Протеинкиназы составляют одно из крупнейших семейств ферментов человека и регулируют множество различных процессов передачи сигнала посредством присоединения фосфатных групп к белкам; в частности, тирозинкиназы фосфорилируют белки на спиртовой группировке остатков тирозина. Семейство тирозинкиназ включает членов, регулирующих рост, миграцию и дифференциацию клеток. Аномальная активность киназ вовлечена в разнообразные заболевания человека, включая раки, аутоиммунные и воспалительные заболевания. Поскольку протеинкиназы находятся среди ключевых регуляторов клеточной передачи сигнала, они обеспечивают средства модулирования клеточной функции низкомолекулярными ингибиторами киназной активности и, следовательно, создают хорошие мишени для разработки лекарственных средств. В дополнение к лечению болезненных процессов, опосредованных киназами, селективные и эффективные ингибиторы киназной активности также полезны для исследования процессов клеточной передачи сигнала и идентификации других клеточных мишеней, представляющих терапевтический интерес.
Тирозинкиназа селезенки SYK (от англ. "Spleen Tyrosine Kinase") представляет собой нерецепторную тирозинкиназу, незаменимую для активации В-клеток посредством передачи сигнала рецепторами В-клеток (BCR; от англ. В-cell receptor). SYK активируется при связывании с фосфорилированным рецептором BCR и, таким образом, инициирует ранние события передачи сигнала, следующие за активацией BCR. Мыши с дефицитом SYK проявляют раннее блокирование развития В-клеток. Следовательно, ингибирование ферментативной активности SYK в клетках предложено в качестве терапии аутоиммунного заболевания посредством его действий на продуцирование аутоантител.
В дополнение к роли SYK при передаче сигнала BCR и активации В-клеток, она также играет роль в дегрануляции мастоцитов и активации эозинофилов, опосредованной FcεRl. Таким образом, SYK вовлечена в аллергические расстройства, включающие астму. SYK связывается с фосфорилированной гамма-цепью FcγRl посредством ее SH2-доменов и является незаменимой для передачи сигнала вниз. Мастоциты с дефицитом SYK демонстрируют дефектную дегрануляцию, секрецию арахидоновой кислоты и цитокинов. Это также показано для фармакологических агентов, ингибирующих активности SYK в мастоцитах. Обработка антисмысловыми олигонуклеотидами SYK ингибирует индуцированную антигеном инфильтрацию эозинофилов и нейтрофилов в модели астмы на животных. Эозинофилы с дефицитом SYK также проявляют нарушенную активацию в ответ на стимуляцию FcεR. Таким образом, низкомолекулярные ингибиторы SYK полезны для лечения воспалительных заболеваний, индуцированных аллергией, включающих астму.
В свете того, что рассмотрены различные состояния, при которых приносит пользу лечение, в которое вовлечено модулирование биохимического пути SYK, сразу становится очевидным, что новые соединения, модулирующие биохимический путь SYK, и способы применения этих соединений должны обеспечить существенные терапевтические преимущества для широкого ряда пациентов. В данном изобретении предложены новые соединения, применяемые для терапевтического лечения аутоиммунных и воспалительных заболеваний за счет направленности на биохимический путь SYK или за счет ингибирования киназы SYK.
В изобретении предложено соединение формулы I
где:
А представляет собой циклоалкил или гетероциклоалкил;
каждый X независимо представляет собой амино, C(=O)NHR, C(=O)R, C(=O)OR, OR, NHC(=O)R, CH2NHR, низший алкил, низший гидроксиалкил или низший гидроксиалкиламино;
каждый R независимо представляет собой Н или R';
каждый R' независимо представляет собой низший алкил, гетероциклоалкил, фенил, гетероарил, гетероарил-низший алкил или бициклический гетероарил, необязательно замещенный одним или более Rʺ;
каждый Rʺ независимо представляет собой гидрокси, низший алкиламидо, карбокси, оксо, низший алкокси, низший алкиламино или низший диалкиламино;
m равно 0, 1 или 2;
В представляет собой фенил, либо моноциклический или бициклический гетероарил;
каждый Y независимо представляет собой атом галогена, низший алкил, низший алкокси, низший галогеналкил, низший гидроксиалкил, гетероарил, низший алкилсульфонил, циклоалкил, гетероарил или гетероциклоалкил; и
n равно 0, 1 или 2;
или его фармацевтически приемлемая соль.
В изобретении предложен способ лечения воспалительного или аутоиммунного состояния, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.
В изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I, смешанное по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, эксципиентом или разбавителем.
Определения
Выражение объекта в единственном числе, как используют в данном описании, относится к одному или более этих объектов; например, соединение относится к одному или более соединений или по меньшей мере к одному соединению. Как таковые, термины в единственном числе, "один или более" и "по меньшей мере один" можно использовать в данном описании взаимозаменяемо.
Выражение "как определено в данном описании выше" относится к самому широкому определению для каждой группы, предложенной в Кратком изложении сущности изобретения или в самом широком пункте формулы изобретения. Во всех других воплощениях, приведенных ниже, заместители, которые могут присутствовать в каждом воплощении, и которые не являются явно определенными, сохраняют самое широкое определение, приведенное в Кратком изложении сущности изобретения.
Как используют в данном описании, либо в переходной фразе, либо в содержании формулы изобретения, термины "содержат (содержит)" и "содержащий" следует интерпретировать в неограничивающем значении. То есть, эти термины следует интерпретировать как синонимы выражений "имеющий по меньшей мере" или "включающий по меньшей мере". При использовании в контексте способа термин "содержащий" означает, что способ включает по меньшей мере перечисленные стадии, но может включать дополнительные стадии. При использовании в контексте соединения или композиции термин "содержащий" означает, что соединение или композиция включает по меньшей мере перечисленные признаки или компоненты, но может также включать дополнительные признаки или компоненты.
Как используют в данном описании, если конкретно не указано иное, слово "или" используют во "включительном" смысле "и/или", а не в "исключительном" смысле "либо/либо".
Термин "независимо" используют в данном описании для указания того, что переменную применяют в каждом случае независимо от наличия или отсутствия переменной, имеющей такое же или другое определение, в пределах одного или того же соединения. Таким образом, в соединении, в котором R" встречается дважды, и его определяют как "независимо атом углерода или азота", оба радикала Rʺ могут представлять собой атом углерода, оба Rʺ могут представлять собой атом азота или один Rʺ может представлять собой атом углерода, а другой может представлять собой атом азота.
Когда какая-либо переменная встречается более чем один раз в какой-либо группировке или формуле, изображающей и описывающей соединения, использованные или заявленные в настоящем изобретении, ее определение при каждой встречаемости не зависит от ее определения при каждой другой встречаемости. Комбинации заместителей и/или переменных также допустимы только в том случае, если результатом таких комбинаций является стабильное соединение.
Каждый символ "*" в конце связи или "------", протянутый через связь, относится к точке присоединения функциональной группы или другой химической группировки к остальной части молекулы, частью которой является эта группа или группировка. Так, например:
Связь, втянутая в кольцевую систему (в противоположность соединенной с вершинной точкой), указывает на то, что эта связь может быть присоединена к любому из подходящих кольцевых атомов.
Термин "необязательный" или "необязательно", как используют в данном описании, означает, что описанное впоследствии событие или обстоятельство может произойти, но не обязательно, и что описание включает случаи, где это событие или обстоятельство происходит, и случаи, в которых оно не происходит. Например, "необязательно замещенный" означает, что необязательно замещенная группировка может включать атом водорода или заместитель.
Выражение "необязательная связь" означает, что связь может присутствовать или отсутствовать, и что описание включает простые, двойные или тройные связи. Если заместитель обозначен как "связь" или "отсутствует", в данном случае атомы, связанные с заместителями, соединены непосредственно.
Термин "примерно" используют в данном описании для обозначения приблизительно, в области, неточно или около. Когда термин "примерно" используют в сочетании с числовым интервалом, он модифицирует этот интервал путем расширения его границ выше и ниже указанных числовых значений. Как правило, термин "примерно" используют в данном описании для модифицирования числового значения выше и ниже указанного значения вариансой, составляющей 20%.
Некоторые соединения могут проявлять таутомерию. Таутомерные соединения могут существовать в виде двух или более взаимно превращаемых соединений. Прототропные таутомеры приводят в результате к миграции ковалентно связанного атома водорода между двумя атомами. Таутомеры, как правило, существуют в равновесии, и попытки выделения индивидуальных таутомеров обычно образуют смесь, химические и физические свойства которой соответствуют смеси соединений. Положение равновесия зависит от химических свойств в пределах молекулы. Например, во многих алифатических альдегидах и кетонах, таких как ацетальдегид, преобладает кетоформа, тогда как в фенолах преобладает енольная форма. Распространенные прототропные таутомеры включают кето/енольные (-С(=O)-СН- ↔ -С(-ОН)=СН-), амид/имидокислотные (-C(=O)-NH- ↔ -C(-OH)=N-) и амидиновые (-C(=NR)-NH- ↔ -C(-NHR)=N-) таутомеры. Два последних таутомера, в частности, распространены в гетероарильных и гетероциклических кольцах, и настоящее изобретение включает все таутомерные формы соединений.
Технические и научные термины, используемые в данном описании, имеют значение, обычно понимаемое специалистами в области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение, если не указано иное. В данном изобретении сделана ссылка на различные методологии и материалы, известные специалистам в данной области техники. Стандартные справочные работы, в которых изложены общие принципы фармакологии, включают книгу Goodman and Gilman's, The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th Ed., McGraw Hill Companies Inc., New York (2001). Любые подходящие материалы и/или способы, известные специалистам в данной области техники, можно использовать при выполнении данного изобретения. Тем не менее, раскрыты предпочтительные материалы и способы. Материалы, реагенты и тому подобное, на которые сделана ссылка в последующем описании и в примерах, могут быть получены из коммерческих источников, если не отмечено иное.
Определения, описанные в настоящем изобретении, могут быть приложены с образованием химически релевантных комбинаций, таких как "гетероалкиларил", "галогеноалкилгетероарил", "арилалкилгетероциклил", "алкилкарбонил", "алкоксиалкил" и тому подобное. Когда термин "алкил" используют как суффикс, следующий за другим термином, как в "фенилалкиле" или "гидроксиалкиле", это следует относить к алкильной группе, как определено выше, замещенной заместителями в количестве от одного до двух, выбранных из другой конкретно названной группы. Так, например, "фенилалкил" относится к алкильной группе, имеющей от одного до двух фенильных заместителей, и, таким образом, включает бензил, фенилэтил и дифенил. "Алкиламиноалкил" представляет собой алкильную группу, имеющую от одного до двух заместителей алкиламино. "Гидроксиалкил" включает 2-гидроксиэтил, 2-гидроксипропил, 1-(гидроксиметил)-2-метилпропил, 2-гидроксибутил, 2,3-дигидроксибутил, 2-(гидроксиметил), 3-гидроксипропил и т.д. Соответственно, как используют в данном описании, термин "гидроксиалкил" используют для определения подгруппы гетероалкильных групп, определенных ниже. Термин-(ар)алкил относится либо к незамещенной алкильной группе, либо к аралкильной группе. Термин (гетеро)арил или (гет)арил относится либо к арильной, либо к гетероарильной группе.
Термин "спироциклоалкил", как используют в данном описании, означает спироциклическую циклоалкильную группу, такую как, например, спиро[3.3]гептан. Термин спирогетероциклоалкил, как используют в данном описании, означает спироциклический гетероциклоалкил, такой как, например, 2,6-диазаспиро[3.3]гептан.
Термин "ацил", как используют в данном описании, обозначает группу - C(=O)R, где R представляет собой атом водорода или низший алкил, как определено в данном описании. Термин "алкилкарбонил", как используют в данном описании, обозначает группу формулы C(=O)R, где R представляет собой алкил, как определено в данном описании. Термин C1-6 ацил относится к группе -C(=O)R, содержащей 6 атомов углерода. Термин "арилкарбонил", как используют в данном описании, обозначает группу формулы C(=O)R, где R представляет собой арильную группу; термин "бензоил", как используют в данном описании, обозначает "арилкарбонильную" группу, где R представляет собой фенил.
Термин "сложный эфир", как используют в данном описании, обозначает группу формулы -C(=O)OR, где R представляет собой низший алкил, как определено в данном описании.
Термин "алкил", как используют в данном описании, обозначает неразветвленный или разветвленный, насыщенный, одновалентный углеводородный остаток, содержащий от 1 до 10 атомов углерода. Термин "низший алкил" обозначает прямоцепочечный или разветвленный углеводородный остаток, содержащий от 1 до 6 атомов углерода. "C1-10 алкил", как используют в данном описании, относится к алкилу, состоящему из атомов углерода в количестве от 1 до 10. Примеры алкильных групп включают, но не ограничены ими, следующие группы: низшие алкильные группы, включающие метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, или пентил, изопентил, неопентил, гексил, гептил и октил.
При использовании термина "алкил" в качестве суффикса после другого термина, как в термине "фенилалкил" или "гидроксиалкил", подразумевают, что он относится к алкильной группе, как определено выше, замещенной заместителями в количестве от одного до двух, выбранными из других конкретно названных групп. Так, например, "фенилалкил" обозначает радикал R'Rʺ-, где R' представляет собой фенильный радикал, a Rʺ представляет собой алкиленовый радикал, как определено в данном описании, понимая, что точка присоединения фенилалкильной группировки находится на алкиленовом радикале. Примеры арилалкильных радикалов включают, но не ограничены ими, бензил, фенилэтил, 3-фенилпропил. Термины "арилалкил" или "аралкил" интерпретируют подобным образом за исключением случаев, когда R' представляет собой арильный радикал. Термины "(гет)арилалкил" или "(гет)аралкил" интерпретируют подобным образом за исключением случаев, когда R' необязательно представляет собой арильный или гетероарильный радикал.
Термины "галогеналкил" или "галоген-низший алкил" или "низший галогеналкил" относится к прямоцепочечному или разветвленному углеводородному остатку, содержащему от 1 до 6 атомов углерода, где один или более атомов углерода замещено одним или более атомов галогена.
Термин "алкилен" или "алкиленил", как используют в данном описании, означает двухвалентный насыщенный нормальный углеводородный радикал из атомов углерода в количестве от 1 до 10 (например, (СН2)n) или разветвленный насыщенный двухвалентный углеводородный радикал из атомов углерода в количестве от 2 до 10 (например, -СНМе- или -СН2СН(i-Pr)СН2-), если не указано иное. За исключением случая метилена, открытые валентности алкиленовой группы не присоединены к одному и тому же атому. Примеры алкиленовых радикалов включают, но не ограничены ими, метилен, пропилен, 2-метил-пропилен, 1,1-д и метил-этилен, бутилен, 2-этилбутилен.
Термин "алкокси", как используют в данном описании, означает -О-алкильную группу, где алкил является таким, как определено выше, такую как метокси, этокси, н-пропилокси, изопропилокси, н-бутилокси, изобутилокси, трет-бутилокси, пентилокси, гексилокси, включая их изомеры. "Низший алкокси", как используют в данном описании, означает алкоксигруппу с "низшей алкильной" группой, как определено выше. "С1-10алкокси", как используют в данном описании, относится к -О-алкилу, где алкил представляет собой С1-10.
Термин “РСу3” относится к фосфину, трехзамещенному тремя циклическими группировками.
Термины "галогеналкокси" или "галоген-низший алкокси" или "низший галогеналкокси" относится к низшей алкокси группе, где один или более атомов углерода замещено одним или более атомов галогена.
Термин "гидроксиалкил", как используют в данном описании, означает алкильный радикал, как определено в данном описании, где от одного до трех атомов водорода на различных атомах углерода замещено гидроксильными группами.
Термины "алкилсульфонил" и "арилсульфонил", как используют в данном описании, относятся к группе формулы -S(=O)2R, где R представляет собой алкил или арил соответственно, а алкил и арил являются такими, как определено в данном описании. Термин "гетероалкилсульфонил", как используют в данном описании, относительно данного описания означает группу формулы -S(=O)2R, где R представляет собой "гетероалкил", как определено в данном описании.
Термины "алкилсульфониламино" и "арилсульфониламино", как используют в данном описании, относится к группе формулы -NR'S(=O)2R, где R представляет собой алкил или арил соответственно, R' представляет собой атом водорода или С1-3 алкил, а алкил и арил являются такими, как определено в данном описании.
Термин "циклоалкил", как используют в данном описании, относится к насыщенному карбоциклическому кольцу, содержащему от 3 до 8 атомов углерода, то есть к циклопропилу, циклобутилу, циклопентилу, циклогексилу, циклогептилу или циклооктилу. "С3-7 циклоалкил", как используют в данном описании, относится к циклоалкилу, состоящему из атомов углерода в количестве от 3 до 7 в карбоциклическом кольце.
Термин "карбоксиалкил", как используют в данном описании, относится к алкильной группировке, где один атом водорода замещен карбоксилом, с пониманием того, что точка присоединения гетероалкильного радикала проходит через атом углерода. Термин "карбокси" или "карбоксил" относится к группировке -CO2H.
Термин "гетероарил" или "гетероароматический", как используют в данном описании, означает моноциклический или бициклический радикал из кольцевых атомов в количестве от 5 до 12, имеющий по меньшей мере одно ароматическое или частично ненасыщенное кольцо, содержащее от четырех до восьми атомов на кольцо, включающих один или более гетероатомов N, О или S, где остальные кольцевые атомы представляют собой атомы углерода, с пониманием того, что точка присоединения гетероарильного радикала находится на ароматическом или частично ненасыщенном кольце. Как хорошо известно специалистам в данной области техники, гетероарильные кольца обладают в меньшей степени ароматическим характером, чем их полностью углеродные аналоги. Таким образом, для целей изобретения необходимо, чтобы гетероарильная группа имела лишь некоторую степень ароматического характера. Примеры гетероарильных группировок включают моноциклические ароматические гетероциклы, имеющие от 5 до 6 кольцевых атомов и от 1 до 3 гетероатомов, включающие, но не ограниченные ими, пиридинил, пиримидинил, пиразинил, оксазинил, пирролил, пиразолил, имидазолил, оксазолил, 4,5-дигидро-оксазолил, 5,6-дигидро-4H-[1,3]оксазолил, изоксазол, тиазол, изотиазол, триазолин, тиадиазол и оксадиоксолин, которые могут быть необязательно замещены одним или более, предпочтительно одним или двумя заместителями, выбранными из гидрокси, циано, алкила, алкокси, тио, низшего галогеналкокси, алкилтио, атома галогена, низшего галогеналкила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, атома галогена, амино, алкиламино, диалкиламино, аминоалкила, алкиламиноалкила и диалкиламиноалкила, нитро, алкоксикарбонила и карбамоила, алкилкарбамоила, диалкилкарбамоила, арилкарбамоила, алкилкарбониламино и арилкарбониламино. Примеры бициклических группировок включают, но не ограничены ими, хинолинил, изохинолинил, бензофурил, бензотиофенил, бензоксазол, бензизоксазол, бензотиазол, нафтиридинил, 5,6,7,8-тетрагидро-[1,6]нафтиридинил и бензизотиазол. Бициклические группировки могут быть необязательно замещены на любом кольце, тем не менее, точка присоединения находится на кольце, содержащем гетероатом.
Термин "гетероциклил", "гетероциклоалкил" или "гетероцикл", как используют в данном описании, означает одновалентный насыщенный циклический радикал, состоящий из двух или более колец, предпочтительно от одного до двух колец, включая спироциклические кольцевые системы, содержащих от трех до восьми атомов на кольцо (выбранных из N, О или S(O)0-2), и который может быть необязательно независимо замещен заместителями в количестве от одного или более, предпочтительно от одного до двух, выбранными из гидрокси, оксо, циано, низшего алкила, низшего алкокси, низшего галогеналкокси, алкилтио, атома галогена, низшего галогеналкила, гидроксиалкила, нитро, алкоксикарбонила, амино, алкиламино, алкилсульфонила, арилсульфонила, алкиламиносульфонила, ариламиносульфонила, алкилсульфониламино, арилсульфониламино, алкиламинокарбонила, ариламинокарбонила, алкилкарбониламино, арилкарбониламино, а также его ионные формы, если не указано иное. Примеры гетероциклических радикалов включают, но не ограничены ими, морфолинил, пиперазинил, пиперидинил, азетидинил, пирролидинил, гексагидроазепинил, оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, оксазолидинил, тиазолидинил, изоксазолидинил, тетрагидропиранил, тиоморфолинил, хинуклидинил и имидазолинил, а также их ионные формы. Примеры могут быть также бициклическими, такими как, например, 3,8-диаза-бицикло[3.2.1]октан, 2,5-диаза-бицикло[2.2.2]октан или октагидро-пиразино[2,1-с][1,4]оксазин.
Ингибиторы SYK
Подразумевают, что формула I, представленная в данном описании:
включает формулы с приведенными ниже резонансными расположениями в пиридазиновом кольце:
В изобретении предложено соединение формулы I
где:
А представляет собой циклоалкил или гетероциклоалкил;
каждый X независимо представляет собой амино, C(=O)NHR, C(=O)R, C(=O)OR, OR, NHO(=O)R, CH2NHR, низший алкил, низший гидроксиалкил или низший гидроксиалкиламино;
каждый R независимо представляет собой Н или R';
каждый R' независимо представляет собой низший алкил, гетероциклоалкил, фенил, гетероарил, гетероарил низший алкил или бициклический гетероарил, необязательно замещенный одним или более Rʺ;
каждый Rʺ независимо представляет собой гидрокси, низший алкиламидо, карбокси, оксо, низший алкокси, низший алкиламино или низший диалкиламино;
m равно 0, 1 или 2;
В представляет собой фенил, либо моноциклический или бициклический гетероарил;
каждый Y независимо представляет собой атом галогена, низший алкил, низший алкокси, низший галогеналкил, низший гидроксиалкил, гетероарил, низший алкилсульфонил, циклоалкил, гетероарил или гетероциклоалкил; и
n равно 0, 1 или 2;
или его фармацевтически приемлемая соль.
В изобретении предложено соединение формулы I, где В представляет собой пиридил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой циклогексил или тетрагидропиранил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой циклогексил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой тетрагидропиранил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой циклогексил или тетрагидропиранил, а В представляет собой пиридил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой циклогексил, а В представляет собой пиридил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой тетрагидропиранил, а В представляет собой пиридил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где m равно 1.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой циклогексил, В представляет собой пиридил, и m равно 1.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой тетрагидропиранил, В представляет собой пиридил, и m равно 1.
В изобретении предложено соединение формулы I, где X представляет собой амино.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой циклогексил, В представляет собой пиридил, m равно 1, и X представляет собой амино.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой тетрагидропиранил, В представляет собой пиридил, m равно 1, и X представляет собой амино.
В изобретении предложено соединение формулы I, где n равно 1.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой циклогексил, В представляет собой пиридил, m равно 1, X представляет собой амино, и n равно 1.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой тетрагидропиранил, В представляет собой пиридил, m равно 1, X представляет собой амино, и n равно 1.
В изобретении предложено соединение формулы I, где каждый Y независимо представляет собой атом галогена, низший алкил, низший алкокси, низший гидроксиалкил, гетероарил, низший алкилсульфонил, циклоалкил или гетероарил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где Y представляет собой низший алкил, циклоалкил, гетероарил или низший алкилсульфонил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где Y представляет собой низший алкил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой циклогексил, В представляет собой пиридил, m равно 1, X представляет собой амино, n равно 1, и Y представляет собой низший алкил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой тетрагидропиранил, В представляет собой пиридил, m равно 1, X представляет собой амино, n равно 1, и Y представляет собой низший алкил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где n равно 2.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой циклогексил, В представляет собой пиридил, m равно 1, X представляет собой амино, и n равно 2.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой тетрагидропиранил, В представляет собой пиридил, m равно 1, X представляет собой амино, и n равно 2.
В изобретении предложено соединение формулы I, где один Y представляет собой низший алкил, а другой представляет собой атом галогена или низший алкил. В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой циклогексил, В представляет собой пиридил, m равно 1, X представляет собой амино, n равно 2, один Y представляет собой низший алкил, а другой представляет собой атом галогена или низший алкил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой тетрагидропиранил, В представляет собой пиридил, m равно 1, X представляет собой амино, n равно 2, один Y представляет собой низший алкил, а другой представляет собой атом галогена или низший алкил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где В представляет собой пирроло[2,3-b]пиридинил или пиразолил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где В представляет собой пирроло[2,3-b]пиридинил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где В представляет собой пиразолил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой циклогексил, В представляет собой пирроло[2,3-b]пиридинил, m равно 1, X представляет собой амино, n равно 1, и Y представляет собой низший алкил.
В изобретении предложено соединение формулы I, где А представляет собой циклогексил, В представляет собой пиразолил, m равно 1, X представляет собой амино, n равно 1, и Y представляет собой низший алкил.
В изобретении предложено соединение, выбранное из группы, состоящей из приведенных ниже соединений:
6-(цис-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-(цис-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1S,2R)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-[1,2,3]триазол-1-ил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-(цис-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-метансульфонил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-пара-толуиламино-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-4-(5,6-диметил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-циклопропил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-фтор-6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1S,2R)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5,6-диметил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-хлор-6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5,6-диметокси-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида 2,2,2-трифторацетат;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-(циклогексиламино)-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-бензо[d]имидазол-4-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
4-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-5-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-4-(6-изопропил-5-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
4-(6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4Р)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид; и
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид.
В изобретении предложен способ лечения воспалительного или аутоиммунного состояния, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.
В изобретении предложен указанный выше способ, дополнительно включающий введение дополнительного терапевтического средства, выбранного из химиотерапевтического или антипролиферативного средства, противовоспалительного средства, иммуномодулирующего или иммуносупрессивного средства, нейротрофического фактора, средства для лечения сердечно-сосудистого заболевания, средства для лечения диабета или средства для лечения иммунодефицитных расстройств.
В изобретении предложен способ лечения воспалительного состояния, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.
В изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.
В изобретении предложен способ лечения астмы, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.
В изобретении предложен способ лечения иммунного расстройства, включающего следующие расстройства: волчанку, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, псориаз, диабет типа I, осложнения после трансплантации органа, ксенотрансплантацию, диабет, рак, астму, атопический дерматит, аутоиммунные расстройства щитовидной железы, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, болезнь Альцгеймера и лейкоз, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.
В изобретении предложен способ лечения воспалительного состояния, включающий совместное введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества противовоспалительного соединения в комбинации с соединением формулы I.
В изобретении предложен способ лечения иммунного расстройства, включающий совместное введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества иммуносупрессивного соединения в комбинации с соединением формулы I.
В изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I, смешанная по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, эксципиентом или разбавителем.
В изобретении предложена указанная выше фармацевтическая композиция, дополнительно содержащая дополнительное терапевтическое средство, выбранное из химиотерапевтического или антипролиферативного средства, противовоспалительного средства, иммуномодулирующего или иммуносупрессивного средства, нейротрофического фактора, средства для лечения сердечно-сосудистого заболевания, средства для лечения диабета или средства для лечения иммунодефицитных расстройств.
В изобретении предложено применение соединения формулы I для получения лекарственного средства, полезного для лечения расстройств, связанных с Syk.
В изобретении предложено применение соединения формулы I для получения лекарственного средства, полезного для лечения ревматоидного артрита.
Соединение, способ или композиция раскрыты в данном изобретении.
Примеры репрезентативных соединений, включенных в настоящее изобретение и находящихся в пределах объема настоящего изобретения, представлены в следующей таблице. Эти следующие ниже примеры и примеры получения промежуточных соединений предложены, чтобы обеспечить более ясное понимание и выполнение изобретения на практике специалистами в данной области техники. Их не следует рассматривать как ограничивающие объем изобретения, но исключительно как иллюстративные и репрезентативные примеры.
Как правило, номенклатура, использованная в данном изобретении, основана на компьютерной системе AUTONOMTM v. 4.0, институт Бельштейна, или Struct = Name, приложение CambridgeSoft®, для создания систематической номенклатуры ИЮПАК. Если имеется расхождение между изображенной структурой и названием, принято, что изображенной структуре присваивают большее значение. Кроме того, если стереохимия структуры или части структуры не указана, например, полужирными или пунктирными линиями, эту структуру или часть структуры следует интерпретировать как включающую все ее стереоизомеры.
В таблице I изображены примеры соединений триазолпиридина согласно общей формуле I.
Синтез
Общая схема
Соединения общей формулы I
где:
А представляет собой циклоалкил или гетероциклоалкил;
каждый X независимо представляет собой амино, C(=O)NHR, C(=O)R, C(=O)OR, OR, NHC(=O)R, CH2NHR, низший алкил, низший гидроксиалкил или низший гидроксиалкиламино;
каждый R независимо представляет собой Н или R';
каждый R' независимо представляет собой низший алкил, гетероциклоалкил, фенил, гетероарил, гетероарил низший алкил или бициклический гетероарил, необязательно замещенный одним или более R”;
каждый R” независимо представляет собой гидрокси, низший алкиламидо, карбокси, оксо, низший алкокси, низший алкиламино или низший диалкиламино;
m равно 0, 1 или 2;
В представляет собой гетероарил;
каждый Y независимо представляет собой атом галогена, низший алкил, низший алкокси, низший галогеналкил, низший гидроксиалкил, гетероарил, низший алкилсульфонил или гетероциклоалкил; и
n равно 0, 1 или 2;
или его фармацевтически приемлемая соль, можно синтезировать, следуя приведенной ниже общей схеме:
где Y является таким, как определено выше, Q может представлять собой СН или N, Z может представлять собой СН2 или О, и R1 может представлять собой низший алкил.
