ПРОИЗВОДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ПИРАЗОЛА Российский патент 2016 года по МПК C07D409/14 C07D409/04 C07D231/14 C07D401/14 C07D403/14 C07D413/12 C07D413/14 C07D417/14 C07D471/08 C07D487/08 A61K31/454 A61K31/496 A61K31/5377 A61K31/541 A61P3/00 A61P9/00 

Перекрестная ссылка на родственные заявки

В данной заявке заявляется приоритет предварительной заявки на патент США № 61/541182, поданной 30 сентября 2011 года, содержание которой во всей ее полноте включено в данное описание посредством ссылки.

Уровень техники

Центральные каннабиноидные (CB1) рецепторы 1 экспрессируются в мозге. Их функция оказывает влияние на многие неврологические и психологические осложнения. См., например, Goutopoulos et al., Pharmacol. Ther., 2002, 95, 103-7; и Shia et al., патент США № 7834046. Римонабант, антагонист центрального рецептора СВ1, использовали для лечения ожирения. Однако указанное лекарственное средство оказывает вредное побочное психиатрическое действие. См., например, Wu et al., Curr. Top. Med. Chem., 2011, 11, 1421-29.

Рецепторы CB1 экспрессируются также в ряде периферических тканей, например, в печени, в жировых тканях, адипоцитах и надпочечниках. См. Marzo et al., Nat. Rev. Endocrinol., 2009, 5, 633-638. Антагонисты периферических рецепторов CB1 являются потенциальными лекарственными препаратами для лечения многих расстройств, таких как ожирение, избыточный вес, неалкогольная жировая болезнь печени, сахарный диабет 2 типа, нефропатия, фиброз почек, остеопороз и остеоартрит. См., например, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2009, 19, 639-643; J. Clin. Invest., 2010, 120, 2953-2966; Bioorg. Med. Chem. Lett., 2010, 20, 4573-4577; и Diabetes 2010, 59, 1046-1054. Общепризнано, что подобные лекарственные препараты не должны иметь нежелательных побочных эффектов, которые наблюдаются для римонабанта. См., например, Wu et al., Curr. Top. Med. Chem., 2011, 11, 1421-29.

Еще предстоит выявить среди периферических рецепторов CB1, как синтезированных, так и еще не синтезированных, безопасные и эффективные кандидаты для использования в качестве лекарственных средств.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение основано на открытии, заключающемся в том, что некоторые производные соединения пиразола эффективны при лечении расстройств, опосредованных периферическим рецептором CB1.

В соответствии с одним аспектом, настоящее изобретение касается производных соединений пиразола формулы (I):

В указанной формуле R₁ обозначает Н, С₁-С₁₀ алкил, С₂-С₁₀ алкенил, С₂-С₁₀ алкинил, C₃-C₂₀ циклоалкил, С₃-С₂₀ циклоалкенил, С₃-С₂₀ гетероциклоалкил, C₃-C₂₀ гетероциклоалкенил, арил или гетероарил; каждый из R₂ и R₃ независимо обозначает Н, С₁-С₁₀ алкил, С₃-С₂₀ циклоалкил, C₃-C₂₀ гетероциклоалкил, арил или гетероарил; или R₂ вместе с R₃ и атомом азота, к которому они присоединены, образуют C₃-C₂₀ гетероциклоалкил, C₃-C₂₀ гетероциклоалкенил или гетероарил; каждый из R₄ и R₅ независимо обозначает Н, С₁-С₁₀ алкил, С₃-С₂₀ циклоалкил, C₃-C₂₀ циклоалкенил, С₃-С₂₀ гетероциклоалкил, C₃-C₂₀ гетероциклоалкенил, арил, гетероарил, C(O)R_a, C(O)OR_a, C(O)NR_aR_b, C(S)NR_aR_b, C(=NH)NR_aR_b, C(=N-CN)NR_aR_b, C(=N-NO₂)NR_aR_b, S(O)R_a, S(O₂)R_a, S(O)NR_aR_b или S(O₂)NR_aR_b; или R₄ вместе с R₅ и атомом азота, к которому они присоединены, образуют C₃-C₂₀ гетероциклоалкил, C₃-С₂₀ гетероциклоалкенил или гетероарил; где каждый из R_a и R_b независимо обозначает H, C₁-C₁₀ алкил, C₃-C₂₀ циклоалкил, С₃-C₂₀ гетероциклоалкил, арил или гетероарил, или R_a вместе с R_b и атомом азота, к которому они присоединены, образуют C₃-C₂₀ гетероциклоалкил, C₃-C₂₀ гетероциклоалкенил или гетероарил, а Х обозначает группу или где R₆ обозначает Н, C₁-C₁₀ алкил, C₃-C₂₀ циклоалкил, C₃-C₂₀ циклоалкенил, С₃-С₂₀ гетероциклоалкил, С₃-C₂₀ гетероциклоалкенил, арил или гетероарил; R₇ представляет собой Н, атом галогена, трифторметил, C₁-C₁₀ алкил, C₁-C₁₀ алкокси, нитро, циано, амино или гидрокси; а m принимает значение 0, 1, 2, 3, 4 или 5.

Одно подмножество вышеописанных соединений составляют производные соединения пиразола, в которых X обозначает: .

В указанных соединениях R₁ обозначает арил, замещенный атомом галогена (например, 2,4-дихлорфенил); каждый из R₂ и R₃ независимо обозначает Н или пиперидинил; каждый из R₄ и R₅ независимо обозначает Н или S(O₂)NR_aR_b, где каждый из R_a и R_b независимо обозначает Н, C₁-C₁₀ алкил, С₃-C₂₀ циклоалкил, С₃-C₂₀ гетероциклоалкил, арил или гетероарил; или R_a вместе с R_b и атомом азота, к которому они присоединены, образуют C₃-C₂₀ гетероциклоалкил, С₃-C₂₀ гетероциклоалкенил или гетероарил; R₆ обозначает C₁-C₁₀ алкил, С₃-C₂₀ циклоалкил или арил.

Другое подмножество вышеописанных соединений составляют производные соединения пиразола, в которых X обозначает:

В указанных соединениях R₁ обозначает арил, замещенный атомом галогена (например, 2,4-дихлорфенил); каждый из R₂ и R₃ независимо обозначает Н или пиперидинил; каждый из R₄ и R₅ независимо обозначает Н или S(O₂)NR_aR_b, где каждый из R_a и R_b независимо обозначает Н, C₁-C₁₀ алкил, С₃-C₂₀ циклоалкил, С₃-C₂₀ гетероциклоалкил, арил или гетероарил; или R_a вместе с R_b и атомом азота, к которому они присоединены, образуют C₃-C₂₀ гетероциклоалкил, С₃-C₂₀ гетероциклоалкенил или гетероарил; R₇ обозначает Н, атом галогена или трифторметил; а m равно 1.

Термин ″алкил″ означает насыщенную, линейную или разветвленную углеводородную группу, такую как -СН₃ или -СН(СН₃)₂. Термин ″алкенил″ означает линейную или разветвленную углеводородную группу, которая содержит по меньшей мере одну двойную связь, такую как -СН=СН-СН₃. Термин ″алкинил″ означает линейную или разветвленную углеводородную группу, которая содержит по меньшей мере одну тройную связь, такую как -С≡С-СН₃. Термин ″алкокси″ относится к -O-алкилу. Примеры алкокси включают, однако этим не ограничиваясь, метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, изобутокси, втор-бутокси и трет-бутокси. Термин ″циклоалкил″ относится к насыщенной циклической углеводородной группе, такой как циклогексил. Термин ″циклоалкенил″ относится к неароматической циклической углеводородной группе, которая содержит по меньшей мере одну двойную связь, такой как циклогексенил. Термин ″гетероциклоалкил″ относится к насыщенной циклической группе, содержащей в цикле по меньшей мере один гетероатом (например, N, О или S), такой как 4-тетрагидропиранил. Термин ″гетероциклоалкенил″ относится к неароматической циклической группе, содержащей в цикле по меньшей мере один гетероатом (например, N, О или S) и по меньшей мере одну двойную связь, такой как пиранил. Термин ″арил″ относится к углеводородной группе, имеющей один или несколько ароматических циклов. Примеры арильных групп включают фенил (Ph), фенилен, нафтил, нафтилен, пиренил, антрил и фенантрил. Термин ″гетероарил″ относится к группе, включающей один или несколько ароматических циклов, которые содержат по меньшей мере один гетероатом (например, N, O или S). Примеры гетероарильных групп включают фурил, фурилен, флуоренил, пирролил, тиенил, оксазолил, имидазолил, тиазолил, пиридил, пиримидинил, хиназолинил, хинолил, изохинолил и индолил.

Если не указано иное, указанные алкил, алкенил, алкинил, алкокси, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкенил, арил и гетероарил включают как замещенные, так и незамещенные радикалы. Возможные заместители в циклоалкиле, циклоалкениле, гетероциклоалкиле, гетероциклоалкениле, ариле и гетероариле включают, однако этим не ограничиваясь, C₁-C₁₀ алкил, С₂-С₁₀ алкенил, С₂-С₁₀ алкинил, C₃-C₂₀ циклоалкил, С₃-С₂₀ циклоалкенил, С₁-С₂₀ гетероциклоалкил, С₁-С₂₀ гетероциклоалкенил, C₁-C₁₀ алкокси, арил, арилокси, гетероарил, гетероарилокси, амино, C₁-C₁₀ алкиламино, C₁-C₂₀ диалкиламино, ариламино, диариламино, C₁-C₁₀ алкилсульфонамино, арилсульфонамино, С₁-С₁₀ алкилимино, арилимино, C₁-C₁₀ арилсульфонимино, арилсульфонимино, гидроксил, атом галогена, тиогруппу, C₁-C₁₀ алкилтио, арилтио, C₁-C₁₀ алкилсульфонил, арилсульфонил, ациламино, аминоацил, аминотиоацил, амидо, амидино, гуанидино, уреидо, тиоуреидо, циано, нитро, нитрозо, азидо, ацил, тиоацил, ацилокси, карбоксил и сложный эфир карбоновой кислоты. С другой стороны, возможные заместители в алкиле, алкениле или алкиниле включают все вышеуказанные заместители, за исключением C₁-C₁₀ алкила. Циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкенил, арил и гетероарил могут быть конденсированы друг с другом.

