СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНКСИОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2014 года по МПК A61K31/4184 A61K31/38 A61K31/192 A61P25/22 

Предлагаемое изобретение относится к медицине и фармакологии, и может быть использовано в качестве средства, обладающего анксиолитической активностью.

Известны замещенные 2-[2-(3-оксоморфолин-4-ил)этилтио]бензимидазолы, обладающие анксиолитической активностью [патент RU 2373202, 2009 г.].

Наиболее близким аналогом изобретения являются производные 2-меркаптобензимидазола, обладающие селективной анксиолитической активностью [патент RU 2061686, 1996 г.].

Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, в том числе обладающих психотропным действием с выраженным противотревожным или анксиолитическим свойством.

Технический результат - получение средства выраженного анксиолитического действия.

Сущность изобретения: применение калиевой соли 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-тио]уксусной кислоты (вещество I) формулы

в качестве средства, обладающего анксиолитическим действием.

Известно, что калиевая соль 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-тио]уксусной кислоты (№ госрегистрации 9393889) обладает большей иммуномодулирующей активностью, нежели левамизол при меньшей в 46,5 раз токсичности. Из доступных источников не следует, что калиевая соль 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-тио]уксусной кислоты (вещество I) обладает противотревожным или анксиолитическим действием. Данное соединение синтезируют кипячением 1-(1,1-диоксотиетанил-3)-2-хлорбензимидазола с тиогликолевой кислотой в этаноле в щелочной среде получают 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-тио] уксусную кислоту, переходящую при взаимодействии с едким кали в этаноле в целевую соль [патент RU 2115652, 1998 г.].

Для исследования анксиолитического действия применяют различные виды конфликтного поведения-столкновения положительной (например, питьевой) и отрицательной (боязнь наказания) мотиваций, а также боязнь различных естественных факторов (например, высоты). Так как тревога - явление сложное, имеющее множество измерений, при ее изучении следует применять несколько методов, позволяющих оценить действие веществ на разные компоненты тревоги. Наиболее популярными способами изучения противотревожного действия веществ являются методы конфликтной ситуации и приподнятого крестообразного лабиринта [Т.А. Воронина, С.Б. Середенин. Методические указания по изучению транквилизирующего (анксиолитического) действия фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под общей редакцией члена-корреспондента РАМН, профессора Р.У. Хабриева. Издание второе, переработанное и дополненное. - Москва, 2005]. Методы исследования проводили на беспородных белых крысах-самцах массой 200-250 г.

Анксиолитическое действие калиевой соли 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-тио]уксусной кислоты (вещество I) изучали с помощью метода конфликтной ситуации и приподнятого крестообразного лабиринта, наиболее адекватных поставленной задаче.

Конфликтная ситуация создавалась столкновением (конфликтом) у крыс питьевой мотивации и электроболевого раздражения [Liljiequist S., Engel J.A. The effects of GABA and benzodiazepine receptor antagonists on the anticonflict actions of diazepam or ethanol. // Pharmacology, Biochemistry & Behavior. - 1984. - Vol.21. - P.521-525; Vogel J., Beer В., Clody T. A simple and reliable conflict proceedure for testing antianxiety agents. // Psychopharmacologia. - 1971. - Vol.21. - P.1-7]. В исследовании использовалась разработанная в лаборатории психофармакологии НИИ фармакологии РАМН многоканальная установка конфликтной ситуации [Молодавкин Г.М., Воронина Т.А. Многоканальная установка для поиска транквилизаторов и изучения механизмов их действия по методу конфликтной ситуации // Эксперим. и клин фармакол. - 1995. - Т.58, №2. - С.54-56]. Прибор состоит из трех частей: экспериментальной камеры, электронного блока и счетного устройства. Экспериментальная камера размерами 275×275×450 мм изготовлена из органического стекла. Она установлена на стандартный электродный пол, выполненный из прутков нержавеющей стали диаметром 4 мм с расстоянием между ними 8-10 мм. К боковой стене каждой камеры прикреплена поилка - стеклянный сосуд с соском, изготовленным из нержавеющей стали. Сосок входил на 2 см в камеру на высоте 5 см от пола. В отличие от многих установок, в нашем приборе поилка установлена в общем объеме камеры, а не в затемненном отсеке. Это сделано по той причине, что животные, находясь в новой обстановке, в силу инстинкта стараются спрятаться в темном отсеке и могут находить поилку не в результате целенаправленного поиска для удовлетворения мотивации, а случайно. Электродный пол и сосок поилки присоединяли к электронному блоку.

