КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ МОДУЛЯЦИИ КИНАЗНОГО КАСКАДА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2015 года по МПК C07D413/12 A61K31/5377 A61P35/00 A61P3/04 

РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

По этой заявке испрашивается приоритет заявки на патент США 12/468,694, поданной 19 мая 2009. Все содержание которой включено в настоящее описание путем ссылки.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к некоторым полиморфам 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилатной соли (KX2-391^.MSA) и к композициям и способам синтеза в основном чистого 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (KX2-391) и его мезилатной и бис-гидрохлоридной соли. Изобретение также относится к способам применения таких композиций.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Трансдукция сигнала представляет собой любой процесс, с помощью которого клетка преобразует один вид сигнала или стимула в другой. Процессы, называемые трансдукцией сигнала, часто включают последовательность биохимических реакций в клетке, которые выполняются ферментами и связаны через вторые медиаторы. Во многих процессах трансдукции, увеличивающееся число ферментов и других молекул задействуется в событиях, которые проистекают из начального стимула. В таких случаях цепь стадий упоминается как "сигнальный каскад" или "путь второго медиатора" и часто приводит к тому, что малый стимул вызывает обширный ответ. Один класс молекул, участвующих в трансдукции сигналов, составляют семейство киназных ферментов. Наибольшая группа киназ представляет собой протеинкиназы, которые действуют на определенные белки и модифицируют их активность. Они используются экстенсивно для передачи сигналов и контроля сложных процессов в клетках.

Протеинкиназы составляют большой класс ферментов, которые катализируют перенос γ-фосфата от АТФ до гидроксильной группы на боковой цепи Ser/Thr или Tyr в белках и пептидах и тесно участвуют в контроле различных важных функций клетки, возможно, в особенности, следующих: трансдукция сигналов, дифференцировка и пролиферация. По оценке, в организме человека имеются приблизительно 2000 различных протеинкиназ, и хотя каждая из них фосфорилирует специфические белковые/пептидные субстраты, они все связывают один и тот же второй субстрат, АТФ, в высококонсервативном кармане. Протеинфосфатазы катализируют перенос фосфата в противоположном направлении.

Тирозинкиназа представляет собой фермент, который может переносить фосфатную группу от АТФ до остатка тирозина в белке. Фосфорилирование белков киназами представляет собой важный механизм трансдукции сигналов для регуляции ферментативной активности. Тирозинкиназы делятся на две группы; те, которые являются эндоплазматическими белками и трансмембранными рецептор-связанными киназами. У человека имеется 32 эндоплазматические тирозинкиназы и 58 рецептор-связанных протеин-тирозинкиназ. Гормоны и факторы роста, которые действуют на связанные с тирозин-киназами рецепторы на поверхности клеток, являются вообще ускоряющими рост и функционируюи, стимулируя деление клеток (например, инсулин, инсулиноподобный фактор роста 1, эпидермальный фактор роста).

Ингибиторы различных известных протеинкиназ или протеинфосфатаз имеют различные терапевтические применения. Одним многообещающим потенциальным терапевтическим применением для ингибиторов протеинкиназы или протеинфосфатазы является применение в качестве противораковых средств. Приблизительно 50% известных онкогенных продуктов составляют протеин-тирозин киназы (PTK), и было показано, что их киназная активность приводит к превращению клеток.

PTK могут быть классифицированы в две категории, PTK мембранного рецептора (например, PTK рецептора фактора роста) и нерецепторные PTK (например, семейство Src протоонкогенных продуктов). Существуют по меньшей мере 9 членов семейства Src нерецепторных PTK, причем pp60^c-src (далее упоминаемый просто как "Src") является прототипом PTK семейства, в котором каталитические домены из приблизительно 300 аминокислот являются высоко консервативными. О гиперактивации Src сообщалось во множестве случаев человеческого рака, включая рак толстой кишки, молочной железы, легкого, мочевого пузыря и кожи, а также в случаях рака желудка, волосатоклеточного лейкоза и нейробластомы. Сигнальный путь гиперактивированной пролиферации клеток проходит от трансмембранных рецепторов (например, EGFR и p185HER2/Neu) к внутреннему пространству клеток, по-видимому, также через Src. Следовательно, недавно было предположено, что Src является универсальной мишенью для терапии рака, потому что гиперактивация (без мутации) участвует в инициации, прогрессии и метастазе опухолей для многих важных человеческих типов опухолей.

Поскольку киназы участвуют в регуляции различных нормальных клеточных путей трансдукции сигналов (например, роста, дифференцировки, выживания, адгезии, миграции клеток и т.д.), считается, что киназы играют роль в различных заболеваниях и нарушениях. Таким образом, модуляция сигнальных киназных каскадов может быть важным способом для лечения или профилактики таких заболеваний и нарушений.

Соединение KX2-391 является биарильным соединением для модуляции киназного каскада и раскрыто в патенте США 7300931; заяке на патент США 11/480,174; и заявке PCT/2008/004847. Дигидрохлоридные и мезилатные соли KX2-391 описаны в заявках на патенты 12/005,792 и 12/154,056, соответственно, включая способы их синтеза. Вышеуказанные патенты и заявки не раскрывают определенный полиморф KX2-391^.MSA с желаемыми свойствами, относящимися к стабильности, гигроскопичности, растворимости и кристалличности.

KX2-391 и его соли могут быть использованы в способах модуляции киназного каскада и могут быть использованы для лечения или профилактики нарушений и/или заболеваний, связанных с пролиферацией клеток, таких как потеря слуха, остеопороз, диабет, заболевание глаз, инсульт, атеросклероз, нейропатическая боль и гепатит B. Таким образом, существует неотложная потребность в обнаружении формы этого соединения с желаемыми физическими свойствами.

РЕЗЮМЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к полиморфу мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующемуся структурой дифракции рентгеновских лучей, в основном подобной представленной на Фигуре 7. Настоящее изобретение относится к полиморфу мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующемуся структурой дифракции рентгеновских лучей, включающей пики в приблизительно 22,7, 19,7, 18,9 и 16,3 градусов 2θ.

Настоящее изобретение относится к полиморфу мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующемуся термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164, измеренное прибором Mettler 822^e DSC. В одном аспекте, изобретение относится к полиморфу мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующемуся структурой дифракции рентгеновских лучей, в основном подобной представленной на Фигуре 7, и дополнительно характеризующемуся термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164, измеренное прибором Mettler 822^e DSC. В одном аспекте, изобретение относится к полиморфу мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующемуся структурой дифракции рентгеновских лучей, включающей пики в приблизительно 22,7, 19,7, 18,9 и 16,3 градусов 2θ, и дополнительно характеризующемуся термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164, измеренное прибором Mettler 822^e DSC.

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A) и фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель.

Настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики заболевания или состояния у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту фармацевтической композиции по изобретению, причем указанное заболевание или состояние выбрано из рака, потери слуха, остеопороза, ожирения, диабета, глазных заболеваний, инсульта, атеросклероза, нейропатической боли, гепатита B, аутоиммунного заболевания.

Настоящее изобретение относится к способу получения полиморфа мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), включающему стадию добавления метансульфоновой кислоты к 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамиду в ацетоне. В одном аспекте, способ включает количество указанного ацетона, составляющее более чем 64 объема.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

Фигура 1 представляет собой график, указывающий DSC KX2-391^.2HCl лот 02BP111F.

Фигура 2 представляет собой график, указывающий DSC KX2-391^.2HCl лот 02BP111E.

Фигура 3 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391^.2HCl лот 02BP111E.

Фигура 4 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391^.2HCl лот 02BP111F.

Фигура 5 представляет собой спектр 1H ЯМР KX2-391 (лот 02BP096K).

Фигура 6 представляет собой спектр 1H ЯМР KX2-391^.MSA, Форма A.

Фигура 7 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391^.MSA, Форма А (лот GJP-S10(1)).

Фигура 8 представляет собой график, указывающий DSC KX2-391^.MSA, Форма A.

Фигура 9 представляет собой график, указывающий TGA KX2-391^.MSA, Форма A.

Фигура 10 представляет собой график, указывающий Анализ Сорбции влаги KX2-391^.MSA, Форма A.

Фигура 11 представляет собой хроматограмму ВЭЖХ KX2-391^.MSA, Форма A.

Фигура 12 представляет собой спектр ATR-FTIR KX2-391^.MSA, Форма A.

Фигура 13 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391^.2HCl [лот 02BP111G].

Фигура 14 представляет собой график, указывающий DSC KX2-391^.2HCl [лот 02BP111G].

Фигура 15 представляет собой график, указывающий TGA KX2-391^.2HCl [лот 02BP111G].

Фигура 16 представляет собой спектр 1H ЯМР KX2-391^.2HCl [лот 02BP111G].

Фигура 17 представляет собой график, указывающий Анализ Сорбции влаги KX2-391^.2HCl [лот 02BP111G].

Фигура 18 представляет собой хроматограммы ВЭЖХ KX2-391^.2HCl [лот 02BP111G].

Фигура 19 представляет собой график, показывающий гравиметрическую кривую влажности KX2,391^.2HCl.

Фигура 20 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391^.p-TSA, Форма A.

Фигура 21 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391^.p-TSA, Форма B.

Фигура 22 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391^.фумарат.

Фигура 23 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391^.малеат.

Фигура 24 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391 бис-малеат.

Фигура 25 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391 бис-фумарат, Форма A.

Фигура 26 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391 бис-фумарат, Форма B.

Фигура 27 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391 бис-фосфат, Форма A.

Фигура 28 представляет собой график, указывающий XRPD KX2-391 бис-п-тозилат.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Детали одного или более вариантов осуществления изобретения сформулированы в ниже сопутствующем описании. Хотя любые способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным здесь, могут использоваться в практике или тестировании настоящего изобретения, будут описаны предпочтительные способы и материалы. Другие признаки, объекты и преимущества изобретения будут очевидны из описания. В описании, формы единственного числа также включают множественное число, если из контекста явно не следует иное. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют то же самое значение, как обычно понимается специалистом в области техники, к которой относится это изобретение. В случае конфликта трактовок следует руководствоваться настоящим описанием. Все публикации, заявки на патент, патенты и другие источники, упомянутые здесь, полностью включены путем ссылки.

Получение KX2-391 и его солей

Синтез 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина показан на схеме ниже:

4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолин (5) синтезировали в 3 стадии. Промежуточное соединение 2 синтезировали, используя реакцию сочетания простого эфира, например, используя синтез эфира по Williamson. Образование эфира между 4-(2-хлорэтил)морфолином (1) и 4-бромфенолом осуществляли в присутствии карбоната калия и DMF, получая 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолин (2). Строго сухие состояния не являются существенными для этой реакции, и основная промывка гидроксидом натрия использовалась, чтобы удалить оставшийся 4-бромфенол. В другом аспекте изобретения, промежуточное соединение 2 синтезировали, используя любую реакцию формирования простого эфира. Промежуточное соединение 2 синтезировали, исходя из соединения 1, содержащего любую удаляемую группу. Например, химик может исходить из соединений общей формулы: , в которой удаляемая группа “LG” включает, но не ограничена ими, галоген, тозилат, мезилат, трифлат и т.д.

Соединение 5 получали, используя реакцию Suzuki. Формирование арил бората, 6-фторпиридин-3-ил-3-бороновой кислоты (4), осуществляли, образуя анион арила, используя н-BuLi, с последующим гашением in situ с использованием триизопропилборат (Li, et al., J. Org. Chem. 2002, 67, 5394-5397). Полученную 6-фторпиридин-3-ил-3-бороновую кислоту (4) подвергали реакции сочетания с 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолином (2) в растворе DME и водного раствора карбоната натрия, используя тетракис(трифенилфосфин)палладий, получая 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолин (5), который очищали, используя хроматографию на силикагеле. Химику известно, что для получения соединения 5 можно использовать реакцию сочетания с другим переходным металлом.

Синтез 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид дигидрохлорида показан ниже:

2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид дигидрохлорид (KX2-391.HCl) синтезировали в четыре линейные стадии. 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолин фторид (5) вытесняли анионом ацетонитрила, который образуют, используя коммерчески доступный NaHMDS. Ацетонитрил медленно добавляли к охлажденной смеси соединения 5 и основания, чтобы образовать 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрил (6). В другом аспекте изобретения, промежуточное соединение 5 может иметь удаляемую группу, отличную от фтора. Таким образом, можно получить соединения общей формулы:

где LG включает другие удаляемые группы, известные химику.

Катализируемый кислотой метанолиз 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила (6) осуществляли, используя смесь концентрированной серной кислоты и олеума. Использование олеума удаляло остаточную воду из реакционной смеси и уменьшало количество образующегося побочного продукта карбоновой кислоты. Реакционную смесь гасили, добавляя реакционную смесь к раствору насыщенного бикарбоната натрия и дихлорметана, поддерживая температуру ниже 20°C. Любая примесь карбоновой кислоты может быть легко удалена путем обработки водой. В другом аспекте изобретения для алкоголиза нитрила соединения 6 с получением соединения 7 специалистом используются условия, катализируемые другой кислотой.

Полученный 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетат (7) и бензил амин подвергали сочетанию в анизоле при высокой температуре, получая 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид (KX2-391). Раствор HCl, полученный добавлением ацетил хлорида к абсолютному этанолу добавляли к KX2-391, чтобы получить бис-HCl соль, 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид дигидрохлорид, (KX2-ди-HCl).

Синтез мезилатной соли KX2-391 (KX2-391·MSA) изображен на схеме ниже:

2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилат (KX2-391^.MSA) синтезировали в четыре линейные стадии, исходя из соединения 5. Первые 3 стадии осуществляли подобно процедуре, обсужденной выше для KX2-391^.2HCl, получая 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетат (KX2-391). KX2-391 превращали в метансульфонатную соль обработкой метансульфоновой кислотой (MSA) в ацетоне при 50°C, получая 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилат (KX2-391^.MSA).

В другом аспекте изобретения, может синтезироваться промежуточное соединение 7, имеющее группу, отличную от -C(O)OMe. Химик может получить промежуточные соединения общей формулы:

в которой группа “R” включает, но не ограничена ими, водород и алкил.

В одном аспекте, изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, включающему стадии:

введения 4-(2-хлорэтил)морфолина в реакцию с 4-бромфенолом с получением 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина; (2) сочетания 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина с 6-фторпиридин-3-ил-3-бороновой кислотой с получением 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина;

введения 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина в реакцию с ацетонитрилом с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила; (4) превращения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила в 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетат; и (5) введения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетата в реакцию с бензиламином с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида.

В другом аспекте изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилата, включающему стадии: (1) введения 4-(2-хлорэтил)морфолина в реакцию с 4-бромфенолом с получением 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина; (2) сочетания 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина с 6-фторпиридин-3-ил-3-бороновой кислотой с получением 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина; (3) введение 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина в реакцию с ацетонитрилом с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила; (4) превращения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила в 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетат; (5) введения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетата в реакцию с бензиламином с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида; и (6) контакта 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида с метансульфоновой кислотой с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилата.

В другом аспекте, изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилата, включающему стадию контакта 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида с метансульфоновой кислотой с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилата.

В другом аспекте, изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид дигидрохлорида, включающему стадии: (1) введения 4-(2-хлорэтил)морфолина в реакцию с 4-бромфенолом с получением 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина; (2) сочетания 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина с 6-фторпиридин-3-ил-3-бороновой кислотой с получением 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина; (3) введения 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина в реакцию с ацетонитрилом с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила; (4) превращения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила в 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетат; (5) введения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетата в реакцию с бензиламином с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида; и (6) контакта 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида с соляной кислотой с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид дигидрохлорида.

В другом аспекте, изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид дигидрохлорида, включающему стадию контакта 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида с соляной кислотой с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид дигидрохлорида.

В другом аспекте, изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, включающему стадию введения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетата в реакцию с бензиламином с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида.

В другом аспекте, изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, включающему стадии превращения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила в 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетат; и введения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетата в реакцию с бензиламином с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида.

В другом аспекте, изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, включающему стадии введения 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина в реакцию с ацетонитрилом с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила; превращения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила в 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетат; и введения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетата в реакцию с бензиламином с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида.

В другом аспекте, изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, включающему стадии сочетания 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина с 6-фторпиридин-3-ил-3-бороновой кислотой с получением 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина; введения 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина в реакцию с ацетонитрилом с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила; превращения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила в 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетат; и введения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетата в реакцию с бензиламином с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида.

В другом аспекте, изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, включающему стадию введения 4-(2-хлорэтил)морфолина в реакцию с 4-бромфенолом с получением 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина.

В другом аспекте, изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, включающему стадию сочетания 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина с 6-фторпиридин-3-ил-3-бороновой кислотой с получением 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина.

В другом аспекте, изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, включающему стадию введения 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина в реакцию с ацетонитрилом с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила.

В другом аспекте, изобретение относится к способу получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, включающему стадии превращения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила в 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетат.

В другом аспекте, изобретение относится к способу, описанному выше для KX2-391, для получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилата, включающему стадию: контакта 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида с метансульфоновой кислотой с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилата.

В другом аспекте, изобретение относится к способу, описанному выше для KX2-391, для получения 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид дигидрохлорида, включающему стадию контакта 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида с соляной кислотой с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид дигидрохлорида.

В одном аспекте, изобретение относится к полиморфу мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, полученному способом, описанным здесь, и далее полученному способом очистки, включающим стадию перекристаллизации сырого препарата указанной соли из ацетона. В другом аспекте, полиморф получают способом очистки, в котором количество указанного используемого ацетона составляет 80 объемов.

Композиции

Изобретение относится к в основном чистому 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамиду (KX2-391) и к его солям, сольватам, гидратам или пролекарствам: Другие названия для соединения KX2-391 включают 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид и свободное основание KX2-391.

Изобретение относится к композициям и способам синтеза высоко очищенного KX2-391 (>98,0% согласно ВЭЖХ), который является безопасным и простым и который производит KX2-391 в большом масштабе (>100 г). Предпочтительно синтез производит соединение с высоким выходом (>80%) и с ограниченным количеством примесей.

В предпочтительных вариантах осуществления, KX2-391 в композициях согласно настоящему изобретению имеет чистоту более чем 98%. Например, чистота KX2-391 в композициях по изобретению составляет 98,5%, 99,0%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% или 99,9%.

В предпочтительных вариантах осуществления, композиции и составы по изобретению содержат менее чем 2% примесей. Например, композиции и составы по изобретению содержат менее чем 2% любой из следующих примесей или их комбинаций этого: этил хлорид, этанол, этилацетат, гептан, анизол и палладий.

Некоторые примеси измеряют в частях на миллион, что является относительным измерением веса, равным весу растворенного вещества/вес раствора × 1000000, например, вес этил хлорида/вес образца KX2-391 ди-HCl × 1000000; например, вес этил хлорида/вес образца KX2-391 мезилата × 1000000.

В других предпочтительных вариантах осуществления композиция содержит менее чем 250 ppm этил хлорида по данным анализа остаточного растворителя газовой хроматографии объема свободного пространства над продуктом. В варианте осуществления, соединения и составы согласно настоящему изобретению содержат этил хлорид в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 250 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 200 ppm, менее чем 200 ppm, менее чем 150 ppm, менее чем 100 ppm или менее чем 50 ppm этил хлорида.

Соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат менее чем приблизительно 100 ppm палладия. В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат палладий в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 100 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 75 ppm, менее чем 50 ppm, менее чем 30 ppm, менее чем 20 ppm, менее чем 10 ppm или менее чем 5 ppm палладия.

В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат этанол в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 5000 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 4500 ppm, менее чем 4000 ppm, менее чем 3500 ppm, менее чем 3000 ppm, менее чем 2500 ppm или менее чем 2000 ppm этанола.

В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат этилацетат в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 50000 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 48000 ppm, менее чем 45000 ppm, менее чем 40000 ppm, менее чем 35000 ppm, менее чем 30000 ppm или менее чем 25000 ppm этилацетата.

В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат гептан в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 7500 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 7000 ppm, менее чем 6500 ppm, менее чем 6000 ppm, менее чем 5000 ppm, менее чем 3000 ppm, или менее чем 1000 ppm гептана.

В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат анизол в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 100 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 80 ppm, менее чем 75 ppm, менее чем 50 ppm, менее чем 25 ppm, менее чем 10 ppm или менее чем 5 ppm анизола.

Изобретение относится к композиции, которая включает в основном чистый сольват KX2-391.

Изобретение также относится к композиции, которая включает в основном чистый гидрат KX2-391.

Изобретение также включает в основном чистую соль присоединения с кислотой KX2-391. Например, гидрохлоридную соль. Соль присоединения с кислотой может быть, например, дигидрохлоридной солью. Например, соль присоединения с кислотой может быть, например, мезилатной солью.

Изобретение относится к композиции, которая включает в основном чистую соль присоединения с кислотой KX2-391.

Изобретение относится к композиции, которая включает в основном чистую гидрохлоридную соль KX2-391. Изобретение относится к композиции, которая включает в основном чистую дигидрохлоридную соль KX2-391.

Изобретение относится к композиции, которая включает в основном чистую мезилатную соль KX2-391.

Изобретение также включает пролекарство KX2-391.

Изобретение также включает в основном чистую фармацевтически приемлемую соль KX2-391.

Изобретение также относится к композиции, которая включает в основном чистый KX2-391 или его сольват, гидрат или соль и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

Изобретение относится к в основном чистому 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид дигидрохлориду:

Изобретение относится к композициям и способам синтеза высоко очищенного KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA (>98,0% согласно ВЭЖХ), который является безопасным и простым и который производит KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA, соответственно, в большом масштабе (>100 г) с высоким выходом (>80%) и с ограниченным количеством этилхлорида (<250 ppm этил хлорида по данным анализа остаточного растворителя газовой хроматографии объема свободного пространства над продуктом).

В предпочтительных вариантах осуществления, KX2-391^.2HCl в композициях согласно настоящему изобретению имеет чистоту более чем 98%. Например, чистота KX2-391^.2HCl в композициях по изобретению составляет 98,5%, 99,0%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% или 99,9%.

В предпочтительных вариантах осуществления, композиции и составы по изобретению содержат менее чем 2% примесей. Например, композиции и составы по изобретению содержат менее чем 2% любой из следующих примесей или их комбинаций: этил хлорид, этанол, этилацетат, гептан, анизол и палладий.

В других предпочтительных вариантах осуществления композиция содержит менее чем 250 ppm этил хлорида по данным анализа остаточного растворителя газовой хроматографии объема свободного пространства над продуктом. В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат этил хлорид в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 250 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 200 ppm, менее чем 200 ppm, менее чем 150 ppm, менее чем 100 ppm или менее чем 50 ppm этил хлорида.

Соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат менее чем приблизительно 100 ppm палладия. В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат палладий в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 100 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 75 ppm, менее чем 50 ppm, менее чем 30 ppm, менее чем 20 ppm, менее чем 10 ppm или менее чем 5 ppm палладия.

Изобретение также относится к композиции, которая включает в основном чистый KX2-391^.2HCl и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

Изобретение относится к в основном чистому 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилату (KX2-391^.MSA):

Изобретение относится к композициям и способам синтеза высоко очищенного KX2-391^.MSA (>98,0% согласно ВЭЖХ), который является безопасным и простым и который производит KX2-391^.MSA в большом масштабе (>100 г) с высоким выходом (>80%) и с ограниченным количеством этил хлорида (<250 ppm этил хлорида по данным анализа остаточного растворителя газовой хроматографии объема свободного пространства над продуктом).

В предпочтительных вариантах осуществления, KX2-391^.MSA в композициях согласно настоящему изобретению имеет чистоту более чем 98%. Например, чистота KX2-391^.MSA в композициях по изобретению составляет 98,5%, 99,0%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% или 99,9%.

В предпочтительных вариантах осуществления, композиции и составы по изобретению содержат менее чем 2% примесей. Например, композиции и составы по изобретению содержат менее чем 2% любой из следующих примесей или их комбинаций: этил хлорид, этанол, этилацетат, гептан, анизол и палладий.

В других предпочтительных вариантах осуществления композиция содержит менее чем 250 ppm этил хлорида по данным анализа остаточного растворителя газовой хроматографии объема свободного пространства над продуктом. В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат этил хлорид в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 250 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 200 ppm, менее чем 200 ppm, менее чем 150 ppm, менее чем 100 ppm или менее чем 50 ppm этил хлорида.

Соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат менее чем приблизительно 100 ppm палладия. В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат палладий в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 100 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 75 ppm, менее чем 50 ppm, менее чем 30 ppm, менее чем 20 ppm, менее чем 10 ppm или менее чем 5 ppm палладия.

Изобретение также относится к композиции, которая включает в основном чистый KX2-391^.MSA и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

Изобретение относится к в основном чистому 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилату (KX2-391^.MSA), Форма A:

Изобретение относится к композициям и способам синтеза высоко очищенного KX2-391^.MSA, Форма А (>98,0% согласно ВЭЖХ), который является безопасным и простым и который производит KX2-391^.MSA, Форма А, в большом масштабе (>100 г) с высоким выходом (>80%) и с ограниченным количеством этил хлорида (<250 ppm этил хлорида по данным анализа остаточного растворителя газовой хроматографии объема свободного пространства над продуктом).

В предпочтительных вариантах осуществления, KX2-391^.MSA, Форма А, в композициях согласно настоящему изобретению имеет чистоту более чем 98%. Например, чистота KX2-391^.MSA, Форма А, в композициях по изобретению составляет 98,5%, 99,0%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% или 99,9%.

В предпочтительных вариантах осуществления, композиции и составы по изобретению содержат менее чем 2% примесей. Например, композиции и составы по изобретению содержат менее чем 2% любой из следующих примесей или их комбинаций: этил хлорид, этанол, этилацетат, гептан, анизол и палладий.

В других предпочтительных вариантах осуществления композиция содержит менее чем 250 ppm этил хлорида по данным анализа остаточного растворителя газовой хроматографии объема свободного пространства над продуктом. В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат этил хлорид в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 250 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 200 ppm, менее чем 200 ppm, менее чем 150 ppm, менее чем 100 ppm или менее чем 50 ppm этил хлорида.

Соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат менее чем приблизительно 100 ppm палладия. В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат палладий в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 100 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 75 ppm, менее чем 50 ppm, менее чем 30 ppm, менее чем 20 ppm, менее чем 10 ppm или менее чем 5 ppm палладия.

Изобретение также относится к композиции, которая включает в основном чистый KX2-391^.MSA, Форма A, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

Некоторые соединения и соли по изобретению являются не-АТФ-конкурентными ингибиторами киназы.

Например, соединения по изобретению или их соли могут быть использованы для лечения или профилактики микробной инфекции, такой как бактериальная, грибковая, паразитная или вирусная инфекция.

Соединение по изобретению или его соль может использоваться как фармацевтическое средство. Например, соединение по изобретению или его соль используется как антипролиферативное средство для лечения человека и/или животных, например, для лечения человека и/или других млекопитающих. Соединения или соли могут использоваться без ограничения, например, как противораковое, антиангиогенезное, противомикробное, антибактериальное, противогрибковое, противопаразитарное и/или противовирусное средство. Дополнительно, соединения или соли могут использоваться для лечения связанных с пролиферацией других клеток нарушений, таких как диабетическая ретинопатия, дегенерация желтого пятна и псориаз. Противораковые средства включают антиметастатические средства.

Соединение по изобретению или его соль, используемые в качестве фармацевтического средства, могут быть, например, в основном чистым KX2-391, KX2-391^.2HCl, KX2-391^.MSA или KX2-391^.MSA, Форма A.

Настоящее изобретение относится к композициям и составам, которые содержат ограниченное количество примесей. Соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению имеют чистоту более чем приблизительно 98,0% при определении способами, известными из уровня техники, например, ВЭЖХ. В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению имеют чистоту в пределах от приблизительно 99,0% до приблизительно 100% (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, такие соединения, соли, композиции, или составы могут иметь чистоту 98,1%, 98,2%, 98,3%, 98,4%, 98,5%, 98,6%, 98,7%, 98,8%, 98,9%, 99,0%, 99,1%, 99,2%, 99,3, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% или 99,9%.

Для обеспечения максимального фармакодинамического и терапевтического эффекта композиций и составов настоящего изобретения, предпочтительно ограничивать количество таких примесей как этил хлорид и палладий. Эти примеси могут привести к нежелательной токсичности.

В предпочтительных вариантах осуществления, композиции и составы по изобретению содержат менее чем 2% примесей. Например, композиции и составы по изобретению содержат менее чем 2% любой из следующих примесей или их комбинаций: этил хлорид, этанол, этилацетат, гептан, анизол и палладий.

В других предпочтительных вариантах осуществления композиция содержит менее чем 250 ppm этил хлорида при определении анализом остаточного растворителя газовой хроматографии объема свободного пространства над продуктом. В варианте осуществления, соединения и составы согласно настоящему изобретению содержат этил хлорид в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 250 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 200 ppm, менее чем 200 ppm, менее чем 150 ppm, менее чем 100 ppm или менее чем 50 ppm этил хлорида.

Соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат менее чем приблизительно 100 ppm палладия. В варианте осуществления, соединения, соли и составы согласно настоящему изобретению содержат палладий в диапазоне от приблизительно 0 ppm до приблизительно 100 ppm (или любое значение в пределах указанного диапазона). Например, композиции содержат менее чем 75 ppm, менее чем 50 ppm, менее чем 30 ppm, менее чем 20 ppm, менее чем 10 ppm или менее чем 5 ppm палладия.

Композиции полиморфа

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, в основном подобной представленной на Фигуре 7.

В другом аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включающей пики в приблизительно 22,7, 19,7, 18,9 и 16,3 градусов 2θ.

В одном аспекте изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включающей пики в приблизительно 13,1, 15,6, 16,3, 17,5, 18,9, 19,7, 20,1, 20,9, 21,4, 22,3, 22,7, 23,5, 25,7, 26,1, 26,4, 26,8 и 27,1 градусов 2θ.

В одном аспекте, полиморф по изобретению характеризуется структурой дифракции рентгеновских лучей, измеренной облучением Cu Kα.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164.

В одном аспекте, полиморф по изобретению характеризуется термограммой DSC при измерении прибором Mettler 822^e DSC.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, в основном подобной представленной на Фигуре 7 и термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164.

В другом аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включающей пики в приблизительно 22,7, 19,7, 18,9 и 16,3 градусов 2θ и термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включающей пики в приблизительно 13,1, 15,6, 16,3, 17,5, 18,9, 19,7, 20,1, 20,9, 21,4, 22,3, 22,7, 23,5, 25,7, 26,1, 26,4, 26,8 и 27,1 градусов 2θ и термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C.

В одном аспекте, полиморф по изобретению характеризуется термальным гравиметрическим анализом при измерении прибором Mettler851^e STDA/TGA.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, в основном подобной представленной на Фигуре 7; термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164, и термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C.

В другом аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включающей пики в приблизительно 22,7, 19,7, 18,9 и 16,3 градусов 2θ; термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164, и термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включающей пики в приблизительно 13,1, 15,6, 16,3, 17,5, 18,9, 19,7, 20,1, 20,9, 21,4, 22,3, 22,7, 23,5, 25,7, 26,1, 26,4, 26,8 и 27,1 градусов 2θ; термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164, и термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся анализом сорбции влаги, имеющим поглощение воды приблизительно 1,1 вес.% воды при 60% RH и 5,7 вес.% воды при 90% RH.

В одном аспекте, полиморф по изобретению характеризуется анализом сорбции влаги при измерении прибором для определения сорбции влаги Hiden IGAsorp.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, в основном подобной представленной на Фигуре 7; термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164; термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C, и анализом сорбции влаги, имеющим поглощение воды приблизительно 1,1 вес.% воды при 60% RH и 5,7 вес.% воды при 90% RH.

В другом аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включая пики в приблизительно 22,7, 19,7, 18,9 и 16,3 градусов 2θ; термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164; термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C, и анализом сорбции влаги, имеющим поглощение воды приблизительно 1,1 вес.% воды при 60% RH и 5,7 вес.% воды при 90% RH.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включая пики в приблизительно 13,1, 15,6, 16,3, 17,5, 18,9, 19,7, 20,1, 20,9, 21,4, 22,3, 22,7, 23,5, 25,7, 26,1, 26,4, 26,8 и 27,1 градусов 2θ; термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164; термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C, и анализом сорбции влаги, имеющим поглощение воды приблизительно 1,1 вес.% воды при 60% RH и 5,7 вес.% воды при 90% RH.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся высокоэффективной жидкостной хроматографией как имеющий пик при приблизительно 9,1.

В одном аспекте, инструментальные параметры высокоэффективной жидкостной хроматографии показаны в Примере 10.