Фармацевтические композиции и введение Соединения по настоящему изобретению можно включать в широкий ряд дозируемых форм и носителей для перорального введения. Пероральное введение можно осуществлять в форме таблеток, таблеток с покрытием, драже, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий, сиропов или суспензий. Соединения по настоящему изобретению эффективны при введении другими путями введения, включающими среди прочих путей введения непрерывное введение (внутривенные капельницы), местное, парентеральное, внутримышечное, внутривенное, подкожное, трансдермальное (которое может включать вещество, усиливающее проницаемость), трансбуккальное, назальное, ингаляционное введение и введение посредством суппозиториев. Предпочтительным путем введения, как правило, является пероральный с использованием удобного режима ежесуточного дозирования, который можно регулировать в соответствии со степенью поражения и ответом пациента на активный ингредиент.
Соединение или соединения по настоящему изобретению, а также их фармацевтически приемлемые соли вместе с одним или более традиционных эксципиентов, носителей или разбавителей можно помещать в форму фармацевтических композиций и стандартных дозируемых форм. Фармацевтические композиции и стандартные дозируемые формы могут состоять из традиционных ингредиентов в общепринятых долях с дополнительными активными соединениями или активными веществами или без них, и эти стандартные дозируемые формы могут содержать любое подходящее эффективное количество активного ингредиента в соответствии с предназначенным диапазоном суточной дозировки, которую нужно применять. Фармацевтические композиции можно применять в виде твердых веществ, таких как таблетки или заполненные капсулы, полутвердых веществ, порошков, препаратов пролонгированного высвобождения или жидкостей, таких как растворы, суспензии, эмульсии, эликсиры или заполненные капсулы, для перорального применения; либо в форме суппозиториев для ректального или вагинального введения; либо в форме стерильных инъекционных растворов для парентерального применения. Характерный препарат содержит от примерно 5% до примерно 95% активного соединения или соединений (масс/масс). В термин "препарат" или "дозируемая форма" подразумевают включать как твердые, так и жидкие препараты активного соединения, и специалисту в данной области техники понятно, что активный ингредиент может находиться в различных препаратах в зависимости от органа или ткани-мишени, а также от желаемой дозы и фармакокинетических параметров.
Термин "эксципиент", как используют в данном описании, относится к соединению, полезному при получении фармацевтической композиции, в целом безопасному, нетоксичному и не являющемуся ни биологически, ни иначе нежелательным, и включает эксципиенты, приемлемые как для ветеринарного применения, так и для медицинского фармацевтического применения. Соединения по данному изобретению можно вводить одни, но, как правило, их вводят в смеси с одним или более подходящих фармацевтических эксципиентов, разбавителей или носителей, выбранных в соответствии с предназначенным путем введения и стандартной фармацевтической практикой.
"Фармацевтически приемлемый" означает то, что полезно при получении фармацевтической композиции, то есть в целом безопасно, нетоксично и не является ни биологически, ни иначе нежелательным, и включает то, что является приемлемым как для ветеринарного, так и для медицинского фармацевтического применения.
Форма "фармацевтически приемлемой соли" активного ингредиента может также исходно придавать активному ингредиенту желательное фармакокинетическое свойство, отсутствовавшее в несолевой форме, и может даже оказывать положительное влияние на фармакодинамику активного ингредиента в отношении его терапевтической активности в организме. Выражение "фармацевтически приемлемая соль" соединения означает соль, являющуюся фармацевтически приемлемой и обладающую желаемой фармацевтической активностью исходного соединения. Такие соли включают следующие соли: (1) соли присоединения кислоты, образованные с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и тому подобное; или образованные с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, пропионовая кислота, гексановая кислота, циклопентанпропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, молочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, 3-(4-гидроксибензоил)бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, 1,2-этан-дису4льфоновая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, 4-хлорбензолсульфоновая кислота, 2-нафталинсульфоновая кислота, 4-толуолсульфоновая кислота, камфорсульфоновая кислота, 4-метилбицикло[2.2.2]-окт-2-ен-1-карбоновая кислота, глюкогептоновая кислота, 3-фенилпропионовая кислота, триметилуксусная кислота, трет-бутилуксусная кислота, лаурилсульфоновая кислота, глюконовая кислота, глутаминовая кислота, гидроксинафтокислота, салициловая кислота, стеариновая кислота, муконовая кислота и тому подобное; или (2) соли, образованные при замещении протона кислоты, присутствующего в исходном соединении, либо ионом металла, например, ионом щелочного металла, ионом щелочноземельного металла или ионом алюминия; либо при координировании этого протона кислоты с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, трометамин, N-метилглюкамин и тому подобное.
Препараты твердой формы включают порошки, таблетки, пилюли, капсулы, крахмальные облатки, суппозитории и диспергируемые гранулы. Твердый носитель может представлять собой одно или более веществ, которые могут также действовать как разбавители, корригенты, солюбилизаторы, смазывающие вещества, суспендирующие агенты, связующие вещества, консерванты, разрыхлители таблеток или инкапсулирующий материал. В порошках носитель, как правило, представляет собой тонкоизмельченное твердое вещество, представляющее собой смесь с тонкоизмельченным активным ингредиентом. В таблетках активный ингредиент, как правило, смешивают с носителем, обладающим необходимой связующей способностью, в подходящих долях и прессуют с получением желаемой формы и размера. Подходящие носители включают, но не ограничены ими, карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лактоза, пектин, декстрин, крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлозу, натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, легкоплавкий воск, масло какао и тому подобное. Препараты твердой формы могут содержать в дополнение к активному ингредиенту красящие вещества, корригенты, стабилизаторы, буферы, искусственные и натуральные подсластители, диспергирующие агенты, загустители, солюбилизирующие агенты и тому подобное.
Для перорального введения также подходят жидкие препараты, включающие эмульсии, сиропы, эликсиры, водные растворы, водные суспензии. Эти препараты включают препараты твердой формы, предназначенные для преобразования в жидкую форму за короткое время перед применением. Эмульсии можно готовить в растворах, например, в водных растворах пропиленгликоля, либо они могут содержать эмульгирующие агенты, такие как лецитин, сорбитанмоноолеат или аравийская камедь. Водные растворы можно готовить путем растворения активного ингредиента в воде и добавления подходящих красящих веществ, корригентов, стабилизирующих агентов и загустителей. Водные суспензии можно готовить путем диспергирования тонкоизмельченного активного ингредиента в воде с вязким веществом, таким как натуральные или синтетические камеди, смолы, метилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы и другие хорошо известные суспендирующие агенты.
Соединения по настоящему изобретению можно включать в препараты для парентерального введения (например, путем инъекции, например, болюсной инъекции или непрерывной инфузии) и можно представлять в стандартной дозируемой форме в ампулах, предварительно заполненных шприцах, контейнерах для инфузии небольшого объема или в контейнерах для многократных доз с добавленным консервантом. Композиции могут принимать такие формы, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных основах, например, растворы в водном полиэтиленгликоле. Примеры масляных или неводных носителей, разбавителей, растворителей или основ включают следующие вещества: пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла (например, оливковое масло) и инъекционные органические сложные эфиры (например, этилолеат), а также могут содержать вспомогательные вещества, такие как консервирующие, увлажняющие, эмульгирующие или суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно активный ингредиент может находиться в порошкообразной форме, полученной путем асептического выделения стерильного твердого вещества или путем лиофилизации из раствора для восстановления перед применением подходящей основой, например, стерильной апирогенной водой.
Соединения по настоящему изобретению можно включать в препараты для местного введения в эпидермис в виде мазей, кремов или лосьонов, либо в виде трансдермального пластыря. Препараты в виде мазей и кремов можно, например, готовить с водной или масляной основой с добавлением подходящих загустителей и/или гелеобразующих агентов. Лосьоны можно готовить с водной или масляной основой, и они, как правило, также содержат один или более эмульгирующих агентов, стабилизирующих агентов, диспергирующих агентов, суспендирующих агентов, загустителей или красящих веществ. Препараты, подходящие для местного введения в полость рта, включают лепешки, содержащие активный ингредиент в корригированной основе, обычно в сахарозе и аравийской камеди или трагаканте; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и аравийская камедь; и полоскания для рта, содержащие активный ингредиент в подходящем жидком носителе.
Соединения по настоящему изобретению можно включать в препараты для введения в виде суппозиториев. Легкоплавкий воск, такой как смесь глицеридов жирных кислот или масло какао, сначала плавят, и активный ингредиент гомогенно диспергируют, например, путем перемешивания. Затем расплавленную гомогенную смесь заливают в формы удобного размера, дают возможность охладиться и затвердеть.
Соединения по настоящему изобретению можно включать в препараты для вагинального введения. Пессарии, тампоны, кремы, гели, пасты, пенки или спреи содержат в дополнение к активному ингредиенту такие носители, которые известны в данной области техники как подходящие.
Соединения по настоящему изобретению можно включать в препараты для назального введения. Растворы или суспензии наносят непосредственно в полости носа с помощью традиционных средств, например, с помощью капельницы, пипетки или спрея. Эти препараты могут быть представлены в форме однократной дозы или многократных доз. В последнем случае капельницы или пипетки это может быть достигнуто за счет введения пациентом подходящего предопределенного объема раствора или суспензии. В случае спрея это может быть достигнуто, например, с помощью мерного распылительного насоса.
Соединения по настоящему изобретению можно включать в препараты для аэрозольного введения, в частности, в дыхательные пути, и включающего интраназальное введение. Соединение, как правило, имеет малый размер частиц, например, порядка пяти (5) микрон или менее. Такой размер частиц может быть получен способами, известными в данной области техники, например, с помощью микронизации. Активный ингредиент находится в упаковке под давлением с подходящим пропеллентом, таким как хлорфторуглерод (CFC; от англ. "chlorofluorocarbon"), например, дихлордифторметан, трихлорфторметан или дихлортетрафторэтан, либо диоксид углерода или другой подходящий газ. Аэрозоль для удобства может также содержать поверхностно-активное вещество, такое как лецитин. Дозу лекарственного средства можно контролировать с помощью мерного клапана. Альтернативно активные ингредиенты могут быть представлены в форме сухого порошка, например, в виде порошкообразной смеси соединения в подходящей основе порошка, такой как лактоза, крахмал, производные крахмала, такие как гидроксипропилметилцеллюлоза и поливинилпирролидон (ПВП). Порошкообразный носитель образует гель в полости носа. Порошкообразная композиция может быть представлена в стандартной дозируемой форме, например, в капсулах или картриджах, например, желатиновых, или в блистерных упаковках, из которых можно вводить порошок с помощью ингалятора.
При желании препараты можно готовить с энтеросолюбильными покрытиями, приспособленными для введения с пролонгированным или контролируемым высвобождением активного ингредиента. Например, соединения по настоящему изобретению можно готовить в устройствах для трансдермальной или подкожной доставки лекарственных средств. Эти системы доставки предпочтительны в тех случаях, когда необходимо пролонгированное высвобождение соединения, и когда принципиально важно соблюдение пациентом режима и схемы лечения. Соединения в системах для трансдермальной доставки часто прикреплены к твердой подложке, клеящейся на кожу. Интересующее соединение можно также объединять с усилителем проницаемости, например, Azone (1-додецилаза-циклогептан-2-он). Системы доставки пролонгированного высвобождения вводят подкожно в подкожный слой с помощью операции или инъекции. В подкожных имплантатах соединение инкапсулировано в мембране, растворимой в жидкостях, например, в силиконовом каучуке или в биоразлагаемом полимере, например, в полиакриловой кислоте.
Подходящие препараты вместе с фармацевтическими носителями, разбавителями и эксципиентами описаны в книге Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, изданной E.W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvania. Ученый-фармацевт может модифицировать препараты в пределах идей описания, чтобы получить различные препараты для конкретного пути введения, не делая композиции по настоящему изобретению нестабильными или не подвергая риску их терапевтическую активность.
Модифицирование настоящих соединений, например, чтобы придать им большую растворимость в воде или в другой основе, может быть легко выполнено посредством небольших модификаций (образование соли, этерификация и т.д.), которые хорошо известны обычному специалисту в данной области техники. Обычному специалисту в данной области техники также хорошо известно, как модифицировать путь введения и режим дозирования конкретного соединения, чтобы управлять фармакокинетикой настоящих соединений для получения максимального полезного эффекта у пациентов.
Термин "терапевтически эффективное количество", как используют в данном описании, означает количество, необходимое для уменьшения симптомов заболевания у индивидуума. Дозу регулируют по индивидуальным потребностям в каждом конкретном случае. Эта доза может варьировать в широких пределах в зависимости от различных факторов, таких как тяжесть заболевания, подлежащего лечению, возраст и общее состояние здоровья пациента, другие лекарственные средства, которыми лечат пациента, путь и форма введения, а также предпочтения и опыт лечащего врача. Для перорального введения целесообразна суточная доза, составляющая от примерно 0,01 до примерно 1000 мг/кг массы тела в сутки при монотерапии и/или при комбинированной терапии. Предпочтительная суточная доза составляет от примерно 0,1 до примерно 500 мг/кг массы тела, более предпочтительно от 0,1 до примерно 100 мг/кг массы тела, и наиболее предпочтительно от 1,0 до примерно 10 мг/кг массы тела в сутки. Таким образом, для введения человеку массой 70 кг диапазон суточной дозы должен составлять от примерно 7 мг до 0,7 г в сутки. Суточную дозу можно вводить в виде однократной дозы или в разделенной дозы, в характерном случае от 1 до 5 доз в сутки. Как правило, лечение начинают с меньших доз, которые меньше оптимальной дозы соединения. Затем дозу повышают с небольшими приращениями до достижения оптимального эффекта у индивидуального пациента. Обычный специалист по лечению заболеваний, описанных в данном изобретении, способен без ненужного экспериментирования и, полагаясь на собственные знания, опыт и описание данного изобретения, определить терапевтически эффективное количество соединений по настоящему изобретению для данного заболевания и данного пациента.
Фармацевтические препараты предпочтительно находятся в стандартных дозируемых формах. В такой форме препарат подразделяют на однократные дозы, содержащие подходящие количества активного ингредиента. Стандартная дозируемая форма может представлять собой упакованный препарат, где упаковка содержит дискретные количества препарата, такие как упакованные таблетки, капсулы и порошки во флаконах или ампулах. Стандартная дозируемая форма также может представлять собой саму капсулу, таблетку, крахмальную облатку или лепешку, либо она может представлять собой подходящее число любой из этих упакованных форм.
Препараты
Фармацевтические препараты для доставки посредством различных путей готовят, как показано в следующих таблицах. "Активный ингредиент" или "активное соединение", как используют в таблицах, означает одно или более из соединений формулы I.
Ингредиенты смешивают и распределяют в капсулы, каждая из которых содержит примерно 100 мг; одна капсула составляет приблизительную суммарную суточную дозу.
Композиция для перорального введения
Ингредиенты объединяют и гранулируют, используя растворитель, такой как метанол. Затем препарат высушивают и формуют с получением таблеток (содержащих примерно 20 мг активного соединения) с помощью подходящей таблеточной машины.
Ингредиенты смешивают с образованием суспензии для перорального введения.
Активный ингредиент растворяют в части воды для инъекций. Затем добавляют необходимое количество хлорида натрия при перемешивании, чтобы сделать раствор изотоническим. Массу раствора доводят остальным количеством воды для инъекций, фильтруют через 0,2-микронный мембранный фильтр и упаковывают в стерильных условиях.
Ингредиенты плавят и смешивают вместе в паровой бане и заливают в формы, содержащие суммарную массу 2,5 г.
Все ингредиенты, за исключением воды, объединяют и нагревают примерно до 60°С при перемешивании. Затем добавляют достаточное количество воды примерно при 60°С при энергичном перемешивании, чтобы эмульгировать ингредиенты, а затем добавляют необходимое количество воды примерно до 100 г.
Назальные распыляемые препараты
В качестве назальных распыляемых препаратов готовят несколько водных суспензий, содержащих от примерно 0,025-0,5 процентов активного соединения. Эти препараты необязательно содержат неактивные ингредиенты, такие как, например, микрокристаллическая целлюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, декстроза и тому подобное. Можно добавлять соляную кислоту для доведения pH. Назальные распыляемые препараты можно доставлять посредством мерного насоса для назального спрея, в характерном случае добавляющего примерно 50-100 микролитров препарата на активацию. Характерный режим дозирования составляет 2-4 распыления каждые 4-12 ч.
Показания и способы лечения
Соединения, раскрытые в данном изобретении, являются ингибиторами киназы, в частности, ингибиторами киназы SYK. Эти ингибиторы могут быть полезны для лечения одного или более заболеваний, отвечающих на ингибирование киназы, включающих заболевания, отвечающие на ингибирование киназы SYK и/или ингибирование пролиферации В-клеток у млекопитающих. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, считают, что взаимодействие соединений по изобретению с SYK приводит в результате к ингибированию активности SYK и, следовательно, к фармацевтической пользе этих соединений. Соответственно, изобретение включает способ лечения млекопитающего, например, человека, страдающего заболеванием, отвечающим на ингибирование активности SYK и/или на ингибирование пролиферации В-клеток, где данный способ включает введение млекопитающему, страдающему таким заболеванием, эффективного количества по меньшей мере одного химического соединения, предложенного в данном изобретении. Эффективная концентрация может быть определена экспериментально, например, с помощью анализа концентрации соединения в крови, или теоретически путем вычисления биодоступности. Другие киназы, которые могут подвергаться влиянию в дополнение к SYK, включают, но не ограничены ими, другие тирозинкиназы и серин/треонинкиназы.
Киназы играют значительные роли в биохимических путях передачи сигнала, контролирующих фундаментальные клеточные процессы, такие как пролиферация, дифференциация и гибель (апоптоз). Аномальную активность киназы считают вовлеченной в широкий ряд заболеваний, включающих множественные раки, аутоиммунные и/или воспалительные заболевания и острые воспалительные реакции. Многосторонняя роль киназ в ключевых биохимических путях клеточной передачи сигнала обеспечивает значительную возможность для идентификации новых лекарственных средств, направленных на киназы и биохимические пути передачи сигнала.
В изобретении предложен способ лечения воспалительного или аутоиммунного состояния, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.
В изобретении предложен описанный выше способ, дополнительно включающий введение дополнительного терапевтического агента, выбранного из химиотерапевтического или антипролиферативного средства, противовоспалительного средства, иммуномодулирующего или иммуносупрессивного средства, нейротрофического фактора, средства для лечения сердечно-сосудистого заболевания, средства для лечения диабета или средства для лечения иммунодефицитных расстройств.
В изобретении предложен способ лечения воспалительного состояния, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.
В изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.
В изобретении предложен способ лечения астмы, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.
В изобретении предложен способ лечения иммунного расстройства, включающего волчанку, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, псориаз, диабет типа I, осложнения трансплантатов органов, ксенотрансплантацию, диабет, рак, астму, атопический дерматит, аутоиммунные расстройства щитовидной железы, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, болезнь Альцгеймера и лейкоз, где данный способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.
В изобретении предложен способ лечения воспалительного состояния, включающий совместное введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества противовоспалительного соединения в комбинации с соединением формулы I.
В изобретении предложен способ лечения воспалительного состояния, включающий совместное введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества иммуносупрессивного соединения в комбинации с соединением формулы I.
ПРИМЕРЫ
Сокращения
Обычно используемые сокращения включают: ацетил (Ас; от англ. "acetyl"), азо-бис-изобутирилнитрил (AIBN; от англ. "azo-bis-isobutyrylnitrile"), атмосферы (атм), 9-борабицикло[3.3.1]нонан (9-BBN или BBN; от англ. "borabicyclo[3.3.1]nonane"), 2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил (BINAP; от англ. "bis(diphenylphosphino)-1,1'-binaphthyl"), трет-бутоксикарбонил (Вое; от англ. "tert-butoxycarbonyl"), ди-трет-бутилпирокарбонат или Ьос ангидрид (BOC2O), бензил (Bn; от англ. "benzyl"), бутил (Bu; от англ. "butyl"), номер по реферативному журналу "Кемикал Абстракте" (CASRN; от англ. "Chemical Abstracts Registration Number"), бензилоксикарбонил (CBZ или Z), карбонилдиимидазол (CDl; от англ. "carbonyl diimidazole), 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан (DABCO; от англ. "1,4-diazabicyclo[2.2.2]octane"), трифторид диэтиламиносеры (DAST; от англ. "diethylaminosulfur trifluoride"), дибензилиденацетон (dba; от англ. "dibenzylideneacetone"), 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен (DBN; от англ. "1,5-diazabicyclo[4.3.0]non-5-ene"), 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU; от англ. "1,8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene"), N,N'-дициклогексилкарбодиимид (DCC; от англ. "N,N'-dicyclohexylcarbodiimide"), 1,2-дихлорэтан (ДХЭ), дихлорметан (ДХМ), 2,3-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохинон (DDQ; от англ. "Dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone), диэтилазодикарбоксилат (DEAD; от англ. "diethyl azodicarboxylate"), ди-изо-пропилазодикарбоксилат (DIAD; от англ. "di-iso-propylazodicarboxylate), диизобутилалюмогидрид (DIBAL или DIBAL-H; от англ. "di-iso-butylaluminumhydride"), диизопропилэтиламин (DIPEA; от англ. "di-iso-propylethylamine"), N,N-диметилацетамид (ДМА), 4-N,N-диметиламинопиридин (ДМАП), N,N-диметилформамид (ДМФ), диметилсульфоксид (ДМСО), 1,1'-бис-(дифенилфосфино)этан (dppe; от англ. "1,1'-bis-(diphenylphosphino)ethane), 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен (dppf; от англ. "1,1'-bis-(diphenylphosphino)ferrocene"), 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид (EDCI; от англ. "1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride"), 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин (EEDQ; от англ. "2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline"), этил (Et), этилацетат (EtOAc), этанол (EtOH), 2-этокси-2Н-хинолин-1-карбоновой кислоты этиловый эфир (EEDQ; от англ. "2-ethoxy-2H-quinoline-1-carboxylic acid ethyl ester"), диэтиловый эфир (Et2O), этилизопропиловый эфир (EtOiPr), O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N.N.N'N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HATU), уксусная кислота (НОАс), 1-N-гидроксибензотриазол (HOBt), жидкостная хроматография высокого давления (ВЭЖХ; высокоэффективная жидкостная хроматография), изопропанол (IPA), изопропилмагния хлорид (iPrMgCl), гексаметилдисилазан (HMDS; от англ. "hexamethyl disilazane"), жидкостная хроматография с масс-спектрометрией (ЖХМС), гексаметилдисилазан лития (LiHMDS), мета-хлорпероксибензойная кислота (m-СРВА; от англ. "meta-chloroperoxybenzoic acid), метанол (МеОН), температура плавления (т.пл.), MeSO2- (мезил или Ms), метил (Me), ацетонитрил (MeCN), мета-хлорпербензойная кислота (МСРВА; от англ. "m-chloroperbenzoic acid"), масс-спектр (MC), метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ), метилтетрагидрофуран (Ме-ТГФ), N-бромсукцинимид (NBS; от англ. "N-bromosuccinimide"), н-бутиллитий (nBuLi), N-карбоксиангидрил (NCA; от англ. "N-carboxyanhydride"), N-хлорхлорсукцинимид (NCS; от англ. "N-chlorosuccinimide"), N-метилморфолин (NMM; от англ. "N-methylmorpholine"), N-метилпирролидон (NMP; от англ. "N-methylpyrrolidone"), пиридиния хлорхромат (РСС; от англ. "pyridinium chlorochromate"), дихлор-((бис-дифенилфосфино)ферроценил)палладий(II) (Pd(dppf)Cl2), ацетат палладия(II) (Pd(OAc)2), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (Pd2(dba)3), пиридиния дихромат (PDC), фенил (Ph), пропил (Pr), изопропил (i-Pr), фунты на квадратный дюйм (psi), пиридин (pyr), 1,2,3,4,5-пентафенил-1'-(ди-трет-бутилфосфино)ферроцен (Q-Phos), комнатная температура (температура окружающей среды, кт или КТ), втор-бутиллитий (sBuLi), трет-бутилдиметилсилил или t-BuMe2Si (TBDMS), тетра-н-бутиламмония фторид (TBAF; от англ. "tetra-n-butylammonium fluoride"), триэтиламин (TEA; от англ. "triethylamine" или Et3N), 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил (TEMPO; от англ. "2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl"), трифлат или CF3SO2- (Tf), трифторуксусная кислота (ТФУ), 1,1'-бис-2,2,6,6-тетраметилгептан-2,6-дион (TMHD; от англ. "1,1'-bis-2,2,6,6-tetramethylheptane-2,6-dione"), O-бензотриазол-1-ил-N,N,N',N-тетраметилурония тетрафторборат (TBTU; от англ. "O-benzotriazol-1-yl-N,N,N',N'-tetramethyluronium tetrafluoroborate"), тонкослойная хроматография (ТСХ), тетрагидрофуран (ТГФ), триметилсилил или Me3Si (TMS; от англ. "trimethylsilyl"), пара-толуолсульфоновой кислоты моногидрат (TsOH или pTsOH), 4-Me-C6H4SO2-или тозил (Ts) и N-уретан-N-карбоксиангидрид (UNCA; от англ. "N-urethane-N-carboxyanhydride"). Традиционная номенклатура, включающая префиксы нормальный (н), изо (изо), вторичный (втор-), третичный (трет-) и нео, имеет свое обычное значение при использовании с алкильной группировкой (J. Rigaudy and D.P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford).
Общие условия
Если не указано иное, все температуры, включая температуры плавления (то есть т. пл.) указаны в градусах Цельсия (°С). Понятно, что реакция, образующая указанный и/или желаемый продукт, может необязательно быть результатом непосредственного объединения двух реагентов, которые были первоначально добавлены, то есть может существовать одно или более промежуточных соединений, образующихся в смеси, которая в конечном счете приводит к образованию указанного и/или желаемого продукта. Приведенные выше сокращения могут быть использованы в Примерах получения промежуточных соединений и в Примерах. Все названия были созданы, используя программу Autonom или ChemDraw.
Приведенные ниже примеры получения промежуточных соединений и примеры приведены, чтобы обеспечить специалисту в данной области техники более ясное понимание и выполнение настоящего изобретения на практике. Их не следует рассматривать как ограничивающие объем изобретения, а исключительно как иллюстративные и репрезентативные.
Препаративные примеры
Пример 1
6-(цис-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Смесь 6-хлор-4-(6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (0,0996 г, 0,378 ммоль), N-метилпирролидинона (2 мл) и рацемического цис-циклогексан-1,2-диамина (0,270 мл, 2,29 ммоль) перемешивали при 150°С в течение 15 ч, затем концентрировали до темно-оранжевого масла. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 0 до 10% смеси 20:1 метанол: NH4OH в дихлорметане) получили оранжевое твердое вещество. Это твердое вещество растирали со смесью метанола (1 мл) и диэтилового эфира (10 мл), затем фильтровали и высушивали с получением 6-(цис-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амида (0,041 г, 32%) в виде светло-рыжеватого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 1.33 (d, J=9.06 Гц, 2Н), 1.47-1.79 (m, 6Н), 2.13 (br. s., 2Н), 3.16 (d, J=3.02 Гц, 1Н), 3.89 (br. s., 1Н), 6.74 (d, J=8.31 Гц, 1Н), 6.79-6.89 (m, 2Н), 7.52-7.67 (m, 2Н), 8.09 (s, 1Н), 8.35 (br. s., 1Н), 11.59 (s, 1Н) (предполагают, что пик пиридилметильной группы, 3 Н, совпадает с пиком растворителя ДМСО). МС (электрическая ионизация ЭИ/химическая ионизация ХИ) m/z: 342 [М+Н].
Пример 2
6-(цис-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Смесь 6-хлор-4-(6-этилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (0,0448 г, 0,161 ммоль), N-метилпирролидинона (1 мл) и рацемического цис-циклогексан-1,2-диамина (0,115 мл, 0,977 ммоль) перемешивали при 150°С в течение 19 ч, затем охлаждали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 0 до 10% смеси 20:1 метанол: NH4OH в дихлорметане) получили желтое твердое вещество. Это твердое вещество растирали с диэтиловым эфиром (5 мл), фильтровали и высушивали с получением рацемической 6-(цис-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты (0,0264 г, 46%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 1.26 (t, J=7.55 Гц, 5 Н), 1.43-1.79 (гл, 8Н), 2.74 (q, J=7.43 Гц, 2Н), 3.11 (br. s., 1Н), 3.78 (br. s., 1Н), 6.71-6.81 (m, 2Н), 6.85 (d, J=7.55 Гц, 1H), 7.55-7.68 (m, 2Н), 8.07 (s, 1Н), 8.36 (br. s., 1H), 11.65 (s, 1H). MC (ЭИ/ХИ) т/т.356 [М+Н].
Пример 3
6-((3R4R)-3-Аминотетрагидропиран-4-иламино)-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
6-Хлор-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (150 мг, 0,57 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат (185 мг, 0,85 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (2,8 мл) и N,N-диизопропилэтиламине (0,25 мл, 1,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 150°С в течение 4 суток. Добавляли дополнительное количество трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (50 мг, 0,23 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (0,04 мл, 0,23 ммоль) четырьмя порциями (каждые 36 ч в течение 144 ч). Смесь охлаждали, а затем добавляли воду и этилацетат. Водный слой экстрагировали этилацетатом, и объединенные органические слои промывали раствором хлорида натрия и высушивали над сульфатом натрия. После концентрирования остаток очищали хроматографией (силикагель, от 0 до 7% метанола в дихлорметане) с получением {(3R,4R)-4-[6-карбамоил-5-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-иламино]-тетрагидропиран-3-ил}-карбаминовой кислоты трет-бутилового эфира (60 мг, 18%) в виде прозрачного аморфного остатка. Этот остаток имел чистоту 83%, и его использовали без дополнительной очистки. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 444 [М+Н].