В соответствии с другим аспектом, настоящее изобретение относится к способу лечения расстройств, опосредованных периферическими рецепторами CB1. Указанный способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества одного или нескольких производных соединений пиразола вышеуказанной формулы (I). Примеры расстройств, опосредованных периферическими рецепторами CB1, включают ожирение, избыточный вес, сахарный диабет 2 типа, неалкогольную жировую болезнь печени, гиперлипидемию, дислипидемию, атеросклероз, инфаркт миокарда, инсульт, артериальную гипертензию, бронходилатацию, геморрагический шок, фиброз печени, цирроз печени, неврологические расстройства, аддиктивные расстройства, нарушения обмена веществ, глаукому, остеопороз, остеоартрит, нефропатию, фиброз почек и хронические воспалительные заболевания.

Термин ″лечение″ или ″терапия″ относится к введению одного или нескольких производных соединений пиразола пациенту, у которого наблюдается вышеописанное расстройство, симптом подобного расстройства или предрасположенность к подобному расстройству, с целью вызвать терапевтический эффект, например, излечить, ослабить, изменить, оказать воздействие, облегчить или предотвратить вышеуказанное расстройство, его симптом или предрасположенность к нему.

Описанные выше производные соединения пиразола включают как сами указанные соединений, а также их соли, пролекарства и сольваты, если они существуют. Например, соль может быть образована анионом и положительно заряженной группой (например, аминогруппой) в производном соединении пиразола. Подходящие анионы включают хлорид, бромид, иодид, сульфат, нитрат, фосфат, цитрат, метансульфонат, трифторацетат, ацетат, малат, тозилат, тартрат, фумарат, глутамат, глюкуронат, лактат, глутарат и малеат. Кроме того, соли могут быть также образованы катионом и отрицательно заряженной группой (например, карбоксилатом) в производном соединении пиразола. Подходящие катионы включают ион натрия, ион калия, ион магния, ион кальция и катион аммония, такой как ион тетраметиламмония. Производные соединения пиразола также включают соли, содержащие четвертичные атомы азота. Примеры пролекарств включают сложные эфиры и другие фармацевтически приемлемые производные, которые при введении пациенту способны высвобождать активные производные соединения пиразола. Сольват относится к комплексу, образованному активным производным соединением пиразола и фармацевтически приемлемым растворителем. Примеры фармацевтически приемлемых растворителей включают воду, этанол, изопропанол, этилацетат, уксусную кислоту и этаноламин.

В объем настоящего изобретения входит также фармацевтическая композиция, содержащая одно или несколько вышеуказанных производных соединений пиразола, которая предназначена для лечения одного из вышеуказанных расстройств, а также применение подобной композиции для изготовления лекарственного средства, предназначенного для проведения подобного лечения.

Подробности одного или нескольких вариантов осуществления настоящего изобретения изложены в приведенном ниже описании. Другие отличительные признаки, объекты и преимущества настоящего изобретения станут очевидны из описания и формулы изобретения.

Подробное описание изобретения

Ниже приведены примеры соединений по настоящему изобретению:

Приведенные в данном описании производные соединения пиразола могут быть получены по способам, хорошо известным из области техники. Последовательность, приведенная ниже на схеме 1, поясняет синтез производных соединений пиразола по настоящему изобретению.

В частности, производное соединение тиофена, содержащее кетонную группу (соединение А), может реагировать с производным оксалата (диэтилоксалатом) в присутствии основания с образованием производного соединения 1,3-диона, содержащего сложноэфирную группу (соединение B). Производное соединение 1,3-диона можно ввести в реакцию сочетания с гидразином с последующей внутримолекулярной циклизацией, которую осуществляют при кипячении с обратным холодильником в уксусной кислоте, с получением производного соединения пиразола, содержащего сложноэфирную группу (соединение С). Региоселективное бромирование производного соединения пиразола можно осуществить с использованием N-бромсукцинимида в ТГФ при комнатной температуре с получением соответствующего 5-бромпроизводного (соединение D). Указанное соединение можно бромировать дальше с получением дибромида (соединение Е), который, в свою очередь, обрабатывают нитратом серебра в смеси ацетон/вода (1:1) и получают бромзамещенное гидроксильное соединение (соединение F). Оно может вступать в реакцию с различными аминами в различных условиях проведения реакции (в присутствии хлорида алюминия) с образованием амида (соединение G). Атом брома в амиде можно затем преобразовать в алкиновую группу, используя Pd(PPh₃)₂Cl₂ и CuI в качестве катализаторов. Гидроксильную группу в полученном указанным образом соединении (соединение H) подвергают бромированию (с использованием PBr₃) и получают бромид (соединение I).

Соединение I можно ввести во взаимодействие с азидом натрия с последующим восстановлением по Штаудингеру (PPh₃) и получить соответствующий первичный амин (соединение J), который можно ввести в реакцию конденсации с различными хлорангидридами кислот (например, сульфонилхлоридом) и получить некоторые соединения по настоящему изобретению (например, соединения 10-85 и 143-157). Соединение I, необязательно, может непосредственно претерпевать S_N2 замещение с образованием других соединений по настоящему изобретению (например, соединений 87-113).

Полученное указанным образом производное соединение пиразола может быть очищено любым подходящим способом, например, колоночной хроматографией, высокоэффективной жидкостной хроматографией или перекристаллизацией.

Другие производные соединения пиразола по настоящему изобретению (например, соединения 119-142) можно получить, используя другие подходящие исходные вещества по вышеуказанным схемам синтеза и другие способы, известные из области техники. Вышеуказанные способы могут также дополнительно включать стадии введения или удаления подходящих защитных групп с тем, чтобы, в конечном счете, позволить провести синтез производных соединений пиразола. Кроме того, с целью получения требуемых соединений, различные этапы синтеза могут быть осуществлены в другой последовательности или в другом порядке. Синтетические химические превращения и методики применения защитных групп (и удаления защитных групп), пригодных для проведения синтеза требуемых производных соединений пиразола, известны из области техники и включают, например, те, что описаны в R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); и L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) и в последующих их изданиях.

Указанные в данном описании производные соединения пиразола могут содержать неароматическую двойную связь и один или несколько асимметрических центров. Таким образом, они могут существовать в виде рацематов и рацемических смесей, отдельных энантиомеров, индивидуальных диастереомеров, смесей диастереомеров и в виде цис- или транс-изомерных форм. Данное изобретение предполагает использование всех подобных изомерных форм.

В объем настоящего изобретения входит также фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного вышеуказанного производного соединения пиразола и фармацевтически приемлемый носитель.

Кроме того, данное изобретение охватывает способ введения эффективного количества одного или нескольких производных соединений пиразола пациенту, страдающего от заболевания, которое описано выше в разделе ″Сущность изобретения″. ″Эффективное количество″ относится к количеству активного производного соединения пиразола, необходимого для оказания терапевтического воздействия на пациента, лечение которого проводят. Как известно специалистам, эффективные дозы меняются в зависимости от заболевания, лечение которого осуществляют, пути введения, используемого наполнителя, а также от возможности совместного использования с другими терапевтическими методами.

При осуществлении способа по настоящему изобретению композицию, содержащую одно или несколько производных соединений пиразола, можно вводить парентерально, перорально, интраназально, ректально, местно или трансбуккально. Термин ″парентеральный″ в данном описании относится к подкожной, внутрикожной, внутривенной, внутримышечной, интраартикулярной, внутриартериальной, внутрисуставной, внутригрудинной, внутриполостной, внутриочаговой или внутричерепной инъекции, а также к любому подходящему способу вливания.

Стерильный состав для инъекции может представлять собой раствор или суспензию в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, такой как раствор в 1,3-бутандиоле. Приемлемыми носителями и растворителями, которые могут использоваться, являются маннит, вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды обычно используют нелетучие масла (например, синтетические моно- или диглицериды). Для получения препаратов для инъекций пригодны жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее производные с глицерином, а также натуральные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, в частности, их полиоксиэтилированные производные. Указанные масляные растворы или суспензии могут также содержать в качестве разбавителя или диспергатора длинноцепочечный спирт, карбоксиметилцеллюлозу или подобные диспергирующие средства. Для приготовления композиций могут также применяться другие обычно используемые поверхностно-активные вещества, такие как Tween или Span, или другие подобные эмульгаторы или агенты, повышающие биодоступность, которые обычно используют при изготовлении фармацевтически приемлемых твердых, жидких или других лекарственных форм.

Композицией для перорального введения может быть любая орально приемлемая стандартная лекарственная форма, в том числе капсулы, таблетки, эмульсии и водные суспензии, дисперсии и растворы. В случае таблеток обычно используемые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Как правило, также добавляют лубриканты, такие как стеарат магния. Для перорального введения в форме капсулы пригодные разбавители включают лактозу и сухой кукурузный крахмал. В том случае, когда водные суспензии или эмульсии вводят перорально, активный ингредиент может быть суспендирован или растворен в масляной фазе в комбинации с эмульгирующими или суспендирующими агентами. Если необходимо, могут быть добавлены подсластители, ароматизаторы или красители.

Композицию назального аэрозоля или композицию для ингаляции можно приготовить в соответствии с методиками, хорошо известными из области приготовления фармацевтических композиций. Например, подобную композицию можно приготовить в виде раствора в физиологическом растворе с использованием бензилового спирта или других подходящих консервантов, стимуляторов абсорбции для повышения биодоступности, фторуглеводородов и/или других солюбилизаторов или диспергаторов, известных из области техники.

Композицию, содержащую одно или несколько активных производных соединений пиразола, можно также назначать в форме суппозиториев для ректального введения.

Носитель в фармацевтической композиции должен быть ″приемлемым″ в том смысле, что должен быть совместим с активным ингредиентом композиции (и, предпочтительно, быть способным стабилизировать активные ингредиенты) и не оказывать вредного воздействия на пациента, лечение которого проводят. Один или несколько солюбилизаторов могут использоваться в качестве фармацевтических вспомогательных веществ, с целью доставки активного производного соединения пиразола. Примеры других носителей включают коллоидный оксид кремния, стеарат магния, целлюлозу, лаурилсульфат натрия и D&C Yellow # 10.