В одном аспекте, полиморф по изобретению характеризуется высокоэффективной жидкостной хроматографией при измерении прибором для ВЭЖХ Waters Alliance.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, в основном подобной представленной на Фигуре 7; термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164; термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C, анализом сорбции влаги, имеющим поглощение воды приблизительно 1,1 вес.% воды при 60% RH и 5,7 вес.% воды при 90% RH, и высокоэффективной жидкостной хроматографией как имеющий пик при приблизительно 9,1.

В другом аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включая пики в приблизительно 22,7, 19,7, 18,9 и 16,3 градусов 2θ; термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164; термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C, анализом сорбции влаги, имеющим поглощение воды приблизительно 1,1 вес.% воды при 60% RH и 5,7 вес.% воды при 90% RH, и высокоэффективной жидкостной хроматографией как имеющий пик при приблизительно 9,1.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включающей пики в приблизительно 13,1, 15,6, 16,3, 17,5, 18,9, 19,7, 20,1, 20,9, 21,4, 22,3, 22,7, 23,5, 25,7, 26,1, 26,4, 26,8 и 27,1 градусов 2θ; термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164; термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C, анализом сорбции влаги, имеющим поглощение воды приблизительно 1,1 вес.% воды при 60% RH и 5,7 вес.% воды при 90% RH, и высокоэффективной жидкостной хроматографией как имеющий пик при приблизительно 9,1.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся инфракрасной спектроскопией с преобразованием Фурье, функционирующей в режиме измерения ослабления общего отражения (ATR-FTIR), имеющей характеристические пики в приблизительно 1641, 1211, 1163, 1150, 1035, 831, 771 и 746 волновых чисел (см^-1).

В одном аспекте, полиморф по изобретению характеризуется ATR-FTIR при измерении Thermo-Nicolet Avatar 370 с приложением Smart Endurance Attenuated Total-Reflection.

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, в основном подобной представленной на Фигуре 7; термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164; термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C, анализом сорбции влаги, имеющим поглощение воды приблизительно 1,1 вес.% воды при 60% RH и 5,7 вес.% воды при 90% RH, высокоэффективной жидкостной хроматографией как имеющий пик при приблизительно 9,1, и инфракрасной спектроскопией с преобразованием Фурье, функционирующей в режиме измерения ослабления общего отражения (ATR-FTIR), имеющей характеристические пики в приблизительно 1641, 1211, 1163, 1150, 1035, 831, 771 и 746 волновых чисел (см^-1).

В другом аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включающей пики в приблизительно 22,7, 19,7, 18,9 и 16,3 градусов 2θ; термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164; термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C, анализом сорбции влаги, имеющим поглощение воды приблизительно 1,1 вес.% воды при 60% RH и 5,7 вес.% воды при 90% RH, высокоэффективной жидкостной хроматографией как имеющий пик при приблизительно 9,1, и инфракрасной спектроскопией с преобразованием Фурье, функционирующей в режиме измерения ослабления общего отражения (ATR-FTIR), имеющей характеристические пики в приблизительно 1641, 1211, 1163, 1150, 1035, 831, 771 и 746 волновых чисел (см^-1).

В одном аспекте, изобретение включает полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включающей пики в приблизительно 13,1, 15,6, 16,3, 17,5, 18,9, 19,7, 20,1, 20,9, 21,4, 22,3, 22,7, 23,5, 25,7, 26,1, 26,4, 26,8 и 27,1 градусов 2θ; термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение в приблизительно 164; термальным гравиметрическим анализом как имеющий незначительные потери веса ниже 230°C, анализом сорбции влаги, имеющим поглощение воды приблизительно 1,1 вес.% воды при 60% RH и 5,7 вес.% воды при 90% RH, высокоэффективной жидкостной хроматографией как имеющий пик при приблизительно 9,1, и инфракрасной спектроскопией с преобразованием Фурье, функционирующей в режиме измерения ослабления общего отражения (ATR-FTIR), имеющей характеристические пики в приблизительно 1641, 1211, 1163, 1150, 1035, 831, 771 и 746 волновых чисел (см^-1).

В одном аспекте, изобретение включает фармацевтическую композицию, включающую полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A) и фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель.

В одном аспекте изобретение включает способ лечения или профилактики заболевания или состояния у пациента, включающий стадию введения указанному пациенту фармацевтической композиции по изобретению, причем указанное заболевание или состояние выбраны из рака, потери слуха, остеопороза, ожирения, диабета, заболеваний глаз, инсульта, атеросклероза, нейропатической боли, гепатита B, аутоиммунного заболевания.

В одном аспекте, изобретение включает способ получения полиморфа мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), включающий стадию добавления метансульфоновой кислоты к 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамиду в ацетоне. В одном аспекте, количество указанного ацетона составляет более 64 объемов. В одном аспекте, количество указанного ацетона составляет более 64 объемов и менее чем 100 объемов. В одном аспекте, количество указанного ацетона составляет 80 объемов. Термин "объемы" относится к объему жидкости, необходимому для растворения массы материала, то есть (мл растворителя)/(граммы соединения)=объемы.

Способы применения

Поскольку киназы участвуют в регуляции разнообразных нормальных клеточных путей трансдукции сигналов (например, роста, дифференцировки, выживания, адгезии, миграции клеток и т.д.), киназы, как считается, играют роль в различных заболеваниях и нарушениях. Таким образом, модуляция сигнального каскада киназы может быть важным способом лечения или профилактики таких заболеваний и нарушений. Такие заболевания и нарушения включают, например, рак, остеопороз, сердечно-сосудистые нарушения, дисфункцию иммунной системы, диабет типа II, ожирение и отторжение трансплантата.

Соединения по изобретению или их соли могут быть использованы в модуляции компонента сигнального каскада киназы. Некоторые соединения или их соли могут быть использованы в модуляции больше чем одного компонента сигнального каскада киназы. Фраза “модулирует один или более компонентов сигнального каскада протеинкиназы” означает, что на один или более компонентов сигнального каскада киназы действуют таким образом, что функционирование клетки изменяется. Компоненты сигнального каскада протеин киназы включают любые белки, участвующие, прямо или косвенно в сигнальном пути киназы, включая вторые медиаторы и апстрим и даунстрим мишени.

Множество протеинкиназ и фосфатаз являются известными и представляют собой цели для развития терапии. См., например, Hidaka and Kobayashi, Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol, 1992, 32:377-397; Davies et al., Biochem. J., 2000, 351:95-105, каждый из которых включен в настоящее описание путем ссылки.

Одно семейство киназ, протеин-тирозинкиназы, делятся на два больших семейства: тирозиновые киназы рецепторов, или RTK (например, киназа инсулинового рецептора (IRK), рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), основной рецептор фактора роста фибробластов (FGFR), рецептор тромбоцитарного фактора роста (PDGFR), рецептор фактора роста сосудистого эндотелия (VEGFR-2 или Flk1/KDR) и рецептор фактора роста нервов (NGFR)), и нерецепторные тирозин киназы, или NRTK (например, семейство Src (Src, Fyn, Yes, Blk, Yrk, Fgr, Hck, Lck и Lyn), Fak, Jak, Abl и Zap70). См., например, Parang and Sun, Expert Opin. Ther. Patents, 2005, 15:1183-1207, включенный в настоящее описание путем ссылки.

Из-за роли киназ Src в различных видах рака, эти киназы являются объектом множества исследований, касающихся развития ингибиторов Src в качестве терапии рака, включая высоко метастатический рост раковых клеток. Ингибиторы Src являются объектом поиска в качестве терапии различных видов рака, включая, например, рак толстой кишки, предраковые поражения толстой кишки, рак яичника, рак молочной железы, рак эпителия, рак желудка, мелкоклеточный рак легкого, рак поджелудочной железы и другие. См., например, Frame, Biochim. Biophys. Acta, 2002, 1602:114-130 и Parang and Sun, Expert Opin. Ther. Patents, 2005, 15:1183-1207.

Ингибирование других киназ может быть полезным в лечении и модуляции других типов заболеваний и нарушений. Например, различные заболевания глаз могут ингибироваться или предотвращаться введением ингибиторов тирозин киназы рецептора VEGF. Ингибиторы тирозин фосфатазы PTP-1B и/или гликоген фосфорилазы могут обеспечить лечение диабета типа II или ожирения. Ингибиторы p56lck могут быть пригодны в лечении нарушений иммунной системы. Другие мишени включают обратную транскриптазу ВИЧ, тромбоксан синтазу, EGFRTK p55 fyn и т.д.

Соединения по изобретению или их соли могут быть ингибиторами сигнального пути Src, которые связываются в субстратном сайте пептида Src. Активность различных соединения по изобретению и солей была изучена в c-Src (527F, конститутивно активный и трансформирующий) трансформированных клетках NIH3T3 и в человеческих раковых клетках толстой кишки (HT29). Например, на этих линиях клеток было показано, что KX2-391 снижает уровень фосфорилирования известных субстратов белка Src дозозависимым образом и хорошо коррелирует с ингибирующими рост эффектами. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, соединения по изобретению или их соли могут непосредственно ингибировать Src, и могут делать это, связываясь в пептидсвязывающем сайте (в противоположность связыванию на аллостерическом участке).

Осуществляли эксперименты по молекулярному моделированию, которые показывают, что соединения по изобретению вписываются в модель субстратного сайта Src (См., например, патенты США 7005445 и 7070936). Моделирование также используется для переоборудования скелета ингибитора киназы Src для нацеливания на другие киназы, просто при использовании другого набора боковых цепей на молекулах и/или изменении непосредственно скелета.

Без желания быть связанными с теорией, можно считать, что конформация некоторых киназ (например, Src) вне клеток относительно конформации в клетках заметно отличается, потому что в клетках множество киназ встроены в мультибелковые сигнальные комплексы. Таким образом, поскольку связывающий пептидный субстрат сайт не является хорошо сформированным в изолированной киназе (как показывают рентгеновские тонкие структуры Src), считается, что активность против изолированной киназы для ингибитора связывания пептидного субстрата является слабой. Связывание с этим сайтом в тесте с изолированной киназой требует, чтобы ингибитор захватил очень малый процент от полного белка в тесте с изолированным ферментном, который находится в той же самой конформации, которая существует в клетках. Это требует большого избытка ингибитора для дренирования значительных количеств фермента из каталитического цикла в тесте, чтобы это могло быть обнаружено.

Однако для клеточных тестов большой избыток ингибитора не является необходимым, поскольку, как ожидают, образуется пептидсвязывающий сайт. В клеточных тестах Src связывающие область SH2 & SH3 белки уже изменили конформацию Src так, чтобы связывающий пептидный субстрат сайт полностью сформировался. Таким образом, низкие концентрации ингибитора могут удалить фермент из каталитического цикла, так как весь фермент находится в сжатой связывающей конформации.

Огромное большинство известных ингибиторов киназы являются АТФ-конкурентными и показывает недостаточную селективность в группе тестов с изолированной киназой. Однако многие из соединений по изобретению или их солей, как считается, являются связывающими пептидный субстрат ингибиторами. Таким образом, обычный высокопроизводительный скрининг соединений и солей против изолированных ферментов, таких как Src, не привел бы к открытию соединения по изобретению и их солей.

Соединения по изобретению или их соли могут быть ингибиторами киназ. Соединение по изобретению или его соль может быть не-АТФ конкурентным ингибитором киназы. Соединение по изобретению или его соль может ингибировать киназу непосредственно, или оно может воздействовать на киназный путь. В одном варианте осуществления, соединение или его соль ингибирует один или более компонентов сигнального каскада протеин киназы. В другом варианте осуществления, соединение или его соль представляет собой аллостерический ингибитор. В другом варианте осуществления, соединение или его соль представляет собой ингибитор пептидного субстрата. В другом варианте осуществления, соединение или его соль не ингибирует связывание АТФ с протеинкиназой. В одном варианте осуществления, соединение или его соль ингибирует семейство Src протеинкиназ. В другом варианте осуществления, семейство Src протеинкиназ представляет собой pp60^c-src тирозин киназу.

Соединения согласно настоящему изобретению или их соли могут быть использованы в качестве фармацевтических средств, например, в качестве терапевтических средств для лечения человека и животных. Соединения или их соли могут использоваться без ограничения, например, в качестве противораковых, антиангиогенезных, антиметастатических, противомикробных, антибактериальных, противогрибковых, противопаразитарных и/или противовирусных средств. Некоторые полиморфы могут использоваться без ограничения, например, в качестве противораковых, антиангиогенезных, антиметастатических, противомикробных, антибактериальных, противогрибковых, противопаразитарных и/или противовирусных средств.

В одном варианте осуществления, введение композиции по изобретению осуществляют перорально, парентерально, подкожно, внутривенно, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутриносовой инстилляцией, внутриполостной или внутрипузырной инстилляцией, топически, например, введением закапыванием в ухо, внутриартериально, внутрь повреждения, дозировочным насосом или нанесением на слизистые оболочки. В другом варианте осуществления, соединение или его соль вводят с фармацевтически приемлемым носителем.

Рак

В недавних библиографических источниках существует значительное обоснование нацеливания pp60c-src (Src) как широко применимого подхода к терапии рака, не приводящего к серьезной токсичности. Например, опухоли, при которых наблюдается усиленная трансдукция сигналов PTK рецептора EGF, или суперэкспрессия родственного Her-2/neu рецептора, конститутивно активировали Src и усиливали инвазивность опухоли. Ингибирование Src в этих клетках вызывает остановку роста, запускает апоптоз и обращает трансформированный фенотип (Karni et al. (1999) Oncogene 18(33): 4654-4662). Известно, что аномально повышенная активность Src позволяет трансформированным клеткам расти независимым от закрепления способом. Это очевидно вызвано тем фактом, что трансдукция сигналов внеклеточного матрикса повышает активность Src в пути FAK/Src, скоординированным образом с митогенной трансдукцией сигналов, и таким образом блокирует апоптотический механизм, который в норме был бы активирован. Следовательно, ингибирование FAK/Src в опухолевых клетках может индуцировать апоптоз, потому что индуцируется апоптотический механизм, который обычно активируется после высвобождения из внеклеточного матрикса (Hisano, et al., Proc. Annu. Meet. Am. Assoc. Cancer Res. 38:A1925 (1997)). Дополнительно, уменьшенная экспрессия мРНК VEGF была отмечена после ингибирования Src, и опухоли, полученные из этих Src-ингибируемых линий клеток, показали уменьшенное ангиогенное развитие (Ellis et al., Journal of Biological Chemistry 273 (2):1052-1057 (1998)).

Было сделано предположение, что Src может являться "универсальной" мишенью для терапии рака, так как было обнаружено, что он сверхактивирован в возрастающем числе опухолей человека (Levitzki, Current Opinion in Cell Biology, 8, 239-244 (1996); Levitzki, Anti-Cancer Drug Design, 11, 175-182 (1996)). Представляется, что потенциальной выгодой от ингибирования Src для терапии рака является четырехкратное ингибирование нерегулируемого роста клеток, вызванное эффектами петли аутокринного фактора роста, ингибирование метастазирование вследствие запуска апоптоза после высвобождения из клеточного матрикса, ингибирование ангиогенеза опухоли через сниженные уровни VEGF и низкая токсичность.

Сообщалось, что раковые клетки предстательной железы демонстрируют суперэкспрессию паксиллина и p130cas, а также гиперфосфорилированы (Tremblay et al., Int. J. Cancer, 68, 164-171, 1996) и могут, таким образом, быть главной мишенью для ингибиторов Src.

Изобретение включает способ профилактики или лечения нарушения пролиферации клеток путем введения пациенту фармацевтической композиции, которая включает в основном чистый KX2-391, или его соль, сольват, гидрат или пролекарство, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент. Изобретение включает в основном чистый KX2-391 бис-HCl. Изобретение включает в основном чистый KX2-391 мезилат. Изобретение включает полиморф KX2-391^.MSA, например, Форму A.

Например, нарушение пролиферации клеток представляет собой предраковое состояние или рак. Нарушение пролиферации клеток, поддающееся лечению или профилактике соединениями по изобретению или их солями, может быть раком, таким как, например, рак толстой кишки или рак легкого. Нарушение пролиферации клеток, поддающееся лечению или профилактике соединениями по изобретению или их солями, может быть гиперпролиферативным нарушением. Нарушение пролиферации клеток, поддающееся лечению или профилактике соединениями по изобретению или их солями, может представлять собой псориаз.

Лечение или профилактика пролиферативного нарушения могут осуществляться через ингибирование тирозин киназы. Например, тирозин киназа может быть киназой Src или киназой фокальной адгезии (FAK).

В одном варианте осуществления, соединение по изобретению или его соль может использоваться для лечения или профилактики рака мозга у пациента. Другой аспект изобретения включает применение соединения по изобретению или соли этого для получения лекарственного средства для лечения или профилактики рака мозга. Для защиты против рака мозга, соединение или соль могут вводиться до развития рака мозга у пациента. Альтернативно, соединение или соль могут использоваться для лечения рака мозга у пациента. Соединение согласно настоящему изобретению или его соль, используемые для лечения или профилактики рака мозга, может участвовать в модуляции сигнального каскада киназы, например, ингибитор киназы, не-АТФ конкурентный ингибитор, ингибитор тирозин киназы, ингибитор фосфатазы протеинкиназы или ингибитор протеин-тирозин фосфатов 1B.

Термин “рак мозга” охватывает различные виды рака. Ими могут быть фактические опухоли головного мозга, которые возникают из самого мозга, известные как первичный рак мозга, которых существует несколько. Термин “рак мозга” относится к злокачественным опухолям, то есть, опухолям, которые энергично растут и распространяются, пересиливая здоровые клетки тем, что отбирают у них место, кровь и питательные вещества. Опухоли, которые не распространяются энергично, называют доброкачественными опухолями. Доброкачественные опухоли в целом менее серьезны, чем злокачественная опухоль, но доброкачественная опухоль может, тем не менее, вызывать проблемы в мозге. Могут также быть метастазы в мозге, которые представляют собой форму распространения другого рака, такого как рак легкого или молочной железы, в мозг.

Опухоли головного мозга классифицируются как по типу клеток мозга, которые составляют их, так и по тому, как опухоль выглядит под микроскопом. Первичные опухоли головного мозга могут происходить из любой из клеток в мозге или из определенных структур в мозге. Клетки нейроглии поддерживают нейроны мозга, и опухоли, которые происходят из этих клеток, известны как глиальные опухоли. В оболочке, которая окружает мозг, могут также развиться опухоли, и они известны как менингиомы. Существуют другие типы опухолей, которые включают другие структуры мозга, включая эпендимому. Самыми распространенными первичными опухолями головного мозга являются глиомы, менингиомы, аденомы гипофиза, вестибулярные шванномы и примитивные нейроэктодермальные опухоли (медуллабластомы).

Настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики глиобластомы, злокачественной быстро растущей астроцитомы центральной нервной системы и обычно полушария головного мозга. Синонимы глиобластомы включают мультиформную глиобластому (GBM), гигантоклеточную глиобластому и мультиформную спонгиобластому. Глиобластом является наиболее распространенной злокачественной первичной опухолью головного мозга, и оказалось, что она с большим трудом поддается лечению. Эти опухоли часто агрессивны и инфильтруются в окружающую мозг ткань. Глиобластомы происходят из глиальных клеток, которые являются клетками, которые формируют ткань, которая окружает и защищает другие нервные клетки, находящиеся в головном мозге и спинном мозге. Глиобластомы главным образом состоят из звездообразных глиальных клеток, известных как астроциты. Термин "глиома" включает любой тип опухоли головного мозга, такой как астроцитомы, олигодендроглиомы, эпендимомы и папилломы сплетения сосудистой оболочки. Астроцитомы входят в четыре степени, основанные на том, как быстро клетки воспроизводятся, и вероятности того, что они инфильтруются в соседнюю ткань. Степени I или II астроцитом являются доброкачественными и могут называться астроцитомами низкой степени. Степени III и IV астроцитом являются злокачественными и могут называться как высокодифференцированными астроцитомами. Степень II астроцитом известна как анапластические астроцитомы. Степень IV астроцитом известна как мультиформная глиобластома.

Изобретение относится к способу лечения или профилактики медуллобластомы. Медуллобластома представляет собой очень злокачественную первичную опухоль головного мозга, которая возникает в мозжечке или задней ямке. Первоначально считавшаяся глиомой, медуллобластома, как теперь известно, относится к семейству примитивных черепных нейроэктодермальных опухолей (PNET).

Опухоли, которые возникают в мозжечке, называются инфратенториальными, потому что они возникают ниже, в толстой оболочке, которая отделяет полушария головного мозга от мозжечка. Другой термин для медуллобластомы - инфратенториальная PNET. Медуллобластома представляет собой наиболее распространенную PNET, возникающую в мозге. Все опухоли PNET мозга представляют собой инвазивные и быстро растущие опухоли, которые, в отличие от большинства опухолей головного мозга, распостраняются через спинномозговую жидкость (СМЖ) и часто метастазируют в различные места в мозге и позвоночном столбе. Пиком возникновения медуллобластом является возраст семь лет. Семьдесят процентов медуллобластом возникает у людей моложе 16 лет. Десмопластическая медуллобластома особенно распространена во взрослом возрасте. Этот тип опухоли редко встречается вне пятого десятилетия жизни.

Настоящее изобретение относится к способу для лечения или профилактики нейробластомы, рака, который формируется в нервной ткани. Клетки нейробластомы обычно напоминают очень примитивные развивающиеся нервные клетки, обнаруживаемые в эмбрионе или плоде. Термин «нейро» указывает "нервы", в то время как бластома относится к раку, который воздействует на незрелые или развивающиеся клетки. Нейроны (нервные клетки) представляют собой главный компонент головного мозга и спинного мозга и нервов, которые соединяют их с остальной частью тела. Нейробластома обычно возникает в надпочечниках, но может также возникнуть в спинном мозге. Нейробластома представляет собой самый распространенный внечерепной солидный рак у детей. В 2007 году нейробластома была самым распространенным раком в грудном возрасте, которого ежегодно в США регистрировали приблизительно 650 новых случаев. Около 50 процентов случаев нейробластом встречаются у детей младше двух лет. Она представляет собой нейроэндокринную опухоль, возникающую из любого нейрального гребня симпатической нервной системы, или СНС. Отдел автономной нервной системы, СНС представляет собой нервную сеть, которая несет сообщения от мозга по всему телу и ответственна за реакцию борьбы-или-бегства и продукцию адреналина или эпинефрина.

Изобретение относится к способу лечения или профилактики нейроэпителиом, злокачественных опухолей нейроэпителия. Нейроэпителиомы обычно обнаруживаются у детей и взрослых молодого возраста. Они возникают чаще всего в грудной стенке, тазу или конечностях, либо в костях, либо в мягких тканях. Процедуры, используемые в диагностике, могут включать исследования крови и мочи, рентген пораженной кости и целого тела и легких, аспирацию костного мозга, СТ сканирование и флуороскопию. Лечение включает хирургию, лучевую терапию и химиотерапию. Опухоли Юинга являются примером типа периферической нейроэпителиомы.

Было показано, что киназы играют роль в раке мозга. Профили экспрессии генов мультиформной глиобластомы позволили идентифицировать тирозин киназы как играющие роли в миграции/инвазии глиом. Например, PYK2 представляет собой член семейства фокальной адгезии нерецепторных тирозин киназ; он близко связан с src-индуцированной увеличенной полимеризацией актина на периферии фибробластных клеток. Его роль в миграции/инвазии глиом стала более ясной, поскольку суперэкспрессия PYK2 индуцировала миграцию клеток глиобластомы в культуре. Уровни активированного PYK2 положительно коррелируют с фенотипом миграции на четырех линиях клеток глиобластомы (SF767, G112, T98G и U118). Анализ активированного PYK2 в инвазии GBM in situ обнаружил стойкое окрашивание в инфильтрирующих клетках GBM. (См., Hoelzinger et al, Neoplasia, vol. 7(1)7-16). Таким образом, модуляция рецептора киназы с использованием соединения по изобретению может быть полезной в профилактике или лечении рака мозга, такого как мультиформная глиобластома.

Изобретение также относится к способу лечения или профилактики рака или нарушения пролиферации у пациента, включающему введение композиции, включающей эффективное количество в основном чистого KX2-391, или его соли, сольвата, гидрата или пролекарства, например, в основном чистого KX2-391, KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA. Изобретение включает введение эффективного количества в основном чистого полиморфа KX2-391^.MSA, например, Формы A.

Потеря слуха

Как описано здесь, соединение по изобретению или его соль может использоваться для защиты против или профилактики потери слуха у пациента. В одном аспекте, полиморф по изобретению может использоваться для защиты против или профилактики потери слуха у пациента. Для защиты против или профилактики потери слуха, соединение или соль могут вводиться до шумового воздействия или воздействия лекарственного средства, которое вызывает потерю слуха, для предотвращения потери слуха или уменьшения уровня потери слуха. Такие лекарственные средства, которые вызывают потерю слуха, могут включать химиотерапевтические лекарственные средства (например, лекарственные средства на основе платины, которые нацеливают волосатые клетки) и аминогликозидные антибиотики. Соединение по изобретению или его соль может приводить к синергическому эффекту с некоторыми противораковыми лекарственными средствами. Например, многообещающие ингибиторы могут быть скринированы в тестах на первичных человеческих опухолевых тканях, особенно для поиска синергизма с другими известными противораковыми лекарственными средствами. Кроме того, ингибиторы протеинкиназы могут снижать токсичность некоторых противораковых лекарственных средств (например, лекарственных средств на основе платины, которые являются токсичными для улитки и почек), таким образом позволяя увеличить дозировку.

Альтернативно, соединение по изобретению или его соль может использоваться для лечения потери слуха у пациента. В этом варианте осуществления, соединение или соль вводят пациенту после начала потери слуха, чтобы уменьшить уровень потери слуха. Соединение по изобретению может участвовать в коррекции киназного каскада, например, ингибитора киназы, не-АТФ конкурентного ингибитора, ингибитора тирозин киназы, ингибитора Src или модулятора киназы фокальной адгезии (FAK). Не желая быть связанными с теорией, считают, что введение ингибиторов киназы предотвращает апоптоз кохлеарных волосатых клеток, таким образом предотвращая потерю слуха. В одном варианте осуществления, соединение по изобретению или его соль вводят пациенту, страдающему потерей слуха, чтобы предотвратить дальнейшую потерю слуха. В другом варианте осуществления, соединение по изобретению или его соль вводят пациенту, страдающему потерей слуха, чтобы восстановить потерянный слух. В частности, после шумового воздействия, тесные клеточные связи между кохлеарными волосатыми клетками, а также взаимодействие клетка-внеклеточный матрикс, рвутся и подвергаются нагрузке. Нагрузка на эти тесные клеточные связи инициирует апоптоз в клетках через комплексный сигнальный путь, в котором тирозин киназы действуют как молекулярные выключатели, взаимодействуя с киназой фокальной адгезии для трансдукции сигналов разрывов между клеткой и матриксом к ядру. Считается, что введение ингибиторов киназы предотвращает инициацию апоптоза в этом каскаде.

Идентификация апоптоза в подвергшейся воздействию шума улитке дала множество новых возможностей для профилактики вызванной шумом потери слуха (NIHL) (Hu, et al.; 2000, Acta. Otolaryngol., 120, 19-24). Например, ухо может быть защищено от NIHL введением антиоксидантных лекарственных средств в круглое окно уха (Hight, et al.; 2003, Hear. Res., 179, 21-32; Hu, et al.; Hear. Res. 113, 198-206). В частности, NIHL был уменьшен введением апробированных FDA антиоксидантных соединений (N-L-ацетилцистеина (L-NAC) и салицилата) у шиншиллы (Kopke, et al.; 2000, Hear. Res., 149, 138-146). Кроме того, Harris et al. недавно описали профилактику NIHL с ингибиторами Src-PTK (Harris, et al.; 2005, Hear. Res., 208, 14-25). Таким образом, вероятно, что введение соединения согласно настоящему изобретению, которое модулирует активность киназ, является полезным для лечения потери слуха.

Изменения в присоединения клеток или клеточного стресса могут активировать различные сигналы через активацию интегринов и через фосфорилирование PTK, включая семейство Src тирозин киназ. Взаимодействия Src были связаны с сигнальными путями, которые изменяют цитоскелет и активируют различные каскады протеинкиназы, которые регулируют выживание клеток и транскрипцию генов (рассматривается в Giancotti and Ruoslahti; 1999, Science, 285, 1028-1032). Фактически, недавние результаты показали, что внешние волосатые клетки (OHC), которые отделились от клеточной основы после интенсивного шумового воздействия, подвергались апоптотической гибели клеток. В частности, считается, что Src PTK сигнальный каскад участвует как в метаболически-, так и механически-индуцированной инициации апоптоза в чувствительных клетках улитки. В недавнем исследовании, ингибиторы Src обеспечили защиту от 4 часового шума в диапазоне октавы на 4 кГц при 106 децибелах, что показывает, что Src-PTK могут быть активированы во внешних волосатых клетках после шумового воздействия (Harris, et al.; 2005, Hear. Res., 208, 14-25). Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению, которые модулируют активность Src, могут быть использованы в лечении потери слуха.

Другой аспект изобретения включает способ защиты от или лечения потери слуха у пациента, включающий введение композиции, включающей эффективное количество в основном чистого KX2-391 или его соли, сольвата, гидрата или пролекарства, например, в основном чистого KX2-391, KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA. Изобретение включает введение эффективного количества в основном чистого полиморфа KX2-391^.MSA, например, Формы A.

В одном варианте осуществления, соединение вводят до начала потери слуха. В другом варианте осуществления, соединение вводят после начала потери слуха.

В одном варианте осуществления, соединение вводят в комбинации с лекарственным средством, которое вызывает потерю слуха, например, цисплатином или аминогликозидным антибиотиком. В другом варианте осуществления, соединение вводят в комбинации с лекарственным средством, которое нацеливает волосатые клетки.

Остеопороз

Настоящее изобретение относится к способу защиты от или лечения остеопороза у пациента. В одном аспекте, способ включает защиту от или лечение остеопороза с использованием полиморфа по изобретению. Этот способ включает введение эффективного количества соединения по изобретению или его соли пациенту для защиты от или лечения остеопороза. Для защиты от остеопороза, соединение или соль могут вводиться до развития остеопороза. Альтернативно, соединение или соль могут использоваться для лечения остеопороза у пациента. В одном варианте осуществления, соединение или его соль вводят пациенту после инициации остеопороза, чтобы уменьшить уровень остеопороза.

Соединение по изобретению или его соль может быть, например, не-АТФ конкурентным ингибитором. Соединение по изобретению или его соль может модулировать сигнальный каскад киназы, в зависимости от специфических боковых цепей и выбранных модификаций остова. Соединение по изобретению может быть ингибитором киназы. Например, соединение или соль могут быть ингибиторами протеин-тирозин киназы (PTK). Богатая пролином тирозин киназа (PYK2; также известная как β киназа адгезии клеток, родственная тирозин киназа фокальной адгезии или кальций-зависимая тирозин киназа) и киназа фокальной адгезии (FAK) являются членами отдельного семейства нерецепторных протеин-тирозин киназ, которые регулируются различными внеклеточными стимулами (Avraham, et al.; 2000, Cell Signal., 12, 123-133; Schlaepfer, et al.; 1999, Prog. Biophys. Mol. Biol., 71, 435-478). Соединение по изобретению или его соль может быть ингибитором Src. Показано, что дефицит Src связан с остеопорозом у мышей из-за потери функции остеокластов (Soriano, et al.; 1991, Cell, 64, 693-702). Альтернативно, соединение по изобретению или его соль может модулировать экспрессию киназы М, связанной с рецептором интерлейкина-1 (IRAK-M). Мыши с дефицитом IRAK-M проявляют тяжелый остеопороз, который связан с ускоренной дифференцировкой остеокластов, увеличением периода полужизни остеокластов и их активацией (Hongmei, et al.; 2005, J. Exp. Med., 201, 1169-1177).

Многоядерные остеокласты происходят от слияния одноядерных фагоцитов и играют главную роль в развитии и реконструкции костей через резорбцию костей. Остеокласты представляют собой многоядерные, окончательно дифференцированные клетки, которые разлагают минерализованный матрикс. В нормальной костной ткани существует баланс между остеогенезом, осуществляемым остеобластами, и резорбцией кости остеокластами. Когда баланс этого динамического и высоко регулируемого процесса нарушается, резорбция кости может превысить остеогенез, приводя к количественной потере костной массы. Поскольку остеокласты являются существенными для развития и реконструкции костей, увеличение их числа и/или активности приводит к заболеваниям, которые связаны с генерализованной потерей костной массы (например, остеопороз), и другим с ограниченной потерей костной массы (например, ревматоидный артрит, периодонтальное заболевание).

