производных бензола и имеющим свободные валентности на атомах кольца, дают названия как замещенным радикалам фенилена. Бивалентным радикалам, образованным из одновалентных полициклических углеводородных радикалов, названия которых заканчиваются на «-ил», путем удаления одного атома водорода с атома углерода со свободной валентностью, дают названия путем добавления «-иден» к Названию соответствующего одновалентного радикала, например, нафтиловую группу с двумя местами присоединения называют нафтилиденом. Арил, однако, не включает гетероарил, отдельно определенный ниже, и не пересекается с ним никаким образом. Следовательно, если одно или более карбоциклических ароматических колец конденсированы с гетероциклическим ароматическим кольцом, получающаяся система колец представляет собой гетероарил, а не арил, как определено в настоящем описании.
[019] Термин «галоген» включает фтор, хлор, бром и йод.
[020] Термин «гетероарил» относится к
5-7-членным ароматическим моноциклическим кольцам, содержащим один или более, например, 1-4 или, в некоторых вариантах реализации, 1-3 гетероатома, выбранных из N, О и S, причем оставшиеся атомы кольца представляют собой углерод;
8-12-членным бициклическим кольцам, содержащим один или более, например, 1-4 или, в некоторых вариантах реализации, 1-3 гетероатома, выбранных из N, О и S, причем оставшиеся атомы кольца представляют собой углерод, и по меньшей мере одно кольцо является ароматическим, и по меньшей мере один гетероатом присутствует в ароматическом кольце; и
11-14-членным трициклическим кольцам, содержащим один или более, например, 1-4 или, в некоторых вариантах реализации, 1-3 гетероатома, выбранных из N, О и S, причем оставшиеся атомы кольца представляют собой углерод, и по меньшей мере одно кольцо является ароматическим, и по меньшей мере один гетероатом присутствует в ароматическом кольце.
[021] Например, гетероарил содержит 5-7-членное гетероциклическое ароматическое кольцо, конденсированное с 5-7-членным циклоалкильным кольцом. Для подобных конденсированных бициклических гетероарильных систем колец, в которых только одно из колец содержит один или более гетероатомов, место присоединения может находиться на гетероароматическом кольце или на циклоалкильном кольце.
[022] В случае, когда общее число атомов S и О в гетероарильной группе превышает 1, указанные гетероатомы не являются смежными. В некоторых вариантах реализации общее число атомов S и О в гетероарильной группе не превышает 2. В некоторых вариантах реализации общее число атомов S и О в ароматическом гетероцикле не превышает 1.
[023] Примеры гетероарильных групп включают, без ограничения, (согласно нумерации от места соединения, обозначенного 1), пиридил (такой как 2-пиридил, 3-пиридил или 4-пиридил), пиразинил, 2,4-пиримидинил, 3,5-пиримидинил, 2,4-имидазолил, изоксазолил, оксазолил, тиазолил, тиадиазолил, тетразолил, тиенил, бензотиенил, фурил, бензофурил, бензоимидазолил, индолил, индолинил, пиридизинил, триазолил, хинолинил, пиразолил, пирролопиридинил (такой как 1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил), пиразолопиридинил (такой как 1Н-пиразоло[3,4-b]пиридин-5-ил), бензоксазолил (такой как бензо[d]оксазол-6-ил), бензотиазолил (такой как бензо[d]тиазол-6-ил), индазолил (такой как 1Н-индазол-5-ил) и 5,6,7,8-тетрагидроизохинолин.
[024] Бивалентным радикалам, образованным из одновалентных гетероарильных радикалов, названия которых заканчиваются на «-ил», путем удаления одного атома водорода с атома углерода со свободной валентностью, дают названия путем добавления «-иден» к названию соответствующего одновалентного радикала, например, пиридиловую группу с двумя местами присоединения Зазывают пирилиденом. Гетероарил не включает арил, определенный выше, и не пересекается с ним никаким образом.
[025] Замещенный гетероарил также включает системы колец, замещенные одним или более оксидными (-O) заместителями, такими как пиридинил N-оксиды.
[026] Под «гетероциклом» или «гетероциклическим кольцом» подразумевается 4-12-членное моноциклическое, бициклическое или трициклическое насыщенное или частично ненасыщенное кольцо, содержащее по меньшей мере 2 атома углерода, а также 1-3 гетероатома, независимо выбранных из кислорода, серы и азота. «Гетероцикл» также относится к 5-7-членному гетероциклическому кольцу, содержащему один или более гетероатомов, выбранных из N, О или S, конденсированных с 5-, 6- и/или 7-членным циклоалкилом, карбоциклическим ароматическим или гетероароматическим кольцом, при условии, что место присоединения находится на гетероциклическом кольце, когда гетероциклическое кольцо конденсировано с карбоциклическим ароматическим или гетероароматическим кольцом, и что место присоединения может находиться на циклоалкильном или гетероциклическом кольце, когда гетероциклическое кольцо конденсировано с циклоалкилом. «Гетероцикл» также относится к алифатическому спироциклическому кольцу, содержащему один или более гетероатомов, выбранных из N, О или S, при условии, что место присоединения находится на гетероциклическом кольце. Кольца могут быть насыщенными или иметь одну или более двойных связей (т.е. быть частично ненасыщенными). Гетероцикл может быть замещен оксо. Местом присоединения может быть углерод или гетероатом в гетероциклическом кольце. Гетероцикл не является гетероарилом, определенным выше.
[027] Подходящие гетероциклы включают, например (согласно нумерации от места соединения, обозначенного 1), 1-пирролидинил, 2-пирролидинил, 2,4-имидазолидинил, 2,3-пиразолидинил, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил, 4-пиперидинил, 2,5-пиперазинил, пиранил, 2-морфолинил и 3-морфолинил. Замещенный гетероцикл также включает системы колец, замещенные одной или более оксо-группами, такими как пиперидинил N-оксид, морфолинил-N-оксид, 1-оксо-1-тиоморфолинил и 1,1-диоксо-1-тиоморфолинил.
[028] Под «возможным» или «возможно» подразумевается, что описываемое далее событие или условие может иметь место или не иметь места, и что описание включает случаи, в которых событие или условие имеет место, и случаи, в которых оно не имеет места. Например, «возможно замещенный алкил» охватывает «алкил» и «замещенный алкил», определенные ниже. Специалистам в области техники будет очевидно, что в случае любой группы, содержащей один или более заместителей, предполагается, что такая группа не приводит к какому-либо замещению или замещениям, являющимся пространственно нецелесообразными, неосуществимыми с точки зрения синтеза и/или нестабильными по своей природе.
[029] В настоящем описании термин «замещенный» означает, что любой один или более атомов водорода на целевом атоме или в группе заменен заместителем, выбранным из указанной группы, при условии, что не превышается нормальная валентность целевого атома. Когда заместителем является оксо (т.е. =O), замещаются два атома водорода на атоме. Комбинации заместителей и/или переменных параметров допустимы только в случае, если такие комбинации позволяют получить стабильные соединения или полезные синтетические промежуточные соединения. Предполагается, что под стабильной композицией или стабильной структурой имеют в виду соединение, которое является достаточно устойчивым для того, чтобы перенести выделение из реакционной смеси и последующую формулировку в агент, имеющий по меньшей мере практическую применимость. Если не указано иное, заместителям дают названия Согласно основной структуре. Например, следует понимать, что когда (циклоалкил)алкил упомянут в качестве возможного заместителя, местом присоединения данного заместителя к основной структуре является алкильная часть.
[030] В некоторых вариантах реализации «замещенный одной или более группами» относится к двум атомам водорода на целевом атоме или в группе, которые независимо заменены двумя заместителями, выбранными из указанной группы заместителей. В некоторых вариантах реализации «замещенный одной или более группами» относится к трем атомам водорода на целевом атоме или в группе, которые независимо заменены тремя заместителями, выбранными из указанной группы заместителей. В некоторых вариантах реализации «замещенный одной или более группами» относится к четырем атомам водорода на целевом атоме или в группе, которые независимо заменены четырьмя заместителями, выбранными из указанной группы заместителей.
[031] Описанные в настоящей заявке соединения включают, без ограничения, где это возможно, свои оптические изомеры, такие как энантиомеры и диастереомеры, смеси энантиомеров, в т.ч. рацематы, смеси диастереомеров и другие смеси указанных изомеров, в том объеме, в котором они могут быть получены средним специалистом в области техники при помощи стандартных экспериментов. В таких ситуациях одиночные энантиомеры или диастереомеры, т.е. оптически активные формы, могут быть получены путем асимметричного синтеза или разделения рацематов или смесей диастереомеров. Если возможно, разделение рацематов или смесей диастереомеров можно осуществлять посредством, например, стандартных способов, таких как кристаллизация в присутствии агента для оптического расщепления или хроматография, например, с применением колонки для хиральной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Кроме того, подобные соединения включают Z- и Е-формы (или цис- и транс-формы) соединений с двойными углерод-углеродными связями. Когда соединения, описанные в настоящей заявке, существуют в различных таутомерных формах, предполагается, что термин «соединение» включает все таутомерные формы соединения в объеме, в котором они могут быть получены без проведения излишних экспериментов. Подобные соединения также включают кристаллические формы, в т.ч. полиморфы и клатраты, в том объеме, в котором они могут быть получены средним специалистом в области техники при помощи стандартных экспериментов. Сходным образом, предполагается, что термин «соль» включает все изомеры, рацематы, другие смеси, Z- и Е-формы, таутомерные формы и кристаллические формы соли Соединения в том объеме, в котором они могут быть получены средним Специалистом в области техники без проведения излишних экспериментов.
[032] «Фармацевтически приемлемые соли» включают, без ограничения, соли неорганических кислот, такие как гидрохлорат, фосфат, дифосфат, гидробромат, сульфат, сульфинат, нитрат и подобные; а также соли органической кислоты, такие как малат, малеат, фумарат, тартрат, сукцинат, цитрат, лактат, метансульфонат, п-толуолсульфонат, 2-гидроксиэтилсульфонат, бензоат, салицилат, стеарат, алканоат, такой как ацетат, и соли с НООС-(СН2)n-СООН, где n равен 0-4, и подобные соли. Сходным образом, фармацевтически приемлемые катионы включают, без ограничения, натрий, калий, кальций, алюминий, литий и аммоний.
[033] Кроме того, если соединение, описанное в настоящей заявке, получают в виде соли присоединения кислоты, можно получить свободное основание путем повышения основности раствора соли кислоты. И наоборот, если продукт представляет собой свободное основание, можно получить соль присоединения, в частности, фармацевтически приемлемую соль присоединения, путем растворения свободного основания в подходящем органическом растворителе и обработки раствора кислотой в соответствии со стандартными процедурами для получения солей присоединения кислоты из основных соединений. Специалистам в области техники известны различные методики синтеза, которые можно Использовать без проведения излишних экспериментов для получения нетоксичных фармацевтически приемлемых солей присоединения.
[034] «Сольват», такой как «гидрат», получают путем проведения реакции между растворителем и соединением. Предполагается, что термин «соединение» включает сольваты, в т.ч. гидраты, соединений в том объеме, в котором они могут быть получены средним специалистом в области техники путем проведения стандартных экспериментов. Сходным образом, «соли» включают сольваты, такие как гидраты, солей в том объеме, в котором они могут быть получены средним специалистом в области техники путем проведения стандартных экспериментов. Подходящие сольваты представляют собой фармацевтически приемлемые сольваты, такие как гидраты, в т.ч. моногидраты и полугидраты, в том объеме, в котором они могут быть получены средним специалистом в области техники путем проведения стандартных экспериментов.
[035] «Хелат» получают путем координации соединения к иону металла в двух (или более) местах. Предполагается, что термин «соединение» включает хелаты соединений. Сходным образом, «соли» включают хелаты солей.
[036] «Нековалентный комплекс» получают путем взаимодействия соединения и другой молекулы, причем между соединением и молекулой не образуется ковалентная связь. Например, комплексообразование может произойти посредством ван-дер-ваальсовского взаимодействия, образования водородной связи и электростатических взаимодействий (также называемых ионными связями). Подобные нековалентные комплексы включены в термин «соединение».
[037] Термин «водородная связь» относится к форме ассоциации между электроотрицательным атомом (также известным как акцептор водородной связи) и атомом водорода, присоединенным ко второму, относительно электроотрицательному атому (также известному как донор водородной связи). Подходящие доноры и акцепторы водородной связи широко известны в медицинской химии (G.С. Pimentel and A.L McClellan, The Hydrogen Bond, Freeman, San Francisco, 1960; R. Taylor and O. Kennard, “Hydrogen Bond Geometry fn Organic Crystals”, Accounts of Chemical Research, 17, pp.320-326 (1984)).
[038] В настоящем описании термины «группа», «радикал» или «фрагмент» являются синонимами; предполагается, что они обозначают функциональные группы или фрагменты молекул, которые могут быть присоединены к связи или другим фрагментам молекул.
[039] Термин «активное вещество» используют для обозначения химического вещества с биологической активностью. В некоторых вариантах реализации «активное вещество» представляет собой химическое вещество с фармацевтической применимостью.
[040] «Лечение», «лечить» или «облегчение» относится к введению по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения, описанных в настоящей заявке, субъекту, страдающему раковым заболеванием, или имеющему симптомы ракового заболевания, или имеющему предрасположенность к раковому заболеванию, с целью излечения, облегчения, изменения, улучшения состояния или воздействия на раковое заболевание, симптомы ракового заболевания или предрасположенность к раковому заболеванию.
[041] Термин «эффективное количество» относится к количеству по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения, описанных в настоящей заявке, являющемуся эффективным для «лечения», определенного выше, заболевания или расстройства у субъекта. В случае ракового заболевания эффективное количество может вызвать любое из изменений, которое можно наблюдать или измерить у субъекта согласно определению «лечения», «лечить» или «облегчения», приведенному выше. Например, эффективное количество может уменьшить число раковых или опухолевых клеток; уменьшить размер опухоли; ингибировать или остановить инфильтрацию опухолевых клеток в периферические органы, в т.ч., например, распространение опухоли в мягкие ткани и кость; ингибировать и остановить метастазирование опухоли; ингибировать и остановить рост опухоли; до некоторой степени облегчить один или более симптомов, связанных с раковым заболеванием, снизить заболеваемость и смертность; улучшить качество жизни; или привести к комбинации подобных эффектов. Эффективное количество может быть количеством, достаточным для уменьшения симптомов заболевания, восприимчивого к ингибированию активности PI3K/mTOR. В случае терапии ракового заболевания эффективность in vivo может быть измерена, например, путем оценки продолжительности жизни, времени до прогрессирования заболевания (ТТР), показателей эффективности (RR), времени ответа и/или качества жизни. Эффективные количества могут варьировать, как известно специалистам в области техники, в зависимости от пути введения, применения наполнителя и совместного применения с другими агентами.
