СОЕДИНЕНИЯ ТИЕНОПИРИМИДИНА Российский патент 2017 года по МПК C07D495/04 C07D513/04 A61K31/519 A61P3/10 A61P17/06 A61P19/02 A61P25/28 A61P35/00 

Протеин киназы представляют собой одно из крупнейших семейств ферментов человека; они регулируют разнообразные процессы передачи сигнала, присоединяя к белкам фосфатные группы. В частности, тирозин киназы фосфорилируют белки по гидроксильной группе тирозиновых остатков. В семейство тирозиновых киназ входят участники, которые контролируют рост клеток, их миграцию и дифференциацию. Нарушения активности киназ вовлечены в развитие разнообразных заболеваний человека, включая раки, аутоиммунные и воспалительные заболевания. Поскольку тирозин киназы относятся к числу основных регуляторов передачи сигнала в клетке, они позволяют регулировать функцию клетки с использованием низкомолекулярных ингибиторов киназной активности и, тем самым, представляют собой удобную мишень для дизайна лекарственных средств. Помимо лечения опосредуемых киназами заболеваний, селективные и эффективные ингибиторы киназной активности полезны также при исследовании процессов передачи сигнала в клетке и для идентификации других клеточных мишеней, представляющих собой терапевтический интерес.

SYK (Spleen Tyrosine Kinase, тирозиновая киназа селезенки) представляет собой нерецепторную тирозиновую киназу, существенную для активации В-клеток посредством передачи сигнала через рецепторы В-клеток (B-cell receptor, BCR). SYK активируется при связывании с фосфорилированными BCR и, таким образом, инициирует начальные события, связанные с вызванной BCR-активацией передачей сигнала. Мыши с недостатком SYK демонстрируют ранний блок в развитии В-клеток. Таким образом, ингибирование ферментативной SYK активности в клетках предлагается как способ лечения аутоиммунных заболеваний благодаря своему влиянию на производство аутоантител.

Помимо роли, которую SYK играет в передаче BCR-сигнала и активации В-клеток, она также играет ключевую роль в опосредуемой FceRI дегрануляции тучных клеток и активации эозинофилов. Так, SYK принимает участие в развитии аллергических расстройств, включая астму. Этот фермент связывается с фосфорилированной гамма-цепью FcγRI посредством ее доменов SH2 и важна для последующей передачи сигнала. Лишенные SYK тучные клетки демонстрируют нарушения в своем дегранулировании, а также секреции арахидоновой кислоты и цитокинов. Этот эффект был также показан для фармакологических агентов, ингибирующих активность SYK в тучных клетках. Воздействие SYK антисенсных олигонуклеотидов ингибирует антиген-индуцированную инфильтрацию эозинофилов и нейтрофилов в животных моделях астмы. Дефицитные по SYK эозинофилы демонстрируют нарушение своей активации в ответ на стимуляцию FceR. Таким образом, низкомолекулярные ингибиторы SYK будут полезны при лечении аллергических воспалительных заболеваний, включая астму.

В связи с наличием многочисленных заболеваний, состояния которых предполагается облегчить при лечении, включающем модулирование сигнального пути SYK, становится совершенно очевидным, что новые соединения, модулирующие путь SYK, и способы применения этих соединений должны обеспечить большому количеству пациентов существенную терапевтическую выгоду. В настоящем документе приводятся новые соединения для их применения при терапевтическом лечении аутоиммунных и воспалительных заболеваний путем взаимодействия с сигнальным путем SYK или путем ингибирования SYK-киназы.

Заявка относится к соединению формулы I

где каждая группа А независимо представляет собой моноциклический или бициклический арил или гетероарил, возможно, замещенный одной или более группами А';

каждая группа А' независимо представляет собой низший алкил, галоген, циано или гетероарил;

каждая группа R¹ независимо представляет собой низший алкил, циклоалкил или гетероциклоалкил, возможно, замещенный одной или более группами R^1'; и

каждая группа R^1' независимо представляет собой амино или низший алкил амино;

или к его фармацевтически приемлемой соли.

Заявка относится к способу лечения воспалительного или аутоиммунного состояния, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Заявка относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I, смешанное, по меньшей мере, с одним фармацевтически приемлемым носителем, эксципиентом или разбавителем.

