СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МЕСТНОЙ ИММУНО-ЦИТОЛОГИЧЕСКОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ В СИСТЕМЕ НАЗАЛЬНО-АССОЦИИРОВАННОЙ ЛИМФОИДНОЙ ТКАНИ Российский патент 2016 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в лабораторной диагностике иммуно-цитологической недостаточности в системе назально-ассоциированной лимфоидной ткани (НАЛТ).

В настоящее время известно, что высокий уровень заболеваемости верхних дыхательных путей и, особенно, патологии ЛОР-органов как у детей и подростков, так и у взрослых лиц неразрывно связан с состоянием местной клеточной защиты (МКЗ), роль которой выполняет назально-ассоциированная лимфоидная ткань (НАЛТ). Среди многочисленных структур МКЗ первостепенное значение придается системе лимфоцитов носоглоточного кольца Вальдейра-Пирогова.

Известно изобретение, которое относится к медицине, в частности оториноларингологии, и может быть использовано для оценки состояния лимфоидной ткани глотки и небных миндалин у детей. Сущность способа: берут мазки-отпечатки для риноцитограммы и цитограмм из левой небной миндалины и левой щеки. Исследуют клеточный состав полученных мазков на бинокулярном микроскопе, определяют содержание сегментоядерных нейтрофилов в цитограмме и общем составе клеток. На основании полученных данных дифференцируют наличие хронического процесса в области носоглоточной миндалины, или наличие хронического процесса в области небных миндалин, или наличие хронического процесса в области лимфоидной ткани носоглотки в сочетании с гипертрофией небных миндалин без признаков воспаления, или наличия хронического процесса лимфоидной ткани носоглотки и небных миндалин. Использовании способа позволяет повысить точность диагностики состояния лимфоидной ткани носоглотки и небных миндалин у детей при отсутствии травматичности.

В настоящее время известно, что первой линией защиты организма от чужеродных антигенов (патогенных вирусов и бактерий) является мукозальная иммунная система или MALT-система (от англ. Mucosa associated lymphoid tissue). Мукозальный иммунитет является частью общей системы защиты организма. Мукозальная иммунная система состоит из многих отделов, имеющих разный клеточный состав и разные функции. Лимфо-аденоидное кольцо Вальдейера-Пирогова, окружающее глотку человека, состоит из миндалин и аденоидов, которые получили название назально-ассоциированной лимфоидной ткани (или nasal associated lymphoid tissue - NALT). Лимфоаденоидное кольцо представлено шестью крупными скоплениями лимфоидной ткани, которые называются миндалинами: двумя парными небными, третьей непарной - носоглоточной, четвертой непарной - язычной и двумя парными (пятой и шестой) - трубными. Между миндалинами в стенке глотки имеются небольшие скопления лимфоцитов. Миндалины относятся к числу периферических органов иммунитета и служат источником эффекторных клеток иммунной системы. Поверхность миндалин покрыта многослойным плоским эпителием и имеет множественные лакуны (или крипты), углубляющиеся в лимфоидную ткань. Составляющие лимфоаденоидного кольца миндалины считают вторичными периферическими органами иммунной системы. Однако миндалины не являются регионарными лимфатическими узлами и не выполняют дренирующей функции. Эпителиальный покров небных и язычной миндалин (многослойный плоский эпителий) образует крипты, увеличивая площадь поверхности эпителия. Глоточная и трубные миндалины покрыты однослойным многорядным мерцательным эпителием респираторного типа с мерцательными и бокаловидными клетками, выделяющими слизь. Формирование НАЛТ-системы в онтогенезе у детей имеет ряд особенностей. У новорожденных в миндалинах хорошо выявляются лимфоидные фолликулы. Нарастание массы лимфоидной ткани в миндалинах достигает максимума к 10 годам жизни. После наступления половой зрелости (с 14 лет) происходит возрастная инволюция миндалин - уменьшается объем и число фолликулов, вплоть до их исчезновения, лимфоидная ткань подвергается атрофии и замещается соединительной тканью (Плужников М.С., Лавренова Г.В., Левин М.Я., Назаров П.Г., Никитин К.А. Тонзиллит: Клинические и иммунологические аспекты. - Глава из книги: Иммунология хронического тонзиллита. - СПб.: диалог, 2004. - С. 3-59).