Стадия 2
трет-Бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат (60 мг, чистота 83%, 0,112 ммоль) растворяли в дихлорметане (0,85 мл) и охлаждали до 0°С. Добавляли по каплям трифторуксусную кислоту (0,35 мл, 4,49 ммоль), затем смесь подогревали до комнатной температуры. Через 3 ч смесь концентрировали в вакууме, затем добавляли воду, раствор бикарбоната натрия и этилацетат. Водную фазу экстрагировали этилацетатом. Хлорид натрия добавляли к водному слою и дополнительно экстрагировали его этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, 0-10% метанол в дихлорметане) получили 6-((3R,4R)-3-амино-тетрагидропиран-4-иламино)-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (11 мг, 28%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.61 (s, 1Н) 8.39 (br. s., 1Н) 8.12 (s, 1Н) 7.65 (br. s., 1Н) 7.60 (t, J=7.7 Гц, 1Н) 6.95 (d, J=7.2 Гц, 1Н) 6.85 (d, J=7.6 Гц, 1Н) 6.75 (d, J=8.3 Гц, 1Н) 4.10 (br. s., 1Н) 3.79-3.89 (m, 1Н) 3.66-3.75 (m, 1Н) 3.49-3.57 (m, 1Н) 3.37-3.47 (m, 1Н) 3.00-3.08 (m, 1Н) 1.94-2.12 (m, 1Н) 1.76-1.92 (m, 1Н) 1.63-1.73 (m, 1Н). МС (ЭИ/ХИ) m/z: 344 [М+Н].
Пример 4
6-((1S,2R)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-[1,2,3] триазол-1-ил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
6-(ди-трет-Бутилоксикарбонил-амино)-2-бромпиридин (1,26 г, 3,4 ммоль), порошок меди (1,29 г, 6,75 ммоль), 1Н-1,2,3-триазол (4,66 г, 67,5 ммоль) и гидроксид калия (0,38 г, 6,75 ммоль) объединяли и перемешивали при 130°С в течение 16 ч. После охлаждения смесь адсорбировали на силикагели и дважды очищали хроматографией (силикагель, от 0 до 7% метанола в дихлорметане), затем (силикагель, от 25 до 100% этилацетата в гексанах) с получением сначала 6-[1,2,3]триазол-1-ил-пиридин-2-иламина (203 мг, 37%) в виде белого твердого вещества, а затем 6-[1,2,3]триазол-2-ил-пиридин-2-иламина (219 мг, 40%) в виде белого твердого вещества. 6-[1,2,3]Триазол-1-ил-пиридин-2-иламин: 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 8.49 (d, J=1.1 Гц, 1Н) 7.80 (d, J=1.1 Гц, 1Н) 7.60-7.68 (m, 1Н) 7.51 (d, J=7.2 Гц, 1Н) 6.53 (d, J=7.9 Гц, 1Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 162 [М+Н]; 6-[1,2,3]триазол-2-ил-пиридин-2-иламин: 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 7.86 (s, 2Н) 7.62 (t, J=7.9 Гц, 1Н) 7.40 (d, J=7.9 Гц, 1Н) 6.52 (d, J=7.9 Гц, 1Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 162 [М+Н].
Стадия 2
4,6-Дихлор-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (200 мг, 0,905 ммоль) и 6-[1,2,3]триазол-1-ил-пиридин-2-иламин (147 мг, 0,914 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (6 мл), и раствор продували аргоном. Добавляли трис(дибензилиденацетон)дипалладий (83 мг, 0,09 ммоль), Ксантфос (105 мг, 0,18 ммоль) и карбонат цезия (884 мг, 2,7 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 100°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали, разбавляли насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, затем экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 25 до 100% этилацетата в гексанах) получили 6-хлор-4-(6-[1,2,3]триазол-1-ил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (48 мг, 15%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 9.34-9.43 (m, 1Н) 8.54-8.57 (m, 1Н) 8.43 (d, J=1.1 Гц, 1Н) 7.87-7.97 (m, 3Н) 7.60 (dd, J=7.4, 1.3 Гц, 1Н) 4.55 (q, J=7.2 Гц, 2Н) 1.50 (t, J=7.2 Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 346 [М+Н].
Стадия 3
6-Хлор-4-(6-[1,2,3]триазол-1-ил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (48 мг, 0,139 ммоль) суспендировали в 7 М аммиаке в метаноле (23 мл). Через 4 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(6-[1,2,3]триазол-1-ил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амида (44 мг, 100%) в виде беловатого твердого вещества, которое использовали непосредственно в следующей стадии без очистки. МС (ЭИ/ХИ) m/z.317 [М+Н].
Стадия 4
6-Хлор-4-(6-[1,2,3]триазол-1-ил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (44 мг, 0,139 ммоль) растворяли в N-метилпирролидиноне (0,9 мл). Добавляли цис-циклогексан-1,2-диамин (95 мг, 0,834 ммоль), и смесь подогревали до 150°С. Через 16 ч смесь охлаждали и концентрировали в вакууме. Полученный остаток разбавляли насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, затем экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 0:0:10 до 0,1:1:10 гидроксид аммония: метанол: дихлорметан) получили 6-(цис-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-[1,2,3]триазол-1-ил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (13 мг, 23%) в виде коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 10.33 (s, 1Н) 9.13 (d, J=8.3 Гц, 1Н) 8.84 (d, J=1.1 Гц, 1Н) 8.16-8.26 (m, 1Н) 8.03 (d, J=0.8 Гц, 1Н) 7.96 (d, J=7.9 Гц, 1Н) 7.67 (s, 1Н) 7.51-7.57 (m, 1Н) 7.51-7.57 (m, 1Н) 7.43-7.50 (m, 1Н) 3.60 (br. s., 1Н) 2.96-3.03 (m, 1Н) 1.21-1.64 (m, 8Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 395 [М+Н].
Пример 5
6-(цис-2-Аминоциклогексиламино)-4-(5-метансульфонил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
Метил-6-хлор-4-(5-(метилсульфонил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
В колбу загружали метил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилат (200 мг, 0,966 ммоль), 5-(метилсульфонил)пиридин-2-амин (183 мг, 1,06 ммоль), Pd2(dba)3 (88,5 мг, 0,097 ммоль), Ксантфос (112 мг, 0,193 ммоль) и карбонат цезия (944 мг, 2,9 ммоль). Добавляли 1,4-диоксан (6,0 мл), и через смесь барботировали аргон, при этом озвучивая колбу ультразвуком в течение 5 мин. Колбу запаивали и нагревали при 100°С в течение 1 ч. После охлаждения смесь фильтровали через целлит, и фильтрационный кек промывали CH2Cl2. Фильтраты концентрировали в вакууме, затем очищали хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкМ, 23 г, Versaflash Supelco, от 0 до 100% этилацетата в гексанах, 30 мин) с получением метил-6-хлор-4-(5-(метилсульфонил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (62 мг, 19%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 11.18 (s, 1Н) 9.31 (s, 1Н) 8.98 (d, J=2.27 Гц, 1Н) 8.19 (dd, J=8.59, 2.53 Гц, 1Н) 7.09 (dd, J=8.84, 0.76 Гц, 1Н) 4.15 (s, 3Н) 3.15 (s, 3Н). ЖХМС (ЭИ/ХИ) т/т.342,9 [М+Н].
Стадия 2
6-Хлор-4-(5-(метилсульфонил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Метил-6-хлор-4-(5-(метилсульфонил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (62 мг, 0,181 ммоль) суспендировали в аммиаке (7 М в метаноле, 3,94 г, 5 мл, 35,0 ммоль). Реакционный сосуд запаивали. Через 18 ч смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(5-(метилсульфонил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (60 мг, 100%) в виде беловатого твердого вещества, которое использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 3
6-(цис-2-Аминоциклогексиламино)-4-(5-(метилсульфонил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Смесь 6-хлор-4-(5-(метилсульфонил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (60 мг, 0,183 ммоль), цис-циклогексан-1,2-диамина (125 мг, 1,1 ммоль) и N-метил-2-пирролидинона (2 мл) нагревали до 150°С. Через 18 ч реакционную смесь охлаждали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкМ, 23 г, Versaflash Supelco, от 0 до 5% МеОН, содержащего 10% NH4OH в CH2Cl2, 20 мин) получили твердый остаток. Этот остаток растворяли в МеОН и CH2Cl2, затем осаждали добавлением циклогексана. Образовавшееся твердое вещество получили путем декантирования маточного раствора, затем высушивали с получением 6-(цис-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-(метилсульфонил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (19 мг, 45,6 мкмоль, 25%) в виде бежевого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 12.21 (s, 1Н) 8.73 (d, J=2.27 Гц, 1Н) 8.48 (br. s., 1Н) 8.16 (s, 1Н) 8.12 (dd, J=8.69, 2.64 Гц, 1Н) 7.75 (br. s., 1Н) 7.14 (d, J=8.69 Гц, 1Н) 7.03 (d, J=7.93 Гц, 1Н) 4.06 (br. s., 1Н) 3.26 (s, 3Н) 3.09 (br. s., 1H) 1.24-1.78 (m, 10 H). ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 406 [М+Н].
Пример 6
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-пара-толуиламино-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
6-Хлор-4-пара-толуиламино-пиридазин-3-карбоновой кислоты метиловый эфир
4,6-Дихлор-пиридазин-3-карбоновой кислоты метиловый эфир (200 мг, 0,966 ммоль), пара-толуидин (104 мг, 0,966 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (0,34 мл, 1,93 ммоль) растворяли в N.N-диметилацетамиде (2,4 мл), затем нагревали при 110°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали, затем наливали в этилацетат и воду. Водный слой экстрагировали этилацетатом, а затем объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 0 до 50% этилацетата в гексанах) получили 6-хлор-4-пара-толуиламино-пиридазин-3-карбоновой кислоты метиловый эфир (214 мг, 79%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 9.61 (br. s., 1Н) 7.23 - 7.32 (m, 2Н) 7.13 (d, J=7.9 Гц, 2Н) 6.96 (s, 1Н) 4.08 (s, 3Н) 2.41 (s, 3Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z.278 [М+Н].
Стадия 2
6-Хлор-4-пара-толуиламино-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
6-Хлор-4-пара-толуиламино-пиридазин-3-карбоновой кислоты метиловый эфир (210 мг, 0,756 ммоль) суспендировали в 7 М аммиаке в метаноле (7 мл). Через 3,5 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(6-[1,2,3]триазол-1 -ил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амида (199 мг, 100%) в виде беловатого твердого вещества, которое использовали непосредственно в следующей стадии без очистки. МС (ЭИ/ХИ) m/z.263 [М+Н].
Стадия 3
[(1S,2R)-2-(6-Карбамоил-5-пара-толуиламино-пиридазин-3-иламино)-циклогексил]-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир
6-Хлор-4-пара-толуиламино-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (199 мг, 0,758 ммоль) и трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (325 мг, 1,52 ммоль) растворяли в N-метилпирролидиноне (4,7 мл). Реакционную смесь нагревали при 150°С в течение 16 ч, затем добавляли дополнительное количество трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (550 мг, 2,57 ммоль всего) тремя порциями за 6 суток. Реакционную смесь охлаждали, разбавляли этилацетатом и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали водой и соляным раствором, затем высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. Полученный остаток очищали хроматографией (силикагель, от 0 до 5% метанола в дихлорметане) с получением [(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-пара-толуиламино-пиридазин-3-иламино)-циклогексил]-карбаминовой кислоты трет-бутилового эфира (26 мг, 8%) в виде светло-коричневого аморфного остатка. ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z.441 [М+Н].
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-пара-толуиламино-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
[(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-пара-толуиламино-пиридазин-3-иламино)-циклогексил]-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир (26 мг, 0,059 ммоль) растворяли в дихлорметане (0,6 мл), затем охлаждали до 0°С. Добавляли по каплям трифторуксусную кислоту (0,27 мл, 3,54 ммоль), затем реакционную смесь подогревали до 25°С. Через 4 ч смесь охлаждали в ледяной бане и нейтрализовали раствором бикарбоната натрия. Смесь экстрагировали этилацетатом, и объединенные органические слои промывали соляным раствором, высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 0 до 80% раствором 0,1:0,01 метанол: NH4OH в дихлорметане) получили 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-пара-толуиламино-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (15 мг, 72%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 10.30 (s, 1Н) 8.20-8.30 (m, 1Н) 7.44-7.55 (m, 1Н) 7.17-7.27 (m, 2Н) 7.07-7.17 (m, 2Н) 6.59 (d, J=7.9 Гц, 1Н) 6.33 (s, 1Н) 3.95-4.09 (m, 1Н) 2.93-3.06 (m, 1Н) 2.30 (s, 3Н) 1.19-1.68 (m, 9Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z.341 [М+Н].
Пример 7
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
Метил-6-хлор-4-(6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
Перемешанный раствор метил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (255 мг, 1,23 ммоль) и 6-изопропилпиридин-2-амина (252 мг, 1,85 ммоль) в ацетонитриле (8,0 мл) нагревали при 140°С в течение 21 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали в вакууме, затем остаток очищали хроматографией (силикагель, 20-45 мкм, 80 г, Thomson, от 0 до 10% ацетона в дихлорметане, 20 мин) с получением метил-6-хлор-4-(6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (113 мг, 30%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 10.64 (br. s., 1Н) 9.39 (s, 1Н) 7.63 (t, J=7.83 Гц, 1Н) 6.94 (d, J=7.58 Гц, 1Н) 6.78 (d, J=8.08 Гц, 1Н) 4.12 (s, 3Н) 3.01-3.19 (m, 1Н) 1.31-1.42 (m, 6Н). ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 307 [М+Н].
Стадия 2
6-Хлор-4-(6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Метил-6-хлор-4-(6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (99 мг, 322 мкмоль) добавляли в трубку под давлением с последующим добавлением аммиака (7 М в метаноле, 3,94 г, 5 мл, 35,0 ммоль). Смесь нагревали до 50°С в течение 18 ч, а затем добавляли дополнительное количество 7 н. аммиака в метаноле (7,5 мл). Через 24 ч смесь охлаждали, фильтровали и высушивали с получением 6-хлор-4-(6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (103 мг, 100%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн1 11.58 (br. s., 1Н) 9.41 (s, 1Н) 8.20 (br. s., 1Н) 7.60 (t, J=7.83 Гц, 1Н) 6.90 (d, J=7.33 Гц, 1Н) 6.77 (d, J=8.08 Гц, 1Н) 5.72 (br. s., 1Н) 3.01-3.16 (m, 1Н) 1.37 (d, J=6.82 Гц, 6 H). ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 292 [М+Н].
Стадия 3
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3- карбоксамид
К раствору 6-хлор-4-(6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (102 мг, 350 мкмоль) в N-метил-2-пирролидиноне (6 мл) добавляли трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (150 мг, 699 мкмоль), и смесь нагревали до 150°С в течение 3 суток. Добавляли дополнительное количество трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (150 мг, 699 мкмоль), и реакционную смесь нагревали до 150°С дополнительно в течение 2 суток, затем охлаждали, концентрировали и очищали хроматографией (силикагель, 50 мкм, 40 г, Analogix, от 96:3,8:0,2 до 84:15,2:0,8; дихлорметан:МеОН:МН4ОН) с получением смеси трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата и 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (33 мг). Эту смесь растворяли в дихлорметане (2 мл), затем добавляли ТФУ (370 мг, 250 мкл, 3,24 ммоль). Через 18 ч смесь концентрировали в вакууме, и полученный остаток очищали хроматографией (сферический силикагель, 20-45 мкм, 25 г, Versaflash Supelco, от 96:3,8:0,2 до 84:15,2:0,8 дихлорметан: МеОН:NH4OH, 25 мин градиент) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (12 мг, 9%) в виде коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн1 11.35 (br. s., 1Н) 8.33 (s, 1Н) 7.96 (br. s., 1Н) 7.44 (t, J=7.83 Гц, 1H) 6.70 (d, J=7.58 Гц, 1H) 6.61 (d, J=8.08 Гц, 1H) 5.61 (br. s., 1H) 5.31 (br. s., 1H) 3.75 (br. s., 1H) 3.19 (d, J=3.28 Гц, 1H) 2.89-3.01 (m, 1H) 1.32-1.80 (m, 8 H) 1.27 (d, J=6.82 Гц, 6 H). ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 370 [M+Н].
Пример 8
6-((3R,4R)-3-Аминотетрагидропиран-4-иламино)-4-(5,6-диметил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
Этил-6-хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
В трубку под давлением загружали этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилат (300 мг, 1,36 ммоль), 5,6-диметилпиридин-2-амин (249 мг, 2,04 ммоль) в ацетонитриле (8 мл), и смесь нагревали в масляной бане при 140°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь концентрировали в вакууме, адсорбировали на силикагеле, а затем очищали хроматографией (силикагель, 50 мкм, колонка 80 г от фирмы Analogix, от 0% до 10% ацетона в дихлорметане, 20 мин) с получением этил-6-хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (150 мг, 36%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) 6 млн-1 10.20 (s, 1Н) 8.86 (s, 1Н) 7.57 (d, J=8.08 Гц, 1Н) 6.97 (d, J=8.08 Гц, 1Н) 4.40 (q, J=7.24 Гц, 2Н) 2.42 (S, 3Н) 2.23 (s, 3Н) 1.35 (t, J=7.20 Гц, 3Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z.307 [М+Н].
Стадия 2
6-Хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
В трубку под давлением загружали этил-6-хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (133 мг, 434 мкмоль) и 7 н. аммиак в метаноле (9,44 г, 12 мл, 84,0 ммоль). Смесь нагревали в масляной бане при 50°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (160 мг, 100%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 11.48 (br. s., 1Н) 9.18 (s, 1Н) 8.17 (br. s., 1Н) 7.43 (d, J=8.34 Гц, 1H) 6.74 (d, J=7.83 Гц, 1H) 5.67 (br. s., 1H) 2.53 (s, 3 H) 2.28 (s, 3 H); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z 278 [М+Н]. Это вещество использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 3
6-((3R4R)-3-Аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
6-Хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид (120 мг, 432 мкмоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат (187 мг, 864 мкмоль) в N-метил-2-пирролидиноне (6 мл) нагревали при 150°С в течение 1,5 суток. После выпаривания растворителя остаток растворяли в дихлорметане (2 мл) и ТФУ (370 мг, 250 мкл, 3,24 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, затем растворитель выпаривали, и остаток очищали хроматографией (сферический силикагель, 20-45 мкм, 11 г, Versaflash от Supelco, от 97:2,75:0,15 до 87:12,35:0,65 дихлорметан: МеОН:МН4ОН, 20 мин) с получением коричневого твердого вещества. Коричневое твердое вещество растворяли в дихлорметане и добавляли 10 мл циклогексана. После стояния образовался твердый осадок. Супернатант декантировали, и твердый остаток высушивали в вакууме с получением 6-((3R4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (18 мг, 12% за две стадии) в виде коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 11.23 (br. s., 1Н) 8.29 (s, 1Н) 8.03 (br. s., 1Н) 7.36 (d, J=8.08 Гц, 1H) 6.67 (d, J=8.08 Гц, 1H) 5.68-5.79 (m, 1Н) 5.39 (br. s., 1H) 4.02 (d, J=7.33 Гц, 1H) 3.88 (d, J=11.12 Гц, 1H) 3.69 (d, J=11.62 Гц, 1H) 3.55 (t, J=11.49 Гц, 1H) 3.10 (br. s., 1H) 2.49 (s, 3 H) 2.25 (s, 3 H) 2.02 (d, J=12.38 Гц, 1H) 1.42-1.84 (m, 3 H); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 358 [M+Н].
Пример 9
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
6-Хлор-4-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты метиловый эфир
4,6-Дихлор-пиридазин-3-карбоновой кислоты метиловый эфир (165 мг, 0,8 ммоль) и 1-метил-1Н-пиразол-3-амин (81 мг, 0,837 ммоль) растворяли в N-метилпирролидиноне (3,2 мл). Реакционную смесь нагревали при 110°С в течение 2 ч, затем охлаждали и концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли водой, а затем экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали соляным раствором, высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 10 до 70% этилацетата в гексанах) получили 6-хлор-4-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты метиловый эфир (69 мг, 32%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 10.09 (br. s., 1Н) 8.24 (s, 1Н) 7.34 (d, J=2.3 Гц, 1Н) 6.02 (d, J=2.3 Гц, 1Н) 4.08 (s, 3Н) 3.91 (s, 3Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 268 [М+Н].
Стадия 2
6-Хлор-4-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
6-Хлор-4-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты метиловый эфир (75 мг, 0,28 ммоль) суспендировали в 7 М аммиаке в метаноле (3 мл). Через 16 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амида (70 мг, 100%) в виде беловатого твердого вещества, которое использовали непосредственно в следующей стадии без очистки. 1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.39 (s, 1Н) 8.77 (br. s., 1Н) 8.24 (s, 1Н) 8.13 (br. s., 1Н) 7.72 (d, J=2.3 Гц, 1H) 6.18 (d, J=2.3 Гц, 1H) 3.84 (s, 3Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 253 [М+Н].
Стадия 3
{(1S,2R)-2-[6-Карбамоил-5-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир
6-Хлор-4-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (60 мг, 0,237 ммоль) и трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (102 мг, 0,475 ммоль) растворяли в N-метилпирролидиноне (1,5 мл). Реакционную смесь нагревали при 150°С в течение 16 ч, затем добавляли дополнительное количество трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (100 мг, 0,47 ммоль всего) добавляли тремя порциями за 6 суток. Реакционную смесь охлаждали, разбавляли этилацетатом и водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали водой и соляным раствором, а затем высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. Полученный остаток очищали хроматографией (силикагель, от 0 до 7% метанола в дихлорметане) с получением {(1S,2R)-2-[6-карбамоил-5-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты трет-бутилового эфира (18 мг, 17%) в виде коричневого аморфного остатка. 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 10.68-10.80 (m, 1Н) 7.89-8.06 (m, 1Н) 7.34-7.37 (m, 1Н) 7.25 (d, J=2.3 Гц, 1Н) 5.93 (d, J=2.3 Гц, 1Н) 5.56-5.64 (m, 1Н) 5.02-5.14 (m, 1Н) 3.91-4.01 (m, 1Н) 3.86 (s, 3Н) 1.55 (br. s., 8Н) 1.40 (s, 9Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z.431 [М+Н].
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
{(1S,2R)-2-[6-карбамоил-5-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир (34 мг, 0,079 ммоль) растворяли в дихлорметане (1 мл), затем охлаждали до 0°С. Добавляли по каплям трифторуксусную кислоту (0,5 мл, 6,49 ммоль), затем реакционную смесь подогревали до 25°С.Через 4 ч смесь охлаждали в ледяной бане и нейтрализовали раствором бикарбоната натрия. Смесь экстрагировали этилацетатом, и объединенные органические слои промывали соляным раствором, высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 0 до 80% раствора 0,1:0,01 метанол: NH4OH в дихлорметане) получили 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (5 мг, 20%) в виде коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ млн1 10.84-10.89 (m, 1Н) 8.23-8.32 (m, 1Н) 7.66 (d, J=2.3 Гц, 1Н) 7.48-7.59 (m, 1Н) 7.10 (s, 1Н) 6.73 (d, J=7.9 Гц, 1Н) 6.05 (d, J=2.3 Гц, 1Н) 3.91-4.05 (m, 1Н) 3.01-3.11 (m, 1Н) 1.46 - 1.72 (m, 6Н) 1.25-1.36 (m, 2Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 331 [М+Н].
Пример 10
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
6-Хлор-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир
4,6-Дихлор-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (300 мг, 1,36 ммоль) и 6-метилпиридин-2-амин (176 мг, 1,63 ммоль) растворяли в ацетонитриле (4,1 мл), затем нагревали при 140°С в течение 16 ч. Добавляли вторую порцию 6-метилпиридин-2-амина (73 мг, 0,67 ммоль). После следующих 2 суток при 140°С реакционную смесь охлаждали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 5 до 40% этилацетата в гексанах) получили 6-хлор-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (146 мг, 36%) в виде светло-желтого масла. 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 10.68 (br. s., 1Н) 9.21 (s, 1Н) 7.59 (t, J=7.7 Гц, 1Н) 6.90 (d, J=7.6 Гц, 1Н) 6.76 (d, J=7.9 Гц, 1Н) 4.57 (q, J=7.2 Гц, 2Н) 2.57 (s, 3Н) 1.51 (t, J=7.0 Гц, 3Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 315 [М+Na].
Стадия 2
6-Хлор-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
6-Хлор-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (137 мг, 0,468 ммоль) суспендировали в 7 М аммиаке в метаноле (3 мл). Через 4 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амида (123 мг, 100%) в виде беловатого твердого вещества, которое использовали непосредственно в следующей стадии без очистки. ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 264 [М+Н].
Стадия 3
{(1S,2R)-2-[6-Карбамоил-5-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-иламино]-циклогексил)-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир
6-Хлор-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (130 мг, 0,49 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (0,17 мл, 0,986 ммоль) и трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (211 мг, 0,986 ммоль) растворяли в N-метилпирролидиноне (2 мл) и нагревали при 150°С в течение 2 суток. Реакционную смесь охлаждали и концентрировали в вакууме, затем разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали соляным раствором, высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 0 до 5% метанола в дихлорметане) получили {(1S,2R)-2-[6-карбамоил-5-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир (78 мг, 35%) в виде светло-коричневого аморфного остатка. ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 442 [М+Н].
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
{(1S,2R)-2-[6-Карбамоил-5-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир (188 мг, 0,426 ммоль) растворяли в дихлорметане (4 мл), затем охлаждали до 0°С. Добавляли по каплям трифторуксусную кислоту (2 мл, 25 ммоль), затем реакционную смесь подогревали до 25°С. Через 4 ч смесь охлаждали в ледяной бане и нейтрализовали раствором бикарбоната натрия. Смесь экстрагировали этилацетатом, и объединенные органические слои промывали соляным раствором, высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 0 до 100% раствора 0,1:0,01 метанол: NH4OH в дихлорметане) получили 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (61 мг, 42%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.61 (s, 1Н) 8.35-8.44 (гл, 1Н) 8.10 (s, 1Н) 7.61 (br. s, 1Н) 7.61 (t, J=7.3 Гц, 1Н) 6.81-6.89 (m, 1Н) 6.85 (d, J=7.3 Гц, 1H)6.76(d, J=8.1 Гц, 1Н) 3.76 - 3.99 (m, 2Н) 3.11 -3.18(m, 1Н) 2.48 - 2.49 (m, 3Н) 1.49-1.77 (m, 7 Н) 1.27-1.38 (m, 2Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 342 [М+Н].
Пример 11
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-пирролоГ2,3-Ыпиридин-6-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
(3-Метил-пиридин-2-ил)-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир
3-Метилпиридин-2-амин (20 г, 185 ммоль) растворяли в этилацетате (30 мл) и добавляли по каплям к раствору ди-трет-бутилдикарбоната (64,6 г, 296 ммоль) в гексанах (72 мл) при 60°С. Через 3 ч смесь охлаждали до 25°С. Через 16 ч добавляли гексаны (70 мл). Через 2 ч твердый осадок фильтровали, кек промывали гексанами, а затем высушивали с получением (3-метил-пиридин-2-ил)-карбаминовой кислоты трет-бутилового эфира (27,4 г, 71%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 8.24-8.29 (m, 1Н) 7.49-7.54 (m, 1Н) 7.00-7.07 (m, 1Н) 2.30 (s, 3Н) 1.52 (s, 9Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 209 [М+Н].
Стадия 2
1Н-пирроло[2.3-b]пиридин
(3-Метил-пиридин-2-ил)-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир (5 г, 24 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (96 мл) и охлаждали в бане лед-соль до -15°С. Добавляли по каплям раствор бутиллития (1,6 М в гексанах, 30 мл, 48 ммоль) в течение 30 мин. После дополнительного 1 ч добавляли N,N-диметилформамид (1,9 мл, 34,5 ммоль), и реакционную смесь подогревали до 25°С в течение 16 ч. Реакционную смесь очень медленно охлаждали примерно к 150 мл 6 М раствора HCl. Полученную в результате смесь подогревали до 55°С в течение 2 ч, затем охлаждали, фазы разделяли, и к водному слою добавляли этилацетат. 6 М раствор гидроксида натрия медленно добавляли до pH 6, затем слои разделяли, и водный слой еще раз экстрагировали этилацетатом. Объединенные этилацетатные экстракты промывали раствором хлорида натрия, высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 1Н-пирроло[2,3-b]пиридина (3,8 г, 134%) в виде коричневого полутвердого вещества. Это вещество использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки. 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 10.86 (br. s., 1Н) 8.28 (dd, J=4.9, 1.5 Гц, 1Н) 7.98 (dd, J=7.7, 1.7 Гц, 1Н) 7.36 (d, J=3A Гц, 1Н) 7.10 (dd, J=7.9, 4.9 Гц, 1Н) 6.51 (d, J=3.4 Гц, 1Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z:119 [М+Н].
Стадия 3
Комплекс 1 Н-пирроло[2,3-b]пиридин-7-оксида и 3-хлорбензойной кислоты
1Н-пирроло[2,3-b]пиридин (2,8 г, 24 ммоль) растворяли в этилацетате (24 мл) и охлаждали до 0°С. Добавляли по каплям раствор 3-хлорпербензойной кислоты (77%, 6,7 г, 30,1 ммоль) в этилацетате (24 мл), затем реакционную смесь подогревали до 25°С в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, фильтровали, и твердые вещества высушивали с получением неочищенного комплекса 1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-7-оксида и 3-хлорбензойной кислоты (4,1 г, 58%) в виде беловатого твердого вещества. Этот комплекс использовали непосредственно в следующей стадии без очистки. ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 135 [М+Н].