Определения

Термин в единственном числе означает один или больше соответствующих термину предметов или явлений; например, "соединение" означает одно или больше соединений или, по меньшей мере, одно соединение. Единственное число, а также термины "один или более" и "по меньшей мере, один" в настоящем документе могут использоваться взаимозаменяемо.

Фраза "в соответствии с данным здесь определением" означает максимально широкое определение для каждой группы, из краткого описания изобретения или формулы изобретения. В соответствии со всеми остальными воплощениями, заместители, которые могут присутствовать в каждом воплощении и которые явным образом здесь не определены, сохраняют предельно широкое определение, данное в кратком описании изобретения.

В соответствии с настоящей спецификацией, будь то переходная фраза или формула изобретения, термины "содержит(ат)" или "содержащий(ая)" следует интерпретировать как имеющие открытое значение. То есть, эти термины следует считать синонимами фраз "содержащие, по меньшей мере," или "включающие, по меньшей мере". В контексте процесса термин "содержащий" означает, что процесс включает, по меньшей мере, перечисляемые этапы, но может включать и дополнительные этапы. В контексте соединения или композиции термин "содержащий" означает, что соединение или композиция включает, по меньшей мере, перечисленные свойства или компоненты, но может включать и другие свойства или компоненты.

Если специально не указано иначе, в настоящем документе союз "или" имеет включающий смысл "и/или", а не исключающий ("или одно, или другое").

Термин "независимо" здесь используется, чтобы показать, что переменная применима к любому экземпляру, независимо от наличия или отсутствия переменной в том же соединении, имеющей такое же или другое определение. Так, если в соединении R'' появляется дважды и определена как “независимо углерод или азот”, обе группы R'' могут быть азотом, или одна группа может быть углеродом, а другая азотом.

Если какая-либо переменная более одного раза представлена в любой группе или формуле, отображающей или описывающей соединения, используемые или заявленные в настоящем изобретении, ее определение в каждом случае не зависит от определения в каждом другом случае. Кроме того, комбинации заместителей и/или переменных допустимы, только если такие комбинации приводят к образованию стабильных соединений.

Символы "*" в конце связи иличерез связь, относятся к точке прикрепления функциональной или другой химической группы к остальной части молекулы, которой они принадлежат. Так, например,

MeC(=O)OR⁴ где или ^.

Линия, проходящая через циклическую систему (в отличие от связи с отдельным центром), показывает, что связь может относиться к любому подходящих атомов цикла.

Термины "возможный" или "возможно" в настоящем описании означает, что описываемое далее событие или обстоятельство может, но не обязано произойти, а описание включает примеры, где событие или обстоятельство происходит, а также и примеры, где оно не происходит. Например, "возможно, замещенный" означает, что возможно замещенная группа может включать в себя атом водорода или заместитель.

Фраза "возможная связь" означает, что связь может присутствовать или не присутствовать, и что описание включает простые, двойные или тройные связи. Если заместитель обозначен как "связь" или "отсутствует", то связанные с ним атомы соединены непосредственно.

Термин "около" в настоящем описании означает "приблизительно", "в районе", "грубо" или "округленно". Если термин "около" применяется совместно с числовым диапазоном, он модифицирует диапазон, раздвигая границы выше и ниже заданного численного значения. В целом, термин "около" используется, чтобы изменить заданный численный диапазон на 20% выше и ниже заявленного значения.

Определенные соединения могут демонстрировать таутомеризм. Таутомерные соединения могут существовать в виде двух или более взаимопревращающихся разновидностей. Прототропные таутомеры образуются вследствие миграции между атомами атома ковалентно связанного водорода. В общем случае, таутомеры существуют в равновесии, и попытка выделить индивидуальные таутомеры, обычно, приводит к образованию смеси, чьи физические и химические свойства согласуются со свойствами смеси соединений. Положение равновесия зависит от химических компонентов молекулы. Например, во многих алифатических альдегидах и кетонах, таких как ацетальдегид, кето-форма преобладает, а в фенолах преобладает енольная форма. Обычные прототропные таутомеры включают кето/енолы (-С(=O)-СН-D-С(-ОН)=СН-), амиды/имидные кислоты (-C(=O)-NH-D-C(-OH)=N-) и амидины (-C(=NR)-NH-D-C(-NHR)=N-). Два последних особенно распространены в гетероарилах и гетероциклах, и настоящее изобретение охватывает все таутомерные формы этих соединений.