В последние годы внесен существенный вклад в науку по исследованию НАЛТ-системы. С этой целью используют мазки-отпечатки с поверхности слизистых оболочек с последующим определением состава клеточных элементов, проводят бактериологическое исследование материала, полученного с объектов стерильными тампонами, серологические исследования сыворотки крови с определением титров антител, делают смывы для оценки иммунологических факторов (иммуноглобулины, цитокины, лизоцим и др.), выполняют гистологические исследования биопсийного материала, проводится визуальный и специальный осмотр специалистами (Плужников М.С., Лавренова Г.В., Левин М.Я., Назаров П.Г., Никитин К.А. Тонзиллит: Клинические и иммунологические аспекты. - Глава из книги: Иммунология хронического тонзиллита. - СПб.: диалог, 2004. - С. 3-59); (Маккаев Х.М. Тактика сочетанного консервативного лечения хронических воспалительных заболеваний лимфоидных органов носоглотки (хронического тонзиллита и аденоидита) у детей // Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 202. - №5. - С. 39-43.).

Однако наиболее близкое по существу техническое решение имеет ряд недостатков. Представленные методики относятся к числу инвазивных, трудоемких и дорогостоящих. Этот способ не решает главной задачи, а именно не содержит практических рекомендаций по его использованию, а представляет собой теоретическую основу для решения данной проблемы. В то же время наибольший интерес представляет способ диагностики тех или иных нарушений НАЛТ-системы, предшествующих развитию заболеваний аденоидно-глоточного кольца. Именно на доклиническом этапе выявление изменений НАЛТ-системы имеет наибольшую ценность. В прототипе не представлены конкретные показатели, рекомендуемые для диагностики иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы. Более того, не показаны возрастные особенности каких-либо иммунологических показателей НАЛТ-системы, а также не разработаны конкретные критерии диагностики ее недостаточности.

Технический результат выражается в повышении информативной ценности показателей структурно-функциональной оценки состояния НАЛТ-системы. Решается главная поставленная задача изобретения по диагностике иммуно-цитологической недостаточности, ранжированной по степеням (I-й, II-й, III-й). Это позволяет предложенный способ считать более совершенным. Способ реализуется путем выполнения поэтапных иммуно-ццитологических исследований НАЛТ-системы.

Локусом для оценки состояния локальной иммунной системы служила назально-ассоциированная лимфоидная ткань (НАЛТ), представленная небными, трубными, язычной и носоглоточной миндалинами.

Материалом для исследования служило отделяемое с поверхности небных миндалин. Содержимое миндалин получали методом мазков-отпечатков с помощью ватного тупфера, слегка увлажненного 0,9%-ным раствором хлорида натрия. Цитологические препараты готовили путем равномерного нанесения и распределения полученного содержимого НАЛТ на поверхности предметного стекла. Нативные препараты высушивали на воздухе, фиксировали в смеси Никифорова (этиловый спирт и эфир в соотношении 1:1) в течение 10 минут и вновь высушивали на воздухе. Окраску препаратов осуществляли по методу Романовского-Гимзе в течение 30 минут. После окраски препараты ополаскивали дистиллированной водой и высушивали на воздухе. Цитологическое исследование окрашенных препаратов проводили с помощью световой микроскопии (окуляр × 10, объектив × 90) под иммерсией.

Цитологический анализ полученных данных проводился в соответствии с алгоритмом выполнения ряда технологических операций в определенной последовательности, включающих определение общего содержания клеток (ОСК) и их жизнеспособности (ЖСК), общей и парциальной цитограммы лимфоцитов.

Общее содержание клеток подсчитывают полуколичественным способом по методике, предложенной А.Я. Осиным (1994) (Осин А.Я. Цитологические методы диагностики в пульмонологии детского возраста // II-й Международный симпозиум фонда медицинского обмена Японии, России и стран Северо-Восточной Азии: тез. докл. - Россия. - Владивосток, 1994. - С. 182-183). При этом ОСК в исследуемой биосреде определяли путем подсчета количества клеточных элементов в полях зрения (п/з) и выражения их числа в условных единицах (усл. ед.). Содержание клеток определяют в зависимости от интенсивности клеточной реакции и их количества в 1 п/з. При этом 1 усл. ед. обозначают низкое или малое содержание клеток (единичные клетки, 1-25 клеток в п/з), 2 усл. ед. - умеренное или среднее содержание клеток (25-50 клеток в п/з) и 3 усл. ед. - высокое содержание клеток (многочисленные клетки, 50-100 клеток в п/з). При отсутствии исследуемых клеток в п/з их не регистрируют и обозначают 0 усл. ед. При исследовании оценивают обычно 50-100 п/з и по преобладающему числу соответствующих оценок (0, 1, 2, 3 усл. ед.) или по средней их величине судят об ОСК в исследуемой биосреде (0-3 усл. ед.).

Жизнеспосбность клеток (ЖСК) оценивают по методике с использованием трипанового синего (голубого). Для этого смешивают 0,1 мл 1%-го раствора трипанового синего (голубого) и 0,1 мл 1,0%-ного раствора эозина. Смесь заливают в счетную камеру Горяева и определяют количество жизнеспособных (красного/розового цвета) клеток при подсчете на 100 клеточных элементов. Результат выражают в относительных величинах (%) (Стефании Д.В., Вельтищев Ю.Е. Клиническая иммунология и иммунопатология детского возраста // Руководство для врачей. - М.: Медицина, 1996. - 384 с.).