[042] Термин «ингибирование» обозначает снижение исходного уровня биологической активности или процесса. «Ингибирование активности PI3K и/или mTOR» относится к снижению активности PI3K и/или mTOR в качестве прямого или опосредованного ответа на присутствие по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли, описанных в настоящей заявке, по отношению к активности PI3K и/или mTOR в отсутствие по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения. Снижение активности не связано рамками какой-либо теории и может являться следствием прямого взаимодействия по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения, описанных в настоящей заявке, с PI3K и/или mTOR или следствием взаимодействия по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения, описанных в настоящей заявке, с одним или более факторами, которые в свою очередь оказывают воздействие на активность PI3K и/или mTOR. Например, присутствие по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения, описанных в настоящей заявке, может снизить активность PI3K и/или mTOR посредством прямого связывания с PI3K и/или mTOR, посредством оказания воздействия (прямого или опосредованного) на другой фактор, который в свою очередь вызывает снижение активности PI3K и/или mTOR, или посредством (прямого или опосредованного) снижения количества PI3K и/или mTOR в клетке или организме.
[043] Детальное описание одного или более вариантов реализации настоящего изобретения изложено ниже.
[044] Согласно настоящему изобретению предложено по меньшей мере одно соединение формулы 1:
и/или по меньшей мере одна фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, где
А1 представляет собой N или СН;
А4 и А5 независимо представляют собой N или CR2;
А2 и А3 совместно с кольцом В представляют собой 5-членный гетероарил или гетероцикл, содержащий от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, О и S, и указанный 5-членный гетероарил или гетероцикл возможно замещен одной или более группами, независимо выбранными из алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, оксо, -C(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -С(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, галогеналкила, гетероарила и гетероцикла;
при условии, что А2 и А3 совместно с кольцом В не являются 
;
представляет собой одинарную связь или двойную связь;
R1 представляет собой гетероарил, возможно замещенный одной или более группами, независимо выбранными из алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, оксо, -C(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -C(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, галогеналкила, гетероарила и гетероцикла;
R и R2 независимо выбраны из Н, алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, -C(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -C(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -OC(O)Ra, -OC(O)NRcRd, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, галогеналкила, гетероарила и гетероцикла;
и каждый из вышеуказанных алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, галогеналкила, гетероарила и гетероцикла может быть замещен одной или более группами, независимо выбранными из возможно замещенного алкила, возможно замещенного алкенила, возможно замещенного алкинила, возможно замещенного арила, возможно замещенного циклоалкила, -ОН, оксо, -C(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -C(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, возможно замещенного галогеналкила, возможно замещенного гетероарила и возможно замещенного гетероцикла;
каждый Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf и Rg независимо выбран из Н, возможно замещенного алкила, возможно замещенного алкенила, возможно замещенного алкинила, возможно замещенного арила, возможно замещенного циклоалкила, возможно замещенного галогеналкила, возможно замещенного гетероарила и возможно замещенного гетероцикла,
или Ra и Rc, и/или Rc и Rd, и/или Rc и Re, и/или Rc и Rf, и/или Rd и Re, и/или Rg и Rf совместно с атомом (атомами), к которым они присоединены, образуют 3-10-членное возможно замещенное гетероциклическое кольцо; и
в каждом случае n независимо равен 0, 1 или 2;
где каждая возможно замещенная группа, указанная выше, может быть незамещена или независимо замещена одним или более, например, одним, двумя или тремя заместителями, независимо выбранными из C1-C4 алкила, циклоалкила, оксо, арила, гетероцикла, гетероарила, арил-С1-С4алкил-, гетероарил-С1-С4 алкил-, C1-C4 галогеналкил-, -OC1-C4 алкила, -OC1-C4 алкилфенила, -C1-C4 алкил-ОН, -C1-C4 алкил-O-С1-С4 алкила, -OC1-C4 галогеналкила, галогена, -ОН, -NH2, -C1-C4 алкил-NH2, -N(C1-C4 алкил)(С1-С4 алкил), -NH(C1-C4 алкил), N(C1-C4 алкил)(С1-С4 алкилфенил), -NH(C1-C4 алкилфенил), циано, нитро, оксо, -CO2H, -C(O)OC1-C4 алкила, -С(O)Oциклоалкила, -С(O)Oарила, -С(O)Oгетероарила, -С(O)Oгетероцикла, -CON(C1-C4 алкил)(С1-С4 алкил), -CONR'R'', где R' и R'' совместно с атомом N, к которому они присоединены, образуют гетероцикл, -CON(циклоалкил)(циклоалкил), -CON(гетероцикл)(гетероцикл), -CONH(C1-C4 алкил), -CONH(циклоалкил), -CONH(гетероцикл), -CONH2, NHC(O)(C1-C4 алкил), -NHC(O)(циклоалкил), -NHC(O)(гетероцикл), -NHC(O)(арил), такой как -NHC(O)(фенил), -NHC(O)(гетероарил), -N(C1-C4алкил)С(O)(С1-С4алкил), -N(C1-C4 алкила)С(O)(циклоалкил), N(C1-C4 алкил)С(O)(гетероцикл), -N(C1-C4 алкил)С(O)(арил), такой как -N(C1-C4 алкил)С(O)(фенил), N(C1-C4 алкил)С(O)(гетероарил), -C(O)C1-C4 алкил, -C(O)(циклоалкил), -С(O)(гетероцикл), -С(O)(арил), такой как -С(O) фенил, -С(O)(гетероарил), -C(O)C1-C4 галогеналкил, -OC(O)C1-C4 алкил, ОС(O)(циклоалкил), -ОС(O)(гетероцикл), - -ОС(O)(гетероарил), ОС(O)(арил), такой как -ОС(O)фенил, -SO2(C1-C4 алкил), - SO2(циклоалкил), -SO2(гетероцикл), -SO2(арил), такой как SO2(фенил), -SO2(гетероарил), -SO2(C1-C4 галогеналкил), -SO2NH2, -SO2NR'R'', где R' и R'' совместно с атомом N, к которому они присоединены, образуют гетероцикл, -SO2NH(C1-C4 алкил), -SO2NH(циклоалкил), -SO2NH(гетероцикл), -SO2NH(арил), такой как -SO2NH(фенил), -SO2NH(гетероарил), -NHSO2(C1-C4 алкил), NHSO2(циклоалкил), NHSO2(гетероцикл), NHSO2(арил), такой как -NHSO2(фенил), NHSO2(гетероарил) и -NHSO2(C1-C4 галогеналкил), где каждый алкил, фенил, арил, циклоалкил, гетероцикл и гетероарил может быть замещен одной или более группами, независимо выбранными из -ОН, галогена, циклоалкила, гетероцикла, C1-C4 алкила, C1-C4 галогеналкил-, -OC1-C4 алкила, C1-C4 алкил-ОН, -C1-C4 алкил-O-C1-C4 алкила, -OC1-C4 галогеналкила, циано, нитро, -NH2, -CO2H, -C(O)OC1-C4 алкила, -CON(C1-C4 алкил)(С1-С4 алкил), -CONH(C1-C4 алкил), -CONH2, -NHC(O)(C1-C4 алкил) и -N(C1-C4 алкил)С(O)(С1-С4 алкил).
[045] В некоторых вариантах реализации А2 и А3 совместно с кольцом В представляют собой 5-членный гетероарил или гетероцикл, содержащий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из N, О и S. В некоторых вариантах реализации А2 и А3 совместно с кольцом В представляют собой 5-членный гетероарил или гетероцикл, содержащий от 1 до 3 гетероатомов азота.
[046] В некоторых вариантах реализации А2 и А3 совместно с кольцом В могут быть выбраны из структур (2)-(6)
где
t представляет собой 1, 2 или 3; и
R3 независимо выбран из Н, C1-C6 алкила, С2-С8 алкенила, С2-С8 алкинила, C6-С14 арила, С3-С9 циклоалкила, -C(O)ORb, -CN, -C(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -OC(O)Ra, -OC(O)NRcRd, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, галогеналкила, гетероарила и гетероцикла;
и каждый из вышеуказанных алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, гетероарила и гетероцикла может быть замещен одной или более группами, независимо выбранными из возможно замещенного алкила, возможно замещенного алкенила, возможно замещенного алкинила, возможно замещенного арила, возможно замещенного циклоалкила, -ОН, оксо, -C(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -C(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, возможно замещенного галогеналкила, возможно замещенного гетероарила и возможно замещенного гетероцикла, и Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf и Rg такие, как определено выше.
при условии, что, когда А2 и А3 совместно с кольцом В представляют собой структуру (4), А4 не является CR2, причем R2 такой, как определено выше.
[047] Например, R3 независимо выбран из Н, ОН, CN, NO2, галогена, C1-C6 алкила, C2-C8 алкенила, C2-C8 алкинила, С6-С14 арила, С3-С9 циклоалкила, гетероарила и гетероцикла, где каждый из указанных алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, гетероарила и гетероцикла может быть замещен одной или более группами, независимо выбранными из возможно замещенного алкила, возможно замещенного алкенила, возможно замещенного алкинила, возможно замещенного арила, возможно замещенного циклоалкила, -ОН, оксо, -C(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -C(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, возможно замещенного галогеналкила, возможно замещенного гетероарила и возможно замещенного гетероцикла;
[048] В некоторых вариантах реализации А2 и А3 совместно с кольцом В выбраны из структур (2)-(5), где R3 и t такие, как определено выше.
[049] В некоторых вариантах реализации А2 и А3 совместно с кольцом В выбраны из структур (3)-(4), где R3 и t такие, как определено выше.
[050] В некоторых вариантах реализации А4 представляет собой N или СН.
[051] В некоторых вариантах реализации А5 представляет собой N или СН.
[052] В некоторых вариантах реализации A1, A4 и A5 представляют собой СН.
[053] В некоторых вариантах реализации A1 и A5 представляют собой СН, и А4 представляет собой N.
[054] В некоторых вариантах реализации R1 представляет собой гетероарил, который выбран из следующих структур
например, R1 представляет собой гетероарил, выбранный из
где каждая из структур может быть замещена одной или более группами, независимо выбранными из алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, галогеналкила, гетероарила, гетероцикла, оксо, --C(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -C(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -OC(O)Ra, -OC(O)NRcRd, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, и галогена, где каждый из указанных алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, галогеналкила, гетероарила и гетероцикла может быть замещен одной или более группами, независимо выбранными из возможно замещенного алкила, возможно замещенного алкенила, возможно замещенного алкинила, возможно замещенного арила, возможно замещенного циклоалкила, -ОН, оксо, -C(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -C(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, возможно замещенного галогеналкила, возможно замещенного гетероарила и возможно замещенного гетероцикла;
где каждый Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf и Rg независимо выбран из Н, алкила, арила, циклоалкила, галогеналкила, гетероарила и гетероцикла, и где каждый из указанных алкила, арила, циклоалкила, гетероарила и гетероцикла в Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf и Rg может быть замещен одним или более, например, одним или двумя или тремя, заместителями, независимо выбранными из галогена и алкила.
[055] В некоторых вариантах реализации R1 представляет собой 
, который может быть замещен одной или более группами, независимо выбранными из:
- алкила, алкенила и алкинила, где каждая из указанных групп может бытьзамещена группами, независимо выбранными из возможно замещенного алкила, возможно замещенного алкенила, возможно замещенного алкинила, возможно замещенного арила, возможно замещенного циклоалкила, -ОН, оксо, -C(O)Ra, -C(O)ORb, -CN, -C(O)NRcRd, -NRcRd, -NRcC(O)Ra, -NRcS(O)nRe, -NRcS(O)nNRfRg, -NRcC(O)ORb, -NRcC(O)NRdRe, -NO2, -ORb, -S(O)nRe, -S(O)nNRcRd, галогена, возможно замещенного галогеналкила, возможно замещенного гетероарила и возможно замещенного гетероцикла;
C(O)NRcRd;
NRcRd;
-ORb;
-галогена;
-циано;
-NRcS(O)nRe,
где каждый Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf и Rg независимо выбран из Н, алкила, арила, циклоалкила, галогеналкила, гетероарила и гетероцикла, например, каждый Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf и Rg независимо выбран из Н, C1-C6 алкила, фенила, С3-С6 циклоалкила, C1-С3 галогеналкила, гетероарила и гетероцикла, где каждый из указанных алкила, арила, циклоалкила, гетероарила и гетероцикла в Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf и Rg может быть замещен одним или более, например, одним или двумя или тремя, заместителями, независимо выбранными из галогена и алкила.
[056] Также согласно настоящему изобретению предложено по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений 1-184, и/или по меньшей мере одна фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, описанные в настоящей заявке.
[057] Соединения, описанные в настоящей заявке, и/или фармацевтически приемлемые соли указанных соединений могут быть синтезированы из коммерчески доступных исходных веществ при помощи способов, широко известных в области техники, в комбинации с описанием настоящей заявки. Следующие схемы иллюстрируют способы получения некоторых соединений, описанных в настоящей заявке.
Схема I
Схема II
[058] Соединения, полученные таким образом, могут быть далее изменены в периферических положениях с получением требуемых соединений. Превращения в синтетической химии описаны, например, в R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley and Sons (1999); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); и L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) и последующих изданиях.
[059] Перед применением по меньшей мере одно соединение и/или по меньшей мере одна фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, описанные в настоящей заявке, могут быть очищены при помощи колоночной хроматографии, высокоэффективной жидкостной хроматографии, кристаллизации или других подходящих способов.
[060] Также согласно настоящему изобретению предложена композиция, содержащая по меньшей мере одно соединение и/или по меньшей мере одну фармацевтически приемлемую соль указанного соединения, описанные в настоящей заявке, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.