Значение используемых в настоящем описании технических и научных терминов, обычно, понятно специалисту в уровне техники, для которого настоящее изобретение предназначено, если не указано иначе. В настоящем описании сделаны ссылки на различные методологии и материалы, известные специалистам в уровне техники. Стандартные справочные работы, задающие общие принципы фармакологии, включают Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (Фармакологические основы терапии), 10^th Ed., McGraw Hill Companies Inc., New York (2001). Для работы по настоящему изобретению можно использовать любые подходящие материалы и/или методы, известные специалисту в уровне техники. Однако, предпочтительные материалы и методы описаны. Материалы, реагенты и т.д., на которые в следующем далее описании и примерах делаются ссылки, можно получить из коммерческих источниках, если не сказано иное.

Приводимые здесь определения можно объединять, образуя химически релевантные комбинации, такие как "гетероалкиларил," "галогеналкилгетероарил," "арилалкилгетероциклил," "алкилкарбонил," "алкоксиалкил" и подобные им. Если термин "алкил" применяется как суффикс после другого термина, как в названиях "фенилалкил" или "гидроксиалкил", он обозначает алкильную группу, как описано выше, замещенную одним или двумя заместителями, выбранными из числа других специально названных групп. Так, например, "фенилалкил" означает алкильную группу с одним или двумя заместителями фенилами и, таким образом, включает бензил, фенилэтил и бифенил. "Алкиламиноалкил" означает алкильную группу с одним или двумя алкиламино-заместителями. "Гидроксиалкил" включает 2-гидроксиэтил, 2-гидроксипропил, 1-(гидроксиметил)-2-метилпропил, 2-гидроксибутил, 2,3-дигидроксибутил, 2-(гидроксиметил), 3-гидроксипропил и т.д. Соответственно, в настоящем описании, термин "гидроксиалкил" используется для обозначения подмножества описанных ниже гетероалкильных групп. Термин -(ар)алкил означает либо незамещенный алкил, либо аралкильную группу. Термин (гетеро)арил или (гет)арил означает либо арил, либо гетероарил.

Термин "спироциклоалкил" в настоящем описании означает спироциклическую циклоалкильную группу, такую как, например спиро[3.3]гептан. Термин спирогетероциклоалкил здесь означает спироциклический гетероциклоалкил, такой как, например, 2,6-диаза-спиро[3.3]гептан.

Термин "ацил" в настоящем описании означает группу формулы -C(=O)R, где R представляет собой водород или низший алкил в соответствии с данным здесь определением. Термин "алкилкарбонил" в настоящем описании означает группу формулы C(=O)R, где R представляет собой алкил в соответствии с данным здесь определением. Термин C_1-6ацил означает группу -C(=O)R, содержащую 6 атомов углерода. Термин "арилкарбонил" в настоящем описании означает группу формулы C(=O)R, где R представляет собой арильную группу; термин "бензоил" в настоящем описании означает группу "арилкарбонил", где R представляет собой фенил.

Термин "сложный эфир" в настоящем описании означает группу формулы -C(=O)OR, где R представляет собой низший алкил в соответствии с данным здесь определением.

Термин "алкил" в настоящем описании означает неразветвленную или разветвленную цепочку, представляющую собой насыщенный одновалентный углеводородный остаток, содержащий от 1 до 10 атомов углерода. Термин "низший алкил" означает линейную или разветвленную цепочку, представляющую собой углеводородный остаток, содержащий от 1 до 6 атомов углерода. "С_1-10алкил" в настоящем описании означает алкил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода. Примеры алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, низшие алкильные группы, в том числе, метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил или пентил, изопентил, неопентил, гексил, гептил и октил.

Если термин "алкил" применяется как суффикс после другого термина, как в названиях "фенилалкил" или "гидроксиалкил", он обозначает алкильную группу, как описано выше, замещенную одним или двумя заместителями, выбранными из числа других специально названных групп. Так, например, "фенилалкил" означает радикал R'R''-, где R' представляет собой фенильный радикал, a R'' алкиленовый радикал в соответствии с данным здесь определением, причем точка прикрепления фенилалкильной группы может находится на алкиленовом радикале. Примеры арилалкильных радикалов включают, но не ограничиваются ими, бензил, фенилэтил, 3-фенилпропил. Термины "арилалкил" или "аралкил" интерпретируются таким же образом, за исключением того, что R представляет собой арильный радикал. Термины "(гет)арилалкил" или "(гет)аралкил" интерпретируются таким же образом, за исключением того, что R' может быть радикалом арила или гетероарила.