Дифференцированный состав клеточных элементов или общую цитограмму изучаемой биосреды определяют при сплошном исследовании 100-200 клеток.

Структурно-функциональное состояние НАЛТ-системы характеризуется общим содержанием клеток (ОСК) и жизнеспособностью клеток (ЖСК), общей цитограммой и парциальной цитограммой лимфоцитов (Лф).

Общая цитограмма НАЛТ-системы характеризуется наличием эпителиоцитов (Эц), лейкоцитов (эозинофилов, нейтрофилов, лимфоцитов - Э, Н, Лф), плазмоцитов (Пц), макрофагов (Мф) в относительных величинах (%) и эпителиально-лейкоцитарного соотношения в виде индекса (Эц/Лц). Индекс эпителиально-лейкоцитарного соотношения рассчитывают по формуле: Эц/Лц=Эц : (Э, Н, ЛФ). Высокие индексы указывают на усиление миграции лейкоцитов на поверхность эпителиального покрова, а низкие их величины - на восстановление Эц и усиление регенераторных их свойств.

Парциальная цитограмма Лф различается по размерам, степеням зрелости и числу основных их генераций (бластные клетки, большие, средние и малые лимфоциты - Бл. Кл., БЛф, СЛф, МЛф, индекс генерации лимфоцитов - ИГЛф), по взаимодействию. Лф и Эц и локализации относительно эпителия (внутри-, или интраэпителиальные - ИЭЛф и вне- или эстраэпителиальные - ЭЭЛф и их соотношение - ИЭлф/ЭЭЛф, по метаболическим свойствам (популяции Т-, В-, О-лимфоциты), по митотической активности или пролиферации (индекс митозов Лф-ИМЛф) и по степени повреждения или альтерации структуры Лф (индекс деструкции и средний показатель деструкции Лф-ИДЛф и СПДЛф).

Индекс генерации лимфоцитов рассчитывают по формуле:

ИГЛф=(Бл. Кл.+БЛф):(СЛф+МЛф);

индекс соотношения интра- и экстраэпителиальных лимфоцитов - по формуле: ИЭЛф/ЭЭЛф=ИЭЛф:ЭЭЛф;

индекс соотношения Т- и В-лимфоцитов - по формуле: Т-Лф/В-Лф=Т-Лф:В-Лф;

индекс митозов лимфоцитов - по формуле: ИМЛф=Лфм:(Лфм+Лфо), где ЛМф - количество Лф с фигурами митозов и Лфо - число Лф без признаков митозов;

индекс деструкции лимфоцитов - ИДЛф=(N₁+N₂+N₃+N₄):(N₀+N₁+N₂+N₃+N₄), где N₀, N₁, N₂, N₃, N₄ - количество клеток 0-го, 1-го, 2-го, 3-го, 4-го класса деструкции;

средний показатель деструкции лимфоцитов - СПДЛф=[(1×N₁)+(2×N₂)+(3×N₃)+(4×N₄)]:100, где 1, 2, 3, 4 - номера класса деструкции клеток, 100 - общее количество подсчитанных клеток.

Дифференцированный подсчет генерации Лф разной степени зрелости осуществляется на 100 Лф и рассчитывается индекс генерации Лф (ИГЛф). В лимфоцитограмме по степени зрелости клеточных элементов выделяют бластные клетки (Бл. Кл.), большие, средние и малые Лф (БЛф, СЛф, МЛф). В этом случае Бл. Кл. и БЛф отождествляют с макрогенерациями Лф, СЛф - с мезогенерациями и МЛф - с микрогенерациями Лф. При этом Бл. Кл. соответствуют полибластам с полипотентной ориентацией дифференцировки, БЛф - лифобластам, СЛф - пролимфоцитам и МЛф - зрелым Лф. Для расчета ИГЛф используют следующую формулу: (Бл. Кл.+БЛф):(СЛф+МЛф), в которой числитель представлен суммой малодифференцированных клеточных элементов (Бл. Кл.+БЛф), а знаменатель - суммой зрелых форм (СЛф+МЛф). Величины ИГЛф в норме могут колебаться от 0,05 до 0,15 (в среднем составляет 0,10). Увеличение ИГЛф свидетельствует о сдвиге в сторону созревающих (малодифференцированных) клеток (Бл. Кл.+БЛф), а снижение ИГЛф указывает на преобладание зрелых форм Лф (СЛф+МЛф). Следовательно, значение ИГЛф находится в обратной зависимости от степени зрелости Лф: чем выше величины ИГЛф - тем меньше степень зрелости Лф, а чем ниже величины ИГЛф - тем больше степень зрелости Лф. ИГЛф позволяет судить о характере и интенсивности процессов генерации клеточных элементов.