Стадия 4
1Н-Пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламин
Комплекс 1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-7-оксида и 3-хлорбензойной кислоты (1,5 г, 5,16 ммоль) суспендировали в ацетонитриле (10 мл). Добавляли диметилсульфат (0,54 мл, 5,68 ммоль), и реакционную смесь подогревали до 60°С. Через 16 ч смесь переносили в толстостенную трубку под давлением и добавляли 7 М раствор аммиака в метаноле (11 мл). Трубку запаивали и подогревали до 55°С. Через 16 ч растворитель выпаривали, и остаток растворяли в дихлорметане и 10% растворе карбоната натрия. Водный слой экстрагировали дихлорметаном, а затем объединенные органические слои последовательно промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой и соляным раствором. Органическую фазу высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 10 до 80% этилацетата в гексанах) получили 1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламин (316 мг, 46%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 8.73 (br. s., 1Н) 7.70 (d, J=8.3 Гц, 1Н) 6.99 (d, J=3.5 Гц, 1Н) 6.38 (d, J=8.3 Гц, 1Н) 6.36 (d, J=3.5 Гц, 1Н) 3.82 (br. s., 2Н).
Стадия 5
2-(1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-ил)-изоиндол-1,3-дион
1Н-Пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламин (0,12 г, 0,9 ммоль) суспендировали в уксусной кислоте (1,5 мл), затем добавляли фталевый ангидрид (133 мг, 0,9 ммоль) и добавляли ацетат натрия (118 мг, 1,44 ммоль), и смесь нагревали до 120°С. Через 3 ч смесь концентрировали в вакууме, полученный остаток растворяли в этилацетате, а затем охлаждали до 0°С. Добавляли ледяную воду и раствор бикарбоната натрия, затем водный слой экстрагировали этилацетатом. Водный слой доводили до pH 6 1 М раствором HCl и дважды экстрагировали дополнительным количеством этилацетата. Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия, затем концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 20 до 70% этилацетата в гексанах) получили 2-(1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-ил)-изоиндол-1,3-дион (179 мг, 75%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.91 (br. s., 1H)8.15(d, J=7.9 Гц, 1Н) 7.90-8.05 (m, 4 Н) 7.59-7.65 (m, 1Н) 7.21 (d, J=7.9 Гц, 1Н) 6.54-6.60 (m, 1Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 264 [М+Н].
Стадия 6
2-(1-Метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-ил)-изоиндол-1,3-дион
2-(1Н-Пирроло[2,3-b]пиридин-6-ил)-изоиндол-1,3-дион (179 мг, 0,68 ммоль) суспендировали в ацетонитриле (3,4 мл). Затем добавляли йодметан (53 мкл, 0,843 ммоль) и карбонат цезия (443 мг, 1,36 ммоль). Через 16 ч добавляли воду, и водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 2-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-ил)-изоиндол-1,3-диона (0,22 г, 117%) в виде светло-коричневого твердого вещества, которое использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 278 [М+Н].
Стадия 7
1-Метил-1 Н-пирролоГ2,3-Ыпиридин-6-иламин
2-(1-Метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-ил)-изоиндол-1,3-дион (220 мг, 0,793 ммоль) растворяли в этаноле (4 мл), затем добавляли гидразин (0,5 мл, 15,9 ммоль). Через 16 ч смесь концентрировали в вакууме и распределяли между этилацетатом и водой. Водный слой дважды экстрагировали дополнительным количеством этилацетата, затем объединенные органические экстракты промывали соляным раствором, высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 10 до 50% этилацетата в гексанах) получили 1-метил-1 Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламин (115 мг, 98%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 7.67 (d, J=8.3 Гц, 1Н) 6.87 (d, J=3.4 Гц, 1Н) 6.35 (d, J=8.3 Гц, 1Н) 6.30 (d, J=3.4 Гц, 1Н) 4.38 (br. s., 2Н) 3.76 (s, 3Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z.148 [М+Н].
Стадия 8
6-Хлор-4-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир
4,6-Дихлор-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (195 мг, 0,882 ммоль) и 1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламин (156 мг, 1,06 ммоль) растворяли в ацетонитриле (2,7 мл), затем нагревали при 140°С в течение 2 суток. Реакционную смесь охлаждали и концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли водой, а затем экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали соляным раствором, высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 5 до 70% этилацетата в гексанах) получили 6-хлор-4-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (52 мг, 18%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн1 10.78 (s, 1Н) 9.34 (s, 1Н) 7.90 (d, J=8.3 Гц, 1Н) 7.14 (d, J=3.3 Гц, 1Н) 6.74 (d, J=8.3 Гц, 1Н) 6.45 (d, J=3.5 Гц, 1Н) 4.58 (d, J=7.1 Гц, 2Н) 3.90 (s, 3Н) 1.52 (t, J=7.2 Гц, 3Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 332 [М+Н].
Стадия 9
6-Хлор-4-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
6-Хлор-4-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (52 мг, 0,157 ммоль) суспендировали в 7 М аммиаке в метаноле (2 мл). Через 2 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амида (47 мг, 100%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое использовали непосредственно в следующей стадии без очистки. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн1 12.07 (s, 1Н) 9.24 (s, 1Н) 8.85 (br. s., 1Н) 8.21 (br. s., 1Н) 7.99 (d, J=8.3 Гц, 1Н) 7.42 (d, J=3.3 Гц, 1Н) 6.81 (d, J=8.3 Гц, 1Н) 6.45 (d, J=3.3 Гц, 1Н) 3.83 (s, 3Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z.303 [М+Н].
Стадия 10
((1S,2R)-2-[6-Карбамоил-5-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-иламино1-циклогексил)-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир 6-Хлор-4-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (42 мг, 0,139 ммоль) и трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (89 мг, 0,416 ммоль) растворяли в N-метилпирролидиноне (1,4 мл) и нагревали при 150°С в течение 36 ч. Добавляли дополнительное количество трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (35 мг, 0,16 ммоль), и нагревание продолжали еще в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали и концентрировали в вакууме, затем разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали соляным раствором, высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 0 до 5% метанола в дихлорметане) получили {(1S,2R)-2-[6-карбамоил-5-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир (12 мг, 18%) в виде светло-коричневого аморфного остатка. ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z.481 [М+Н].
Стадия 11
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
{(1S,2R)-2-[6-Карбамоил-5-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир (23 мг, 0,048 ммоль) растворяли в дихлорметане (1 мл), затем охлаждали до 0°С. Добавляли по каплям трифторуксусную кислоту (0,5 мл, 6,5 ммоль), затем реакционную смесь подогревали до 25°С. Через 2 ч смесь охлаждали в ледяной бане и нейтрализовали раствором бикарбоната натрия. Смесь экстрагировали этилацетатом, и объединенные органические слои промывали соляным раствором, высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 0 до 100% раствора 0,1:0,01 метанол: NH4OH в дихлорметане) получили 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (5,8 мг, 32%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.74-11.82 (m, 1Н) 8.35-8.44 (m, 1Н) 8.14 (s, 1Н) 7.90 (d, J=8.3 Гц, 1Н) 7.60-7.67 (m, 1Н) 7.32 (d, J=3.3 Гц, 1Н) 6.80 (d, J=7.6 Гц, 1Н) 6.66 (d, J=8.3 Гц, 1Н) 6.40 (d, J=3.3 Гц, 1Н) 3.86 (s, 3Н) 3.11-3.17(m, 1Н) 1.50-1.75 (m, 8Н) 1.23-1.36 (m, 3Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 381 [М+Н].
Пример 12
6-((1R2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
Этил-6-хлор-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
В трубку под давлением загружали этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилат (300 мг, 1,36 ммоль), 6-циклопропилпиридин-2-амин (273 мг, 2,04 ммоль) и ацетонитрил (8 мл) и нагревали при 140°С в течение 20 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь концентрировали в вакууме, и полученный остаток очищали хроматографии (силикагель, 50 мкм, 80 г, Analogix, от 0 до 10% ацетона в дихлорметане, 20 мин) с получением этил-6-хлор-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (145 мг, 34%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 6 млн-1 10.64 (br. s., 1Н) 9.39 (s, 1Н) 7.63 (m, J=7.83 Гц, 1Н) 6.94 (d, J=7.58 Гц, 1Н) 6.78 (d, J=8.08 Гц, 1Н) 4.12 (s, 3Н) 1.99-2.10 (m, 1Н) 1.06-1.12 (m, 4Н). ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 319 [М+Н].
Стадия 2
6-Хлор-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Этил-6-хлор-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (140 мг, 439 мкмоль) и аммиак (7 М в метаноле, 9,44 г, 12 мл, 84,0 ммоль) нагревали при 50°С в запаянной трубке в течение 21 ч. После охлаждения до комнатной температуры в результате концентрирования в вакууме получили 6-хлор-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид (112 мг, 88%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 11.51 (br. s., 1H) 9.16 (s, 1H) 8.16 (br. s., 1H) 7.52 (t, J=7.74 Гц, 1H) 6.86-6.96 (m, 1H) 6.68 (d, J=7.93 Гц, 1H) 5.65 (br. s., 1H) 1.99-2.10 (m, 1H) 1.06-1.12 (m, 4H). ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z. 290 [M+Н]. Неочищенный продукт использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 3
трет-Бутил-(1R,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
К перемешанному раствору 6-хлор-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (104 мг, 359 мкмоль) в N-метил-2-пирролидиноне (5 мл) добавляли ДМАП (47 мг, 377 мкмоль) и трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (154 мг, 718 мкмоль). Смесь нагревали до 150°С в течение 1,5 суток, затем колбу продували потоком N2 при нагревании при 140°С для выпаривания летучих растворителей. Затем полученный остаток очищали хроматографией (силикагель, 50 мкм, 60 г, Analogix, от 97:2,75:0,15 до 84:15,2:0,8 дихлорметан: МеОН: NH4OH, 30 мин) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (126 мг, содержащий некоторое количество остаточного NMP) в виде коричневого вязкого масла. 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 11.43 (br. s., 1Н) 8.17 (br. s., 1Н) 8.03 (br. s., 1H) 7.44 (br. s., 1H) 7.03 (br. s., 1H) 6.80 (br. s., 1H) 6.60 (br. s., 1H) 5.76 (br. s., 1H) 5.49 (br. s., 1H) 3.82 (br. s., 1H) 3.24 (br. s., 1H) 2.03 (br. s., 1H) 1.32-1.91 (m, 8H) 1.45 (s., 9H) 1.05 (d, J=16.62 Гц, 4H). ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 468 [M+Н]. Это вещество использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (25 мг, 53,5 мкмоль) в дихлорметане (4 мл) добавляли ТФУ (370 мкг, 0,25 мкл, 3,24 мкмоль). Через 6 ч смесь концентрировали в вакууме, затем очищали флэш-хроматографией (сферический силикагель, 20-45 мкм, 25 г, Versaflash от Supelco, от 97:2,75:0,15 до 84:15,2:0,8 дихлорметан: МеОН: NH4OH, 30 мин) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (13 мг, 10%, две стадии) в виде коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн1 11.43 (br. s., 1Н) 8.17 (br. s., 1Н) 8.03 (br. s., 1H) 7.44 (br. s., 1H) 7.03 (br. s., 1H) 6.80 (br. s., 1H) 6.60 (br. s., 1H) 5.76 (br. s., 1H) 5.49 (br. s., 1H) 3.82 (br. s., 1H) 3.24 (br. s., 1H) 2.03 (br. s., 1H) 1.32-1.91 (m, 8H) 1.05 (d, J=16.62 Гц, 4H). ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 368 [M+Н].
Пример 13
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(5-фтор-6-метилпиридин-2-иламино пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
Этил-6-хлор-4-(5-фтор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
В трубку под давлением загружали этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилат (300 мг, 1,36 ммоль), 5-фтор-6-метилпиридин-2-амин (257 мг, 2,04 ммоль) и ацетонитрил (8 мл), затем нагревали при 140°С в течение 3 суток. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали в вакууме, и остаток очищали хроматографией (силикагель, 50 мкм, 80 г, Analogix, от 0 до 10% ацетона в дихлорметане, 25 мин) с получением этил-6-хлор-4-(5-фтор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (69 мг, 16%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн1 10.72 (br. s., 1Н) 9.06 (s, 1Н) 7.38 (s, 1Н) 6.74-6.85 (m, 1Н) 4.58 (q, J=7.07 Гц, 2Н) 2.56 (d, J=3.03 Гц, 3Н) 1.53 (t, J=7.07 Гц, 3Н) 1.27 (s, 1Н). ЖХМС (ЭИ/ХИ) т/г: 311 [М+Н].
Стадия 2
6-Хлор-4-(5-Фтор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Этил-6-хлор-4-(5-фтор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (111,2 мг, 358 мкмоль) добавляли в трубку под давлением, содержащую 7 М аммиак в метаноле (9,44 г, 12 мл, 84,0 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 50°С в течение 6 ч, затем концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(5-фтор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (110 мг, 100%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн1 11.67 (br. s., 1Н) 9.10 (s, 1Н) 8.17 (br. s., 1Н) 7.35 (t, J=8.50 Гц, 1H) 6.79 (dd, J=8.69, 3.02 Гц, 1H) 5.67 (br. s., 1H) 2.54 (d, J=3.02 Гц, 3H). ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 282 [М+Н]. Неочищенный продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 3
трет-Бутил-(1S.2R)-2-(6-карбамоил-5-(5-фтор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
К раствору 6-хлор-4-(5-фтор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (109 мг, 387 мкмоль) в N-метил-2-пирролидиноне (2,4 мл) добавляли ДМАП (50,7 мг, 406 мкмоль) и трет-бутил-(18, 2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (166 мг, 774 мкмоль), и смесь нагревали до 150°С в течение 1,5 суток. В смесь продували потоком N2, все еще нагревая ее при 140°С, для выпаривания NMP, затем реакционную смесь очищали хроматографией (силикагель, 50 мкм, 40 г, Analogix, от 97:2,75:0,15 до 84:15,2:0,8 дихлорметан: МеОН: NH4OH, 30 мин) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(5-фтор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (82 мг, 23%) в виде коричневого масла. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 11.43 (s, 1Н) 8.24 (s, 1Н) 8.08 (br. s., 2Н) 7.22-7.37 (m, 1Н) 6.66-6.77 (m, 1Н) 5.64 (d, J=3.28 Гц, 1Н) 4.02 (br. s., 2Н) 2.49 (d, J=3.03 Гц, 3H) 1.67-1.92 (m, 2Н) 1.35-1.65 (m, 8Н). ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 460 [М+Н].
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(5-фтор-6-метилпиридин-2-иламино пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(5-фтор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (40 мг, 87,0 мкмоль) в дихлорметане (3,2 мл) добавляли ТФУ (592 мкг, 0,400 мкл, 5,19 мкмоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь концентрировали в вакууме, затем очищали хроматографией (сферический силикагель, 20-45 мкм, 23 г, Versaflash от Supelco, от 99:0,95:0,05 до 90:9,5:0,5 дихлорметан : МеОН : NH4OH, 25 мин) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-фтор-6-метилпиридин-2-иламинопиридазин-3-карбоксамида (10 мг, 32% выход) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн1 11.65 (s, 1Н) 8.38 (br. s., 1Н) 7.97 (s, 1Н) 7.54-7.69 (m, 2Н) 6.75-6.94 (m, 2Н) 3.15 (d, J=3.03 Гц, 1Н) 2.47 (d, J=2.78 Гц, 3Н) 1.44-1.84 (m, 8Н) 1.33 (br. s., 2Н). ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 360 [М+Н].
Пример 14
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
6-Хлор-4-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир
4,6-Дихлор-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (500 мг, 2,26 ммоль) и 6-этилпиридин-2-амин (415 мг, 3,39 ммоль) растворяли в ацетонитриле (7 мл), затем нагревали при 140°C в течение 3 суток. Реакционную смесь охлаждали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 5 до 50% этилацетата в гексанах) получили 6-хлор-4-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (246 мг, 35%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 10.68 (br. s., 1Н) 9.30 (s, 1Н) 7.61 (t, J=7.8 Гц, 1Н) 6.91 (d, J=7.3 Гц, 1Н) 6.77 (d, J=7.8 Гц, 1Н) 4.57 (q, J=7.2 Гц, 2Н) 2.86 (q, J=7.6 Гц, 2Н) 1.52 (t, J=7.1 Гц, 3Н) 1.38 (t, J=7.5 Гц, 3Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 307 [М+Н].
Стадия 2
6-Хлор-4-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
6-Хлор-4-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (241 мг, 0,786 ммоль) суспендировали в 7 М аммиаке в метаноле (9 мл). Через 3 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амида (218 мг, 100%) в виде беловатого твердого вещества, которое использовали непосредственно в следующей стадии без очистки. ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 278 [М+Н].
Стадия 3
{(1S,2R)-2-[6-Карбамоил-5-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир
6-Хлор-4-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (218 мг, 0,785 ммоль) и трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (336 мг, 1,57 ммоль) растворяли в N-метилпирролидиноне (4 мл) и нагревали при 150°С в течение 40 ч. Добавляли дополнительное количество трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (168 мг, 0,78 ммоль), и нагревание продолжали еще в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали и концентрировали в вакууме, затем разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали соляным раствором, высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 0 до 5% метанола в дихлорметане) получили {(1S,2R)-2-[6-карбамоил-5-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир (167 мг, 46%) в виде светло-коричневого аморфного остатка. 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 11.44 (s, 1Н) 8.47 (s, 1Н) 7.97-8.03 (m, 1Н) 7.52 (t, J=7.6 Гц, 1Н) 7.22-7.26 (m, 1 Н) 6.78 (d, J=7.2 Гц, 1H) 6.70 (d, J=7.9 Гц, 1H) 5.38-5.43 (m, 1Н) 4.92-5.00 (m, 1Н) 3.97-4.08 (m, 2Н) 2.80 (q, J=7.6 Гц, 2H) 1.58-1.96 (m, 8Н) 1.41 (s, 9Н) 1.31-1.39 (m, 3Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z: 456 [М+Н].
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
{(1S,2R)-2-[6-Карбамоил-5-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир (167 мг, 0,367 ммоль) растворяли в дихлорметане (4 мл), затем охлаждали до 0°С. Добавляли по каплям трифторуксусную кислоту (2 мл, 26 ммоль), затем реакционную смесь подогревали до 25°С. Через 5 ч смесь охлаждали в ледяной бане и нейтрализовали раствором бикарбоната натрия. Смесь экстрагировали этилацетатом, и объединенные органические слои промывали соляным раствором, высушивали (сульфат натрия), фильтровали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 5 до 80% раствора 0,1:0,01 метанол : NH4OH в дихлорметане) получили 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-этил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид (66 мг, 50%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.66 (s, 1Н) 8.35-8.40 (гл, 1Н) 8.09 (s, 1Н) 7.63 (dd, J=8.2, 7.5 Гц, 1Н) 7.62 (br. s., 1Н) 6.86 (d, J=7.6 Гц, 1Н) 6.79 (d, J=7.6 Гц, 1Н) 6.76 (d, J=7.8 Гц, 1Н) 3.73 - 3.86 (m, 1Н) 3.10-3.15 (m, 1Н) 2.75 (q, J=7.6 Гц, 2Н) 1.48-1.73 (m, 7 Н) 1.27 (t, J=7.7 Гц, 3Н) 1.24-1.37 (m, 2Н); ЖХМС (ЭИ/ХИ) m/z.356 [М+Н].
Пример 15
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(5,6-диметил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
Этил-6-хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
В толстостенную запаиваемую трубку загружали этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилат (300 мг, 1,36 ммоль) и 5,6-диметилпиридин-2-амин (249 мг, 2,04 ммоль). К смеси добавляли ацетонитрил (8,00 мл), и реакционную смесь нагревали при перемешивании в масляной бане при 140°С в течение 20 ч. После охлаждения до комнатной температуры остаток суспендировали в дихлорметане и очищали флэш-хроматографией (силикагель 20-45 мкм, 40 г, Thomson), элюируя смесью от 0 до 10% в течение 20 мин ацетон/дихлорметан с получением этил-6-хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (195 мг, 46,8%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 10.54 (s, 1Н), 9.14 (s, 1Н), 7.41 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 6.70 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 4.55 (q, J=7.2 Гц, 2Н), 2.50 (s, 3Н), 2.26 (s, 3Н), 1.50 (t, J=7.2 Гц, 3Н); ЖХМС 307,0 [М+Н]+.
Стадия 2
6-Хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
В круглодонной колбе на 50 мл суспендировали этил-6-хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (929 мг, 3,03 ммоль) в 7 М растворе аммиака в метаноле (7,87 г, 10,0 мл, 70,0 ммоль). Колбу запаивали и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Растворители выпаривали, и твердый остаток высушивали в высоком вакууме с получением 6-хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (841 мг, 100% выход) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 11.37 (br. s., 1Н), 9.11 (s, 1Н), 8.09 (br. s., 1Н), 7.32 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 6.63 (d, J=8.1 Гц, 1Н), 5.59 (br. s., 1Н), 2.43 (s, 3Н), 2.19 (s, 3Н); ЖХМС 278,0 [М+Н]+.
Стадия 3
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
6-Хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид (841 мг, 3,03 ммоль) растворяли в NMP (2 мл), и к этому раствору добавляли трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (649 мг, 3,03 ммоль), и реакционную смесь нагревали в масляной бане при перемешивании при 120°С в течение 24 ч. Добавляли второй эквивалент трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (649 мг, 3,03 ммоль), и реакцию продолжали в течение 72 ч. Смесь охлаждали, затем растворитель NMP отгоняли в высоком вакууме. Остаток растворяли в дихлорметане, содержащем несколько капель метанола, и пропускали через пробку из силикагеля, элюируя 5% раствора 9:1 MeOH:NH4OH в CH2Cl2, с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата, смешанного с 6-хлор-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамидом. Смесь суспендировали в CH2Cl2 (3 мл), затем добавляли ТФУ (1,48 г, 13,0 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь концентрировали в вакууме, и полученный остаток очищали хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 50 г, Versaflash Supelco, от 0 до 10% раствора 9:1 MeOH:NH4OH в CH2Cl2, 20 мин) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (550 мг, 49% выход за две стадии) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.48 (s, 1Н), 8.36 (br. s., 1Н), 8.05 (s, 1Н), 7.60 (br. s., 1Н), 7.47 (d, J=8.1 Гц, 1H), 6.80 (d, J=8.1 Гц, 1H), 6.73 (d, J=8.1 Гц, 1H), 3.87 (br. s., 1H), 3.15 (br. s., 1H), 2.45 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.44-1.79 (m, 8H), 1.32 (br. s., 2Н); ЖХМС 356,1 [M+H]+.
Пример 16
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(5-хлор-6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
Метил-6-хлор-4-(5-хлор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
В трубку под давлением загружали метил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилат (2 г, 9,66 ммоль) и 5-хлор-6-метилпиридин-2-амин (2,76 г, 19,3 ммоль). К смеси добавляли ацетонитрил (12 мл), и реакционную смесь нагревали при перемешивании при 130°С в течение 1,5 суток. После охлаждения до комнатной температуры ацетонитрил удаляли в вакууме. Полученный остаток очищали хроматографией (силикагель, 80 г, 50 мкм от фирмы Analogix, от 0% до 5% ацетона в дихлорметане за 20 мин., удерживание при 5% в течение 5 мин, затем повышение градиента от 5% до 10% за следующие 20 мин) с получением метил-6-хлор-4-(5-хлор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (618 мг, 20%) в виде оранжевого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 10.70 (br. s., 1Н), 9.18 (s, 1Н), 7.63 (d, J=8.34 Гц, 1Н), 6.78 (d, J=8.34 Гц, 1Н), 4.12 (s, 3Н), 2.66 (s, 3Н), 1.58 (br. s., 1Н); ЖХМС 313 [М+Н]+.
Стадия 2
6-Хлор-4-(5-хлор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
В трубку под давлением загружали метил-6-хлор-4-(5-хлор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин -3-карбоксилат (600 мг, 1,92 ммоль) и раствор аммиака в метаноле (7 М, 20 мл, 140 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 50°С и перемешивали в течение 18 ч. Смесь охлаждали и концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(5-хлор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (665 мг неочищенного продукта, 116%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 11.69 (br. s., 1Н), 9.18 (s, 1Н), 8.20 (br. s., 1Н), 7.61 (d, J=8.59 Гц, 1Н), 6.77 (d, J=8.59 Гц, 1Н), 5.71 (br. s., 1Н), 2.65 (s, 3Н). ЖХМС 298 [М+Н]+. Это вещество использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 3
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(5-хлор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
В трубку под давлением загружали 6-хлор-4-(5-хлор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид (600 мг, 2,01 ммоль), трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (863 мг, 4,03 ммоль) и NMP (6 мл) с получением желтой суспензии. Реакционную смесь перемешивали при 140°С в течение 2,5 суток. После охлаждения до комнатной температуры NMP отгоняли, используя аппарат Kugelrohr, с получением коричневого вязкого масла. Это неочищенное вещество растворяли в дихлорметане и метаноле и адсорбировали на силикагеле. В результате очистки хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 50 г, колонка Versaflash от фирмы Supelco, элюируя от 100% дихлорметана до смеси 84:15,2:0,8 дихлорметан/метанол/NH4OH) получили трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(5-хлор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат (242,3 мг) в виде коричневого твердого вещества. Затем этот продукт растворяли в дихлорметане (3 мл) и добавляли ТФУ (2,96 г, 2 мл, 26,0 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Избыток ТФУ и дихлорметана удаляли в вакууме, и полученный остаток очищали хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 50 г, Versaflash от Supelco, элюируя градиентом от 0,05:0,95:99 NH4OH: метанол: дихлорметан вплоть до 0,6:11,4:88 NH4OH:метанол:дихлорметан за 40 мин) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-хлор-6-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (152 мг, 4%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.77 (br. s., 1Н), 8.42 (br. s., 1Н), 8.05 (br. s., 1 Н), 7.59-7.80 (m, 2Н), 6.78-6.99 (m, 2Н), 3.18 (br. s., 1H), 2.57 (br. s., 4 H), 1.21-1.42 (m, 2H), 1.20 -1.81 (m, 8 H). ЖХМС 376 [M+H]+.
Пример 17
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(5-хлор-6-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
Стадия 1
2-Диазо-3-оксо-пентандикарбоновой кислоты диметиловый эфир
К перемешанному раствору диметил-3-оксопентандиоата (50,0 г, 287,1 ммоль) и триэтиламина (47,8 мл, 344,5 ммоль) в ацетонитриле (1,2 л) при 0°С добавляли порциями 4-ацетамидобензолсульфонилазид (69,0 г, 287,1 ммоль). После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч (ТСХ на силикагеле; этилацетат: гексан = 1:4, Rf=0,3; показала активность KMnO4). Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали с получением вязкой массы, которую разбавляли н-гексаном (3 л). Нежелательный твердый побочный продукт удаляли фильтрованием, затем фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением 2-диазо-3-оксо-пентандикарбоновой кислоты диметилового эфира (50,0 г, выход неочищенного продукта 87%) в виде светло-желтой жидкости, которую непосредственно использовали для следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 2
4,6-Дигидрокси-пиридазин-3-карбоновой кислоты метиловый эфир
Смесь 2-диазо-3-оксо-пентандикарбоновой кислоты диметилового эфира (50,0 г, 249,8 ммоль) и трифенилфосфина (65,5 г, 249,8 ммоль) в диэтиловом эфире (500 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Органический растворитель удаляли в вакууме, а затем к остатку добавляли уксусную кислоту (500 мл) и воду (50 мл), и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 10 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением вязкого остатка. В результате растирания с этилацетатом получили желтое твердое вещество, которое очищали хроматографией (силикагель, 100-200 меш, 1-5% метанола в дихлорметане) с получением 4,6-дигидрокси-пиридазин-3-карбоновой кислоты метилового эфира (12,8 г, 30%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС 169,2 [М+Н]+.
Стадия 3
4,6-Дихлор-пиридазин-3-карбоновой кислоты метиловый эфир
Смесь 4,6-дигидрокси-пиридазин-3-карбоновой кислоты метилового эфира (10,5 г, 61,7 ммоль) и POCl3 (70 мл) нагревали до 95°С в течение 5 ч. Избыток POCl3 удаляли при пониженном давлении, затем неочищенный остаток добавляли к ледяной воде (250 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные экстракты высушивали, затем концентрировали с получением неочищенного остатка, который очищали хроматографией (силикагель, 100-200 меш, 30% этилацетат в гексане) с получением 4,6-дихлор-пиридазин-3-карбоновой кислоты метилового эфира (9,2 г, 72%) в виде беловатого твердого вещества. ЖХМС: 207,0 [М+Н]+.
Стадия 4
6-Хлор-4-(5,6-диметокси-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты метиловый эфир
Смесь 4,6-дихлор-пиридазин-3-карбоновой кислоты метилового эфира (1,0 г, 4,83 ммоль) и 5,6-диметоксипиридин-2-амина (968 мг, 6,28 ммоль) растворяли в ацетонитриле (5 мл) и нагревали при 70°С в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме, и полученную неочищенную массу очищали хроматографией (силикагель, 100-200 меш, 10-70% этилацетат в гексане) с получением 6-хлор-4-(5,6-диметокси-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты метилового эфира (830 мг, 53%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС: 325,2 [М+Н]+.
Стадия 5
6-Хлор-4-(5,6-диметокси-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амид
6-Хлор-4-(5,6-диметокси-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты метиловый эфир (1,7 г, 5,2 ммоль) суспендировали в аммиаке в метаноле (7 н., 30,0 мл, 210 ммоль), и колбу запаивали. После перемешивания в течение 6 ч при комнатной температуре смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(5,6-диметокси-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амида (1,55 г, 96%) в виде желтого порошка. ЖХМС: 310,4 [М+Н]+.