Электронный блок содержит стабилизаторы тока (по одному на каждый канал, что обеспечивает возможность независимой регулировки тока в них), формирователи выходных сигналов для счетного устройства и формирователи задержки подачи наказующего тока на поилки в день эксперимента. Он обеспечивает регистрацию ненаказуемых взятий воды во время выработки навыка взятий воды (тренировки, без подачи тока на поилки), а также наказующий ток и сигналы наказуемых взятий воды во время эксперимента.

Счетное устройство обеспечивает регистрацию ненаказуемых взятий воды во время тренировки и наказуемых взятий воды во время эксперимента. В ряде опытов регистрацию показателей производили с помощью персонального компьютера Pentium III (550 Мгц). Для этого было изготовлено специальное устройство, преобразующее выходные сигналы электронного блока конфликтной ситуации в стандартные импульсы, пригодные для ввода в последовательный порт компьютера, и программа (на языке Basic) записи событий и временных интервалов в дисковые файлы (совместно с В.Д. Солопахо). В дальнейшем данные, накопленные в этих файлах, подвергали статистической обработке с помощью статистических пакетов "Statgraf" и "Statistica" для Windows.

Опыт проводили в течение 3 дней. В первый день животных полностью лишали питья. На следующий день, т.е. после 24-часовой депривации, проводили выработку навыка взятия воды из поилки. Для этого животных на 5 мин помещали в экспериментальные камеры. Животные обследовали камеру, через некоторое время находили поилку и начинали пить. В этот день на поилку и пол камеры подавали слабый ток (0,05 мА), не ощущаемый крысами, поэтому взятия воды были ненаказуемыми и их число характеризовало выраженность питьевой мотивации. На третий день животных снова на 10 мин помещали в экспериментальные камеры, но на этот раз через 10 сек после первого взятия воды на соски поилок и электродный пол камер подавали постоянный ток силой 0,25 мА, так что каждое взятие воды становилось наказуемым и для удовлетворения жажды крысам надо было преодолеть страх, развившийся в результате наказания. В эксперименте сила наказующего тока превосходила тот же показатель во время тренировки в 5 раз, что и создавало условия сильной тревоги. Мерой выраженности эффекта считали достоверное увеличение числа наказуемых взятий воды из поилок животными в опытной группе по сравнению с контрольными.

При исследованиях с использованием метода конфликтной ситуации у крыс развивается чрезвычайно сильное стрессорное состояние, вызванное питьевой депривацией и ударами электрическим током. По этой причине в поведенческих исследованиях используют также более щадящий метод приподнятого крестообразного лабиринта, в котором оценивается боязнь крысами высоты и открытого пространства [Pellow S., File S.E. Anxiolytic and anxiogenic drugs effects on exploratory activity in an elevated plus-maze. A novel test of anxiety in the rat. // Pharmacology, Biochemistry & Behavior. - 1986. - Vol.24. - P.525-529].

Метод приподнятого крестообразного лабиринта

Работу проводили на беспородных белых крысах массой 200-250 г. Лабиринт представляет собой 2 рукава шириной 15 см и длиной 1 м, скрепленные под прямым углом в середине. 2 противоположных рукава лабиринта имеют стенки размерами 40×40 см (они являются закрытыми), а два других стенок не имеют (они считаются открытыми). Все устройство устанавливается на высоте 1 м над уровнем пола.

Крыс помещали в центр лабиринта и в течение 3 минут визуально оценивали число заходов в открытые и закрытые рукава лабиринта, время пребывания в них и число свешиваний в открытой части лабиринта. Для регистрации оцениваемых показателей использовали программу, написанную на языке QBASIC 4.5, которая позволяла связать поведенческие акты, осуществляемые крысой, с нажатиями на определенные клавиши клавиатуры компьютера. Программа подсчитывала показатели для каждого животного, строила суммарную таблицу с вычислением средних и их стандартных отклонений и записывала ее на диск в виде файла [Г.М. Молодавкин, Т.А. Воронина. Компьютерные программы для регистрации результатов поведенческих экспериментов. Экспериментальная и клиническая фармакология, 2005, т.68, №6, с.55-58].

Вещество I вводили внутрибрюшинно в дозах 2,5; 5 и 10 мг/кг за 30 минут до опыта. В качестве препаратов сравнения использовали феназепам в дозе 0,5 мг/кг и афобазол в дозе 5 мг/кг.

