НАТРИЕВАЯ СОЛЬ ДИЭТИЛОВОГО ЭФИРА 4-ОКСО-1,4-ДИГИДРОПИРАЗОЛО[5,1-C]-1,2,4-ТРИАЗИН-3,8-ДИКАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ, МОНОГИДРАТ Российский патент 2017 года по МПК C07D487/04 A61K31/53 

Описание патента на изобретение RU2612300C1

1. Область техники, к которой относится изобретение.

Изобретение относится к области биологически активных соединений - натриевой соли диэтилового эфира 4-оксо-1,4-дигидропиразоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-3,8-дикарбоновой кислоты, моногидрату, обладающей антигликирующей активностью, предназначенной для лечения и профилактики последствий сахарного диабета.

Изобретение может быть использовано в лечебных учреждениях и научно-исследовательских лабораториях.

2. Уровень техники

Неферментативное взаимодействие белков с глюкозой (реакция Майяра) приводит к образованию химических соединений - конечных продуктов гликирования (КПГ) (NA Ansari, Z Rasheed, 2010). Именно внутри- и внеклеточное накопление КПГ считают важным фактором патогенеза таких заболеваний, как атеросклероз, сердечная недостаточность, воспаление, ревматоидный артрит [1] и остеоартрит, нейродегенеративные заболевания [2], включая болезни Альцгеймера и Паркинсона.

Особенно интенсивно данный процесс протекает при сахарном диабете и имеет немаловажное значение в развитии его осложнений [3-5] и скорость образования КПГ зависит от уровня и длительности экспозиции глюкозы [6]. Эффекты КПГ могут быть классифицированы как рецептор-независимые и -зависимые, могут действовать внутриклеточно или циркулировать и действуют на рецепторы клеточной поверхности, таких как рецепторы для КПГ (РКПГ). Поскольку гликирование происходит в течение длительного периода времени, КПГ влияют на долгоживущие белки, например, главными мишенями являются структурные компоненты соединительной ткани и, в частности, коллаген типа IV, но и другие долгоживущие белки могут также подвергаться гликированию, в том числе миелин, тубулин, активатор плазминогена 1, фибриноген. Накопление КПГ во внеклеточном матриксе приводит к образованию меж- и внутримолекулярных поперечных сшивок и повышению ригидности кровеносных сосудов. Кроме того, под действием КПГ изменяется состав внеклеточного матрикса, с повышенной экспрессией фибронектина, коллагена типа III, IV, VI и ламинина, возможно, опосредовано через активацию ключевых профибротических цитокинов, таких как трансформирующий фактор роста β и фактор роста соединительной ткани. Рецептор-зависимые эффекты КПГ опосредованы их взаимодействием со специфическими рецепторами, что приводит к активации вторичных передатчиков, таких как протеинкиназа С. Ключевая мишень РКПГ - ядерный фактор NF-кВ, который перемещается в ядро и приводит к повышению транскрипции таких белков, как молекулы межклеточной адгезии-1, Е-селектин, эндотелин-1, сосудистый эндотелиальный фактор роста, провоспалительные цитокины. Все вышеперечисленное лежит в основе патогенеза таких последствий сахарного диабета, как диабетические атеросклероз, нефро-, нейро-, ретино-, кардио-, ангиопатии, которые являются причиной высокого риска инвалидизации и смертности среди пациентов с сахарным диабетом.

На сегодняшний день нет препаратов, специфически угнетающих образование КПГ, применяемых в клинической практике. Интерес к данной проблематике и поиску лекарственных средств, способных тормозить реакцию Майяра, снижать образование конечных продуктов гликирования и предотвращать развитие осложнений сахарного диабета, неуклонно растет. Первым и наиболее изученным веществом, ингибирующим гликирование белков, является аминогуанидин 2 (АГ), выбранным в качестве прототипа. Он предотвращает формирование флюоресцирующих КПГ и глюкозопроизводных поперечносшитых молекул коллагена. Механизм антигликирующего действия аминогуанидина связывают с его способностью захватывать реактивные дикарбонильные интермедиаты. Однако клинические испытания данного препарата были остановлены в связи с его недостаточной эффективностью и наличием побочных эффектов [7, 8].