Стадия 6
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(5,6-диметоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Способ А
В трубку под давлением загружали 6-хлор-4-(5,6-диметоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид (310 мг, 1,00 ммоль), трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (429 мг, 2,00 ммоль) и NMP (4 мл). Реакционную смесь перемешивали при 140°С в течение 18 ч, затем NMP отгоняли, используя аппарат Kugelrohr, в высоком вакууме при 120°С с получением коричневого вязкого масла. Это неочищенное масло растворяли в дихлорметане и метаноле, затем адсорбировали на силикагеле и очищали хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 11 г, Versaflash от Supelco, элюируя от 100% дихлорметана до 88:11,4:0,6 дихлорметан: метанол: NH4OH, 40 мин) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(5,6-диметоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата в виде коричневого вязкого масла (291,3 мг). Это масло растворяли в дихлорметане (2 мл) и добавляли ТФУ (740 мг, 500 мкл, 6,49 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. ТФУ и дихлорметан удаляли в вакууме, и полученный остаток очищали хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 50 г, Versaflash от Supelco, элюируя от 0,1:1,9:98 NH4OH: метанол: дихлорметан до 0,6:11,4:88 NH4OH метанол: дихлорметан, 40 мин) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5,6-диметоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (81 мг, 21%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.33 (br. s., 1Н), 8.34 (br. s., 1Н), 7.59 (br. s., 1H), 7.46 (s, 1H), 7.35 (d, J=8.08 Гц, 1H), 6.70 (d, J=7.83 Гц, 1H), 6.57 (d, 7=8.34 Гц, 1H), 3.95 (s, 3Н), 3.76 (s, 3Н), 3.10 (br. s., 1H), 2.03 (br. s., 2H), 1.18-1.78 (m, 8 H), 0.98-1.12 (m, 1Н);ЖХМС 388 [M+H]+.
Способ В
К 6-хлор-4-(5,6-диметоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамиду (500 мг, 1,6 ммоль) и трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамату (692 мг, 3,2 ммоль) в NMP (1,5 мл)добавляли метокситриметилсилан (0,5 мл, 3,6 ммоль), и смесь нагревали до 150°С в течение 65 ч. Смесь концентрировали в высоком вакууме с получением липкой неочищенной массы, которую очищали хроматографией (силикагель, 100-200 меш, 1-10% метанола в дихлорметане) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5,6-диметокси-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амида (220 мг, 35%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС 388 [М+Н]+.
Пример 18
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
Этил-6-хлор-4-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
К раствору этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (790 мг, 3,57 ммоль) в ацетонитриле (11,9 мл) добавляли 4,6-диметилпиридин-2-амин (873 мг, 7,15 ммоль) и нагревали при 140°С в запаянном флаконе в течение 20 ч. Смесь концентрировали в вакууме, затем очищали хроматографией (силикагель, 0-8% ацетона в дихлорметане) с получением этил-6-хлор-4-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (165 мг, 538 мкмоль, 15%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 10.60 (s, 1Н), 9.24 (s, 1Н), 8.75 (S, 1Н), 8.59 (s, 1Н), 4.58 (q, J=7.1 Гц, 2Н), 2.53 (s, 3Н), 2.33 (s, 3Н), 1.52 (t, J=7.1 Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 306,1 [М+Н].
Стадия 2
6-Хлор-4-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору этил-6-хлор-4-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (165 мг, 538 мкмоль) в метаноле (1 мл) добавляли аммиак в метаноле (4,72 г, 6 мл, 42,0 ммоль), и смесь перемешивали при 50°С в течение 16 ч. Затем смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (140 мг, 504 мкмоль, 94%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.92 (s, 1Н), 9.13 (s, 1Н), 8.86 (s, 1Н), 8.21 (s, 1Н), 6.84 (s, 1Н), 6.76 (s, 1Н), 2.45 (s, 3Н), 2.29 (s, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 277,9 [М+Н].
Стадия 3
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
К раствору 6-хлор-4-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (140 мг, 504 мкмоль) в NMP (2,52 мл) добавляли трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (216 мг, 1,01 ммоль), и смесь нагревали при 130°С в течение 72 ч. Реакционную смесь охлаждали и разбавляли этилацетатом и соляным раствором. Органическую фазу промывали соляным раствором (2х) и водой (1х), затем органическую фазу концентрировали в вакууме, а затем очищали хроматографией (силикагель, 40-100% этилацетата в гексанах) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (75 мг, 98,8 мкмоль, 20%) в виде оранжевого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 456,2 [М+Н].
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида 2,2,2-трифторацетат
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (75 мг, 165 мкмоль) в дихлорметане (5 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (1,88 г, 1,27 мл, 16,5 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь концентрировали, а затем остаток разбавляли дихлорметаном и нейтрализовали NH4OH. В результате очистки хроматографией (силикагель, 0-100% смеси 10:0.ю5:89,5 метанол: NH4OH: дихлорметан в дихлорметане) с последующей дополнительной очисткой ВЭЖХ (С-18, градиент 10-100% воды в ацетонитриле) получили 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида 2,2,2-трифторацетат (33 мг, 70,3 мкмоль, 43%) в виде хлопьевидного белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.66 (s, 1Н), 8.38 (s, 1Н), 8.25 (s, 1Н), 7.86 (br. s, 1Н), 7.40 (br. s, 2Н), 6.76 (s, 1Н), 6.65 (s, 1Н), 4.40 (s., 1Н), 3.63 (s, 1Н), 2.48 (s, 3Н), 1.58-1.86 (m, 8Н), 1.46 (m, 2Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 356,1 [М+Н].
Пример 19
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
Метил-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксилат
Смесь метил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (0,69 г, 3,33 ммоль) и 6-трет-бутилпиридин-2-амина (1,00 г, 6,67 ммоль) растворяли в ацетонитриле (3 мл) и нагревали при 130°С в течение 14 ч. Темно-коричневую смесь охлаждали, концентрировали на силикагеле и очищали хроматографией (силикагель, 80 г, 0-20% ацетона в дихлорметане, 40 мин) с получением метил-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксилата (372 мг, 1,16 ммоль, 35%) в виде желтого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 321,0 [М+Н].
Стадия 2
4-(6-трет-Бутилпиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксамид
Метил-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксилат (360 мг, 1,12 ммоль) суспендировали в 7 н. аммиаке в метаноле (12 мл, 84,0 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме с получением 4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксамида (317 мг, 1,03 ммоль, 92%) в виде желтого порошка. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 306,0 [М+Н]. Это вещество использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 3
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(5-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-карбамоилпиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
Перемешанный раствор 4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксамида (317 мг, 1,04 ммоль) и трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (444 мг, 2,07 ммоль) в NMP (4 мл) нагревали при 140°С в течение 24 ч в запаянной трубке. Смесь концентрировали в вакууме (Kuglerohr, высокий вакуум) до коричневого твердого вещества. В результате очистки хроматографией (силикагель, 40 г, 0-10% раствора 9:1 МеОН в дихлорметане, 30 мин), а затем второй очистки хроматографией (силикагель, 24 г, 10% ацетона в дихлорметане, 10 мин, затем 9:1:90 МеОН: NH4OH: ДХМ, 10 мин) получили трет-бутил-(1S,2R)-2-(5-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-карбамоилпиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат (197 мг, 407 мкмоль, 39%) в виде коричневой вязкой смолы. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 484,2 [М+Н]. Это вещество содержало небольшие количества остаточного NMP, и его использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(5-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-карбамоилпиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (192 мг, 397 мкмоль) в дихлорметане (2 мл) добавляли ТФУ (747 мг, 505 мкл, 6,55 ммоль). Через 14 ч смесь концентрировали в вакууме, затем очищали хроматографией (сферический силикагель, 50 г, 0-20% раствора 9:1 МеОН: NH4OH в дихлорметане, 30 мин) с получением светло-коричневой смолы. Эту смолу растирали с этанолом и концентрировали с получением желтого твердого вещества. В результате еще одного растирания с горячим этанолом, а затем декантирования супернатанта получили 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид (57 мг, 149 мкмоль, 37%) в виде кремового порошка после высушивания в высоком вакууме. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.80 (s, 1Н), 8.39 (d, J=2.0 Гц, 1H), 7.98 (s, 1Н), 7.55-7.76 (m, 2Н), 6.96-7.09 (m, 1Н), 6.77 (dd, J=8.1, 0.5 Гц, 1H), 6.70 (d, J=8.1 Гц, 1H), 3.67 (br. s., 1H), 3.03-3.12 (m, 1H), 1.45-1.72 (m, 8H), 1.22-1.41 (m, 11H); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 384,2 [М+Н].
Пример 20
6-(циклогексиламино)-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Суспензию 6-хлор-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (100 мг, 345 мкмоль, полученного, как описано для примера 12) и циклогексиламина (342 мг, 395 мкл, 3,45 ммоль) в 1М-метил-2-пирролидиноне (0,5 мл) нагревали при 130°С в течение 14 ч. Смесь охлаждали и концентрировали в высоком вакууме при 120°С, чтобы удалить весь остаточный растворитель и исходное аминное соединение. Полученное коричневое твердое вещество очищали хроматографией (силикагель, 11 г, сферический, 0-20% ацетона в дихлорметане, 20 мин) с получением 6-(циклогексиламино)-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (81 мг, 230 мкмоль, 67% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.72 (br. s., 1Н), 8.37 (br. s., 1Н), 7.83 (s, 1Н), 7.62 (br. s., 1H), 7.56 (t, J=7.7 Гц, 1H), 7.10 (d, J=7.8 Гц, 1H), 6.88 (d, J=7.3 Гц, 1H), 6.66 (d, J=8.1 Гц, 1H), 3.52-3.69 (m, 1H), 2.04-2.18 (m, 1H), 1.90-2.00 (m, 2H), 1.72-1.82 (m, 2H), 1.63 (d, J=12.6 Гц, 1H), 1.24 -1.45 (m, 4H), 1.09-1.23 (m, 1H), 0.95-1.03 (m, 4H); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 353,1 [М+Н].
Пример 21
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
Метил-6-хлор-4-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
В толстостенную, многократно запаиваемую трубку загружали метил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилат (1,3 г, 6,28 ммоль) и 6-циклобутилпиридин-2-амин (931 мг, 6,28 ммоль) в ацетонитриле (6,00 мл). Трубку нагревали при перемешивании в масляной бане при 80°С в течение 48 ч. Растворитель выпаривали в вакууме, остаток растворяли в дихлорметане, а затем очищали флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 50 г, Versaflash, Supelco), элюируя от 0 до 10% смеси дихлорметан/ацетон в течение 20 мин с получением метил-6-хлор-4-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (350 мг, 17,5% выход) в виде светло-желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 10.62 (s, 1Н), 9.49 (s, 1Н), 7.59 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 6.85 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 6.73 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 4.10 (s, 3Н), 3.67 (quin, J=8.6 Гц, 1Н), 2.24 -2.58 (m, 4Н), 1.85-2.22 (m, 2Н); ЖХМС 319,0 [M+H]+.
Стадия 2
6-Хлор-4-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
В круглодонной колбе на 100 мл суспендировали метил-6-хлор-4-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (350 мг, 1,1 ммоль) в 7 М аммиаке в метаноле (7,87 г, 10,0 мл, 70,0 ммоль). Колбу запаивали и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Образовавшееся твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали в высоком вакууме с получением 6-хлор-4-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (281 мг, 84,3% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.95 (s, 1Н), 9.34 (s, 1Н), 8.85 (s, 1Н), 8.20 (s, 1Н), 7.69 (t, J=7.7 Гц, 1Н), 6.91 (dd, J=7.7, 3.6 Гц, 2Н), 3.66 (quin, J=8.6 Гц, 1Н), 2.19-2.40 (m, 4Н), 1.78-2.15 (m, 2Н); ЖХМС 304,1 [М+Н]+.
Стадия 3
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
В круглодонной колбе на 25 мл раствор 6-хлор-4-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (281 мг, 925 мкмоль) в Ы-метил-2-пирролидиноне (3,5 мл) обрабатывали трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбаматом (397 мг, 1,85 ммоль), и смесь нагревали до 120°С в течение 72 ч. После охлаждения до комнатной температуры растворитель выпаривали в высоком вакууме, и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 80 г, Versaflash, Supelco), элюируя от 0 до 5% смеси (МеОН, содержащий 10% NH4OH)/CH2Cl2 в течение 20 мин, с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (112 мг, 25,1% выход) в виде светло-коричневой пены. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 11.49 (br. s., 1Н), 8.38 (s, 1Н), 8.12 (d, J=3.0 Гц, 1Н), 7.42 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 7.23 (s, 1Н), 6.67 (d, J=7.2 Гц, 1Н), 6.59 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 5.89 - 6.22 (m, 2Н), 3.72-4.08 (m, 2Н), 3.55 (quin, J=8.6 Гц, 1Н), 1.76-2.11 (m, 4Н), 1.19-1.74 (m, 19Н); ЖХМС 482,1 [М+Н]+.
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
В круглодонной колбе на 25 мл раствор трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (112 мг, 233 мкмоль) в CH2Cl2 (5,0 мл) обрабатывали ТФУ (2,22 г, 1,5 мл, 19,5 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворители выпаривали, и остаток очищали флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 80 г, Versaflash, Supelco), элюируя от 0 до 10% (МеОН, содержащий 10% NH4OH)/CH2Cl2 в течение 30 мин, с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (48 мг, 126 мкмоль, 54,1% выход) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 11.43 (br. s., 1Н), 8.45 (s, 1Н), 8.03 (br. s., 1Н), 7.51 (t, J=7.7 Гц, 1H), 6.75 (d, J=7.2 Гц, 1H), 6.68 (d, J=7.9 Гц, 1H), 5.62 (d, J=8.3 Гц, 1H), 5.37 (br. s., 1H), 3.88 (br. s., 1H), 3.65 (quin, J=8.5 Гц, 1H), 3.22 (d, J=4.9 Гц, 1H), 2.27 - 2.51 (m, 4H), 1.99-2.22 (m, 1H), 1.94 (dd, J=11.1, 5.5 Гц, 1H), 1.07-1.84 (m, 10Н); ЖХМС 382,0 [M+H]+.
Пример 22
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-бензо[d]имидазол-4-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
Этил-6-хлор-4-(1-метил-1Н-бензо[d]имидазол-4-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
В толстостенную, многократно запаиваемую трубку загружали этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилат (500 мг, 2,26 ммоль) и 1-метил-1 Н-бензо[d]имидазол-4-амина дигидрохлорид (498 мг, 2,26 ммоль) в ацетонитриле (3,5 мл) при перемешивании. Добавляли DIPEA (877 мг, 1,19 мл, 6,79 ммоль), и трубку нагревали при перемешивании в масляной бане при 80°С в течение 24 ч. Растворители выпаривали, и неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (силикагель 20-45 мкм, 80 г, Thomson, от 0 до 20% ацетона в дихлорметане, 20 мин) с получением этил-6-хлор-4-(1-метил-1Н-бензо[d]имидазол-4-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (461 мг, 1,39 ммоль, 61%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 10.42 (s, 1Н), 7.92 (s, 1Н), 7.30-7.45 (m, 2Н), 7.23-7.28 (m, 1Н), 7.20 (s, 1Н), 4.59 (q, J=7.1 Гц, 2Н), 3.91 (s, 3Н), 1.51 (t, J=7.2 Гц, 3Н); ЖХМС 332,0 [М+Н]+.
Стадия 2
6-Хлор-4-(1-метил-1Н-бензо[d]имидазол-4-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Этил-6-хлор-4-(1-метил-1Н-бензо[d]имидазол-4-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (285 мг, 859 мкмоль) суспендировали в аммиаке (7 М в метаноле, 7,87 г, 10,0 мл, 70,0 ммоль). Колбу запаивали и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворитель выпаривали, и остаток высушивали в высоком вакууме с получением 6-хлор-4-(1-метил-1Н-бензо[d]имидазол-4-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (260 мг, 100%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.36 (s, 1Н), 8.74 (s, 1Н), 8.22 (s, 1Н), 8.09 (s, 1Н), 7.41-7.52 (m, 1Н), 7.28-7.35 (m, 2Н), 7.23 (s, 1Н), 3.86 (s, 3Н); ЖХМС 303,0 [М+Н]+.
Стадия 3
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
Раствор 6-хлор-4-(1-метил-1Н-бензо[d]имидазол-4-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (260 мг, 859 мкмоль) в N-метил-2-пирролидиноне (3,0 мл) обрабатывали трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбаматом (368 мг, 1,72 ммоль), и смесь нагревали до 120°С в течение 72 ч. Растворитель выпаривали в высоком вакууме, и остаток очищали хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 80 г, Versaflash, Supelco, от 0 до 5% раствора 9:1 МеОН: NH4OH в CH2Cl2, 20 мин) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(1-метил-1 Н-бензо[d]имидазол-4-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (132 мг, 32%) в виде светло-коричневой пены. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 11.05 (s, 1Н), 7.89 (d, J=2.6 Гц, 1Н), 7.77 (s, 1Н), 7.39 (br. s., 1Н), 6.96-7.30 (m, 3Н), 6.40 (br. s., 1Н), 6.10-6.33 (m, 2Н), 3.78 (br. s., 4H), 3.52 (br. s., 1H), 0.95-1.70 (m, 17H); ЖХМС 481,0[M+H]+.
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-бензо[d]имидазол-4-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Раствор трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(1-метил-1Н-бензо[d]имидазол-4-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (132 мг, 275 мкмоль) в CH2Cl2 (5 мл) обрабатывали ТФУ (4,08 г, 2,76 мл, 35,8 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворитель выпаривали, и остаток очищали хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 80 г, Versaflash, Supelco, от 0 до 10% раствора 9:1 МеОН:NH4OH в CH2Cl2, 30 мин) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-бензо[d]имидазол-4-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (70 мг, 67%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.06 (s, 1Н), 8.23 (br. s., 1Н), 8.16 (s, 1Н), 7.50 (br. s., 1Н), 7.15-7.37 (m, 3Н), 6.75 (s, 1Н), 6.70 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 4.09 (br. s., 1Н), 3.84 (s, 3Н), 3.08 (br. s., 1Н), 1.54 (br. s., 6Н), 1.26 (d, J=17.0 Гц, 2H); ЖХМС 381,1 [М+Н]+.
Пример 23
4-(6-(2Н-1.2.3-Триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
Этил-4-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксилат
К раствору этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (154 мг, 695 мкмоль) в ацетонитриле добавляли 6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-амин (112 мг, 695 мкмоль) и нагревали до 140°С в течение 72 ч. Смесь охлаждали и осаждали добавлением ацетона. Смесь фильтровали, и собранное твердое вещество промывали метанолом и эфиром, затем высушивали с получением этил-4-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксилата (85 мг, 246 мкмоль, 35%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ млн-1 10.60 (s, 1Н), 9.50 (s, 1Н), 8.26 (s, 2Н), 8.08 (t, J=8.2 Гц, 1Н), 7.74 (d, J=7.8 Гц, 1Н), 7.35 (d, J=8.2 Гц, 1Н), 4.48 (q, J=7.3 Гц, 2Н), 1.40 (t, J=7.3 Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 346,0 [М+Н].
Стадия 2
4-(6-(2Н-1,2,3-Триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксамид
Аммиак в метаноле (3,94 г, 5 мл, 35,0 ммоль) добавляли к этил-4-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксилату (100 мг, 289 мкмоль) и перемешивали при 35°С в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме с получением 4-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксамида (90 мг, 284 мкмоль, 98%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ млн-1 12.30 (s, 1Н), 9.13 (s, 1Н), 9.54 (s, 1Н), 8.94 (s, 1Н), 8.29 (s, 1Н), 8.27 (s, 2Н), 8.05 (t, J=8.1 Гц, 1Н), 7.72 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 7.23 (d, J=8.1 Гц, 1Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 316,9 [М+Н].
Стадия 3
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(5-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-карбамоилпиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
К раствору 4-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксамида (90 мг, 284 мкмоль) в NMP (947 мкл) добавляли трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (122 мг, 568 мкмоль), и смесь нагревали до 140°С в течение 16 ч. Добавляли дополнительное количество трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (61 мг, 284 мкмоль), и смесь нагревали еще в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали, разбавляли этилацетатом и соляным раствором, затем фазы разделяли, и органическую фазу собирали и промывали соляным раствором (2х). Органический слой концентрировали в вакууме, затем очищали хроматографией (силикагель, 2-5% метанола в дихлорметане) с получением остатка, который растирали с этилацетатом, фильтровали и промывали эфиром с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(5-(6-(2H-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-карбамоилпиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (79 мг, 160 мкмоль, 56%) в виде коричневого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 495,1 [М+Н].
Стадия 4
4-(6-(2Н-1,2,3-Триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(5-(6-(2H-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-карбамоилпиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (79 мг, 160 мкмоль) в дихлорметане (2,5 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (364 мг, 246 мкл, 3,19 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь разбавляли дихлорметаном и 1 н. NaOH (2 мл), а затем промывали NaHCO3 и соляным раствором. Органический слой высушивали над MgSO4, затем фильтровали и концентрировали в вакууме. Смесь растворяли в этаноле и концентрировали (3х). Полученный остаток растирали с эфиром и, наконец, фильтровали с получением 4-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)пиридазин-3-карбоксамида (5 мг, 10,8 мкмоль, 7%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн1 12.12 (s, 1Н), 8.46 (s, 1Н), 8.38 (s, 2Н), 7.99 (t, 7=8.1 Гц, 1Н), 7.80 (s, 1Н), 7.62 (d, J=8.1 Гц, 1Н), 7.11 (d, J=8.2 Гц, 1Н), 6.94 (s., 1Н), 1.35-1.85 (m, 8Н), 1.46 (m, 2Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 395,1 [М+Н].
Пример 24
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
Этил-6-хлор-4-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
В толстостенную, многократно запаиваемую трубку загружали этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилат (1,5 г, 6,79 ммоль), 6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-амин (1,09 г, 8,14 ммоль), ацетонитрил (10 мл) и основание Хунига (877 мг, 1,19 мл, 6,79 ммоль). Смесь нагревали при 80°С при перемешивании в течение 3 суток, после охлаждения до комнатной температуры растворители отгоняли, и полученный неочищенный остаток очищали хроматографией (колонка 80 г, 50 мкм от фирмы Thomson, от 0 до 10% ацетона в дихлорметане, 20 мин) с получением этил-6-хлор-4-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (554 мг, 26%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 10.51 (s, 1Н), 8.94 (s, 1Н), 7.41 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 6.60 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 4.46 (q, J=7.2 Гц, 2Н), 2.92 (t, J=7.7 Гц, 2Н), 2.83 (t, J=7.4 Гц, 2Н), 1.87-2.24 (m, 2Н), 1.42 (t, J=7.2 Гц, 3Н); ЖХМС 319,0 [М+Н]+.
Стадия 2
6-Хлор-4-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Этил-6-хлор-4-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (554 мг, 1,74 ммоль) суспендировали в 7 М аммиаке в метаноле (11,8 г, 15,0 мл, 105 ммоль). Колбу, содержащую смесь, запаивали и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Выпавшее в осадок беловатое твердое вещество отделяли фильтрованием и высушивали в высоком вакууме с получением 6-хлор-4-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (375 мг, 75%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.92 (s, 1Н), 8.95 (s, 1Н), 8.83 (s, 1Н), 8.18 (s, 1Н), 7.63 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 6.84 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 2.78-3.00 (m, 4Н), 2.07 (quin, J=7.6 Гц, 2Н); ЖХМС 290,0 [М+Н]+.
Стадия 3
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
Раствор 6-хлор-4-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (375 мг, 1,29 ммоль) и трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (555 мг, 2,59 ммоль) в N-метил-2-пирролидиноне (3 мл) обрабатывали трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбаматом (555 мг, 2,59 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 120°С в течение 72 ч, затем охлаждали до комнатной температуры, концентрировали в высоком вакууме, и полученный остаток очищали хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 80 г, Versaflash, Supelco, от 0 до 5% раствора 9:1 МеОН:NH4OH в CH2Cl2, 20 мин) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (444 мг, 73%) в виде светло-коричневой пены. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 11.30 (s, 1Н), 8.19 (s, 1Н), 8.06 (d, J=3.4 Гц, 1Н), 7.40 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 6.75-7.10 (m, 1Н), 6.61 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 5.77-6.14 (m, 2Н), 3.99 (m, 1Н), 3.55-3.74 (m, 1Н), 2.67-3.05 (m, 4Н), 2.11 (quin, J=7.5 Гц, 2Н), 1.18-2.01 (m, 17Н); ЖХМС 468,2 [М+Н]+.
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Раствор трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (444 мг, 950 мкмоль) в CH2Cl2 (5 мл) обрабатывали ТФУ (4,08 г, 2,76 мл, 35,8 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворители выпаривали, и остаток очищали флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 80 г, Versaflash, Supelco), элюируя от 0 до 5% раствора 9:1 МеОН: NH4OH в CH2Cl2, 15 мин) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (80 мг, 23%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.54 (br. s., 1Н), 8.35 (br. s., 1Н), 7.95 (br. s., 1H), 7.46-7.69 (m, 2H), 6.80 (d, J=7.2 Гц, 1H), 6.69 (d, J=7.6 Гц, 1H), 3.89 (br. s., 1H), 3.12 (br. s., 1H), 2.75-2.98 (m, 4H), 1.96-2.17 (m, 2H), 1.61 (d, J=11.7 Гц, 8H), 1.31 (br. s., 2H); ЖХМС 368,3 [M+H]+.
Пример 25
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
Этил-6-хлор-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
В толстостенную запаиваемую трубку загружали этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилат (0,985 г, 4,46 ммоль) и 6-изопропил-5-метилпиридин-2-амин (1,005 г, 6,69 ммоль). К смеси добавляли ацетонитрил (5 мл), и желтый раствор нагревали (масляная баня/нагревательная платформа) при перемешивании при 130°С в течение 20 ч с получением коричневого раствора. После охлаждения до комнатной температуры ацетонитрил удаляли в вакууме с получением темно-коричневого твердого вещества. Остаток растворяли в дихлорметане, адсорбировали на силикагеле и очищали колоночной флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 50 г, Versaflash от Supelco, элюируя от 0% до 5% ацетона в дихлорметане в течение 20 мин, удерживая в течение 5 мин, а затем элюируя от 5% до 20% в течение 20 мин и удерживая в течение 5 мин) с получением этил-6-хлор-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата в виде желтых кристаллов (848 мг, 57%). 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 10.60 (br. s., 1Н), 9.36 (s, 1Н), 7.44 (d, J=8.08 Гц, 1Н), 6.70 (d, J=8.08 Гц, 1Н), 4.58 (q, J=7.07 Гц, 2Н), 3.30 (spt, J=6.70 Гц, 1Н), 2.34 (s, 3Н), 1.52 (t, J=7.20 Гц, 3Н), 1.33 (d, J=6.82 Гц, 6Н). ЖХМС 335 [М+Н]+.
Стадия 2
6-Хлор-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
В трубку под давлением загружали этил-6-хлор-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (850 мг, 2,54 ммоль) и раствор аммиака в метаноле (7 М, 20 мл, 140 ммоль). Светло-желтую суспензию перемешивали при 50°С в течение 1,5 ч. После этого реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (693 мг, 89%) в виде оранжевого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 11.48 (br. s., 1Н), 9.39 (s, 1Н), 8.18 (br. s., 1Н), 7.42 (d, J=8.08 Гц, 1Н), 6.71 (d, J=8.08 Гц, 1Н), 5.67 (br. s., 1Н), 3.29 (dt, J=13.52, 6.63 Гц, 1Н), 2.33 (s, 3Н), 2.26-2.26 (m, 1Н), 1.33 (d, J=6.82 Гц, 2Н). ЖХМС 306 [М+Н]+.
Стадия 3
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
В трубку под давлением загружали 6-хлор-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид (230 мг, 752 мкмоль), трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (242 мг, 1,13 ммоль) и NMP (4 мл). Этот желтый раствор перемешивали при 130°С в течение 2,5 суток. После этого NMP отгоняли, используя аппарат Kugelrohr, в высоком вакууме с получением светло-коричневого твердого вещества. Это неочищенное твердое вещество растворяли в дихлорметане и МеОН и адсорбировали на силикагеле, затем очищали колоночной флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 11 г, Versaflash от Supelco, элюируя от 100% дихлорметана до 88:11,4:0,6 дихлорметан: метанол: NH4OH за 40 мин) с получением светло-коричневого твердого вещества. Этот неочищенный продукт растворяли в дихлорметане (2 мл) и добавляли ТФУ (740 мг, 500 мкл, 6,49 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. После этого ТФУ и дихлорметан удаляли в вакууме, полученное коричневое твердое вещество растворяли в дихлорметане, адсорбировали на силикагеле, а затем очищали колоночной флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 11 г, Versaflash от Supelco, элюируя от 100% дихлорметана до 88:11,4:0,6 дихлорметан: метанол: NH4OH за 40 мин) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (70 мг, 24%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.65 (br. s., 1Н), 8.37 (br. s., 1Н), 7.92 (s, 1Н), 7.61 (br. s., 1H), 7.48 (d, J=8.34 Гц, 1H), 6.71 (d, J=8.08 Гц, 1H), 6.66 (d, J=8.08 Гц, 1H), 3.24 (dt, J=13.39, 6.70 Гц, 1H), 3.08 (d, J=2.53 Гц, 1H), 2.26 (s, 3H), 1.30-1.75 (m, 11H), 1.26 (dd, J=6.70, 1.39 Гц, 6H). ЖХМС 384 [М+Н]+.