Можно предварительно осуществить скрининг описанных выше производных соединений пиразола на их эффективность при лечении вышеуказанных заболеваний путем проведения анализа в условиях in vitro, а затем подтвердить результаты в экспериментах на животных и клиническими испытаниями. Другие методы также должны быть очевидны специалистам в данной области техники.

Приведенные ниже конкретные примеры следует рассматривать лишь как иллюстративные, а не ограничивающие каким-либо образом настоящее изобретение. Авторы настоящего изобретения полагают, что без дальнейших уточнений специалист на основе данного описания сможет осуществить настоящее изобретение в максимально полном объеме. Все процитированные в данном описании публикации во всей их полноте включены в данное описание посредством ссылки.

Пример 1: Синтез соединений 10-85 и 143-157

Общая методика проиллюстрирована приведенной ниже схемой с использованием соединения 10 в качестве конкретного примера.

Реагенты и условия: (a) LiHMDS, диэтилоксалат, ТГФ/Et₂O, от -78°C до комнатной температуры, 20 час, 85%, (b) 2,4-дихлорфенилгидразина гидрохлорид, EtOH, комнатная температура, 22 час; (c) AcOH, 120°С, 24 час, 50% по двум стадиям, (d) NBS (N-бромсукцинимид), CH₃CN, от 0°C до комнатной температуры, 16 час, 95%; (e) NBS, AIBN, CCl₄, 80°С, 16 час; (f) AgNO₃, ацетон/H₂O=1/1, 60°С, 16 час, 68% по двум стадиям; (g) АlСl₃, 1-аминопиперидин, DCE, комнатная температура, 16 час, 97%; (h) PdCl₂(PPh₃)₂, CuI, 1-этинил-4-(трифторметил)бензол, 2-этаноламин, ТГФ/H₂O (1/1), 80°С, 12 час, 70%; (i) PBr₃, CH₂Cl₂, от 0°C до комнатной температуры, 2 час, (j) NaN₃, ДМФА, комнатная температура, 3 час; (k) PPh₃, ТГФ/H₂O (1/1), комнатная температура, 16 час, 66% по трем стадиям; (l) пирролидин-1-сульфонилхлорид, Et₃N, ДМФА, от 0°C до комнатной температуры, 16 час, 87%.

Литиевая соль этил 3-метил-2,4-диоксо-4-тиофен-2-ил-бутаноата (Соединение 2):

В атмосфере аргона к перемешиваемому на магнитной мешалке раствору бис-(триметилсилил)амида лития (22,2 мл; 22,20 ммоль, 1,0 М в ТГФ) в диэтиловом эфире (40 мл) при -78°С по каплям добавляют 1-(2-тиенил)-1-пропанон (2,81 г, 20,04 ммоль) в диэтиловом эфире (15 мл). Смесь перемешивают при той же температуре еще в течение 45 мин и по каплям добавляют диэтилоксалат (3,3 мл, 24,40 ммоль). Реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают еще в течение 16 час. Выпавший из реакционной смеси осадок отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром и сушат в вакууме, получая неочищенную литиевую соль 2 (4,21 г, 85%) в виде твердого вещества бледно-желтого цвета.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-метил-5-тиофен-2-ил-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (Соединение 3):

К раствору соли лития соединения 2 (3,21 г, 13,04 ммоль) в этаноле (35 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота в один прием добавляют гидрохлорид 2,4-дихлорфенилгидразина (3,01 г, 14,05 ммоль). Полученную смесь перемешивают при той же температуре в течение 22 час. После завершения реакции осадок отфильтровывают, промывают этанолом и диэтиловым эфиром и сушат в вакууме, получая твердое вещество светло-желтого цвета (3,31 г). Указанное сырое твердое вещество без дальнейшей очистки растворяют в уксусной кислоте (30 мл) и кипятят с обратным холодильником в течение 24 час. Реакционную смесь выливают в воду со льдом и экстрагируют этилацетатом (2×30 мл). Экстракты объединяют, промывают водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают.

Очистка флэш-хроматографией на силикагеле с использованием смеси н-гексан/этилацетат (9:1) дает эфир 3 (2,49 г, 50% по двум стадиям) в виде твердого вещества белого цвета: т.пл. 121-122°С; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,43 (д, J=2,1 Гц, 1H), 7,39-7,34 (м, 2H), 7,32 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,00 (дд, J=5,1, 3,6 Гц, 1H), 6,89 (д, J=5,1 Гц, 1H), 4,45 (кв., J=7,2 Гц, 2H), 2,44 (с, 3H), 1,42 (т, J=7,2 Гц, 3H); ¹³C ЯМР (CDCl₃) δ 162,7, 142,8, 137,8, 136,3, 136,0, 133,9, 131,0, 129,6, 128,8, 128,5, 127,7, 127,6, 127,2, 119,9, 60,9, 14,4, 9,9; ESMS m/z: 381,0 (M+1), 403,0 (M+23).

5-(5-Бромтиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-метил-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (Соединение 4):

При 0°C к перемешиваемому на магнитной мешалке раствору соединения 3 (2,21 г, 5,79 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) в атмосфере аргона добавляют небольшими порциями NBS (1,24 г, 6,96 ммоль). Полученную смесь затем нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 16 час. Реакцию прерывают, добавив насыщенный водный раствор тиосульфата натрия, и концентрируют при пониженном давлении для удаления ацетонитрила. Водный слой экстрагируют этилацетатом (2×40 мл). Органические слои объединяют, промывают водой, насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют, получая сырой остаток, который очищают флэш-хроматографией, элюируя смесью н-гексан/этилацетат (9:1), и получают 5-бромзамещенный сложный эфир 4 (2,53 г, 95%) в виде твердого вещества белого цвета: т.пл. 93-94°С; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,46 (д, J=1,8 Гц, 1H), 7,36-7,35 (м, 1H), 7,34 (д, J=1,8 Гц, 1H), 6,96 (д, J=3,9 Гц, 1H), 6,64 (д, J=3,9 Гц, 1H), 4,44 (кв., J=7,2 Гц, 2H), 2,42 (с, 3H), 1,42 (т, J=7,2 Гц, 3H); ¹³C ЯМР (CDCl₃) δ 161,7, 142,2, 136,1, 135,8, 134,9, 133,0, 130,3, 129,5, 129,3, 128,6, 127,2, 119,5, 114,2, 114,1, 60,2, 13,8, 9,3; ESMS m/z: 460,9 (M+1), 482,9 (M+23).

Этил 4-(бромметил)-5-(5-бромтиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-1H-пиразол-3-карбоксилат (Соединение 5):

К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору соединения 4 (2,20 г, 4,78 ммоль) в ССl₄ (22 мл) добавляют NBS (1,1 г, 6,21 ммоль) и AIBN (0,05 г, 0,33 ммоль). Полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 16 час. После охлаждения до комнатной температуры осадок отфильтровывают. Растворитель из фильтрата удаляют при пониженном давлении и получают дибромид 5 в виде жидкости бледно-желтого цвета: ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,48 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,38-7,32 (м, 2H), 7,01 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,99 (д, J=3,6 Гц, 1H), 4,77 (с, 2H), 4,48 (кв., J=7,2 Гц, 2H), 1,43 (т, J=7,2 Гц, 3H); ¹³С ЯМР (CDCl₃) δ 161,5, 142,2, 138,4, 137,1, 135,0, 133,8, 130,8, 130,5, 130,3, 130,2, 128,2, 128,0, 120,6, 116,4, 61,6, 22,4, 14,3; ESMS m/z: 538,8 (M+1)

Этил 5-(5-бромтиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-(гидроксиметил)-1H-пиразол-3-карбоксилат (Соединение 6):

К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору нитрата серебра (3,25 г, 19,12 ммоль) в 100 мл 50%-ного водного раствора ацетона при комнатной температуре добавляют суспензию сырого соединения 5 в 70%-ном водном растворе ацетона (50 мл). Смесь оставляют на ночь перемешиваться при 60°С. После охлаждения до комнатной температуры нерастворимый остаток отфильтровывают, а фильтрат концентрируют в вакууме для удаления ацетона. Смесь экстрагируют с помощью CH₂Cl₂, органические экстракты объединяют, промывают водой, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, получая сырой остаток, который очищают флэш-хроматографией, элюируя смесью н-гексан/этилацетат (2:1), и получают гидроксизамещенный сложный эфир 6 (1,55 г, 68% по двум стадиям) в виде твердого вещества белого цвета: ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,46 (дд, J=1,2, 1,2 Гц, 1H), 7,33 (д, J=1,2 Гц, 2H), 6,96 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,76 (д, J=3,6 Гц, 1H), 4,71 (д, J=7,2 Гц, 2H), 4,48 (кв., J=7,2 Гц, 2H), 3,76 (т, J=7,2 Гц, 1H), 1,42 (т, J=7,2 Гц, 3H); ¹³С ЯМР (CDCl₃) δ 163,3, 142,9, 137,3, 136,8, 135,0, 133,7, 130,7, 130,4, 130,3, 130,1, 128,4, 127,8, 124,2, 115,8, 61,9, 54,5, 14,2; ESMS m/z: 498,9 (M+23).

5-(5-Бромтиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-(гидроксиметил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 7):

К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору соединения 6 (4,40 г, 9,24 ммоль) и трихлорида алюминия (2,46 г, 18,48 ммоль) в дихлориде этана (88 мл) в атмосфере аргона при 0°C медленно добавляют 1-аминопиперидин (3,70 г, 36,96 ммоль). Полученную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение 16 час, затем прекращают реакцию, добавив ледяную воду. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×40 мл). Органические экстракты объединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая сырой остаток, который очищают флэш-хроматографией, элюируя смесью н-гексан/этилацетат (1:1), и получают соединение 7 (4,75 г, 97%) в виде твердого вещества белого цвета: ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,73 (с, 1H), 7,49 (д, J=2,4 Гц, 1H), 7,35 (дд, J=8,4, 2,4 Гц, 1H), 7,28 (д, J=8,4 Гц, 1H), 6,95 (д, J=4,0 Гц, 1H), 6,69 (д, J=4,0 Гц, 1H), 5,17 (т, J=7,2 Гц, 1H), 4,67 (д, J=7,2 Гц, 2H), 2,83 (уш.с, 4Н), 1,78-1,73 (м, 4Н), 1,42 (уш.с, 2Н);

¹³С ЯМР (CDCl₃) δ 160,0, 144,7, 136,9, 136,6, 135,0, 133,6, 130,7, 130,3, 130,2, 128,6, 128,1, 124,0, 115,8, 57,1, 54,7, 25,3, 23,2; ESMS m/z: 529,1 (M+1).