В ряду азоло-1,2,4-триазинов известны соединения, обладающие противовирусным действием. Противовирусный препарат Триазавирин - 2-метилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-он, тригидрат 3 [9] зарегистрирован в реестре лекарственных средств РФ как препарат для лечения гриппозной инфекции (№ гос. регистрации ЛП-002604).

3. Сущность изобретения.

Сущность изобретения составляет натриевая соль диэтилового эфира 4-оксо-1,4-дигидропиразоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-3,8-дикарбоновой кислоты, моногидрат, обладающая антигликирующей активностью, формулы (1).

4. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.

4.1. Заявляемое соединение - натриевая соль диэтилового эфира 4-оксо-1,4-дигидропиразоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-3,8-дикарбоновой кислоты, моногидрат 1, получено по следующей схеме: диазотирование этилового эфира 5-аминопиразоло-4-карбоновой кислоты 4 с образованием диазопиразола 4, азосочетание с диэтилмалонатом с последующей циклизацией промежуточно образующегося гидразона в присутствии карбоната натрия.

Пример 1. Синтез натриевой соли диэтилового эфира 4-оксо-1,4-дигидропиразоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-3,8-дикарбоновой кислоты, моногидрата 1:

1.08 (0.007 моль) г этилового эфира 5-аминопиразоло-4-карбоновой кислоты 3 растворяют в 1.4 мл соляной кислоты и 0.7 мл воды. Раствор охлаждают до -10°C и диазотируют раствором 0.5 г NaNO2 в 0.7 мл воды. Полученный раствор соли диазония приливают к смеси 7 мл 2М раствора Na2CO3 и 0.78 мл (0.007 моль) диэтилмалоната, pH должен быть 8-10. Реакционную массу выдерживают 1 час при температуре от -10 до 0°C и 1 час при комнатной температуре. Осадок отфильтровывают, сушат и перекристаллизовывают сначала из 50% уксусной кислоты, затем из 50% этанола. Выход 1.0 г (45%).

Заявляемое соединение - натриевая соль диэтилового эфира 4-оксо-1,4-дигидропиразоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-3,8-дикарбоновой кислоты, моногидрат 1, имеет следующие физико-химические характеристики: Тпл>250°C. 1Н ЯМР спектр (DMSO-d6, м.д., КССВ, Гц): 1.31-1.36 (6Н, м, 2СН3) 4.23-4.31 (4Н, м, 2СН2), 8.09 (1Н, с, СН). 13C ЯМР спектр (DMSO-d6, δ, м.д.): 14.28 (CH3), 14.38 (CH3), 59.35 (CH2), 59.80 (CH2), 99.99 (C=C), 128.86 (C-C=O), 146.13 (C-H), 148.31 (C=O), 150.93 (C-N), 162.19 (O-С=O), 164.93 (O-С=O). Найдено, %: C - 40.97; H - 4.05; N - 17.24; C11H11N4NaO5*H2O; вычислено, %: С - 41.26; H - 4.09; N - 17.50.

Физико-химические характеристики соединения 1 полностью соответствуют приписываемой структуре.

4.2. Пример 2. Определение антигликирующей активности соединения 1 в системе in vitro.

Реакцию гликирования воспроизводили по методу [10]. Конечный объем реакционной смеси составлял 1.5 мл. Реакционная смесь содержала растворы бычьего сывороточного альбумина (1 мг/мл) и глюкозы (500 mM) в фосфатном буфере (pH 7.4). Для предупреждения бактериального роста в буферный раствор вносили азид натрия в конечной концентрации 0.02%. Все вещества растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО). В экспериментальные образцы добавляли 50 мкл раствора изучаемого соединения 1 в различных концентрациях, в контрольные образцы добавляли растворитель в аналогичном объеме. Все экспериментальные образцы инкубировали в течение 24 часов при 60°C. По истечении срока инкубации, проводили определение специфической флуоресценции гликированного бычьего сывороточного альбумина (БСА) на спектрофлуориметре F-7000 (Hitachi, Япония) при длине волны возбуждения 370 нм и испускания 440 нм. В качестве вещества сравнения использовали аминогуанидин. Были изучены концентрационные зависимости антигликирующей активности и рассчитаны показатели концентраций IC50, вызывающих снижение флуоресценции гликированного бычьего сывороточного альбумина на 50%.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни, табличного редактора Microsoft Excel 2007 и программы GraphPad Prism 5.0.