Для оценки взаимодействия эпителиальных М-клеток или микроворсинчатых эпителиальных клеток, выполняющих транспортную функцию, и Лф осуществляют подсчет количества эпителиальных М-клеток, соответствующего числа интра- и эстраэпителиальных Лф (ИЭЛф и ЭЭЛф) в %, вычисляют соотношения ИЭЛф/ЭЭЛф и дают его оценку. Эпителиальные М-клетки транспортируют антиген с поверхности слизистой оболочки в подлежащую лимфоидную ткань. М-клетки не обрабатывают антиген и не представляют его. М-клетки захватывают Лф путем эндоцитоза (эндоцитобиоза), изолируют их от экзо- и эндогенных влияний в различных слоях слизистой оболочки. Именно М-клетки служат локусом взаимодействия антигенного материала и Лф. Они заключают в себе Лф, которые инфильтруют эпителиальный покров (интраэпителиальные Лф-ИЭЛф). В конечном итоге эпителиальные М-клетки и ИЭЛф составляют структурно-функциональную основу местной защитно-транспортной системы клеток в лимфоидной ткани. Собственная часть технологии цитологического анализа включает определение числа ИЭЛф и ЭЭЛф и расчет индекса соотношения ИЭЛф/ЭЭЛф, средняя величина ИЭЛф/ЭЭЛф в норме чаще составляет 0,15-0,30. Величины содержания ИЭЛф (12,8-22,5%) и значения ИЭЛф/ЭЭЛф находятся в прямой зависимости от степени активности процессов кооперации клеточных элементов (Эц-Лф).

Идентификация популяций Лф (Т-, В-, О-Лф) в биосистеме НАЛТ осуществляют с помощью цитохимического метода, раннее предложенного Л.А. Ивановой, Е.В. Васильевой, В.В. Соколовым (1979) для исследования популяции Лф в периферической крови путем выявления активности кислой фосфатазы (КФ). По характеру распределения химического продукта в клетках косвенно судят об их принадлежности к той или иной популяции. Цитохимическую реакцию на определение активности КФ в Лф проводят методом азосочетания по Р.П. Нарциссову (1970) с использованием нафтол-AS-Bi-фосфата в качестве субстрата и азотированного парарозанилина в качестве красителя (Нарциссов Р.П. Цитохимия ферментов лейкоцитов в педиатрии: Дис. … докт. мед. наук. - М., - 1970. - 360 с.). При оценке цитологических препаратов на КФ выделяю 3 типа реакции в Лф:

- единичные (1-4, реже больше) яркие, четко очерченные; крупные или средних размеров гранулы (Т-Лф);

- множественные мелкие, нечетко очерченные гранулы, часто на фоне диффузного окрашивания (О-Лф);

- отсутствие продукта реакции на КФ, ферментоотрицательные клетки (В-Лф).

Содержание КФ определяют в 100 клеточных элементах и подсчитывают дифференцированное число Лф с разным характером цитохимической реакции: Т-Лф, В-Лф, О-Лф и соотношение Т-Лф/В-Лф. Соотношения популяций могут быть нормальными или отражать состояние их дисбаланса.

Оценка репродуктивной функции клеток проводится путем цитогенетических и цитологических исследований. Для этого определяют число клеток с фигурами митозов в относительных (%) величинах (Сапин М.Р., Этингер Л.Е. Иммунная система человека. - М.: Медицина, - 1996. - 304 с. Цитопродукция Лф в биосистеме НАЛТ определяется путем подсчета числа клеток, содержащих фигуры митозов в %, вычисления индекса митозов (ИМЛф) и их оценки. Репродуктивная функция клеток исследуется по митотической их активности. Митоз, как наиболее распространенный способ репродукции клеток, обеспечивает возможность образования генетически равноценных клеток и сохраняет преемственность хромосом в ряду клеточных генераций. Это достигается сочетанием процессов идентичной редупликации хромосом и их равномерным распределением между дочерними клетками. При цитологическом исследовании определяют процесс митозов в клетках на разных его стадиях. Чаще всего выделяют 4 стадии собственного процесса митоза:

1-ю профазу - стадию формирования хромосом и расхождения центриолей;

2-ю метафазу - стадию перемещения хромосом к экваториальной плоскости делящейся клетки и формирование «материнской звезды»;

3-ю анафазу - стадию расхождения хромосом к полюсам, формирования и образования фигуры «дочерних звезд»;

4-ю телефазу - заключительную стадию митоза или стадию реконструкции (формирование) дочерних ядер из групп хромосом и разделения тела клетки на 2 части.