Остеокласты и остеобласты командуют множеством клеточных путей трансдукции сигналов, включающих протеинкиназы. Активация остеокластов инициируется адгезией к кости, перестройкой цитоскелета, формированием зоны контакта (sealing zone) и формированием поляризованной складчатой мембраны. Считается, что протеин-тирозин киназа 2 (PYK2) участвует в передаче сигналов от поверхности клетки к цитоскелету, поскольку она является тирозин фосфорилированной и активируемой инициированной адгезией трансдукцией сигналов в остеокластах (Duong, et al.; 1998, J. Clin. Invest., 102, 881-892). Недавние исследования показали, что снижение содержания белка PYK2 приводит к ингибированию формирования остеокластов и резорбции кости in vitro (Duong, et al.; 2001, J. Bio. Chem., 276, 7484-7492). Поэтому ингибирование PYK2 или других протеин-тирозин киназ, по-видимому, может уменьшить уровень остеопороза, снижая формирование остеокластов и резорбцию кости. Таким образом, без желания быть связанными с теорией, вероятно, что введение соединения согласно настоящему изобретению или его соли может модулировать активность киназы (например, PTK) и поэтому приводить к ингибированию формирования остеокластов и/или резорбции кости, таким образом излечивая остеопороз.

Src тирозин киназа представляется многообещающей терапевтической мишенью для заболевания костей, что подтверждено исследованиями на мышах с нокаутом по Src и клеточными экспериментами in vitro, что позволяет предположить регулирующую роль Src как в остеокластах (положительная), так и в остеобластах (отрицательная). В остеокластах Src играет ключевые роли в подвижности, поляризации, выживании, активации (формирование фестончатого края) и адгезии, опосредуя различные пути трансдукции сигналов, особенно трансдукции сигналов цитокина и интегрина (Parang and Sun; 2005, Expert Opin. Ther. Patents, 15, 1183-1207). Кроме того, нацеленное разрушение гена src у мышей вызывает остеопетроз, нарушение, характеризующееся сниженной резорбцией кости, не показывая никаких очевидных морфологических или функциональных аномалий в других тканях или клетках (Soriano, et al.; 1991, Cell, 64, 693-702). Остеопетрозный фенотип src ^-/- мышей является клеткоавтономным и следует из дефектов в зрелых остеокластах, которые обычно экспрессируют высокие уровни белка Src (Horne, et al.; 1991, Cell, 119, 1003-1013). Ограничивая эффективность Src тирозин киназы, которая запускает активность остеокласта и ингибирует остеобласты, ингибиторы Src, как считается, уменьшают ломкость костей и стимулируют остеогенез. Поскольку остеокласты обычно экспрессируют высокие уровни Src, ингибирование активности киназы Src могло бы быть полезно в лечении остеопороза (Missbach, et al.; 1999, Bone, 24, 437-449). Таким образом, ингибиторы PTK согласно настоящему изобретению, которые модулируют активность Src, могут быть использованы в лечении остеопороза.

Например, нокаут гена Src у мышей приводила только к одному дефекту, а именно, остеокластам, которые не в состоянии формировать фестончатые края и следовательно осуществлять резорбцию костей. Однако функция остеокласта в отношении резорбции кости сохранялась у этих мышей при введении киназа-дефектного гена Src (Schwartzberg et al., (1997) Genes & Development 11: 2835-2844). Это позволило предположить, что активность киназы Src можно ингибировать in vivo, не вызывая единственную известную токсичность, поскольку присутствие белка Src является очевидно достаточным для того, чтобы рекрутировать и активировать другие PTK (которые являются существенными для поддержания функции остеокластов) в существенном сигнальном комплексе остеокластов.

Другой аспект изобретения включает способ защиты от или лечения остеопороза у пациента, включающий введение композиции, включающей эффективное количество в основном чистого KX2-391 или его соли, сольвата, гидрата или пролекарства, например, в основном чистого KX2-391, KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA. Изобретение включает введение эффективного количества в основном чистого полиморфа KX2-391^.MSA, например, Формы A.

В одном варианте осуществления, соединение или соль вводят до начала остеопороза. В другом варианте осуществления, соединение или соль вводят после начала остеопороза.

Ожирение

Как описано здесь, соединение по изобретению или его соль может использоваться для защиты от или предупреждения ожирения у пациента. В одном аспекте, полиморф по изобретению может использоваться для защиты от или предупреждения ожирения у пациента. Для защиты от ожирения, соединение или соль могут вводиться до развития ожирения у пациента. Например, соединение или соль могут вводиться для предотвращения или уменьшения увеличения массы тела. Альтернативно, соединение или соль могут использоваться для лечения ожирения у пациента. Соединение согласно настоящему изобретению или его соль может участвовать в модуляции сигнального каскада киназы, например, ингибитора киназы, не-АТФ конкурентного ингибитора, ингибитора тирозин киназы, ингибитора протеин-тирозинфосфатазы или ингибитора протеин-тирозин фосфатазы 1B.

Ожирение часто ассоциировано с диабетом и увеличенной инсулинорезистентностью в инсулинчувствительных тканях, таких как скелетная мышца, печень и белая жировая ткань (Klaman, et al.; 2000, Mol. Cell. Biol., 20, 5479-5489). Инсулин играет критическую роль в регуляции гомеостаза глюкозы, метаболизма липидов и энергетического баланса. Трансдукция сигналов инсулина инициируется связыванием инсулина с инсулиновым рецептором (IR), рецепторной тирозин киназой. Связывание инсулина вызывает каскад событий фосфорилирования, начиная с автофосфорилирования IR на множественных тирозиловых остатках. Автофосфорилирование усиливает активность киназы IR и вызывает события даунстрим сигнального пути. Стимулирующие эффекты протеин-тирозин киназ и ингибирующие эффекты протеин-тирозин фосфатаз в значительной степени определяют действие инсулина. Адекватная трансдукция сигналов инсулина минимизирует большие колебания концентраций глюкозы в крови и обеспечивает адекватную доставку глюкозы к клеткам. Так как инсулиновая стимуляция приводит к множественным событиям фосфорилирования тирозила, увеличенная активность одной или более протеин-тирозин фосфатаз (PTP) может привести к инсулинорезистентности, которая может привести к ожирению. Действительно, об увеличенной активности PTP сообщалось в случае нескольких состояний, связанных с резистентностью к инсулину, включая ожирение (Ahmad, и др.; 1997, Метаболизм, 46, 1140-1145). Таким образом, без желания быть связанными с теорией, введение соединения согласно настоящему изобретению или его соли модулирует активность киназы (например, PTP), таким образом приводя к лечению ожирения у пациента.

Трансдукция сигналов инсулина начинается с активации IR через фосфорилирование тирозина и достигает кульминации в захвате глюкозы в клетки транспортером глюкозы, GLUT4 (Saltiel and Kahn; 2001, Nature, 414, 799-806). Активированный IR должен тогда быть дезактивирован и возвращен к основному состоянию, что представляет собой процесс, который, как считается, включает протеин-тирозинфосфатазу-1B (PTP-1B) (Ahmad, et al; 1997, J. Biol. Chem., 270, 20503-20508). Разрушение гена, который кодирует PTP-1B, у мышей приводит к чувствительности к инсулину и увеличенной устойчивости к вызываемому питанием ожирению (Elchebly, et al.; 1999, Science, 283, 1544-1548; Klaman, et al.; 2000, Mol. Cell. Biol., 20, 5479-5489). Уменьшение жировой ткани у мышей с дефицитом PTP-1B была следствием выраженного сокращения массы жировых клеток без уменьшения числа адипоцитов (Klaman, et al.; 2000, Mol. Cell. Biol., 20, 5479-5489). Кроме того, истощение у мышей с дефицитом PTP-1B сопровождалось усиленным основным обменом и расходами полной энергии, без отмеченной альтерации экспрессии мРНК разобщающего белка. Разрушение гена PTP-1B продемонстрировало, что изменение активности PTP-1B может модулировать трансдукцию сигналов инсулина и вызванное питанием ожирение in vivo. Таким образом, без желания быть связанными с теорией, введение соединения согласно настоящему изобретению, которое модулирует трансдукцию сигналов инсулина (например, активность PTP-1B), может быть использовано в лечении ожирения у пациента.

Другой аспект изобретения включает способ защиты от или лечения ожирения у пациента, включающий введение композиции, включающей эффективное количество в основном чистого KX2-391 или его соли, сольвата, гидрата или пролекарства, например, в основном чистого KX2-391, KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA. Изобретение включает введение эффективного количества в основном чистого полиморфа KX2-391 MSA, например, Формы A.

В одном варианте осуществления, соединение или соль вводят до развития ожирения у пациента. В другом варианте осуществления, соединении или соль вводят после развития ожирения у пациента.

Диабет

Как описано здесь, соединение по изобретению или его соль может использоваться для защиты от или профилактики диабета у пациента. В одном аспекте, полиморф по изобретению может использоваться для защиты от или профилактики диабета. Для защиты от диабета, соединение или соль могут вводиться до развития диабета у пациента. Альтернативно, соединение или соль могут использоваться для лечения диабет у пациента. Соединение согласно настоящему изобретению или его соль может участвовать в модуляции сигнального каскада киназы, например ингибитора киназы, не-АТФ конкурентного ингибитора, ингибитора тирозин киназы, ингибитора фосфатазы и гомолога тензина на хромосоме 10 (PTEN) или ингибитора инозитол-5'-фосфатазы 2, содержащей гомологию последовательности 2 (SHIP2).

Сахарный диабет типа 2 (T2DM) представляет собой нарушение, связанное с нарушением регуляции энергетического метаболизма. Энергетический метаболизм в значительной степени контролируется гормоном инсулином, мощным анаболическим агентом, который промотирует синтез и запасание белков, углеводов и липидов и ингибирует их распад и высвобождение обратно в кровоток. Действие инсулина инициируется при связывании с его тирозин киназным рецептором, что приводит к автофосфорилированию и увеличенной активности катализатора киназы (Patti, et al.; 1998, J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol. 9, 89-109). Фосфорилирование тирозина заставляет белки субстрата инсулинового рецептора (IRS) взаимодействовать с p85 регуляторной субъединицей фосфатидилинозитол-3 киназы (PI3K), приводя к активации фермента и его нацеливанию на определенный субклеточный участок в зависимости от типа клетки. Фермент производит липидный продукт фосфатидилинозитол-3,4,5-трифосфат (PtdIns(3,4,5)P₃), который регулирует локализацию и активность многочисленных белков (Kido, et al.; 2001, J. Clin. Endocrinol. Metab., 86, 972-979). PI3K играет существенную роль в стимулируемом инсулином захвате и запасании глюкозы, ингибировании липолиза и регуляции экспрессии генов печени (Saltiel, et al.; 2001, Nature, 414, 799-806). Суперэкспрессия доминант-интерферирующих форм PI3K может блокировать захват глюкозы и транслокацию глутаматного транспортера четыре, GLUT4, к плазматической мембране (Quon, et al.; 1995, Mol. Cell. Biol., 15, 5403-5411). Таким образом, введение соединения согласно настоящему изобретению, которое модулирует активность киназы (например, PI3K) и поэтому приводит к увеличенному захвату глюкозы, является полезным в лечении диабета.

PTEN представляет собой главный регулятор сигнального пути PI3K во многих типах клеток и функционирует как супрессор опухоли в силу антагонизма антиапоптотических, пролиферативных и гипертрофических активностей пути PI3K (Goberdhan, et al.; 2003, Hum. Mol. Genet., 12, R239-R248; Leslie, et al.; 2004, J. Biochem., 382, 1-11). Не желая быть связанными с теорией, считают, что PTEN аттенуирует путь PI3K дефосфорилированием молекулы PtdIns(3,4,5)P₃, разлагая этот важный липидный второй медиатор до PtdIns(4,5)P₂. В недавнем исследовании, сокращение эндогенного белка PTEN на 50% с использованием малой интерферирующей РНК (siРНК) усиливало инсулин-зависимые увеличения уровней PtdIns(3,4,5)P₃ и захват глюкозы (Tang, et al.; 2005, J. Biol. Chem., 280, 22523-22529). Таким образом, без желания быть связанными с теорией, вероятно, что введение соединения согласно настоящему изобретению, которое модулирует активность PTEN и поэтому приводит к увеличенному захвату глюкозы, является полезным для лечения диабета.

Уровни PtdIns(3,4,5)P₃ также контролируются семейством белков инозитол-5'-фосфатазы, содержащей SRC гомологию 2 (SH2) (SHIP), SHIP1 и SHIP2 (Lazar and Saltiel; 2006, Nature Reviews, 5, 333-342). SHIP2, экспрессируемый в скелетной мышце, среди других чувствительных к инсулину тканей, катализирует превращение PtdIns(3,4,5)P₃ в PtdIns(3,4)P₂ (Pesesse, et al.; 1997; Biochem Biophys. Res. Commun., 239, 697-700; Backers, et al.; 2003, Adv. Enzyme Regul., 43, 15-28; Chi, et al.; 2004, J. Biol. Chem., 279, 44987-44995; Sleeman, et al.; 2005, Nature Med., 11, 199-205). Суперэкспрессия SHIP2 заметно уменьшала стимулируемые инсулином уровни PtdIns(3,4,5)P₃, что коррелировало с предположенной способностью SHIP2 аттенуировать активацию даунстрим-эффекторов PI3K (Ishihara, et al.; 1999, Biochem. Biophys. Res. Commun., 260, 265-272). Таким образом, без желания быть связанными с теорией, вероятно, что введение соединения согласно настоящему изобретению, которое модулирует активность SHIP2 и поэтому приводит к увеличенному захвату глюкозы, является полезным для лечения диабета.

Другой аспект изобретения включает способ защиты от или лечения диабета у пациента, включающий введение композиции, включающей эффективное количество в основном чистого KX2-391 или его соли, сольвата, гидрата или пролекарства, например, в основном чистого KX2-391, KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA. Изобретение включает введение эффективного количества в основном чистого полиморфа KX2-391^.MSA, например, Формы A.

В одном варианте осуществления, соединение или соль вводят до начала диабета. В другом варианте осуществления, соединение или соль вводят после начала заболевания.

Глазное заболевание

Как описано здесь, соединение по изобретению может использоваться для защиты от или профилактики глазного заболевания у пациента. В одном аспекте, полиморф по изобретению может использоваться для защиты от или профилактики глазного заболевания. Для защиты от глазного заболевания соединение или соль могут вводиться до развития глазного заболевания у пациента. Альтернативно, соединение или соль могут использоваться для лечения глазного заболевания у пациента, например, дегенерации желтого пятна, ретинопатии и отека желтого пятна. Соединение согласно настоящему изобретению или соль может участвовать в модуляции каскада киназы, например, ингибитора киназы, не-АТФ конкурентного ингибитора, ингибитора тирозин киназы, например, ингибитора тирозин киназы рецептора фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF).

Может иметь место угрожающее зрительному восприятию образование новых сосудов физиологически аваскулярной роговицы. Пролиферативные ретинопатии, преимущественно диабетическая ретинопатия и возрастная дегенерация желтого пятна, характеризуются увеличенной проницаемостью сосудов, приводя к отеку сетчатки и подсетчаточному накоплению жидкости и пролиферации новых сосудов, которые склонны к кровотечению. Ангиогенез, формирование новых кровеносных сосудов из существующих ранее капилляров, является неотъемлемой частью как нормального развития, так и многочисленных патологических процессов. VEGF, центральный медиатор сложного каскада ангиогенеза и мощный фактор проницаемости, является привлекательной мишенью для новой терапии. VEGF является лигандом для двух мембраносвязанных рецепторов тирозин киназы, VEGFR-1 и VEGFR-2. Связывание лиганда вызывает димеризацию VEGFR и трансфосфорилирование с последующей активацией внутриклеточного домена тирозин киназы. Образующаяся в результате ось внутриклеточной трансдукции сигналов приводит к пролиферации, миграции и выживанию клеток эндотелия сосудов. Таким образом, без желания быть связанными с теорией, вероятно, что введение соединения согласно настоящему изобретению или его соли, которое модулирует активность киназы, например, активность тирозин киназы, и приводит к ингибированию ангиогенеза и/или образования новых сосудов, является полезным для лечения глазного заболевания, например, дегенерации желтого пятна, ретинопатии и/или отека желтого пятна.

Дегенерация желтого пятна характеризуется VEGF-опосредованной протечкой сетчатки (увеличение сосудистой проницаемости) и ненормальным ростом малых кровеносных сосудов позади глаза (ангиогенез). VEGF был идентифицирован в неоваскулярных мембранах как при диабетической ретинопатии, так и при возрастной дегенерации пятна, и внутриглазные уровни фактора коррелируют с серьезностью образования новых сосудов при диабетической ретинопатии (Kvanta, et al.; 1996, Invest. Ophthal. Vis. Sci., 37, 1929-1934.; Aiello et al., 1994, N. Engl. J. Med., 331, 1480-1487). Терапевтический антагонизм VEGF в этих моделях приводит к значительному ингибированию и сетчаточного, и хориоидального образования новых сосудов, а также к сокращению проницаемости сосудов (Aiello, et al.; 1995, Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 92, 10457-10461; Krzystolik, et al.; 2002, Arch. Ophthal., 120, 338-346; Qaum, et al.; 2001, Invest. Ophthal. Vis. Sci., 42, 2408-2413). Таким образом, без желания быть связанными с теорией, вероятно, что введение соединения согласно настоящему изобретению, которое модулирует активность VEGF и приводит к ингибированию ангиогенеза и/или образования новых сосудов, является полезным для лечения глазного заболевания, например, дегенерации желтого пятна, ретинопатии и/или отека желтого пятна.

Другой аспект изобретения включает способ защиты от или лечения глазных заболеваний, например, дегенерации желтого пятна, ретинопатии, отека желтого пятна и т.д. у пациента, включающий введение композиции, включающей эффективное количество в основном чистого KX2-391 или его соли, сольвата, гидрата или пролекарства, например, в основном чистого KX2-391, KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA. Изобретение включает введение эффективного количества в основном чистого полиморфа KX2-391^.MSA, например, Формы A.

В одном варианте осуществления, соединение или соль вводят до начала глазного заболевания. В другом варианте осуществления, соединение или соль вводят после начала глазного заболевания.

Инсульт

Соединения по изобретению или его соли используются в способах лечения, профилактики или облегчения у пациента, который подвергается риску инсульта, страдает от инсульта или перенес инсульт. В одном аспекте, полиморф по изобретению используется в способах лечения, профилактики или облегчения инсульта. Соединения по изобретению или его соли пригодны для использования в способах лечения пациентов, которые проходят реабилитацию после инсульта.

Инсульт, также известный как острое нарушение мозгового кровообращения (CVA), является острым неврологическим повреждением, в результате которого кровоснабжение в части мозга прерывается вследствие либо закупорки артерии, либо разрушения кровеносного сосуда. Часть мозга, в котором кровоснабжение больше не прервано, получает кислород и/или питательные вещества, которые несет кровь. Клетки мозга повреждаются или некротизируют, таким образом ослабляя функцию в этой части мозга. Мозговая ткань прекращает функционировать, если она лишена кислорода в течение более чем 60-90 секунд и после нескольких минут получает необратимое повреждение, возможно приводящее к гибели ткани, то есть, инфаркту.

Инсульты классифицируются в два основных типа: ишемический, то есть, закупорка кровеносного сосуда, снабжающего мозг, и геморрагический, то есть, кровотечение в мозг или окружающее мозг пространство. Большинство всех инсультов представляют собой ишемические инсульты. Ишемический инсульт обычно подразделяется на тромботический инсульт, эмболический инсульт, системную гипоперфузию (инсульт водораздела) или венозный тромбоз. При тромботическом инсульте, формирующий тромб процесс развивается в пораженной артерии, тромб, то есть, кровяной сгусток, постепенно сужает просвет артерии, таким образом препятствуя кровотоку в дистальной ткани. Эти сгустки обычно формируются вокруг атеросклеротических бляшек. Есть два типа тромботических инсультов, которые разделяют на категории на основании типа сосуда, на котором сформировался тромб. Тромботический инсульт крупных сосудов включает общие и внутренние сонные артерии, позвоночные артерии и артериальный круг большого мозга. Тромботический инсульт малых сосудов включает внутрицеребральные артерии, ответвления артериального круга большого мозга, ствол средней мозговой артерии и артерии, отходящие от дистальной позвоночной и базилярной артерии.

Тромб, даже неокклюдирующий, может привести к эмболическому инсульту, если тромб разрывается, при этом становясь эмболом. Эмбол относится к перемещающейся частице или остаткам органических веществ в артериальном кровотоке, происходящим из другого места. Эмболический инсульт относится к закупорке эмболом артериального доступа к части мозга. Эмбол часто представляет собой кровяной сгусток, но он может также быть бляшкой, оторвавшейся от атеросклеротического кровеносного сосуда, или множеством других веществ, включая жир, воздух и даже злокачественные клетки. Поскольку эмбол происходит из другого места, местная терапия только временно решает проблему. Таким образом, источник эмбола должен быть идентифицирован. Существует четыре категории эмболического инсульта: с известным кардиальным источником; с потенциальным кардиальным или аортальным источником (от трансторакальной или трансэзофагальной эхокардиограммы); с артериальным источником; и с неизвестным источником.

Системная гипоперфузия представляет собой сокращение кровотока ко всем частям тела. Она обычно является следствием недостаточности нагнетательной функции сердца в результате остановки сердца или аритмий, или сниженного функционального состояния сердца в результате инфаркта миокарда, легочной эмболии, перикардиального выпота или кровотечения. Пониженная кислотность (то есть, низкое содержание кислорода в крови) может приводить к гипоперфузии. Поскольку сокращение кровотока является глобальным, могут быть затронуты все части мозга, особенно области "водораздела", которые являются областями пограничной зоны, снабжаемыми главными мозговыми артериями. Кровоток к этим областям не обязательно прекращается, но может снижаться до такой степени, когда происходит повреждение головного мозга.

Вены в мозге функционируют, дренируя кровь назад к телу. Когда вены окклюдируют вследствие тромбоза, дренирование крови блокируется, и кровь застаивается, вызывая отек мозга. Этот отек мозга может привести как к ишемическому, так и к геморрагическому инсульту. Это обычно происходит при редком заболевании - тромбозе венозного синуса.

Инсульт диагностируют у лица или пациента, используя одну или более методик, известных в данной области техники, таких как, например, неврологическая экспертиза, анализы крови, CT-сканирование (без контрастных усилений), ЯМР-сканирование, Доплеровское ультразвуковое исследование и артериография (то есть, рентгенография артерий после инъекции радиоконтрастного материала в кровоток). Если инсульт подтвержден визуально, осуществляют различные другие исследования, чтобы определить, имеется ли периферический источник эмбол. Эти исследования включают, например, ультразвуковое/Доплеровское исследование сонных артерий (для обнаружения каротидного стеноза); электрокардиограмма (ЭКГ) и эхокардиограмма (для идентификации аритмий и результирующего свертывания в сердце, которое может распространиться в сосуды мозга через кровоток); мониторинг Holter для идентификации неустойчивых аритмий и ангиограммы мозговой сосудистой сети (если считают, что кровотечение происходит от аневризмы или порока развития артериовенозной системы).

Соединения или соли, пригодные для использования в этих способах лечения, профилактики или облегчения инсульта или симптома, связанного с инсультом, представляют собой соединения или соли, которые модулируют сигнальный каскад киназы до, в ходе или после инсульта. В некоторых вариантах осуществления, соединение или соль является ингибитором киназы. Например, соединение или соль представляет собой ингибитор тирозин киназы. В варианте осуществления, ингибитор тирозин киназы представляет собой ингибитор Src. Например, соединение или соль, используемые в способах лечения, профилактики или облегчения инсульта или симптома, связанного с инсультом, описанные здесь, представляют собой аллостерический ингибитор сигнального каскада киназы до, в ходе или после инсульта. Предпочтительно, соединение или соль, используемые в способах лечения, профилактики или облегчения инсульта или симптома, связанного с инсультом, описанные здесь, представляют собой не-АТФ конкурентный ингибитор сигнального каскада киназы до, в ходе или после инсульта.

Было показано, что ингибирование активности Src обеспечивает защиту мозга в ходе инсульта (См. Paul et al., Nature Medicine, vol. 7(2):222-227 (2001), который тем самым полностью включен путем ссылки). Было показано, что фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), который продуцируется в ответ на ишемическое повреждение, промотирует проницаемость сосудов. Исследования показали, что киназа Src регулирует VEGF-опосредованный VP в мозге после инсульта, и введения ингибитора Src до и после инсульта уменьшает отек, улучшает мозговую перфузию и уменьшает объем инфаркта после того, как повреждение имело место (Paul et al., 2001). Таким образом, ингибирование Src может быть полезным в профилактике, лечении или облегчении вторичного повреждения после инсульта.

Соединения по изобретению или их соли предотвращают, лечат или облегчают инсульт или симптомы, связанные с инсультом. Симптомы инсульта включают внезапное онемение или слабость, особенно на одной стороне тела; внезапную спутанность или расстройство речи или понимания речи; внезапное нарушение зрения в одном или обоих глазах; внезапная нарушения ходьбы, головокружение или потерю равновесия или координации; или внезапную сильную головную боль без известной причины.

Вообще существуют три стадии лечения инсульта: профилактика, терапия немедленно после инсульта и реабилитация после инсульта. Терапии для предотвращения первого или рекуррентного инсульта основаны на лечении основных факторов риска инсульта, таких как, например, артериальная гипертензия, высокий холестерин, фибрилляция предсердий и диабет. Терапии острого инсульта основаны на попытках остановить инсульт, в то время как он происходит, быстро растворяя кровяной сгусток, вызывающий ишемический инсульт, или останавливая кровотечение при геморрагическом инсульте. Реабилитация после инсульта помогает людям преодолевать нарушения, возникающие вследствие повреждения при инсульте. Лечение или лекарственная терапия представляют собой самое общее лечение инсульта. Самыми популярными классами лекарственных средств, используемых для профилактики или лечения инсульта, являются анти-тромботические лекарственные средства (например, антитромбоцитарные средства и антикоагулирующие средства) и тромболитики. Соединения или соли вводят пациенту, который подвергается риску инсульта, страдает от инсульта или перенес инсульт, одновременно до, в ходе, после инсульта, или используют любую комбинацию этих введений. Соединения по изобретению или их соли вводят индивидуально, в фармацевтических композициях или в комбинации с любым из разнообразных известных лекарственных средств, таких как, например, антитромбоцитарные средства (например, аспирин, клопидогрел, дипиридамол), антикоагулирующее средство (например, варфарин) или тромболитическое средство (например, активатор плазминогена ткани (t-РА), ретеплаза, урокиназа, стрептокиназа, тенектаплаза, ланотеплаза или анистреплаза.

Другой аспект изобретения включает способ защиты от или лечения инсульта у пациента, включающий введение композиции, включающей эффективное количество в основном чистого KX2-391 или его соли, сольвата, гидрата или пролекарства, например, в основном чистого KX2-391, KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA. Изобретение включает введение эффективного количества в основном чистого полиморфа KX2-391^.MSA, например, Формы A.

В одном варианте осуществления, соединение или соль вводят до развития инсульта. В другом варианте осуществления, соединение или соль вводят после развития инсульта.

Атеросклероз

Соединения по изобретению или их соли используются в способах лечения, профилактики или облегчения атеросклероза или его симптома у пациента, у которого имеется риск атеросклероза или атеросклероз. В одном аспекте, полиморф по изобретению используется в способах лечения, профилактики или облегчения атеросклероза или его симптома.

Атеросклероз представляет собой заболевание, затрагивающее артериальный кровеносный сосуд, и обычно упоминается как "отверждение" артерий. Это вызвано формированием многократных бляшек в артериях. Атеросклеротические бляшки, хотя они компенсируются расширением артерии, могут приводить к разрушениям бляшки и стенозу (то есть, сужению) артерии, что, в свою очередь, приводит к недостаточному кровоснабжению органа, который она питает. Альтернативно, если компенсирующийся процесс расширения артерии чрезмерен, в конце концов формируется чистая аневризма. Эти осложнения являются хроническими, медленно прогрессирующими и кумулятивными. Обычно мягкая бляшка внезапно разрывается, вызывая формирование кровяного сгустка (то есть, тромба), что быстро замедляет или останавливает кровоток, что, в свою очередь, ведет к гибели тканей, питаемых артерией. Этот катастрофический случай называют образованием инфаркта. Например, тромбоз венечных сосудов коронарной артерии вызывает инфаркт миокарда, обычно известный как сердечный приступ. Инфаркт миокарда происходит, когда атеросклеротическая бляшка медленно растет во внутренней оболочке коронарной артерии и затем внезапно разрывается, полностью окклюдируя артерию и предотвращая нисходящий кровоток.

Атеросклероз и острый инфаркт миокарда диагностируют у пациента, используя любой вид клинических и/или лабораторных испытаний, такой как физическое обследование, рентгенологическое или ультразвуковое обследование и исследование крови. Например, врач или клиницист может прослушать артерии пациента, чтобы обнаружить патологический свистящий звук, названный шумом. Шум можно слышать с помощью стетоскопа, размещенного над пораженной артерией. Альтернативно, или кроме того, клиницист или врач могут проверить пульс, например, в ноге или ступне, на предмет аномалий, таких как слабость или отсутствие. Врач или клиницист может выполнить исследование крови, чтобы проверить уровень холестерина или проверить уровни кардиальных ферментов, таких как креатинкиназа, тропонин и лактатдегидрогеназа, чтобы обнаружить аномалии. Например, субъединицы тропонина I или T, которые являются высоко специфичными для миокарда, повышаются перед развитием постоянного повреждения. Положительный тропонин при установленной боли в груди может точно предсказать высокую вероятность инфаркта миокарда в ближайшем будущем. Другие тесты для диагностики атеросклероза и/или инфаркта миокарда включают, например, ЭКГ (электрокардиограмма) для измерения степени и регулярности сокращений сердца у пациента; рентгенографию грудной клетки, измерение голеностопного/плечевого индекса, в котором сравнивают кровяное давление в лодыжке с кровяным давлением в руке; ультразвуковой анализ артерий; КТ-сканирование областей интереса; вазографию; тест физической нагрузки, ядерный сканирование сердца; и магнитно-резонансное исследование (MRI) и позитронную эмиссионную томографию (РЕТ) сердца.

Соединения или соли, пригодные для использования в этих способах лечения, профилактики или облегчения атеросклероза или его симптома, представляют собой соединения или соли, которые модулируют сигнальный каскад киназы у пациента, у которого существует риск или который страдает атеросклерозом. В некоторых вариантах осуществления, соединение или соль является ингибитором киназы. Например, соединение или соль является ингибитором тирозин киназы. В варианте осуществления, ингибитор тирозин киназы является ингибитором Src. Предпочтительно, соединение или соль, используемые в способах лечения, профилактики или облегчения атеросклероза или его симптома, описанные здесь, представляют собой аллостерический ингибитор сигнального каскада киназы, участвующего в атеросклерозе. Предпочтительно, соединение или соль, используемые в способах лечения, профилактики или облегчения атеросклероза или симптома, связанного с атеросклерозом, описанные здесь, представляют собой не-АТФ конкурентный ингибитор сигнального каскада киназы, участвующего в атеросклерозе.

Клеточная трансдукция сигнала, осуществляемая Src, как полагают, играет ключевую роль в увеличенной проницаемости сосудов, известной как сосудистая проницаемость (VP). Было показано, что фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), который продуцируется в ответ на ишемическое повреждение, включая, например, инфаркт миокарда, промотирует проницаемость сосудов. Исследования показали, что ингибирование киназы Src уменьшает VEGF-опосредованный VP. (См. Parang and Sun, Expert Opin. Ther. Patents, vol. 15(9): 1183-1206 (2005), который тем самым полностью включен ссылкой). Мыши, обработанные ингибитором Src, демонстрировали сниженное повреждение ткани, связанное с травмой или повреждением кровеносных сосудов после инфаркта миокарда по сравнению с необработанными мышами. (См. например, Публикации патента США № 20040214836 и 20030130209 Cheresh et al., содержание которых тем самым полностью включено ссылкой). Таким образом, ингибирование Src может быть полезным в профилактике, лечении или облегчении вторичного повреждения после повреждения вследствие атеросклероза, такого как, например, инфаркт миокарда.

Атеросклероз вообще не проявляет симптомы, пока он не сужает серьезно артерию и ограничивает кровоток или пока он не вызывает внезапную обструкцию. Симптомы зависят от того, где развиваются бляшки и сужение, например, в сердце, мозге, других витальных органах и ногах или почти по всему телу. Начальными симптомами атеросклероза могут быть боль или судороги, когда тело требует большего количества кислорода, например, в ходе физической нагрузки, когда человек может почувствовать боль в груди (стенокардия) из-за нехватки кислорода в сердце или судороги ног в силу нехватки кислорода в ногах. Сужение артерий, снабжающих кровью мозг, может вызвать головокружение или транзиторные ишемические атаки (TIA), где симптомы и признаки инсульта длятся менее чем 24 часа. Как правило, эти симптомы развиваются постепенно.