Термины "галогеналкил", "гало-низший алкил" или "низший галогеналкил" означают линейный или разветвленный углеводородный остаток, содержащий от 1 до 6 атомов углерода, где один или более атомов углерода замещены одним или более атомами галогена.

Термины "алкилен" или "алкиленил" в настоящем описании означают двухвалентный насыщенный линейный углеводородный радикал длиной от 1 до 10 атомов углерода (например, (СН₂)_n) или разветвленный двухвалентный насыщенный линейный углеводородный радикал длиной от 2 до 10 атомов углерода (например, -СНМе- или -CH₂CH(i-Pr)CH₂-), если не сказано иначе. За исключением метилена, открытые валентности на алкиленовой группе не прикреплены к одному и тому же атому. Примеры алкиленовых радикалов включают, но не ограничиваются ими, метилен, этилен, пропилен, 2-метил-пропилен, 1,1-диметил-этилен, бутилен, 2-этилбутилен.

Термин "алкокси" в настоящем описании означает -О-алкильную группу, где алкил определен выше, такую как метокси, этокси, н-пропилокси, изопропилокси, н-бутилокси, изобутилокси, трет-бутилокси, пентилокси, гексилокси, включая изомеры. "Низший алкокси" в настоящем описании означает алкокси-группу с "низшей алкильной" группой, как определено выше. "С_1-10алкокси" в настоящем описании означает -О-алкил, где алкил представляет собой С_1-10.

Термин "РСу₃" означает фосфин, тризамещенный тремя циклическими группами.

Термины "галогеналкокси", "галоген-низший алкокси" или "низший галогеналкокси" означают низшую алкокси-группу, где один или более атомов углерода замещены одним или более атомами галогена.

Термин "гидроксиалкил" в настоящем описании означает алкильный радикал, как определено выше, где от одного до трех атомов водорода на различных атомах углерода замещены гидроксильными группами.

Термины "алкилсульфонил" и "арилсульфонил" в настоящем описании означают группу формулы -S(=O)₂R, где R представляет собой алкил или арил, соответственно, а алкил и арил соответствуют данным здесь определениям. Термин "гетероалкилсульфонил" в настоящем описании означают группу формулы -S(=O)₂R, где R представляет собой "гетероалкил" в соответствии с данным здесь определением.

Термины "алкилсульфониламино" и "арилсульфониламино" в настоящем описании означают группу формулы -NR'S(=O)₂R, где R представляет собой алкил или арил, соответственно, R' представляет собой водород или С_1-3алкил, а алкил и арил соответствуют данным здесь определениям.

Термин "циклоалкил" в настоящем описании означает насыщенный карбоцикл, содержащий от 3 до 8 атомов углерода, то есть, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил или циклооктил. "С_3-7циклоалкил" в настоящем описании означает циклоалкил, содержащий от 3 до 7 атомов углерода в карбоцикле.

Термин "карбокси-алкил" в настоящем описании означает алкильную группу, где один атом водорода был замещен на карбоксил, причем точка прикрепления гетероалкильного радикала приходится на атом углерода. Термины "карбокси" или "карбоксил" означают группу -CO₂H.