[061] Композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение и/или по меньшей мере одну фармацевтически приемлемую соль указанного соединения, описанные в настоящей заявке, можно вводить различными известными способами, например, перорально, парентерально, при помощи спрея для ингаляций или имплантируемого резервуара. Термин «парентеральный» в настоящем описании включает подкожные, внутрикожные, внутривенные, внутримышечные, внутрисуставные, внутриартериальные, внутрисуставные, интрастернальные, интратекальные, внутриочаговые и внутричерепные способы инъекции или инфузии.
[062] Пероральная композиция может представлять собой любую лекарственную форму, приемлемую для перорального введения, в т.ч., без ограничения, таблетки, капсулы, эмульсии и водные суспензии, дисперсии и растворы. Обычно используемые носители для таблеток включают лактозу и кукурузный крахмал. Также в таблетки обычно добавляют смазывающие вещества, такие как стеарат магния. Полезные разбавители для перорального введения в капсульной форме включают лактозу и высушенный кукурузный крахмал. Когда водные суспензии или эмульсии вводят перорально, активный ингредиент может быть суспендирован или растворен в масляной фазе совместно с эмульгаторами или суспендирующими агентами. При необходимости могут быть добавлены определенные подсластители, ароматизаторы или красители.
[063] Стерильная композиция для инъекций (например, водная или масляная суспензия) может быть получена при помощи способов, известных в области техники, с применением подходящих диспергирующих или смазывающих агентов (таких как, например, Твин 80) и суспендирующих агентов. Стерильный состав для инъекций также может представлять собой стерильный раствор или суспензию для инъекций в нетоксичном разбавителе или растворе, приемлемом для Парентерального введения, например, в виде раствора в 1,3-бутандиоле. В число фармацевтически приемлемых носителей и растворителей, которые можно применять, входят маннитол, вода, растор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. К тому же, в качестве растворителя или питательной взвеси обычно применяют стерильные жирные масла (например, синтетические моно- или диглицериды). Жирные кислоты, такие как масляная кислота и ее глицеридные производные, а также фармацевтически приемлемые масла природного происхождения, такие как оливковое масло или касторовое масло, особенно в полиоксиэтилированных формах, подходят для получения композиций для инъекций. Указанные масляные растворы или суспензии также могут содержать спиртовой разбавитель или диспергатор с длинной цепью, или карбоксиметилцеллюлозу или сходные диспергирующие агенты.
[064] Композиция для ингаляции может быть получена при помощи способов, широко известных в области приготовления фармацевтических составов, в виде растворов в солевом растворе, содержащих бензиловый спирт и другие Подходящие консерванты, стимуляторы абсорбции для увеличения биодоступности, фторуглероды и/или другие солюбилизирующие или Диспергирующие агенты, известные в области техники.
[065] Композиция для местного применения может быть получена в форме масла, крема, лосьона, мази и т.п. Подходящие носители для композиции включают растительные или минеральные масла, медицинский вазелин (белый мягкий парафин), жиры или масла с разветвленной цепью, животные жиры и спирты с высокой молекулярной массой (выше С12). В некоторые вариантах реализации фармацевтически приемлемым растворителем является тот, в котором растворим активный ингредиент. Эмульгаторы, стабилизаторы, смачивающие агенты и антиоксиданты, а также ингредиенты, придающие цвет или запах, при необходимости также могут быть включены в композицию. К тому же, в указанных композициях для местного применения могут быть применены агенты, усиливающие проникновение через кожу. Примеры подобных компонентов могут быть найдены в Патентах США 3,989,816 и 4,444,762.
[066] Кремы могут быть получены из смеси минерального масла, самоэмульгирующегося пчелиного воска и воды, в которую добавляют активный ингредиент, растворенный в небольшом количестве масла, такого как миндальное масло. Примером такого крема является крем, содержащий примерно 40 частей воды, примерно 20 частей пчелиного воска, примерно 40 частей минерального масла и примерно 1 часть миндального масла. Мази могут быть получены путем смешения активного ингредиента в растительном масле, таком как миндальное масло, с теплым мягким парафином и последующего охлаждения смеси. Примером подобной мази является мазь, содержащая примерно 30% масс. миндального масла и примерно 70% масс. мягкого белого парафина.
[067] Фармацевтически приемлемый носитель относится к носителю, который совместим с активными ингредиентами композиции (и в некоторых вариантах реализации способен стабилизировать активные ингредиенты) и не оказывает пагубного воздействия на субъект, которому его вводят. Например, солюбилизирующие агенты, такие как циклодекстрины (которые формируют специфические более растворимые комплексы по меньшей мере с одним соединением и/или по меньшей мере с одной фармацевтически приемлемой ролью указанного соединения, описанными в настоящей заявке), могут быть Использованы в качестве фармацевтических наполнителей для доставки активных ингредиентов. Примеры других носителей включают коллоидный гидроксид кремния, стеарат магния, целлюлозу, лаурилсульфат натрия и пигменты, такие как D&C Yellow #10.
[068] Для первоначальной оценки эффективности ингибирования активности PI3K и/или mTOR по меньшей мере одним соединением и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой солью указанного соединения, описанными в настоящей заявке, могут быть использованы подходящие анализы in vitro. При помощи анализов in vivo могут быть проведены дальнейшие исследования Эффективности указанных по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения, описанных в настоящей заявке, для лечения ракового заболевания. Например, соединения, описанные в настоящей заявке, и/или их фармацевтически приемлемые соли могут быть введены животному (например, модель на мыши), страдающему от ракового заболевания, и может быть проведена оценка их терапевтических эффектов. Положительные результаты в одном или более подобных тестах будут достаточными для пополнения базы научных знаний, и, таким образом, этого будет достаточно для демонстрации практической применимости тестируемых соединений и/или солей. На основании результатов также может быть определен подходящий диапазон доз и подходящий путь введения для животных, например, людей.
[069] Также предложен способ ингибирования активности PI3K и/или mTOR. Способ включает приведение фермента в контакт с по меньшей мере одним соединением и/или одной фармацевтически приемлемой солью указанного соединения, описанными в настоящей заявке, в количестве, эффективном для ингибирования активности PI3K и/или mTOR.
[070] Указанные по меньшей мере одно соединение и/или по меньшей мере одна фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, описанные в настоящей заявке, могут быть применены для достижения благоприятного терапевтического или профилактического эффекта, например, у субъектов, страдающих раковым заболеванием. В настоящем описании термин «раковое заболевание» относится к клеточному нарушению, характеризующемуся неконтролируемой клеточной пролиферацией или нарушением ее регуляции, снижением клеточной дифференциации, неадекватной способностью распространяться в окружающую ткань и/или способностью вызывать новый рост в эктопических областях. Термин «раковое заболевание» включает, без ограничения, солидные опухоли и опухоли крови. Термин «раковое заболевание» включает заболевания кожи, тканей, органов, костей, хрящей, крови и сосудов. Термин «раковое заболевание» также включает первичные и метастатические раковые заболевания.
[071] Неограничивающие примеры солидных опухолей включают рак поджелудочной железы; рак мочевого пузыря; рак толстой кишки; рак молочной Железы, в т.ч. метастатический рак молочной железы; рак предстательной железы, в т.ч. андроген-зависимый и андроген-независимый рак предстательной железы; рак почки, в т.ч., например, метастатическая почечно-клеточная карцинома; гепатоклеточный рак; рак легкого, в т.ч., например, немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), бронхоальвеолярная карцинома (БАК) или аденокарцинома легкого; рак яичников, в т.ч., например, прогрессирующий эпителиальный рак или первичный перитонеальный рак; рак шейки матки; рак желудка; рак пищевода; рак органов головы и шеи, в т.ч., например, плоскоклеточный рак органов головы и шеи; рак кожи, в т.ч., например, злокачественная меланома; нейроэндокринный рак, в т.ч. метастатические нейроэндокринные опухоли; опухоли мозга, в т.ч., например, глиома, анапластическая олигодендроглиома, мультиформная глиобластома взрослых и анапластическая астроцитома взрослых; рак кости; саркома мягких тканей и карцинома щитовидной железы. Например, указанные солидные опухоли включают рак поджелудочной железы; рак мочевого пузыря; рак прямой кишки; рак молочной железы и рак яичников.
[072] Неограничивающие примеры гематологических злокачественных опухолей включают острый миелолейкоз (AML); хронический миелолейкоз (CML), в т.ч. прогрессирующий CML и бластный криз (CML-BP); острый лимфобластный лейкоз (ALL); хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL); болезнь Ходжкина (HD); неходжкинскую лимфому (NHL), в т.ч. фолликулярную лимфому и лимфому из клеток мантийной зоны; В-клеточную лимфому; Т-клеточную лимфому; множественную миелому (ММ); макроглобулинемию Вальденстрема; миелодиспластический синдром (MDS), в т.ч. рефракторную анемию (RA), рефрактерную анемию с кольцевидными сидеробластами (RARS), (рефракторную анемию с избытком бластов (RAEB) и RAEB в трансформации (RAEB-T); а также миелопролиферативные синдромы.
[073] В некоторых вариантах реализации примеры раковых заболеваний, Подвергающихся лечению согласно настоящему изобретению, включают, без Ограничения, рак легкого, рак органов головы и шеи, рак толстой, кишки, рак поджелудочной железы, рак прямой кишки, рак молочной железы, рак яичников, рак предстательной железы, рак желудка, рак почки, рак печени, рак мозга, рак кости и лейкемию.
[074] В некоторых вариантах реализации указанное по меньшей мере одно соединение и/или по меньшей мере одну фармацевтически приемлемую соль указанного соединения, описанные в настоящей заявке, вводят совместно с другим терапевтическим агентом. В некоторых вариантах реализации другой терапевтический агент представляет собой агент, который обычно вводят пациентам, страдающим от заболевания или патологического состояния, подвергающегося лечению. Указанные по меньшей мере одно соединение и/или по меньшей мере одна фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, описанные в настоящей заявке, могут быть введены с другим терапевтическим агентом в одной лекарственной форме или в отдельной лекарственной форме. При введении в отдельной лекарственной форме, введение другого терапевтического агента возможно до, во время или после введения по меньшей мере одного соединения и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения, описанных в настоящей заявке.
[075] В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одно соединение и/или по меньшей мере одну фармацевтически приемлемую соль указанного соединения, описанные в настоящей заявке, вводят совместно с противоопухолевым агентом. В настоящем описании термин «противоопухолевый агент» относится к любому агенту, вводимому субъекту, страдающему раковым заболеванием, с целью лечения указанного заболевания. Неограничивающие примеры противоопухолевых агентов включают: лучевую терапию; иммунотерапию; химиотерапевтические агенты, повреждающие ДНК, и химиотерапевтические агенты, нарушающие репликацию клеток.
[076] Неограничивающие примеры химиотерапевтических агентов, Повреждающих ДНК, включают ингибиторы топоизомеразы I (например, иринотекан, топотекан, камптотецин и их аналоги или метаболиты, а также доксорубицин); ингибиторы топоизомеразы II (например, этопозид, тенипозид и даунорубицин); алкилирующие агенты (например, мелфалан, хлорамбуцил, бусульфан, тиотепа, ифосфамид, кармустин, ломустин, семустин, стрептозоцин, декарбазин, метотрексат, митомицин С и циклофосфамид); ДНК-интеркаляторы (например, цисплатин, оксалиплатин и карбоплатин); ДНК-интеркаляторы и генераторы свободных радикалов, такие как блеомицин; и миметики нуклеозидов (например, 5-фторурацил, капецитибин, гемцитабин, флударабин, цитарабин, меркаптопурин, тиогуанин, пентостатин и гидроксимочевина).
[077] Химиотерапевтические агенты, нарушающие репликацию клеток, включают: паклитаксел, доцетаксел и их аналоги; винкристин, винбластин и их аналоги; талидомид и его аналоги (например, СС-5013 и СС-4047); ингибиторы протеинтирозинкиназы (например, иматиниба мезилат и гефитиниб); ингибиторы протеасом (например, бортезомиб); ингибиторы транскрипционного фактора NF-каппа В, в т.ч. ингибиторы киназы I каппа В; антитела, связывающиеся с белками, которые сверхэкспрессируются при раковых заболеваниях и тем самым осуществляют понижающую регуляцию размножения клеток (например, трастузумаб, ритуксимаб, цетуксимаб и бевацизумаб); а также другие ингибиторы известных белков или ферментов, которые активируются или сверхэкспрессируются при раковых заболеваниях, ингибирование которых приводит к понижающей регуляции размножения клеток.
[078] Приведенные ниже примеры являются исключительно иллюстративными и не должны считаться в какой-либо степени ограничивающими. Авторами были приложены усилия для обеспечения точности в отношении использованных численных показателей (например, количеств, температуры и т.д.), однако следует принимать во внимание некоторые погрешности и отклонения в экспериментах. Если не указано иное, доли представляют собой массовые доли, температура указана в градусах Цельсия, а давление равно или приблизительно равно атмосферному давлению. Все данные МС проверены на приборах agilent 6120 и/или agilent 1100. Спектры 1H ЯМР записаны на ЯМР-спектрометре Varian 400 МГц с применением CDCl3 или ДМСО-d6 в качестве растворителя и тетраметилсилана (ТМС) в качестве внутреннего стандарта. Химические сдвиги (δ) выражены в миллионных долях (м.д.) в сторону слабого поля от внутреннего ТМС, и значения J даны в Гц. Все реагенты, использованные в настоящем описании, за исключением промежуточных соединений, являются коммерчески доступными. Все названия соединений, за исключением названий реагентов, сгенерированы программой Chemdraw 10.
[079] В следующих примерах используются сокращения, приведенные ниже:
Промежуточное соединение 1
2-(5-аминопиридин-2-ил)-2-метилпропаннитрил
[080] К раствору 2-хлор-5-нитропиридина (10 г, 63 ммоль) в ТГФ (150 мл) при комнатной температуре добавляли K2CO3 (17,4 г, 126 ммоль) и трет-бутил 2-цианоацетат (10,7 г, 76 ммоль). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником и перемешивали в течение ночи. После этого отфильтровывали твердое вещество и концентрировали фильтрат с получением промежуточного соединения I-1b (16,6 г), m/z 208 (M+H)+.