Симптомы инфаркта миокарда характеризуются различными степенями боли в груди, дискомфортом, потливостью, слабостью, тошнотой, рвотой и аритмиями, иногда приводящими к потери сознания. Боль в груди представляет собой самый общий симптом острого инфаркта миокарда и часто описывается как ощущение напряжения, сдавления или сжатие. Боль может отдавать в челюсть, шею, руки, спину и эпигастрий, чаще всего в левую руку или шею. Боль в груди наиболее вероятно вызвана инфарктом миокарда, когда она длится в течение более чем 30 минут. Пациенты, страдающие инфарктом миокарда, могут демонстрировать одышку (диспнея), особенно, если уменьшение сокращения миокарда вследствие инфаркта является достаточным, чтобы вызвать левожелудочковый отказ с воспалением легкого или даже отеком легкого.

Соединения по изобретению или их соли вводят индивидуально, в фармацевтических композициях или в комбинации с любым из различных известных лекарственных средств для лечения атеросклероза, таким как, например, понижающие холестерин лекарственные средства (например, статины), антитромбоцитарные лекарственные средства или антикоагулирующие средства.

Другой аспект изобретения включает способ защиты от или лечения атеросклероза у пациента, включающий введение композиции, включающей эффективное количество в основном чистого KX2-391 или его соли, сольвата, гидрата или пролекарства, например, в основном чистого KX2-391, KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA. Изобретение включает введение эффективного количества в основном чистого полиморфа KX2-391 MSA, например, Формы A.

В одном варианте осуществления, соединение или соль вводят до появления симптомов атеросклероза. В другом варианте осуществления, соединение вводят после появления симптомов атеросклероза.

Нейропатическая боль

Соединения по изобретению или их соли используются в способах лечения, профилактики, облегчения нейропатической боли, такой как хроническая нейропатическая боль, или ее симптома у пациента, который подвергается риску страдать от, страдает от или перенес нейропатическую боль. В одном аспекте, полиморф по изобретению используется в способах лечения, профилактики, облегчения нейропатической боли, такой как хроническая нейропатическая боль, или ее симптома.

Нейропатическая боль, также известная как невралгия, качественно отличается от обычной ноцицептивной боли. Нейропатическая боль обычно выражается в виде устойчивого жжения и/или “булавок и иголок” и/или ощущения "удара током". Различие между ноцицептивной болью и нейропатической болью обусловлено тем, что "обычная" ноцицептивная боль стимулирует только болевые нервы, в то время как невропатия часто приводит к стимуляции как болевых, так и неболевых сенсорных нервов (например, нервов, которые отвечают на прикосновение, теплоту, холод) в той же самой области, таким образом генерируя сигналы, которые спинной мозг и головной мозг обычно не должны получать.

Нейропатическая боль представляет собой комплексное, хроническое состояние боли, которое обычно сопровождается повреждением тканей. При нейропатической боли волокна самого нерва могут повреждаться, становиться дисфункциональными или травмироваться. Эти поврежденные нервные волокна посылают некорректные сигналы другим болевым центрам. Влияние повреждения нервного волокна включает изменение функции нерва как в месте повреждения, так и областях вокруг повреждения.

Нейропатическую боль диагностируют у лица или пациента, используя одну или множества разнообразных лабораторных и/или клинических методик, известных в данной области техники, таких как, например, физическое обследование.

Соединения или соли, пригодные для использования в этих способах лечения, профилактики или облегчения нейропатической боли, такой как хроническая нейропатическая боль, или симптома, связанного с нейропатической болью, представляют собой соединения, которые модулируют киназный сигнальную каскад, участвующий в нейропатической боли.

Было показано, что c-Src регулирует активность рецепторов N-метил-D-аспартата (NMDA). (См. Yu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 96:7697-7704 (1999), который тем самым полностью включен ссылкой). Исследования показали, что PP2, низкомолекулярный ингибитор киназы Src, уменьшает фосфорилирование субъединицы NM2 рецептора NMDA. (См. Guo et al., J. Neuro., vol. 22:6208-6217 (2002), который тем самым полностью включен ссылкой). Таким образом, ингибирование Src, который, в свою очередь, ингибирует активность рецепторов NMDA, может быть полезным в профилактике, лечении или облегчении нейропатической боли, такой как хроническая нейропатическая боль.

Соединения по изобретению или их соли позволяют осуществлять профилактику, лечение или облегчение нейропатической боли, такой как хроническая нейропатическая боль, или симптома, связанного с нейропатической болью. Симптомы нейропатической боли включают взрывание и жгучую боль, покалывания и онемение.

Соединения по изобретению или их соли вводят индивидуально, в фармацевтических композициях или в комбинации с любым из разнообразных известных лекарственных средств, таких как, например, анальгетики, опиоиды, трициклические антидепрессанты, противосудорожные средства и ингибиторы обратного захвата серотонина-норэпинефрина.

В одном варианте осуществления, соединение или соль вводят перед началом хронической нейропатической боли. В другом варианте осуществления, соединение вводят после начала хронической нейропатической боли.

Другой аспект изобретения включает способ лечения, профилактики, облегчения нейропатической боли или ее симптома, у пациента, включающий введение композиции, включающей эффективное количество в основном чистого KX2-391 или его соли, сольвата, гидрата или пролекарства, например, в основном чистого KX2-391, KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA. Изобретение включает введение эффективного количества в основном чистого полиморфа KX2-391^.MSA, например, Формы A.

Гепатит B

Соединения по изобретению или их соли используются в способах лечения, профилактики или облегчения гепатита B или его симптома у пациента, для которого существует риск гепатита B или который страдает гепатитом B. В одном аспекте, полиморф по изобретению используется в способах лечения, профилактики или облегчения гепатита B или его симптома.

Вирус гепатита B, член семейства Hepadnavirus, состоит из белкового капсида, содержащего вирусный геном в форме двойной спирали ДНК с областями одинарной спирали, и внешней оболочки на основе липидов с заякоренными белками. Белки оболочки участвуют в связывании и высвобождении вируса в чувствительные клетки. Внутренний капсид перемещает геном ДНК к ядру клетки, где вирусные мРНК транскрибируются. Образуются три субгеномных транскрипта, кодирующие белки оболочки, наряду с транскриптом, кодирующим X белок. Транскрибируется четвертая прегеномная РНК, которая экспортируется в цитозоль и транслирует вирусную полимеразу и капсидные белки. Полимераза и прегеномная РНК инкапсидируются при сборке капсида, где обратная транскрипция прегеномной РНК в геномную ДНК осуществляется полимеразным белком. Зрелый капсид затем выходит из клетки через нормальные секреторные пути, приобретая по пути оболочку.

Вирус гепатита B является одним из нескольких известных неретровирусных вирусов, которые используют обратную транскрипцию как часть процесса репликации. Другие вирусы, которые используют обратную транскрипцию, включают, например, HTLV или ВИЧ.

В ходе инфекции HBV иммунный ответ хозяина отвечает как за гепатоцеллюлярное повреждение, так и за выведение вируса. В то время как врожденный иммунный ответ не играет значительную роль в этих процессах, адаптивный иммунный ответ, особенно специфичные для вируса цитотоксические Т-лимфоциты (CTL), вносит свой вклад почти во все повреждение печени, связанное с инфекцией HBV. Уничтожая инфицированные клетки и продуцируя противовирусные цитокины, способные вычищать HBV из жизнеспособных гепатоцитов, CTL также удаляют вирус. Хотя повреждение печени инициируется и опосредуется CTL, антиген-неспецифичные воспалительные клетки могут ухудшить CTL-индуцированную иммунопатологию, и тромбоциты могут облегчить аккумуляцию CTL в печени.

Гепатит B диагностируют у пациента, используя любой из разнообразных клинических и/или лабораторных тестов, таких как физическое обследование и анализ крови или сыворотки. Например, кровь или сыворотку тестируют на присутствие вирусных антигенов и/или антител, продуцированных хозяином. В обычном тесте на гепатит B, обнаружение поверхностного антигена гепатита B (HBsAg) используется для скрининга на наличие инфекции. Он представляет собой первый детектируемый вирусный антиген, который появляется в ходе инфекции с этим вирусом; однако на ранних стадиях инфекции этот антиген может не присутствовать, и он может оставаться невыявленным и на более поздних стадиях инфекции, поскольку он выводится хозяином. В течение этого «окна», в котором хозяин остается инфицированным, но успешно выводит вирус, антитела IgM к основному антигену гепатита B (anti-HBc IGM) могут быть единственным серологическим признаком заболевания.

Вскоре после появления HBsAg, появляется другой антиген, называемый антигеном гепатита B e (HBeAg). Традиционно присутствие HBeAg в сыворотке хозяина связано с намного более высокими масштабами репликации вируса; однако некоторые варианты вируса гепатита B не продуцируют “e” антиген вообще. В ходе естественного течения инфекции, HBeAg может выводиться, и антитела к “e” антигену (anti-HBe) возникнут непосредственно после этого. Это превращение обычно связывают с резким снижением репликации вируса. Если хозяин способен выводить инфекцию, то в конечном счете HBsAg станет недоступным для выявления и будет сопровождаться антителами к поверхностному антигену гепатита B (anti-HBs). Лицо с отрицательной реакцией в отношении HBsAg, но положительной в отношении anti-HBs либо вывело инфекцию, либо было предварительно вакцинировано. Многие люди, которые являются HbsAg-положительными, могут демонстрировать очень небольшое размножение вирусов, и следовательно, могут иметь незначительный риск долговременных осложнений или передачи инфекции другим людям.

Соединения или соли, которые могут быть использованы в этих способах лечения, профилактики или облегчения гепатита B или его симптома, представляют собой соединения или соли, которые модулируют киназный сигнальный каскад у пациента, для которого имеется риск гепатита B или который страдает гепатитом B. В некоторых вариантах осуществления, соединение или соль представляет собой ингибитор киназы. Например, соединение или соль представляет собой ингибитор тирозин киназы. В варианте осуществления, ингибитор тирозин киназы представляет собой ингибитор Src. Предпочтительно, соединение или соль, используемые в способах лечения, профилактики или облегчения гепатита B или его симптома, описанные здесь, представляют собой аллостерический ингибитор сигнального каскада киназы, участвующего в гепатите B. Предпочтительно, соединение или соль, используемые в способах лечения, профилактики или облегчения гепатита B или симптома, связанного с гепатитом B, описанные здесь, представляют собой не-АТФ конкурентный ингибитор сигнального каскада киназы, участвующего в гепатите B.

Src играет роль в репликации вируса гепатита B. Кодируемый вирусом фактор транскрипции HBx активирует Src на стадии, которая требуется для распространения вируса HBV. (См., например, Klein et al., EMBO J., vol. 18:5019-5027 (1999); Klein et al., Mol. Cell. Biol., vol. 17:6427-6436 (1997), каждый из которых тем самым полностью включен ссылкой). Таким образом, ингибирование Src, которое, в свою очередь, ингибирует Src-опосредованное распространение вируса HBV, может быть полезным в профилактике, лечении или облегчении гепатита B или его симптома.

Соединения по изобретению или их соли позволяют осуществить профилактику, лечение или облегчение гепатита B или симптома, связанного с гепатитом B. Симптомы гепатита B обычно развиваются в течение 30-180 дней после экспонирования к вирусу. Однако до половины всех людей, инфицированных вирусом гепатита B, не имеет никаких симптомов. Симптомы гепатита B часто сравнимы с гриппом, и включают, например, потерю аппетита; усталость; тошноту и рвоту, зуд по всему телу; боль в печени (например, с правой стороны живота, снизу от грудной клетки), желтизну и изменения в выделительных функциях.

Соединения по изобретению или их соли вводят индивидуально, в фармацевтических композициях или в комбинации с любым из разнообразных известных лекарственных средств для лечения гепатита B, таким как, например, альфа интерферон, ламивудин (Epivir-HBV) и бараклуд (энтекавир).

Другой аспект изобретения включает способ защиты от или лечения гепатита B у пациента, включающий введение композиции, включающей эффективное количество в основном чистого KX2-391 или его соли, сольвата, гидрата или пролекарства, например, в основном чистого KX2-391, KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA. Изобретение включает введение эффективного количества в основном чистого полиморфа KX2-391^.MSA, например, Формы A.

В одном варианте осуществления, соединение или соль вводят прежде, чем пациент получил гепатит B. В другом варианте осуществления, соединение или соль вводят после того, как пациент получил гепатит B.

Регуляция активности иммунной системы

Как описано здесь, соединения по изобретению или их соли могут использоваться для регуляции активности иммунной системы у пациента с обеспечением, таким образом, защиты от или профилактики аутоиммунного заболевания, например, ревматоидного артрита, рассеянного склероза, сепсиса и волчанки, а также отторжения трансплантата и аллергических заболеваний. Альтернативно, соединение может использоваться для лечения аутоиммунного заболевания у пациента. В одном аспекте, полиморф по изобретению может использоваться для регуляции активности иммунной системы у пациента. Соединение или соль могут привести к уменьшению серьезности симптомов или остановке угрожающей прогрессии аутоиммунного заболевания у пациента. Соединение по изобретению или его соль может участвовать в коррекции сигнального каскада киназы, например, ингибитора киназы, не-АТФ конкурентного ингибитора, ингибитора тирозин киназы, например, ингибитора Src, ингибитора p59fyn (Fyn) или ингибитора p56lck (Lck).

Аутоиммунные заболевания представляют собой заболевания, вызванные распадом аутотолерантности, так, что адаптивная иммунная система отвечает на собственные антигены и приводит к повреждениям тканей и клеток. Аутоиммунные заболевания могут быть орган-специфическими (например, тиреоидит или диабет) или системными (например, системная красная волчанка). Т-клетки модулируют опосредованный клетками иммунный ответ в адаптивной иммунной системе. В нормальных условиях Т-клетки экспрессируют рецепторы антигена (рецепторы Т-лимфоцита), которые распознают фрагменты пептида чужеродных белков, связанные с молекулами собственного главного комплекса гистосовместимости. Среди самых ранних распознаваемых событий после возбуждения рецептора Т-лимфоцита (TCR) можно назвать активацию Lck и Fyn, приводящую к фосфорилированию TCR на остатках тирозина в пределах иммунорецепторных звеньев активации на основе тирозина (Zamoyska, et al.; 2003, Immunol. Rev., 191, 107-118). Тирозин киназы, такие как Lck (которая является членом семейства Src протеин тирозин киназ) играют существенную роль в регуляции трансдукции сигналов клетки и пролиферации клеток, фосфорилируя остатки тирозина пептидов и белков (Levitzki; 2001, Top. Curr. Chem., 211, 1-15; Longati, et al.; 2001, Curr. Drug Targets, 2, 41-55; Qian, and Weiss; 1997, Curr. Opin. Cell Biol., 9, 205-211). Таким образом, без желания быть связанными с теорией, вероятно, что введение соединения согласно настоящему изобретению, которое модулирует активность тирозин киназы (например, Src), является полезным в лечении аутоиммунного заболевания.

Обе тирозин киназы lck и fyn активируются в пути TCR; таким образом, ингибиторы lck и/или fyn имеют потенциальную полезность как аутоиммунные средства (Palacios and Weiss; 2004, Oncogene, 23, 7990-8000). Lck и Fyn преимущественно экспрессируются Т-клетками в течение большей части жизни. Роли Lck и Fyn в развитии Т-клеток, гомеостазе и активации были продемонстрированы в исследованиях на животных и исследованиях на линиях клеток (Parang and Sun; 2005, Expert Opin. The. Patents, 15, 1183-1207). Активация Lck участвует в аутоиммунных заболеваниях и отторжении трансплантата (Kamens, et al.; 2001, Curr. Opin. Investig. Drugs, 2, 1213-1219). Результаты показали, что lck (-) линии клеток Jurkat неспособны распространяться, продуцировать цитокины и генерировать увеличение внутриклеточного кальция, инозитолфосфата и фосфорилирование тирозина в ответ на возбуждение рецептора Т-клетки (Straus and Weiss; 1992, Cell., 70, 585-593; Yamasaki, et al.; 1996, Mol. Cell. Biol., 16, 7151-7160). Поэтому средство, ингибирующее lck, эффективно блокировало бы функцию T-клеток, действовало как иммуносупрессивное средство и имело бы потенциальную полезность в лечении аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, рассеянный склероз и волчанка, а также в области отторжения трансплантата и аллергических заболеваний (Hanke and Pollok; 1995, Inflammation Res., 44, 357-371). Таким образом, без желания быть связанными с теорией, вероятно, что введение соединения согласно настоящему изобретению или соли, которое модулирует один или более членов семейства Src протеин тирозин киназ (например, lck и/или fyn) является полезным в лечении аутоиммунного заболевания.

Другой аспект изобретения включает способ регуляции активности иммунной системы у пациента, включающий введение композиции, включающей эффективное количество в основном чистого KX2-391 или его соли, сольвата, гидрата или пролекарства, например, в основном чистого KX2-391, KX2-391^.2HCl или KX2-391^.MSA. Изобретение включает введение эффективного количества в основном чистого полиморфа KX2-391^.MSA, например, Формы A.

Определения

Для удобства, некоторые термины, используемые в описании, примерах и приложенной формуле изобретения, собраны здесь.

Протеинкиназы составляют большой класс ферментов, которые катализируют перенос γ-фосфата от АТФ до гидроксильной группы на боковой цепи Ser/Thr или Tyr в белках и пептидах и тесно участвует в контроле различных важных функций клеток, вероятно, прежде всего таких как: трансдукция сигналов, дифференцировка и пролиферация. По оценке, в организме человека существует приблизительно 2000 различных протеинкиназ, и хотя каждая из них фосфорилирует специфические субстраты белка/пептида, они все связывают один и тот же второй субстрат АТФ в высоко консервативном кармане. Приблизительно 50% известных онкогеннх продуктов представляют собой протеин тирозин киназы (PTK), и было показано, что их киназная активность приводит к трансформации клеток.

PTK могут быть классифицированы в две категории, PTK мембранного рецептора (например, PTK рецептора фактора роста) и нерецепторные PTK (например, семейство Src протоонкогенных продуктов и киназы фокальной адгезии (FAK)). О гиперактивации Src сообщалось во множестве случаев рака человека, включая рак толстой кишки, молочной железы, легкого, мочевого пузыря и кожи, а также в случае рака желудка, волосатоклеточного лейкоза и нейробластомы.

“Ингибирует один или более компонентов сигнального каскада протеинкиназы” означает, что один или более компонентов сигнального каскада киназы затрагиваются таким образом, что функционирование клетки изменяется. Компоненты сигнального каскада протеин киназы включают любые белки, участвующие, прямо или косвенно, в сигнальном пути киназы, включая вторые мессенджеры и апстрим и даунстрим мишени.

"Лечение" включает любой эффект, например, уменьшение, ослабление, коррекцию или устранение, которое приводит к выздоровлению состояния, заболевания, нарушения и т.д. "Лечение" болезненного состояния включает: ингибирование болезненного состояния, то есть, остановку развития болезненного состояния или его клинических симптомов; или уменьшение болезненного состояния, то есть, временную или постоянную регрессию болезненного состояния или его клинических симптомов.

"Профилактика" болезненного состояния включает препятствование развитию клинических симптомов болезненного состояния у пациента, который может быть экспонирован или предрасположен к болезненному состоянию, но еще не испытывает или не демонстрирует симптомы болезненного состояния.

"Болезненное состояние" означает любое заболевание, нарушение, состояние, симптом или показание.

В рамках изобретения, термин “нарушение пролиферации клеток” относится к состояниям, в которых нерегулируемый и/или ненормальный рост клеток может привести к развитию нежелательного состояния или заболевания, которое может быть злокачественным или незлокачественным, например псориатическое состояние. В рамках изобретения, термины “псориатическое состояние” или "псориаз" относятся к нарушениям, включающим гиперпролиферацию кератиноцитов, инфильтрацию воспалительных клеток и альтерацию цитокинов.

В одном варианте осуществления, нарушение пролиферации клеток представляет собой рак. В рамках изобретения, термин "рак" включает солидные опухоли, такие как рак легкого, молочной железы, толстого кишечника, яичника, мозга, печени, поджелудочной железы, предстательной железы, злокачественную меланому, немеланомный рак кожи, а также гематологические опухоли и/или злокачественные процессы, такие как детские лейкозы и лимфомы, множественная миелома, болезнь Ходжкина, лимфомы лимфоцитарного и кожного происхождения, острый и хронический лейкоз, такой как острый лимфобластный, острый миелоцитарный или хронический миелоцитарный лейкоз, плазмоцитарная опухоль, лимфоидная опухоль и рак, связанный со СПИДом.

В дополнение к псориатическим состояниям, типами пролиферативных заболеваний, которые могут быть подвергнуты лечению с использованием композиций согласно настоящему изобретению, являются эпидермальные и дермоидные кисты, липомы, аденомы, капиллярные и кожные гемангиомы, лимфангиомы, невусные поражения, тератомы, нефромы, миофиброматоз, остеопластические опухоли и другие диспластические массы и т.п. Пролиферативные заболевания могут включать дисплазии и нарушения подобного типа.

"Терапевтически эффективное количество" означает количество соединения или соли, которое, при введении млекопитающему для лечения заболевания, является достаточным для осуществления такого лечения заболевания. В одном варианте осуществления, терапевтически эффективное количество вводят млекопитающему, чтобы уменьшить уровень заболевания, например, уменьшить уровень потери слуха. В одном варианте осуществления вводят терапевтически эффективное количество соединения или соли. В другом варианте осуществления, вводят терапевтически эффективное количество композиции. "Терапевтически эффективное количество" варьирует в зависимости от соединения или соли, заболевания и его серьезности и возраста, массы тела и т.д., млекопитающего, которое будет получать лечение.

Терапевтически эффективное количество одного или более соединений или солей может быть составлено с фармацевтически приемлемым носителем для введения человеку или животному. Соответственно, соединения, соли или составы могут вводиться, например, через пероральный, парентеральный или топический пути, обеспечивая терапевтически эффективное количество соединения. В альтернативных вариантах осуществления, соединения или соли, полученные в соответствии с настоящим изобретением, могут использоваться для покрытия или пропитки медицинского устройства, например, стента.

Термин “профилактически эффективное количество” означает эффективное количество соединения или соли, согласно настоящему изобретению, которое вводят для оказания профилактического эффекта в отношении заболевания. В одном варианте осуществления, вводят профилактически эффективное количество соединения или соли. В другом варианте осуществления, вводят профилактически эффективное количество композиции.

"Фармакологический эффект" в рамках изобретения охватывает эффекты, произведенные у пациента, которые достигают намеченной цели терапии. В одном варианте осуществления, фармакологический эффект означает, что первичные признаки получающего лечение пациента предотвращены, облегчены или уменьшены. Например, фармакологический эффект может быть таким, который приводит к профилактике, облегчению или сокращению первичных показаний у получающего лечение пациента. В другом варианте осуществления, фармакологический эффект означает, что нарушения или симптомы первичных показаний получающего лечение пациента предотвращены, облегчены или уменьшены. Например, фармакологический эффект может быть таким, который приводит к профилактике или уменьшению первичных показаний у получающего лечение пациента.

Соединения согласно настоящему изобретению или их соли, которые содержат атомы азота, могут быть преобразованы в N-оксиды обработкой окислителем (например, 3-хлорпероксибензойной кислотой (m-CPBA) и/или пероксидом водорода) с получением других соединений или солей согласно настоящему изобретению. Таким образом, рассматриваются все показанные и заявленные азотсодержащие соединения или соли, когда это позволяет валентность и структура, включая как соединение, так и соль, как показано, а также их N-оксидные производные (которые могут определяться как N→O или N⁺-O^-). Кроме того, в других случаях, атомы азота в соединениях или солях согласно настоящему изобретению могут быть превращены в соединения N-гидрокси или N-алкокси. Например, соединения N-гидрокси могут быть получены окислением родительского амина окислителем, таким как m-CPBA. Также рассматриваются все показанные и заявленные азотсодержащие соединения или соли, когда это позволяет валентность и структура, охватывая как соединение, так и соль, как показано, а также их N-гидрокси (то есть, N-OH) и N-алкокси (то есть, N-OR, в которых R представляет собой замещенный или незамещенный C_1-6 алкил, C_1-6 алкенил, C_1-6 алкинил, C_3-14 карбоцикл или 3-14-членный гетероцикл) производные.

"Противоион" используется для обозначения малых отрицательно заряженных единиц, таких как хлорид, бромид, гидроксид, ацетат и сульфат.

“Анионная группа”, в рамках изобретения, относится к группе, отрицательно заряженной при физиологическом рН. Анионные группы включают карбоксилат, сульфат, сульфонат, сульфинат, сульфамат, тетразолил, фосфат, фосфонат, фосфинат или фосфоротиоат или их функциональные эквиваленты. “Функциональные эквиваленты” анионных групп включают биоизостеры, например, биоизостеры карбоксилатной группы. Биоизостеры охватывают как классические биоизостерные эквиваленты, так и неклассические биоизостерные эквиваленты. Классические и неклассические биоизостеры известны в данной области техники (см., например, Silverman, R. B. The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, Academic Press, Inc.: San Diego, Calif., 1992, pp.19-23). В одном варианте осуществления, анионная группа представляет собой карбоксилат.

Настоящее изобретение включает все изотопы атомов, встречающихся в соединениях по изобретению. Изотопы включают атомы, имеющие то же самое атомное число, но разные массовые числа. В качестве общего примера и без ограничения, изотопы водорода включают тритий и дейтерий, и изотопы углерода включают C-13 и C-14.

Соединения или соли, описанные здесь, могут иметь центры асимметрии. Соединения согласно настоящему изобретению или их соли, содержащие асимметрично замещенный атом, могут быть выделены в оптически активных или рацемических формах. В данной области известно, как получить оптически активные формы, например, разделением рацемических форм или синтезом из оптически активных исходных материалов. Многие геометрические изомеры олефинов, двойные связи C=N, и т.п. могут также присутствовать в соединениях, описанных здесь, и все такие стабильные изомеры рассмотрены в настоящем изобретении. Цис и транс геометрические изомеры соединений согласно настоящему изобретению или их соли описаны и могут быть выделены как смесь изомеров или как разделенные изомерные формы. Все хиральные, диастереомерные, рацемические и геометрические изомерные формы структуры включены в рамки изобретения, если определенная стереохимия или изомерная форма специфически не обозначена. Все таутомеры показанных или описанных соединений или солей также считаются частью настоящего изобретения.

В настоящем описании структурная формула соединения или соли в некоторых случаях для удобства представляет собой определенный изомер, но настоящее изобретение включает все изомеры, такие как геометрический изомер, оптический изомер, основанный на асимметрическом углероде, стереоизомер, таутомер и т.п., которые могут быть в структурном отношении, и смесь изомеров, и не ограничены для удобства описанием формулы, и могут быть любым из изомера или смеси. Поэтому асимметрический атом углерода может присутствовать в молекуле, и оптически активное соединение и рацемическое соединение могут присутствовать в соединении по изобретению, но настоящее изобретение не ограничено ими и включает любое. Кроме того, может присутствовать кристаллический полиморфизм, но он не является ограничительным, но любая кристаллическая форма может быть единственной или смесью кристаллических форм, или ангидридом или гидратом. Кроме того, так называемый метаболит, который образуется при разложении соединения по изобретению in vivo, включен в рамки настоящего изобретения.

"Изомерия" означает соединения или соли, которые имеют идентичные молекулярные формулы, но различаются по характеру или последовательности связей их атомов или простаранственному расположению их атомов. Изомеры, которые различаются по пространственному расположению их атомов, называют "стереоизомерами". Стереоизомеры, которые не являются зеркальными отображениями друг друга, называют "диастереоизомерами", и стереоизомеры, которые являются неналагающимися зеркальными изображениями, называют "энантиомерами" или, иногда, оптическими изомерами. Атом углерода, связанный с четырьмя неидентичными заместителями, называют "хиральным центром".

"Хиральный изомер" означает соединение или соль по меньшей мере с одним хиральным центром. Он имеет две энантиомерные формы противоположной хиральности и может существовать либо как индивидуальный энантиомер, либо как смесь энантиомеров. Смесь, содержащую равные количества индивидуальных энантиомерных форм, противоположной хиральности, называют "рацемической смесью". Соединение или соль, которое имеет более одного хирального центра, имеют 2^n-1 энантиомерных пар, где n означает число хиральных центров. Соединения или соли с более чем одним хиральным центром могут существовать либо как индивидуальный диастереомер или как смесь диастереомеров, которую называют "диастереомерная смесь". Когда присутствует один хиральный центр, стереоизомер может быть характеризован абсолютной конфигурацией (R или S) этого хирального центра. Абсолютная конфигурация относится к пространственному расположению заместителей, присоединенных к хиральному центру. Заместители, присоединенные к рассматриваемому хиральному центру оцениваются в соответствии с Sequence Rule of Cahn, Ingold and Prelog. (Cahn et al, Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn and Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (London), 612; Cahn et al., Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J., Chem. Educ. 1964, 41, 116).

"Геометрические изомеры" означают диастереомеры, которые обязаны своим существованием замедленному вращению вокруг двойных связей. Эти конфигурации дифференцированы по их названиям приставками цис и транс, или Z и E, которые указывают, что группы находятся на одной и той же стороне или противоположных сторонах по отношению к двойной связи в молекуле согласно правилам Cahn-Ingold-Prelog.

Далее, структуры и другие соединения или соли, обсуждаемые в этой заявке, включают все атропные изомеры. "Атропные изомеры" являются типом стереоизомеров, в котором атомы двух изомеров по-разному расположены в пространстве. Атропные изомеры обязаны своим существованием ограниченному вращению, вызванному помехой вращения больших групп относительно центральной связи. Такие атропные изомеры обычно существуют в форме смеси, однако в результате недавних продвижений в методиках хроматографии, было возможно разделить смеси двух атропных изомеров в случаях выбора.

Термины “кристаллические полиморфы” или "полиморфы" или “кристаллические формы” означают кристаллические структуры, в которых соединение (или его соль или сольват) может кристаллизоваться в различных вариантах расположения кристаллов, которые все имеют один и тот же элементный состав. Различные кристаллические формы обычно имеют разные структуры дифракции рентгеновских лучей, инфракрасный спектр, температуру плавления, плотностную твердость, кристаллическую форму, оптические и электрические свойства, стабильность и растворимость. Растворитель перекристаллизации, скорость кристаллизации, температуры хранения и другие факторы могут привести к доминированию одной кристаллической формы. Кристаллические полиморфы соединений могут быть получены кристаллизацией в различных условиях.

Дополнительно, соединения согласно настоящему изобретению, например, соли соединений, могут существовать в гидратированной или негидратированной (безводной) форме или в форме сольватов с другими молекулами растворителя. Неограничивающие примеры гидратов включают моногидраты, дигидраты и т.д. Неограничивающие примеры сольватов включают этанольные сольваты, ацетоновые сольваты и т.д.

"Сольваты" означают формы добавления растворителя, которые содержат стехиометрический или не стехиометрические количества растворителя. Некоторые соединения или соли имеют тенденцию захватывать фиксированное молярное отношение молекул растворителя в кристаллическом твердом состоянии, таким образом формируя сольват. Если растворителем является вода, сольват, который образуется, представляет собой гидрат, когда растворителем является спирт, сольват, который образуется, представляет собой алкоголят. Гидраты образуются комбинацией одной или более молекул воды с одним из веществ, в которых вода сохраняет свое молекулярное состояние как H₂O, причем такая комбинация может формировать один или более гидратов.

"Таутомеры" относятся к соединениям или солям, структуры которых заметно различаются по расположению атомов, но которые существуют в легком и быстром равновесии. Следует понимать, что соединения по изобретению или их соли могут быть изображены как различные таутомеры. Следует также понимать, что, когда соединения имеют таутомерные формы, все таутомерные формы находятся в рамках изобретения, и название соединений или солей не исключает никакой таутомерной формы.

Некоторые соединения согласно настоящему изобретению или их соли могут существовать в таутомерной форме. Таутомеры также находятся в рамках настоящего изобретения.

Соединения, соли и пролекарства согласно настоящему изобретению могут существовать в нескольких таутомерных формах, включая енольную и иминную форму, и форму кето и енамина, и их геометрические изомеры и их смеси. Все такие таутомерные формы находятся в рамках настоящего изобретения. Таутомеры существуют как смеси таутомеров в растворе. В твердой форме обычно преобладает один таутомер. Даже при том, что один таутомер может быть описан, настоящее изобретение включает все таутомеры соединений или солей по изобретению.