Термины "гетероарил" или "гетероароматический" в настоящем описании означают моноциклический или бициклический радикал от 5 до 12 атомов в цикле, содержащий, по меньшей мере, один ароматический или частично ненасыщенный цикл, который, в свою очередь, содержит от четырех до восьми атомов, включая один или больше гетероатомов N, О, или S, а оставшиеся атомы цикла являются атомами углерода; причем точки прикрепления гетероарильного радикал находится на ароматическом или частично ненасыщенном цикле. Как хорошо известно специалистам в уровне техники, гетероарильные циклы характеризуются менее выраженным ароматическим характером, по сравнению со своими содержащими только атомы углерода аналогами. Таким образом, для целей изобретения, гетероарильная группа должна обладать только небольшой степенью ароматичности. Примеры гетероарильных групп включают моноциклические ароматические гетероциклы, содержащие от 5 до 6 атомов в цикле, и от 1 до 3 гетероатомов, включая, но не ограничиваясь ими, пиридинил, пиримидинил, пиразинил, оксазинил, пирролил, пиразолил, имидазолил, оксазолил, 4,5-дигидро-оксазолил, 5,6-дигидро-4Н-[1,3]оксазолил, изоксазол, тиазол, изотиазол, триазолин, тиадиазол и оксадиаксолин, которые могут дополнительно быть замещены одним или более, предпочтительно, одним или двумя заместителями, выбранными из числа гидрокси, циано, алкил, алкокси, тио, низшего галогеналкокси, алкилтио, галогена, низшего галогеналкила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, амино, алкиламино, диалкиламино, аминоалкила, алкиламиноалкила и диалкиламиноалкила, нитро, алкоксикарбонила и карбамоила, алкилкарбамоила, диалкилкарбамоила, арилкарбамоила, алкилкарбониламино и арилкарбониламино. Примены бициклических групп включают, но не ограничиваются ими, хинолинил, изохинолинил, бензофурил, бензотиофенил, бензоксазол, бензизоксазол, бензотиазол, нафтиридинил, 5,6,7,8-тетрагидро-[1,6]нафтиридинил и бензизотиазол. Бициклические группы могут быть замещены на любом цикле, однако, точка прикрепления находится на цикле, содержащем гетероатом.

Термины "гетероциклил", "гетероциклоалкил" или "гетероцикл" в настоящем описании означают одновалентный насыщенный циклический радикал, состоящий из одного или более циклов, предпочтительно, из одного или двух циклов, включая спироциклические системы от трех до восьми атомов на цикл, содержащий в цикле один или более гетероатомов (выбранных из числа N, О или S(O)_0-2), и который может дополнительно быть независимо замещен одним или более, предпочтительно, одним или двумя заместителями, выбранными из числа гидрокси, оксо, циано, низшего алкила, низшего алкокси, низшего галогеналкокси, алкилтио, галогена, низшего галогеналкила, гидроксиалкила, нитро, алкоксикарбонила, амино, алкиламино, алкилсульфонила, арилсульфонила, алкиламиносульфонила, ариламиносульфонила, алкилсульфониламино, арилсульфониламино, алкиламинокарбонила, ариламинокарбонила, алкилкарбониламино, арилкарбониламино и их ионных форм, если не сказано иначе. Примеры гетероциклических радикалов включают, но не ограничиваются ими, морфолинил, пиперазинил, пиперидинил, азетидинил, пирролидинил, гексагидроазепинил, оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, оксазолидинил, тиазолидинил, изоксазолидинил, тетрагидропиранил, тиоморфолинил, хинуклидинил и имидазолинил, а также их ионные формы. Примеры могут также быть бициклическими, такими как, например, 3,8-диаза-бицикло[3.2.1]октан, 2,5-диаза-бицикло[2.2.2]октан или октагидро-пиразино[2,1-с][1,4]оксазин.

Ингибиторы SYK

Заявка относится к соединению формулы I

где каждая группа А независимо представляет собой моноциклический или бициклический арил или гетероарил, возможно, замещенный одной или более группами А';

каждая группа А' независимо представляет собой низший алкил, галоген, циано или гетероарил;

каждая группа R¹ независимо представляет собой низший алкил, циклоалкил или гетероциклоалкил, возможно, замещенный одной или более группами R^1'; и

каждая группа R^1' независимо представляет собой амино или низший алкил амино;

или к его фармацевтически приемлемой соли.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой циклогексил, замещенный амино.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой тетрагидропиранил, замещенный амино.