Пример 26
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
Этил-6-хлор-4-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
Смесь этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (0,80 г, 3,62 ммоль) и 6-пропилпиридин-2-амина (739 мг, 5,43 ммоль) растворяли в ацетонитриле (4 мл) и нагревали при 130°С. Через 24 ч реакционную смесь охлаждали и концентрировали в вакууме, затем очищали хроматографией (силикагель, 80 г, от 0 до 3% ацетона в дихлорметане в течение 15 мин, затем от 3 до 10% ацетона в дихлорметане в течение следующих 15 мин) с получением этил-6-хлор-4-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (335 мг, 1,04 ммоль, 29%) в виде светло-желтого кристаллического твердого вещества после высушивания в высоком вакууме при комнатной температуре. ЖХМС 321,1 [М+Н]+.
Стадия 2
6-Хлор-4-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Этил-6-хлор-4-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (340 мг, 1,06 ммоль) перемешивали с 7 н. аммиаком в метаноле (15,1 мл, 106 ммоль). За несколько минут образовался бесцветный осадок. Через 18 ч смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (289 мг, 991 мкмоль, 94%) в виде беловатого порошка. ЖХМС 292,2 [М+Н]+. Это вещество использовали непосредственно без дополнительной очистки.
Стадия 3
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
6-Хлор-4-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид (289 мг, 991 мкмоль) и трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (425 мг, 1,98 ммоль) растворяли в N-метил-2-пирролидиноне (2 мл) и нагревали при 130°С в течение 24 ч. ЖХМС показала массу желаемого продукта, а также исходное вещество. Добавляли третий эквивалент трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (213 мг, 0,991 ммоль), и нагревание продолжали. Через 8 ч добавляли третью порцию трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (0,310 г). Через 24 ч смесь охлаждали и концентрировали в вакууме (высокий вакуум, 100°С) до коричневого твердого остатка. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 0 до 10% раствора 9:1 МеОН: NH4OH в дихлорметане, 20 мин) получили трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат (271 мг, 577 мкмоль, 58%) в виде светло-коричневого твердого вещества. ЖХМС 470,2 [М+Н]+.
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат (260 мг, 554 мкмоль) растворяли в дихлорметане (4 мл), затем добавляли ТФУ (3,16 г, 2,13 мл, 27,7 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч, затем смесь концентрировали в вакууме до коричневого масла и очищали хроматографией (силикагель, 40 г, от 0 до 20% раствора 9:1 МеОН:NH4OH в дихлорметане, 30 мин) с получением светло-желтой пены (140 мг). Это вещество растворяли в этаноле и концентрировали в вакууме (3×20 мл) с получением желаемого продукта, чистого по ЯМР и ЖХМС за исключением следов изопропилового спирта. Это вещество растворяли в абсолютном этаноле, концентрировали в вакууме, а затем дважды растирали с этанолом (2×0,5 мл), а затем высушивали с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (110 мг, 295 мкмоль, 53%) в виде белого порошка. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.67 (s, 1Н), 8.39 (br. s., 1Н), 8.08 (br. s., 1Н), 7.63 (t, J=7.7 Гц, 2H), 6.85 (d, J=7.6 Гц, 1H), 6.72-6.82 (m, 2Н), 3.74 (br. s., 1H), 3.12 (d, J=3.0 Гц, 1H), 2.65-2.76 (m, 2H), 1.45-1.81 (m, 10Н), 1.21 -1.39 (m, 2H), 0.94 (t, J=7.3 Гц, 3Н); ЖХМС 370,2 [М+Н]+.
Пример 27
6-((3R,4R)-3-Аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Смесь 6-хлор-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (223 мг, 729 мкмоль, полученного, как описано в примере 25), трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (315 мг, 1,46 ммоль) и NMP (4 мл) перемешивали при 140°С в течение 18 ч. NMP отгоняли, используя аппарат Kugelrohr, в высоком вакууме с получением светло-коричневого твердого вещества. Это неочищенное вещество растворяли в дихлорметане и МеОН и адсорбировали на силикагеле, затем очищали хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 11 г, Versaflash от Supelco, элюируя от 100% дихлорметана до 88:11,4:0,6 дихлорметан: метанол : NH4OH за 40 мин) с получением 109 мг промежуточного соединения в виде коричневого твердого вещества. Это промежуточное соединение растворяли в дихлорметане (2 мл) и добавляли ТФУ (740 мг, 500 мкл, 6,49 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. ТФУ и дихлорметан концентрировали в вакууме, и полученный остаток очищали хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 11 г, Versaflash от Supelco, элюируя от 100% дихлорметана до 88:11,4:0,6 дихлорметан: метанол: NH4OH за 40 мин) с получением коричневого твердого вещества. Это твердое вещество суспендировали в 0,5 мл гептана и 10 каплях этанола. Смесь кратковременно обрабатывали ультразвуком, а затем нагревали, затем охлаждали, и растворители декантировали. Твердый остаток высушивали в течение ночи в высоком вакууме с получением 6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (22 мг, 8%) в виде коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 11.18-11.31 (m, 1Н), 8.26 (s, 1Н), 7.95 (br. s., 1Н), 7.26 (d, J=8.34 Гц, 1Н), 6.55 (d, J=8.08 Гц, 1Н), 5.73 (d, J=7.33 Гц, 1Н), 5.29 (br. s., 1Н), 3.99 (br. s., 1H), 3.90 (d, J=8.08 Гц, 1H), 3.78 (d, J=11.37 Гц, 1H), 3.66 (q, J=7.07 Гц, 1H), 3.57 (d, J=11.37 Гц, 1H), 3.44 (t, J=11.12 Гц, 1H), 3.20 (dt, J=13.33, 6.60 Гц, 1H), 2.97 (br. s., 1H), 2.21 (s, 3H), 1.89 (d, J=11.12 Гц, 1H), 1.61-1.77 (m, 1H), 1.25 (dd, J=6.57, 3.54 Гц, 6Н), 1.18 (t, J=7.07 Гц, 1Н); ЖХМС 386 [М+Н]+.
Пример 28
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
Этил-6-хлор-4-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-карбоксилат
К раствору этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (700 мг, 3,17 ммоль) в ацетонитриле (10,6 мл) добавляли этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилат (700 мг, 3,17 ммоль), и смесь нагревали при 140°С в запаянном флаконе в течение 48 ч. Смесь охлаждали, а затем концентрировали в вакууме, затем очищали хроматографией (силикагель, от 0 до 30% ацетона в дихлорметане) с получением этил-6-хлор-4-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-карбоксилата (104 мг, 340 мкмоль, 11%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ млн-1 9.70 (s, 1Н), 7.03 (s, 1Н), 6.99 (s, 1Н), 6.88 (s, 2Н), 4.57 (q, J=7.6 Гц, 2Н), 2.38 (s, 6Н), 1.52 (t, J=7.6 Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z.305,9 [М+Н].
Стадия 2
6-Хлор-4-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору этил-6-хлор-4-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-карбоксилата (104 мг, 340 мкмоль) в метаноле добавляли аммиак в метаноле (4,86 мл, 34,0 ммоль) и перемешивали при 50°С в течение 16 ч. Смесь концентрировали с получением 6-хлор-4-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-карбоксамида (90 мг, 325 мкмоль, 96%) в виде коричневого твердого вещества, которое использовали непосредственно без очистки. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ млн-1 10.84 (s, 1Н), 8.72 (s, 1Н), 8.08 (s, 1Н), 7.12 (s, 1Н), 6.98 (s, 2Н), 6.98 (s, 1Н), 6.93 (s, 1Н), 2.30 (s, 6Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 276,9 [М+Н].
Стадия 3
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
К раствору 6-хлор-4-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-карбоксамида (44 мг, 159 мкмоль) в NMP (530 мкл) добавляли трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (68,2 мг, 318 мкмоль), и смесь нагревали до 140°С в течение 20 ч. Затем добавляли дополнительное количество трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (68,2 мг, 318 мкмоль), и нагревание продолжали еще в течение 7 ч. Наконец, добавляли другую порцию трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (34,1 мг, 159 мкмоль), и смесь нагревали в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали, а затем разбавляли этилацетатом. Фазы разделяли, а затем органическую фазу промывали водой и соляным раствором. Органическую фазу отделяли, концентрировали в вакууме, и полученный остаток очищали хроматографией (силикагель, от 30 до 70% этилацетата в гексанах) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (30 мг, 66,0 мкмоль, 42%) в виде коричневого масла. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 455,2 [М+Н].
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (30 мг, 66,0 мкмоль) в дихлорметане (1 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (151 мг, 102 мкл, 1,32 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме, затем разбавляли дихлорметаном и добавляли по каплям 25% NH4OH до измерения pH, составляющего примерно 8. Этот слабощелочной раствор промывали водой, затем органическую фазу концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, от 30 до 100% раствора 10:89,5:0,5 МеОН: дихлорметан: NH4OH в дихлорметане) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-карбоксамида (17 мг, 48,0 мкмоль, 73%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, метанол-d6) δ млн-1 6.90 (s, 2Н), 6.88 (s, 1Н), 6.50 (s, 1Н), 4.32 (s, 1Н), 1.63-1.84 (m, 6Н), 1.51 (m, 2Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 355,1 [М+Н].
Пример 29
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
Этил-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксилат
Смесь этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (0,73 г, 3,3 ммоль) и 6-трет-бутилпиридин-2-амина (992 мг, 6,61 ммоль, имеется в продаже от фирмы J&W PharmLab, LLC) растворяли в ацетонитриле (3,00 мл) и нагревали при 130°С в течение 20 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь концентрировали, и остаток очищали флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 50 г, Versaflash, Supelco), элюируя от 0 до 20% ацетона в дихлорметане за 20 мин, с получением этил-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксилата (539 мг, 48,7% выход) в виде светло-коричневого остатка. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 10.59 (s, 1Н), 9.32 (s, 1Н), 7.55 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 6.98 (d, J=7.2 Гц, 1Н), 6.66 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 4.48 (q, J=7.2 Гц, 2Н), 1.43 (t, J=7.2 Гц, 3Н), 1.28-1.35 (m, 9Н); ЖХМС 335,0, 337,0 [М+Н]+.
Стадия 2
4-(6-трет-Бутилпиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксамид
В круглодонной колбе на 100 мл суспендировали этил-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксилат (539 мг, 1,61 ммоль) в 7 М аммиаке в метаноле (7,87 г, 10,0 мл, 70,0 ммоль). Колбу запаивали и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворители выпаривали, и остаток высушивали в высоком вакууме с получением чистого 4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксамида (492 мг, 99,9% выход) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.94 (s, 1Н), 9.23 (s, 1Н), 8.84 (s, 1Н), 8.19 (s, 1Н), 7.74 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 7.14 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 6.92 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 1.34 (s, 9Н); ЖХМС 306,1, 308,1 [М+Н]+.
Стадия 3
трет-Бутил-(3R,4R)-4-(5-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-карбамоилпиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат
В многократно запаиваемую трубку под давлением загружали 4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксамид (100 мг, 327 мкмоль), растворенный в NMP (2,00 мл). К этому раствору добавляли трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат (70,7 мг, 327 мкмоль), и реакционную смесь нагревали в масляной бане при перемешивании при 130°С в течение 24 ч. Добавляли дополнительное количество трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (70,7 мг, 327 мкмоль), и реакцию продолжали в течение 24 ч. Добавляли дополнительное количество трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (70,7 мг, 327 мкмоль), и реакцию продолжали в течение 72 ч. NMP выпаривали в высоком вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (силикагель 50 мкм, 40 г, Analogix), элюируя от 0 до 5% (МеОН, содержащий 10% NH4OH)/CH2Cl2 в течение 20 мин, с получением трет-бутил-(3R,4R)-4-(5-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-карбамоилпиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (73 мг, 46,0% выход) в виде желтой пены. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 11.45 (br. s., 1Н), 8.33 (s, 1Н), 8.14 (s, 1Н), 8.06 (d, J=3.4 Гц, 1Н), 7.52 (t, J=7.9 Гц, 1H), 6.91 (d, J=7.9 Гц, 1H), 6.66 (d, J=7.9 Гц, 1H), 5.65 (br. s., 1H), 5.37 (d, J=8.3 Гц, 1H), 3.38-4.31 (m, 6H), 1.63-2.23 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.39 (s, 9H); ЖХМС 486,3 [М+Н]+.
Стадия 4
6-((3R,4R)-3-Аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(3R,4R)-4-(5-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)-6-карбамоилпиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (73 мг, 150 мкмоль) в CH2Cl2 (3,00 мл) добавляли ТФУ (1,48 г, 1 мл, 13,0 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворитель выпаривали, и остаток очищали флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 23 г, Versaflash, Supelco), элюируя от 0 до 5% (МеОН, содержащий 10% NH4OH)/CH2Cl2 в течение 20 мин, с получением 6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (23,5 мг, 40,5% выход) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 11.45 (s, 1Н), 8.38 (s, 1Н), 8.03 (br. s., 1Н), 7.54 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 6.93 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 6.69 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 5.83 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 5.37 (br. s., 1Н), 3.91 -4.13(m, 2Н), 3.86 (d, J=11.0 Гц, 1Н), 3.65 (d, J=10.6 Гц, 1Н), 3.41-3.58 (m, 1Н), 3.04 (br. s., 1Н), 1.97 (d, J=9.4 Гц, 1H), 1.63-1.85 (m, 1Н), 1.55 (br. s., 3Н), 1.42 (s, 9H); ЖХМС 386,2 [М+Н]+.
Пример 30
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
6-Этоксипиридин-2-амин
Во флаконе в водяной бане раствор 21 масс. % этилата натрия в этаноле (1,08 г, 1,25 мл, 15,9 ммоль) разбавляли в этаноле (4 мл) и перемешивали при 25°С в течение 10 мин, затем добавляли 6-хлорпиридин-2-амин (2,0 г, 15,6 ммоль) одной порцией. Через 3 ч реакционную смесь переносили в запаянную колбу и перемешивали при 130°С в течение 18 ч. Добавляли вторую порцию раствора 21 масс. % этилата натрия в этаноле (1,08 г, 1,25 мл, 15,9 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 130°С еще в течение 36 ч. Наконец, добавляли третью порцию 21 масс. % этилата натрия в этаноле (3,18 г, 3,66 мл, 46,7 ммоль), и смесь перемешивали при 140°С в течение 6 ч, затем при 130°С в течение 18 ч. Смесь охлаждали, концентрировали на силикагеле и очищали хроматографией (силикагель, Analogix 120 г, от 0 до 100% этилацетата в гексанах, 60 мин) с получением 6-этоксипиридин-2-амина (819 мг, 36%), который использовали непосредственно без дополнительной очистки. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 139 [М+Н].
Стадия 2
Этил-6-хлор-4-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
В запаянной реакционной трубке объединяли 6-этоксипиридин-2-амин (775 мг, 5,61 ммоль) и этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилат (620 мг, 2,8 ммоль) с ацетонитрилом (14 мл) и перемешивали при 130°С в течение 36 ч. Смесь охлаждали, концентрировали до коричневого твердого вещества, а затем подвергали хроматографии (колонка 80 г Silicycle, элюент от 0 до 10% ацетона в дихлорметане, 20 мин, затем удерживали при 10% в течение 10 мин) с получением этил-6-хлор-4-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (40,3 мг, 125 мкмоль, 4%) в виде белого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 323,2 [М+Н].
Стадия 3
6-Хлор-4-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Этил-6-хлор-4-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (40,3 мг, 125 мкмоль) растворяли в 7 н. растворе аммиака в метаноле (7,01 г, 9 мл, 63,0 ммоль) и перемешивали при 25°С в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (33 мг, 112 мкмоль, 90%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое использовали непосредственно без дополнительной очистки. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 294,1 [М+Н].
Стадия 4
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
6-Хлор-4-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид (33 мг, 112 мкмоль) и трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (50 мг, 233 мкмоль) объединяли в NMP (2 мл) и перемешивали при 140°С в течение 48 ч. Добавляли вторую порцию трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (50 мг, 233 мкмоль), и реакционную смесь перемешивали при 140°С в течение 96 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Полученный остаток распределяли между водой и EtOAc. Водный слой экстрагировали EtOAc, и органические слои объединяли и промывали соляным раствором. Растворитель удаляли в вакууме с получением оранжевой пены. Эту пену концентрировали на силикагеле и очищали хроматографией (4 г RediSep Gold, от 0 до 5% смеси МеОН, содержащего 0,5% NH4OH, в дихлорметане, 20 мин) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (32,3 мг, 51,4 мкмоль, 46%), содержащего некоторое количество примеси дихлорметана. Это вещество использовали непосредственно без дополнительной очистки. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 372,3 [М+Н].
Стадия 5
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
трет-Бутил-(1R,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат (32,2 мг, 51,2 мкмоль) растворяли в дихлорметане (1 мл) и обрабатывали трифторуксусной кислотой (744 мг, 0,5 мл, 6,53 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 3 ч, затем концентрировали в вакууме до коричневого масла. Это масло растворяли в дихлорметане, промывали 1 н. NaOH (3×5 мл) и соляным раствором (5 мл), затем органическую фазу высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали с получением беловатого твердого вещества. Это твердое вещество растирали с Et2O (3×5 мл) и высушивали в течение ночи в вакууме с получением беловатого твердого вещества, 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (12,6 мг, 33,6 мкмоль, 66% выход), 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.65 (br. s., 1Н), 8.40 (br. s., 1Н), 7.71 (s, 1Н), 7.64 (t, J=7.9 Гц, 2Н), 6.77 (d, J=7.8 Гц, 1Н), 6.54 (d, J=7.8 Гц, 1Н), 6.36-6.42 (m, 1Н), 4.35 (q, J=7.0 Гц, 2Н), 3.85 (br. s., 1Н), 3.09 (br. s., 1Н), 1.48-1.74 (m, 6Н), 1.20-1.40 (m, 5Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 372,3 [М+Н].
Пример 31
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
2-Аллил-3-метокси-6-нитропиридин
2-Бром-3-метокси-6-нитропиридин (3,22 г, 13,8 ммоль), фторид цезия (6,3 г, 41,5 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий (0) (1,6 г, 1,38 ммоль) объединяли с 2-аллил-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксабороланом (2,55 г, 2,85 мл, 15,2 ммоль) в ТГФ (27 мл) и нагревали при 66°С в течение 20 ч. Смесь охлаждали, затем разбавляли водой и этилацетатом. Фазы разделяли, затем органическую фазу промывали водой (2х) и соляным раствором, концентрировали в вакууме, а затем очищали хроматографией (силикагель, от 10 до 50% этилацетата в гексанах) с получением 2-аллил-3-метокси-6-нитропиридина (2,0 г, 10,3 ммоль, 75%) в виде синего твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 194,8 [М+Н].
Стадия 2
5-Метокси-6-пропилпиридин-2-амин
К раствору 2-аллил-3-метокси-6-нитропиридина (2,0 г, 10,3 ммоль) в этаноле (34 мл) добавляли 10% палладий на углероде (219 мг, 2,06 ммоль). Реакционную смесь откачивали и снова заполняли водородом. Эту операцию повторяли еще два раза. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода при 1 атм в течение 16 ч, затем фильтровали через слой целлита, и фильтрационный кек тщательно промывали этилацетатом. Фильтраты концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, от 25 до 90% этилацетата в гексанах) с получением 5-метокси-6-пропилпиридин-2-амина (1,41 г, 8,48 ммоль, 82%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 7.09 (d, J=8.8 Гц, 1Н), 6.38 (d, J=8.8 Гц, 1Н), 4.28 (br. s, 2Н), 3.77 (s, 3Н), 2.68 (t, J=7.9 Гц, 2Н), 1.69 (m, 2Н), 0.99 (t, J=7.4 Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 166,8 [М+Н].
Стадия 3
Этил-6-хлор-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
К раствору этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (1,9 г, 8,6 ммоль) в ацетонитриле (28,7 мл) добавляли 5-метокси-6-пропилпиридин-2-амин (1,43 г, 8,6 ммоль), и смесь нагревали при 70°С в течение 72 ч. Смесь концентрировали в вакууме, затем очищали хроматографией (силикагель, от 10 до 60% этилацетата в гексанах) с получением этил-6-хлор-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (1,22 г, 3,48 ммоль, 41%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 10.58 (s, 1Н), 8.84 (s, 1Н), 7.25 (d, J=8.7 Гц, 1Н), 6.88 (d, J=8.5 Гц, 1Н), 4.58 (q, J=7.3 Гц, 2Н), 3.88 (s, 3Н), 2.87 (t, J=7.5 Гц, 2Н), 1.84 (m, 2Н), 1.52 (t, J=7.3 Гц, 3Н), 1.05 (t, J=7.1 Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 351,0 [М+Н].
Стадия 4
6-Хлор-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К смеси этил-6-хлор-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (1,22 г, 3,48 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли 7 н. аммиак в метаноле (23,6 г, 30 мл, 210 ммоль), и смесь перемешивали при 50°С в запаянной трубке в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (1,113 г, 3,46 ммоль, 100%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.72 (s, 1Н), 8.89 (s, 1Н), 8.77 (s, 1Н), 8.13 (s, 1Н), 7.47 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 7.01 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 3.81 (s, 3Н), 2.74 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 1.75 (гл, 2Н), 0.97 (t, J=7.3 Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 321,9 [М+Н].
Стадия 5
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
К раствору 6-хлор-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (200 мг, 622 мкмоль) в NMP (2,07 мл) добавляли трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (133 мг, 622 мкмоль), и смесь нагревали при 140°С в течение 20 ч. Добавляли вторую порцию трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (133 мг, 622 мкмоль), и смесь перемешивали еще в течение 7 ч. Добавляли последнюю порцию трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (133 мг, 622 мкмоль), и смесь нагревали в течение 16 ч, затем охлаждали, разбавляли этилацетатом и промывали соляным раствором (4х). Органический слой собирали, концентрировали в вакууме, и полученный остаток очищали хроматографией (силикагель, от 1 до 5% метанола в дихлорметане) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (96 мг, 192 мкмоль, 31%) в виде светло-коричневого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z. 500,2 [М+Н].
Стадия 6
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (96 мг, 192 мкмоль) в дихлорметане (3 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (438 мг, 296 мкл, 3,84 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали в вакууме, затем разбавляли 25% водным NH4OH и дихлорметаном. Фазы разделяли, и органическую фазу промывали водой. Органический слой концентрировали в вакууме, затем очищали хроматографией (силикагель, от 3 до 20% метанола в дихлорметане) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (59 мг, 148 мкмоль, 77%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.36 (s, 1Н), 8.30 (S, 1Н), 7.72 (s, 1Н), 7.60 (s, 1Н), 7.42 (d, J=8.8 Гц, 1Н), 6.87 (d, J=8.8 Гц, 1Н), 6.72 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 3.96 (s, 1Н), 3.79 (s, 3Н), 3.28 (s, 1Н), 2.72 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 1.54-1.74 (m, 8Н), 1.35 (m, 2Н), 0.94 (t, J=7A Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z.400,2 [М+Н].
Пример 32
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
3-Метокси-6-нитро-2-(проп-1-ен-2-ил)пиридин
Во флакон для микроволнового реактора добавляли смесь 2-бром-3-метокси-6-нитропиридина (1,5 г, 6,44 ммоль), 4,4,5,5-тетраметил-2-(проп-1-ен-2-ил)-1,3,2-диоксаборолана (1,41 г, 8,37 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0) (744 мг, 644 мкмоль), трехосновного фосфата калия (2,73 г, 12,9 ммоль), ДМА (16,1 мл) и воды (5,36 мл). Флакон герметично закрывали и нагревали в микроволновом реакторе в течение 20 мин при 150°С, затем охлаждали и разбавляли этилацетатом и соляным раствором. Органическую фазу отделяли и промывали соляным раствором (3х), затем концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, от 5 до 35% этилацетата в гексанах) с получением 3-метокси-6-нитро-2-(проп-1-ен-2-ил)пиридина (824 мг, 4,24 ммоль, 66%) в виде коричневого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 194,8 [М+Н].
Стадия 2
6-Изопропил-5-метоксипиридин-2-амин
К раствору 3-метокси-6-нитро-2-(проп-1-ен-2-ил)пиридина (824 мг, 4,24 ммоль) в этаноле (14,1 мл) добавляли 10% палладий на углероде (45,2 мг, 424 мкмоль). Реакционную смесь откачивали и снова заполняли водородом. Эту операцию повторяли еще два раза. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода при 1 атм в течение 16 ч. Затем смесь фильтровали через слой целлита, фильтрат концентрировали в вакууме, а затем очищали хроматографией (силикагель, от 10 до 60% этилацетата в гексанах) с получением 6-изопропил-5-метоксипиридин-2-амина (562 мг, 3,38 ммоль, 80%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 7.04 (d, J=8.7 Гц, 1Н), 6.33 (d, J=8.7 Гц, 1Н), 4.12 (br. s, 2Н), 3.78 (s, 3Н), 3.36 (m, 1Н), 1.22 (d, J=7.0 Гц, 6Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 166,8 [М+Н].
Стадия 3
6-Хлор-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
К раствору этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (747 мг, 3,38 ммоль) в ацетонитриле (11,3 мл) добавляли 6-изопропил-5-метоксипиридин-2-амин (562 мг, 3,38 ммоль) и нагревали до 80°С в течение 20 ч. Смесь охлаждали и концентрировали в вакууме. В результате очистки хроматографией (силикагель, от 10 до 50% этилацетата в гексанах) получили этил-6-хлор-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (438 мг, 1,25 ммоль, 37%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 10.61 (s, 1Н), 9.15 (s, 1Н), 7.22 (d, J=8.7 Гц, 1Н), 6.61 (d, J=8.7 Гц, 1Н), 4.57 (q, J=7.6 Гц, 2Н), 3.88 (s, 3Н), 3.53 (m, 1Н), 1.53 (t, J=7.0 Гц, 3Н), 1.31 (d, J=6.7 Гц, 6Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 351,0 [М+Н].
Стадия 4
Этил-6-хлор-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
Смесь этил-6-хлор-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (438 мг, 1,25 ммоль) и аммиака в метаноле (7 н., 8,92 мл, 62,4 ммоль) в метаноле (1 мл) подогревали при 40°С в течение 16 ч. Затем смесь концентрировали в вакууме с получением этил-6-хлор-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (438 мг, 1,25 ммоль, 100%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн1 11.75 (S, 1Н), 9.03 (s, 1Н), 8.78 (s, 1Н), 8.13 (s, 1Н), 7.48 (d, J=8.5 Гц, 1Н), 7.00 (d, J=8.5 Гц, 1Н), 3.82 (s, 3Н), 3.44 (m, 1Н), 1.22 (d, J=6.6 Гц, 6Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 321,9 [М+Н].
Стадия 5
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
К раствору 6-хлор-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-
иламино)пиридазин-3-карбоксамида (199 мг, 618 мкмоль) в NMP (2,06 мл) добавляли трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (532 мг, 2,47 ммоль) четырьмя порциями, приблизительно через каждые 12 ч при нагревании при 140°С. После суммарного времени нагревания 48 ч смесь охлаждали, разбавляли этилацетатом и соляным раствором, затем фазы разделяли, и органическую фазу еще дважды промывали соляным раствором. Органическую фазу концентрировали в вакууме, затем очищали хроматографией (силикагель, от 1 до 5% метанола в дихлорметане) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (100 мг, 200 мкмоль, 32%) в виде коричневого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 500,4 [М+Н].
Стадия 6
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (100 мг, 200 мкмоль) в дихлорметане (3 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (456 мг, 308 мкл, 4,00 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме, затем добавляли 25% водный раствор NH4OH. Затем смесь разбавляли дихлорметаном и водой, фазы разделяли, и органическую фазу дважды промывали водой. Органический слой высушивали над безводным сульфатом магния, затем очищали хроматографией (силикагель, от 0 до 15% метанола в дихлорметане) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (43 мг, 108 мкмоль, 54%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.45 (s, 1Н), 8.31 (s, 1Н), 7.69 (s, 1Н), 7.58 (s, 1Н), 7.42 (d, J=8.7 Гц, 1Н), 6.85 (d, J=8.7 Гц, 1Н), 6.63 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 3.80 (s, 3Н), 3.42 (m, 1Н), 3.15 (s, 1Н), 1.52-1.69 (m, 8Н), 1.32 (m, 2Н), 1.24 (d, J=6.4 Гц, 6Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 400,3 [М+Н].
Пример 33
4-(6-(1Н-Пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
6-(1Н-Пиразол-1-ил)пиридин-2-амин
6-(Ди-Вос-амино)-2-бромпиридин (1,0 г, 2,68 ммоль, ChronTech), медь (341 мг, 5,36 ммоль), гидроксид калия (301 мг, 5,36 ммоль) и 1Н-пиразол (1,82 г, 26,8 ммоль, экв.: 10) объединяли и перемешивали при 160°С в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали, разбавляли EtOAc (50 мл), и твердые вещества удаляли фильтрованием. Темно-синий фильтрат промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 и соляным раствором, затем концентрировали на силикагеле и очищали хроматографией (колонка 40 г RediSep, от 20 до 100% этилацетата в гексанах, 20 мин) с получением 6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-амина (365 мг, 2,28 ммоль, 85%) в виде белого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 161,2 [М+Н].
Стадия 2
4-(6-(1Н-Пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксилат
Раствор этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (230 мг, 1,04 ммоль) и 6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-амина (332,3 мг, 2,07 ммоль) в ацетонитриле (11,8 мл) нагревали при 130°С в запаянной трубке в течение 48 ч, затем охлаждали, концентрировали в вакууме, а затем очищали хроматографией (силикагель, Analogix колонка 24 г RediSep Gold, от 0 до 20% ацетона в дихлорметане, 20 мин) с получением этил-4-(6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксилата (107 мг, 258 мкмоль, 25%) в виде белого твердого вещества. Это вещество было очищенным на 83%, и его использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 345,1 [М+Н].