Таутомер представляет собой один из двух или более структурных изомеров, которые существуют в равновесии и легко превращаются из одной изомерной формы в другую. Эта реакция приводит к формальной миграции атома водорода, сопровождаемой разрушением смежных сопряженных двойных связей. В растворах, где таутомеризация возможна, будет достигнуто химическое равновесие таутомеров. Точное отношение таутомеров зависит от нескольких факторов, включая температуру, растворитель и рН. Понятие таутомеров, которые являются взаимопревращаемыми таутомеризациями, называют таутомерией.

Из различных типов таутомерии, которые являются возможными, обычно наблюдаются два. В кето-энольной таутомерии встречается одновременный сдвиг электронов и атома водорода. Кольцево-цепочечная таутомерия демонстрируется глюкозой. Она возникает в результате реакции альдегидной группы (-CHO) в цепи молекулы сахара с одной из гидроксильных групп (-ОН) в той же самой молекуле с приданием циклической (кольцевой) формы.

Таутомеризации катализируются: Основанием: 1. депротонирование; 2. формирование делокализованного аниона (например, энолат); 3. протонирование в другом положении аниона; Кислотой: 1. протонирование; 2. формирование делокализованного катиона; 3. депротонирование в другом положении, смежном с катионом.

Обычные таутомерные пары представляют собой: кетон - энол, амид - нитрил, лактам - лактим, амид - имид кислотная таутомерия в гетероциклических кольцах (например, в гуанине, тимине и цитозине), амин - енамин и енамин - енамин.

Следует, соответственно, понимать, что изомеры, являющиеся результатом асимметрических атомов водорода (например, все энантиомеры и диастереомеры), включены в рамки изобретения, если не указано иное. Такие изомеры могут быть получены в в основном чистой форме обычными методиками разделения и стереохимически контролируемым синтезом. Кроме того, структуры и другие соединения и группы, обсуждаемые в этой заявке, также включают все таутомеры. Алкены могут включать E- или Z-геометрию, где это возможно. Соединения по изобретению могут существовать в стереоизомерной форме, поэтому могут быть получены как индивидуальные стереоизомеры или как смеси.

"Фармацевтическая композиция" является составом, содержащим раскрытые соединения или их соли, в форме, подходящей для введения пациенту. В одном варианте осуществления, фармацевтическая композиция находится в форме массы или в стандартной лекарственной форме. Может быть предпочтительным составить композиции в стандартной лекарственной форме для простоты введения и однородности дозировки. Стандартная лекарственная форма в рамках изобретения относится к физически дискретным единицам, которые являются подходящими в качестве разовых доз для введения пациенту, который получает лечение; причем каждая единица содержит предопределенное количество активного реагента, вычисленное так, чтобы произвести желаемый терапевтический эффект, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем. Спецификация для стандартных лекарственных форм по изобретению может быть продиктована, и непосредственно зависит от них, уникальными характеристиками активного реагента и специфического терапевтического эффекта, который должен быть достигнут, а также ограничениями, присущими такому активному агенту для лечения человека.

Стандартная лекарственная форма представляет собой любую разновидность форм, включая, например, капсулы, в/в мешок, таблетку, аэрозольный ингалятор с единственным насосом или ампулу. Количество активного ингредиента (например, состава раскрытого соединения или его соли, гидрата, сольвата или изомера) в унифицированной дозе композиции представляет собой эффективное количество и варьирует в зависимости от конкретного лечения. Специалисту понятно, что иногда необходимо сделать обычные изменения дозировки в зависимости от возраста и состояния пациента. Дозировка будет также зависеть от пути введения. Могут быть рассмотрены различные пути, включая пероральный, легочный, ректальный, парентеральный, чрескожный, подкожный, внутривенный, внутримышечный, внутрибрюшинный, ингаляционный, щечный, подъязычный, внутриплевральный, внутриоболочковый, внутриносовой и т.п. Лекарственные формы для топического или чрескожного введения соединения по изобретению или его соли включают порошки, спреи, мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, растворы, пластыри и ингаляционные препараты. В одном варианте осуществления, активное соединение или соль смешаны в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем, и с любыми консервантами, буферами или пропеллентами, которые требуются.

Термин “доза вспышки” относится к составам соединения, которые представляют собой быстро диспергируемые лекарственные формы.

Термин "непосредственное высвобождение" определяют как высвобождение соединения или соли из лекарственной формы за относительно короткий промежуток времени, обычно до приблизительно 60 минут. Термин "модифицированное высвобождение", определяют как включающий отсроченное высвобождение, пролонгированное высвобождение и прерывистое высвобождение. Термин "прерывистое высвобождение" определяют как серию высвобождений лекарственного средства из лекарственной формы. Термин “замедленное высвобождение” или “пролонгированное высвобождение” определяют как непрерывное высвобождение соединения или соли из лекарственной формы за длительный период.

"Пациент" включает млекопитающих, например, человека, животных-компаньонов (например, собак, кошек, птиц и т.п.), сельскохозяйственных животных (например, коров, овец, свиней, лошадей, домашнюю птицу и т.п.) и лабораторных животных (например, крыс, мышей, морских свинок, птиц и т.п.). В одном варианте осуществления, пациентом является человек.

В рамках изобретения, фраза “фармацевтически приемлемый” относится к тем соединениям, солям, материалам, композициям, носителям и/или лекарственным формам, которые, в рамках нормального медицинского суждения, являются подходящими для использования в контакте с тканями человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соразмерного с приемлемым отношением выгоды/риска.

"Фармацевтически приемлемый эксципиент" означает эксципиент, который является пригодным для получения фармацевтической композиции, которая является в целом безопасной, нетоксичной, и который не является ни биологически, ни в ином отношении нежелательным и включает эксципиент, который является приемлемым для ветеринарного использования а также фармацевтического использования для человека. "Фармацевтически приемлемый эксципиент" в рамках описания и формулы изобретения включает как один такой эксципиент, так и более одного.

Фраза “фармацевтически приемлемый носитель” в рамках изобретения означает фармацевтически приемлемый материал, композицию или носитель, такой как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, эксципиент или инкапсулирующий растворитель материал, участвующий в переносе или транспортировке соединения от одного органа или части тела к другому органу или части тела. Каждый носитель должен быть "приемлемым" в том смысле, чтобы быть совместимым с другими ингредиентами состава и не быть вредным для пациента. Некоторые примеры материалов, которые могут служить фармацевтически приемлемыми носителями, включают: сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлоза и ее производные, такие как натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, этилцеллюлоза и ацетилцеллюлоза; порошкованный трагакант; солод; желатин; тальк; эксципиенты, такие как масло какао и воски для суппозиториев; масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль; многоатомные спирты, такие как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; сложные эфиры, такие как этил олеат и этил лаурат; агар-агар; буферные средства, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; альгиновую кислоту; апирогенную воду; изотонический солевой раствор; раствор Рингера; этанол; рН-забуференные растворы; полиэфиры, поликарбонаты и/или полиангидриды; и другие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических составах.

Соединения по изобретению способны к дальнейшему образованию солей. Все эти формы также рассматриваются в рамках заявленного изобретения.

"Фармацевтически приемлемая соль" соединения означает соль, которая является фармацевтически приемлемой и обладает желаемой фармакологической активностью родительского соединения.

В рамках изобретения, “фармацевтически приемлемые соли” относятся к производным раскрытых соединений, в которых родительское соединение модифицировано с образованием его соли с кислотой или с основанием. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но не ограничены ими, соли с неорганической или органической кислотой основных остатков, таких как амины, щелочные или органические соли кислотных остатков, таких как карбоновые кислоты, и т.п. Фармацевтически приемлемые соли включают обычные нетоксичные соли или соли четвертичного аммониевого основания родительского соединения, образованные, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Например, такие обычные нетоксичные соли включают, но не ограничены ими, полученные из неорганических и органических кислот, выбранных из 2-ацетоксибензойной, 2-гидроксиэтансульфоновой, уксусной, аскорбиновой, бензолсульфоновой, бензойной, дикарбоновой, угольной, лимонной, этилендиаминтетрауксусной, этандисульфоновой, 1,2-этансульфоновой, фумаровой, глюкогептоновой, глюконовой, глутаминовой, гликолевой, гликольлиарсаниловой, гексилрезорциновой, гидрабамовой, бромистоводородной, хлористоводородной, йодистоводородной, гидроксималеиновой, гидроксинафтойной, изэтиновой, молочной, лактобионовой, лаурилсульфоновой, малеиновой, яблочной, миндальной, метансульфоновой, напсиловой, азотной, щавелевойй, памовой, пантотеновой, фенилуксусной, фосфорной, полигалактуроновой, пропионовой, салициловой, стеариновой, подуксусной, янтарной, сульфамовой, сульфаниловой, серной, дубильной, винной, толуолсульфоновой и обычно встречающихся аминокислот, например, глицина, аланина, фенилаланина, аргинина и т.д.

Другие примеры включают капроновую кислоту, циклопентанпропионовую кислоту, пировиноградную кислоту, малоновую кислоту, 3-(4-гидроксибензоил)бензойную кислоту, коричную кислоту, 4-хлорбензолсульфоновую кислоту, 2-нафталинсульфоновую кислоту, 4-толуолсульфоновую кислоту, камфорсульфоновую кислоту, 4-метилбицикло-[2.2.2]-окт-2-ен-1-карбоновую кислоту, 3-фенилпропионовую кислоту, триметилуксусную кислоту, трет-бутилуксусную кислоту, муконовую кислоту и т.п. Изобретение также охватывает соли, образующиеся, когда кислотный протон, присутствующий в родительском соединении, либо заменяется металлическим ионом, например, ионом щелочного металла, ионом щелочноземельного металла или ионом алюминия; либо координирует с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, трометамин, N-метилглюкамин и т.п.

Следует понимать, что все ссылки на фармацевтически приемлемые соли включают формы добавления растворителя (сольваты) или кристаллические формы (полиморфы), как определено здесь, той же самой соли.

Фармацевтически приемлемые соли согласно настоящему изобретению могут синтезироваться из родительского соединения, которое содержит основную или кислотную группу, обычными химическими способами. Вообще, такие соли могут быть получены реакцией формы свободной кислоты или основания этих соединений со стехиометрическим количеством подходящего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе, или в смеси двух; может использоваться неводная среда, такая как простой эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Списки подходящих солей можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (Mack Publishing Company, 1990). Например, соли могут включать, но не ограничены ими, гидрохлоридные и ацетатные соли алифатического аминсодержащего, гидроксиламинсодержащего и иминсодержащего соединений согласно настоящему изобретению.

Соединения или соли согласно настоящему изобретению могут быть получены как пролекарства, например фармацевтически приемлемые пролекарства. Термин «пролекарство» относится к любому соединению, которое высвобождает активное исходное лекарственное средство in vivo. Так как известно, что пролекарства усиливают многочисленные желательные качества фармацевтических препаратов (например, растворимость, биодоступность, легкость в производстве и т.д.), соединения или соли согласно настоящему изобретению могут быть в форме пролекарства. Таким образом, настоящее изобретение охватывает пролекарства заявленных соединений и солей, способы их получения и композиции, их содержащих. “Пролекарства” включают любые ковалентно связанные носители, которые высвобождают активное исходное лекарственное средство согласно настоящему изобретению in vivo, когда такое пролекарство вводят пациенту. Пролекарства согласно настоящему изобретению получают, модифицируя функциональные группы в соединении таким образом, что эти модифицированные группы расщепляются или обычной манипуляцией, или in vivo, давая родительское соединение или соль. Пролекарства включают соединения или соли согласно настоящему изобретению, в которых гидрокси, амино, сульфгидрильная, карбокси или карбонильная группа присоединена к любой группе, которая может быть расщеплена in vivo с образованием свободной гидроксильной, свободной амино, свободной сульфгидрильной, свободной карбокси или свободной карбонильной группы, соответственно.

Примеры пролекарств включают, но не ограничены ими, сложные эфиры (например, ацетатные, диалкиламиноацетатные, формиатные, фосфатные, сульфатные и бензоатные производные) и карбаматные (например, N,N-диметиламинокарбонил) функциональных гидроксигрупп, сложноэфирные группы (например, сложные этиловые эфиры, сложные морфолиноэтанольные эфиры) функциональных групп карбоксильной группы, производные N-ацила (например, N-ацетил), основания N-Манниха, основания Шиффа и енаминоны функциональных аминогрупп, оксимы, ацетали, кетали и енольных сложных эфиров кетона и функциональные альдегидные группы в соединениях, и т.п., см. Bundegaard, H. “Design of Prodrugs” p1-92, Elesevier, New York-Oxford (1985).

«Защитная группа» относится к группировке атомов, которая, когда она присоединена к реактивной группе в молекуле, маскирует, уменьшает или предотвращает ее реакционную способность. Примеры защитных групп могут быть найдены в Green and Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, (Wiley, 2^nd ed. 1991); Harrison and Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vols. 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996); and Kocienski, Protecting Groups, (Verlag, 3^rd ed. 2003).

“Стабильное соединение” и “стабильная структура” указывают соединение или соль, которые являются достаточно прочной, чтобы пережить выделение с полезной степенью чистоты из реакционной смеси и составление в эффективное терапевтическое средство.

В описании формы единственного числа также включают множественное число, если контекст ясно не диктует иное. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют то же самое значение, как обычно понимается специалистом в области техники, к которой относится это изобретение. В случае разночтения, следует отдавать предпочтение настоящему описанию.

Все проценты и отношения, используемые здесь, если не указано иное, являются весовыми.

“Комбинированная терапия” (или «со-терапия») включает введение соединения по изобретению или его соли и по меньшей мере второго средства как части определенного режима лечения, предназначенного для того, чтобы обеспечить благоприятное воздействие от совместного действия этих терапевтических средств. Благоприятное воздействие комбинации включает, но не ограничено ими, фармакокинетическое или фармакодинамическое совместное действие, следующее из комбинации терапевтических средств. Введение этих терапевтических средств в комбинации обычно осуществляют с определенным интервалом времени (обычно минуты, часы, дни или недели в зависимости от выбранной комбинации). “Комбинированная терапия” может быть, но обычно не является таковой, предназначена, чтобы охватить введение двух или более из этих терапевтических средств как часть отдельных режимов монотерапии, чтобы случайно и произвольно привести к комбинациям согласно настоящему изобретению.

“Комбинированная терапия” охватывает введение этих терапевтических средств последовательно, то есть, когда каждое терапевтическое средство вводят в различное время, а также введение этих терапевтических средств, или по меньшей мере двух из этих терапевтических средств, по существу одновременно. В основном одновременное введение может быть осуществлено, например, при введении пациенту единственной капсулы, имеющей фиксированное отношение каждого терапевтического средства, или в виде множества отдельных капсул для каждого из терапевтических средств. Последовательное или в основном одновременное введение каждого терапевтического средства может быть произведено любым подходящим путем, включая, но не ограничиваясь ими, пероральные пути, внутривенные пути, внутримышечные пути и прямую абсорбцию через ткани слизистой оболочки. Терапевтические средства могут вводиться одним и тем же путем или разными путями. Например, первое терапевтическое средство выбранной комбинации может вводиться внутривенной инъекцией, в то время как другие терапевтические средства комбинации вводиться применяться перорально. Альтернативно, например, все терапевтические средства могут вводиться перорально, или все терапевтические средства могут вводиться внутривенной инъекцией. Последовательность, в которой вводят терапевтические средства, не является строго критической.

“Комбинированная терапия” также охватывает введение терапевтических средств как описано выше в дальнейшей комбинации с другими биологически активными ингредиентами и нелекарственными терапиями (например, хирургией или лучевой терапией). Когда комбинированная терапия далее включает нефармакотерапию, нефармакотерапия может быть проведена в любое подходящее время, при условии, что достигается благоприятное воздействие от совместного действия комбинации терапевтических средств и нефармакотерапии. Например, в соответствующих случаях, благоприятное воздействие все еще достигается, когда нефармакотерапия удалена по времени от введения терапевтических средств возможно на период до дней или даже недель.

По всему описанию, где композиции описаны как имеющие, включающие или содержащие определенные компоненты, рассматривается, что композиции также состоят по существу из, или состоят из, перечисленных компонентов. Точно так же, где способы описаны как имеющие или включающие определенные стадии способа, способы также состоят по существу из, или состоят из, перечисленных стадий обработки. Далее, следует понимать, что порядок стадий или порядок, в котором осуществляют определенные действия, является несущественным, пока изобретение остается действующим. Кроме того, две или более стадий или действий могут быть проведены одновременно.

Соединения, или их фармацевтически приемлемые соли, вводят перорально, через нос, чрескожно, легочным путем, ингаляционным путем, щечным путем, подъязычным путем, внутрибрюшинно, подкожно, внутримышечно, внутривенно, ректально, внутриплеврально, внутриоболочково и парентерально. В одном варианте осуществления, соединение или соль вводят перорально. Специалисту известны преимущества определенных путей введения.

Режим введения с использованием соединения или соли выбирают в соответствии с различными факторами, включая тип, вид, возраст, массу тела, пол и медицинское состояние пациента; серьезность состояния, которое будет подвергнуто лечению; путь введения; почечную и печеночную функцию пациента; и конкретное используемое соединение или его соль. Обычно квалифицированный врач или ветеринар могут легко определить и предписать эффективное количество лекарственного средства, необходимое для предотвращения, противостояния или остановки прогресса состояния.

Методики для составления и введения раскрытых соединения по изобретению или их солей могут быть найдены в Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19^th edition, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995). В варианте осуществления, соединения, описанные здесь, и их фармацевтически приемлемые соли используются в фармацевтических препаратах в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Подходящие фармацевтически приемлемые носители включают инертные твердые наполнители или разбавители и стерильные водные или органические растворы. Соединения или соли будут присутствовать в таких фармацевтических композициях в количествах, достаточных, чтобы обеспечить желаемое количество дозировки в диапазоне, описанном здесь.

В одном варианте осуществления, соединении или соли получают для перорального введения, причем раскрытые соединения или соли объединяют с подходящим твердым или жидким носителем или разбавителем, формируя капсулы, таблетки, пилюли, порошки, сиропы, растворы, суспензии и т.п.

Таблетки, пилюли, капсулы и т.п. содержат от приблизительно 1 до приблизительно 99 весовых процентов активного ингредиента и связующее, такое как трагакант, гуммиарабик, кукурузный крахмал или желатин; эксципиенты, такие как дикальций фосфат; дезинтегратор, такой как кукурузный крахмал, картофельный крахмал или альгиновая кислота; лубрикант, такой как стеарат магния; и/или подсластитель, такой как сахароза, лактоза, сахарин, ксилит и т.п. Когда стандартная лекарственная форма представляет собой капсулу, она часто содержит, в добавление к материалам вышеупомянутого типа, жидкий носитель, такой как нелетучее жидкое масло.

В некоторых вариантах осуществления, различные другие материалы присутствуют как покрытия или для изменения физической формы лекарственной формы. Например, в некоторых вариантах осуществления, таблетки покрыты шеллаком, сахаром или ими обоими. В некоторых вариантах осуществления, сироп или эликсир содержит, в добавление к активному ингредиенту, сахарозу как подсластитель, метил и пропилпарабены как консерванты, краситель и ароматизатор, такой как вишневый или апельсиновый ароматизатор, и т.п.

Для некоторых вариантов осуществления, касающихся парентерального введения, раскрытые соединения или их соли, сольваты, таутомеры или полиморфы могут быть объединены со стерильной водной или органической средой с образованием инъецируемых растворов или суспензий. В одном варианте осуществления, инъецируемые композиции представляют собой водные изоосмотические растворы или суспензии. Композиции могут стерилизоваться и/или содержать адъюванты, такие как консервирующие, стабилизирующие, смачивающие или эмульгирующие, промоторы растворения, соли для регулировки осмотического давления и/или буферы. Кроме того, они могут также содержать другие терапевтически ценные вещества. Композиции получают обычными способами смешивания, гранулирования или нанесения покрытия, соответственно, и содержат приблизительно от 0,1 до 75%, в другом варианте осуществления, композиции содержат приблизительно от 1 до 50% активного ингредиента.

Например, инъецируемые растворы получают, используя растворители, такие как кунжутное или арахисовое масло, или водный раствор пропиленгликоля, а также водные растворы водорастворимых фармацевтически приемлемых солей соединений. В некоторых вариантах осуществления, дисперсию получают в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях в маслах. В обычных условиях хранения и использования, эти препараты содержат консервант, чтобы предотвратить рост микроорганизмов. Термины «парентеральное введение» и «вводимый парентерально» в рамках изобретения означают введение средств, отличное от энтерального и топического введения, обычно инъекцией, и включают, без ограничения, внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, внутриоболочковую, интракапсулярную, внутриглазничную, внутрисердечную, кожную, внутрибрюшинную, транстрахеальную, подкожную, субкутикулярную, внутрисуставную, субкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную и надчревную инъекцию и инфузию.

Для ректального введения, подходящие фармацевтические композиции представляют собой, например, топические препараты, суппозитории или клизмы. Суппозитории предпочтительно получают из жирных эмульсий или суспензий. Композиции могут стерилизоваться и/или содержать адъюванты, такие как консервирующие, стабилизирующие, смачивающие или эмульгирующие, промоторы растворения, соли для регулировки осмотического давления и/или буферы. Кроме того, они могут также содержать другие терапевтически ценные вещества. Композиции получают обычными способами смешивания, гранулирования или нанесения покрытия, соответственно, и содержат приблизительно от 0,1 до 75%, в другом варианте осуществления, композиции содержат приблизительно от 1 до 50% активного ингредиента.

В некоторых вариантах осуществления, соединения или соли составляют так, чтобы доставлять активное средство легочным введением, например, введением состава аэрозоля, содержащего активное средство, из, например, распылителя с ручным насосом, небулайзера или герметичного ингалятора с отмериваемой дозой. В некоторых вариантах осуществления, подходящие составы этого типа также включают другие средства, такие как антистатики, для поддержания раскрытых соединений или солей как эффективные аэрозоли.

Устройство для доставки лекарственного средства для доставки аэрозолей включает подходящую аэрозольную канистру с дозирующим клапаном, содержащим фармацевтический состав аэрозоля как описано, и кожух привода, адаптированный для того, чтобы держать канистру и позволяющий осуществлять доставку лекарственного средства. Канистра в устройстве для доставки лекарственного средства имеет объем свободного пространства над продуктом, составляющий более чем приблизительно 15% общего объема канистры. Часто полимер, предназначенный для легочного введения, растворен, суспендирован или эмульгирован в смеси растворителя, поверхностно-активного вещества и пропеллента. Смесь поддерживают под давлением в канистре, которая была герметизирована с помощью дозирующего клапана.

Для носового введения может использоваться твердый или жидкий носитель. Твердый носитель включает грубый порошок, имеющий величину частиц в диапазоне, например, от приблизительно 20 до приблизительно 500 микрон, и такой состав вводят быстрой ингаляцией через носовые пути. В некоторых вариантах осуществления, когда используется жидкий носитель, состав вводят в форме спрея или капель для носа, и он включает масляные или водные растворы активных ингредиентов.

Активные реагенты могут быть получены с носителями, которые защищают против быстрого удаления из организма. Например, может использоваться состав контролируемого высвобождения, включая имплантаты и микроинкапсулированные системы доставки. Могут использоваться биоразлагаемые биологически совместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиорто-эфиры и полимолочная кислота. Способы получения таких составов будут очевидны для специалиста. Материалы могут также быть получены коммерчески от Alza Corporation and Nova Pharmaceuticals, Inc. Липосомальные суспензии (включая липосомы, нацеленные на инфицированные клетки, с моноклональными антителами к вирусным антигенам) могут также использоваться как фармацевтически приемлемые носители. Они могут быть получены согласно способам, известным специалисту, например, как описано в патенте США 4522811.

Композиции и составы согласно настоящему изобретению могут также включать один или более осушителей. Подходящими осушителями, которые могут использоваться в настоящем изобретении, являются такие, которые являются фармацевтически безопасными, и включают, например, фармацевтические марки силикагеля, кристаллический алюмосиликат натрия, калия или кальция, коллоидный диоксид кремния, безводный сульфат кальция и т.п. Осушитель может присутствовать в количестве от приблизительно 1,0% до 20,0%, или от приблизительно 2% до 15% вес./вес. (или любое значение в пределах указанного диапазона).

Также рассматриваются составы, которые быстро диспергируют лекарственные формы, также известные как «формы» флэш-дозы. В частности, некоторые варианты осуществления согласно настоящему изобретению составляют как композиции, которые высвобождают их активные ингредиенты в пределах короткого промежутка времени, например, обычно за менее чем приблизительно пять минут, в другом варианте осуществления за менее чем приблизительно девяносто секунд, в другом варианте осуществления за менее чем приблизительно тридцать секунд и в другом варианте осуществления за менее чем приблизительно десять или пятнадцать секунд. Такие составы являются подходящими для введения пациенту различными путями, например, вставкой в полость или нанесением на влажную поверхность тела или открытую рану.

Как правило, “флэш-доза” является твердой лекарственной формой, которую вводят перорально, которая быстро диспергируется во рту, и следовательно, не требует большого усилия для проглотывания и позволяет соединению быстро проглатываться или абсорбироваться через слизистые оболочки полости рта. В некоторых вариантах осуществления, подходящие быстро диспергирующиеся лекарственные формы также используются в других применениях, включая лечение ран и других физических повреждений и патологических состояний, в которых высвобождение лекарственного средства путем внешнего нанесения влажной среды не является возможным.

“Формы” флэш-дозы известны из уровня техники; см. например, шипучие лекарственные формы и покрытия для быстрого высвобождения нерастворимых микрочастиц в патентах США 5578322 и 5607697; высушенные замораживанием пены и жидкости в патентах США 4642903 и 5631023; формованные из расплава лекарственные формы в патентах США 4855326, 5380473 и 5518730; твердые вещества свободной формы в патенте США 6471992; сахаридная матрица носителя и жидкое связующе в патентах США 5587172, 5616344, 6277406 и 5622719; и другие формы, известные из уровня техники.

Соединения по изобретению или их соли также составляют как составы «периодического высвобождения», в которых соединение или соль высвобождаются из фармацевтических композиций в виде серии высвобождений (то есть, импульсов). Соединения или соли также составляют как составы “замедленного высвобождения”, в которых соединение или соль непрерывно высвобождаются из фармацевтической композиции в течение длительного периода.

Также рассматриваются составы, например, жидкие составы, включая циклические или алифатические инкапсулирующие или сольватирующие средства, например, циклодекстрины, простые полиэфиры или полисахариды (например, метилцеллюлоза), или, в другом варианте осуществления, полианионные производные β-циклодекстрина с группой соли сульфоната натрия, отделенные от олеофильной полости матрицы алкилэфирной спейсерной группой или полисахаридами. В одном варианте осуществления, средство представляет собой метилцеллюлозу. В другом варианте осуществления, средство представляет собой полианионное производное β-циклодекстрина с солью сульфоната натрия, отделенной от олеофильной полости матрицы спейсерной группой бутилового эфира, например, CAPTISOL® (CyDex, Overland, KS). Специалист может оценить подходящие отношения состава средство/раскрытое соединение, получая раствор средства в воде, например, раствор 40 вес.%; получая серийные разведения, например, чтобы получить растворы 20%, 10%, 5%, 2,5%, 0% (контроль) и т.п.; добавляя избыток (по сравнению с количеством, которое может быть солюбилизировано средством) раскрытого соединения или соли; смешивая в подходящих условиях, например, нагреванием, перемешиванием, разрушением ультразвуком и т.п.; центрифугируя или фильтруя полученные смеси, чтобы получить прозрачные растворы; и анализируя растворы на концентрацию раскрытого соединения или соли.

Все публикации и патентные документы, процитированные здесь, включены в настоящее описание ссылкой, как если бы каждая такая публикация или документ были специфично и индивидуально обозначены как включенные в настоящее описание ссылкой. Цитирование публикаций и патентных документов не является допущением того, что любой из таких документов составляет релевантный уровень техники, ни какого-либо допущения относительно содержания или даты этого документа. Поскольку изобретение было описано посредством письменного описания, специалисту будет понятно, что изобретение может быть осуществлено в различных вариантах осуществления, и что предшествующее описание и примеры, приведенные ниже, приведены в целях иллюстрации и не ограничивают объем последующей формулы изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: Мелкомасштабный синтез KX2-391

Предварительный синтез, описанный ниже, был проиллюстрирован в US20060160800A1. Эта процедура может быть использована для мелкомасштабных реакций, например, реакции, которые производят до 50 г продукта.

Для следующего синтеза, если не указано иное, реагенты и растворители использовались такими, как они были получены от коммерческих поставщиков. Протонные и углеродные спектры ядерного магнитного резонанса были получены на спектрометрах Bruker AC 300 или Bruker AV 300 при 300 МГц для протона и 75 МГц для углерода. Спектры приведены в ppm (δ), и константы связывания J приведены в Герц. Тетраметилсилан использовался как внутренний стандарт для протонных спектров, и пик растворителя использовался как референсный пик для углеродных спектров. Данные масс-спектров и LC-MS были получены на масс-спектрометре ионизации атмосферного давления (APCI) Perkin Elmer Sciex 100. Исследования LC-MS получали, используя колонку Luna C8(2) (100 × 4,6 мм, Phenomenex) с УФ-детекцией при 254 нм, используя программу стандартного градиента растворителя (Способ B). Тонкослойную хроматографию (TLC) осуществляли, используя планшеты с силикагелем Analtech и визуализировали ультрафиолетовым (УФ) светом, йодом или 20 вес.% фосфорномолибденовой кислоты в этаноле. Исследования ВЭЖХ осуществляли, используя колонку Prevail C18 (53 × 7 мм, Alltech) с УФ-детекцией при 254 нм, используя программу стандартного градиента растворителя (Способ A или B).

Способ A:

A = вода с 0,1 об./об. трифторуксусной кислоты

B = ацетонитрил с 0,1 об./об. трифторуксусной кислоты

Время
(мин) Поток
(мл/мин) %A %B 0,0 3,0 95,0 5,0 10,0 3,0 0,0 100,0 11,0 3,0 0,0 100,0

Способ B:

A = вода с 0,02 об./об. трифторуксусной кислоты

B = ацетонитрил с 0,02 об./об. трифторуксусной кислоты

Время
(мин) Поток
(мл/мин) %A %B 0,0 2,0 95,0 5,0 4,0 2,0 5,0 95,0

Синтез N-бензил-2-(5-бромпиридин-2-ил)ацетамида:

В колбу загружали 5-(5-бромпиридин-2(1H)-илиден)-2,2-диметил-1,3-диоксан-4,6-дион (1,039 г, 3,46 ммоль), бензиламин (0,50 мл, 4,58 ммоль) и толуол (20 мл). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником под азотом в течение 18 часов, затем охлаждали и помещали в морозильник для охлаждения. Продукт собирали фильтрацией и промывали гексанами, получая массу ярких белых кристаллов (1,018 г, 96%).

Синтез 4-(2-(4-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенокси)этил)морфолина:

К перемешиваемому раствору 4-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенола (2,55 г, 11,58 ммоль), 2-морфолин-4-илэтанола (1,60 мл, 1,73 г, 13,2 ммоль) и трифенилфосфина (3,64 г, 13,9 ммоль) в метиленхлориде (60 мл) при 0°C добавляли по каплям DIAD (2,82 г, 13,9 ммоль). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Через 18 часов, добавляли дополнительные части трифенил фосфина (1,51 г, 5,8 ммоль), 2-морфолин-4-илэтанола (0,70 мл, 5,8 ммоль) и DIAD (1,17 г, 5,8 ммоль). После перемешивания в течение дополнительных 2 часов при температуре окружающей среды реакционную смесь концентрировали, и остаток очищали флэш-хроматографией (5%-25% EtOAc в CHCl₃), получая продукт в форме твердого вещества белого цвета (2,855 г, 74%).

Синтез 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида KX2-391

В реакционную пробирку на 10 мл с перегородкой и магнитной мешалкой загружали N-бензил-2-(5-бромпиридин-2-ил)ацетамид (123 мг, 0,403 ммоль), 4-(2-(4-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенокси)этил)морфолин (171 мг, 0,513 ммоль) и FibreCat 1007 (30 мг, 0,015 ммоль). Добавляли этанол (3 мл), затем водный раствор карбоната калия (0,60 мл, 1,0 м., 0,60 ммоль). Пробирку закрывали и нагревали в условиях микроволнового облучения при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь охлаждали и концентрировали, чтобы удалить большую часть этанола, и затем забирали в 10 мл этилацетата и промывали последовательно водной и насыщенным раствором хлорида натрия. Органический слой высушивали MgSO₄, фильтровали и концентрировали до твердого вещества белого цвета. Это твердое вещество белого цвета растирали с диэтиловым эфиром, получая KX2-391 в форме твердого вещества белого цвета (137 мг, 79%): Т. Пл. 135-137°C; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 8,70 (д, 1H, J=2,0 Гц), 7,81 (дд, 1H, J=2,4 Гц, J=8,0 Гц), 7,65 (ушир.с, 1H), 7,49 (д, 2H, J=8,8 Гц), 7,37-7,20 (м, 6H), 7,01 (д, 2H, J=8,8 Гц), 4,49 (д, 2H, J=5,8 Гц), 4,16 (т, 2H, J=5,7 Гц, 3,82 (с, 2H), 3,78-3,72 (м, 4H), 2,84 (т, 2H, J=5,7 Гц), 2,62-2,58 (м, 4H); ВЭЖХ (Способ B) 98,0% (AUC), t_R=1,834 мин,; APCI MS m/z 432 [M+H]⁺.