1-(2,4-Дихлорфенил)-5-(5-(2-(4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-4-(гидроксиметил)-N- (пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 8):

Раствор бромтиофена 7 (1,20 г, 2,26 ммоль), PdCl₂(PPh₃)₂ (0,16 г, 0,23 ммоль), CuI (0,06 г, 0,28 ммоль) и 2-этаноламина (0,5 М (водный раствор), 14 мл, 6,78 ммоль) в ТГФ (50 мл) перемешивают и дегазируют в атмосфере аргона в автоклаве в течение 10 мин, а затем в один прием добавляют 1-этинил-4-(трифторметил)бензол (0,58 г, 3,39 ммоль). Полученную смесь нагревают до 80°С на масляной бане в течение 12 час. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь выливают в воду (20 мл) и водный слой экстрагируют этилацетатом (2×40 мл). Органические экстракты объединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая сырой остаток, который очищают флэш-хроматографией, элюируя смесью н-гексан/этилацетат (1:1), и получают соединение 8 (0,98 г, 70%) в виде твердого вещества белого цвета: ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,75 (с, 1H), 7,57 (с, 1H), 7,50 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,36 (дд, J=8,4, 2,0 Гц, 1H), 7,32 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,18 (д, J=4,0 Гц, 1H), 6,84 (д, J=4,0 Гц, 1H), 5,21 (т, J=3,2 Гц, 1H), 4,73 (д, J=3,2 Гц, 2H), 2,83 (уш.с, 4H), 1,77-1,75 (м, 4H), 1,43 (уш.с, 2H); ¹³С ЯМР (CDCl₃) δ 160,0, 144,8, 136,8, 136,6, 135,1, 133,6, 132,6, 131,5, 130,7, 130,2 (кв., J_C-F=32,6 Гц), 130,3, 129,7, 129,1, 128,0, 126,1, 125,7, 125,3 (кв., J_C-F=3,6 Гц), 123,7 (кв., J_C-F=270,9 Гц), 93,6, 83,7, 57,1, 54,8, 25,3, 23,1; ESMS m/z: 619,1 (M+1).

4-(Аминометил)-1-(2,4-дихлорфенил)-5-(5-(2-(4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 9):

К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору соединения 8 (1,00 г, 1,62 ммоль) в CH₂Cl₂ (50 мл) при 0°С по каплям добавляют PBr₃ (0,87 г, 3,23 ммоль). Дают полученной смеси нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение 2 час, а затем прекращают реакцию, добавив ледяную воду. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×20 мл). Органические экстракты объединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая соответствующий бромид, который, в свою очередь, без очистки вводят в реакцию с NaN₃ (0,53 г, 8,08 ммоль) в ДМФА (10 мл), которую проводят при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь выливают в воду (10 мл) и водную фазу экстрагируют этилацетатом (2×20 мл). Органические экстракты объединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая соответствующий азид. Указанное азидное производное без очистки затем обрабатывают с помощью PPh₃ (0,51 г, 1,94 ммоль) в ТГФ/H₂O (1/1) (20 мл) при комнатной температуре в течение 16 час и после очистки с помощью хроматографии (CH₂Cl₂:MeOH=9:1) получают соединение 9 (0,66 г, 66% в три стадии) в виде твердого вещества бледно-желтого цвета: ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,85 (уш.с, 1H), 7,62-7,56 (м, 4H), 7,51 (д, J=1,8 Гц, 1H), 7,38-7,32 (м, 2H), 7,19 (д, J=3,9 Гц, 1H), 6,91 (д, J=3,9 Гц, 1H), 3,99 (с, 2H), 2,87-2,79 (м, 4H), 2,01 (с, 1H), 1,76 (квинтет, J=5,4 Гц, 4H), 1,49-1,38 (м, 2H); ESMS m/z: 618,0 (M+1).

1-(2,4-Дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((пирролидин-1-сульфонамидо)метил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 10):

К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору соединения 9 (1,15 г, 1,86 ммоль) и Et₃N (0,38 г, 3,72 ммоль) в ДМФА (10 мл) при 0°C добавляют пирролидин-1-сульфонилхлорид (0,47 г, 2,79 ммоль). Дают полученной смеси нагреться до комнатной температуры в течение 16 час, а затем прекращают реакцию, добавив воду. Водную фазу экстрагируют этилацетатом (2×20 мл), органические экстракты объединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая сырой остаток, который очищают флэш-хроматографией, элюируя смесью н-гексан/этилацетат (1:1), и получают требуемый продукт 10 (1,21 г, 87%) в виде твердого вещества белого цвета: т.пл. 163-164°С; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,71 (с, 1H), 7,61-7,56 (м, 4H), 7,53 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,40-7,33 (м, 2H), 7,23 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,22 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,50 (т, 6,8 Гц, 1H), 4,34 (д, J=6,8 Гц, 2H), 3,28-3,25 (м, 4H), 2,87-2,81 (м, 4H), 1,86 (квинтет, J=3,6 Гц, 4H), 1,78 (квинтет, J=5,6 Гц, 4H), 1,48-1,42 (м, 2H); ¹³С ЯМР (CDCl₃) δ 159,2, 144,3, 137,4, 136,7, 134,8, 133,3, 132,7, 131,3, 130,6, 130,2, 130,1, 130,0 (кв., J_C-F=33,0 Гц), 128,5, 127,9, 125,9, 125,6, 125,0 (кв., J_C-F=4,0 Гц), 123,5 (кв., J_C-F=270,5 Гц), 119,7, 93,4, 83,7, 56,9, 47,7, 37,2, 25,3, 25,0, 22,9; ESMS m/z: 751,0 (M+1).

(Z)-4-((2-Циано-3-циклопропилгуанидино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 11):

ESMS (M+1): 725,1.

(E)-4-((1-Амино-2-нитровиниламино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 12):

ESMS (M+1): 704,1.

(E)-1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((1-(метиламино)-2-нитровиниламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 13):

ESMS (M+1): 718,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-(гуанидинометил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 14):

ESMS (M+1): 660,2.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((3-метилгуанидино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 15):

ESMS (M+1): 674,2.

4-(Ацетамидометил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 16):

ESMS (M+1): 660,1.

Метил (1-(2,4-дихлорфенил)-3-(пиперидин-1-илкарбамоил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-4-ил)метилкарбамат (Соединение 17):

ESMS (M+1): 676,1.

Этил (1-(2,4-дихлорфенил)-3-(пиперидин-1-илкарбамоил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-4-ил)метилкарбамат (Соединение 18):

ESMS (M+1): 690,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((3-этилуреидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 19):

ESMS (M+1): 689,1.

4-((3-Циклопропилуреидо)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 20):

ESMS (M+1): 701,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((3-метилтиоуреидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 21):

ESMS (M+1): 691,1.

4-((3-Циклопропилтиоуреидо)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 22):

ESMS (M+1): 717,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((4,5-дигидро-1H-имидазол-2-иламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 23):

ESMS (M+1): 686,1.

(E)-4-((2-Циано-3-метилгуанидино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 24):

ESMS (M+1): 699,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-(метилсульфонамидометил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 25):

ESMS (M+1): 696,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((1-метилэтилсульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 26):

ESMS (M+1): 724,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((N,N-диметилсульфамоиламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 27):

ESMS (M+1): 725,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((N-метилсульфамоиламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 28):

ESMS (M+1): 711,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((N-изопропилсульфамоиламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 29):

ESMS (M+1): 739,1.

4-((N-трет-Бутилсульфамоиламино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 30):

ESMS (M+1): 753,1.

4-(Циклопентансульфонамидометил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 31):

ESMS (M+1): 750,1.

4-((1H-Имидазол-5-сульфонамидо)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 32):

ESMS (M+1): 748,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((4-этилпиперазин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1Н-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 33):

ESMS (M+1): 794,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((пиперидин-1-сульфонамидо)метил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 34):

ESMS (M+1): 765,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((морфолин-4-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 35):

ESMS (M+1): 767,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((3,5-диметилпиперидин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 36):

ESMS (M+1): 793,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((2,6-диметилморфолин-4-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 37):

ESMS (M+1): 795,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-({[(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)сульфонил]амино}метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-{[4-(трифторметил)фенил]этинил}тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 38):

ESMS (M+1): 815,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 39):

ESMS (M+1): 806,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((тиофен-2-сульфонамидо)метил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 40):

ESMS (M+1): 764,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((4-метилпиперазин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 41):

ESMS (M+1): 780,1.

4-((N-Циклопропилсульфамоиламино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 42):

ESMS (M+1): 737,1.

4-((N-Циклопентилсульфамоиламино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 43):

ESMS (M+1): 765,1.

4-((N-Циклогексилсульфамоиламино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 44):

ESMS (M+1): 779,1.

4-((N-Циклогептилсульфамоиламино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 45):

ESMS (M+1): 793,1.

4-((Азиридин-1-сульфонамидо)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 46):

ESMS (M+1): 723,1.

4-((Азетидин-1-сульфонамидо)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 47):

ESMS (M+1): 737,1.

4-((1,3-Оксазетидин-3-сульфонамидо)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 48):

ESMS (M+1): 739,1.

4-{[(7-Азабицикло[2.2.1]гепт-7-илсульфонил)амино]метил}-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-{[4-(трифторметил)фенил]этинил}тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 49):

ESMS (M+1): 777,1.

4-((2-Азабицикло[2.2.1]гептан-2-сульфонамидо)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 50):

ESMS (M+1): 737,1.

4-(Циклопропансульфонамидометил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 51):

ESMS (M+1): 722,1.

4-(Циклогексансульфонамидометил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 52):

ESMS (M+1): 764,1.