В результате было установлено, что соединение 1 проявило высокую антигликирующую активность, превышающую активность вещества сравнения (Таблица 1). В связи с этим на следующем этапе была изучена зависимость антигликирующего эффекта соединения 1 от концентрации (Таблица 2). Полученные результаты позволили рассчитать показатели концентрации веществ, вызывающие снижение флуоресценции гликированного БСА на 50% (IC50). Показатель IC50 для соединения 1 составил 53.96 μМ, а для аминогуанидина - 765.00 μМ.

Пример 3. Определение LD50 при изучении острой токсичности на лабораторных животных.

Изучение острой токсичности заявляемого соединения 1 и вещества сравнения аминогуанидина проводили согласно Руководству по проведению доклинических исследований лекарственных средств [11]. Острую суточную токсичность определяли на белых нелинейных мышах-самках массой 21-24 г при внутрибрюшинном введении. Величину токсикологического показателя - LD50 рассчитывали по методу Миллера и Тейтнера [12]. Расчет показателей эффективной концентрации IC50 и LD50 проводили методом регрессионного анализа. В качестве показателя широты терапевтического действия использовали условный терапевтический индекс (УТИ), который рассчитывали как отношение величины LD50 к IC50.

При изучении острой токсичности заявляемого соединения 1 было установлено, что показатель LD50 для данного вещества составил 518.4 мг/кг (Таблица 3). На основании полученных результатов был рассчитан показатель УТИ, по величине которого соединение 1 превосходит аминогуанидин в 4.27 раза.

Таким образом, заявляемое соединение - натриевая соль диэтилового эфира 4-оксо-1,4-дигидропиразоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-3,8-дикарбоновой кислоты, моногидрат - превосходит по антигликирующей активности и условному терапевтическому индексу вещество сравнения (прототип).

Список литературы

[1] Syngle, A. et al. Advanced glycation end-products inhibition improves endothelial dysfunction in rheumatoid arthritis / A. Syngle, K. Vohhra, N. Garg, L. Kaur, P. Chand // International Journal of Rheumatic Diseases. - 2012. - Vol. 15. - P. 45-55.

[2] Li, J., et al. Advanced glycation end products and neurodegenerative diseases: Mechanisms and perspective / J. Li, D. Liu, L. Sun, Y. Lu, Z. Zhang // Journal of the Neurological Sciences. - 2012. - Vol. 317. - P. 1-5.

[3] Ansari, NA. Non-enzymatic glycation of proteins: from diabetes to cancer. / Ansari NA, Rasheed Z. // Biomed Khim. - 2010. - Vol. 56 (2). - P. 168-178.

[4] Goh, S. - Y., Cooper, M.E. The Role of Advanced Glycation End Products in Progression and Complications of Diabetes / S. - Y. Goh, M.E. Cooper // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2008. - Vol. 93(4). - P. 1143-1152.

[5] Ramasamy, R. et al. Receptor for AGE (RAGE): signaling mechanisms in the pathogenesis of diabetes and its complications. R. Ramasamy, S.F. Yan, A.M. Schmidt. Ann N Y Acad Sci. - 2011.- Vol. 1243. - P. 88-102.

[6] Балаболкин, М.И. Роль гликирования белков, окислительного стресса в патогенезе сосудистых осложнений при сахарном диабете / М.И. Балаболкин // Сахарный диабет. - 2002. - №4. - С. 8-16.

[7] Freedman, B.I. et al. Design and baseline characteristics for the aminoguanidine clinical trial in overt type 2 diabetic nephropathy (ACTION II) / B.I. Freedman, J. - P. Wuerth, K. Cartwright, R.P. Bain, S. Dippe, K. Hershon, A.D. Mooradian, B.S. Spinowitz // Control. Clin. Trials - 1999. - Vol. 20(5). - P. 493-510.

[8] Bolton, W.K. et al. Randomized trial of an inhibitor of formation of advanced glycation end products in diabetic nephropathy / W.K. Bolton, D.C. Cattran, M.E. Williams, S.G. Adler, G.B. Appel, K. Cartwright, P.G. Foiles, B.I. Freedman, P. Raskin, R.E. Ratner, B.S. Spinowitz, F.C. Whittier, J. - P. Wuerth // Am J Nephrol - 2004. - Vol. 24. - P. 32-40.