Пример 2: Синтез промежуточного масштаба дигидрохлорида KX2-391

Синтез, показанный в этом примере, может использоваться в средне-масштабаных реакциях. Получение загрузок по меньшей мере 50 г соли дигидрохлорида KX2-391 показано на Схеме 1. Линейный синтез состоит из 6 стадий, седьмая стадия является получением одного из реагентов, 6-фторпиридин-3-илбороновой кислоты (которая является также доступной коммерчески). Общий выход последовательности стадий составил 35% со средним выходом 83%, самый низкий выход с одной стадии составил 68%. Из семи стадий только одна потребовала проведения хроматографии. Указанную ниже процедуру осуществляли в масштабе 70 г.

Первая стадия представляет собой синтез эфира Williamson между 4-бромфенолом (131 г) и N-хлорэтилморфолином (1 как соль HCl; 141 г) с использованием порошка K₂CO₃ (3 - 3,5 эквивалентов) в качестве основания и ацетонитрила в качестве растворителя. Ингредиенты смешивали и перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение ночи с высоким превращением (96,3-99,1%). После разбавления дихлорметаном и гептаном, реакционную смесь фильтровали и упаривали, получая желаемый продукт 2 с по существу количественном выходом (216 г). Следует отметить, что с подобными субстратами (например, 4-бром-3-фторфенолом), превращения (даже при экстенсивном нагревании) были не всегда такими высокими (например, 59,9-98,3%). Как алкил хлорид, так и K₂CO₃ предпочтительно приобретали у Auldrich. Если продолжение нагревания не приводит к завершению реакции, непрореагировавший бромфенол может быть легко удален растворением сырой реакционной смеси в 4 частях толуола и промыванием фенола 4 частями 15% водного раствора NaOH.

Одним из реагентов, необходимых для второй стадии (сочетание Suzuki), была 6-фторпиридин-3-илбороновая кислота (4). Хотя он является доступным коммерчески, этот реагент был легко получен литий-бромидным обменом 5-бром-2-фторпиридина (3, 102 г) с н-бутиллитием (1,2 экв.) при низких температурах (<-60°C) в TBME с последующим добавлением триизопропилбората (1,65 экв.). Обе стадии реакции являются краткими, со временем суммарной реакции (включая время добавления) ~3 часов. Гашение осуществляют с водным 24%-ым раствором NaOH, который также экстрагирует продукт, оставляя примеси в органическом слое. Как только водный слой был удален, его затем нейтрализовали HCl и экстрагировали EtOAc. После высушивания органических фаз и разбавления некоторым количеством гептана, концентрация приводит к осаждению/кристаллизация продукта. Фильтрация дала бороновую кислоту 4 при относительно высокой чистоте (AUC 96,4%) и хороший выход (69 г, 79-90%; см. примечание относительно оценки выхода в экспериментальной части), которая может использоваться без дальнейшей очистки.

Вторая стадия реакции в линейной последовательности (сочетание Suzuki) представляет собой простую для настройки реакцию; все реагенты [2 (111 г), водный раствор Na₂CO₃, DME и Pd(PPh₃)₄ (0,04 экв.)] загружали в реакционную колбу, и смесь нагревали с обратным холодильником; следует отметить, что реакционную смесь дегазировали, чтобы удалить кислород. Как только реакция была полной (в пределах 7 ч), обработка включала декантацию (или сифонирование) реакционного раствора от органических солей на стороне колбы (не было никакого видимого водного слоя), колбу промывали и высушивали, и растворитель удаляли от объединенных органических фаз. Кристаллизация сырого 5 из смеси изопропанол/гептан обеспечила материал улучшенной чистоты по сравнению с сырым продуктом, но все еще требовала хроматографии (отношение силикагеля к сырому продукту составило ~8,5:1), чтобы получить материал подходящей чистоты (>98%); выход составил 68% (79,5 г). Использование чистого 5 предотвращало потребность в хроматографии на следующей стадии смещения ацетонитрилом атома фтора.

Замена фторида ацетонитрилом была также простой реакцией, и простая кристаллизация при температуре окружающей среды сырого продукта обеспечила чистый 6 с высоким выходом и чистотой. Реакция включала начальное формирование “енолата” из ацетонитрила (6,5 экв.) с использованием гексаметилдисилана калия KHMDS (8 экв.)/ТГФ при -10°C с последующим немедленным добавлением фторида 5 (79 г). Реакция была быстрой, и через один час ее останавливали насыщенным солевым раствором. После высушивания и выпаривания растворителя органических фаз, полученная сырая смесь состояла только из двух компонентов, желаемого продукта и намного меньшего количества полярного продукта видимой самоконденсации ацетонитрила. Сырую смесь завихряли в смеси изопропанол/гептан и оставляли в течение ночи, что привело к полной кристаллизации продукта, который фильтровали и промывали, получая 6 с высокой чистотой (AUC 99,3%) с хорошим выходом (64 г, 76%).

Метанолиз 6 (64 г) осуществляли, нагревая в 40%-ом H₂SO₄ (в MeOH), пока реакция не была полной (25 ч). Реакционную смесвь затем охлаждали, перемешивали с MgSO₄, чтобы преобразовать следы гидролизованного продукта (ArCH₂-CO₂Me) назад в продукт и затем добавляли к охлажденному водному раствору K₂CO₃ с одновременной экстракцией в дихлорметан. Высушивание и выпаривание большей части DCM с последующим добавлением 5%-ого EtOAc (в гептане) и дальнейшая концентрации привели к кристаллизации продукта. Фильтрация и промывка твердого вещества дала высокую чистоту (AUC 98,9%) 7 с хорошим выходом (82%), дополнительный продукт высокой чистоты (4 г) получали из маточных растворов для общего выхода 61,7 г (87%).

Стадия амидирования также включала загрузку реактора ингредиентами (7 (61 г), бензил амином (3 экв.) и анизолом с высокой температурой кипения) и затем нагревание с обратным холодильником, пока реакция не была полной. Охлаждение реакционной смеси привело к полной кристаллизации целевого соединения с высокой чистотой (98,9%) и хорошим выходом (81%).

Заключительная стадия представляла собой формирование дигидрохлоридной соли целевого соединения. Чтобы обеспечить полное протонирование на обоих основных участках, реакцию проводили в абсолютном этаноле, который свободно растворял соль дигидрохлорида. После выпаривания почти досуха, реакционную смесь дважды обрабатывали этанолом, чтобы удалить избыток хлорида водорода. Полученное вязкое масло растворяли в этаноле (2 части) и затем добавляли, при быстром перемешивании, к большому объему (20 частей) EtOAc (этилацетат). Фильтрация, промывка этилацетатом (без гептана) и вакуумная сушка обеспечили соль дигидрохлорида KX2-391 в форме светло-кремового порошка. В общей сложности 68 г (выход 97%) получали из конечной соли с высокой чистотой (AUC 99,6%), которые содержали следы EtOAc (4,8% вес./вес.), EtOH (0,3% вес./вес.) и гептана (0,6% вес./вес.; от конечной промывки гептаном до вакуумной сушки). Эту соль также кристаллизовали (вместо способа осаждения, описанного выше) из горячей смеси EtOH/EtOAc, получая прозрачную дробь, которая имеет намного более низкие уровни захвата растворителя (только 0,26% вес./вес. EtOAc и 0,45% вес./вес. EtOH) и является свободно текучей.

Получение 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина (2):

В трехгорлую круглодонную колбу на 5 л, оборудованную приводной мешалкой, термометром с переходным устройством, конденсатором и азотным входом (на вершине конденсатора), загружали 1 (140,7 г, 0,756 моль), 4-бромфенол (130,6 г, 0,755 моль), безводный порошок K₂CO₃ (367,6 г, 2,66 моль, 3,5 экв.) и ацетонитрил (1,3 л). Смесь энергично перемешивали (лопасти вращаются у основания колбы) при 80°C (в течение ночи), с последующим разбавлением с DCM (500 мл) и гептаном (200 мл) и фильтрацией через Целит. Выпаривание досуха (rotovap, затем высокий вакуум) дало 2 в форме светло-желтого масла (216,00 г, выход 100%, AUC 96,3%, содержит 3,7% непрореагировавшего бромфенола). Этот материал успешно использовали без дальнейшей очистки.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 2,57 (т, 4H), 2,79 (т, 2H), 3,73 (т, 4H), 4,08 (т, 2H), 6,78 (д, 2H), 7,37 (д, 2H), MS (от LC/MS): m/z 287,1 [M+1].

То, что бромфенол может быть легко удален, демонстрировали на образце 2 г, сначала растворяя образец в толуоле (8 г) и промывая 8 г 15%-ого водного раствора NaOH; жидкостная хроматография не показала никакого следа непрореагировавшего бромфенола в рекуперируемом продукте (1,97 г; рекуперация 98,5%).

Получение 6-фторпиридин-3-илбороновой кислоты (4):

К перемешиваемому и охлажденному (ванна сухой лед-ацетон) безводному [TBME] (620 мл; в трехгорлой круглодонной колбе на 3 л, оборудованной приводной мешалкой, температурным зондом с переходным устройством и азотным входом), добавляли (через шприц) 2М BuLi (352 мл, 0,704 моль, 1,2 экв.). К этой быстро перемешиваемой и охлаждаемой (<-75°C) смеси добавляли раствор 3 (102,2 г, 0,581 моль) в безводном TBME (100 мл) в течение 13 минут, в течение которых внутренняя температура повысилась до -62°C. Реакционную смесь перемешивали в течение еще 45 минут (температуру поддерживали в диапазоне от -62°C до -80°C) с последующим быстрым и последовательным добавлением четырех частей триизопропилбората (общее количество 180 г, 0,957 моль, 1,65 экв.). В конце добавления внутренняя температура повысилась до -33°C. После перемешивания в течение дополнительных 45 минут на холодной ванне (внутренняя температура понизилась от -33°C до -65°C) холодную ванну удаляли, и температура перемешиваемой смеси самостоятельно повысилась до -22°C в течение 50 мин. После нагревания (на водяной бане) до 6°C в течение 15 минут, перемешиваемую реакционную смесь помещали в ванну с водой со льдом и затем гасили под азотом охлажденным раствором NaOH (160 г) в воде (500 мл). Как только добавление было заверешено, внутренняя температура составила 20°C. Эту смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1,5 часов. Водный слой удаляли, нейтрализовали до рН 7 с помощью ~350 мл концентрированной HCl и затем экстрагировали EtOAc (3 × 1 л). Поскольку рН составлял теперь 8-9, водный слой подкисляли до рН 7 с использованием ~15 мл концентрированной HCl и экстрагировали далее (2 × 1 л) этилацетатом. Объединенные экстракты EtOAc высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали до объема ~150 мл. При завихрении концентрата, гептан добавляли частями (полный объем 300 мл), что приводило к осаждению/кристаллизации продукта. Фильтрация, промывка твердого вещества гептаном (100 мл, 300 мл, затем еще 300 мл) и естественная сушка дала целевой продукт в форме твердого вещества грязно-белого цвета (68,6 г, выход 79-90% *; чистота LC 96,4%, ЯМР показал приблизительно 5,5% вес./вес. Гептана), который успешно использовали без дальнейшей очистки. LC/MS показал, что он был смесью двух следующих соединений, интенсивность соединения более высокой молекулярной массы была мажорной (*Примечание: выход реакции=79%, если бороновая кислота, как предполагают, является единственным компонентом и =90%, если предполагается, что циклический борат является единственным компонентом):

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,14 (дд, 1H), 8,27 (ддд, 1H), 8,39 (ушир.с, 2H, 2OH), 8,54 (т.стр. д, 1H), MS (от LC/MS): m/z 143,0 [M+1; для бороновой кислоты] и 370,0 [M+1; для циклического бората выше]

Получение 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина (5):

В трехгорлую круглодонную колбу на 2 л, оборудованную приводной мешалкой, термометром и переходным устройством, конденсатором и азотным входом (наверху конденсатора) загружали 2 (110,7 г, 0,387 моль), 4 (71,05 г, 0,477 моль, 1,23 экв.) и DME (700 мл). Полученный перемешиваемый раствор дегазировали, пропуская быстрый поток азота через перемешиваемый раствор в течение 5 минут, с последующим добавлением дегазированного раствора Na₂CO₃ (121,06 г, 1,142 моль, 3 экв.) в H₂O (250 мл) и также твердый Pd(PPh₃)₄ (19,8 г, 0,044 экв.). Немедленно после последнего добавления пространство выше реакционной смеси продували азотом, и смесь затем перемешивали при 80-85°C (внутренняя температура) в течение 7 часов с последующим охлаждением до температуры окружающей среды. Из-за нехватки водного слоя, супернатант декантировали, оставляя неорганические соли (с адсорбированной водой). Реакционную колбу с неорганическими солями промывали смесью 50% дихлорметан/этилацетат (2 × 250 мл), причем смывы добавляли к декантированному супернатанту. Эти объединенные органические фазы высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали досуха, получая темно-коричневое масло (148 г). К этому маслу добавляли 150 г смеси 50% гептан/изопропиловый спирт (IPA), и после завихрения и охлаждения (через ледяную водяную баню) начиналась кристаллизация. Добавляли дополнительное количество гептана (50 г), и полученное твердое вещество фильтровали, промывали и высушивали на воздухе, получая 48 г твердого вещества светло-коричневого цвета. После выпаривания фильтрата досуха, полученную смесь завихряли в 100 мл 50% гептан/IPA с последующим добавлением дополнительного количества гептана (~100 мл), закрывали пробкой и помещали в морозильник для кристаллизации. Полученное твердое вещество фильтровали, промывали гептаном, и высушивали на воздухе, получая 61 г липкого твердого вещества. Упаривание полученного фильтрата дало масло (34 г), которое содержало значительный меньше полярных примесей, включая Ph₃P=O, и его разделяли между 2н. HCl (240 мл) и EtOAc (220 мл). Водный слой из основания удаляли и затем перемешивали с EtOAc, нейтрализуя с помощью K₂CO₃ до рН 7-8. Слой EtOAc высушивали, фильтровали и упаривали досуха (22 г). Части 48 г, 61 г и 22 г хроматографировали на силикагеле (1,1 кг), упакованном в DCM. Элюирование с помощью DCM (400 мл), 50% DCM/EtOAc (5 л) и затем 50% DCM/EtOAc (8 л), содержащего увеличивающиеся количества MeOH/Et₃N (начиная с 1,5% MeOH/1% Et₃N и заканчивая 5% MeOH/3% Et₃N) дало 77,68 г вязкого масла (чистота 98,0%), которое немедленно кристаллизовалось после завихрения в гептане (300 мл). Фильтрация, промывка гептаном и естественная сушка дала 75,55 г (AUC 98,7%) твердого 5. Дополнительный чистый 5 (общее количество 3,9 г, AUC 98,6-99,3%) получали из более ранних хроматографических фракций, содержащих Ph₃P=O, очищая их как это было сделано для вышеупомянутого образца 34 г, с последующей кристаллизацией путем упаривания. Полный выход 5 составил 79,5 г (68%).

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 2,59 (т, 4H), 2,84 (т, 2H), 3,75 (т, 4H), 4,16 (т, 2H), 6,97 (дд, 1H), 7,01 (д, 2H), 7,46 (д, 2H), 7,92 (ддд, 1H), 8,37 (т.стр. д, 1H), MS (от LC/MS): m/z 303,2 [M+1].

Получение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила (6):

Трехгорлая круглодонная колба на 3 л была оборудована приводной мешалкой, термометром и переходным устройством, дополнительной воронкой, и азотным входом (на вершине воронки для добавления, положительное давление через барботер). При быстром потоке азота через барботер удаляли пробку, и колбу загружали KHMDS (415,8 г, 2,08 моль) и затем безводным ТГФ (1 л). К перемешиваемому и охлажденному (ванна лед/метанол, внутренняя температура раствора -8°C) раствору KHMDS/THF добавляли по каплям раствор MeCN (70 г) в ТГФ (110 мл) в течение 22 минут с последующим непосредственно относительно быстрым (4 минуты) добавлением раствора 5 (79,06 г, 0,262 моль) в ТГФ (400 мл), после чего внутренняя температура реакционной смеси достигла 10°C. При непрерывном охлаждении (1 ч) внутренняя температура составила -6°C, и по результатам TLC реакция казалась полной. После дополнительных 30 минут (внутренняя температура -3°C) реакционную смесь гасили насыщенным солевым раствором (1 л) и разбавляли EtOAc (500 мл). После удаления водного слоя, органический раствор высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали досуха (по маслу) с последующим полным растворением в IPA (150 мл), разбавлением гептаном (300 мл), добавлением затравочных кристаллов (полученных растворением ~100 мг сырого масла в IPA (~150 мг) и разбавлением гептаном (~2,5 мл)) и отстаиванием в течение ночи. После перемешивания для разрушения кристаллического твердого вещества, твердое вещество фильтровали, промывали 250 мл смеси 2:1 гептан/IPA и затем многократно промывали гептаном и высушивали на воздухе, получая 64,38 г (выход 76%) целевого продукта 6 в форме кристаллического вещества желто-коричневого цвета (чистота LC 99,3%). Еще 5,88 г менее чистого материала были получены из фильтрата.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 2,59 (т, 4H), 2,84 (т, 2H), 3,74 (т, 4H), 3,97 (с, 2H), 4,17 (т, 2H), 7,02 (д, 2H), 7,46 (д, 1H), 7,51 (д, 2H), 7,87 (дд, 1H), 8,77 (т.стр. д, 1H), MS (от LC/MS): m/z 324,4 [M+1].

Получение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетата (7):

В одногорлую круглодонную колбу на 2 л загружали 6 (64,00 г, 0,198 моль) и MeOH (360 г) с последующим медленным, аккуратным добавлением по каплям H₂SO₄ (240 г), и полученный гомогенный раствор перемешивали при нагревании с обратным холодильником (115°C на масляной бане), пока реакция не была полной (25 часов с 0,8% непрореагировавшего исходного материала) с 3,5% ArCH₂CO₂H. После короткого охлаждения, добавляли MgSO₄ (75 г), и смесь образовывала завихрение и позволяла выдержать дополнительные 45 минут (композиция теперь содержит 96,3% продукта, 0,8% непрореагировавшего исходного материала и 2,5% ArCH₂CO₂H). Реакционную смесь затем медленно добавляли к быстро перемешиваемой и охлажденной (ванна с водой со льдом) смеси DCM (2 л) и раствору K₂CO₃ (450 г) в H₂O (600 мл). Полученную эмульсию отстаивали в течение ночи. Чистые части органического раствора выкачивали, и части остатка обрабатывали многократно водой и DCM, чистые органические фракции объединяли с первоначальной частью, которая была выкачана. Объединенные органические фракции высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали до объема ~1,2 л с последующим добавлением 300 мл 5%-ого EtOAc (в гептане) и затем гептана (300 мл) и смесь концентрировали снова (rotovap с высокой температурой), чтобы удалить DCM. В этот момент добавляли 15 мл EtOAc, и горячую смесь завихряли до начала кристаллизации, завихрение продолжали до почти полного заверешения кристаллизации и затем оставляли стоять и охлаждаться до температуры окружающей среды для полной кристаллизации. Твердое вещество затем фильтровали, промывали 300 мл 5% EtOAc (в гептане) и гептаном (100 мл) и затем полностью высушивали на воздухе, получая 57,74 г (выход 82%) 7 в фолрме твердого вещества светло-желтого цвета (AUC 98,9%). Еще 3,94 г чистого продукта (AUC 97,9%) были получены из фильтрата (полный выход 87%).

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 2,60 (т, 4H), 2,84 (т, 2H), 3,74 (перекрывающиеся т и с, 6 H), 3,89 (с, 2H), 4,17 (т, 2H), 7,01 (д, 2H), 7,34 (д, 1H), 7,49 (д, 2H), 7,80 (дд, 1H), 8,74 (т.стр. д, 1H), MS (от LC/MS): m/z 357,4 [M+1].

Получение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (KX2-391 свободное основание).

В одногорлую круглодонную колбу на 1 л загружали 7 (61,4 г, 0,172 моль), бензил амин (55,6 г, 0,519 моль, 3 экв.) и безводный анизол (300 г) и затем перемешивали при нагревании с обратным холодильником, пока реакция не была по существу полна (23 часа, температура 165°C на масляной бане; внутренняя температура составляла 147°C), и затем давали охладиться до температуры, близкой к температуре окружающей среды. Часть (1 мл) реакционной смеси разбавляли толуолом (1 мл), что приводило к полной кристаллизации этой части. Эту затравку затем добавляли к реакционной смеси и давали стоять, пока целая реакционную смесь не кристаллизовалась в единственный блок. Добавляли толуол (150 мл), и смесь завихряли, чтобы разбить твердое вещество. Добавляли смесь гептан/толуол (1:1, 100 мл), и твердую смесь разбивали далее. Наконец, добавляли гептан (50 мл, тогда 25 мл), и смесь разбивали далее, позволяя выдерживать дополнительные 30 минут перед фильтрацией твердого вещества. Фильтрация твердого вещества, промывка смесью 2:1 толуол/гептан (300 мл), 1:2 толуол/гептан (300 мл) и затем гептаном (2 × 300 мл), и затем высушивание (воздух, затем высокий вакуум) дала 60,16 г (выход 81%) целевого продукта в форме твердого вещества белого цвета (≥98,9% AUC). Еще 2,5 г менее чистого материала (на 97,4%) были получены из маточных растворов.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 2,60 (т, 4H), 2,83 (т, 2H), 3,74 (т, 4H), 3,82 (с, 2H), 4,18 (т, 2H), 4,49 (д, 2H), 7,01 (д, 2H), 7,2-7,35 (м, 6H), 7,49 (д, 2H), 7,64 (ушир.т, 1H), 7,81 (дд, 1H), 8,69 (т.стр. д, 1H), MS (от LC/MS): m/z 432,5 [M+1].

Получение 4-(2-(4-(6-(2-(бензиламино)-2-оксоэтил)пиридиний-3-ил)фенокси)этил)-морфолин-4-ий хлорид (KX2-391, диHCl соль).

К перемешиваемой суспензии KX2-391 (свободное основание, 60,00 г) в абсолютном EtOH (600 мл) добавляли 170 мл 2,5 М HCl (в этаноле), добавляли 25 мл EtOH для промывки стенок колбы. Полученный гомогенный раствор перемешивали при температуре окружающей среды (20 минут) и затем упаривали почти досуха (до вспенивания). После после обработки с использованием EtOH (2 x 150 мл), остаток снова забирали в EtOH (150 мл) и затем медленно добавляли гептан, пока смесь не стала казалаться насыщенной (33 мл требуется для сохранения мутности). После выдерживания в течение ночи формировались два слоя. После добавления дополнительного количества гептана (250 мл) кристаллизация все еще не могла быть вызвана и поэтому реакционную смесь концентрировали до объема ~200 мл, в какой момент смесь становилась гомогенной. Этот густой гомогенный раствор добавляли по каплям к очень быстро перемешиваемому (механически) EtOAc (2 л). После завершения добавления 25 мл промывочного EtOH из первоначальной колбы и воронку для добавления добавляли к быстро перемешиваемой смеси. Быстрое перемешивание продолжали еще ~1 часа, и затем смесь фильтровали, и твердое вещество (частично липкое) промывали EtOAc (300 мл) и затем гептаном. После начала промывки гептаном твердое вещество стало намного более липким. Воронку Buchner из печеного стекла и ее содержимое накрывали (бумажное полотенце/круглая резинка) и немедленно помещали в вакуумный сушильный шкаф. После вакуума при ~45°C в течение ночи, вакуум выпускали под азотом, и воронку Buchner, содержащую продукт (пенистое твердое вещество) немедленно помещали назад в застежку-молнию и затем под азотом (мешок-перчатка) перемещали в колбу, и пенистое твердое вещество разбивали (лопатка) в порошок. Вторая ночь под высоким вакуумом (~45°C) привела только к 1,3 г дополнительной потери веса. Постоянный вес был по существу достигнут после третьей ночи высокого вакуума (~45°C), когда только 0,2 г веса были потеряны. Финальный вес материала составил 68,05 г (выход 97%), причем материал содержал 0,29 экв. (4,8% вес./вес.) EtOAc, 0,035 экв. (0,3% вес./вес.) EtOH и 0,03 экв. (0,6% вес./вес.) гептан. Чистота составила 99,6%.

¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ 3,1-3,3 (м, 2H), 3,45-3,65 (м, 4H), 3,8-4,0 (м, 4H), 4,11 (с, 2H), 4,32 (д, 2H), 4,57 (т, 2H), 7,19 (д, 2H), 7,2-7,4 (м, 5H), 7,88 (д, 2H), 7,93 (д, 1H), 8,68 (дд, 1H), 8,99 (ушир.т, 1H), 9,10 (т.стр. д, 1H), 11,8 (ушир.с, 1H), MS (от LC/MS): m/z 432,5 [M+1 свободного основания]

Элементный анализ (для C₂₆H₂₉N₃O₃ · 2HCl · 0,035EtOH · 0,29EtOAc · 0,03гептан · 0,8H₂O):

Вычислено (%): C, 60,03; H, 6,54; N, 7,65; Cl, 12,91

Наблюдается (%): C, 59,85/59,97; H, 6,54/6,47; N, 7,67/7,67; Cl, 13,10/13,24

Вычислено FW: 534,63 (не принимая во внимание 0,8 H₂O, которые, вероятно, возникли в течение обращения с этим очень гигроскопичным порошком, поскольку ¹H ЯМР не показывает наличия H₂O).

Уровень этил хлорида в этом материале был измерен и было найдено, что он составляет 98 ppm. Образец был также проанализирован и было найдено, что он содержит 5 800 ppm гептана.

Анализ другой части этого образца привел к следующим результатам: AUC 99,6%, 1640 ppm этанола, 41480 ppm этилацетата, 5600 ppm гептаав, анизола не обнаружео и 120 ppm этил хлорида.

Процедура перекристаллизации соли была также разработана с использованием вышеупомянутой высушенной соли. Эта процедура работает только на очень чистой сырой соли (содержащий остаточный EtOH), полученной от концентрации солеобразующей реакционной смеси HCl:

Соль (575 мг) растворяли в двойной массе абсолютного EtOH (1,157 г) и затем нагревали под азотом. К этому горячему (перемешиваемому) раствору добавляли 1,6 г 25%-ого EtOH (в EtOAc) с последующим добавлением EtOAc (0,25 мл), что приводило к мутности, которая оставалась. Мутному горячему раствору давали охладиться до температуры окружающей среды, в ходе чего происходила кристаллизация. После заверешения кристаллизации (2 ч), кристаллическое твердое вещество фильтровали, промывали безводным EtOAc (~40 мл) и высушивали в вакууме, получая 424 мг дигидрохлоридной соли KX2-391 в форме сыпучего твердого вещества (мелкая дробь, AUC 99,8%), содержащего только 0,05 экв. (0,45% вес./вес.) EtOH и 0,015 экв. (0,26% вес./вес.) EtOAc. Немного лучшей рекуперации (460 мг от 586 мг) достигали, используя смесь изопропанол/EtOAc, но уровень захвата растворителя был более высоким [0,085 экв. (1,0% вес./вес.) у изопропанола и 0,023 экв. (0,4% вес./вес.) EtOAc].

Пример 3: Крупномасштабный синтез KX2-391 ди-HCl

Реагенты и растворители использовали такими, как они были получены от коммерческих поставщиков. Развитие реакций проверяли ВЭЖХ, GC/MS или ¹H ЯМР. Тонкослойную хроматографию (TLC) осуществляли, используя планшеты с силикагелем Analtech и визуализировали УФ светом (254 нм). Высокоэффективную жидксотную хроматографию (ВЭЖХ) осуществляли на приборе Agilent 1100 Series. Протонные и углеродные спектры ядерного магнитного резонанса получали, используя Bruker AV 300 при 300 МГц для протона и 75 МГц для углерода. Пик растворителя использовали как референсный пик для протонных и углеродных спектров.

Получение 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина (2)

В снабженный рубашкой реактор на 50 л, оборудованный обратным холодильником и температурным зондом, загружали 4-(3-хлорпропил)морфолин (2,44 кг, 0,54 моль), 4-бромфенол (2,27 кг, 0,54 моль, 1,0 экв.), измельченный в порошок карбонат калия (6,331 кг, 1,88 моль, 3,50 экв.) и DMF (12,2 л) и перемешивали. Реакционную смесь затем нагревали до 60-65ºC и перемешивали в течение ночи. Через 17,5 часов, реакционную смесь охлаждали до 20-25ºC. Реакционную смесь загружали на другой реактор, оборудованный донным клапаном для обработки. Поддерживая температуру 20-30ºC, в реактор загружали деионизованную воду (48,7 л). Фазы разделяли. Водный слой экстрагировали MTBE (3 × 24,4 л). К объединенным органическим фракциям добавляли деионизованную воду (18,3 л) и затем 6M гидроксида натрия (18,2 л). Смесь перемешивали в течение 2-5 минут, и фазы разделяли. Органическую фазу промывали водой (24,4 л) и солевым раствором (24,4 л), высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали, получая 3370 г желтого масла (89%-ый сырой выход, AUC 99,4% ВЭЖХ).

Получение 6-фторпиридин-3-илбороновой кислоты (4)

Реактор на 72 л, оборудованный обратным холодильником и температурным зондом. В реактор загружали 5-бром-2-фторпиридин (1,17 л, 0,568 моль), толуол (18,2 л) и триизопропил борат (3,13 л, 0,68 моль, 1,2 экв.) и перемешивали. Тетрагидрофуран (4,4 л) добавляли в реактор, и реакционную смесь охлаждали до температуры от −35 до −50ºC. Поддерживая температуру от −35 до −45ºC, в реактор осторожно добавляли н-бутил литий (раствор 2,5 М в гексане, 5,44 л, 0,68 моль, 1,2 экв.). Через 5 часов, реакцию считали полной, и реакционную смесь нагревали до температуры от −15 до −20ºC. К реакционной смеси в реактор добавляли 2M HCl (11,80 л), поддерживая температуру от −15ºC до 0ºC. Реакционную смесь перемешивали при 18-23ºC в течение (16 ч), и фазы разделяли. Органические фазы затем экстрагировали 6М гидроксида натрия (6,0 л). Кислые анбазные водные фазы смешивали в реакторе и добавляли 6М HCl (2,5 л) до достижения рН 7,5. Затем к водной фазе добавляли хлорид натрия (6,0 кг). Водную фазу тогда экстрагировали ТГФ (3 × 20 л). Объединенные органические фазы высушивали сульфатом магния и концентрировали, получая 1300 г твердого вещества желто-коричневого цвета (81%-ый сырой выход).

Получение 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина (5)

В реактор на 72 л, оборудованный обратным холодильником, разбрызгивающей трубкой, барботером и температурным зондом, загружали 6-фторпиридин-3-илборную кислоту (2,84 кг, 1,24 экв.), 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолин (4,27 кг, 1,0 экв.) и DME (27 л). Начинали перемешивание, и затем к реакционной смеси добавляли карбонат натрия (4,74 кг, 3,0 экв.) в форме раствора в деионизованной воде (17,1 л). Аргон барботировали через реакционную смесь в течение 50 минут. Под атмосферой аргона, тетракис(трифенилфосфин)палладий (750 г, 0,04 экв.) добавляли к реакционной смеси в форме суспензии в DME (1,0 л). Реакционную смесь нагревали до 75-85ºC и перемешивали в течение ночи (17 ч). Реакционную смесь охлаждали до температуры от 18 до 22ºC. Деионизованную воду (26,681 кг) и MTBE (26,681 л) загружали в реактор и перемешивали в течение 5 минут. Фазы разделяли, и водную фазу экстрагировали MTBE (2 × 26,7 л). Объединенные органические фазы экстрагировали 2M HCl (1 × 15,0 л, 3 × 21,8 л). Водную фазу затем загружали снова в реактор и добавляли этилацетат (26,7 л). Устанавливали рН 6,2, используя 6М гидроксида натрия (26,7 л), поддерживая температуру от 15 до 25ºC. Фазы разделяли, и водную фазу экстрагировали этилацетатом (2 × 26,7 л). Объединенные органические фазы высушивали сульфатом магния и концентрировали, получая 4555 г остатка (101%-ый сырой выход, AUC 67,1% ВЭЖХ).