[081] Неочищенный продукт трет-бутил 2-циано-2-(5-нитропиридин-2-ил)ацетат (I-1b, 12 г, 47 ммоль) растворяли в 100 мл HCl/EtOH (об./об. 1:5) и перемешивали при 80°С в течение 4 ч. После этого смесь концентрировали, разбавляли H2O и экстрагировали EtOAc (4×40 мл). Комбинированные экстракты концентрировали, и осадок очищали при помощи хроматографии на силикагеле (РЕ:EtOAc = 3:1) с получением 2-(5-нитропиридин-2-ил)ацетонитрила (I-1с) в виде твердого вещества (7,7 г, 42,0% выхода).
[082] К смеси 2-(5-нитропиридин-2-ил)ацетонитрила (I-1с, 8 г, 46 ммоль) и K2CO3 (18 г, 110 ммоль) в CH3CN (200 мл) по каплям добавляли йодметан (7,5 мл, 120 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение ночи. После этого смесь фильтровали, фильтрат концентрировали, и остаток очищали при помощи хроматографии на силикагеле (РЕ:EtOAc = 5:1) с получением 2-метил-2-(5-нитропиридин-2-ил)пропаннитрила (I-1d) (4,2 г, 48% Выхода), m/z 192 (M+H)+.
[083] Смесь 2-метил-2-(5-нитропиридин-2-ил)пропаннитрила (I-1d, 2 г, 10,4 ммоль) и SnCl2·2H2O (9,3 г, 41,6 ммоль) в EtOAc (10 мл) перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение 4 ч. После охлаждения до Комнатной температуры к смеси добавляли водный 2 М NaOH (80 мл) для доведения рН до 8~9, твердое вещество отфильтровывали, и фильтрат экстрагировали этилацетатом (3×40 мл). Комбинированные органические слои высушивали над безводным Na2SO4 и концентрировали с получением 2-(5-аминопиридин-2-ил)-2-метилпропаннитрила (I-1) (1,7 г, 65,3% выхода).
Промежуточное соединение 2
1,1,1-трифтор-N-(2-метокси-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-3-ил)метансульфонамид
[084] Смесь 2-метокси-3-нитро-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил) пиридина (300 мг, 1,1 ммоль) и ренеевского никелевого катализатора (Raney-Ni) (10 мг) в МеОН (10 мл) подвергали действию H2 и перемешивали в течение 2 ч. После фильтрации фильтрат концентрировали с получением соединения, указанного в названии, в виде твердого белого вещества (261 мг). Выход: 95,0%.
[085] К раствору 2-метокси-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-3-амина (100 мг, 0,4 ммоль) и 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридина (115 мг, 0,56 ммоль) в дихлорметане (5 мл) по каплям добавляли ангидрид трифторметансульфоновой кислоты (147 мг, 0,52 ммоль) при -20°С, после чего смесь перемешивали при этой температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли Под вакуумом, а остаток использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки (141 мг). Выход: 92,0%.
Промежуточное соединение 3
6-хлор-3-нитро-1,5-нафтиридин-4-ол
[086] Смесь 6-хлорпиридин-3-амина (5,0 г, 38,8 ммоль) и 5-(метоксиметилен)-2,2-диметил-1,3-диоксан-4,6-диона (7,2 г, 38,8 ммоль) в i-PrOH (60 мл) перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение 2 ч, и растворитель удаляли с получением 5-((6-хлорпиридин-3-иламино)метилен)-2,2-диметил-1,3-диоксан-4,6-диона в виде твердого вещества с выходом 91% (10,0 г), m/z 283 (М+Н)+
[087] К нагретому теплоносителю Dowtherm A (200 мл) при 200°С добавляли 5-((6-хлорпиридин-3-иламино)метилен)-2,2-диметил-1,3-диоксан-4,6-дион (3,5 г, 12,4 ммоль), после чего смесь перемешивали в течение еще 5 мин. После охлаждения до комнатной температуры к смеси добавляли РЕ. Осадок собирали и высушивали под вакуумом с получением 6-хлор-1,5-нафтиридин-4-ола в виде грязно-белого твердого вещества с выходом 42% (0,94 г), m/z 183 (М+Н)+
[088] 6-хлор-1,5-нафтиридин-4-ол (1,45 g, 8 ммоль) добавляли к ледяной конц. H2SO4 (15 мл), после чего медленно добавляли KNO3 (1,62 г, 16 ммоль) при 0°С. Смесь нагревали до 100°С в течение 1 ч, затем ее вливали в ледяную воду. Осадок собирали и высушивали под вакуумом с получением 6-хлор-3-нитро-1,5-нафтиридин-4-ола в виде твердого вещества с выходом 90% (1,97 г).
Промежуточное соединение 4
2,4-дифтор-N-(2-метокси-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-3-ил)бензолсульфонамид
[089] Смесь 5-бром-2-метокси-3-нитропиридина (5 г, 21,5 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолана) (6,6 г, 25,8 ммоль), PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (500 мг) и ацетата калия (6,3 г, 64,5 ммоль) в безводном 1,4-диоксане (200 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч. После этого растворители удаляли. Неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента петролейного эфира: EtOAc = 10:1 с получением 2-метокси-3-нитро-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил) пиридина с выходом 81% (5 г), m/z 281 (M+H)+.
[090] К раствору 2-метокси-3-нитро-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридина (500 мг, 1,79 ммоль) в МеОН (50 мл) добавляли Raney-Ni (50 мг). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере H2 в течение 2 ч. После этого осадок отфильтровывали, а растворитель удаляли с получением 2-метокси-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-3-амина с выходом 89% (400 мг). m/z 251 (M+H)+.
[091] К раствору 2-метокси-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-3-амина (400 мг, 1,6 ммоль) в пиридине (5 мл) медленно добавляли 2,4-дифторбензолсульфонилхлорид (407 мг, 1,9 ммоль), реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, растворитель выпаривали под вакуумом, и осадок обрабатывали солевым раствором (5 мл) и экстрагировали EtOAc (3×10 мл). Комбинированный органический слой выпаривали под вакуумом, и осадок очищали при помощи хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента петролейного эфира: EtOAc = 5:1 с получением требуемого продукта - 2,4-дифтор-N-(2-метокси-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-3-ил)бензолсульфонамида в виде твердого белого вещества с выходом 59% (400 мг). m/z 427 (M+H)+.
Промежуточное соединение 5
8-бром-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалин
[092] К раствору хиноксалин-2-ола (1,5 г, 10,3 ммоль) в НОАс (15 мл) добавляли бром (0,895 мл, 15,5 ммоль), смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч, осадок собирали и промывали этиловым эфиром, и высушивали с получением 7-бромхиноксалин-2-ола в виде твердого вещества с выходом 90% (2 г).
[093] К суспензии 7-бромхиноксалин-2-ола (2 г, 8,88 ммоль) в чистом оксихлориде фосфора (7 мл) добавляли ДМФ (2 капли). Смесь нагревали до 100°С в течение 3 ч, затем ее охлаждали до комнатной температуры. Оксихлорид фосфора удаляли под вакуумом, и осадок растворяли в EtOAc и помещали в ледяную воду при перемешивании. Смесь 3 раза экстрагировали EtOAc, комбинированный органический слой промывали насыщенным раствором NaHCO3. После этого органический слой концентрировали с получением 7-бром-2-хлорхиноксалина в виде твердого вещества с выходом 93% (2 г).
[094] К раствору 7-бром-2-хлорхиноксалина (2 г, 8,2 ммоль) в этаноле (20 мл) добавляли гидразингидрат (85%, 4,5 мл, 32,8 ммоль). Смесь нагревали до 78°С в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры собирали осадок путем фильтрации с получением 7-бром-2-гидразинилхиноксалина в виде твердого белого вещества с выходом 87% (1,7 г).
[095] Раствор 7-бром-2-гидразинилхиноксалина (200 мг, 0,83 ммоль) в Триэтоксиметане (3 мл) нагревали до 100°С в течение 4 ч; после охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли этиловым эфиром, и осадок собирали путем фильтрации и высушивали под вакуумом с получением продукта, указанного в названии, - 8-бром-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалина в виде твердого желтого вещества с выходом 87% (180 мг). m/z 251 (M+H)+.
Промежуточное соединение 6
8-бром-1-циклопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалин
[096] К раствору 7-бром-2-гидразинилхиноксалина (200 мг, 0,83 ммоль) в ДМФ (3 мл) добавляли HATU (380 мг, 1 ммоль), DIPEA (0,205 мл, 1 ммоль) и циклопропанкарбоновую кислоту (71 мг, 0,83 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 5 ч смесь разбавляли EtOAc. Органический слой три раза промывали водой, затем концентрировали с получением N'-(7-бромхиноксалин-2-ил)циклопропанкарбогидразида в виде твердого желтого вещества, которое напрямую использовали на следующей стадии, m/z 309 (М+Н)+.
[097] Неочищенный продукт N'-(7-бромхиноксалин-2-ил)циклопропан карбогидразид растворяли в НОАс (5 мл) и затем нагревали до 100°С в течение ночи. Растворитель удаляли под вакуумом, и остаток промывали водой и высушивали под вакуумом с получением соединения, указанного в названии, - 8-бром-1-циклопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалина в виде твердого желтого вещества с общим выходом 42% (100 мг). m/z 291 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 7
8-бром-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалин-1(2Н)-он
[098] К раствору 7-бром-2-гидразинилхиноксалина (200 мг, 0,83 ммоль) в дихлорметане (5 мл) добавляли триэтиламин (0,175 мл, 1,2 ммоль), после чего по каплям добавляли раствор дифосгена (0,055 мл, 0,46 ммоль) в дихлорметане при 0°С при перемешивании в атмосфере азота. После перемешивания при комнатной температуре в течение 5 ч растворитель удаляли под вакуумом, остаток промывали водой и высушивали под вакуумом с получением соединения, указанного в названии, - 8-бром-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалин-1(2Н)-она в виде твердого желтого вещества с выходом 82% (180 мг). m/z 265 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 7
5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3-(трифторметил)пиридин-2-амин
[099] Оранжевую суспензию 5-бром-3-(трифторметил)пиридин-2-амина (4 г, 16, 25 60 ммоль) 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолана) (5,90 г, 23,24 ммоль), КОАс (4,07 г, 41,5 ммоль) и PdCl2(dppf).CH2Cl2 (0,678 г, 0,830 ммоль) в диоксане (60 мл) нагревали до 110°С в течение 10 ч в атмосфере N2. После концентрирования под вакуумом с удалением растворителя неочищенный продукт очищали при помощи колонки с силикагелем с РЕ/EtOAc в качестве элюента с получением чистого продукта в виде бледно-желтого твердого вещества (4,5 г, выход 94%). МС (m/z): 289 (М+Н)+
Пример 1: Синтез соединений 1-20
Соединение 1
(S)-1-(4-(8-(6-амино-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)-2-гидроксипропан-1-он
[0100] К суспензии 6-хлор-3-нитро-1,5-нафтиридин-4-ола (5 г, 22,1 ммоль) в 15 мл ДМФ добавляли раствор хлорокиси фосфора (2,7 мл, 28,8 ммоль) в безводном ДМФ (10 мл) в течение 3 мин. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, после чего ее выливали на колотый лед. Полученный осадок собирали при помощи фильтрации, промывали H2O и высушивали под вакуумом с получением 2,8-дихлор-7-нитро-1,5-нафтиридина в виде твердого желтого вещества (4 г, выход 74,0%). МС (m/z): 244 (M+H)+.
[0101] Смесь 2,8-дихлор-7-нитро-1,5-нафтиридина (4 г, 16,4 ммоль), трет-бутилового эфира 4-амино-пиперидин-1-карбоновой кислоты (4 г, 19,7 ммоль) и триэтиламина (3,5 мл) в ДМФ (15 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь выливали в воду (250 мл). Осадок собирали при помощи фильтрации, промывали H2O и высушивали под вакуумом с получением трет-бутил 4-(6-хлор-3-нитро-1,5-нафтиридин-4-иламино)пиперидин-1-карбоксилата в виде твердого желтого вещества (6,54 г, выход 97,8%). Неочищенный продукт использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. МС (m/z): 408 (M+H)+.
[0102] К раствору трет-бутил 4-(6-хлор-3-нитро-1,5-нафтиридин-4-иламино)пиперидин-1-карбоксилата (6,43 г, 15,7 ммоль) в EtOAc (250 мл) добавляли SnCl2·2H2O (18 г, 78,8 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После этого для доведения рН до 8 добавляли насыщенный NaHCO3. Твердое вещество отфильтровывали. Фильтрат концентрировали, и неочищенный продукт очищали при помощи колоночной хроматографии с применением EtOAc:РЕ в качестве элюента с получением трет-бутил 4-(3-амино-6-хлор-1,5-нафтиридин-4-иламино)пиперидин-1-карбоксилата в виде твердого желтого вещества с выходом 85,6% (5,1 г). МС (m/z): 378 (М+Н)+.
[0103] К раствору трет-бутил 4-(3-амино-6-хлор-1,5-нафтиридин-4-иламино)пиперидин-1-карбоксилата (2,5 г, 6,6 ммоль) в уксусной кислоте (8 мл) добавляли NaNO2 (460 мг, 6,6 ммоль) при 0°С. После перемешивания смеси при комнатной температуре в течение 2 часов добавляли насыщенный бикарбонат натрия и ледяную воду. Полученную смесь экстрагировали CH2Cl2. Органический слой высушивали над безводным Na2SO4 и концентрировали. Неочищенный продукт очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента EtOAc:РЕ с получение трет-бутил 4-(8-хлор-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата в виде твердого желтого вещества с выходом 73,8% (1,9 г). МС (m/z): 388.8 (М+Н)+.
[0104] Раствор трет-бутил 4-(8-хлор-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата (4 г) в CH2Cl2/МеОН подвергали воздействию 3 мл конц. HCl. Полученный раствор затем концентрировали с получением гидрохлорида 8-хлор-1-(пиперидин-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридина в виде твердого желтого вещества (3,81 г, выход 100%). МС (m/z): 289 (М+Н)+.