[9] О.Н. Чупахин, В.Л. Русинов, В.Н. Чарушин, Е.Н. Уломский, А.Ю. Петров, О.И. Киселев, Патент РФ 2294936 от 10.03.2007.

[10] Jedsadayanmata, A. In Vitro Antiglycation Activity of Arbutin / A. Jedsadayanmata // Naresuan University Journal - 2005. - Vol. 13 (2). - P. 35-41.

[11] Миронов, A.H. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая, Гриф и К, Москва, 2012, 944 с.

[12] Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта, Медгиз, Ленинград, 1963, 146 с.

Похожие патенты RU2612300C1

название год авторы номер документа
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ АНТИГЛИКИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ В ТВЕРДОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ В ВИДЕ КАПСУЛ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ 2019
  • Косолапов Вадим Анатольевич
  • Котовская Светлана Константиновна
  • Петров Владимир Иванович
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Сапожникова Ирина Михайловна
  • Смирнова Людмила Андреевна
  • Спасов Александр Алексеевич
  • Степанова Элеонора Федоровна
  • Шевченко Александр Михайлович
RU2738804C1
НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 3-НИТРО-4-ОКСО-1,4-ДИГИДРОПИРАЗОЛО[5,1-с]-1,2,4-ТРИАЗИН-8-КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ, ДИГИДРАТ 2016
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Чупахин Олег Николаевич
  • Чарушин Валерий Николаевич
  • Сапожникова Ирина Михайловна
  • Близник Анастасия Михайловна
  • Спасов Александр Алексеевич
  • Петров Владимир Иванович
  • Кузнецова Валентина Андреевна
  • Ковалева Анастасия Игоревна
  • Васильев Павел Михайлович
  • Ворфоломеева Виктория Викторовна
RU2641107C1
2-(5-НИТРОНИЛФУРАН-2-ИЛ)-5-МЕТИЛ-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[1,5-А]ПИРИМИДИН-7(4Н)-ОН И ЕГО СОЛИ 2018
  • Чупахин Олег Николаевич
  • Чарушин Валерий Николаевич
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Саватеев Константин Валерьевич
  • Уломский Евгений Нарциссович
  • Федотов Виктор Владимирович
  • Петров Владимир Иванович
  • Спасов Александр Алексеевич
  • Бабкова Валентина Андреевна
  • Бабков Денис Александрович
RU2716715C2
ПРИМЕНЕНИЕ НАТРИЕВОЙ СОЛИ ДИЭТИЛОВОГО ЭФИРА 4-ОКСО-1,4-ДИГИДРОПИРАЗОЛО[5,1-С]-1,2,4-ТРИАЗИН-3,8-ДИКАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ, МОНОГИДРАТА В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ПОЗДНИХ ОСЛОЖНЕНИЙ САХАРНОГО ДИАБЕТА 2019
  • Бабкова Валентина Андреевна
  • Говорова Юлия Александровна
  • Гурова Наталия Алексеевна
  • Котовская Светлана Константиновна
  • Литвинов Роман Александрович
  • Науменко Людмила Владимировна
  • Петров Владимир Иванович
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Сапожникова Ирина Михайловна
  • Смирнов Алексей Владимирович
  • Спасов Александр Алексеевич
  • Шмидт Максим Вячеславович
RU2765117C2
ПРИМЕНЕНИЕ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ ГИДРАЗОНОВ В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВ, ОБЛАДАЮЩИХ АНТИГЛИКИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ 2016
  • Климочкин Юрий Николаевич
  • Беленькая Раиса Семеновна
  • Леонова Марина Валентиновна
  • Спасов Александр Алексеевич
  • Петров Владимир Иванович
  • Васильев Павел Михайлович
  • Кузнецова Валентина Андреевна
  • Ковалева Анастасия Игоревна
RU2658819C2
3-ГУАНИДИНОАЗОЛО[1,2,4,5]ТЕТРАЗИНЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ АНТИГЛИКИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ 2017
  • Ишметова Рашида Иршотовна
  • Игнатенко Нина Константиновна
  • Русинов Геннадий Леонидович
  • Чарушин Валерий Николаевич
  • Спасов Александр Алексеевич
  • Петров Владимир Иванович
  • Сысоева Валентина Андреевна
RU2668971C1
Применение сульфасалазина в качестве ингибитора образования конечных продуктов гликирования 2017
  • Штырлин Юрий Григорьевич
  • Спасов Александр Алексеевич
  • Балакин Константин Валерьевич
  • Кузнецова Валентина Андреевна
  • Петров Владимир Иванович
  • Стрельник Алексей Дмитриевич
RU2680844C1
БИС[1,2,4]ТРИАЗОЛО[4,3-b:3',4'-f][1,2,4,5]ТЕТРАЗИНЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ АНТИГЛИКИРУЮЩЕЙ, АНТИГЛИКОКСИДАЦИОННОЙ И АНТИАГРЕГАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ 2020
  • Чарушин Валерий Николаевич
  • Коротина Анна Владимировна
  • Толщина Светлана Геннадьевна
  • Русинов Геннадий Леонидович
  • Литвинов Роман Александрович
  • Бабкова Валентина Андреевна
  • Сиротенко Виктор Сергеевич
  • Бабков Денис Александрович
  • Спасов Александр Алексеевич
RU2755897C1
Ингибиторы образования конечных продуктов гликирования на основе азопроизводных фенилсульфокислот 2016
  • Спасов Александр Алексеевич
  • Штырлин Юрий Григорьевич
  • Балакин Константин Валерьевич
  • Кузнецова Валентина Андреевна
  • Петров Владимир Иванович
  • Стрельник Алексей Дмитриевич
RU2634594C1
Применение азопроизводных фенилсульфокислот в качестве ингибиторов образования конечных продуктов гликирования 2016
  • Спасов Александр Алексеевич
  • Штырлин Юрий Григорьевич
  • Балакин Константин Валерьевич
  • Зиганшин Айрат Усманович
  • Кузнецова Валентина Андреевна
  • Петров Владимир Иванович
  • Стрельник Алексей Дмитриевич
RU2628605C1