Очистка 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина (5)

Сырой продукт (575 г) очищали хроматографией на силикагеле, элюируя смесью метанол/этилацетат/гептан (30% этилацетат/гептан, 50% этилацетат/гептан, 75% этилацетат/гептан, 100% этилацетата и 5% метанол/этилацетат). Концентрация чистых фракций TLC (10% метанол/дихлорметан, R_f=0,3) дала 420 г твердого вещества светло-коричневого цвета (73% рекуперации, AUC>99,9% ВЭЖХ).

Получение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила (6)

Раствор 1М NaHMDS (2,0 л, 5,0 экв.) в ТГФ загружали в 5-л колбу и охлаждали до температуры от −20 до −15ºC. Поддерживая температуру ниже −10ºC, фторид (119,7 г, 1,0 экв.) в ТГФ (500 мл) загружали в колбу за 20 минут. Ацетонитрил (82,5 мл, 4,0 экв.) в ТГФ (170 мл) добавляли в колбу за 20 минут, поддерживая температуру ниже −10ºC. Реакционную смесь затем перемешивали в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляли солевой раствор (1,5 л, 12,6 изданий) с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру ниже 10ºC. Раствор затем нагревали до температуры окружающей среды, и слоям дали разделиться. Смесь фильтровали через Целит и промывали ТГФ (1 × 200 мл, 1 × 100 мл). Водную фазу экстрагировали толуолом (750 мл). Объединенные органические фазы высушивали сульфатом магния, фильтровали, промывали толуолом (2 × 250 мл) и концентрировали досуха. Добавляли толуол (1 л), и раствор снова концентрировали досуха, получая 169,8 г масла. MTBE (1190 мл, 7 об.) добавляли к маслу при 50ºC и перемешивали в течение 15 минут. Гептан (850 мл, 5 об.) добавляли за десять минут при 50ºC. Смесь затем охлаждали до температуры окружающей среды за 1,5 часа и перемешивали в течение 2 часов. Суспензию фильтровали, промывали смесью 1:4 MBTE/гептан (2 × 100 мл) и высушивали в сушильном шкафу в течение ночи при 45ºC, получая 102,3 г твердого вещества грязно-белого цвета (80%-ый выход, AUC 98,8% ВЭЖХ).

Получение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетата (7)

Нитрил 6 (101 г) и метанол (1,01 л, 10 об.) загружали в 3-л колбу, оборудованную магнитной мешалкой и термопарой. Концентрированную H₂SO₄ (175 мл, 10,0 экв.) добавляли по каплям к раствору за 15 минут, поддерживая температуру ниже 60ºC. Затем к раствору по каплям добавляли 30% дымящую серную кислоту (124 мл), поддерживая температуру ниже 60ºC. Раствор затем нагревали с обратным холодильником с нагревающейся мантией и перемешивали в течение ночи. Когда реакцию считали полной, реакционную смесь охлаждали до 20ºC. Во вторую колбу (22 л) загружали насыщенный бикарбонат натрия (10,7 л) и дихлорметан (1,1 л) и охлаждали до 15ºC. Поддерживая температуру ниже 20ºC, реакционную смесь добавляли к смеси бикарбонат натрия/дихлорметан. Смесь перемешивали в течение 15 минут, и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (1 × 550 мл, 1 × 300 мл). Объединенные органические фазы высушивали сульфатом магния и концентрировали досуха, получая 105 г твердого вещества оранжевого цвета (94%-ый сырой выход, AUC 97,7% ВЭЖХ).

Получение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (KX2-391)

Сложный эфир 7 (103 г), анизол (513 мл, 5 об.) и бензиламин (94 мл, 3,0 экв.) загружали в колбу на 3 л, оборудованную термопарой и верхней мешалкой. Реакционную смесь затем нагревали до 142ºC и перемешивали в течение двух дней. Реакционную смесь охлаждали до 45-50ºC и перемешивали в течение 2 часов. К смеси по каплям за один час добавляли н-гептан (1,5 л). Раствор охлаждали до температуры окружающей среды за три часа и затем перемешивали в течение ночи. Полученную суспензию фильтровали, промывали смесью 4:1 анизол/н-гептан (200 мл) и н-гептаном (3 мл ×100). Высушенный в сушильном шкафу в течение ночи, полученный продукт представлял собой 112,1 г твердого вещества желто-коричневого цвета (90%-ый выход, AUC 99,6% ВЭЖХ). Использование единственного изомера гептана было существенным для адекватной количественной оценки остатка растворителя. См. Фигуру 5 в отношении ¹H ЯМР KX2-391.

Получение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид дигидрохлорида (KX2-391 ^. 2HCl)

EtOH (1,0 л) загружали в 2-л колбу и к колбе медленно добавляли ацетил хлорид (62,5 мл, 3,0 экв.) и перемешивали в течение 40 минут. Полученный раствор добавляли к KX2-391 (100 г) за 30 минут, поддерживая температуру 30ºC. Раствор концентрировали до массы 270 г. Концентрированный раствор добавляли к этилацетату (2 л) за 20 минут при быстром перемешивании. Смесь перемешивали в течение ночи и затем фильтровали под азотом, получая два различных твердых продукта, твердые частицы желто-коричневого цвета (73,5 г) и более темные твердые частицы (42,2 г). Твердые частицы смешивали в сухом виде, получая объединенный выход 99%. Анализ ВЭЖХ показал чистоту 99,0% (AUC). Анализ показал, что этанол присутствовал в количестве 2530 ppm, этилацетат в количестве 48110 ppm, этил хлорид в количестве 170 ppm, и гептан и анизол не были обнаружены. Содержание палладия анализировали три раза и установили, что оно составляет 29 ppm, 2 ppm и менее чем 1 ppm.

Исследование кристаллизации KX2-391 ^. 2HCl

Эксперименты, показанные в Таблице 1, проводили, чтобы исследовать различные условия кристаллизации и осаждения KX2-391^.2HCl.

Таблица 1
Исследование кристаллизации KX2-391 2HCl Условия образования соли Условия кристаллизации Комментарии Экспт Амид
(г) Партия Растворитель Кислота Растворитель
(об.) Партия EtOAc
(об.) Темп.
© Красивые твердые частицы
(д/н)   02BP097A 0,1 02BP090D
(грязно-белый) IPA IPA-HCl
(5M) IPA
(10) -- 10 60 Н Липкие твердые частицы/суспензия, образованная при добавлении EtOAc 02BP097B 0,1 02BP091E
(белый) IPA IPA-HCl
(5M) IPA
(10) -- -- 60 Н Гуммирование при охлаждении 02BP097C 0,1 02BP091E
(белый) IPA IPA-HCl
(5M) IPA
(15) -- 6 65 Н Сначала высыхание при добавлении EtOAc; масляный продукт при охлаждении 02BP097D 0,1 02BP091E
(белый) -- IPA-HCl
(5M) EtOAc/IPA -- -- 60 Н IPA-HCl добавляли к раствору амида; гуммирование при добавлении (2 капли)

02BP097E 0,3 02BP090D
(грязно-белый) EtOH IPA-HCl
(5M) EtOH
(3,3) Acros 6,3 30-60 Д Твердые частицы, наблюдаемые при 30ºC после добавления EtOAc; медленная фильтрация 02BP097F 0,3 02BP093G
(твердое вещество желто-кооричневого цвета) EtOH IPA-HCl
(5M) EtOH
(3,3) Acros 6,6 60 Д Твердые частицы, наблюдаемые при охлаждении после добавления EtOAc; медленная фильтрация 02BP097G 0,3 02BP093G
(твердое вещество желто-кооричневого цвета) PrOH IPA-HCl
(5M) PrOH
(3,3) -- 1,7 60 Н Твердые частицы, наблюдаемые при охлаждении после добавления EtOAc; медленная фильтрация 02BP097H 0,3 02BP093G
(твердое вещество желто-кооричневого цвета) BuOH IPA-HCl
(5M) BuOH
(5) -- 1,2 60 Н Твердые частицы, наблюдаемые при охлаждении после добавления EtOAc; медленная фильтрация

02BP098A,B,C 1,0 02BP093G
(твердое вещество желто-кооричневого цвета) EtOH IPA-HCl
(5M) EtOH
(3,3) Ald 4 - 6 60 Н Мутность, наблюдаемая раньше, чем ожидалось; выделение масла 02BP098D 1,0 02BP093G
(твердое вещество желто-кооричневого цвета) EtOH EtOH-HCl
(2,5M) EtOH
(3,3) Ald 4,6 60 Н Выделение масла при охлаждении 02BP098E 0,3 02BP090D
(грязно-белый) EtOH EtOH-HCl
(2,5M) EtOH
(3,3) Ald 5,3 60 Н Выделение масла при добавлении EtOAc 02BP098F 0,3 02BP091E
(белый) EtOH IPA-HCl
(5M) EtOH
(3,3) Acros 6 60 N Выделение масла при добавлении EtOAc 02BP098G 0,3 02BP091E
(белый) PrOH IPA-HCl
(5M) PrOH
(3,3) -- 4 60 N Выделение масла при охлаждении

Осаждение было достигнуто обратным добавлением KX2-391^.2HCl в концентрированном растворе этанола к большому объему быстро перемешиваемого этилацетата. Эта процедура осаждения была осуществлена для демонстрационной загрузки, приводящей к формированию двух различных типов твердого вещества. Два различных типа твердого вещества были физически разделены и отфильтрованы отдельно. Сначала фильтровали менее плотное твердое вещество желто-коричневого цвета (партия 02BP111E, 74 г, AUC 99,1% ВЭЖХ), затем более плотное более темное твердое вещество (партия 02BP111F, 43 г, AUC 99,1% ВЭЖХ). После высушивания в вакуумном сушильном шкафу и перед смешиванием двух твердых веществ образец каждого сохраняли для анализа. Данными, представляющими интерес, являются Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC, Фигуры 1 и 2) и Преломление порошка в Рентгеновских лучах (XRPD, Фигуры 3 и 4). Данные ВЭЖХ для этих двух образцов были сопоставимы, в то время как DSC и XRPD были отличны.

Оба препарата ВЭЖХ имели чистоту более 99,0% (в % области), образец из партии 02BP111E показал единственный эндотермический случай приблизительно при 198°C, в то время как образец из партии 02BP111F показал два эндотермических события при 117°C и 189°C. Данные XRPD для этих двух образцов были также отличны, образец из партии 02BP111E выглядел кристаллическим, в то время как образец из партии 02BP111F выглядел аморфным. Данные ВЭЖХ, данные XRPD и данные DSC подтвердили, что эти два образца представляют собой разные формы одного и того же материала.

Обе партии KX2-391^.2HCl (партия 02BP111E и 02BP111F) смешивали в сухом виде, получая новую партию KX2-391^.2HCl (партия 02BP111G). KX2-391^.2HCl (партия 02BP111G) содержала 170 ppm этил хлорида.

Пример 4: Получение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилата (KX2-391. MSA).

Получение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила (6)

В круглодонный реактор 1 загружали натрий бис(тириметилдисилил)амид (1,0 М в ТГФ, 23,2 л), и раствор охлаждали до ≤-10°C за 52 минуты. В стеклянную бутыль, под азотом, загружали соединение 5 (1400 г, 1 вес) и ТГФ (7,0 л, безводный, 5 об.)). Загрузку перемешивали со включенной воздушной мешалкой под азотом. Загрузка не была полностью растворимой и представляла собой мутный раствор. Раствор соединения 5 добавляли в реактор 1 за 41 минуту через 5-л воронку для добавления. Раствор ацетонитрила (965 мл, безводный, 0,69 об.) в ТГФ (2,0 л, безводный, 1,43 об.) получали и добавляли в реактор 1 за 48 минут при ≤-10°C через ту же самую воронку для добавления (незначительное количество твердого вещества желтого цвета присутствовало на стенке реактора). После выдерживания в течение 45 минут при ≤-10°C загрузку отбирали для анализа, и соединение 5 составило 0,03% в результате превращения (спецификация ≤1,5% в результате превращения). Через один час 24 минуты после отбора к реактору 1 за 52 минуты добавляли солевой раствор (17,6 л, 12,6 об.) и получали плохо перемешивающую загрузку (напоминающую эмульсию). Слой диатомовой земли получали на 24-дюймовой воронке из полипропилена (1026 г целита 545, суспендированного в 3,3 л воды с исключенным фильтратом). Загрузку фильтровали при отсасывании через этот слой, и реактор промывали ТГФ (1,75 л, 1,25 об.), и смывы переносили на осадок от фильтрации. Осадок промывали второй частью ТГФ (1,75 л, 1,25 об.), и полное время фильтрации составило 1 час 17 минут. Фильтрат переносили в реактор 2, и фазы разделяли и выдерживали в течение ночи (загрузку выдерживали в реакторе под азотом). Органическую фазу (приблизительно 34,5 л) дренировали, и водную фазу экстрагировали толуолом (8,1 л, 5,8 об.), перемешивая в течение 16 минут и отстаивая в течение 12 минут. Возможно опустить экстракцию толуолом и просто добавить толуол непосредственно к органической фазе после разделения. Водную фазу (приблизительно 19 л) удаляли, и органические фазы объединяли и высушивалили в реакторе 2 с сульфатом магния (1400 г, 1 вес, безводный) за 55 минут. Загрузку фильтровали через 24-дюймовую воронку из полипропилена, оборудованную действующим фильтром, в стеклянную бутыль. Загрузку обрабатывали аргоном и сохраняли в холодной (2-8°C) в этой концентрации. На следующий день загрузку концентрировали до остатка и промывали толуолом (11,8 л, 8,4 об.), который в свою очередь концентрировали (водяная баня 50±5°C). В момент добавления толуола загрузка представляла собой оранжевую суспензию и оставалась такой после концентрации. Полное время концентрации составило 5 часов 3 минуты.

В реактор 3 загружали MTBE (13,9 л, 9,9 об., ACS), который затем нагревали до 45±5°C. MTBE дренировали, и приблизительно 2 л MTBE использовали для суспендирования загрузки от сосуда в реакторе 3. Оставшийся MTBE добавляли в реактор 3, поддерживая температуру загрузки 45±5°C, и загрузку затем выдерживали в течение 33 минут в этом диапазоне температур. н-гептан (10 л, 7,1 об., 99%) затем добавляли в реактор 3 за 39 минут, поддерживая загрузку при 45±5°C. Источник тепла отсоединяли, загрузку охлаждали до 25±5°C за 4 часа 5 минут и выдерживали при этом диапазоне температур в течение 27 часов 4 минуты. Загрузку затем фильтровали при отсасывании через 24-дюймовую воронку из полипропилена (ткань PTFE), накрывали и высушивали отсасыванием под азотом. Полное время фильтрации составило 20 минут. Оранжевую загрузку (чистый влажный вес 1322 г) высушивали до постоянного веса за 48 часов 3 минуты в вакуумном сушильном шкафу при 45±5°C. Загрузку переносили в два лабораторных стакана из янтарного стекла на 80 унций (Тефлоновая крышка) и обрабатывали аргоном (1217 г 6, 81% теории).

Получение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетата (7)

В 22-л реактор загружали соединение 6 (900 г, 2,78 моль) и метанол (9,0 л, 10 об., безводный). Серную кислоту (1115 мл, кипятясь) добавляли к суспензии за 2 часа 11 минут, получая темный раствор. Максимальная температура составила 65,5°C (цель <65°C). Серную кислоту (1565 мл, 1,74 об., концентрированная) добавляли к загрузке за 1 час 49 минут, и загрузку затем нагревали до температуры видимого кипения растворителя (74°C) за 18 минут. Загрузку поддерживали при этой температуре в течение 16 часов 57 минут. Было отметено, что видимое мягкое кипение отсутствует, поэтому загрузку нагревали снова с обратным холодильником при 79-80°C в течение 2 часов 15 минут. Загрузку поддерживали при этой температуре (80±5°C) в течение 10 часов 57 минут, и источник тепла тогда отсоединяли; дополнительную загрузку метанола (0,75 л, 0,8 об., безводный) осуществляли через 26 часов 4 минуты, чтобы пополнить потерянный объем растворителя. Было оценено, что 2,5-3,3 л растворителя были потеряны в результате выпаривания. Анализ ВЭЖХ после 42 часов 31 минуту кипения показал, что уровень соединения 6 составил 0,6% в результате превращения (спецификация ≤1,0%). В каждый реактор 1 и 2 загружали метилен хлорид (4,8 л, 5,3 об.) и раствор бикарбоната натрия (48 л, 53,3 об., насыщенный). Растворы бикарбоната натрия сохраняли в течение ночи при 2-8°C и удаляли на следующее утро. Половину загрузки от 22-л реактора добавляли частями в каждый реактор за 47 и 44 минуты, соответственно, (температура загрузки составила 12-13 и 14-15°C, соответственно). Гашение сопровождалось образованием диоксида углерода (энергичное при закручивании). Загрузки из каждого реактора затем переносили в 200-л реактор, и загрузку перемешивали в течение 16 минут, затем отстаивали в течение 25 минут, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали последовательно двумя частями метилен хлорида (5 л, 5,6 об. и 2,7 л, 3 об.); каждая экстракция имела место в течение 15 минут, перемешивание осуществляли с отстаиванием в течение 6 и 9 минут, соответственно. Объединенную органическую фазу переносили в реактор 3 и высушивали сульфатом магния (900 г, 1 вес, безводный) в течение 35 минут. Загрузку затем фильтровали при отсасывании через 24-дюймовую воронку из полипропилена, выстланную тканью «Акулья кожа» и оборудованную действующим фильтром (10 микронов, Pall P/N 12077). Фильтрат концентрировали на роторном испарителе в течение в общей сложности 2 часов 18 минут при 40±5°C (температура водяной бани). Через 54 минуты загрузка затвердевала и формировала шарики. Их разбивали, и концентрацию продолжали. Загрузку (смесь тонких твердых частиц и лабильных кусков) затем дополнительно измельчали и возвращали в сосуд, и концентрацию продолжали. Загрузку переносили в стакан из янтарного стекла на 80 унций с Тефлоновой крышкой и обрабатывали аргоном, получая соединение 7 (871 г, 88% теории).

Получение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (KX2-391)

В 22-л реактор загружали соединение 7 (650 г, 1,82 моль), анизол (3,25 л, 5 об., безводный) и бензиламин (600 мл, 0,92 об., 3 экв.). Загрузку (приблизительно 18°C) нагревали до 142±5°C в течние 1 часа 44 минуты, причем растворение происходило при 30°C. Загрузку поддерживали при 142±5°C в течение 69 часов 30 минут, и в этот момент времени анализ ВЭЖХ показал, что соединение 7 составило 0,9% в результате превращения (спецификация ≤1,7% в результате превращения). Загрузку охлаждали до 45-50°C за 5 часов 12 минут (для улучшения охлаждения поток азота был увеличен, как только температура загрузки составила приблизительно 72°C). В этом диапазоне температур загрузка плохо перемешивалась, и при смешивании температуру загрузки увеличивали до 52°C. Она составляла было >50°C в течение ≤15 минут. Загрузку выдерживали в течение 2 часов 2 минут один раз первоначально при <50°C, затем н-гептан (9,75 л, 15 об., 99%) добавляли к загрузке за 1 час 56 минут, поддерживая температуру загрузки 45-50°C. Нагревание тогда прекращали, и загрузку охлаждали до 25°C за 10 часов 32 минуты и затем до приблизительно 20°C за 20 минут. Полное время выдерживания загрузки при ≤25°C составило 4 часа 50 минут (2 часа 47 минут приблизительно при 20°C). Загрузку фильтровали при отсасывании через 24-дюймовую воронку с фильтром из полипропилена (выстланную тканью PTFE), и реактор промывали смесью анизол/н-гептан (1,3 л, 4:1), и смывы переносили на осадок после фильтрации. Осадок затем последовательно промывали двумя частями н-гептана (1,3 л, 0,65 л). Полное время фильтрации составило 39 минут. Загрузку (чистый влажный вес 1004 г KX2,391) переносили на трем стеклянные тарелки и помещали в вакуумный сушильный шкаф при 50°C и высушивали до постоянного веса в течение 96 часов 26 минут.

Получение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамид мезилата (KX2-391·MSA)

KX2-391 (520 г, 1,21 моль) переносили в реактор 1, используя ацетон (41,6 об., 80 об., ACS), чтобы облегчить перемещение. Загрузку нагревали до 50±5°C за 33 минуты, причем растворение происходило при 30°C. Загрузку переносили во второй реактор через насос для перемещения, оборудованный действующим фильтром (Pall P/N 12077, 10 микрон) и повторно нагревали до температуры от 46°C до 50±5°C. Метансульфоновую кислоту (121,4 г, 1,05 экв., 99%, сверхчистую) добавляли к светло-желтой загрузке за 12 минут, и нагревание прекращали. Через четырнадцать минут наблюдались белые твердые частицы, которые увеличивались в числе, образуя через 59 минут белую суспензию. Загрузку поддерживали в диапазоне 25±5°C через 7 часов 51 минуту и выдерживали в течение еще 19 часов 21 минут (10 часов 30 минут при ≤27°C). Загрузку фильтровали при отсасывании через 24-дюймовый фильтр из полипропилена (ткань PTFE), и реактор промывали ацетоном (2,0 л, осветленный, ACS), и смывы переносили на осадок после фильтрации. Осадок накрывали крышкой из нержавеющей стали и высушивали отсасыванием под потоком азота. Полное время фильтрации составило 21 минуту. Загрузку (чистый влажный вес 764 г) переносили на три стеклянных сушильных планшета и высушивали в вакуумном сушильном шкафу до постоянного веса 25±5°C в течение 21 часа 54 минут (565 г, 89% теории). Образец отбирали для анализа, и загрузку поддерживали в вакууме при 25±5°C. Загрузку затем переносили в две колбы из янтарного стекла на 80 унций (полипропиленовая крышка с тефлоновым покрытием), обрабатывали аргоном и сохраняли при температуре от -10 до -20°C.

Пример 5: Рентгеновская дифрактометрия порошка KX2-391 ^. MSA, Форма A

Анализ преломления порошка в рентгеновских лучах (XRPD) осуществляли, используя дифрактометр Shimadzu XRD-6000, на KX2-391^.MSA, Форма А, полученном в соответствии со способом согласно настоящему изобретению (Пример 4). Дифрактометр был оборудован медной Рентгеновской трубкой Kα, эксплуатируемой при 40 кВ, 40 мА. Образцы помещали на Si ультрамикроштативы для образцов с отводом в исходное положение. Щель расходимости настраивали на 1,00 градус, щель рассеивания настраивали на 1,00 градус, и принимающая щель составила 0,30 мм. Диапазон сканирования составлял 3,0-45,0 градусов в непрерывном режиме сканирования с размером шага 0,04 градуса и скоростью сканирования 2°/мин. На Фигуре 7 показана Рентгеновская дифрактограмма для KX2-391^.MSA, Форма A. Соответствующие данные для Рентгеновских дифрактограмм представлены в Таблице 2.

Таблица 2
XRPD KX2-391 ^. MSA, Форма A # 3 наиболее мощных пика no. Пик
no. 2Тета
(град.) d
(A) I/II FWHM
(град.) Интенсивность
(импульсов) Интегрированная Инт.
(импульсов) 1 11 22,7377 3,90769 100 0,29390 2624 20079 2 3 16,3047 5,43208 62 0,29020 1623 13145 3 6 19,6782 4,50779 60 0,29280 1563 13084 # Список данных пика   пик
no. 2Тета
(град.) d
(A) I/II FWHM
(град) Интенсивность
(импульсов) Интегрированная Инт.
(импульсов)   1 13,0767 6,76484 10 0,29390 260 2343   2 15,6073 5,67320 7 0,29270 191 1749   3 16,3047 5,43208 62 0,29020 1623 13145   4 17,5438 5,05111 18 0,28760 467 4096   5 18,9449 4,68059 48 0,30900 1259 12580   6 19,6782 4,50779 60 0,29280 1563 13084   7 20,0800 4,41849 11 0,15360 298 2037   8 20,9600 4,23492 3 0,24000 87 682   9 21,4163 4,14571 8 0,30340 207 1843   10 22,2800 3,98692 14 0,35400 375 4393   11 22,7377 3,90769 100 0,29390 2624 20079   12 23,5116 3,78078 10 0,35120 260 2664   13 24,6429 3,60972 4 0,24270 108 641   14 25,2400 3,52566 4 0,28180 92 706   15 25,7200 3,46094 7 0,47700 190 1954   16 26,1200 3,40884 12 0,32600 321 2629   17 26,4400 3,36830 21 0,30440 557 4954   18 26,8000 3,32387 9 0,00000 229 0   19 27,1200 3,28537 7 0,37760 185 2917   20 29,6287 3,01266 3 0,28250 84 986

Пример 6: Калориметрический анализ дифференциального сканирования KX2-391 ^. MSA, Форма A

Калориметрический анализ дифференциального сканирования (DSC) осуществляли, используя прибор Mettler 822^e DSC на KX2-391^.MSA, Форма А, полученном в соответствии со способом согласно настоящему изобретению (Пример 4). Образцы взвешивали в алюминиевой кювете, накрывали перфорированной крышкой и затем герметизировали. Анализ начинали при 30°C и повышали температуру до 300-350°C со скоростью 10°C/минута. Единственное эндотермическое событие было зарегистрировано при 164°C DSC. На Фигуре 8 изображена термограмма DSC для KX2-391^.MSA, Форма A.

Пример 7: Тепловой гравиметрический анализ (TGA) KX2-391 ^. MSA, Форма A

Тепловой гравиметрический анализ осуществляли, используя прибор Mettler 851^e SDTA/TGA на KX2-391^.MSA, Форма А, полученном в соответствии с способом согласно настоящему изобретению (Пример 4). Образцы взвешивали в тигле из оксида алюминия и анализировали при температуре от 30°C до 230°C, причем скорость изменения температуры составляла 10°C/минута. Никаких потерь веса не наблюдалось в анализе TGA ниже 230°C. На Фигуре 9 изображена хроматограмму TGA для KX2-391^.MSA, Форма A.

Пример 8: Анализ сорбции влаги и исследования в камере влажности KX2-391 ^. MSA

Эксперименты по сорбции влаги осуществляли, используя прибор Hiden IGAsorp Moisture Sorption на KX2-391^.MSA, полученном в соответствии со способом согласно настоящему изобретению (Пример 4). Сначала образец высушивали при относительной влажности 0% (RH) и 25°C, пока не было достигнуто весовое равновесие или максимум четыре часа. Образец затем подвергали изотермическому (25°C) адсорбционному сканированию от 10% до 90% RH с шагом 10%. Образцу давали уравновеситься к асимптотическому весу в каждой точке для максимума четырех часов. После адсорбции, десорбционное сканирование от 85 до 0% RH (при 25°C) осуществляли с шагом -10%, снова давая максимум четыре часа для приведения в равновесие к асимптотическому весу. Образец затем высушивали в течение одного часа при 80°C, и полученное твердое вещество анализировали с помощью XRPD. В одном аспекте, анализ сорбции влаги показал, что образец KX2-391^.MSA был слегка гигроскопичным, абсорбируя 1,1 вес.% воды при 60% RH и 5,7 вес.% воды при 90% RH. Было обнаружено, что материал, получаемый в результате эксперимента сорбции влаги, имеет структуру XRPD, совместимую со стартовой формой. На Фигуре 10 изображено изменение процента содержания воды как функция относительной влажности для KX2-391^.MSA, Форма A.

Дальнейшее исследование гигроскопичности мезилатной соли осуществляли, используя несколько камер влажности, чтобы охватить предел колебания влажности от 75, 88 до 95% RH. Камеры RH 75, 88 и 95% были получены с NaCl, BaCl₂ ^.2H₂O и Na₂HPO₄ ^.12H₂O, соответственно, и были уравновешены в течение 48 часов до введения образцов. Образцы помещали в алюминиевые кюветы и проверяли визуальным осмотром в течение пяти дней. В Таблицу 3 сведены наблюдения в моменты времени 0, 3, 5, 24, 48, 72, 96 и 120 часов. Мезилатная соль была стабильна при 75% RH, поскольку материал не расплывался и ни показывал разложения в анализе ВЭЖХ. Материал, экспонируемый к 88% RH, демонстрировал более темный желтый цвет и разложение примерно 10%-ой области ВЭЖХ. В условиях 95% RH наблюдали, что он расплывался в течение трех часов после экспонирования к высокой влажности.

Таблица 3
Резюме исследования гигроскопичности KX2-391-MSA, Форма А, при 75, 88 и 95% относительной влажности (RH) Партия образца Камера влажности **
(% RH/соль) Наблюдения/Время (ч) XRPD* Анализ ВЭЖХ
(% область чистоты) 0 3 5 24 48 72 96 120 GJP-S-17(1) Начальная NA NA NA NA NA NA NA NA Соответствует 99,4 75%-NaCl FF FF FF FF FF FF FF FF Соответствует 99,4 88%-BaCl₂ · 2H₂O FF CC CC CC CC CC CC CC Соответствует 89,3 95%-NA₂HPO₄ · 12H₂O FF D D D D D D D NA NA FF - Свободно текучий порошок
D - полное расплывание наблюдаемого образца
СС - Изменение цвета наблюдаемого образца
NA - Образец не анализировался
* - образец по сравнению с структурой XRPD спонсорской партии
** - Относительная влажность, основанная на литературных значениях для солевых растворов при 25-25ºC

Пример 9: Исследования стабильности KX2-391 ^. MSA, Форма A

Исследования стабильности осуществляли на KX2-391^.MSA, полученном в соответствии со способом согласно настоящему изобретению (Пример 4), с использованием условий, перечисленных в Таблице 4, чтобы определить эффекты экспонирования к повышенной температуре и/или относительной влажности на кристаллической форме KX2-391^.MSA, Форма A. Через 2 недели образцы анализировали с помощью XRPD и ВЭЖХ, чтобы определить, имелось ли какое-нибудь изменение формы или разложение. Результаты показаны в Таблице 5. Образцы JSS-T-99 (6), (7), (8), (9) и (11) наблюдали, получая ту же самую кристаллическую форму XRPD, и ВЭЖХ не показывала значительного разложения. Наблюдали, что материал JSS-T-99 (10), сохраненный при 95% RH, расплывался в этих условиях через менее чем 16 часов. Результаты показали, что KX2-391^.MSA, Форма А, является стабильной кристаллической формой после экспонирования к используемым ускоренным условиям стабильности.

Таблица 5
Исследования стабильности NB Код KX2-391-MSA Amt (мг) Условия экспонирования Начальная форма (XRPD) Форма через 2 недели (XRPD) Чистота ВЭЖХ
(AUC) JSS-T-99(6) 17,9 60ºC Форма A Форма A >99% JSS-T-99(7) 3,619 51% RH Форма A >99% JSS-T-99(8) 4,125 75% RH Форма A >99% JSS-T-99(9) 3,997 88% RH Форма A >99% JSS-T-99(10) 5,756 95% RH Расплавание <16 ч NA JSS-T-99(11) 59,2 40ºC/75% Форма A >99%

Пример 10: Высокоэффективная жидкостная хроматография KX2-391 ^. MSA, Форма A

Высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) осуществляли, используя систему ВЭЖХ Waters Alliance HPLC на KX2-391^.MSA, Форма А, полученном в соответствии со способом согласно настоящему изобретению (Пример 4). Система ВЭЖХ была оборудована УФ-детектором, устройством для создания градиента и сбора и обработки электронных данных, или эквивалентным, автопробоотборником, способным к инъекциям по 10 мкл, аналитической колонкой Thermo Hypersil Gold, 4,6 × 150 мм, 3,0 мкм, P/N 25003-154630, аналитическими весами, способными к взвешиванию с точностью ±0,01 мг, градуированными пипетками и колбами класса А.

Колонка, используемая для исследования, представляла собой колонку Thermo Hypersil Gold, 4,6 × 150 мм, 3,0 мкм, и температура колонки и автоматической пипетки равнялась температуре окружающей среды. Детекция элюируемого соединения происходила при 248 нм (KX2-391 был обнаружен при 248 нм) и 210 нм (бензиламин был обнаружен при 210 нм). Мобильная фаза A представляла собой 0,05% TFA в воде и Мобильная Фаза B представляла собой 0,05% TFA в ацетонитриле с объемной скоростью потока 1,0 мл/мин. Градиент элюирования показан в Таблице 6. Объем инъекции 10 мкл использовался для всех образцов со временем анализа 30 мин. Временя повторного уравновешивания и время сбора составляло 8 минут и 22 минуты, соответственно. Промывку иглы после завершения разгона осуществляли в смеси 50:50 Ацетонитрил/Вода. На Фигуре 11 изображена хроматограмма ВЭЖХ и пиковые результаты для KX2-391^.MSA, Форма A.