Стадия 3
4-(6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксамид
К раствору этил-4-(6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксилата (107 мг, чистота приблизительно 83%, 258 мкмоль) в метаноле (1 мл) добавляли аммиак в метаноле (2,5 мл, 17,5 ммоль), и смесь подогревали при 25°С в течение 18 ч. Смесь охлаждали, фильтровали, и собранное твердое вещество высушивали в вакууме с получением 4-(6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксамида (45 мг, 141 мкмоль, 55%) в виде белого твердого вещества.
Стадия 4
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(5-(6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-карбамоилпиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
К раствору 4-(6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-хлорпиридазин-3-карбоксамида (131 мг, 415 мкмоль) в NMP (5 мл) добавляли трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (133 мг, 622 мкмоль), и смесь перемешивали при 140°С в течение 24 ч. Добавляли вторую порцию трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (162 мг, 756 мкмоль), и смесь нагревали при 140°С в течение следующих 24 ч. Реакционную смесь охлаждали, а затем разбавляли водой. Смесь экстрагировали этилацетатом (3×50 мл), затем объединенные органические фазы промывали соляным раствором (50 мл), затем концентрировали в вакууме и, наконец, очищали хроматографией (силикагель, 12 г RediSep Gold, от 2 до 6% раствора 99,5:0,5 метанол: гидроксид аммония в дихлорметане, 20 мин) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(5-(6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-карбамоилпиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (70 мг, 142 мкмоль, 34%) в виде бежевого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 494,3 [М+Н].
Стадия 5
4-(6-(1Н-Пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(5-(6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-карбамоилпиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (70 мг, 142 мкмоль) в дихлорметане (2,5 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (2,01 г, 1,35 мл, 17,6 ммоль), и смесь перемешивали при 25°C в течение 2 ч. Смесь концентрировали в вакууме, а затем разбавляли дихлорметаном, после чего последовательно промывали 1 н. NaOH (3×5 мл) и соляным раствором (5 мл). Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия, концентрировали в вакууме, а затем высушивали в вакууме с получением 4-(6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)пиридазин-3-карбоксамида (14,2 мг, 36,1 мкмоль, 25%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.93 (s, 1Н), 8.63-8.71 (m, 1Н), 8.45 (br. s., 1Н), 7.78-7.94 (m, 3Н), 7.71 (br. s., 1Н), 7.51 (d, J=7.8 Гц, 1Н), 7.05 (d, J=7.5 Гц, 1Н), 6.92 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 6.63 (dd, J=2.5, 1.8 Гц, 1Н), 4.02 (br. s., 1Н), 3.18 (br. s., 1Н), 1.46-1.79 (m, 7Н), 1.20-1.41 (m, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z.394,3 [М+Н].
Пример 34
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
трет-Бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(6-изопропил677-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат
К раствору 6-хлор-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (199 мг, 618 мкмоль, полученного, как описано в примере 32) в NMP (2,06 мл) добавляли трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат (536 мг, 2,47 ммоль) четырьмя порциями приблизительно через каждые 12 ч, и смесь нагревали при 140°С. После суммарного времени нагревания 48 ч смесь охлаждали, а затем разбавляли этилацетатом и соляным раствором. Фазы разделяли, затем органическую фазу промывали соляным раствором (2х), затем концентрировали в вакууме, и полученный остаток очищали хроматографией (силикагель, от 10 до 50% метанола в дихлорметане) с получением 6-хлор-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (199 мг, 618 мкмоль, количественно) в виде светло-коричневого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 502,2 [М+Н].
Стадия 2
6-((3R,4R)-3-Аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (86 мг, 171 мкмоль) в дихлорметане (2,7 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (391 мг, 264 мкл, 3,43 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем реакционную смесь разбавляли дихлорметаном, концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, от 0 до 12% раствора 99,5:0,5 метанол: NH4OH в дихлорметане) с получением 6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (51 мг, 127 мкмоль, 74%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, метанол-d6) δ млн-1 8.08 (s, 1Н), 7.42 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 6.91 (d, J=8.9 Гц, 1Н), 4.35 (m, 1Н), 4.12 (dd, J=12.1, 3.4 Гц, 1Н), 4.07 (d, J=12.6 Гц, 1Н), 3.89 (s, 1Н), 3.88 (s, 3Н), 3.80 (d, J=12.8 Гц, 1Н), 3.65 (m, 1Н), 3.52 (m, 1Н), 2.12 (m, 1Н), 1.96 (d, J=13.1 Гц, 1Н), 1.32 (d, J=5.8 Гц, 6Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 402,3 [М+Н].
Пример 35
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
6-Хлор-4-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
К раствору этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (260 мг, 1,18 ммоль) в ацетонитриле (3,9 мл) добавляли 6-изопропил-4-метилпиридин-2-амин (265 мг, 1,76 ммоль), а затем смесь нагревали при 140°С в течение 48 ч. Смесь охлаждали, концентрировали в вакууме, а затем очищали хроматографией (силикагель, от 5 до 30% этилацетата в гексанах) с получением этил-6-хлор-4-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (117 мг, 349 мкмоль, 30%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 10.60 (s, 1Н), 9.39 (s, 1Н), 6.76 (s, 1Н), 6.59 (s, 1Н), 4.58 (q, J=7.0 Гц, 2Н), 3.04 (m, 1Н), 2.35 (s, 3Н), 1.53 (t, J=7.1 Гц, 3Н), 1.35 (d, J=7.0 Гц, 6Н),; МС (ЭИ/ХИ) m/z: 335,0 [М+Н].
Стадия 2
6-Хлор-4-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору этил-6-хлор-4-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (115 мг, 343 мкмоль) в метаноле (1 мл) добавляли аммиак в метаноле (7 н., 4,91 мл, 34,3 ммоль), а затем смесь нагревали при 45°С в течение 20 ч. Смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (105 мг, 343 мкмоль, 100%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.91 (s, 1Н), 9.25 (s, 1Н), 8.85 (s, 1Н), 8.21 (s, 1Н), 6.87 (s, 1Н), 6.77 (s, 1Н), 3.01 (m, 1Н), 2.31 (s, 3Н), 1.28 (d, J=6.6 Гц, 6Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 305,9 [М+Н].
Стадия 3
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
К перемешанному раствору 6-хлор-4-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (54 мг, 177 мкмоль) в NMP (590 мкл) добавляли трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (227,1 мг, 883 мкмоль) тремя порциями приблизительно через каждые 12 ч при нагревании смеси (в периоды между добавлениями) при 140°С. После суммарного периода 36 ч смесь охлаждали, а затем разбавляли этилацетатом и водой. Органическую фазу отделяли, а затем промывали водой и соляным раствором. Затем органическую фазу концентрировали в вакууме и, наконец, очищали хроматографией (силикагель, от 30 до 80% этилацетата в гексанах) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (35 мг, 72,4 мкмоль, 41,0%) в виде коричневого масла. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 484,3 [М+Н].
Стадия 4
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (35 мг, 72,4 мкмоль) в дихлорметане (1,1 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (165 мг, 112 мкл, 1,45 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Смесь концентрировали в вакууме, а затем остаток разбавляли дихлорметаном и добавляли несколько капель 25% водного раствора NH4OH до измерения pH смеси, составляющего приблизительно pH 8. Затем смесь промывали водой, органическую фазу собирали, концентрировали в вакууме и, наконец, очищали хроматографией (силикагель, от 3 до 10% раствора 99,5:0,5 метанол NH4OH в дихлорметане) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (15 мг, 39,1 мкмоль, 54%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.64 (s, 1Н), 8.36 (s, 1Н), 8.07 (s, 1Н), 7.64 (s, 1Н), 6.79 (d, J=4.3 Гц, 1Н), 6.73 (s, 1Н), 6.60 (s, 1Н), 3.90 (s, 1Н), 2.98 (m, 1Н), 2.27 (s, 3Н), 1.52-1.76 (m, 6Н), 1.38 (m, 2Н), 1.27 (d, J=7.0 Гц, 6Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 384,1 [М+Н].
Пример 36
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
2-(6-Бромпиридин-2-ил)-2-метилпропаннитрил
В высушенную круглодонную колбу на 500 мл загружали раствор изобутиронитрила (3,29 г, 4,27 мл, 47,6 ммоль) в толуоле (100 мл), этот раствор охлаждали до 0°С и медленно добавляли 0,5 М KHMDS в толуоле (100 мл, 50,0 ммоль). После завершения добавления реакционной смеси давали подогреться до комнатной температуры в течение 1 часа. Полученную в результате смесь добавляли к раствору 2,6-дибромпиридина (28,2 г, 119 ммоль, имеющегося в продаже от фирмы Aldrich) в толуоле (100 мл). При добавлении светло-желтый раствор быстро становился темно-красноватым. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Неочищенную смесь разбавляли эфиром, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония и соляным раствором. Органическую фазу высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в вакууме. Полутвердый остаток суспендировали в небольшом количестве толуола и отфильтровывали, выделили светло-коричневое твердое вещество, соответствующее 2,6-дибромпиридину. Фильтрат очищали флэш-хроматографией (силикагель 50 мкм, 220 г, Rediflash Teledyne-lsco), элюируя от 0 до 50% дихлорметан/гексаны в течение 20 мин, с получением 2-(6-бромпиридин-2-ил)-2-метилпропаннитрила (7,608 г, 28,4% выход) в виде светло-желтого масла, которое отвердевало до белого твердого вещества при стоянии. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 7.58-7.61 (m, 2Н), 7.42-7.46 (m, 1Н), 1.76 (s, 6Н); ЖХМС 225,0, 226,9 [М+Н]+.
Стадия 2
2-(6-Аминопиридин-2-ил)-2-метилпропаннитрил
В толстостенную, многократно запаиваемую трубку загружали в атмосфере аргона оксид меди(I) (159 мг, 1,11 ммоль), 2-(6-бромпиридин-2-ил)-2-метилпропаннитрил (5000 мг, 22,2 ммоль), 28% раствор гидроксида аммония (26,9 мл, 444 ммоль), K2CO3 (614 мг, 4,44 ммоль), N,N-диметилэтилендиамин (196 мг, 244 мкл, 2,22 ммоль) и этиленгликоль (44,4 мл). Реакционную смесь нагревали до 60°С при перемешивании в течение 6 ч. После охлаждения реакционную смесь экстрагировали дихлорметаном (3×25 мл), объединенные органические слои высушивали над сульфатом магния и выпаривали. Остаток очищали флэш-хроматографией (силикагель 50 мкм, 40 г, Analogix), элюируя от 0 до 5% в течение 20 мин (10% гидроксид аммония в метаноле)/дихлорметан, с получением 2-(6-аминопиридин-2-ил)-2-метилпропаннитрила (3,2 г, 89,4% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 7.34-7.46 (m, 1Н), 6.81 (d, J=7.2 Гц, 1Н), 6.40 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 4.67 (br. s., 2Н), 1.63-1.68 (m, 6Н); ЖХМС 162,1 [М+Н]+.
Стадия 3
Этил-6-хлор-4-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
Смесь этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (1,4 г, 6,33 ммоль) и 2-(6-аминопиридин-2-ил)-2-метилпропаннитрила (2,04 г, 12,7 ммоль) растворяли в ацетонитриле (3,00 мл) и нагревали до 130°С в течение 18 ч. Смесь охлаждали, концентрировали, остаток адсорбировали на силикагеле и очищали флэш-хроматографией (силикагель 45 мкм, 160 г, Thomson), элюируя от 0 до 20% ацетона в дихлорметане за 20 мин, был выделен неочищенный желаемый продукт, все фракции, содержащие желаемый продукт, концентрировали, и остаток растворяли в дихлорметане и выпаривали до небольшого объема, где твердое вещество, выпавшее в осадок, фильтровали и высушивали, и это вещество соответствовало желаемому этил-6-хлор-4-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилату (792 мг, 36,2% выход). 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 10.86 (s, 1Н), 9.27 (s, 1Н), 7.75 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 7.26 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 6.90 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 4.58 (q, J=7.2 Гц, 2Н), 1.81 (s, 6Н), 1.52 (t, J=7.2 Гц, 3Н); ЖХМС 346,1 [М+Н]+.
Стадия 4
6-Хлор-4-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
В круглодонной колбе на 50 мл суспендировали этил-6-хлор-4-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (792 мг, 2,29 ммоль) в 7 М аммиаке в метаноле (7,87 г, 10,0 мл, 70,0 ммоль). Колбу запаивали и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Обильное твердое вещество, образовавшееся в ходе реакции, отделяли фильтрованием, фильтрационный кек промывали свежим метанолом и высушивали в высоком вакууме с получением чистого 6-хлор-4-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (581 мг, 80,1% выход) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 12.14 (s, 1Н), 9.22 (s, 1Н), 8.89 (s, 1Н), 8.23 (s, 1Н), 7.87 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 7.27 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 7.10 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 1.73 (s, 6Н); ЖХМС 316,9 [М+Н]+.
Стадия 5
трет-Бутил-(18,2Р)-2-(6-карбамоил-5-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
В многократно запаиваемую трубку под давлением загружали 6-хлор-4-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид (200 мг, 631 мкмоль) и трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (135 мг, 631 мкмоль) в NMP (2,00 мл). Реакционную смесь нагревали в масляной бане при перемешивании при 120°С в течение 18 ч. Затем добавляли дополнительное количество трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (135 мг, 631 мкмоль) небольшими порциями в течение 7 часов, и реакцию продолжали в течение 18 ч. Растворитель отгоняли в высоком вакууме. Остаток растворяли в дихлорметане, содержащем несколько капель метанола, а затем очищали колоночной флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 50 г, Versaflash, Supelco), элюируя от 0 до 5% (МеОН, содержащий 10% NH4OH)/CH2Cl2 в течение 20 мин, с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (110 мг, 222 мкмоль, 35,2% выход) в виде желтой пены. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 11.48 (s, 1Н), 8.82 (br. s., 1Н), 8.00-8.11 (m, 1Н), 7.62 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 6.89 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 6.79 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 5.53-5.85 (m, 2Н), 5.06 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 4.47 (br. s., 1Н), 3.80-3.99 (m, 1Н), 1.24-1.93 (m, 23Н); ЖХМС 495,1 [М+Н]+.
Было также выделено некоторое количество исходного вещества 6-хлор-4-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (130 мг, 65,0% выход).
Стадия 6
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (110 мг, 222 мкмоль) в CH2Cl2 (3,00 мл) добавляли ТФУ (1,48 г, 1,00 мл, 13,0 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворители выпаривали, и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 23 г, Versaflash, Supelco), элюируя от 0 до 5% (МеОН, содержащий 10% NH4OH)/CH2Cl2 в течение 20 мин, с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (50 мг, 57% выход) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 11.47 (s, 1Н), 8.76 (s, 1Н), 8.06 (d, J=3.0 Гц, 1Н), 7.60 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 6.86 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 6.78 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 5.60-5.77 (m, 2Н), 4.25 (br. s., 1Н), 3.11 -3.24 (m, 1Н), 1.32-1.92 (m, 16Н); ЖХМС 395,1 [М+Н]+.
Пример 37
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
2-(6-Бромпиридин-2-ил)пропан-2-ол
В сухую круглодонную колбу на 250 мл, оборудованную магнитной мешалкой и перегородкой, загружали н-бутиллитий, 1,6 М в гексанах (30,3 мл, 48,5 ммоль), колбу охлаждали в бане сухой лед-ацетон до -76°С, и к раствору добавляли ТГФ (30 мл), затем медленно добавляли раствор 2,6-дибромпиридина (11,5 г, 48,5 ммоль) в ТГФ (60 мл) через канюлю в течение 15 мин. Темный желто-коричневый раствор перемешивали в течение 30 минут в бане с сухим льдом, затем добавляли пропан-2-он (4,75 г, 6 мл, 81,7 ммоль). Темно-зеленый раствор перемешивали в бане с сухим льдом в течение 15 минут, а затем давали подогреться до комнатной температуры. Через час осторожно добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония (100 мл), и продукт экстрагировали дихлорметаном (3×200), объединенные органические слои высушивали над сульфатом магния и выпаривали. Остаток очищали флэш-хроматографией (силикагель 50 мкм, 150 г, Analogix), элюируя от 0 до 50% дихлорметан/гексаны в течение 20 мин, с получением 2-(6-бромпиридин-2-ил)пропан-2-ола (9,9 г, 94,3% выход) в виде светло-желтой прозрачной жидкости. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 7.52-7.59 (m, 1Н), 7.33-7.40 (m, 2Н), 4.05 (br. s., 1Н), 1.55 (s, 6Н); ЖХМС 216,1, 218,1 [М+Н]+.
Стадия 2
2-(6-Аминопиридин-2-ил)пропан-2-ол
В толстостенную, многократно запаиваемую трубку в атмосфере аргона загружали оксид меди(I) (53,0 мг, 370 мкмоль), 2-(6-бромпиридин-2-ил)пропан-2-ол (1600 мг, 7,4 ммоль), 28% раствор гидроксида аммония (16,5 М) (8,98 мл, 148 ммоль), K2CO3 (205 мг, 1,48 ммоль), N,N-диметилэтилендиамин (65,3 мг, 81,3 мкл, 740 мкмоль) и этиленгликоль (14,8 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 6 ч при 60°С. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь экстрагировали дихлорметаном (3×25 мл), объединенные органические слои высушивали над сульфатом магния и выпаривали. Остаток очищали флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 23 г, Versaflash, Supelco), элюируя от 0 до 5% (10% гидроксид аммония в метаноле)/дихлорметан в течение 20 мин, с получением 2-(6-аминопиридин-2-ил)пропан-2-ола (626 мг, 55,5% выход) в виде светло-желтой жидкости. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 7.44 (t, J=7.7 Гц, 1Н), 6.67 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 6.38 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 5.12 (s, 1Н), 4.38-4.55 (m, 2Н), 1.49 (s, 6Н); ЖХМС 153,1, 155,1 [М+Н]+.
Стадия 3
Этил-6-хлор-4-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
Смесь этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (0,45 г, 2,04 ммоль) и 2-(6-аминопиридин-2-ил)пропан-2-ола (620 мг, 4,07 ммоль) растворяли в ацетонитриле (3,00 мл) и нагревали при 130°С в течение 18 ч. Смесь охлаждали, концентрировали, остаток адсорбировали на силикагеле и очищали флэш-хроматографией (силикагель 45 мкм, 160 г, Thomson), элюируя от 0 до 100% гексаны/этилацетат за 40 мин, с получением этил-6-хлор-4-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (405 мг, 59,1% выход). 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 10.72 (s, 1Н), 9.00 (s, 1Н), 7.76 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 7.34 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 6.89 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 5.21 (br. s., 1Н), 4.60 (q, J=7.2 Гц, 2H), 1.67 (s, 6Н), 1.54 (t, J=7.9 Гц, 3Н); ЖХМС 337,0, 339,0 [М+Н]+.
Стадия 4
6-Хлор-4-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
В круглодонной колбе на 50 мл суспендировали этил-6-хлор-4-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат (792 мг, 2,35 ммоль) в 7 М аммиаке в метаноле (7,87 г, 10,0 мл, 70,0 ммоль). Колбу запаивали и перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Растворители выпаривали, и остаток очищали флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 50 г, Versaflash, Supelco), элюируя от 0 до 5% (МеОН, содержащий 10% NH4OH)/CH2Cl2 в течение 20 мин, с получением 6-хлор-4-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (241 мг, 33,3% выход) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 11.64 (s, 1Н), 8.96 (s, 1Н), 8.18 (br. s., 1Н), 7.71 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 7.25 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 6.86 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 5.70 (br. s., 1Н), 1.64 (s, 6Н); ЖХМС 308,0, 310,0 [М+Н]+.
Стадия 5
трет-Бутил-(15,2Р)-2-(6-карбамоил-5-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
В сухую круглодонную колбу на 50 мл загружали 6-хлор-4-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид (241 мг, 783 мкмоль), растворенный в NMP (2,00 мл) К этому раствору добавляли трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (168 мг, 783 мкмоль), и реакционную смесь нагревали в масляной бане при перемешивании при 120°С в течение 18 ч. После этого к смеси добавляли дополнительное количество трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамата (168 мг, 783 мкмоль) небольшими порциями в течение 7 часов. После последнего добавления реакцию продолжали в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры растворитель отгоняли в высоком вакууме, остаток растворяли в дихлорметане, содержащем несколько капель метанола, а затем очищали флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 50 г, Versaflash, Supelco), элюируя от 0 до 5% (МеОН, содержащий 10% NH4OH)/CH2Cl2 в течение 20 мин, с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (179 мг, 47,1% выход) в виде желтой пены. 1Н ЯМР (хлороформ-d) δ: 11.54 (br. s., 1Н), 8.16 (br. s., 1Н), 8.04 (s, 1Н), 7.60 (t, J=7.9 Гц, 1H), 7.05 (d, J=7.6 Гц, 1H), 6.76 (d, J=8.3 Гц, 1H), 6.53-6.70 (m, 1Н), 5.81 (d, J=3.4 Гц, 1H), 5.43 (br. s., 1H), 3.71-4.14 (m, 3Н), 1.23-1.90 (m, 23H); ЖХМС 486,2 [M+H]+.
Стадия 6
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (179 мг, 369 мкмоль) в CH2Cl2 (3,00 мл) добавляли ТФУ (1,48 г, 1,00 мл, 13,0 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворитель выпаривали, и остаток очищали флэш-хроматографией (сферический силикагель 20-45 мкм, 23 г, Versaflash, Supelco), элюируя от 0 до 5% (МеОН, содержащий 10% NH4OH)/CH2Cl2 в течение 20 мин, с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (80 мг, 56,3% выход) в виде беловатой пены. 1Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 11.76 (s, 1Н), 8.38 (br. s., 1Н), 7.90 (s, 1Н), 7.60-7.78 (m, 2Н), 7.23 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 6.70-6.83 (m, 2Н), 5.18 (s, 1Н), 3.70 (br. s., 1Н), 3.09 (br. s., 1H), 1.21-1.77 (m, 16H); ЖХМС 386,1 [M+H]+.
Пример 38
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
(Е)-4-Метил-6-(проп-1-енил)пиридин-2-амин
6-Бром-4-метилпиридин-2-амин (500 мг, 2,67 ммоль), (Е)-6-метил-2-(проп-1-енил)-1,3,6,2-диоксаборолан-4,8-дион (1,05 г, 5,35 ммоль), карбонат цезия (2,61 г, 8,02 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий (0) (309 мг, 267 мкмоль) объединяли с диоксаном (7,4 мл) и водой (1,5 мл), и смесь нагревали до 150°С в течение 60 мин в микроволновом реакторе. Реакционную смесь охлаждали, а затем разбавляли этилацетатом и водой. Фазы разделяли, и органическую фазу промывали водой и соляным раствором. Органическую фазу концентрировали в вакууме, а затем очищали хроматографией (силикагель, от 20% до 60% этилацетата в гексанах) с получением остатка, который растирали с метанолом с получением желтого осадка. Этот осадок собирали фильтрованием и высушивали с получением (Е)-4-метил-6-(проп-1-енил)пиридин-2-амина (235 мг, 1,59 ммоль, 59%) в виде желтого масла. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 148,8 [М+Н].
Стадия 2
4-Метил-6-пропилпиридин-2-амин
К раствору (Е)-4-метил-6-(проп-1-енил)пиридин-2-амина (235 мг, 1,59 ммоль) в этаноле (5,29 мл) добавляли 10% палладий на углероде (169 мг, 159 мкмоль). Реакционную смесь откачивали и снова заполняли Н2 три раза. Смесь перемешивали в атмосфере водорода (баллон при 1 атм) в течение 16 ч, затем фильтровали через слой целлита. Фильтрат собирали, концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, градиент от 30 до 60% этилацетата в гексанах) с получением 4-метил-6-пропилпиридин-2-амина (135 мг, 899 мкмоль, 57%) в виде бесцветного масла. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 150,8 [М+Н].
Стадия 3
Этил-6-хлор-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
К раствору этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (335 мг, 1,52 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) добавляли 4-метил-6-пропилпиридин-2-амин (342 мг, 2,27 ммоль), и смесь нагревали в запаянной трубке при 130°С в течение 72 ч. Смесь охлаждали, концентрировали в вакууме, а затем очищали хроматографией (силикагель, от 10 до 35% этилацетата в гексанах) с получением этил-6-хлор-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (147 мг, 439 мкмоль, 29%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн1 10.61 (s, 1Н), 9.26 (s, 1Н), 6.74 (s, 1Н), 6.61 (s, 1Н), 4.58 (q, J=7.1 Гц, 2Н), 2.76 (t, J=7.5 Гц, 1Н), 2.35 (s, 3Н), 1.84 (m, 2Н), 1.53 (t, J=6.9 Гц, 3Н), 1.03 (t, J=7.3 Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 335,0 [М+Н].
Стадия 4
6-Хлор-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Смесь этил-6-хлор-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (147 мг, 439 мкмоль) в аммиаке в метаноле (7 н., 6,27 мл, 43,9 ммоль) нагревали до 40°С в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме с получением 6-хлор-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (134 мг, 438 мкмоль, 100%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.88 (s, 1Н), 9.16 (s, 1Н), 8.82 (s, 1Н), 8.18 (s, 1Н), 6.83 (s, 1Н), 6.76 (s, 1Н), 2.69 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 2.29 (s, 3Н), 1.76 (m, 1Н), 0.95 (t, J=7.3 Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 305,9 [М+Н].
Стадия 5
трет-Бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамат
К раствору 6-хлор-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (134 мг, 438 мкмоль) в NMP (1,5 мл) добавляли трет-бутил-(1S,2R)-2-аминоциклогексилкарбамат (376 мг, 1,75 ммоль) 3 порциями приблизительно через каждые 12 ч в течение 36 ч при нагревании при 140°С в периоды между добавлениями. Затем смесь разбавляли этилацетатом и соляным раствором. Фазы разделяли, и органическую фазу дважды промывали соляным раствором. Органическую фазу концентрировали в вакууме, а затем очищали хроматографией (силикагель, от 30 до 100% этилацетата в гексанах) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (91 мг, 188 мкмоль, 43%) в виде светло-коричневого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 484,3 [М+Н].
Стадия 6
6-((1R,2S)-2-Аминоциклогексиламино)-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(1S,2R)-2-(6-карбамоил-5-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)циклогексилкарбамата (91 мг, 188 мкмоль) в дихлорметане (2,9 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (429 мг, 290 мкл, 3,76 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме, затем разбавляли NH4OH и дихлорметаном. Смесь промывали водой, затем органическую фазу концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, от 3 до 15% метанола в дихлорметане) с получением 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (46 мг, 120 мкмоль, 64%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.59 (s, 1Н), 8.34 (s, 1Н), 8.08 (s, 1Н), 7.63 (s, 1Н), 6.80 (d, J=7.2 Гц, 1Н), 6.70 (s, 1Н), 6.60 (s, 1Н), 3.88 (s, 1Н), 3.25 (s, 1Н), 2.67 (t, J=7.4 Гц, 1Н), 2.26 (s, 3Н), 1.71 (m, 2Н), 1.54-1.71 (m, 6Н), 1.35 (s, 2Н), 0.93 (t, J=7.2 Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 384,1 [М+Н].
Пример 39
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
трет-Бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат
К раствору 6-хлор-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (73 мг, 239 мкмоль, полученного, как описано в примере 38) в NMP (796 мкл) добавляли трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат (206,4 мг, 956 мкмоль) 4 порциями приблизительно через каждые 12 ч в течение 48 ч и нагревали при 140°С в периоды между добавлениями. Через 48 ч смесь разбавляли этилацетатом и соляным раствором. Фазы разделяли, затем органическую фазу промывали соляным раствором (3х), концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, от 1 до 5% метанола в дихлорметане) с получением трет-бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (27 мг, 56 мкмоль, 23%) в виде светло-коричневого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 486,2 [М+Н].
Стадия 2
6-((3R,4R)-3-Аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (27 мг, 55,6 мкмоль) в дихлорметане (1 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (127 мг, 85,7 мкл, 1,11 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме, а затем остаток разбавляли дихлорметаном и 25% водным раствором NH4OH. Смесь промывали водой (2х), затем органическую фазу собирали, концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, от 1 до 10% раствора 99,5:0,5 метанол: NH4OH в дихлорметане) с получением 6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (7 мг, 18,2 мкмоль, 33%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.61 (s, 1Н), 8.38 (s, 1Н), 8.10 (s, 1Н), 7.68 (s, 1Н), 6.98 (d, J=5.8 Гц, 1Н), 6.71 (s, 1Н), 6.61 (s, 1Н), 4.08 (q, J=5.5 Гц, 1Н), 3.92 (d, J=9.9 Гц, 1Н), 3.81 (d, J=12.2 Гц, 1Н), 3.59 (d, J=11.7 Гц, 1Н), 3.47 (t, J=11.8 Гц, 1Н), 3.28 (s, 1Н), 3.17 (d, J=5.0 Гц, 2Н), 2.67 (t, J=7.8 Гц, 1Н), 2.33 (s, 1Н), 2.26 (s, 3Н), 1.72 (m, 3Н), 1.23 (s, 1Н), 0.93 (t, J=7.4 Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 386,2 [М+Н].
Пример 40
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
трет-Бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат
К раствору 6-хлор-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (200 мг, 622 мкмоль, полученного, как описано в примере 31) в NMP (2,1 мл) добавляли трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат (402 мг, 1,86 ммоль) 3 порциями приблизительно через каждые 12 ч в течение 36 ч и нагревали при 140°С в периоды между добавлениями. После суммарного периода 36 ч смесь охлаждали, разбавляли этилацетатом и соляным раствором, затем органическую фазу отделяли и промывали соляным раствором (3х). Затем органическую фазу концентрировали в вакууме, и полученный остаток очищали хроматографией (силикагель, от 1 до 5% метанола в дихлорметане) с получением трет-бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (77 мг, 154 мкмоль, 25%) в виде светло-коричневого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 502,2 [М+Н].