[0105] К раствору гидрохлорида 8-хлор-1-(пиперидин-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридина (1 г, 3,08 ммоль) в 10 мл CH2Cl2 добавляли (S)-1-хлор-1-оксопропан-2-илацетат (1,4 г, 9,23 ммоль) и Et3N (2,2 мл); После перемешивания смеси при комнатной температуре в течение 2 ч ее гасили водой (10 мл). Полученную смесь экстрагировали CH2Cl2 (2×20 мл). Комбинированный органический слой высушивали над безводным Na2SO4 и затем концентрировали под вакуумом с получением (S)-1-(4-(8-хлор-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)-1-оксопропан-2-илацетата (1,2 г). МС (m/z): 403 (М+Н)+
[0106] К раствору (S)-1-(4-(8-хлор-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)-1-оксопропан-2-илацетата (1,2 г, 2,97 ммоль) в смеси ТГФ (30 мл) и МеОН (30 мл) по каплям добавляли LiOH (650 мг, 14,9 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После концентрации под вакуумом остаток разбавляли водой, а значение рН доводили до 7 при помощи 2Н HCl. Полученную смесь концентрировали, осадок собирали при помощи фильтрации, промывали водой и высушивали под вакуумом с получением (S)-1-(4-(8-хлор-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)-2-гидроксипропан-1-она в виде твердого желтого вещества. Неочищенный продукт использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. (918 мг, выход 85,4%). МС (m/z): 361 (М+Н)+.
[0107] К раствору (S)-1-(4-(8-хлор-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)-2-гидроксипропан-1-она (150 мг, 0,42 ммоль) в смеси 20 мл диоксана и 2 мл H2O добавляли 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3-(трифторметил)пиридин-2-амин (120 мг, 0,42 ммоль), Pd(dppf)Cl2 (20 мг, 0,02 ммоль) и Na2CO3 (100 мг, 0,84 ммоль). Полученную смесь продували N2 и перемешивали при 100°С в течение ночи, после чего полученную смесь очищали на силикагеле с применением MeOH/H2O в качестве элюента с получением соединения 1 в виде твердого желтого вещества (59,1 мг). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 9,60 (s, 1Н), 9,20 (s, 1Н), 8,67 (s, 1H), 8,64 (d, J=8,8 Гц, 1Н), 8,54 (d, J=8,8 Гц, 1H), 7,09 (s, 2H), 6,23-6,02 (m, 1Н), 5,17-5,01 (m, 1Н), 4,75-4,50 (m, 2H), 4,46-4,27 (m, 1Н), 3,00-2,79 (m, 1Н), 2,39-1,90 (m, 3H), 1,36-1,16 (m, 6H). МС (m/z): 487 (M+H)+.
[0108] Следующие соединения 2-20 были получены согласно методикам, описанным для Соединения 1, с применением соответствующих промежуточных соединений и бороновых кислот или эфиров в подходящих условиях, которые будут очевидны специалисту в области техники.
Пример 2: Синтез соединений 21-29
Соединение 21
(R)-1-(4-(8-(6-амино-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)-2-гидроксипропан-1-он
[0109] К раствору гидрохлорида 8-хлор-1-(пиперидин-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридина (600 мг, 1,85 ммоль) в ДМФ (15 мл) добавляли (R)-2-гидроксипропановую кислоту (540 мг, 1,85 ммоль), HATU (850 мг, 2,21 ммоль) и DIEA (0,8 мл, 3,70 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли еще 3 экв. HATU и 2 экв. DIEA, т.к. согласно показаниям ВЭЖХ-МС реакция не была завершена. Смесь перемешивали в течение еще 30 мин., после чего разбавляли водой. Полученную смесь дважды экстрагировали этилацетатом. Комбинированные органические слои высушивали над Na2SO4 и концентрировали с получением неочищенного Продукта, который затем очищали при помощи хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента EtOAc:РЕ с получением (R)-1-(4-(8-хлор-1Н-[-1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)-2-гидрокиепропан-1-она в виде твердого желтого вещества (136 мг, выход 20,4%). MG, (m/z): 361 (М+Н)+
[0110] Следующая стадия синтеза соединения 21 была сходна с соответствующей стадией синтеза Соединения 1.
[0111] Соединение 21: твердое вещество, 31,0 мг. 1H ЯМР (400 МГц, дмсо) δ 9,59 (s, 1Н), 9,19 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,63 (d, J=8,9 Гц, 1Н), 8,53 (d, J=8,9 Гц, 1Н), 7,07 (s, 2H), 6,09 (m, 1H), 5,02 (m, 1H), 4,74-4,27 (m, 2H), 2,87 (m, 1H), 2,44-1,90 (m, 3H), 1,27-1,21 (m, 4H). MC (m/z): 487 (M+H)+.
[0112] Следующие соединения 22-29 были получены согласно методикам, описанным для Соединения 21, с применением соответствующих промежуточных соединений и бороновых кислот или эфиров в подходящих условиях, которые будут очевидны специалисту в области техники.
Пример 3: Синтез соединений 30-42
Соединение 30
1-(4-(8-(6-амино-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)-2-метилпропан-1-он:
[0113] Смесь 8-хлор-1-(пиперидин-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]мафтиридина (200 мг, 0,69 ммоль), изомасляной кислоты (67 мг, 0,76 ммоль), HATU (315 мг, 0,83 ммоль) и DIEA (133 мг, 1,04 ммоль) в ДМФ (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем добавляли воду (10 мл), осадок собирали и высушивали под вакуумом с получением 1-(4-(8-хлор-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)-2-метилпропан-1-она в виде твердого вещества (200 мг).
[0114] Смесь 1-(4-(8-хлор-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пипери-дин-1-ил)-2-метилпропан-1-она (60 мг, 0,17 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3-(трифторметил)пиридин-2-амина (53 мг, 0,18 ммоль), K2CO3 (70 мг, 0,51 ммоль) и Pd(dppf)Cl2 (6 мг) в диоксане/H2O (3:1, 4 мл) перемешивали и подвергали микроволновому облучению при 160°С в течение 0,5 ч. Растворитель удаляли, а осадок очищали при помощи флэш-хроматографии (МеОН/H2O=20%-80%) с получением 1-(4-(8-(6-амино-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)-2-метилпропан-1-она в виде твердого белого вещества (46 мг). 1H ЯМР (400 МГц, дмсо) δ 9,61 (s, 1H), 9,21 (d, J=2,1 H2, 1H), 8,66 (dd, J=12,5, 5,5 Гц, 2Н), 8,55 (d, J=8,9 Гц, 1Н), 7,10 (s, 2H), 6,17-6,01 (m, 1Н), 4,78-4,59 (m, 1Н), 4,35-4,26 (m, 1Н), 3,40-3,37 (m, 2Н), 3,05-2,97 (m, 1Н), 2,93-2,82 (m, 1Н), 2,64-2,52 (m, 1Н), 2,39-2,21 (m, 1H), 2,16-1,96 (m, 1H), 1,07 (s, 6H). MC (m/z): 485 (M+H)+.
[0115] Следующие соединения 31-42 были получены согласно методикам, описанным для Соединения 30, с применением соответствующих промежуточных соединений и бороновой кислоты или эфира в подходящих условиях, которые будут очевидны специалисту в области техники.
Пример 4: Синтез соединений 43-47
Соединение 43
2-(4-(8-(6-амино-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)-N,N-диметилацетамид
[0116] Смесь 8-хлор-1-(пиперидин-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридина (100 мг, 0,35 ммоль), 2-хлор-N,N-диметилацетамида (46 мг, 0,38 ммоль) и К2СО3 (97 мг, 1,04 ммоль) в ДМФ (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли, а осадок экстрагировали EtOAc (3×10 мл). Комбинированные органические слои высушивали над Na2SO4 и концентрировали с получением неочищенного 2-(4-(8-хлор-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)-N,N-диметилацетамида, который использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.
[0117] Смесь вышеуказанного продукта, 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3-(трифторметил)пиридин-2-амина (109 мг, 0,38 ммоль), К2СО3 (145 мг, 1,05 ммоль) и Pd(dppf)Cl2 (10 мг) в диоксане/H2O (3:1,4 мл) перемешивали и подвергали микроволновому облучению при 160°С в течение 0,5 ч. Растворитель удаляли, а осадок очищали при помощи хроматографии (МеОН/H2O=20%-80%) с получением соединения 43 в виде бледно-желтого твердого вещества (50 мг). 1H ЯМР (400 МГц, дмсо-d6) δ 9,60 (s, 1H), 9,20 (d, J=2,0 Гц, 1H), 8,66 (dd, J=16,5, 5,4 Гц, 2Н), 8,54 (d, J=8,9 Гц, 1H), 7,12 (s, 2H), 5,97-5,77 (m, 1H), 3,40 (s, 2H), 3,29-3,14 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 2,44-2,35 (m, 4H). MC (m/z): 500 (M+H)+.
[0118] Следующие соединения 44-47 были получены согласно методикам, описанным для Соединения 43, с применением соответствующих промежуточных соединений и бороновой кислоты или эфира в подходящих условиях, которые будут очевидны специалисту в области техники:
Пример 5: Синтез Соединения 48
Соединение 48
5-(1-(1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)пиперидин-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридин-8-ил)-3-(трифторметил)пиридин-2-амин
[0119] В атмосфере азота белую суспензию 8-хлор-1-(пиперидин-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридина (130 мг, 0,450 ммоль), 4-(бромметил) тетрагидро-2Н-пирана (97 мг, 0,540 ммоль) и К2СО3 (124 мг, 0,900 ммоль) в, ацетонитриле (15 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли 20 мл EtOAc. Затем смесь фильтровали через воронку Бюхнера, и органическую фазу собирали и концентрировали. Неочищенный продукт использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки (35 мг). МС (m/z): 387 (M+H)+.
[0120] В атмосфере азота оранжевую суспензию 8-хлор-1-(1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)пиперидин-4-ил)-Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с][1,5]нафтиридина (35 мг, 0,090 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3-(трифторметил)пиридин-2-амина (26,1 мг, 0,090 ммоль), Na2CO3 (19,18 мг, 0,181 ммоль) и PdCl2(dppf).CH2Cl2 (3,69 мг, 4,52 мкмоль) в смеси диоксана (20 мл) и N20 (2 мл) перемешивали в течение 10 минут перед нагреванием полученной смеси до 120°С в течение 2 ч. После концентрации под вакуумом полученный осадок очищали при помощи флэш-хроматографии на 12 г силикагеля (РЕ/EtOAc) с получением продукта в виде бледно-желтого порошка (10 мг). 1H ЯМР (400 МГц, дмсо) δ 9,53 (s, 1Н), 9,15 (d, J=2,1, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,61 (d, J=8,9, 1H), 8,51 (d, J=8,9, 1H), 7,07 (s, 2H), 5,99-5,80 (m, 1H), 3,91-3,85 (m, 4H), 3,22-3,08 (m, 4H), 2,41-2,15 (m, 10Н), 1,73-1,58 (m, 2H). МС (m/z): 513 (M+H)+.
Пример 6: Синтез Соединений 49-78
Соединение 49
2-(4-(8-(6-амино-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,3-а]хиноксалин-1-ил)фенилил)-2-метилпропаннитрил
[0121] К раствору 7-бром-2-гидразинилхиноксалина (1,5 г, 0,063 моль) и 4-(2-цианопропан-2-ил)бензойной кислоты (1,1 г, 0,063 моль) в ДМФ (5 мл) добавляли HATU (2,4 г, 0,063 моль) и DIEA (1,2 г, 0,095 моль). После этого реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Раствор разбавляли водой (5 мл), и твердое вещество собирали при помощи фильтра с получением N'-(7-бромхиноксалин-2-ил)-4-(2-цианопропан-2-ил)бензогидразида в виде твердого желтого вещества (2,2 г, выход 85,0%). МС (m/z): 412 (M+H)+.
[0122] Раствор N'-(7-бромхиноксалин-2-ил)-4-(2-цианопропан-2-ил)бензогидразида (2,2 г, 0,054 моль) в 3 мл АсОН перемешивали при 100°С в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли водой (5 мл). Твердое вещество собирали при помощи фильтра и промывали насыщ. NaHCO3 (5 мл) с получением 2-(4-(8-бром-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалин-1-ил)фенил)-2-метилпропаннитрила в виде твердого желтого вещества (1,8 г, выход 85,0%). МС (m/z): 392 (М+Н)+.
[0123] К смеси 2-(4-(8-бром-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалин-1-ил)фенил)-2-метилпропаннитрила (80 мг, 0,21 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3-(трифторметил)пиридин-2-амина (59 мг, 0,21 ммоль) и К2СО3 (87 мг, 0,63 ммоль) в диоксане (3 мл) и H2O (1 мл) добавляли Pd(dppf)Cl2 (3 мг). Реакционную смесь подвергали микроволновому облучению при 150°С в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали и очищали при помощи хроматографии с получением соединения 49 в виде твердого желтого вещества (52 мг). 1H ЯМР (400, МГц, дмсо) δ 9,38 (s, 1Н), 8,26 (s, 1Н), 8,11 (d, J=8,5, 1H), 7,99-7,95 (m, 1H), 7,92 (d, J=8,3, 2H), 7,83 (d, J=8,4, 2H), 7,63 (m, 1H), 7,52 (d, J=1,5, 1H), 6,77 (8, 2H), 1,77 (8, 6H). MC (m/z): 474 (M+H)+.
[0124] Следующие соединения 50-78 были получены согласно методикам, описанным для Соединения 49, с применением соответствующих промежуточных соединений и бороновой кислоты или эфира в подходящих условиях, которые будут очевидны специалисту в области техники.
Пример 7: Синтез соединений 79-87
Соединение 79
(S)-1-(4-(8-(6-амино-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,3-а]хиноксалин-1-ил)пиперидин-1-ил)-2-гидроксипропан-1-он
[0125] Смесь 1-трет-бутил 4-метилпиперидин-1,4-дикарбоксилата (4,84 г, 20 ммоль) и LiOH (2,52 г, 60 ммоль) в ТГФ (90 мл)/МеОН (90 мл)/H2O (30 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем растворители удаляли, и рН осадка доводили до 2 при помощи 2Н HCl. Полученную смесь экстрагировали EtOAc (3×20 мл). Комбинированные органические слои высушивали над Na2SO4 и концентрировали с получением 1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-карбоновой кислоты (4,6 г, выход 100,0%)
[0126] Смесь 7-бром-2-гидразинил (3 г, 12,55 ммоль), 1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-карбоновой кислоты (3,16 г, 13,81 ммоль), EDCI (2,89 г, 15,06 ммоль), HOBt (2,03 г, 15,06 ммоль) и TEA (1,9 г, 18,83 ммоль) в ДМФ (100 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали EtOAc (3×100 мл). Комбинированные органические слои высушивали над Na2SO4 и концентрировали под вакуумом с получением трет-бутил 4-(2-(7-бромхиноксалин-2-ил)гидразинкарбонил)пиперидин-1-карбоксилата в виде бледно-желтого твердого вещества (3,5 г, выход 62%).