В период интерфазы (между процессами митозов) определяются процессы дифференцировки, роста и функционирования клеток и стадии митозов не определяются.

Количественная оценка цитопродукции осуществляется по степени митотической активности клеток. Для этого используется индекс митозов Лф (ИМЛф), который вычисляют по следующей формуле: ИМЛф=Nмитоз:Nмитоз+N_o, где Nмитоз - число Лф с фигурами митоза и N_o - количество Лф, не содержащих фигур митоза. Теоретически величины ИМЛф могут колебаться в пределах 0-100. В норме величины ИМЛф чаще составляют 0,01-0,05. Причем величины ИМЛф находятся в прямой зависимости от митотической активности Лф. Высокие значения ИМЛф указывают на повышение митотической активности Лф и активацию процессов пролиферации НАЛТ.

Процессы повреждения клеток оценивают по соответствующим индексам деструкции Лф (ИДЛф) и средним показателям деструкции Лф (СПДЛф). Для расчета этих показателей проводится ранжирование клеток (Лф) в зависимости от степени их повреждения по 5 классам. Классы повреждения Лф определяют при подсчете 100 клеток. Полученное число клеток (в %), относится к 0, 1, 2, 3, 4-му классу, условно обозначают соответственно N₀, N₁, N₂, N₃, N₄. ИДЛф рассчитывают по следующей формуле: ИДЛф=(N₁+N₂+N₃+N₄):(N₀+N₁+N₂+N₃+N₄), где числитель представлен суммой клеток с признаками повреждения 1, 2, 3, 4-го класса, а знаменатель - общим числом подсчитанных клеток с признаками и без признаков повреждения (чаще 100 клеток). Величины ИДЛф могут колебаться в пределах 0-1,00 и находятся в прямой зависимости от степени повреждения Лф.

Средний показатель деструкции Лф (СПДЛф) определяется по формуле: СПЛЛф=[(1×N₁)+(2×N₂)+(3×N₃)+(4×N₄)]:100, в которой числитель представлен суммой произведений номера и класса повреждения (N₁, N₂, N₃, N₄), а знаменатель - общим количеством подсчитанных клеток с признаками повреждения. Возможные колебания СПДЛф составляют 0-4,00. Значения СПДЛф находятся в прямой зависимости от интенсивности процессов повреждения. Показатели повреждения Лф (ИДПЛФ и СПДЛф) характеризуют степень (ИДЛф) и интенсивность (СПДЛф) процессов повреждения, а также отражают состояние альтерации Лф в биосреде НАЛТ.

Структурно-функциональное состояния НАЛТ - системы было изучено у 200 здоровых детей и подростков в возрасте от 1 года до 18 лет (154) и взрослых лиц от 19 до 25 лет (46). При этом установлена различная направленность изменения показателей НАЛТ - системы от возраста обследованных (таблица 1).

На поверхности слизистой оболочки определялось умеренное количество клеточных элементов. ОСК в возрастных группах увеличивалось в 1,37 раза (p_1-4<0,001). ЖСК была высокой, увеличивалась с возрастом в 1,19 раза (p_1-4<0,001).

В общей цитограмме количественно было установлено, что преобладали Эц и Лф, а Э, Н, Пц, Мф встречались значительно реже. Количество Эц было доминирующим в структуре цитограммы и повышалось с возрастом в 1,28 раза (p_1-4<0,01). Количество Лф снижалось с возрастом в 1,96 раза (p_1-4<0,001). Число Э закономерно возрастало в возрастных группах в 1,88 раза (p_1-4<0,01), число Нф - в 3,00 раза (p_1-4<0,001), число Пц - в 2,54 раза (p_1-4<0,01) и число Мф - в 1,95 раза (p_1-4<0,001). Средние величины соотношений Эц/Лф были в прямой зависимости от возраста и возрастали в 2,20 раза (р<0,001), что было обусловлено приростом числа Эц и умеренной убылью Лф.