Заявка относится к соединению формулы I, где А представляет собой пиридил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой циклогексил, замещенный амино, и А представляет собой пиридил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой тетрагидропиранил, замещенный амино, и А представляет собой пиридил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где А представляет собой бициклический гетероарил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой циклогексил, замещенный амино, и А представляет собой бициклический гетероарил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой тетрагидропиранил, замещенный амино, и А представляет собой бициклический гетероарил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где А представляет собой гетероарил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой циклогексил, замещенный амино, и А представляет собой гетероарил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой тетрагидропиранил, замещенный амино, и А представляет собой гетероарил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой низший алкил, замещенный амино или "низший алкил-амино"-группой.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой гетероциклоалкил.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой низший алкил, замещенный амино или "низший алкил-амино"-группой, а А представляет собой бициклический гетероарил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой гетероциклоалкил, и А представляет собой бициклический гетероарил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой низший алкил, замещенный амино или "низший алкил амино"-группой, и А представляет собой гетероарил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой гетероциклоалкил, и А представляет собой гетероарил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой низший алкил, замещенный амино или "низший алкил-амино"-группой, и А представляет собой пиридил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, где R¹ представляет собой гетероциклоалкил, и А представляет собой пиридил, возможно, замещенный одной или более группой А'.

Заявка относится к соединению формулы I, выбранной из группы, состоящей из следующих соединений:

(6-Этил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(8-Метил-хинолин-6-ил)-амид 2-((1S,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(8-Этил-хинолин-6-ил)-амид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(5-Циано-6-метил-пиридин-2-ил)-амид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(6-[1,2,3]Триазол-2-ил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(6-[1,2,3]Триазол-1-ил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

[1,6]Нафтиридин-2-иламид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

Бензотиазол-2-иламид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(1Н-Бензоимидазол-2-ил)-амид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

[1,5]Нафтиридин-2-иламид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

Соль присоединения (1-Метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты и соляной кислоты;

Соль присоединения (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-(2-амино-этиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты и трифторуксусной кислоты;

Соль присоединения (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-(азетидин-3-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты и соляной кислоты;

Соль присоединения (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-(2-метиламино-этиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты и соляной кислоты;

Соль присоединения (6-фтор-1-метил-1Н-индазол-3-ил)-амида 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты и трифторуксусной кислоты;

Нафталин-2-иламид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(5-Метил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

п-Толиламид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(1-Метил-1Н-пиразол-3-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

Тиазоло[4,5-b]пиридин-2-иламид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(1-Метил-1Н-пиразол-4-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

Пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-иламид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

Имидазо[1,2-b]пиридазин-3-иламид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(4,6-Диметил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты; и

(5,6-Диметил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4E)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты.

Заявка относится к способу лечения воспалительного или аутоиммунного состояния, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Заявка относится к описанному выше способу, дополнительно включающему введение еще одного терапевтического агента, выбранного из числа химиотерапевтических или анти-пролиферативных агентов, противовоспалительных агентов, иммуномодуляторов или иммуносупрессоров, нейротропного фактора, агентов для лечения сердечнососудистых заболеваний, агентов для лечения диабета или расстройств, связанных с иммунодефицитом. Заявка относится к способу лечения воспалительного состояния, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Заявка относится к способу лечения ревматоидного артрита, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Заявка относится к способу лечения астмы, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Заявка относится к способу лечения иммунных расстройств, включая волчанку, множественный склероз, ревматоидный артрит, псориаз, диабет I типа, осложнения после трансплантации органов, ксенотрансплантацию, диабет, рак, астму, атопический дерматит, аутоиммунные расстройства щитовидной железы, язвенный колит, болезнь Крона, болезнь Альцгеймера и лейкемию, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Заявка относится к способу лечения воспалительного состояния, включающему совместное введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества противовоспалительного соединения совместно с соединением формулы I.

Заявка относится к способу лечения иммунного расстройства, включающему совместное введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества иммуносупрессора совместно с соединением формулы I.

Заявка относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I, смешанное, по меньшей мере, с одним фармацевтически приемлемым носителем, эксципиентом или разбавителем.

Заявка относится к указанной выше фармацевтической композиции, дополнительно содержащей еще один терапевтический агент, выбранный из числа химиотерапевтических или анти-пролиферативных агентов, противовоспалительных агентов, иммуномодуляторов или иммуносупрессоров, нейротропного фактора, агентов для лечения сердечнососудистых заболеваний, агентов для лечения диабета или расстройств, связанных с иммунодефицитом.

Заявка относится к применению соединения формулы I для изготовления лекарственного средства, полезного при лечении ассоциированных с Syk расстройств.

Заявка относится к применению соединения формулы I для изготовления лекарственного средства, полезного при лечении ревматоидного артрита.