[0127] Смесь трет-бутил 4-(2-(7-бромхиноксалин-2-ил)гидразинкарбонил)пиперидин-1-карбоксилата (900 мг, 2,0 ммоль) в АсОН (10 мл) нагревали с обратным холодильником в течение ночи. Затем растворитель удаляли, и осадок очищали при помощи флэш-хроматографии (МеОН/H2O=20%-90%) с получением 8-бром-1-(пиперидин-4-ил)-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалина в виде бледно-желтого твердого вещества (550 мг, выход 83,0%). МС (m/z): 332 (М+Н)+
[0128] Смесь 8-бром-1-(пиперидин-4-ил)-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалина (250 мг, 0,75 ммоль), (S)-2-гидроксипропановой кислоты (75 мг, 0,83 ммоль), HATU (346. мг, 0,90 ммоль) и DIEA (116 мг, 0,90 ммоль) в ДМФ (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. После этого растворители удаляли, и осадок очищали при помощи флэш-хроматографии (МеОН/H2O=20%-90%) с получением (S)-1-(4-(8-бром-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалин-1-ил)пиперидин-1-ил)-2-гидроксипропан-1-она в виде бледно-желтого твердого вещества (200 мг, выход 66,0%). МС (m/z): 404 (М+Н)+
[0129] Смесь (S)-1-(4-(8-бром-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалин-1-ил)пиперидин-1-йл)-2-гидроксипропан-1-она (65 мг, 0,16 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3-(трифторметил)пиридин-2-амина (51 мг, 0,18 ммоль), К2СО3 (67 мг, 0,48 ммоль) и Pd(dppf)Cl2 (5 мг) в диоксане/Н2О (3:1,4 мл) подвергали микроволновому облучению при 150°С в течение 0,5 ч. Т После этого растворители удаляли, и осадок очищали при помощи флэш-хроматографии (МеОН/H2O=20%-80%) с получением соединения 72 в виде твердого желтого вещества (30 мг). 1H ЯМР (400 МГц, дмсо) δ 9,28 (s, 1H), 8,72 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 8,32 (s, 1H), 8,16-8,12 (m, 2H), 8,05 (dd, J=8,5, 1,5 Гц, 1H), 6,82 (s, 2H), 4,91 (dd, J=7,2, 6,5 Гц, 1H), 4,47 (dd, J=17,8, 11,8 Гц, 2H), 4,29 (t, J=10,6 Гц, 1H), 4,15 (t, J=11,2 Гц, 1H), 3,09-2,97 (m, 1H), 2,27 (dd, J=15,6, 14,5 Гц, 2H), 1,97 (dd, J=12,0, 4,5 Гц, 1Н), 1,78 (dd, J=7,1, 5,0 Гц, 1H), 1,25-1,15 (m, 3Н). МС (m/z): 486 (M+H)+.
[0130] Следующие соединения 80-87 были получены согласно методикам, описанным для Соединения 79, с применением соответствующих промежуточных соединений и бороновой кислоты или эфира в подходящих условиях, которые будут очевидны специалисту в области техники:
Пример 8: Синтез Соединений 88-118
Соединение 88
(4-(8-(6-амино-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-1H-имидазо[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)(циклопропил)метанон
[0131] Смесь 8-дихлор-7-нитро-1,5-нафтиридина (3,55 г, 14,55 ммоль) и К2СО3 (6,02 г, 43,65 ммоль) в ДМФ (8 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, и затем вливали в ледяную воду (~20 мл). Осадок собирали, трижды промывали водой и высушивали под вакуумом с получением трет-бутил 4-(6-хлор-3-нитро-1,5-нафтиридин-4-иламино)пиперидин-1-карбоксилата в виде твердого желтого вещества (5,22 г, выход 88%), которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. МС (m/z): 409 (М+Н)+.
[0132] Смесь трет-бутил 4-(6-хлор-3-нитро-1,5-нафтиридин-4-иламино)пиперидин-1-карбоксилата (600 мг, 1,47 ммоль) и SnCl2.H2O (996 мг, 4,41 ммоль) в этилацетате (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, и после этого подщелачивали 5% раствором NaOH. Смесь фильтровали через целитовый фильтр. Фильтрат экстрагировали этилацетатом (3×15 мл). Органические слои комбинировали и промывали солевым раствором (10 мл), высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением трет-бутил 4-(3-амино-6-хлор-1,5-нафтиридин-4-иламино)пиперидин-1-карбоксилата в виде твердого желтого вещества (499 мг, выход 90%), которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. МС (m/z): 378 (M+H)+.
[0133] Смесь трет-бутил 4-(3-амино-6-хлор-1,5-нафтиридин-4-иламино)пиперидин-1-карбоксилата (200 мг, 0,53 ммоль), триэтоксиметана (94 мг, 0,64 ммоль) и PyHCl (6 мг, 0,053 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 3,5 ч. Растворитель удаляли под вакуумом, и осадок добавляли к раствору HCl в МеОН (6Н, 3 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и затем концентрировали под вакуумом. Осадок растворяли в дихлорметане (20 мл). Полученную смесь промывали насыщенным NaHCO3 (10 мл) и солевым раствором (10 мл), высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением 8-хлор-1-(пиперидин-4-ил)-1Н-имидазо[4,5-с][1,5]нафтиридина в виде твердого желтого вещества (110 мг, выход 72%), которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.
[0134] К раствору 8-хлор-1-(пиперидин-4-ил)-1H-имидазо[4,5-с][1,5]нафтиридина (110 мг, 0,382 ммоль) и Et3N (106 мкл, 0,764 ммоль) в ТГФ (15 мл) добавляли циклопропанкарбонилхлорид (38 мкл, 0,420 ммоль) при охлаждении в водяной ванне со льдом. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и затем концентрировали под вакуумом. Осадок растворяли в этилацетате (20 мл). Полученный раствор промывали NaHCO3 (10 мл) и солевым раствором (10 мл), высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением (4-(8-хлор-1H-имидазо[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-yl)пиперидин-1-ил)(циклопропил)метанона в виде твердого желтого вещества (100 мг, выход 73%), которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. МС (m/z): 356 (М+Н)+
[0135] Смесь (4-(8-хлор-1H-имидазо[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-yl)пиперидин-1-ил)(циклопропил)метанона (100 мг, 0,281 ммоль), PdCl2(dppf)2 (12 мг, 0,014 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3-(трифторметил)пирйдин-2-амина (97 мг, 0,337 ммоль) и 2Н раствора К2СО3 (1 мл) в диоксане (4 мл) подвергали микроволновому облучению при 150°С в течение 30 мин. Растворитель удаляли, а осадок очищали при помощи флэш-хроматографии (МеОН/H2O 0% ~100%) с получением соединения 88 в виде желтоватого твердого соединения (70 мг). 1H ЯМР (400 МГц, дмсо) δ 9,20 (s, 1Н), 9,13 (d, J=1,9, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,59 (d, J=2,0, 1H), 8,49 (d, J=8,9, 1H), 8,32 (d, J=8,9, 1H), 6,99 (s, 2Н), 5,98-5,92 (m, 1H), 4,66 (s, 1H), 4,58 (s, 1H), 3,25 (s, 2Н), 2,35 (s, 2Н), 2,09-2,01 (m, 2Н), 2,01-1,90 (m, 1H), 0,80-0,71 (m, 4H). МС (m/z): 482 (M+H)+.
[0136] Следующие соединения 89-118 были получены согласно1 методикам, описанным для Соединения 88, с применением соответствующих промежуточных соединений и бороновой кислоты или эфира в подходящих условиях, которые будут очевидны специалисту в области техники.
Пример 9: Синтез Соединений 119-146
Соединение 119
(4-(8-(6-амино-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-2-метил-1Н-имидазо[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)(циклопропил)метанон
[0137] Смесь трет-бутил 4-(3-амино-6-хлор-1,5-нафтиридин-4-иламино)пиперидин-1-карбоксилата (200 мг, 0,53 ммоль) в уксусной кислоте (3 мл) перемешивали при 100°С в течение ночи. Растворитель удаляли под вакуумом, и осадок добавляли к раствору HCl в МеОН (6Н, 3 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и затем концентрировали под вакуумом. Осадок растворяли в дихлорметане (20 мл). Полученный раствор промывали насыщенным NaHCO3 (10 мл) и солевым раствором (10 мл), высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением неочищенного 8-хлор-2-метил-1-(пиперидин-4-ил)-1H-имидазо[4,5-с][1,5]нафтиридина в виде твердого желтого вещества (110 мг, выход 68%), которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.
[0138] К раствору 8-хлор-2-метил-1-(пиперидин-4-ил)-1Н-имидазо[4,5-с][1,5]нафтиридина (110 мг, 0,364 ммоль) и Et3N (101 мкл, 0,728 ммоль) в ТГФ (15 мл) добавляли циклопропанкарбонилхлорид (36 мкл, 0,401 ммоль) во время охлаждения в водяной ванне со льдом. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и затем концентрировали под вакуумом. Осадок растворяли в смеси CH2Cl (10 мл) и H2O (10 мл). Полученный раствор затем экстрагировали ЕА (2×10 мл). Комбинированные органические слои концентрировали с получением неочищенного (4-(8-хлор-2-метил-1H-имидазо[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)(циклопропил)метанона в виде твердого желтого вещества (105 мг, выход 80%), которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. МС (m/z): 370 (М+Н)+.
[0139] Смесь неочищенного (4-(8-хлор-2-метил-1Н-имидазо[4,5-с][1,5]нафтиридин-1-ил)пиперидин-1-ил)(циклопропил)метанона (105 мг, 0,284 ммоль), PdCl2(dppf)2 (12 мг, 0,014 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3-(трифторметил)пиридин-2-амина (98 мг, 0,340 ммоль) и 2Н раствора К2СО3 (1 мл) в диоксане (4 мл) подвергали микроволновому облучению при 150°С в течение 30 мин. Растворитель удаляли, а остаток очищали при помощи флэш-хроматографии (МеОН/H2O 0% ~100%) %) с получением соединения 119 в виде желтоватого твердого соединения (57 мг). 1H ЯМР (400 МГц, дмсо) δ 9,11 (d, J=6,8, 2Н), 8,58 (s, 1H), 8,48 (d, J=8,8, 1H), 8,29 (d, J=8,3, 1H), 6,97 (s, 2Н), 4,67-4,58 (m, 2Н), 4,06 (s, 1H), 2,75 (m, 5H), 2,11-2,04 (m, 4H), 0,81 (s, 1H), 0,71 (m, 4H). МС (m/z): 496 (М+Н)+
[0140] Следующие соединения 120-146 были получены согласно методикам, Описанным для Соединения 119, с применением соответствующих промежуточных соединений и бороновой кислоты или эфира в подходящих условиях, которые будут очевидны специалисту в области техники.
Пример 10: Синтез Соединений 147-178
Соединение 147
2,4-дифтор-N-(2-метокси-5-(1-метил-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалин-8-ил)пиридин-3-ил)бензолсульфонамид
[0141] Смесь 7-бром-2-гидразинилхиноксалина (200 мг, 0,84 ммоль) и АсОН (5 мл) нагревали с обратным холодильником в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры смесь обрабатывали водой (10 мл); твердое вещество собирали с помощью фильтра и высушивали под вакуумом с получением 8-бром-1-метил-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалина в виде твердого серого вещества (200 мг, выход: 91,0%).
[0142] Смесь 8-бром-1-метил-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалина (60 мг, 0,23 ммоль), 2,4-дифтор-N-(2-метокси-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-3-ил)бензолсульфонамид (107 мг, 0,25 ммоль), К2СО3 (95 мг, 0,69 ммоль) и Pd(dppf)Cl2 (6 мг) в диоксане/H2O (3: 1,4 мл) подвергали микроволновому облучению при 160°С в течение 0,5 ч. Затем растворитель удаляли, и осадок очищали при помощи флэш-хроматографии (МеОН/Н2О=20%-80%) с получением соединения 147 в виде твердого белого вещества (60 мг). 1H ЯМР (400 МГц, дмсо) δ 10,44 (s, 1H), 9,26 (s, 1H), 8,47 (d, J=1,7 Гц, 1Н), 8,34 (d, J=1,5 Гц, 1Н), 8,13 (t, J=10,3 Гц, 1H), 8,02 (d, J=2,1 Гц, 1H), 7,92 (dd, J=8,4, 1,5 Гц, 1H), 7,76 (dd, J=14,9, 8,5 Гц, 1H), 7,51 (dd, J=14,2, 5,4 Гц, 1H), 7,18 (t, J=7,5 Гц, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,17 (s, 3H). MC (m/z): 483 (M+H)+.
[0143] Следующие соединения 148-178 были получены согласно методикам, описанным для Соединения 147, с применением соответствующих промежуточных соединений и бороновой кислоты или эфира в подходящих условиях, которые будут очевидны специалисту в области техники.
Пример 11: Синтез Соединений 179-182
Соединение 179
N-(2-метокси-5-(1-метил-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалин-8-ил)пиридин-3-ил)-4-метилбензолсульфонамид
[0144] Смесь 7-бром-2-гидразинилхиноксалина (1 г, 4,18 ммоль) в уксусной кислоте (10 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 18 ч. Половину уксусной кислоты удаляли под вакуумом, а осадок выливали в ледяную воду. Осадок собирали при помощи фильтра, промывали водой и высушивали под вакуумом с получением неочищенного 8-бром-1-метил-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалина в виде темно-красного твердого вещества (1 г, выход 90%), которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. МС (m/z): 263 (М+Н)+.