В структуре парциальной цитограммы Лф по величине и степени дифференцировки клеток наибольший удельный вес падал на малые и средние Лф (МЛФ и СЛф) и небольшую часть составляли бластные клетки (Бл. Кл.) и большие Лф (БЛф). Количество Бл. Кл. падало в 6,66 раза (p_1-4<0,001) и Блф - в 1,59 раза (p_1-4<0,001). Число СЛф с тенденцией к снижению по возрасту уменьшалось в 1,30 раза (p_1-4<0,001), а число МЛф возрастало в возрастных группах в 1,41 раза (p_1-4<0,001). Большие популяции (Бл. Кл. и БЛФ) относились к малым популяциям (СЛф и МЛф) в виде ИГЛф, который снижался в 1,80 раза (p_1-4<0,01). Изучение числа Лф в зависимости от их локализации по отношению Эц. В соответствии с этим были выделены внутри- или интраэпителиальные Лф (ИЭЛф) и вне- или эстраэпителиальные Лф (ЭЭЛф). Результаты исследования показали, что преобладали ЭЭЛф над ИЭЛф. Возрастная динамика ИЭЛф отличалась обратной направленностью и уменьшалась в 1,76 раза (p_1-4<0,001), а ЭЭЛф - прямой направленностью и возрастала в 1,10 раза (p_1-4<0,02). В связи с разнонаправленной возрастной динамикой этих популяций величины ИЭЛф/ЭЭЛф постепенно снижалась в 1,92 раза (p_1-4<0,001). Количество Т-Лф и В-Лф в возрастных группах было почти равным. Содержание Т-Лф возрастало в 1,26 раза (p_1-4<0,02) и В-Лф - в 1,16 раза (p_1-4<0,05). Их соотношения (Т-Лф/В-Лф) колебались в пределах 0,98-1,05 без достоверных различий (p_1-4>0,2). Содержание О-Лф характеризовалось обратной возрастной зависимостью, и относительные их показатели снижались в 6,02 раза (p_1-4<0,001). Лф в НАЛТ-системе характеризовались низкой митотической активностью, и относительные их показатели снижались с возрастом в 1,19 раза (р_2-3<0,05) и в 1,23 раза (р_3-4<0,05). Процессы деструкции Лф по числу поврежденных клеток (ИДЛф) были слабо выражены и колебались без достоверных различий (p_1-4>0,2). Интенсивность повреждения Лф (СПДЛф) снижалась с возрастом в 1,27 раза (p_1-4<0,001).

Иммуно-цитологические исследования НАЛТ-системы были выполнены у 200 здоровых лиц 1-й группы здоровья. Из них детей в возрасте 1-3 лет было 44, дошкольников 3-7 лет - 55, школьников (детей и подростков) 7-18 лет - 55 и взрослых лиц 19-25 лет - 46.

Для оценки полученных результатов исследования были рассчитаны доверительные интервалы (ДИ) показателей по формуле: X±2·m_x (95% - ДИ). Кроме того, установлена направленность изменений структурно-функциональных показателей НАЛТ-системы с повышением их (↑) или снижением (↓) (таблица 2).

Для диагностики местной иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы были разработаны соответствующие критерии в возрастных группах. Для этого были предложены критерии, соответствующие значениям больше или меньше (> или <) граничных величин доверительных интервалов каждого параметра НАЛТ-системы (таблица 3).

Причем в каждой возрастной группе содержалось 13 показателей со значение больше (>) и по 11 показателей со значением меньше (<). При этом показатели со значением меньше отражали наличие иммуно-цитологической недостаточности, а показатели со значением больше - наличие иммуно-цитологической компенсации. По количеству сниженных показателей устанавливалась степень местной иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы. При этом I-ю степень местной иммуно-цитологической недостаточности диагностируют при снижении 6-8 показателей (или 25,0-33,3%) от общего их количества, II-ю степень - при снижении 9-18 исследуемых показателей (или 37,5-75,0%)) от общего их количества и III-ю степень - при снижении 19-24 исследуемых показателей (или 79,2-100,0%)). При этом деление по степеням осуществлялось на основе принципа простого ранжирования.

Для иллюстрации приводятся конкретные примеры по диагностике местной иммуно-цитологической недостаточности в системе назально-ассоциированной лимфоидной ткани.

Пример 1. Иммуно-цитологические исследования НАЛТ-системы (небные миндалины) проведены у ребенка К., 2 лет 6 месяцев, страдающего частыми острыми респираторными заболеваниями верхних дыхательных путей. Получены следующие иммуно-цитологические показатели НАЛТ-системы: ОСК - 2,20 усл. ед., ЖСК - 69,5%; общая цитограмма: Эц - 38,5%, Э - 1,5%, Н - 2,0%, Лф - 50,0%, Пц - 2,5%, Мф - 5,5%, Эц/Лц - 0,77; цитограмма Лф: Бл. Кл. - 3,1%, БЛф - 3,9%, СЛф - 47,0%, МЛф - 46,0%, ИГЛф - 0,07, ИЭЛф - 24,5%, ЭЭЛф - 75,5%, ИЭЛф/ЭЭЛф - 0,32. Т-Лф - 36,5%, В-Лф - 51,0%, О-Лф - 12,5%, Т-Лф/В-Лф - 0,71, ИМЛф - 0,12, ИДЛф - 0,22 усл. ед., СПДЛф - 133,0 усл. ед.