Реферат патента 2017 года НАТРИЕВАЯ СОЛЬ ДИЭТИЛОВОГО ЭФИРА 4-ОКСО-1,4-ДИГИДРОПИРАЗОЛО[5,1-C]-1,2,4-ТРИАЗИН-3,8-ДИКАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ, МОНОГИДРАТ

Изобретение относится к натриевой соли диэтилового эфира 4-оксо-1,4-дигидропиразоло-[5,1-с]-1,2,4-триазин-3,8-дикарбоновой кислоты моногидрату, обладающему антигликирующей активностью

Технический результат: получено новое соединение, обладающее антигликирующей активностью, которое может быть полезно для лечения и профилактики последствий сахарного диабета. 3 табл., 3 пр.

Формула изобретения RU 2 612 300 C1

Натриевая соль диэтилового эфира 4-оксо-1,4-дигидропиразоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-3,8-дикарбоновой кислоты, моногидрат, проявляющая антигликирующие свойства

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2017 года RU2612300C1

В
Л.Русинов и др
Кипятильник для воды 1921
  • Богач Б.И.
SU5A1
Прибор для нагревания перетягиваемых бандажей подвижного состава 1917
  • Колоницкий Е.А.
SU15A1
Y
Yamada et al
Печь для непрерывного получения сернистого натрия 1921
  • Настюков А.М.
  • Настюков К.И.
SU1A1
НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-МЕТИЛТИО-6-НИТРО-1,2-4-ТРИАЗОЛО[5,1-C]-1,2,4-ТРИАЗИН-7(4H)-ОНА, ДИГИДРАТ, ОБЛАДАЮЩАЯ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ 2005
  • Чупахин Олег Николаевич
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Уломский Евгений Нарциссович
  • Чарушин Валерий Николаевич
  • Петров Александр Юрьевич
  • Киселев Олег Иванович
RU2294936C1

RU 2 612 300 C1

Авторы

Русинов Владимир Леонидович

Чупахин Олег Николаевич

Чарушин Валерий Николаевич

Сапожникова Ирина Михайловна

Близник Анастасия Михайловна

Спасов Александр Алексеевич

Петров Владимир Иванович

Кузнецова Валентина Андреевна

Соловьева Ольга Александровна

Мацевич Анастасия Игоревна

Даты

2017-03-06Публикация

2015-11-02Подача