[0145] Смесь неочищенного 8-бром-1-метил-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалина (809 мг, 3,07 ммоль), PdCl2(dppf)2 (132,6 мг, 0,153 ммоль), 2-метокси-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-3-амина (1 г, 4,3 ммоль) и К2СО3 (1,7 г, 12,28 ммоль) в ДМФ (40 мл) и воде (15 мл) перемешивали при 100°С в течение ночи. Половину растворителя удаляли. После охлаждения до комнатной Температуры полученную смесь выливали в ледяную воду. Осадок собирали, трижды промывали водой и высушивали под вакуумом с получением 2-метокси-5-(1-метил-[1,2,4]триазоло[4,3-а]хиноксалин-8-ил)пиридин-3-амина в виде твердого серого вещества (730 мг, выход 77%), которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. МС (m/z):307 (М+Н)+.
[0146] К смеси неочищенного 2-метокси-5-(1-метил-[1,2,4]триазо ло[4,3-а]хиноксалин-8-ил)пиридин-3-амина (50 мг, 0,163 ммоль) в пиридине (2 мл) добавляли 4-метилбензол-1-сульфонилхлорид (31,3 мг, 0,164 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, и затем нагревали при 50°С в течение 5 ч. Растворитель удаляли, и осадок очищали при помощи ПТСХ с получением соединения 179 в виде твердого серого вещества (22 мг). 1H ЯМР (400 МГц, дмсо) δ 10,00 (s, 1Н), 9,27 (s, 1H), 8,44 (d, J=2,3, 1H), 8,32 (d, J=1,8, 1H), 8,15 (d, J=8,4, 1H), 7,98 (d, J=2,3, 1H), 7,89 (dd, J=8,4, 1,8, 1H), 7,68 (dd, J=,8,4, 1,8, 2H), 7,35 (d, J=8,0, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,17 (s, 3H), 2,33 (s, 3H). МС (m/z):461 (М+Н)+
[0147] Следующие соединения 180-182 были получены согласно методикам, описанным для Соединения 179, с применением соответствующих промежуточных соединений и бороновой кислоты или эфира в подходящих условиях, которые будут очевидны специалисту в области техники.
Пример 12: Синтез Соединений 183 и 184
Соединение 183
2-(4-(8-(6-амино-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-1Н-имидазо[4,5-с]циннолин-1-ил)фенил)-2-метилпропаннитрил
[0148] К белой суспензии 1-(2-аминофенил)этанона (25 г, 185 ммоль) и Et3N (33,4 мл, 240 ммоль) в ДХМ при 0°С по каплям добавляли AcCl (15,70 мл, 222 ммоль) в 25 мл ДХМ. Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После завершения реакции по данным ЖХ-МС реакционную смесь охлаждали до 0°С и затем гасили H2O (100 мл). Изолировали органическую фазу; водный слой экстрагировали ДХМ. Органические фазы комбинировали и промывали H2O и солевым раствором. Полученную органическую фазу высушивали над безводным MgSO4, фильтровали и концентировали досуха с получением неочищенного N-(2-ацетилфенил)ацетамида, который использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки (30 г, выход 92%). МС (m/z): 136 (M+H)+.
[0149] В атмосфере N2 бледно-желтую суспензию неочищенного N-(2-ацетилфенил)ацетамида (28 г, 158 ммоль) в АсОН (300 мл) перемешивали в течение 5 мин, и спустя 1 ч при комнатной температуре добавляли Br2 (12,95 мл, 253 ммоль). Затем полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 75 мин. После завершения реакции по данным ЖХ-МС реакционную смесь гасили H2O (200 мл). Смесь фильтровали через воронку Бюхнера, и собирали твердое вещество в виде N-(2-ацетил-4-бромфенил)ацетамида (35 г, выход 86%). МС (m/z): 216 (М+Н)+.
[0150] В атмосфере N2 смесь N-(2-ацетил-4-бромфенил)ацетамида (35 г, 137 ммоль) и HCl (100 мл, 600 ммоль) в ТГФ (400 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 1 ч. После концентрации под вакуумом с целью удаления растворителя смесь обрабатывали EtOAc (100 мл). Водный слой концентрировали с тем, чтобы удалить ТГФ, и при комнатной температуре добавляли 6Н HCl (100 мл, 600 ммоль). После охлаждения до 0°С к полученной смеси по каплям добавляли NaNO2 (9,43 г, 137 ммоль) в 20 мл Н2О. Реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. После этого реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение еще 6 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры. Собирали твердое вещество, высушивали его под вакуумом с получением требуемого продукта в виде твердого белого вещества. Неочищенный продукт напрямую использовали на следующее/стадии без дальнейшей очистки. (19,5 г, выход 63,4%) МС (m/z): 227 (М+Н)+.
[0151] В атмосфере N2 оранжевый раствор 6-бромциннолин-4-ола (18,5 г, 82 ммоль) в HNO3 (90 мл, 82 ммоль) охлаждали до 0°С и добавляли H2SO4 (30 мл). Полученную смесь затем нагревали до 60°С в течение 3 ч. После завершения реакции по данным ЖХ-МС реакционную смесь охлаждали до 0°С и затем гасили H2O (20 мл). Смесь разбавляли EtOAc (25 мл). Согласно общим методикам обработки, неочищенный осадок вносили в силикагель и элюировали РЕ/EtOAc с получением 6-бром-3-нитроциннолин-4-ола в виде бледно-желтого твердого вещества (13 г, выход 58,6%).
[0152] В атмосфере N2 коричневый раствор 6-бром-3-нитроциннолин-4-ола (2 г, 7,41 ммоль) в ДМФ (10 мл) охлаждали до 0°С, и по каплям добавляли POCl3 (0,897 мл, 9,63 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. После завершения реакции по данным ЖХ-МС реакционную смесь охлаждали до 0°С и затем гасили H2O (50 мл). Смесь фильтровали через воронку Бюхнера и собирали осадок. Неочищенный 6-бром-4-хлор-3-нитроциннолин использовали наследующей стадии без дальнейшей очистки (1,75 г, выход 82%). МС (m/z): 290 (М+Н)+.
[0153] Желтую суспензию 6-бром-4-хлор-3-нитроциннолина (1,75 г, 6,07 ммоль), 2-(4-аминофенил)-2-метилпропаннитрила (1,069 г, 6,67 ммоль) и К2СО3 (1,677 г, 12,13 ммоль) в MeCN (2 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 5 мин. Обработку осуществляли согласно стандартным процедурам обработки, и неочищенное вещество очищали на силикагеле с использованием в качестве элюента РЕ/EtOAc с получением 2-(4-(6-бром-3-нитроциннолин-4-иламино) фенил)-2-метилпропаннитрила в виде твердого желтого вещества (2,5 г, выход 100%). МС (m/z): 414 (M+H)+.
[0154] В атмосфере N2 оранжевый раствор 2-(4-(6-бром-3-нитр6циннолин-4-иламино)фенил)-2-метилпропаннитрила (2,5 г, 6,06 ммоль) и SnCl2.2H2O (5,21 г, 24,26 ммоль) в EtOAc (50 мл) нагревали при 45°С в течение 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры значение рН смеси доводили до 8 при помощи насыщенного Na2CO3. Смесь фильтровали через воронку Бюхнера, и фильтрат собирали и концентрировали с получением 2-(4-(3-амино-6-бромциннолин-4-иламино)фенил)-2-метилпропаннитрила (1,6 г, выход 69%). МС (m/z): 384 (М+Н)+
[0155] В атмосфере N2 коричневый раствор 2-(4-(3-амино-6-бромциннолин-4-иламино)фенил)-2-метил-пропаннитрила (250 мг, 0,654 ммоль) в HCO2H (3 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили H2O и затем концентрировали с тем, чтобы удалить растворитель. Неочищенный продукт напрямую использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки (250 мг, выход 97%). МС (m/z): 394 (М+Н)+.
[0156] В атмосфере N2 оранжевую суспензию 2-(4-(8-бром-1Н-имидазо[4,5-с]циннолин-1-ил)фенил)-2-метилпропаннитрила (100 мг, 0,255 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3-(трифторметил)пиридин-2-амина (95 мг, 0,331 ммоль), Na2CO3 (54,0 мг, 0,510 ммоль) и PdCl2(dppf).CH2Cl2 (10,41 мг, 0,013 ммоль) в диоксане (20 мл) и H2O (2 мл) перемешивали в течение 10 минут при комнатной температуре. Полученную смесь затем нагревали при 120°С в течение 2 ч. Смесь концентрировали под вакуумом, и осадок очищали при помощи хроматографии с получением соединения 183 в виде бледно-желтого порошка (50 мг). 1H ЯМР (400 МГц, дмсо) δ 8,87 (s, 1Н), 8,63 (d, J=8,9, 1H), 8,48 (d, J=2,0, 1H), 8,22 (dd, J=9,0, 1,9, 1H), 7,95 (d, J=8,6, 2H), 7,88 (d, J=8,6, 2H), 7,76 (d, J=2,1, 1H), 7,52 (d, J=1,8, 1H), 6,84 (s, 2H), 1,78 (s, 6H). МС (m/z): 474 (M+H)+.
[0157] Следующее соединение 184 было получено согласно методикам, описанным для Соединения 183, с применением соответствующих промежуточных соединений и бороновой кислоты или эфира в подходящих условиях, которые будут очевидны специалисту в области техники.
Пример 13
Анализ АДФ PI3Ka с использованием метода Transcreener
[0158] В данного анализа была использована флуоресцентная поляризация. Конечные условия для анализа киназы были следующими: 10 мкМ АТФ, 0,2 нг/мкл PI3Kα-киназы, 30 мкмоль/л липидного субстрата и буфера для анализа (50 ммоль/л HEPES (рН 7,5), 100 ммоль/л NaCl, 1 ммоль/л EGTA, 3 ммоль/л MgCl2, 1 ммоль/л ДТТ и 0,03% CHAPS и 2% ДМСО).
[0159] 5 мкл тестируемых соединений в 10% ДМСО и 10 мкл 0,5 нг/мкл киназы Р13Кα-киназы (Invitrogen, PV4788) в буфере для анализа помещали в 96-луночный планшет (Greiner, Cat. 675076), после чего начинали реакцию путем добавления 10 мкл 75 мкмоль/л PIP2 (PS Lipid Substrate Invitorgen, PV5100) и 25 мкмоль/л смеси АТФ. После инкубации смеси в течение 60 минут при комнатной температуре добавляли 25 мкл реагента из набора для определения киназы методом transcreener - «ADP Detection Mix» - (Bellbrook Labs), после чего реакция продолжалась в течение еще 1,5 ч. В конце реакции планшеты анализировали при помощи ридера Tecan Infinite F500 при возбуждении 610 нм и эмиссии 670 нм.
[0160] Стандартную кривую для АДФ получали параллельным путем, замещая соединение и PI3Kα-киназу ДМСО и буфером для анализа соответственно. При этом стандартном анализе кривой вместо фиксированной концентрации АТФ используют различные концентрации АДФ, 0-10 мкМ, и АТФ, 10-0 мкМ (АТФ+АДФ равны 10 мкМ). Другие условия такие же, как описанные выше. Стандартную кривую составляли при помощи программного обеспечения Origin 8.0. Ингибирование тестируемого соединения при выработке АДФ вычисляли на основании концентрации АДФ на стандартной кривой. Значение 1С50 вычисляли при помощи программного обеспечения XLfit 2.0.
[0161] Результаты
Вышеуказанные соединения 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 28, 29, 30, 31, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 87, 88, 89, 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 142, 143, 144, 145, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184 ингибировали рецептор киназы PI3Kα со значением IC50<100 нМ.
Пример 14
Анализ P-Akt с использованием платформы Acumen
[0162] Соединения тестировали с использованием анализа p-Akt на основе клеток на платформе Acumen. Линию клеток рака предстательной железы человека РС3 (АТСС) культурировали в среде F-12 с 10% фетальной бычьей сывороткой. Для анализа p-Akt на платформе Acumen, клетки РС3 высевали при клеточной плотности 5000 клеток/90 мкл в Поли-D-лизиновый 96-луночный планшет (BD, 356692). После инкубации в течение 24 часов добавляли различные концентрации тестируемых соединений (10 мкл), и клетки инкубировали в течение еще 2 часов. Добавляли 100 мкл 4% предварительно нагретого параформальдегида, и клетки фиксировали в течение 45 минут при комнатной температуре. После удаления параформальдегида добавляли 100 мкл 0,1% Triton Х-100, и клетки инкубировали в течение еще 30 минут при комнатной температуре. Клетки дважды промывали 160 мкл PBS, после чего добавляли 100 мкл блокирующего буфера (1% БСФ в PBS), и клетки далее инкубировали в Течение еще 2-3 часов. Клетки снова промывали 160 мкл PBS, обрабатывали 30 мкл Ser473-p-Akt (Cell signaling, CAT: 4060), разбавленного в 0,1% % БСА в концентрации 1:250, и инкубировали при 4°С в течение ночи. Затем клетки дважды промывали 160 мкл PBS. Добавляли 35 мкл иммуноглобулина козы против кролика Alexa Fluor 488 (Invitrogen, A11034) в буфере с разбавлением 1:1000 (0,1% БСА в PBS), и реакционную смесь инкубировали в темноте в течение 1,5 часов. Смесь дважды промывали 160 мкл PBS, после чего в каждую лунку добавляли 35 мкл 1,5 мкМ пропидиум иодида (Sigma, P4170), и реакционный планшет инкубировали при 37°С, 5% CO2 в течение 30 минут. Наконец, планшет помещали в платформу Acumen еХ3 (ТТР LabTech) и сканировали при соответствующих настройках.
[0163] Ингибирование тестируемого соединения вычисляли на основании соотношения клеток, обработанных и не обработанных соединением. Значение IC50 вычисляли при помощи программного обеспечения XLfit 2.0.
Каждое соединение согласно настоящему изобретению, проиллюстрированное на отдельном примере, ингибировало рецептор PI3Kα со значением IC50<1,0 мкМ.
Пример 15
Анализ mTOR TR-FRET
[0164] Соединения тестировали с использованием анализа LanthaScreen TR-FRET. Киназную реакцию проводили в 384-луночном черном планшете (Corning, Cat. 3676). Конечные условия для киназного анализа были таковы: 10 мкмоль/л АТФ, 0,2 нг/мкл киназы mTOR, 0,4 мкмоль/л субстрата GFP-4EBP1 и буфера для анализа (50 ммоль/л HEPES, рН 7,5, 0,01% Tween 20, 1 ммоль/л EGTA, 10 ммоль/л MnCl2, 2 ммоль/л DTT и 1% ДМСО).