Соединение, способ или композиция соответствуют данному описанию.

В следующей далее таблице приводятся примеры соединений, охваченных настоящим изобретением и находящихся в объеме изобретения. Эти примеры и следующие далее способы получения предназначены для того, чтобы специалист в уровне техники более ясно понимал и мог практиковать настоящее изобретение. Не следует считать, что они ограничивают объем изобретения, они просто иллюстрируют и представляют его.

В целом, используемая в заявке номенклатура, основана на AUTONOM™ v.4.0, разработанной в Институте Beilstein компьютерной системе, или на Struct=Name, приложении Кембридж-Софт (CambridgeSoft^®), последняя применялось для генерации названий по системе IUPAC. При наличии расхождений между изображенной структурой и сопровождающим ее названием, правильной следует считать структуру. Кроме того, если для структуры или фрагмента структуры не указана стереохимия, например, полужирными или пунктирными линиями, следует считать, что структура или фрагмент структуры охватывают все стереоизомеры.

Примеры триазолопиридиновых соединений в соответствии с общей формулой I приводятся в таблице I.

Синтез

Общие схемы

Общая схема 1

Общая схема 2

На приведенных выше схемах каждая группа А независимо представляет собой моноциклический или бициклический арил или гетероарил, возможно, замещенный одной или более А', каждая А' независимо представляет собой низший алкил, галоген, циано, или гетероарил, каждая группа X представляет собой СН₂ или О.

Фармацевтическая композиция и введение

Соединения по настоящему изобретению можно сформулировать в виде большого количества дозированных форм совместно с носителями для орального введения. Оральное введение может осуществляться в форме таблеток, покрытых оболочкой таблеток, драже, жестких и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий, сиропов или суспензий. Соединения по настоящему изобретению эффективны также и при введении другими маршрутами, включая, помимо прочего, непрерывное (капельница внутривенно), топическое, парентеральное, внутримышечное, внутривенное, подкожное, трансдермальное (при этом может использоваться агент для усиления проницаемости), буккальное (в ротовую полость), назальное введение, ингаляции и введение посредством суппозиториев. Предпочтительным способом введения, в целом, является оральное введение с обычной суточной схемой дозирования, которую можно настроить в соответствии со степенью заболевания и ответом пациента на действие активного ингредиента.

Соединение или соединения по настоящему изобретению, также как и их фармацевтически приемлемые соли, совместно с одним или более обычными эксципиентами, носителями или разбавителями, можно включать в состав фармацевтических композиций и единичных лекарственных форм. Фармацевтические композиции и единичные лекарственные формы могут состоять из общеупотребительных ингредиентов в обычных пропорциях, вместе с дополнительными активными соединениями или действующими веществами или без них, кроме того, единичные лекарственные формы могут содержать любое подходящее эффективное количество действующего вещества, адекватного используемой ежедневной дозировке. Фармацевтические композиции могут представлять собой твердые лекарственные формы, такие как таблетки или заполненные капсулы, полутвердые формы, порошки, составы задержанного высвобождения и жидкости, такие как растворы, суспензии, эмульсии, эликсиры и заполненные капсулы для орального применения; они могут быть также в форме суппозиториев для ректального или вагинального введения; или в форме стерильных растворов для инъекций, предназначенных для парентерального использования. Типичный препарат может содержать, приблизительно, от 5 до 95% активного соединения или соединений (проценты по массе). Термин "препарат" или "лекарственная форма" включает как твердые, так и жидкие составы с активным веществом, специалист в уровне техники понимает, что активный ингредиент может входить в состав различных препаратов, в зависимости от целевого органа или ткани и от требуемой дозы и фармакокинетических характеристик.

Термин "эксципиент" в настоящем документе означает соединение, полезное при получении фармацевтической композиции, в целом, безопасное, нетоксичное и не являющееся нежелательным в биологическом или ином смысле, и включает эксципиенты, приемлемые для использования в ветеринарии и в создании фармацевтических препаратов для человека. Соединения по настоящему изобретению могут вводиться самостоятельно, но, в общем случае, будут вводиться совместно с одним или более подходящими фармацевтическими эксципиентами, разбавителями и носителями, выбранными с учетом предполагаемого маршрута введения и стандартной фармацевтической практики.