Стадия 2
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (77 мг, 154 мкмоль) в дихлорметане (2,4 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (350 мг, 237 мкл, 3,07 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 16 ч смесь концентрировали в вакууме, затем разбавляли 25% водным раствором NH4OH и дихлорметаном. Смесь промывали водой, затем органическую фазу концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, от 3 до 10% метанола в дихлорметане) с получением 6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (33 мг, 82,2 мкмоль, 54%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.37 (s, 1Н), 8.33 (s, 1Н), 7.74 (s, 1Н), 7.58 (s, 1Н), 7.41 (d, J=8.7 Гц, 1Н), 6.87 (d, J=8.8 Гц, 1Н), 6.76 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 3.98 (br. s, 1Н), 3.84 (m, 1Н), 3.79 (s, 3Н), 3.70 (d, J=11.3 Гц, 1Н), 3.51 (d, J=11.5 Гц, 1Н), 3.40 (t, J=11.2 Гц, 1Н), 2.99 (s, 1Н), 2.72 (t, J=7.4 Гц, 2Н), 1.81 (m, 1Н), 1.72 (m, 2Н), 1.72 (m, 3Н), 0.94 (t, J=7.3 Гц, 3Н); МС (ЭИ/ХИ) т/г.402,2 [М+Н].
Пример 41
6-((3R,4R)-3-Аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
(6-Бром-5-фтор-пиридин-2-ил)-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир
К раствору 6-бром-5-фтор-2-пиколиновой кислоты (2 г, 9,09 ммоль) в трет-бутаноле (46 мл) и триэтиламине (1,27 мл, 9,09 ммоль, экв.: 1,00) добавляли DPPA (1,97 мл, 9,09 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре до растворения всех твердых веществ (примерно 15 мин), после чего ее нагревали до 85°С в течение 2 ч. После охлаждения смесь концентрировали на силикагеле и подвергали хроматографии (силикагель, от 5% до 30% EtOAc в гексанах) с получением (6-бром-5-фтор-пиридин-2-ил)-карбаминовой кислоты трет-бутилового эфира (1,55 г, 59%) с некоторым количеством примесей. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 7.97 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 7.43 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 1.53 (s, 9Н).
Стадия 2
6-Бром-5-фтор-пиридин-2-иламин
К раствору (6-бром-5-фтор-пиридин-2-ил)-карбаминовой кислоты трет-бутилового эфира (1,43 г, 4,91 ммоль) в ДХМ (25 мл) добавляли ТФУ (3,78 мл, 49,1 ммоль, экв.: 10,0). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, после чего ее концентрировали в вакууме и снова растворяли в EtOAc. Органический слой промывали насыщенным водным раствором NaHCO3, а затем водой и соляным раствором. Полученный в результате органический слой was концентрировали на силикагеле и подвергали хроматографии (от 10% до 40% EtOAc/гексаны) с получением 6-бром-5-фтор-пиридин-2-иламина (850 мг, 91%). 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 7.23 (dd, J=8.6, 7.5 Гц, 1Н), 6.41 (dd, J=8.6, 2.6 Гц, 1Н), 4.40 (br. s, 2Н).
Стадия 3
5-Фтор-6-изопропенил-пиридин-2-иламин
К раствору 6-бром-5-фтор-пиридин-2-иламина (850 мг, 4,45 ммоль) в диметилацетамиде (13,5 мл) добавляли 4,4,5,5-тетраметил-2-(проп-1-ен-2-ил)-1,3,2-диоксаборолан (1,09 мл, 5,79 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий (514 мг, 445 мкмоль) и трехосновный фосфат калия (1,89 г, 8,9 ммоль) в воде (4 мл, 223 ммоль). Смесь герметично закрывали во флаконе для микроволнового реактора и нагревали при 150°С в микроволновом реакторе в течение 15 мин. После охлаждения смесь разбавляли EtOAc, промывали водой и соляным раствором, концентрировали на силикагеле и подвергали хроматографии (от 20% до 100% EtOAc в гексанах) с получением 5-фтор-6-изопропенил-пиридин-2-иламина, загрязненного примесями, образовавшимися от катализатора (примерно 800 мг), который использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 4
5-Фтор-6-изопропилпиридин-2-амин
К раствору 5-фтор-6-изопропенил-пиридин-2-иламина (неочищенного из последней стадии, 4,45 ммоль) в метаноле (13,5 мл) добавляли 10% палладий на углероде (95 мг) при комнатной температуре. Присоединяли баллон водорода (1 атм), и смесь перемешивали в течение ночи. Через 18 ч смесь фильтровали через целлит, концентрировали на силикагеле и подвергали хроматографии (от 10% до 40% EtOАс в гексанах) с получением 5-фтор-6-изопропилпиридин-2-амина (470 мг, 69% за две стадии). 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) 6 млн-1 7.12 (t, J=9.2 Гц, 1Н), 6.30 (dd, J=8.5, 3.0 Гц, 1Н), 4.31 (br. s, 2Н), 4.15 (m, 1Н), 1.26 (d, J=7.2 Гц, 6Н).
Стадия 5
Этил-6-хлор-4-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
К раствору этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (674 мг, 3,05 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) добавляли 5-фтор-6-изопропилпиридин-2-амин (470 мг, 3,05 ммоль) и нагревали при 130°С в запаянной трубке в течение 18 ч. После завершения реакции смесь концентрировали на силикагеле и очищали хроматографией (силикагель, от 10% до 33% EtOAc в гексанах) с получением восстановленного анилина (300 мг) и этил-6-хлор-4-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (150 мг, 22%). 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 10.72 (s, 1Н), 9.23 (s, 1Н), 7.38 (t, J=8A Гц, 1Н), 6.79 (dd, J=8.5, 2.8 Гц, 1Н), 4.57 (m, 2Н), 3.45 (m, 1Н), 1.53 (m, 3Н), 1.36 (d, J=6.9 Гц, 6Н).
Стадия 6
6-Хлор-4-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору этил-6-хлор-4-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2- иламино)пиридазин-3-карбоксилата (290 мг, 856 мкмоль) добавляли 7 н. аммиак в МеОН (12,2 мл, 85,6 ммоль). Смесь перемешивали при 40°С в течение 18 ч, после чего растворитель удаляли с получением 6-хлор-4-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (250 мг, 94%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 11.86 (s, 1Н), 9.26 (s, 1Н), 8.19 (br. s, 1Н), 7.36 (t, J=8.8 Гц, 1Н), 6.79 (dd, J=8.5, 2.8 Гц, 1Н), 5.70 (br. s, 1Н), 3.45 (гл, 1Н), 1.37 (d, J=6.7 Гц, 6Н).
Стадия 7
трет-Бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат
К раствору 6-хлор-4-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (250 мг, 807 мкмоль) в NMP (3,2 мл) добавляли трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат (174 мг, 807 мкмоль), и смесь нагревали до 140°С. В течение следующих 36 ч добавляли три дополнительные порции трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (174 мг, 807 мкмоль) через интервалы 12 ч. Через 48 ч смесь охлаждали, разбавляли EtOАс и промывали водой и соляным раствором (2х). Органический слой концентрировали на силикагеле и очищали хроматографией (от 70% до 100% EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (100 мг, 25%). 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 11.49 (s, 1Н), 8.22 (s, 1Н), 8.06 (br. s, 1Н), 7.29 (t, J=9.4 Гц, 1Н), 6.70 (dd, J=8.9, 3.0 Гц, 1Н), 6.07 (br. s, 1H), 5.50 (br. s, 1H), 5.35 (br. s, 1H), 4.26 (br. s, 1H), 4.03 (m, 2H), 3.92 (d, J=11.4 Гц, 1H), 3.68 (d, J=11.5 Гц, 1H), 3.61 (t, J=11.8 Гц, 1H), 3.41 (m, 1H), 2.24 (d, J=11.2 Гц, 1H), 1.81 (m, 1H), 1.49 (s, 9 H), 1.35 (d, J=6.9 Гц, 6 H).
Стадия 8
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (100 мг, 204 мкмоль) в дихлорметане (3 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (466 мг, 315 мкл, 4,1 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь разбавляли 25% водным раствором NH4OH, дихлорметаном и водой. Органическую фазу отделяли и промывали водой (2х), затем концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, от 3 до 10% метанола в дихлорметане) с получением 6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (39 мг, 100 мкмоль, 49%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.76 (s, 1Н), 8.39 (s, 1Н), 7.85 (s, 1Н), 7.65 (s, 1Н), 7.60 (t, J=9.2 Гц, 1Н), 6.88 (dd, J=8.9, 2.9 Гц, 1Н), 6.78 (d, J=7.7 Гц, 1Н), 3.96 (br. s, 1Н), 3.80 (m, 1Н), 3.70 (dd, J=11.4, 2.8 Гц, 1Н), 3.49 (dd, J=11.4. 1.7 Гц, 1Н), 3.37 (m, 2Н), 2.96 (s, 1Н), 1.80 (m, 1Н), 1.69 (m, 2Н), 1.29 (d, J=6.8 Гц, 6Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 390,2 [М+Н].
Пример 42
6-((3R,4R)-3-Аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
Стадия 1
6-Метокси-5-(проп-1-ен-2-ил)пиридин-2-амин
К раствору 5-бром-6-метоксипиридин-2-амина (1,72 г, 8,47 ммоль) в диметилацетамиде (26 мл) добавляли 4,4,5,5-тетраметил-2-(проп-1-ен-2-ил)-1,3,2-диоксаборолан (2,07 мл, 11,0 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий (979 мг, 847 мкмоль) и трехосновный фосфат калия (3,6 г, 16,9 ммоль) в воде (7,63 мл, 424 ммоль). Смесь герметично закрывали во флаконе для микроволнового реактора и нагревали при 150°С в микроволновом реакторе в течение 15 мин. После охлаждения смесь разбавляли EtOAc и Et2O, промывали водой и соляным раствором, концентрировали на силикагеле и подвергали хроматографии (от 10% до 40% EtOAc в гексанах) с получением 6-метокси-5-(проп-1-ен-2-ил)пиридин-2-амина, загрязненного примесями, образовавшимися от катализатора (примерно 950 мг). 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 7.34 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 6.06 (d, J=8.1 Гц, 1Н), 5.19 (m, 1Н), 5.09 (m, 1Н), 4.29 (br. s, 2Н), 3.91 (s, 3Н), 2.10 (s, 3H).
Стадия 2
5-Изопропил-6-метоксипиридин-2-амин
К раствору 5-фтор-6-изопропенил-пиридин-2-иламина (неочищенного со стадии 1, 8,47 ммоль) в метаноле (17,5 мл) добавляли 10% палладий на углероде (123 мг) при комнатной температуре. Присоединяли баллон водорода (1 атм), и смесь перемешивали в течение ночи. Через 18 часов смесь фильтровали через целлит, концентрировали на силикагеле и подвергали хроматографии (от 10% до 40% этилацетата в гексанах) с получением 5-изопропил-6-метоксипиридин-2-амина (740 мг, 53% за две стадии). 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 7.26 (d, J=7.8 Гц, 1Н), 6.07 (d, J=8.1 Гц, 1Н), 4.19 (br. s, 2Н), 3.90 (s, 3Н), 3.08 (m, 1Н), 1.17 (d, J=6.9 Гц, 6Н).
Стадия 3
Этил-6-хлор-4-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
К раствору этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (1,47 г, 6,64 ммоль) в ацетонитриле (7,6 мл) добавляли 5-изопропил-6-метоксипиридин-2-амин (830 мг, 4,99 ммоль), и смесь нагревали при 100°С в запаянной трубке в течение 18 ч. После завершения реакции смесь концентрировали на силикагеле и очищали хроматографией (силикагель, от 10% до 80% этилацетата в гексанах) с получением этил-6-хлор-4-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (500 мг, 28,5%). МС (ЭИ/ХИ) m/z: 351,2 [М+Н].
Стадия 4
6-Хлор-4-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору этил-6-хлор-4-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (500 мг, 1,43 ммоль) добавляли 7 н. аммиак в МеОН (20,5 мл, 143 ммоль). Смесь перемешивали при 40°С в течение 18 ч, после чего растворитель удаляли с получением 6-хлор-4-(5-изопропил-6-метокси-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты амида (450 мг, 98%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 11.47 (s, 1Н), 9.10 (s, 1Н), 8.17 (s, 1Н), 7.48 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 6.53 (d, J=7.7 Гц, 1Н), 5.71 (s, 1Н), 4.04 (s, 3Н), 3.18 (m, 1Н), 1.23 (d, J=7.1 Гц, 6Н).
Стадия 5
трет-Бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат
К раствору 6-хлор-4-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (250 мг, 777 мкмоль) в NMP (2,6 мл) добавляли трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат (672 мг, 2,33 ммоль) четырьмя порциями приблизительно через каждые 12 ч и нагревали до 140°С в периоды между добавлениями. После суммарного периода 48 ч смесь охлаждали, затем разбавляли этилацетатом и соляным раствором. Фазы разделяли, затем органическую фазу промывали соляным раствором (2х), концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, от 0 до 4% раствора 99,5:0,5 метанол: NH4OH в дихлорметане) с получением трет-бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (141 мг, 281 мкмоль, 36%) в виде светло-коричневого твердого вещества. МС (ЭИ/ХИ) m/z: 502,3 [М+Н].
Стадия 6
6-((3R,4R)-3-Аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (141 мг, 281 мкмоль) в дихлорметане (4,3 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (641 мг, 433 мкл, 5,62 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь разбавляли 25% водным раствором NH4OH, дихлорметаном и водой. Органическую фазу отделяли и промывали водой (2х), затем концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, от 3 до 10% раствора 99,5:0,5 метанол: NH4OH в дихлорметане) с получением 6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (35 мг, 87 мкмоль, 31%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн1 11.53 (s, 1Н), 8.37 (s, 1Н), 7.70 (s, 1Н), 7.62 (s, 1Н), 7.54 (d, J=8.1 Гц, 1Н), 6.80 (d, J=7.8 Гц, 1Н), 6.54 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 4.05 (br. s, 1Н), 3.81 (d, J=11.9 Гц, 1Н), 3.67 (dd, J=10.9, 3.5 Гц, 1Н), 3.49 (dd, J=11.1. 1.9 Гц, 1Н), 3.37 (m, 2Н), 3.08 (m, 1Н), 2.97 (s, 1Н), 1.81 (m, 1Н), 1.65 (m, 1Н), 1.16 (d, J=6.8 Гц, 6Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 402,3 [М+Н].
Пример 43
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-кар6оксамид
Стадия 1
Этил-6-хлор-4-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилат
К раствору этил-4,6-дихлорпиридазин-3-карбоксилата (1,63 г, 7,36 ммоль) в ацетонитриле (25 мл) добавляли 6-изопропоксипиридин-2-амин (1,12 г, 7,36 ммоль), и смесь нагревали при 130°С в запаянной трубке в течение 60 ч. После завершения реакции смесь концентрировали на силикагеле и очищали хроматографией (от 20% до 66% EtOAc в гексанах) с получением этил-6-хлор-4-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (330 мг, 13%). МС (ЭИ/ХИ) m/z: 337,1 [М+Н].
Стадия 2
6-Хлор-4-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору полученного этил-6-хлор-4-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксилата (530 мг, 1,57 ммоль) добавляли 7 н. аммиак в МеОН (16,9 мл, 118 ммоль). Смесь перемешивали при 40°С в течение 18 ч, после чего растворитель удаляли с получением 6-хлор-4-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (470 мг, 97%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн1 11.57 (s, 1Н), 9.08 (s, 1Н), 8.17 (s, 1Н), 7.58 (t, J=7.8 Гц, 1Н), 6.50 (d, J=7.3 Гц, 1Н), 6.44 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 5.69 (s, 1Н), 5.23 (m, 1Н), 1.47 (d, J=6.3 Гц, 6Н).
Стадия 3
(3R,4R)-4-(6-Карбамоил-5-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат
К раствору 6-хлор-4-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (270 мг, 877 мкмоль, экв.: 1,00) в NMP (3,51 мл) добавляли трет-бутил-(3R,3R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат (190 мг, 877 мкмоль, экв.: 1,00), и смесь нагревали до 140°С. В течение следующих 36 ч добавляли три дополнительные порции амина через 12 ч интервалы. Через 48 ч смесь охлаждали, разбавляли EtOAc и промывали водой и соляным раствором (2х). Органический слой концентрировали на силикагеле и очищали хроматографией (от 70% до 100% EtOAc/гексаны) с получением (3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (190 мг, 44,4%). 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d6) δ млн-1 11.37 (s, 1Н), 8.06 (s, 1Н), 7.92 (s, 1Н), 7.49 (t, J=7.5 Гц, 1Н), 6.44 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 6.31 (d, J=8.2 Гц, 1Н), 5.91 (s, 1Н), 5.67 (s, 1Н), 5.38 (d, J=8.5 Гц, 1Н), 5.15 (m, 1Н), 4.30 (m, 1Н), 4.05 (s, 1Н), 4.00 (d, J=12.5 Гц, 1Н), 3.90 (d, J=12.3 Гц, 1Н), 3.68 (d, J=11.3 Гц, 1Н), 3.61 (t, J=W.8 Гц, 1Н), 2.27 (s, 1Н), 1.79 (m, 1Н), 1.44 (m, 15 Н).
Стадия 4
6-((3R,4R)-3-Аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид
К раствору трет-бутил-(3R,4R)-4-(6-карбамоил-5-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (185 мг, 379 мкмоль) в дихлорметане (5,9 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (865 мг, 585 мкл, 7,59 ммоль), и смесь перемешивали при кт в течение 16 ч. Смесь разбавляли 25% водным раствором NH4OH, дихлорметаном и водой.
Органическую фазу отделяли и промывали водой (2х), затем концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (силикагель, от 3 до 10% раствора 99,5:0,5 метанол: NH4OH в дихлорметане) с получением 6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамида (68 мг, 176 мкмоль, 46%) в виде беловатого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ млн-1 11.56 (s, 1Н), 8.38 (s, 1Н), 7.62 (m, 3Н), 6.76 (d, J=7.7 Гц, 1Н), 6.54 (d, J=7.8 Гц, 1Н), 6.35 (d, J=8.2 Гц, 1Н), 5.18 (m, 1Н), 4.07 (br. s, 1Н), 3.80 (d, J=11.3 Гц, 1Н), 3.67 (dd, J=11.6, 3.8 Гц, 1Н), 3.50 (dd, J=11.9. 2.3 Гц, 1Н), 3.39 (m, 2Н), 2.96 (s, 1Н), 1.78 (m, 1Н), 1.68 (m, 2Н), 1.33 (dd, J=6.3, 1.7 Гц, 6Н); МС (ЭИ/ХИ) m/z: 388,3 [М+Н].
Биологические примеры
Информация анализа SYK
Определение IC50 ингибирования тирозинкиназы селезенки (SYK).
Анализ киназы SYK представляет собой стандартный киназный анализ, адаптированный к формату 96-луночных планшетов. Этот анализ проводят в 96-луночном формате для определения IC50 на 8 образцах, представляющих собой 10 полулогарифмических разведений, и объеме реакции 40 мкл. Этот анализ измеряет включение радиоактивно меченого 33Р γТР в пептидный субстрат, биотинилированный на N-конце, образованный из природной консенсус-последовательности фосфоакцептора (Biotin-11аа DY*E). Фосфорилированные продукты определяли после остановки реакций ЭДТА и добавления гранул, покрытых стрептавидином. Репрезентативные результаты приведены в таблице II выше.
Аналитические планшеты: 96-луночные планшеты Multiscreen с фильтрами 0,65 мкм (Millipore Cat. No.: MADVNOB10)
Гранулы, покрытые стрептавидином: Стрептавидин-сефароза ТМ, 5,0 мл разведенной суспензии в 50 мМ ЭДТА/ФСБ (1:100) (Amersham, №по каталогу: 17-5113-01)
Соединения: 10 мМ в 100% диметилсульфоксиде (ДМСО), конечная концентрация: соединение 0,003-100 мкМ в 10% ДМСО
Фермент: Рекомбинантный полноразмерный белок SYK человека (Invitrogen № по каталогу: PV4089), дефосфорилированный тирозинфосфатазой белка РТР1В, рабочий раствор 8,89 нМ, конечная концентрация: 0,004 мкМ.
Пептид 1: биотинилированный пептид образован из природной консенсус-последовательности фосфоакцептора (Biotin-EPEGDYEEVLE), специальный заказ от фирмы QCB, исходный раствор 20 мМ, конечная концентрация: 10 мкМ.
АТФ: Аденозин-5'-трифосфат 20 мМ (ROCHE № по каталогу: 93202720), конечная концентрация: 20 мкМ
Буфер: ГЭПЭС: 2-Гидроксиэтилпиперазин-2-этансульфоновая кислота (Sigma, №по каталогу: Н-3375), конечная концентрация: 50 мМ ГЭПЭС pH 7,5
БСА: Бычий сывороточный альбумин фракция V, без жирных кислот (Roche Diagnostics GmbH, № по каталогу 9100221), разведен до конечной концентрации 0,1%
ЭДТА: исходный раствор ЭДТА 500 мМ (GIBCO, № по каталогу: 15575-038) конечная концентрация: 0,1 мМ
ДТТ: 1,4-Дитиотрейтол (Roche Diagnostics GmbH, № по каталогу: 197777), конечная концентрация: 1 mM
MgCl2×6H2O: MERCK, № по каталогу: 105833.1000, конечная концентрация: 10 мМ
Аналитический буфер для разведения (АБР): 50 мМ ГЭПЭС, 0,1 мМ ЭГТА, 0,1 мМ ванадат Na, 0,1 мМ β-глицерофосфат, 10 мМ MgCl2, 1 мМ ДТТ, 0,1% БСА, pH 7,5
Буфер для отмывки гранул: 10 г/л ФСБ (фосфатно-солевой буферный раствор), содержащий 2 М NaCl+1% фосфорная кислота.
Экспериментальный метод
В объеме 20 мкл 18 мкл рекомбинантной полноразмерной киназы SYK [8,89 нМ] смешивали с 2 мкл 10Х концентраций тестируемых соединений [обычно 100 мкМ - 0,003 мкМ] в [10%] ДМСО, и смесь инкубировали в течение 15 мин при КТ.
Киназную реакцию инициировали добавлением 20 мкл 2х смеси субстрата, содержащей биотин-пептидный субстрат [20 мкМ], АТФ [40 мкМ] и 33РγАТФ [2 мкКи/реакция]. После инкубации при КТ в течение 30 мин реакцию останавливали путем перенесения образца 25 мкл реакционной смеси в 96-луночный планшет с мембраной 0,65 мкм Millipore MADVNOB, содержащий 100 мкл 5 мМ ЭДТА и гранулы, покрытые 10% стрептавидином в ФСБ.
Несвязанные радиоактивные нуклеотиды отмывали в вакууме 3×250 мкл 2 М NaCl; 2×250 мкл 2 М NaCl+1% фосфорная кислота и 1×250 мкл H2O. После последней отмывки планшеты с мембраной переносили в адаптер для планшетов, высушивали нагреванием в течение минимум 1 часа при 60°С, и в каждую лунку добавляли 60 мкл сцинтилляционной смеси и считали количество радиоактивности в счетчике Top Counter.
Процент ингибирования вычисляли на основании доли не ингибированного фермента:
% Ингибирования=(1-((Тест - положительный контроль)/(отрицательный контроль - положительный контроль)))*100
IC50 вычисляли, используя соответствие нелинейной кривой, с помощью программы XLfit (ID Business Solution Ltd., Guilford, Surrey, UK).
Изложенное выше изобретение раскрыто в некоторых подробностях в качестве иллюстрации и примера в целях ясности и понимания. Специалисту в данной области техники очевидно, что на практике можно применять изменения и модификации в пределах объема прилагаемой формулы изобретения. Поэтому понятно, что приведенное выше описание подразумевают как иллюстративное и неограничивающее. Объем изобретения, таким образом, следует определять не со ссылкой на приведенное выше описание, а вместо этого его следует определять со ссылкой на приведенную ниже прилагаемую формулу изобретения, параллельно с полным объемом эквивалентов, которыми озаглавлены пункты такой формулы изобретения.
Все патенты, заявки на патенты и публикации, цитируемые в данном изобретении, полностью включены в данное изобретение посредством ссылки для всех целей в такой же степени, как если бы каждое из отдельного патента, заявки на патент или публикации было указано индивидуально.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СОЕДИНЕНИЯ ТИЕНОПИРИМИДИНА | 2013 |
|
RU2637925C2 |
| КЛАСС БИФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ХИМЕРНЫХ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ ДЛЯ НАПРАВЛЕННОГО РАЗРУШЕНИЯ АНДРОГЕННЫХ РЕЦЕПТОРОВ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2020 |
|
RU2825000C2 |
| БЕНЗОТИАЗОЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ РАССТРОЙСТВ | 2018 |
|
RU2778370C2 |
| МОДУЛЯТОРЫ ПРОТЕОЛИЗА И СООТВЕТСТВУЮЩИЕ СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2805511C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ АДАМАНТИЛА, ПОЛЕЗНЫЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ JNK-ОПОСРЕДОВАННОГО РАССТРОЙСТВА | 2012 |
|
RU2626890C2 |
| ФЕНИКОЛОВЫЕ ПРОТИВОБАКТЕРИАЛЬНЫЕ СРЕДСТВА | 2013 |
|
RU2593204C2 |
| ЗАМЕЩЕННЫЕ ДИАМИНОКАРБОКСАМИДНЫЕ И ДИАМИНОКАРБОНИТРИЛЬНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРИМИДИНОВ, ИХ КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ С ИХ ПОМОЩЬЮ | 2012 |
|
RU2625309C2 |
| PROTAC, ЦЕЛЕНАПРАВЛЕННО ВОЗДЕЙСТВУЮЩИЕ НА ТАУ-БЕЛОК, И СВЯЗАННЫЕ С НИМИ СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ | 2017 |
|
RU2805523C2 |
| Новые модулирующие регуляцию дыхания соединения и способы их получения и применения | 2016 |
|
RU2734506C2 |
| СП0СОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЕДИНЕНИЙ ДИГИДРОИНДЕНАМИДА, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИИ, СОДЕРЖАЩИЕ ДАННЫЕ СОЕДИНЕНИЕ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРА ПРОТЕИНКИНАЗЫ | 2009 |
|
RU2528408C2 |
Настоящее изобретение относится к новым пиридазинамидам формулы I, где все переменные заместители определены в формуле изобретения, и их фармацевтически приемлемым солям, а также к фармацевтической композиции на их основе. Соединения формулы (I) являются ингибиторами SYK и полезны для лечения аутоиммунных и воспалительных заболеваний. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 табл., 43 пр.
1. Соединение формулы I
,
где:
А представляет собой циклогексил или тетрагидропиранил;
каждый X независимо представляет собой амино;
m равно 1;
В представляет собой фенил, пиридил, пирроло[2,3-b]пиридинил или пиразолил;
каждый Y независимо представляет собой атом галогена, (С1-С6)алкил, (С1-С6)алкокси, галоген(С1-С6)алкил, гидрокси(С1-С6)алкил, (С1-С6)алкилсульфонил, циклоалкил, моноциклический ароматический гетероцикл, имеющий 5 кольцевых атомов и 3 гетероатома N, или пиразолил;
n равно 0, 1 или 2;
где термин «циклоалкил» относится к насыщенному карбоциклическому кольцу, содержащему от 3 до 8 атомов углерода,
или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение по п. 1, где В представляет собой пиридил.
3. Соединение по п. 1, где n равно 1.
4. Соединение по п. 1, где Y представляет собой (С1-С6)алкил, циклоалкил, триазолил, пиразолил или (С1-С6)алкилсульфонил.
5. Соединение по п. 1, где Y представляет собой (С1-С6)алкил.
6. Соединение по п. 1, где n равно 2.
7. Соединение по п. 6, где один Y представляет собой (С1-С6)алкил, а другой представляет собой атом галогена или (С1-С6)алкил.
8. Соединение по п. 1, где В представляет собой пирроло[2,3-b]пиридинил или пиразолил.
9. Соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих соединений:
амид 6-(цис-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-метилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-(цис-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-этилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-4-(6-метилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((1S,2R)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-[1,2,3]триазол-1-ил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-(цис-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-метансульфонилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-пара-толуиламинопиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-пиразол-3-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-метилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-6-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-фтор-6-метилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-этилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5,6-диметилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-хлор-6-метилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
амид 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5,6-диметоксипиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид 2,2,2-трифторацетат;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-(циклогексиламино)-4-(6-циклопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-циклобутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
4-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-иламино)-6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)пиридазин-3-карбоксамид;
амид 6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-5-метилпиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
амид 6-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-4-(6-изопропил-5-метил-пиридин-2-иламино)-пиридазин-3-карбоновой кислоты;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(3,5-диметилфениламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-трет-бутилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-этоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
4-(6-(1Н-пиразол-1-ил)пиридин-2-иламино)-6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-изопропил-5-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-изопропил-4-метилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((1R,2S)-2-аминоциклогексиламино)-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(4-метил-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-метокси-6-пропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-фтор-6-изопропилпиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид;
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(5-изопропил-6-метоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид; и
6-((3R,4R)-3-аминотетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)-4-(6-изопропоксипиридин-2-иламино)пиридазин-3-карбоксамид.
10. Фармацевтическая композиция, ингибирующая тирозинкиназу селезенки (SYK), содержащая соединение по любому из пп. 1-9, смешанное, по меньшей мере, с одним фармацевтически приемлемым носителем, эксципиентом или разбавителем.
| Устройство для радиоприема | 1924 |
|
SU1184A1 |
| EA 201001618 А1, 30.06.2011 | |||
| EA 201001619 А1, 30.06.2011. | |||