4-((1-Имидазол-5-сульфонамидо)метил)-5-(5-((4-хлорфенил)этинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 53):

ESMS (M+1): 716,1.

5-(5-((4-Хлорфенил)этинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((пирролидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 54):

ESMS (M+1): 719,1.

5-(5-((4-Хлорфенил)этинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((пиперидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 55):

ESMS (M+1): 733,1.

5-(5-((4-Хлорфенил)этинил)тиофен-2-ил)-4-((N-циклопентилсульфамоиламино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 56):

ESMS (M+1): 733,1.

5-(5-((4-Хлорфенил)этинил)тиофен-2-ил)-4-((N-циклопропилсульфамоиламино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 57):

ESMS (M+1): 705,0.

5-(5-((4-Хлорфенил)этинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-((2,6-диметилморфолин-4-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 58):

ESMS (M+1): 763,1.

5-(5-((4-Хлорфенил)этинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-((N-метилсульфамоиламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 59):

ESMS (M+1): 679,1.

4-((Азетидин-1-сульфонамидо)метил)-5-(5-((4-хлорфенил)этинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 60):

ESMS (M+1): 705,0.

4-((1,3-Оксазетидин-3-сульфонамидо)метил)-5-(5-((4-хлорфенил)этинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 61):

ESMS (M+1): 707,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-5-(5-(пент-1-инил)тиофен-2-ил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((пирролидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-

пиразол-3-карбоксамид (Соединение 62):

ESMS (M+1): 649,2.

1-(2,4-Дихлорфенил)-5-(5-(пент-1-инил)тиофен-2-ил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((пиперидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 63):

ESMS (M+1): 663,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((морфолин-4-сульфонамидо)метил)-5-(5-(пент-1-инил)тиофен-2-ил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 64):

ESMS (M+1): 665,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-({[(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)сульфонил]амино}метил)-5-[5-(пент-1-ин-1-ил)тиофен-2-ил]-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 65):

ESMS (M+1): 713,1.

4-(Циклопентансульфонамидометил)-1-(2,4-дихлорфенил)-5-(5-(пент-1-инил)тиофен-2-ил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 66):

ESMS (M+1): 648,2.

4-((1H-Имидазол-5-сульфонамидо)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-5-(5-(пент-1-инил)тиофен-2-ил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 67):

ESMS (M+1): 646,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((3-этилтиоуреидо)метил)-5-(5-(пент-1-инил)тиофен-2-ил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 68):

ESMS (M+1): 603,2.

Метил (1-(2,4-дихлорфенил)-5-(5-(пент-1-инил)тиофен-2-ил)-3- (пиперидин-1-илкарбамоил)-1H-пиразол-4-ил)метилкарбамат (Соединение 69):

ESMS (M+1): 574,1

4-((3-Циклопропилуреидо)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-5-(5-(пент-1-инил)тиофен-2-ил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 70):

ESMS (M+1): 599,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-5-(5-(пент-1-инил)тиофен-2-ил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-(пропионамидометил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 71):

ESMS (M+1): 572,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((N,N-диметилсульфамоиламино)метил)-5-(5-(пент-1-инил)тиофен-2-ил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 72):

ESMS (M+1): 623,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((N-метилсульфамоиламино)метил)-5-(5-(пент-1-инил)тиофен-2-ил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 73):

ESMS (M+1): 609,1.

5-(5-(Циклопентилэтинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((пирролидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 74):

ESMS (M+1): 675,1.

5-(5-(Циклопентилэтинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((пиперидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 75):

ESMS (M+1): 689,1.

5-(5-(Циклопентилэтинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-((морфолин-4-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 76):

ESMS (M+1): 691,1.

5-[5-(Циклопентилэтинил)тиофен-2-ил]-1-(2,4-дихлорфенил)-4-({[(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)сульфонил]амино}метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 77):

ESMS (M+1): 739,1.

4-(Циклопентансульфонамидометил)-5-(5-(циклопентилэтинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 78):

ESMS (M+1): 674,1.

4-((1H-Имидазол-5-сульфонамидо)метил)-5-(5-(циклопентилэтинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 79):

ESMS (M+1): 672,1.

5-(5-(Циклопентилэтинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-((3-этилтиоуреидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 80):

ESMS (M+1): 629,1.

Метил (5-(5-(циклопентилэтинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-3-(пиперидин-1-илкарбамоил)-1H-пиразол-4-ил)метилкарбамат (Соединение 81):

ESMS (M+1): 600,1.

5-(5-(Циклопентилэтинил)тиофен-2-ил)-4-((3-циклопропилуреидо)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 82):

ESMS (M+1): 625,1.

5-(5-(Циклопентилэтинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-(пропионамидометил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 83):

ESMS (M+1): 598,1.

5-(5-(Циклопентилэтинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-((N,N-диметилсульфамоиламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 84):

ESMS (M+1): 649,1.

5-(5-(Циклопентилэтинил)тиофен-2-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-((N-метилсульфамоиламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 85):

ESMS (M+1): 635,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((3-гидроксипирролидин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 143):

ESMS (M+1): 767,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-(((R)-3-гидроксипирролидин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 144):

ESMS (M+1): 767,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-(((S)-3-гидроксипирролидин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 145):

ESMS (M+1): 767,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((3-фтор-3-метилазетидин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 146):

ESMS (M+1): 772,9.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((3,3-дифторпирролидин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 147):

ESMS (M+1): 786,9.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-(((S)-3-фторпирролидин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 148):

ESMS (M+1): 769,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-(((R)-3-фторпирролидин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 149):

ESMS (M+1): 769,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-4-(((S)-2-(трифторметил)пирролидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 150):

ESMS (M+1): 819,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-4-(((R)-2-(трифторметил)пирролидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 151):

ESMS (M+1): 819,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-4-((3-(трифторметил)пирролидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 152):

ESMS (M+1): 819,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((4,4-дифторпиперидин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 153):

ESMS (M+1): 800,9.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((4,4-диметилпиперидин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 154):

ESMS (M+1): 793,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-4-(((R)-3-(трифторметил)пирролидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 155):

ESMS (M+1): 819,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-4-(((S)-3-(трифторметил)пирролидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-пиразол-3- карбоксамид (Соединение 156):

ESMS (M+1): 819,0.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((4-гидроксипиперидин-1-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 157):

ESMS (M+1): 781,0.

Пример 2: Синтез соединений 87-113

Общая методика синтеза поясняется непосредственно ниже с использованием соединения 87 в качестве конкретного примера.

4-(Бромметил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 86):

К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору соединения 8 (0,15 г, 0,24 ммоль) в CH₂Cl₂ (5 мл) при 0°С добавляют PBr₃ (0,13 г, 0,48 ммоль). Дают полученной смеси нагреться до комнатной температуры в течение 2 час, а затем прекращают реакцию, добавив ледяную воду. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×10 мл). Органические экстракты объединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая бромид 86 в виде твердого вещества бледно-желтого цвета. ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,58 (м, 4H), 7,53-7,52 (м, 1H), 7,38-7,37 (м, 2H), 7,23 (д, J=4,0 Гц, 1H), 7,17 (д, J=4,0 Гц, 1H), 4,92 (с, 2H), 2,85 (уш.с, 4H), 1,77-1,71 (м, 4H), 1,42 (уш.с, 2H); ESMS m/z: 681,1 (M+1).

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-[(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метил]-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-{[4-(трифторметил)фенил]этинил}тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 87):

К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору бромида 86 (0,16 г, 0,24 ммоль) в ДМФА (3 мл) при комнатной температуре в один прием добавляют 1,1-диоксид тиоморфолина (0,07 г, 0,48 ммоль). Полученную смесь нагревают до 60°C в течение 16 час, а затем прекращают реакцию, добавив воду. Водную фазу экстрагируют этилацетатом (2×10 мл). Органические экстракты объединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая сырой остаток, который подвергают очистке методом флэш-хроматографии на силикагеле, элюируя смесью н-гексан/этилацетат (1:1), и получают требуемый продукт 87 (0,14 г, 79% по двум стадиям) в виде твердого вещества белого цвета: ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,72 (с, 1H), 7,61 (м, 4H), 7,52 (д, J=1,8 Гц, 1H), 7,41 (д, J=1,8 Гц, 1H), 7,17 (д, J=3,9 Гц, 1H), 6,92 (д, J=3,9 Гц, 1H), 4,03 (с, 2H), 3,14-3,05 (м, 8H), 2,85-2,82 (м, 4H), 1,79-1,74 (м, 4H), 1,44-1,40 (м, 2H); ESMS m/z: 735,8 (M+1).

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((метиламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 88):

ESMS (M+1): 632,1.

4-((Циклопропиламино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 89):

ESMS (M+1): 658,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((изопропиламино)метил)-N-(пиперидин-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 90):

ESMS (M+1): 660,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((3-гидроксиазетидин-1-ил)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 91):

ESMS (M+1): 674,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((3-фторазетидин-1-ил)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 92):

ESMS (M+1): 676,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((оксетан-3-иламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 93):

ESMS (M+1): 674,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((3-метилоксетан-3-иламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 94):

ESMS (M+1): 688,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((метил(оксетан-3-ил)амино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 95):

ESMS (M+1): 688,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((оксетан-3-илметиламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 96):

ESMS (M+1): 688,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((проп-2-иниламино)метил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 97):

ESMS (M+1): 656,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((метил(проп-2-инил)амино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 98):

ESMS (M+1): 670,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-(((R)-2-гидроксипропиламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 99):

ESMS (M+1): 676,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-(((S)-3-гидроксипирролидин-1-ил)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 100):

ESMS (M+1): 688,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-(((S)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-ил)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 101):

ESMS (M+1): 702,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-(((R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-ил)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 102):

ESMS (M+1): 702,1.

4-(((R)-2-Цианопирролидин-1-ил)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 103):

ESMS (M+1): 697,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-[(1,1-дифтор-5-азаспиро[2.4]гепт-5-ил)метил]-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-{[4-(трифторметил)фенил]этинил}тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 104):

ESMS (M+1): 734,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((6,6-дифтор-3-азабицикло[3.1.0]гексан-3-ил)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 105):

ESMS (M+1): 720,2.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((3,3-дифторпирролидин-1-ил)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 106):

ESMS (M+1): 708,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-4-((3-(трифторметил)пирролидин-1-ил)метил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 107):

ESMS (M+1): 740,1.