При статистической обработке вычисляли средние величины и стандартные отклонения при Р<0,05. Достоверность различий между группами определяли с помощью дисперсионного анализа [Боровиков В.П. Statistical искусство анализа данных на компьютере. Для профессионалов. - СПб.: Питер, 2001. - 656 с; В. Дюк, Обработка данных на ПК в примерах. Питер, Санкт-Петербург (1997)].

Результаты исследования изучения влияния вещества I на поведение крыс в конфликтной ситуации. Как известно, крысы контрольной группы в день опыта устремляются к поилкам, но, получив удар током, отказываются от попыток удовлетворить жажду. При этом они осуществляют 80±66,88 (без введения дистиллированной воды) и 124,2±66,2 (после введения дистиллированной воды) наказуемых взятий воды (таблица 1). Феназепам в дозе 0,5 мг/кг оказывал анксиолитическое действие, которое проявлялось в увеличении числа наказуемых взятий воды до 382,9±36,96 (различие с контролем достоверно при Р<0,05). Эффект феназепама сопровождается миорелаксантным действием, заметным, но неярковыраженным в этой дозе. Афобазол в дозе 5 мг/кг также оказывал анксиолитическое действие, увеличивая число наказуемых взятий воды до 264,5±51,58 (различие с контролем также достоверно). Афобазол, в отличие от феназепама, не оказывал миорелаксантного действия. Феназепам по выраженности антиконфликтного эффекта превосходил афобазол на 45%. Вещество I в дозе 2,5 мг/кг оказывает действие, сходное действию феназепама и афобазола, то есть также увеличивает число наказуемых взятий воды до 263,9±71,32 (таблица 1, различие с контролем достоверно). В других дозах (5 и 10 мг/кг) вещество оказывает менее выраженное действие. В отличие от феназепама вещество I не оказывает миорелаксантного действия.

Установлено, что крысы контрольной группы, будучи помещенными в центр приподнятого крестообразного лабиринта, пробыв некоторое время в нем, уходят в закрытые рукава лабиринта и проводят большую часть времени там. Изредка животные ненадолго выходят в открытые рукава и совершают там небольшое количество свешиваний. Такой тип поведения свидетельствует о высокой тревожности. Анксиолитики (и феназепам, и афобазол) увеличивают число выходов в открытые рукава лабиринта, время пребывания в них и число свешиваний (таблица 2). Это указывает на снижение тревожности крыс. Вещество I в дозе 5 мг/кг оказывает сходные эффекты: увеличивает число выходов в открытые рукава лабиринта, время пребывания в них, увеличивает число свешиваний (таблица 2). Следовательно, в этой дозе вещество I также снижает тревожность крыс (оказывает анксиолитическое действие). При введении в других дозах (2,5 и 10 мг/кг) вещество I оказывает менее выраженное действие.

Таким образом, в результате проведенной работы с помощью методов конфликтной ситуации и приподнятого крестообразного лабиринта было установлено, что вещество I оказывает противотревожное (анксиолитическое) действие, сравнимое с эффектами эталонных анксиолитиков феназепама и афобазола, по обоим тестам.

Анксиолитическое действие вещества I не сопровождается характерным для бензодиазепиновых анксиолитиков (феназепам) миорелаксантным действием. Можно предположить, что вещество I имеет высокий потенциал в качестве анксиолитика.

СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНКСИОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Таблица 1 Влияние вещества I на число наказуемых взятий воды в конфликтной ситуации у крыс Группа Доза, мг/кг Число наказуемых взятий воды Контроль Абс. Чист 80,0±66,88 Контроль Дист. В 124,2±66,2 Феназепам 0,5 382,9±36,96 * Афобазол 5,0 264,5±51,58 * Вещество I 2,5 263,9±71,32 * Вещество I 5,0 174,4±54,95 Вещество I 10,0 88,8±31,65 Примечание: * - различие с контрольной группой достоверно при Р<0,05.

Предложено применение калиевой соли 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бенз-имидазолил-2-тио]уксусной кислоты (известной как иммуномодулятор) в качестве средства, обладающего анксиолитическим действием. Показано, что действие заявленного средства на разные компоненты тревоги сравнимо с эффектом эталонных анксиолитиков феназепама и афобазола, при этом оно не сопровождается характерным для бензодиазепиновых анксиолитиков (феназепам) миорелаксантным действием. 2 табл.

Применение калиевой соли 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-тио] уксусной кислоты формулы

в качестве средства, обладающего анксиолитическим действием.