Заключение: цитоморфологические показатели НАЛТ - системы определяются за пределами граничных величин 95% - ДИ, что свидетельствует о наличии местной иммуно-цитологической недостаточности I-й степени, т.к. сниженные значения у 6 показателей (или в 25,0% случаев) и повышенные значения 18 показателей (или в 75,0% случаев).

Пример 2. Иммуно-цитологические исследования НАЛТ-системы (небные миндалины) проведены у ребенка В., 5 лет 6 месяцев, страдающего риносинуситом в периоде обострения. Результаты исследования показали следующие результаты: ОСК - 2,60 усл. ед. и ЖСК - 62,6%; общая цитограмма: Эц - 38,5%, Э - 1,5%, Н - 10,0%, Лф - 36,0%, Пц - 5,5%, Мф - 8,5%, Эц/Лц - 1,07; парциальная цитограмма лимфоцитов: Бл. Кл. - 0,75%, БЛф - 3,25%, СЛф - 45,0%, МЛф - 50,0%, ИГЛф - 0,04, ИЭЛф - 20,0%, ЭЭЛф - 80,0%, ИЭЛф/ЭЭЛф - 0,25, Т-Лф - 32,4%, В-Лф - 53,6%, О-Лф - 14,0%, Т-Лф/В-Лф - 0,60, ИМЛф - 0,10, ИДЛф - 0,28 усл. ед., СПДЛф - 185,5 усл. ед.

Заключение: цитоморфологические показатели НАЛТ - системы определяются за пределами граничных величин 95% - ДИ и указывают на наличие местной иммуно-цитологической недостаточности II-й степени, т.к. сниженные значения у 9 показателей (или в 37,5% случаев) и повышенные значения 15 показателей (или в 62,5% случаев).

Пример 3. Иммуно-цитологические исследования НАЛТ-системы (небные миндалины) проведены у подростка С., 15 лет, страдающего хроническим субкомпенсированным тонзиллитом в стадии ремиссии. Полученные данные характеризовались следующими величинами: ОСК - 2,10 усл. ед., ЖСК - 62,5%; общая цитограмма: Эц - 45,0%, Э - 2,0%, Н - 8,0%, Лф - 35,0%, Пц - 2,25%, Мф - 7,75%, Эц/Лц - 1,28; цитограмма Лф: Бл. Кл. - 0,55%, БЛф - 4,45%, СЛф - 45,5%, МЛф - 42,5%, ИГЛф - 0,05, ИЭЛф - 23,5%, ЭЭЛф - 76,5%, ИЭЛф/ЭЭЛф - 0,31, Т-Лф - 33,3%, В-Лф - 58,0%, О-Лф - 8,7%, Т-Лф/В-Лф - 0,57, ИМЛф - 0,08, ИДЛф - 0,22 усл. ед., СПДЛф - 126,6 усл. ед.

Заключение: цитоморфологические показатели НАЛТ - системы находятся за пределами граничных величин 95% - ДИ и подтверждают наличие местной иммуно-цитологической недостаточности II-й степени, т.к. сниженные значения у 9 показателей (или в 37,5% случаев) и повышенные значения 15 показателей (или в 62,5% случаев).

Пример 4. Иммуно-цитологические исследования НАЛТ-системы (небные миндалины) выполнены у студента Т., 22 лет, страдающего спорадически возникающими ангинами (период реконвалесценции). Результаты проведенных исследований показали следующий спектр данных: ОСК - 1,95 усл. ед., ЖСК - 63,5%; общая цитограмма: Эц - 69,0%, Э - 0,8%, Н - 2,2%, Лф - 22,0%, Пц - 0,5%, Мф - 5,5%, Эц/Лц - 2,76; цитограмма Лф: Бл. Кл. - 0,25%, БЛФ - 4,75%, СЛф - 40,0%, МЛф - 55,0%, ИГЛф - 0,05, ИЭЛф - 10,5%, ЭЭЛф - 89,5%, ИЭЛф/ЭЭЛф - 0,12, Т-Лф - 44,5%, В-Лф - 40,5%, О-Лф - 15,0%, Т-Лф/В-Лф - 1,10, ИМЛф - 0,08, ИДЛф - 0,12 усл. ед., СПДЛф - 89,5 усл. ед.

Заключение: цитоморфологические показатели НАЛТ-системы определяются в пределах доверительных интервалов (95%-ДИ) и свидетельствуют об отсутствии местной иммуно-цитологической недостаточности и восстановлении местной клеточной защиты.