4-((1-Цианоциклопропиламино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 108):

ESMS (M+1): 683,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-(пиперазин-1-илметил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 109):

ESMS (M+1): 687,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 110):

ESMS (M+1): 701,1.

4-((1H-1,2,4-Триазол-1-ил)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 111):

ESMS (M+1): 670,1.

4-(Азидометил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 112)

ESMS (M+1): 644,2.

4-(Цианометил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(5-((4-(трифторметил)фенил)этинил)тиофен-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 113)

ESMS (M+1): 628,1.

Пример 3: Синтез соединений 119-142

Соединения 119-142 получают в соответствии с общей методикой синтеза, которая поясняется ниже с использованием соединения 119 в качестве примера.

Реагенты и условия: (a) NBS (N-бромсукцинимид), AIBN, ССl₄, 80°С, 16 час, (b) AgNO₃, ацетон/H₂O=1/1, 60°С, 16 час, 66% по двум стадиям; (c) АlСl₃, 1-аминопиперидин, DCE, комнатная температура, 16 час, 93%; (d) PBr₃, CH₂Cl₂, комнатная температура, 2 час, (e) NaN₃, ДМФА, комнатная температура, 3 час, (f) PPh₃, ТГФ/H₂O=1/1, комнатная температура, 16 час, 75% по трем стадиям; (g) пирролидин-1-сульфонилхлорид, Et₃N, ДМФА, от 0°C до комнатной температуры, 16 час, 85%.

Промежуточный эфир 115 легко получают по методике трехстадийного синтеза, описанной в литературе, используя в качестве исходного соединения коммерчески доступное соединение 114 (J. Med. Chem., 1999, 42, 769-776).

Этил 5-(4-хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-(гидроксиметил)-1H-пиразол-3-карбоксилат (Соединение 116):

К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору соединения 115 (2,00 г, 4,88 ммоль) в CCl₄ (20 мл) добавляют NBS (1,13 г, 6,34 ммоль) и AIBN (0,06 г, 0,39 ммоль). Полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 16 часов. После охлаждения до комнатной температуры выпавший осадок отфильтровывают. Растворитель из фильтрата удаляют при пониженном давлении, получая неочищенный бромид в виде жидкости бледно-желтого цвета. К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору нитрата серебра (3,32 г, 19,52 ммоль) в 100 мл 50%-ного водного раствора ацетона при комнатной температуре добавляют суспензию полученного бромида в 70%-ном водном растворе ацетона. Смесь оставляют на ночь перемешиваться при 60°С. После охлаждения до комнатной температуры нерастворимый остаток отфильтровывают, а полученный фильтрат концентрируют в вакууме для удаления ацетона. Смесь экстрагируют с помощью CH₂Cl₂, органические слои объединяют, промывают водой, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, получая сырой остаток, который очищают методом флэш-хроматографии на силикагеле, элюируя смесью н-гексан/этилацетат (1:1), и получают сложный эфир 116 (1,37 г, 66% по двум стадиям) в виде твердого вещества белого цвета: ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,41 (д, J=1,8 Гц, 1H), 7,34-7,27 (м, 4H), 7,13-7,10 (м, 2Н), 4,63 (д, J=6,9 Гц, 2H), 4,60 (кв., J=6,9 Гц, 2H), 3,84 (т, J=7,2 Гц, 1H), 1,45 (т, J=6,9 Гц, 3H); ESMS m/z: 447,0 (M+1).

5-(4-Хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-(гидроксиметил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 117):

К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору соединения 116 (1,21 г, 2,84 ммоль) и трихлорида алюминия (1,52 г, 11,36 ммоль) в дихлорэтане (20 мл) медленно в атмосфере аргона при 0°C добавляют 1-аминопиперидин (1,14 г, 11,36 ммоль). Дают полученной смеси нагреться до комнатной температуры в течение 16 час и затем прекращают реакцию, добавив ледяную воду, и водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×20 мл). Органические экстракты объединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая сырой остаток, который очищают методом флэш-хроматографии на силикагеле, элюируя смесью н-гексан/этилацетат (1:1), и получают соединение 117 (1,27 г, 93%) в виде твердого вещества белого цвета: ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,78 (уш.с, 1H), 7,44 (д, J=2,4 Гц, 1H), 7,33-7,20 (м, 4H), 7,08-7,03 (м, 2H), 5,16 (т, J=6,9 Гц, 1H), 4,60 (д, J=6,9 Гц, 2H), 2,88-2,80 (м, 4H), 1,78 (квинтет, J=5,4 Гц, 4H), 1,50-1,40 (м, 2H); ESMS m/z: 479,0 (M+1).

4-(Аминометил)-5-(4-хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 118):

К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору соединения 117 (0,34 г, 0,72 ммоль) в CH₂Cl₂ (20 мл) при 0°С по каплям добавляют PBr₃ (0,39 г, 1,43 ммоль). Дают полученной смеси нагреться до комнатной температуры в течение 2 час, а затем прекращают реакцию, добавив воду. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×10 мл). Органические экстракты объединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая соответствующий бромид в виде твердого вещества бледно-желтого цвета. Без дальнейшей очистки полученное таким образом бромзамещенное соединение обрабатывают с помощью NaN₃ (0,23 г, 3,58 ммоль) в ДМФА (5 мл) при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь выливают в воду (10 мл) и водный слой экстрагируют этилацетатом (2×20 мл). Органические экстракты объединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая сырой азид, который без очистки в течение 16 час подвергают дальнейшей обработке с помощью PPh₃ (0,38 г, 1,43 ммоль) в смеси ТГФ/H₂O (1/1) (7 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь экстрагируют этилацетатом (2×20 мл). Органические экстракты объединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая сырой остаток, который очищают флэш-хроматографией на силикагеле, элюируя смесью CH₂Cl₂/MeOH (9:1), и получают соединение 118 (0,26 г, 75% за три стадии) в виде твердого вещества белого цвета: ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,84 (уш.с, 1H), 7,44 (д, J=1,8 Гц, 1H), 7,30 (д, J=8,1 Гц, 2H), 7,28-7,24 (м, 2H), 7,14 (д, J=8,1 Гц, 2H), 3,87 (с, 2H), 2,88-2,80 (м, 4H), 1,83 (уш.с, 1H), 1,83-1,71 (м, 4H), 1,48-1,38 (м, 2H); ESMS m/z: 478,0 (M+1).

5-(4-Хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((пирролидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 119):

К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору соединения 118 (0,26 г, 0,54 ммоль) и Et₃N (0,11 г, 1,08 ммоль) в ДМФА (3 мл) при 0°C по каплям добавляют пирролидин-1-сульфонилхлорид (0,14 г, 0,81 ммоль). В течение 16 час дают полученной смеси нагреться до комнатной температуры и затем прекращают реакцию, добавив воду. Водную фазу экстрагируют этилацетатом (2×10 мл), органические экстракты объединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая сырой остаток, который очищают флэш-хроматографией, элюируя смесью н-гексан/этилацетат (1:1), и получают требуемый продукт 119 (0,28 г, 85%) в виде твердого вещества белого цвета: ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,72 (с, 1H), 7,45 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,34-7,29 (м, 3Н), 7,24-7,19 (м, 3Н), 6,52 (т, J=6,8 Гц, 1H), 4,19 (д, J=6,8 Гц, 2H), 3,26-3,22 (м, 4H), 2,88-2,80 (м, 4H), 1,85 (квинтет, J=3,6 Гц, 4H), 1,78 (квинтет, J=5,6 Гц, 4H), 1,48-1,41 (м, 2H); ESMS m/z: 611,1 (M+1).

5-(4-Хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((пиперидин-1-сульфонамидо)метил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 120):

ESMS (M+1): 627,1.

5-(4-Хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-((морфолин-4-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 121):

ESMS (M+1): 629,1.

5-(4-Хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-({[(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)сульфонил]амино}метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 122):

ESMS (M+1): 677,1.

5-(4-Хлорфенил)-4-(циклопентансульфонамидометил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 123):

ESMS (M+1): 612,1.

4-((1H-Имидазол-5-сульфонамидо)метил)-5-(4-хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 124):

ESMS (M+1): 610,1.

5-(4-Хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-((3-этилтиоуреидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 125):

ESMS (M+1): 567,1.

Метил (5-(4-хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-3-(пиперидин-1-илкарбамоил)-1H-пиразол-4-ил)метилкарбамат (Соединение 126):

ESMS (M+1): 536,1.

5-(4-Хлорфенил)-4-((3-циклопропилуреидо)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 127):

ESMS (M+1): 561,1.

5-(4-Хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-(пропионамидометил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 128):

ESMS (M+1): 534,1.

5-(4-Хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-((N,N-диметилсульфамоиламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 129):

ESMS (M+1): 587,1.

5-(4-Хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-((N-метилсульфамоиламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 130):

ESMS (M+1): 573,1.

5-(4-Хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-((4,5-дигидро-1H-имидазол-2-иламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 131):

ESMS (M+1): 546,1.

5-(4-Хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-((2,6-диметилморфолин-4-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 132):

ESMS (M+1): 655,1.

5-(4-Хлорфенил)-4-((N-циклопентилсульфамоиламино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 133):

ESMS (M+1): 625,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((пирролидин-1-сульфонамидо)метил)-5-(4-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 134):

ESMS (M+1): 645,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-4-((пиперидин-1-сульфонамидо)метил)-5-(4-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 135):

ESMS (M+1): 659,2.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((морфолин-4-сульфонамидо)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(4-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 136):

ESMS (M+1): 661,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-({[(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)сульфонил]амино}метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-[4-(трифторметил)фенил]-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 137):

ESMS (M+1): 709,1.

4-(Циклопентансульфонамидометил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(4-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 138):

ESMS (M+1): 644,1.

4-((1H-Имидазол-5-сульфонамидо)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(4-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 139):

ESMS (M+1): 642,1.