[0165] В каждую лунку добавляли 2,5 мкл тестируемых соединений в 4% ДМСО и 2,5 мкл 0,8 нг/мкл киназы mTOR (Invitrogen, PV4753), разбавленных в буфере для анализа. Начало реакции инициировали путем добавления 5 мкл смеси 0,8 мкмоль/л субстрата GFP-4EBP1 (Invitorgen, PV4759) и 20 мкмоль/л смесей АТФ. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут. Добавляли 10 мкл 20 ммоль/л EDTA и 4 нмоль/л антитела Tb-anti-p4EBP1 [pThr46] (Invitrogen, PV4755), разбавленных в разбавляющем буфере TR-FRET, и инкубировали в течение еще 1 часа. Затем планшет анализировали при помощи ридера BioTek, Synergy2 при возбуждении 340 нм и эмиссии 490 нм и 528 нм.
[0166] Ингибирование тестируемого соединения вычисляли на основании Соотношения 528 нм/490 нм. Значение IC50 тестового соединения вычисляли при помощи программного обеспечения XLfit 2.0.
[0167] Результаты: Вышеуказанные соединения 1, 6, 7, 9, 10, 12, 14, 16, 17, 21, 25, 26, 30, 33, 35, 42, 43, 44, 45, 46, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 63, 66, 72, 75, 88, 96, 98, 102, 103, 105, 106, 107, 119, 120, 121, 122, 123, 129, 131, 147, 148, 149, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 165, 166, 178, 180, 181 ингибировали mTOR со значением IC50<100 нМ.
Пример 16
Анализ P-S6 с использованием платформы Acumen
[0168] Соединения тестировали с использованием анализа P-S6 на основе клеток на платформе Acumen. Линию клеток рака предстательной железы человека РС3 (АТСС) культурировали в среде F-12 с 10% фетальной бычьей сывороткой. Для анализа p-S6 на платформе Acumen, клетки РС3 высевали при клеточной плотности 5000 клеток/90 мкл в Поли-О-лизиновый 96-луночный планшет (BD, 356692). После инкубации в течение 24 часов добавляли 10 мкл различных концентраций тестируемых соединений, и клетки инкубировали в течение 2 часов, после чего добавляли 100 мкл 4% предварительно нагретого параформальдегида. Клетки фиксировали в течение 45 минут при комнатной температуре. После удаления раствора параформальдегида добавляли 100 мкл 0,1% Triton X-100, и клетки инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем клетки дважды промывали 160 мкл PBS, после чего добавляли 100 мкл блокирующего буфера (1% БСФ в PBS), и далее инкубировали клетки в течение еще 2-3 часов. Клетки снова промывали 160 мкл PBS, обрабатывали 30 мкл антитела p-S6 (Cell signaling, CAT: 4858), разбавленного в 0,1% БСА в концентрации 1:250, и инкубировали при 4°С в течение ночи. Затем клетки дважды промывали 160 мкл PBS. Добавляли 35 мкл иммуноглобулина козы против кролика Alexa Fluor 488 (Invitrogen, А11034) в буфере с разбавлением 1:1000 (0,1% БСА в PBS), и реакционную смесь инкубировали в темноте в течение 1,5 часов. Смесь дважды промывали 160 мкл PBS, после чего в каждую лунку добавляли 35 мкл 1,5 мкМ пропидиум иодида (Sigma, P4170), и реакционный планшет инкубировали при 37°С, 5% CO2 в течение 30 минут. Наконец, планшет помещали в платформу Acumen еХ3 (ТТР LabTech) и бканировали при соответствующих настройках.
[0169] Ингибирование тестируемого соединения вычисляли на основании соотношения клеток, обработанных и не обработанных соединением. Значение IC50 вычисляли при помощи программного обеспечения XLfit 2.0. Каждое соединение согласно настоящему изобретению, проиллюстрированное в примерах, ингибировало mTOR со значением IC50<10,0 мкМ.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| О-АМИНОГЕТЕРОАРИЛАЛКИНИЛСОДЕРЖАЩЕЕ СОЕДИНЕНИЕ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2018 |
|
RU2797694C2 |
| МОДУЛЯТОРЫ ИНТЕГРИРОВАННОГО СИГНАЛЬНОГО ПУТИ СТРЕССА | 2017 |
|
RU2769327C2 |
| ИНГИБИТОРЫ РЕПЛИКАЦИИ ВИРУСА ГРИППА, СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ | 2016 |
|
RU2737190C2 |
| ИНГИБИТОРЫ TYK2 И ПУТИ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2813233C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ АМИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОФТАЛЬМОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И РАССТРОЙСТВ | 2008 |
|
RU2536040C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРИМИДИНА | 2002 |
|
RU2320658C2 |
| СОЕДИНЕНИЕ ИЗОИНДОЛИН, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2019 |
|
RU2813232C2 |
| ИНГИБИТОРЫ АКТИВНОСТИ ПРОТЕИНТИРОЗИНКИНАЗЫ | 2009 |
|
RU2533827C2 |
| МОДУЛЯТОРЫ КАЛЬПАИНА И ИХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ | 2017 |
|
RU2773288C2 |
| ТРИЦИКЛИЧЕСКИЕ КОНДЕНСИРОВАННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРИДИН-2-ОНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ BRD4 | 2016 |
|
RU2734959C2 |
Изобретение относится к области органической химии, а именно к новым гетероциклическим соединениям формулы (1) и/или к их фармацевтически приемлемым солям, где А1 представляет СН; А4 и А5 независимо представляют собой СR2 или N; А2 и А3 совместно с кольцом В представляют собой 5-членный гетероарил или гетероцикл, причем указанный 5-членный гетероарил или гетероцикл выбран из 
где t представляет собой 1 или 2; и
R3 независимо выбран из Н, С1-С6 алкила, С6-арила, С3-С6-членного циклоалкила, C(O)NRcRd, -ORb, гетероарила, представляющего собой пиридин, и гетероцикла, представляющего собой пиперидин и тетрагидропиран; и каждый из вышеуказанных алкила, арила, циклоалкила, гетероарила и гетероцикла может быть замещен одной группой, независимо выбранной из С1-С6 алкила, возможно замещенного одним заместителем, выбранным из -CONMe2, С3-членного циклоалкила, -CN, -ОМе, -пиридина, тетрагидропирана, -СО-морфолина, -СО-пирролидина, (3-метил)оксетана; -ОН; -C(O)Ra; -CN; -C(O)NRcRd; -NRcRd; -ORb; -S(O)nRe; галогена; и замещенного одной группой -СОМе гетероцикла, представляющего собой пиперидин; при условии, что когда А4 представляет собой CR2, А2 и А3 совместно с кольцом В выбраны из структуры (3), (5) или (6); 
представляет собой одинарную связь или двойную связь; R1 представляет собой гетероарил, представляющий собой 6-членное или 9-10-членное ароматическое моно- или бициклическое кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, выбранных из азота, кислорода и серы, возможно замещенный одной или двумя группами, независимо выбранными из С1алкила, С2алкинила, -NRcRd, -NRcS(O)nRe, -ORb, галогена, галогеналкила; R2 независимо выбран из Н; каждый Ra, Rb, Rc, Rd, и Re независимо выбран из Н; С1-С4алкила, возможно замещенного одним заместителем, выбранным из -ОН, -ОМе, -CN, -NH2, -NMe2, С3-циклоалкила; С2-С3алкенила; С3алкинила; С6арила, возможно замещенного одним или двумя заместителями, выбранными из фтора или метильной группы; С3-членного циклоалкила, возможно замещенного одним заместителем, выбранным из -ОН и -CN; галогеналкила; гетероарила, представляющего собой пиридин; и замещенного одной метильной группой гетероцикла, представляющего собой пиперидин, или Rc и Rd совместно с атомом (атомами), к которым они присоединены, образуют 5-6-членное гетероциклическое кольцо, представляющее собой пирролидин или морфолин; и в каждом случае n независимо равен 2. Также изобретение относится к конкретным соединениям, фармацевтической композиции на основе заявленных соединений, способу ингибирования активности PI3K и/или mTOR и применению заявленных соединений. Технический результат: получены новые соединения, полезные для ингибирования активности PI3K и/или mTOR. 5 н. и 10 з.п. ф-лы, 16 пр.
1. Соединение формулы 1:
и/или по меньшей мере одна фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, где
А1 представляет СН;
А4 и А5 независимо представляют собой СR2 или N;
А2 и А3 совместно с кольцом В представляют собой 5-членный гетероарил или гетероцикл, причем указанный 5-членный гетероарил или гетероцикл выбран из
где
t представляет собой 1 или 2; и
R3 независимо выбран из Н, С1-С6 алкила, С6-арила, С3-С6-членного циклоалкила, C(O)NRcRd, -ORb, гетероарила, представляющего собой пиридин, и гетероцикла, представляющего собой пиперидин и тетрагидропиран;
и каждый из вышеуказанных алкила, арила, циклоалкила, гетероарила и гетероцикла может быть замещен одной группой, независимо выбранной из С1-С6 алкила, возможно замещенного одним заместителем, выбранным из -CONMe2, С3-членного циклоалкила, -CN, -ОМе, -пиридина, тетрагидропирана, -СО-морфолина, -СО-пирролидина, (3-метил)оксетана; -ОН; -C(O)Ra; -CN; -C(O)NRcRd; -NRcRd; -ORb; -S(O)nRe; галогена; и замещенного одной группой -СОМе гетероцикла, представляющего собой пиперидин;
при условии, что когда А4 представляет собой CR2, А2 и А3 совместно с кольцом В выбраны из структуры (3), (5) или (6);
представляет собой одинарную связь или двойную связь;
R1 представляет собой гетероарил, представляющий собой 6-членное или 9-10-членное ароматическое моно- или бициклическое кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, выбранных из азота, кислорода и серы, возможно замещенный одной или двумя группами, независимо выбранными из С1алкила, С2алкинила, -NRcRd, -NRcS(O)nRe, -ORb, галогена, галогеналкила;
R2 независимо выбран из Н;
каждый Ra, Rb, Rc, Rd, и Re независимо выбран из Н;
С1-С4алкила, возможно замещенного одним заместителем, выбранным из -ОН, -ОМе, -CN, -NH2, -NMe2, С3-циклоалкила;
С2-С3алкенила;
С3алкинила;
С6арила, возможно замещенного одним или двумя заместителями, выбранными из фтора или метильной группы;
С3-членного циклоалкила, возможно замещенного одним заместителем, выбранным из -ОН и -CN;
галогеналкила;
гетероарила, представляющего собой пиридин; и
замещенного одной метильной группой гетероцикла, представляющего собой пиперидин,
или Rc и Rd совместно с атомом (атомами), к которым они присоединены, образуют 5-6-членное гетероциклическое кольцо, представляющее собой пирролидин или морфолин; и
в каждом случае n независимо равен 2.
2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что указанный R3 независимо выбран из Н, С1-С6 алкила, С6-арила, С3-С6-членного циклоалкила, C(O)NRcRd, -ORb, гетероарила, представляющего собой пиридин, и гетероцикла, представляющего собой пиперидин и тетрагидропиран;
и каждый из вышеуказанных алкила, арила, циклоалкила, гетероарила и гетероцикла может быть замещен одной группой, независимо выбранной из C1-C6 алкила, возможно замещенного одним заместителем, выбранным из -CONMe2, С3-членного циклоалкила, -CN, -ОМе, -пиридина, тетрагидропирана, -СО-морфолина, -СО-пирролидина, (3-метил)оксетана; -ОН; -C(O)Ra; -CN; -C(O)NRcRd; -NRcRd; -ORb; -S(O)nRe; галогена; и замещенного одной группой -СОМе гетероцикла, представляющего собой пиперидин.
3. Соединение по любому из пп.1-2, отличающееся тем, что А5 представляет собой N или СН.
4. Соединение по любому из пп.1-2, отличающееся тем, что А5 представляет собой СН.
5. Соединение по любому из пп.1-2, отличающееся тем, что А4 представляет собой СН.
6. Соединение по любому из пп.1-2, отличающееся тем, что А2 и А3 совместно с кольцом В представляют собой
7. Соединение по любому из пп.1-2, отличающееся тем, что А2 и А3 совместно с кольцом В выбраны из
8. Соединение по любому из пп.1-2, отличающееся тем, что А4 представляет собой N.
9. Соединение по п.8, отличающееся тем, что А2 и А3 совместно с кольцом В представляют собой 
.
10. Соединение по п.8, отличающееся тем, что А2 и А3 совместно с кольцом В выбраны из 
11. Соединение по любому из пп.1-2, 9-10, отличающееся тем, что R1 представляет собой гетероарил, представляющий собой 6-членное или 9-10-членное ароматическое моно- или бициклическое кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, выбранных из азота, кислорода и серы, возможно замещенный одной или двумя группами, независимо выбранными из С1алкила, С2алкинила, -NRcRd, -NRcS(O)nRe, -ORb, галогена, галогеналкила.
12. Соединение, выбранное из группы, включающей
13. Фармацевтическая композиция для ингибирования активности PI3K и/или mTOR, содержащая по меньшей мере одно соединение по любому из пп.1-12 и/или по меньшей мере одну фармацевтически приемлемую соль указанного соединения и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.
14. Способ ингибирования активности PI3K и/или mTOR, включающий приведение фермента в контакт с эффективным количеством по меньшей мере одного соединения по любому из пп.1-12 и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения.
15. Применение по меньшей мере одного соединения по любому из пп.1-12 и/или по меньшей мере одной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения для получения лекарственного средства для ингибирования активности PI3K и/или mTOR.
| Приспособление для суммирования отрезков прямых линий | 1923 |
|
SU2010A1 |
| US 20100120763 A1, 13.05.2010 | |||
| US 20100120762 A1, 13.05.2010 | |||
| Колосоуборка | 1923 |
|
SU2009A1 |
| Способ получения производных /1,2,4/ триазол/4,3-а/хиноксалин-4-амина или их солей | 1983 |
|
SU1246895A3 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ [1,2,4] ТРИАЗОЛО [4,3-А]ХИНОКСАЛИНОНА ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫЕ СОЛИ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ РЕЦЕПТОРОВ АМРА | 1995 |
|
RU2149162C1 |