Таблица 6
Градиент элюирования ВЭЖХ для KX2-391 ^. MSA, Форма A Время (минуты) % A % B 0,0 95 5 20,0 30 70 21,0 0 100 22,0 0 100 22,5 95 5

30,0 95 5

Пример 11 Анализ с помощью инфракрасной спектроскопии ослабленного общего отражения трансформантов Фурье KX2-391 ^. MSA, Форма A

Анализ с помощью инфракрасной спектроскопии ослабленного общего отражения трансформантов Фурье (ATR-FTIR) осуществляли на KX2-391^.MSA, Форма А, полученном в соответствии со способом согласно настоящему изобретению (Пример 4). После получения фона условий лаборатории, образцы помещали в ATR, приссовали плашкой и получали спектр. На Фигуре 12 изображена спектрограмма ATR-FTIR для KX2-391^.MSA, Форма А, измеренная Thermo-Nicolet Avatar 370 с приложением Smart Endurance Attenuated Total-Reflection Attachment.

Пример 12: XRPD KX2-391 ^. 2HCl

Анализ на Рентгеновское преломление порошка (XRPD) осуществляли, используя дифрактометр Shimadzu XRD-6000 на KX2-391.HCl, полученном в соответствии со способом согласно настоящему изобретению (Пример 3). Дифрактометр был оборудован медной Рентгеновской трубкой Kα, эксплуатируемой при 40 кВ, 40 мА. Образцы помещали на Si ультрамикроштативы для образцов с отводом в исходное положение. Щель расходимости настраивали на 1,00 градус, щель рассеивания настраивали на 1,00 градус, и принимающая щель составила 0,30 мм. Диапазон сканирования составлял 3,0-45,0 градусов в непрерывном режиме сканирования с размером шага 0,04 градуса и скоростью сканирования 2°/мин. На Фигуре 13 изображена Рентгеновская дифрактограмма для KX2-391^.2HCl (партия 02BP111G), соответствующие данные для Рентгеновской дифрактограммы представлены в Таблице 7.

Пример 13: DSC KX2-391 ^. 2HCl

Калориметрический анализ дифференциального сканирования (DSC) осуществляли, используя прибор Mettler 822^e DSC на KX2-391^.2HCl, полученном в соответствии со способом согласно настоящему изобретению (Пример 3). Образцы взвешивали в алюминиевой кювете, накрывали перфорированной крышкой и затем герметизировали. Анализ начинали при 30°C и повышали температуру до 300-350°C со скоростью 10°C/минута. Кривая DSC показала три эндотермических события при 189, 266 и 285°C. На Фигуре 14 изображена термограмма DSC для KX2-391^.2HCl (партия 02BP111G).

Пример 14: TGA KX2-391 ^. 2HCl

Тепловой гравиметрический анализ осуществляли, используя прибор Mettler 851^e SDTA/TGA, на KX2-391^.2HCl, полученном в соответствии со способом согласно настоящему изобретению (Пример 3). Образцы взвешивали в тигле из оксида алюминия и анализировали при температуре от 30°C до 230°C, причем скорость изменения температуры составляла 10°C/минута. Потерю веса 9,2% наблюдали между 30-230°C. На Фигуре 15 изображена хроматограмма TGA для KX2-391^.2HCl (партия 02BP111G).

Пример 15: Анализ сорбции влаги KX2-391 ^. 2HCl

Эксперименты по сорбции влаги осуществляли, используя прибор Hiden IGAsorp Moisture Sorption, на KX2-391^.2HCl, полученном в соответствии со способом согласно настоящему изобретению (Пример 3). Сначала образец высушивали при относительной влажности 0% (RH) и 25°C, пока не было достигнуто весовое равновесие или максимум четыре часа. Образец затем подвергали изотермическому (25°C) адсорбционному сканированию от 10% до 90% RH с шагом 10%. Образцу давали уравновеситься к асимптотическому весу в каждой точке для максимума четырех часов. После адсорбции, десорбционное сканирование от 85 до 0% RH (при 25°C) осуществляли с шагом -10%, снова давая максимум четыре часа для приведения в равновесие к асимптотическому весу. Образец затем высушивали в течение одного часа при 80°C, и полученное твердое вещество анализировали с помощью XRPD. В одном аспекте, анализ сорбции влаги показал, что образец был в значительной степени гигроскопичным, абсорбируя 16,7 вес.% воды при 60% RH и 27,0 вес.% воды при 90% RH, что предполагает расплывание с переломным моментом между 40 и 50% RH. На Фигуре 19 показана гравиметрическая кривая влажности KX2-391^.2HCl (партия 02BP111G).

Таблица 8 содержит данные, представленные на Фигуре 17. Исследования сорбции влаги, проводимые при температуре окружающей среды с использованием камеры влажности солевого раствора, проводили, чтобы оценить стабильность твердого вещества путем визуального осмотра. Результаты представлены в Таблице 9. Наблюдали, что образцы полностью расплывались при 51 и 95% RH в течение 12 часов. Когда KX2-391·2HCl был подвергнут 42% RH, расплывание наблюдалось в течение трех часов и продолжало оставаться в этом состоянии в течение следующих семи дней. Однако, когда KX2-391·2HCl был подвергнут 32% RH, было обнаружено, что он оставался стабильным в течение того же периода семи дней, что показывает, что влажность расплывания при температуре окружающей среды составляла от 32 до 42% RH.

Таблица 8
Анализ сорбции влаги KX2-391 ^. 2HCl %RH TW/мг мг воды Вес.%/вода Ммоль воды Молярное отношение (вода:образец) -0,0500 6,6919 0,3936 5,8814 0,0218 1,7493

10,0011 6,7707 0,4724 6,9776 0,0262 2,0998 20,0071 6,8565 0,5582 8,1412 0,0310 2,4810 29,9953 6,9250 0,6267 9,0498 0,0348 2,7855 39,9936 7,0029 0,7046 10,0615 0,0391 3,1317 50,0083 7,3749 1,0766 14,5986 0,0597 4,7853 59,9940 7,5634 1,2651 16,7261 0,0702 5,6228 70,0044 7,7942 1,4959 19,1922 0,0830 6,6487 80,0002 7,9711 1,6728 20,9856 0,0928 7,4350 90,0102 8,6234 2,3251 26,9630 0,1290 10,3345   90,0102 8,6234 2,3251 26,9630 0,1290 10,3345 84,9979 8,1862 1,8879 23,0617 0,1048 8,3910 75,0016 7,5530 1,2547 16,6119 0,0696 5,5767 64,9989 7,4448 1,1465 15,3997 0,0636 5,0957 54,9876 7,3912 1,0929 14,7870 0,0607 4,8578 45,0063 7,3402 1,0419 14,1945 0,0578 4,6309 35,0089 7,2811 0,9828 13,4981 0,0545 4,3683 25,0029 7,2130 0,9147 12,6812 0,0508 4,0655 15,0035 6,7598 0,4615 6,8271 0,0256 2,0512 4,9957 6,6101 0,3118 4,7176 0,0173 1,3860 -0,0430 6,3667 0,0684 1,0737 0,0038 0,3038

Таблица 9
Гигроскопичность KX2-391 ^. 2HCl %RH Результаты Время 95 Расплывание <12 ч

51 Расплывание <12 ч 42 Расплывание <3 ч 32 Твердый 7 дней

Пример 16: Высокоэффективная жидкостная хроматография KX2-391 ^. 2HCl

Высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) осуществляли на KX2-391^.2HCl, полученном в соответствии со способом согласно настоящему изобретению (Пример 3). Система ВЭЖХ была оборудована УФ-детектором, устройством для создания градиента и сбора и обработки электронных данных, или эквивалентным, автопробоотборником, способным к инъекциям по 10 мкл, аналитической колонкой Thermo Hypersil Gold, 4,6 × 150 мм, 3,0 мкм, P/N 25003-154630, аналитическими весами, способными к взвешиванию с точностью ±0,01 мг, градуированными пипетками и колбами класса А.

Колонка, используемая для исследования, представляла собой колонку Thermo Hypersil Gold, 4,6 × 150 мм, 3,0 мкм, и температура колонки и автоматической пипетки равнялась температуре окружающей среды. Детекция элюируемого соединения происходила при 248 нм (KX2-391 был обнаружен при 248 нм) и 210 нм (бензиламин был обнаружен при 210 нм). Мобильная фаза A представляла собой 0,05% TFA в воде и Мобильная Фаза B представляла собой 0,05% TFA в ацетонитриле с объемной скоростью потока 1,0 мл/мин. Градиент элюирования показан в Таблице 10. Объем инъекции 10 мкл использовался для всех образцов со временем анализа 30 мин. Временя повторного уравновешивания и время сбора составляло 8 минут и 22 минуты, соответственно. Промывку иглы после завершения разгона осуществляли в смеси 50:50 Ацетонитрил/Вода. На Фигуре 18 изображена хроматограмма ВЭЖХ для KX2-391^.2HCl (партия 02BP111G).

Таблица 10
Градиент элюирования ВЭЖХ для KX2-391 ^. 2HCl Время (минуты) % А % В 0,0 95 5 20,0 30 70 21,0 0 100 22,0 0 100 22,5 95 5 30,0 95 5

Пример 17: Спектроскопия протонного ядерного магнитного резонанса KX2-391 ^. MSA, Форма A.

Сбор данных спектров ¹H ЯМР осуществляли с 2-10 мг образца, растворенного в 0,8 мл ДМСО-d ₆. Спектры получали, используя от 32 до 64 сканирований с интервалом между импульсами 1,0 с и длительностью импульса 10 мкс (30°). На Фигуре 6 изображен спектр ¹H ЯМР для KX2-391^.MSA, Форма A.

Пример 18: Спектроскопия протонного ядерного магнитного резонанса KX2-391 ^. 2HCl.

Сбор данных спектров ¹H ЯМР осуществляли с 2-10 мг образца, растворенного в 0,8 мл ДМСО-d ₆. Спектры получали, используя от 32 до 64 сканирований с интервалом между импульсами 1,0 с и длительностью импульса 10 мкс (30°). На Фигуре 5 изображен спектр ¹H ЯМР для свободного основания KX2-391. На Фигуре 16 изображен спектр ¹H ЯМР ЯМР для KX2-391^.2HCl (партия 02BP111G).

Пример 19: Оптимизация процесса для KX2-391 ^. MSA, Форма A

Оптимизация процесса мезилат соли была инициирована вследствие решения, что мезилатная соль была наиболее желательной. В скрининге соли использовали ацетон с 200 объемами растворителя, чтобы образовать мезилатную соль. Чтобы сделать масштабируемый процесс, количество ацетона должно быть уменьшено до рабочего объема. В Таблице ниже сведены полученные данные.

NB Коде Кол-во материала
(мг) Растворитель Кол-во растворителя (мл) Об. используемого растворителя Темп.
ºC Рекуперация (мг) Выход
(%) Результаты XRPD* Стехиометрия
(НЯМР) ВЭЖХ
(Область % чистоты) GJP-S-15(1) 155,0 Ацетон 10,0 64 50 171,0 90,2 Соответствует 1,03:1 99,3 GJP-S-16(1) 100,3 MEK 5,0 50 70 104,6 85,3 Соответствует 1,09:1 98,7 GJP-S-16(2) 104,8 MIBK 5,0 50 90 118,0 92,1 Соответствует 1,10:1 99,0 GJP-S-17(1) 100,3 Ацетон 8,0 80 50 106,0 86,4 Соответствует 1,04:1 99,4 GJP-S-18(1) 3507,4 Ацетон 280 80 50 4019,7 93,2 Соответствует 1:01:1 99,5 *Указанный результат описывает подобие увеличенной партии GJP-S-10 (1)

Первый эксперимент завершали, используя 64 объема ацетона и добавление беспримесного MSA. Это количество было выбрано как исходная точка и соответствовало 10 мл растворителя на 0,155 г, используемых в эксперименте. Объемы ацетона были вычислены следующим образом: (10 мл ацетона)/(0,155 г)=64 объема. Слегка масляный материал, наблюдаемый в ходе реакции, затвердевал после охлаждения и осаждался из раствора после добавления кислоты. Это свободнотекучее твердое вещество предоставляло результаты XRPD, 1H ЯМР и ВЭЖХ, соответствующие конечной мезилатной соли. На основании этого эксперимента, количество растворителя, необходимое для того, чтобы препятствовать выделению материала в форме масла, было определено как превышающее 64 объема.

В попытке уменьшить количество масляного материала, произведенного в ходе реакций, исследовали кетоновые растворители с более высокими температурами кипения, такие как метилэтилкетон (MEK, 80°C) и метилизобутилкетон (MIBK, 117°C).

Используя MEK, свободное основание взвешивали в ампулу и растворяли в 5 мл MEK (50 об.). Этот раствор перемешивали при 70°C в течение пяти минут, чтобы обеспечить растворение. Метансульфоновую кислоту (конц.) добавляли в одной части (16 мл, 1,05 экв.). Раствор стал мутным после добавления кислоты, и коричневое масло образовывалось на дне ампулы. Мутный раствор перемешивали в течение двух минут, после чего реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды со скоростью 10°C/ч. В ходе фазы охлаждения происходило осаждение. Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 18 часов. Твердые частицы собирали вакуумной фильтрацией. Масло отверждали и удаляли из колбы. Все твердые частицы высушивали в вакууме при температуре окружающей среды и 30 дюймах Hg. Эта реакция давала 105 мг (выход 90,2%) твердого вещества грязно-белого цвета. Результаты XRPD соответствовали результатам для партии GJP-S-10 (1). Чистота ВЭЖХ составила 98,7.

Используя MIBK, свободное основание взвешивали в ампулу и растворяли в 5 мл MIBK (50 об.). Этот раствор перемешивали при 90°C в течение пяти минут, чтобы обеспечить растворение. Метансульфоновую кислоту (конц.) добавляли в одной части (16,5 мл, 1,05 экв.). Раствор стал мутным после добавления кислоты, и коричневое масло образовывалось на дне ампулы. Мутный раствор перемешивали в течение 2 минут, после чего реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды со скоростью 10°C/ч. В ходе фазы охлаждения происходило осаждение. Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 18 часов. Твердые частицы собирали вакуумной фильтрацией. Масло отверждали и удаляли из колбы. Все твердые частицы высушивали в вакууме при температуре окружающей среды и 30 дюймах Hg. Эта реакция давала 118,0 мг (выход 92,1%) твердого вещества грязно-белого цвета. Результаты XRPD соответствовали результатам для партии GJP-S-10 (1). Чистота ВЭЖХ составила 99,0.

Когда растворители MEK и MIBK нагревали до более высокой температуры, чем при реакции с ацетоном, обе реакции давали большие количества масляного материала по сравнению с ацетоновыми реакциями. Обе реакции также давали свободнотекучее твердое вещество, что привело к результатам XRPD, ¹H ЯМР и ВЭЖХ, соответствующим конечной партии мезилатной соли; однако небольшое разложение наблюдалось при использовании MEK как первичного растворителя.

Ацетон повторно исследовали, используя большее число объемов (80 против 64). Эта реакция образовывала мутный раствор после добавления кислоты, но не производила никакого масляного материала при охлаждении до температуры окружающей среды. Эта реакция давала 86%-ый выход твердого вещества грязно-белого цвета с результатами XRPD, ¹H ЯМР и ВЭЖХ, соответствующими конечной партии мезилатной соли. Этот процесс использовался в масштабе для реакций 3,5 г, которые привели к 4,0 г твердого вещества грязно-белого цвета с выходом 93,7%, и этот процесс переносили на цГМФ для конечной стадии синтеза.

Пример 20: Дифференциальная сканирующая калориметрия

Анализ дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) осуществляли на KX2-391^.MSA, Форма А, полученном в соответствии со способом, описанным здесь (Пример 4), и на нескольких образцах других солей KX2-391. Образцы взвешивали в алюминиевой кювете, накрывали перфорированной крышкой и затем герметизировали. Анализ начинали при 30°C и повышали температуру до 300-350°C со скоростью 10°C/минута.

Образец KX2,391 Начальная темп. (°C) Пиковая темп. (°C) Свободное основание 131,9 136,2 Соль ди-HCl 156,4 188,9 моно-п-тозилатная соль Форма A 110,3
130,2 112,7
158,9

моно-п-тозилатная соль Форма B 105,8
157,9 111,1
162,8 моно-фумаратная соль 136,1 153,4 моно-малеатная соль 143,7 149,9 моно-мезилатная соль, Форма A 159,6 163,8 бис-малеатная соль 50,2 63,8 бис-фумаратная соль Форма A 128,8 141,5 бис-фумаратная соль Форма B 155,6 157,3 бис-фосфатная соль 78,0
120,7
188,3 93,7
128,0
211,6 бис-п-тозилатная соль 84,2
171,6 94,6
171,6

Как показывают данные, представленные здесь, KX2-391^.MSA, Форма A имеет уникальную термограмму DSC, дифференцируясь этим от других солей KX2-391. DSC KX2-391^.MSA, Форма А, производит единственный пик DSC, в отличие от некоторых других форм соли KX2-391, которые проявляются как дублет.

Пример 21: Охарактеризовывание моно солей KX2-391: п-тозилат, фумарат и малеат

Монотозилат KX2-391 Форма A был получен с 1 эквивалентом п-TSA в диоксане и показывал полукристаллическую структуру XRPD как показано на Фигуре 20. Монотозилат KX2-391 Форма B был получен из 1 эквивалента п-TSA в диоксане и показывал кристаллическую структуру XRPD, которая, как было обнаружено, была уникальной по сравнению с 1 эквивалентным промежуточной Формы A. XRPD для Формы B показан на Фигуре 21.

Фумаратная соль KX2-391 была получена с 1 эквивалентом фумаровой кислоты, и XRPD показпан на Фигуре 22.

Малеатная соль была получена из 2 эквивалентов (хотя 1 экв. был целевым отношением) малеиновой кислоты, и XRPD показан на Фигуре 23.

В Таблице ниже сведены дополнительные данные исследования для фумаратной и малеатной соли KX2-391^.MSA и сравнение со свободным основанием, бис-HCl, и солями MSA, описанными выше. Результаты в таблице ниже получали, используя процедуры, описанные выше в Примерах 5 (XRPD), 6 (DSC), 7 (TGA) и 8 (сорбция влаги).

Соль Противоион
(экв., растворитель) XRPD
(форма) TGA
Вес.% потеря Стехиометрия
( ¹ H ЯМР) Растворимость
мг/мл
(pH) Сорбция влаги вес.% воды при 90% RH Свободное основание N/A, H₂O, DCM кристаллическая NA соответствует DI H₂0: NA
pH 2: NA 3,7 Бис-HCl 2, EtOH полукристаллическая 9,2 соответствует DI H₂0: >500 (2,1)
pH 2: >500 (1,9) 27,0 MSA 1, Ацетон кристаллическая 0,0 1,07: 1 DI H₂0: >500 (4,6)
pH 2: >500 (4,3) 5,7 Фумарат 1, Ацетон кристаллическая Форма A 1,7 0,96: 1 DI H₂0: 7,6 (4,5*)
pH 2: 21,5 (4,5*) 0,5 Малеат 1, Ацетон кристаллическая Форма A 0,0 0,99: 1 DI H₂0: 7,3 (4,5*)
pH 2: 21,2 (4,5*) 1,4 N/A - образец не был проанализирован
рН, основанный на приблизительном измерении с использованием бумажного рН-индикатора вместо прибора для измерения вследствие недостаточного объема

Пример 22: Исследование XRPD бис-эквивалентных солей KX2-391: малеат, фумарат и фосфат

Бис-малеат KX2-391, Форма A, был получен с 2 эквивалентами малеиновой кислоты в ацетоне и показывал полукристаллическую структуру XRPD как показано на Фигуре 24. Было обнаружено, что эта структура была уникальной по сравнению со свободным основанием, что показывает успешное формирование соли. ¹H ЯМР стехиометрия составила 1,86:1.

Бис-фумарат KX2-391, Форма A, был получен с 2 эквивалентами фумаровой кислоты в изопропиловом спирте (IPA) и показывал кристаллическую структуру XRPD как показано на Фигуре 25. Наблюдали, что эта структура была уникальной по сравнению со свободным основанием, что предполагало успешное формирование соли. ¹H ЯМР стехиометрия составила 1,93:1. Бис-фумарат KX2-391, Форма B, показан на Фигуре 26.

Бис-фосфат KX2-391 был получен с 2 эквивалентами фосфорной кислоты в ТГФ, показывал полукристаллическую структуру XRPD (Форма A), как показано на Фигуре 27, и было обнаружено, что он был уникальным по сравнению со свободным основанием, что показывает успешное формирование соли. Процент потери веса составил 0,3 и 1,7 при измерении TGA как описано в Примере 7. ¹H ЯМР стехиометрия составила 1,95:1.

Бис-п-тозилат KX2-391 был получен с 2 эквивалентами п-TSA в диоксане и показывал полукристаллическую структуру XRPD как показано на Фигуре 27.

Пример 23: Эксперименты растворимости для солей KX2-391

Эксперименты по растворению осуществляли на солях KX2-391, чтобы лучше понять взаимодействие солей в воде. Это было достигнуто с использованием 5 мг/мл деионизованной воды в эксперименте по растворению, где 5 мг каждой соли взвешивали в ампулу и добавляли 1 мл деионизованной воды. Раствор проверяли визуально при перемешивании магнитной мешалкой в течение 20 минут, чтобы наблюдать время растворения. Результаты экспериментов растворимости 5 мг/мл для мезилатной, Форма A, фумаратной и малеатной солей KX2-391 показаны в таблице ниже. По наблюдениям, твердые частицы фумаратной и малеатной солей не растворялись в течение 10 минут, и поэтому добавляли дополнительный 1 мл деионизованной воды.

NB Код Исходный материал
(противоион) Условия теста
(использование перемешивания магнитной мешалкой) Время (с/мин) 0с 30 с 1 мин 2 мин 5 мин 10 мин
(добавление1 мл деионизованной воды) 15 мин 20 мин SUC-B-81(1) GJP-S-10(1) (MSA) 5,13 мг в 1 мл деионизованной воды P P D           SUC-B-81(2) GJP-S-10(2)
(фумарат) 5,31 мг в 1 мл деионизованной воды P P P P P P P D SUC-B-81(3) GJP-S-10(3)
(малеат) 5,10 мг в 1 мл деионизованной воды P P P P P P P P P-частицы частично растворялись
D-частицы полностью растворялись

Эксперименты растворимости также проводили, используя фосфатный буфер рН 2,0 и деионизованную воду рН 6,9 и KX2-391^.MSA, Форма A. Каждую ампулу заполняли приблизительно 50 мг KX2-391^.MSA, Форма A, и 100 мл аликвот соответствующего растворителя добавляли, пока не наблюдалось полное растворение, с последующим перемешиванием при температуре окружающей среды в течение одного и пяти дней. Полученные твердые частицы выделяли фильтрацией, высушивалили под вакуумом при температуре окружающей среды и анализировали ВЭЖХ. Начальная чистота ВЭЖХ KX2-391^.MSA, Форма A, составляла 99,4 (область %). Растворимость ВЭЖХ KX2-391^.MSA, Форма А, в фосфатном буфере при температуре окружающей среды составила >500 мг/мл и чистота ВЭЖХ была измерена, составляя 99,4. Растворимость ВЭЖХ KX2-391^.MSA, Форма А, в деионизованной H₂O при температуре окружающей среды составила >500 мг/мл, и чистота ВЭЖХ была измерена, составляя 99,4.

Пример 24: Анализ двойного преломления

Анализ двойного преломления обеспечивает оценку степеней кристалличности твердых частиц, произведенных в результате скрининга солей. Помещая 96-луночный планшет между кросс-поляризованной пленкой, твердые частицы индивидуальных лунок анализировали визуально в отношении значительного двойного преломления или определенно кристаллических частиц. Каждая лунка, содержащая твердые частицы, получала числовой разряд от 0 до 3 в зависимости от возрастающей кристалличности, как показано в таблице ниже.

Пример 25: Пороговая растворимость

Пороговую растворимость оценивали, добавляя 200 мл аликвот деминерализованной воды до 1 мл в каждую лунку 96-луночного планшета, полученного в ходе скрининга солей, и осуществляли мониторинг полного растворения. После каждого добавления, планшет встряхивали, чтобы облегчить смешивание в течение по меньшей мере 5 минут до оценки. После оценку присваивали числовой разряд (1-5) в зависимости от возрастающей растворимости, как показано в таблице ниже.

Пример 26: Мелкомасштабный синтез KX2-391 ^. MSA, Форма А, из свободного основания

Свободное основание (350,1 мг) взвешивали в круглодонную колбу на 100 мл и растворяли в ацетоне (52 мл) при перемешивании и нагревании (50°C) в течение 5 минут, чтобы обеспечить растворение. Метансульфоновую кислоту (850 мл, 1M раствор в ацетоне) добавляли в одной части, и раствор оставался прозрачным. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды со скоростью 20°C/ч. После достижения материалом температуры окружающей среды, он осаждался из раствора. Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 16 часов. Это твердое вещество собирали вакуумной фильтрацией и высушивали в вакууме при температуре окружающей среды и 30 дюймах Hg. Эта реакция давала 351,6 мг (72%) твердого вещества бежевого цвета.

Пример 27: Исследование суспензии

Эксперименты с суспензией осуществляли, используя ацетон и деионизованную воду, на KX2-391^.MSA, Форма A. Каждую ампулу заполняли приблизительно 30 мг KX2-391^.MSA, Форма A, и 0,5 и 1 мл соответствующего растворителя, с последующим перемешиванием при температуре окружающей среды в течение одного и пяти дней. Полученные твердые частицы выделяли фильтрацией, высушивали под вакуумом при температуре окружающей среды и анализировали ВЭЖХ и XRPD. Начальная чистота KX2-391^.MSA составляла 99,4%. Условия теста ацетоновой суспензии при температуре окружающей среды привели к твердому веществу, которое показывало XRPD, которая была совместима со структурой начального KX2-391^.MSA, Форма A, и измеренная чистота ВЭЖХ составила 99,3%.

Пример 28: Термический стресс

Эксперименты с термическим стрессом осуществляли на KX2-391^.MSA, Форма A. Каждую ампулу из янтарного стекла на 1 драхму заполняли приблизительно 20 мг KX2-391^.MSA, Форма А, закупоривали и сохраняли в вакууме при 60°C в течение одной недели. Полученные твердые частицы анализировали XRPD и ВЭЖХ. Тепловые/60°C условия теста привели к твердому веществу, которое показывало XRPD, которая была совместима со структурой начального KX2-391^.MSA, Форма A, и измеренная чистота ВЭЖХ составила 99,3%. Структура начального KX2-391^.MSA, Форма A, была совместима со структурой, показанной на фигуре 7.

Пример 29: Влияние растворителя и профиля охлаждения на кристаллическую форму

Влияние растворителя и профиля охлаждения на кристаллическую форму мезилата KX2-391 определяли, используя единственную и двойную кристаллизацию растворителя как при быстром, так и при медленном охлаждении. Одна кристаллическая форма наблюдалась как Форма A. Наблюдаемая кристаллическая форма давала структуру XRPD, которая была совместима со структурой, показанной на фигуре 7.

Пример 30: Исследования прессования и размалывания

Исследования прессования и размалывания осуществляли, чтобы определить влияния физического напряжения на кристаллическую форму мезилата KX2-391, Форма A. Никакого изменения в кристаллической форме не наблюдалось.

Пример 31: Исследования суспензии

Суспензии мезилата KX2-391, Форма А, в пяти условиях (IPA, 1-бутанол, MeCN, THF:вода и диоксан:вода) осуществляли в попытке определить, могут ли быть получены более стабильная кристаллическая форма, сольват или гидрат. После 2 недель суспендирования в условиях окружающей среды, твердые частицы выделяли и анализировали XRPD и ВЭЖХ. Никакие дополнительные формы не наблюдались по данным XRPD. Результаты показаны в таблице ниже.

NB Код Кол-во KX2-391-MSA (мг) Растворитель Кол-во растворителя (мл) Начальная форма (XRPD) Форма через
2 недели (XRPD) Чистота ВЭЖХ (AUC) JSS-T-99(1) 58,7 IPA 1,0 Форма A Форма A >99% JSS-T-99(2) 53,7 1-бутанол 1,0 Форма A >99% JSS-T-99(3) 57,9 MeCN 1,0 Форма A >99%

JSS-T-99(4) 51,9* THF:вода (~0,9:0,1) 1,5   Форма A >99% JSS-T-99(5) 55,6* диоксан:вода (~0,9:0,1) 1,5 Форма A >99% *Дополнительное твердое вещество добавляли до тех пор, пока не наблюдались остаточные твердые частицы, ~100 мг

Пример 32: Исследование растворимости в воде

Растворимость мезилата KX2-391, Форма A, определяли в SGF (2), ацетатном буфере (рН 4,5) и фосфатном буфере (рН 7,2). Суспензиям мезилата KX2-391 в буферном растворе давали уравновеситься в течение ночи при 37°C. Твердые частицы затем выделяли, и супернатант разбавляли и анализировали ВЭЖХ. Реакцию супернатанта затем сравнивали с калибровочной кривой, чтобы определить растворимость. Результаты показаны в таблице ниже.

NB код Буфер рН после суспендирования Средняя растворимость
(мг/мл) JSS-T-100(4) SGF
(рН 2,0) 4,5 700 JSS-T-100(5) ацетат
(рН 4,5) 4,4 737 JSS-T-100(6) фосфат
(рН 7,2) 4,3 150

Буферы не поддерживали рН. Вследствие наблюдаемой высокой растворимости мезилата KX2-391, Форма А, маловероятно, что забуференный раствор будет поддерживать рН на желаемых уровнях в изученном диапазоне рН.

Изобретение относится к полиморфу мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, обладающему свойствами ингибитора Syk, способу его синтеза, фармацевтической композиции на его основе и ее применению для лечения и профилактики пролиферации клеток. 4 н. и 13 з.п. ф-лы, 10 табл., 28 ил., 32 пр.

1. Полиморф мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A), характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, в основном подобной представленной на Фигуре 7.

2. Полиморф по п. 1, дополнительно характеризующийся структурой дифракции рентгеновских лучей, включающей пики в приблизительно 22,7, 19,7, 18,9 и 16,3 градусов 2θ.

3. Полиморф по п. 1, дополнительно характеризующийся термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), имеющей единственное максимальное значение при приблизительно 164 при измерении прибором Mettler 822^е DSC.

4. Полиморф по любому из пп. 1-3, полученный способом очистки, включающим стадию перекристаллизации сырого препарата указанной мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида (Форма A) из ацетона.

5. Полиморф по п. 4, причем количество указанного ацетона составляет более чем 64 объема.

6. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики нарушения пролиферации клеток, включающая полиморф по любому из пп. 1-3, и фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель.

7. Применение фармацевтической композиции по п. 6 для лечения или профилактики нарушения пролиферации клеток.

8. Способ получения полиморфа по любому из пп. 1-3, включающий следующие стадии:
(1) введение 4-(2-хлорэтил)морфолина в реакцию с 4-бромфенолом с получением 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина;
(2) сочетание 4-(2-(4-бромфенокси)этил)морфолина с 6-фторпиридин-3-ил-3-бороновой кислотой с получением 4-(2-(4-(6-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина;
(3) введение 4-(2-(4-(б-фторпиридин-3-ил)фенокси)этил)морфолина в реакцию с ацетонитрилом с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила;
(4) превращение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)ацетонитрила в 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетат;
(5) введение 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)метилацетата в реакцию с бензиламином с получением 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси) фенил) пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида;
(6) добавление метансульфоновой кислоты к 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамиду в ацетон с получением мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида; и
(7) перекристаллизация мезилатной соли из ацетона.

9. Способ по п. 8, в котором количество указанного ацетона составляет более чем 64 объема.

10. Способ по п. 9, в котором количество указанного ацетона составляет более чем 64 и менее чем 100 объемов.

11. Способ по п. 10, в котором количество указанного ацетона составляет 80 объемов.

12. Применение по п. 7, в котором нарушением пролиферации клеток является рак.

13. Применение по п. 12, в котором рак выбран из группы, состоящей из рака легкого, рака молочной железы, рака толстого кишечника, рака яичника, рака мозга, рака печени, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, злокачественной меланомы, немеланомного рака кожи, лейкоза, лимфом, множественной миеломы, болезни Ходжкина, лимфом лимфоцитарного и кожного происхождения, острого и хронического лейкоза, такого как острый лимфобластный, острый миелоцитарный или хронический миелоцитарный лейкоз, плазмоцитарной опухоли, лимфоидной опухоли и рака, связанного со СПИДом.

14. Применение по п. 13, в котором рак представляет собой рак толстого кишечника.

15. Применение по п. 13, в котором рак представляет собой рак легкого.

16. Применение по п. 13, в котором рак представляет собой рак мозга.

17. Применение по п. 7, в котором нарушением пролиферации клеток является псориаз.