1-(2,4-Дихлорфенил)-4-((4,5-дигидро-1H-имидазол-2-иламино)метил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(4-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 140):

ESMS (M+1): 580,1.

Метил (1-(2,4-дихлорфенил)-3-(пиперидин-1-илкарбамоил)-5-(4-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-4-ил)метилкарбамат (Соединение 141):

ESMS (M+1): 570,1.

4-((N-Циклопентилсульфамоиламино)метил)-1-(2,4-дихлорфенил)-N-(пиперидин-1-ил)-5-(4-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид (Соединение 142):

ESMS (M+1): 659,2.

Пример 4: Анализ связывания радиолиганда

Рецепторы CB1 и CB2 человека получают из клеточных линий НЕК293, устойчиво экспрессирующих рецепторы СВ1 и СВ2. Если коротко, клетки, экспрессирующие рецепторы CB1 или CB2, собирают и разрушают ультразвуком. Подвергнутые лизингу клетки центрифугируют в течение 30 мин с ускорением 43000×g при температуре 4°С. Полученные таблетки вновь суспендируют в буферном растворе (50 мМ Tris, 5 мМ MgCl₂, 2,5 мМ ЭДТК, рН 7,4, 10% сахарозы) и хранят при температуре -80°С. Концентрацию белка в очищенном мембранном препарате определяют по методу Брэдфорда, как описано в руководстве, предоставленном фирмой Bio-Rad Laboratories, Inc. (Hercules, CA).

Сродство к рецепторам СВ1 и СВ2 определяют в условиях in vitro с помощью анализа связывания радиолиганда, который проводят следующим образом. 0,2~8 мкг мембранных фракций, полученных, как описано выше, из клеточных линий, экспрессирующих CB1 или CB2, смешивают с буферным раствором (рН 7,4; 50 мМ Tris-HCl, 5 мМ MgCl₂, 1 мМ ЭДТК и 0,3% бычьего сывороточного альбумина), содержащим 0,75 нМ [³H]CP55940 (лиганд, который специфически связывается с рецепторами СВ1 и СВ2) и тестируемым соединением. В контрольном эксперименте вместо тестируемого соединения используют нерадиоактивный СР 55940 (1 мкМ). Смесь инкубируют в течение 1,5 час при 30°С на микропланшетах Multiscreen (Millipore, Billerica, MA), чтобы позволить тестируемому соединению или [³H]CP55940 связаться с рецептором. Реакцию связывания прекращают с помощью устройства для фильтрации, в котором мембранные фракции (содержащие рецепторы CB1 или CB2) удерживаются на фильтрах. Затем фильтры четыре раза промывают буферным промывочным раствором (50 мМ Tris, рН 7,4; 0,25% бычьего сывороточного альбумина), охлажденным льдом, чтобы удалить свободный [³H]CP55940. Радиоактивность мембранных фракций, оставшихся на фильтрах, измеряют с помощью Topcount (Perkin Elmer Inc.). Рассчитывают величины IC₅₀ (концентрация испытуемого соединения, необходимая для 50%-ного ингибирования связывания [³H]CP55940 с рецептором).

В данном анализе тестируют соединения 10-85, 87-113 и 119-157. Неожиданно было обнаружено, что все тестируемые соединения имеют величины IC₅₀ в диапазоне от 1 нМ до 10 мкМ для ингибирования связывания [³H]CP55940 с рецепторами CB1 и CB2, соответственно.

Пример 5: Анализ связывания DELFIA GTP

Активность тестируемого соединения при модуляции рецепторов СВ1 определяют по методике, описанной в следующем абзаце, с использованием набора реагентов для связывания DELFIA GTP, который поставляет фирма Perkin Elmer Inc. (Boston, MA). Анализ связывания DELFIA GTP представляет собой флуоресцентный анализ с временным разрешением, который основан на обмене GDP-GTP на субъединицах G-белка после активации связанного с G-белком рецептора. Следует отметить, что стимуляция рецептора СВ1 под действием СР55940 вызывает замещение GDP на GTP на α-субъединице G-белка, что приводит к образованию комплекса GTP-Gα, т.е. активированной формы G-белка. Для контролирования агонист-зависимой активации G-белка используют Eu-GTP, не подверженный гидролизу GTP, который содержит метку хелата европия. См. Peltonen et al., Eur. J. Pharmacol., 1998, 355, 275.

Клеточные мембраны, полученные из клеток НЕК293, экспрессирующих рецептор CB1 человека, суспендируют в буферном растворе для анализа (50 мМ HEPES, рН 7,4; 100 мМ NaCl, 100 мкг/мл сапонина, 5 мМ MgCl₂, 2 мкМ GDP; 0,5% бычьего сывороточного альбумина). Аликвоту мембранного препарата добавляют в каждую лунку планшета AcroPlate (Pall Life Sciences, Ann Arbor, MI) вместе с тестируемым соединением (различные концентрации в 0,1% ДМСО) и CP55940 (20 нМ в буферном растворе для анализа). Используемый для проведения анализа планшет инкубируют в темноте при температуре 30°С в течение 60 мин. Затем в каждую лунку добавляют Eu-GTP, и планшет инкубируют при температуре 30°С в темноте еще в течение 30 мин. Планшет промывают четыре раза промывочным раствором, который поставляется вместе с набором реагентов для анализа. Связывание Eu-GTP детектируют по сигналу флуоресценции, который определяют с помощью планшет-ридера Victor 2 для множественных меток. Значение ЕС₅₀ (т.е. 50% ингибирование стимулированного CP55940 связывания Eu-GTP) для каждого испытуемого соединения определяют из кривой зависимости от концентрации с использованием нелинейной регрессии (Prism, GraphPad, San Diego, CA).

В данном анализе тестируют соединения 10-85, 87-113 и 119-157. Неожиданно было обнаружено, что все тестируемые соединения имеют значения ЕС₅₀ в диапазоне от 1 нМ до 10 мкМ для ингибирования Eu-GTP связывания путем модулирования активации рецептора CB1, стимулированной действием CP55940.

Пример 6: Четвертной тест на ответную реакцию после стимуляции

Температуру тела и ответные реакции отдергивания хвоста определяют, соответственно, с помощью термометра для ректального измерения температуры (Natsume, Japan) и устройства для определения нечувствительности по отдергиванию хвоста RS232 (Columbus, USA) у самцов мышей C57BL/6. Через один час после перорального введения тестируемого соединения, растворенного в смеси ДМСО/Tween 80/H₂O (1/1/8 по объему), внутрибрюшинно вводят 1 мг/кг CP55940 в физиологическом растворе, содержащем 0,5% ДМСО. Температуру тела измеряют во временных точках 30 и 65 мин, и ответную реакцию отдергивания хвоста определяют в момент времени 35 мин после инъекции.

Проводят испытания для большого количества соединений. Неожиданно было обнаружено, что у мышей при пероральной дозе до 100 мг/кг соединения 10, 63 и 119 не обращают или лишь слегка обращают как индуцированную агонистом CB1 гипотермию, так и обезболивающую ответную реакцию. С другой стороны, указанные ответные реакции заметно обращаются римонабантом, типичным антагонистом центрального СВ1, уже при дозировке 2 мг/кг.

Пример 7: Лечение вызванного диетой ожирения у мышей с использованием тестируемых соединений

Мышам C57BL/6 в возрасте шесть недель дают корм с высоким содержанием жира (Экспериментальная диета D 12451, 45% жира, 20% белка и 35% углеводов) в течение более 12 недель перед тем, как начинают лечение с использованием тестируемых соединений. Соразмерно массе мышей распределяют по разным группам и через желудочный зонд один раз в день проводят кормление носителем (10% ДМСО/10% Tween 80/80% H₂O) или тестируемым соединением с определенной дозой (например, 10 и 20 мг/кг) в течение по меньшей мере двух недель. Общее количество корма, используемого для каждого варианта лечения, и массу тела определяют ежедневно.

Проводят испытания для большого количества соединений. Неожиданно было обнаружено, что длительное лечение вызванного диетой хронического ожирения у мышей с использованием соединения 10 в течение 21 дней приводит к относительному снижению массы на 26,4% (по сравнению с 29,1% для римонабанта) и 32,8% для групп 10 мг/кг и 20 мг/кг, соответственно.

Пример 8: Чувствительность к инсулину у db/db мышей

Проводят лечение самцов db/db мышей в возрасте шести недель тестируемым соединением (например, соединениями 10, 63 и 119) с определенной дозой (например, 10 или 20 мг/кг) в течение не менее двух недель. Общее количество корма, используемого для каждого варианта лечения, и массу тела определяют ежедневно. Мышей после проведения курса лечения не кормят в течение ночи, а затем вводят глюкозу (2 г/кг, перорально через зонд). Уровни глюкозы измеряют с помощью глюкометра по прошествии 0, 30, 60, 90 и 120 мин. В конце исследования берут образцы крови и мочи и образцы тканей (например, почки). По завершении лечения чувствительность к инсулину у мышей значительно улучшается.

Пример 9: Лечение остеопороза у мышей, индуцированного дефицитом эстрогена

Самок мышей в возрасте три месяца подвергают двусторонней овариэктомии или имитируют проведение операции. Через две недели после проведения операции мышам 5 дней в неделю в течение 2, 4 и 8 недель вводят антагонист CB1 (например, соединение 10, 63 и 119) или носитель. Минеральную плотность костной ткани и содержание костных минералов в бедренной кости, большеберцовой кости и L1-L5 поясничном отделе позвоночника определяют методом двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии. Микроструктуру трабекулярного вещества кости (т.е. объем губчатой кости, толщину, количество, расслоение, пористость и показатель объема костной ткани) в бедренной кости, большеберцовой кости и позвоночном столбе анализируют методом µCT-сканирования. Механическую прочность костей определяют на установке для испытания материалов. Результаты показывают как увеличение минеральной плотности костной ткани, так и улучшение ее микроструктуры.