На основании результатов решения технической задачи были сделаны следующие выводы:

- предлагаются многогранные исследования по оценке структурно-функционального состояния НАЛТ-системы, включающие определение общего содержания и жизнеспособности клеток (ОСК и ЖСК), общей цитограммы и парциальной цитограммы лимфоцитов (Лф);

- общие цитограммы отражают дифференцированный состав клеточных элементов и соотношение основных их популяций;

- парциальные цитограммы Лф характеризуются:

- по размерам, степени зрелости и числу генераций,

- по локализации Лф относительно эпителия,

- по метаболическим свойствам и идентификации популяции Лф,

- по митотической активности или степени пролиферации Лф,

- по степени повреждения или альтерации структуры Лф;

- установлена возможная направленность в сторону повышения или снижения исследуемых цитоморфологических показателей;

- разработаны доверительные интервалы с 95%-й точностью и определены граничные их значения;

- показаны возрастные особенности иммуно-цитологических показателей НАЛТ-системы у детей и подростков 1-3, 3-7, и 7-18 лет и у взрослых лиц в возрасте 19-25 лет;

- представлены иммуно-цитологические критерии диагностики местной иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы по граничным величинам доверительных интервалов;

- решена задача по диагностике иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы с установлением 3-х степеней (I-й, II-й, III-й); при снижении 6-8 показателей (25,0-33,3%) диагностируют I-ю степень; 9-18 показателей (37,5-75,0%) - II-й степень и 19-24 показателей (79,2-100,0%) - III-ю степень.

Литература

1. Плужников М.С., Лавренева Г.В., Левин М.Я., Назаров П.Г., Никитин К.А. Тонзиллит: клинические и иммунологические аспекты. - Главы из книги: Иммунология хронического тонзиллита. - СПб.: Диалог, 2004. - С. 3-59.

2. Плужников М.С., Лавренева Г.В., Левин М.Я., Назаров П.Г., Никитин К.А. Тонзиллит: клинические и иммунологические аспекты. - Главы из книги: Иммунология хронического тонзиллита. - СПб.: Диалог, 2004. - С. 3-59.

3. Маккаев Х.М. Тактика сочетанного консервативного лечения хронических воспалительных заболеваний лимфоидных органов носоглотки (хронического тонзиллита и аденоидита) у детей // Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 2002. - №5. - С. 39-43.

4. Осин А.Я. Цитологические методы диагностики в пульмонологии детского возраста // II-й Международный симпозиум фонда медицинского обмена Японии, России и стран Северо-Восточной Азии: тезисы докладов. - Россия - Владивосток, 1994. - С. 182-183.

5. Стефани Д.В., Вельтищев Ю.Е., Клиническая иммунология детского возраста // Руководство для врачей. - М.: Медицина, 1996. - 384 с.

6. Нарциссов Р.П. Цитохимия ферментов лейкоцитов в педиатрии: Дисс. … докт. мед. наук. - М., 1970. - 360 с.

7. Сапин М.Р., Этингер Л.Е. Иммунная система человека. - М.: Медицина, 1996. - 304 с.

Изобретение относится к медицине и может быть эффективно использовано в лабораторной диагностике в способе выявления местной иммуно-цитологической недостаточности в системе назально-ассоциированной лимфоидной ткани (НАЛТ). Способ осуществляют путем комплексных исследований для диагностики местной иммуно-цитологической недостаточности назально-ассоциированной лимфоидной ткани по ряду количественных и качественных иммуно-цитологических показателей общей цитограммы и парциальной цитограммы лимфоцитов и определением в возрастных группах диагностических критериев, соответствующих значениям больше (>) или меньше (<) граничных величин доверительных интервалов каждого исследуемого иммуно-цитологического показателя и с последующим установлением трех степеней иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы. При этом I-ю степень диагностируют при снижении 6-8 показателей или 25,0-33,3% от общего числа показателей; II-ю степень - 9-18 показателей или 37,5-75,0%, III-ю степень - 19-24 показателей или 79,2-100,0%. Используются доверительные интервалы с 95%-ной точностью. 3 табл., 4 пр.

Способ диагностики местной иммуно-цитологической недостаточности в системе назально-ассоциированной лимфоидной ткани (НАЛТ), включающий исследование локальной иммунной системы лимфоидной ткани в цитологических мазках-отпечатках, и отличающийся тем, что способ диагностики осуществляют путем комплексных исследований для диагностики местной иммуно-цитологической недостаточности назально-ассоциированной лимфоидной ткани по ряду количественных и качественных иммуно-цитологических показателей общей цитограммы и парциальной цитограммы лимфоцитов и определением в возрастных группах диагностических критериев, соответствующих значениям больше (>) или меньше (<) граничных величин доверительных интервалов каждого исследуемого иммуно-цитологического показателя и с последующим установлением трех степеней иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы, при этом I-ю степень диагностируют при снижении 6-8 показателей или 25,0-33,3% от общего числа показателей; II-ю степень - 9-18 показателей или 37,5-75,0%, III-ю степень - 19-24 показателей или 79,2-100,0%.