Пример 10: Лечение остеоартрита у мышей

Самцов крыс Sprague-Dawley в возрасте четыре месяца анестезируют путем внутримышечного введения атропина (1 мг/кг) и внутрибрюшинного введения пентобарбитала. На левых коленях крыс проводят срединную парапателлярную артротомию и рассечение передней крестообразной связки (ACLT), чтобы вызвать остеоартрит колена. Крысам с остеоартритом в течение 8 недель дают антагонист CB1 (например, соединения 10, 63 и 119) или носитель. Оценку рентгенографии коленного сустава проводят с помощью маммографической системы. Тип нарушения походки для суставов крыс с остеоартритом анализируют с помощью системы Cat Walk. Морфологию сустава оценивают гистологически по системе количественных показателей Мэнкина. Результаты показывают уменьшение количества баллов по системе Мэнкина.

Пример 11: Лечение крыс с нефропатией и фиброзом почек

Чтобы вызвать диабет, самцам крыс Wistar в возрасте трех месяцев внутрибрюшинно вводят стрептозотоцин (50 мг/кг). Через две недели отбирают для исследования крыс с диабетом, уровень глюкозы в крови натощак у которых составляет 200-300 мг/мл. Крыс с диабетом помещают в системы метаболических клеток и в течение 4 недель вводят антагонист CB1 (например, соединения 10, 63 и 119), при этом собирают мочу крыс. Для оценки функции почек методом ELISA определяют содержание белка и креатинина в моче. Для оценки фиброза почек, почки рассекают, фиксируют, заливают твердым парафином и берут срезы для проведения гистологической оценки после окрашивания по методу Шиффа с использованием надиодной кислоты. Результаты показывают как снижение уровня альбумина в моче, так и уменьшение фиброза почек.

Другие варианты осуществления изобретения

Все признаки, раскрытые в данном описании, могут быть объединены в любом сочетании. Каждый признак, раскрытый в данном описании, может быть заменен альтернативным признаком, который служит той же самой, эквивалентной или аналогичной цели. Таким образом, если специально не указано иное, каждый раскрытый признак представляет собой лишь пример общей серии эквивалентных или сходных признаков.

Из приведенного выше описания специалист сможет легко установить существенные характеристики настоящего изобретения и, не отступая от сущности и объема настоящего изобретения, сможет внести различные изменения и модификации в настоящее изобретение с тем, чтобы приспособить его к различным применениям и условиям. Таким образом, другие варианты осуществления настоящего изобретения также входят в объем прилагаемой формулы изобретения.

Раскрываются производные соединения пиразола, которые охватываются формулой (I), в которой радикалы и группы определены в формуле изобретения и которые пригодны для лечения расстройств, опосредованных периферическим каннабиноидным рецептором 1. Также раскрываются фармацевтические композиции и способы, связанные с применением указанных соединений. 4 н. и 25 з.п. ф-лы, 11 пр.

1. Соединение формулы (I):

где
R₁ обозначает 6-членную ароматическую углеводородную группу, замещенную атомом галогена;
R₂ обозначает Н;
R₃ обозначает 6-членную насыщенную циклическую группу, содержащую атом азота;
R₄ обозначает Н;
R₅ обозначает C(S)NR_aR_b, C(=NH)NR_aR_b, S(O₂)R_a или S(O₂)NR_aR_b, где R_a обозначает Н, С₃-С₈ циклоалкил, имидазолил или диоксидотиоморфилинил; R_b обозначает Н или C₁-С₁₀ алкил; или R_a вместе с R_b и атомом азота, к которому они присоединены, образуют С₃-С₈ гетероциклоалкил, необязательно замещенный C₁-С₁₀ алкилом; а
X обозначает группу: , где R₇ обозначает атом галогена или трифторметил; a m принимает значение 1 или 2.

2. Соединение по п. 1, где R₁ обозначает фенил, замещенный атомом галогена.

3. Соединение по п. 3, где R₁ обозначает 2,4-дихлорфенил.

4. Соединение по п. 1, где R₃ обозначает пиперидинил.

5. Соединение по п. 1, в котором R₅ обозначает S(O₂)NR_aR_b.

6. Соединение по п. 5, где R_a вместе с R_b и атомом азота, к которому они присоединены, образуют С₃-С₈ гетероциклоалкил, необязательно замещенный C₁-С₁₀ алкилом.

7. Соединение по п. 1, где R₇ обозначает атом галогена; a m принимает значение 1.

8. Соединение по п. 7, где R₁ обозначает фенил, замещенный атомом галогена.

9. Соединение по п. 8, где R₁ обозначает 2,4-дихлорфенил.

10. Соединение по п. 7, где R₃ обозначает пиперидинил.

11. Соединение по п. 10, в котором R₅ обозначает S(O₂)NR_aR_b.

12. Соединение по п. 11, в котором R_a вместе с R_b и атомом азота, к которому они присоединены, образуют С₃-С₈ гетероциклоалкил, необязательно замещенный C₁-С₁₀ алкилом.

13. Соединение по п. 1, где R₇ обозначает трифторметил; a m равно 1.

14. Соединение по п. 7, где соединение представляет собой соединение 119

15. Соединение формулы (I):

где
R₁ обозначает 6-членную ароматическую углеводородную группу, замещенную атомом галогена;
R₂ обозначает Н;
R₃ обозначает 6-членную насыщенную циклическую группу, содержащую атом азота,
R₄ обозначает Н;
R₅ обозначает C(S)NR_aR_b, C(=NH)NR_aR_b, С(=N-CN)NR_aR_b, C(=N-NO2)NR_aR_b, S(O₂)R_a или S(O₂)NR_aR_b, где R_a обозначает H, C₃-C₈ циклоалкил, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидинил, диоксидотиоморфолинил, имидазолил или тиенил; R_b обозначает Н или C₁-С₁₀ алкил; или R_a вместе с R_b и атомом азота, к которому они присоединены, образуют С₃-С₈ гетероциклоалкил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, выбранными из группы, содержащей C₁-С₁₀ алкил, галоген, гидроксил и трифторметил; и
X обозначает группу: где R₆ обозначает C₁-С₁₀ алкил, С₃-С₈ циклоалкил или фенил, замещенный галогеном или трифторметилом

16. Соединение по п. 15, где R₁ обозначает фенил, замещенный атомом галогена.

17. Соединение по п. 16, где R₁ обозначает 2,4-дихлорфенил.

18. Соединение по п. 15, где R₃ обозначает пиперидинил.

19. Соединение по п. 15, в котором R₅ обозначает S(O₂)NR_aR_b.

20. Соединение по п. 15, в котором R_a вместе с R_b и атомом азота, к которому они присоединены, образуют С₃-С₈гетероциклоалкил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, выбранными из группы, содержащей C₁-C₁₀ алкил, галоген, гидроксил и трифторметил.

21. Соединение по п. 15, где R₆ обозначает C₁-С₁₀ алкил, С₃-С₈ циклоалкил или фенил, замещенный трифторметилом.

22. Способ лечения расстройства, опосредованного периферическим каннабиноидным рецептором 1, который включает назначение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества соединения формулы (I):

где
R₁ обозначает 6-членную ароматическую углеводородную группу, замещенную атомом галогена;
R₂ обозначает Н;
R₃ обозначает 6-членную насыщенную циклическую группу, содержащую атом азота;
R₄ обозначает Н;
R₅ обозначает C(S)NR_aR_b, C(=NH)NR_aR_b, С(=N-CN)NR_aR_b, C(=N-NO2)NR_aR_b, S(O₂)R_a или S(O₂)NR_aR_b, где R_a обозначает H, C₃-C₈ циклоалкил, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидинил, диоксидотиоморфолинил, имидазолил или тиенил; R_b обозначает Н или C₁-С₁₀ алкил; или R_a вместе с R_b и атомом азота, к которому они присоединены, образуют С₃-С₈ гетероциклоалкил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C₁-С₁₀-алкила, галогена, гидроксила и трифторметила; и
X обозначает группу: или где R₆ обозначает C₁-С₁₀ алкил, С₃-С₈ циклоалкил, фенил, замещенный атомом галогена или трифторметилом; R₇ обозначает атом галогена или трифторметил; a m принимает значение 1 или 2.

23. Способ по п. 22, где расстройством, опосредованным периферическим каннабиноидным рецептором 1, является ожирение, избыточный вес, сахарный диабет 2 типа, неалкогольная жировая болезнь печени, гиперлипидемия, дислипидемия, атеросклероз, инфаркт миокарда, инсульт, артериальная гипертензия, бронходилатация, геморрагический шок, фиброз печени, цирроз печени, неврологическое расстройство, аддиктивное расстройство, нарушение обмена веществ, глаукома, остеопороз, остеоартрит, нефропатия, фиброз почек или хроническое воспалительное заболевание.

24. Способ по п. 23, где расстройством, опосредованным периферическим каннабиноидным рецептором 1, является ожирение, сахарный диабет 2 типа, нефропатия, фиброз почек, остеопороз, остеоартрит или неалкогольная жировая болезнь печени.

25. Способ по п. 22, где X обозначает группу .

26. Способ по п. 22, где X обозначает группу .

27. Способ по п. 22, где соединением является одно из приведенных ниже соединений 10, 63 и 119:

28. Фармацевтическая композиция для лечения расстройства, опосредованного периферическим каннабиноидным рецептором 1, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и соединение формулы (I):

где
R₁ обозначает 6-членную ароматическую углеводородную группу, замещенную атомом галогена;
R₂ обозначает Н;
R₃ обозначает 6-членную насыщенную циклическую группу, содержащую атом азота;
R₄ обозначает Н;
R₅ обозначает C(S)NR_aR_b, C(=NH)NR_aR_b, С(=N-CN)NR_aR_b, C(=N-NO2)NR_aR_b, S(O₂)R_a или S(O₂)NR_aR_b, где R_a обозначает H, C₃-C₈ циклоалкил, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидинил, диоксидотиоморфолинил, имидазолил или тиенил; R_b обозначает Н или C₁-С₁₀ алкил; или R_a вместе с R_b и атомом азота, к которому они присоединены, образуют С₃-С₈ гетероциклоалкил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C₁-С₁₀-алкила, галогена, гидроксила и трифторметила; и
X обозначает группу: или где R₆ обозначает C₁-С₁₀ алкил, С₃-С₈ циклоалкил, фенил, замещенный атомом галогена или трифторметилом; R₇ обозначает атом галогена или трифторметил; a m принимает значение 1 или 2.

29. Соединение по п. 15, где соединение представляет собой соединение 10 или соединение 63
или