"Фармацевтически приемлемый" означает полезный для изготовления фармацевтической композиции, которая, в целом, безопасна, нетоксична, не является нежелательной в биологическом или ином смысле, включая применимость для ветеринарии и для изготовления лекарств для человека.

"Фармацевтически приемлемая солевая форма" активного ингредиента может, прежде всего, обеспечивать его требуемое фармакокинетическое свойство, которого нет у не-солевой формы, и даже может положительно повлиять на фармакодинамику активного ингредиента в отношении его терапевтической активности в организме. Фраза "фармацевтически приемлемая соль" соединения означает соль, которая фармацевтически приемлема и обладают желательной фармакологической активностью родительского соединения. Такие соли включают: (1) соли присоединения кислоты, образуемые с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и подобные им; или образуемые с органическими кислотами, такими уксусная кислота, пропионовая кислота, гексановая кислота, циклопентанпропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, молочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная бензойная кислота, 3-(4-гидроксибензоил)бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, 1,2-этан-дисульфоновая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, 4-хлорбензолсульфоновая кислота, 2-нафталинсульфоновая кислота, 4-толуолсульфоновая кислота, камфоросульфоновая кислота, 4-метилбицикло[2.2.2]-окт-2-ен-1-карбоновая кислота, глюкогептоновая кислота, 3-фенилпропионовая кислота, триметилуксусная кислота, четвертичная бутилуксусная кислота, лаурилсерная кислота, глюконовая кислота, глутаминовая кислота, гидроксинафтойная кислота, салициловая кислота, стеариновая кислота, муконовая кислота подобные им; или (2) соли, образующиеся, когда протон кислоты родительского соединения либо замещается ионом металла, например, ионом щелочного металла, ионом щелочно-земельного металла или ионом алюминия, или координируется с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, трометамин, N-метилглкюамин и подобные им.

Твердые формы включают порошки, таблетки, пилюли, капсулы, облатки, суппозитории и диспергируемые гранулы. Твердый носитель может представлять собой одно или больше веществ, которые также могут выполнять функцию разбавителей, ароматизаторов, солюбилизаторов, лубрикантов, суспендирующих агентов, связующих составов, консервантов, измельчителей или герметизирующего материала. В порошках носитель, обычно, представляет собой тонко измельченное вещество, смешанное с тонко измельченным активным компонентом. В таблетках активный компонент, обычно, смешан с носителем, обладающим необходимой связывающей способностью, в желательной пропорции, и уплотнен до требуемой формы и размера. Подходящие носители включают, но не ограничиваются ими, карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лактозу, пектин, декстрин, крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу натрия, воск с низкой температурой плавления, кокосовое масло и подобные вещества. Помимо активного компонента, твердые лекарственные формы могут содержать красители, ароматизаторы, стабилизаторы, буферы, искусственные и натуральные подсластители, диспергенты, уплотнители, солюбилизирующие агенты и подобные им.

Для орального применения удобны также жидкие лекарственные формы, они включают такие жидкие составы, как эмульсии, сиропы, эликсиры, водные растворы, водные суспензии. Они включают также твердые препараты, предназначенные для превращения в жидкую форму незадолго до использования. Эмульсии можно готовить в растворах, например, в водных растворах пропилен гликоля; они также могут содержать эмульсификаторы, например, такие как лецитин, моноолеат сорбитана или камедь. Водные растворы можно получать, растворяя активный компонент в воде и добавляя подходящие красители, ароматизаторы, стабилизаторы и уплотнители. Водные суспензии можно готовить, растворяя мелко измельченный активный компонент в воде совместно с вязким материалом, таким как природные или синтетические декстрины, смолы, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия и другие хорошо известные суспендирующие агенты.

Соединения по настоящему изобретению можно приготовить в форме для парентерального введения (например, путем инъекции, например, болюсной инъекции или непрерывной инфузии), их можно изготовлять в форме единичной дозировки в виде ампул, заранее наполненных шприцов, небольших контейнеров для инфузии или контейнеров многократного дозирования, добавив туда консервант. Композиции могут также быть в виде суспензий, растворов или эмульсий в масле или водных носителях, например, в виде раствора в водном полиэтилен гликоле. Примеры масляных или неводных носителей, разбавителей, растворителей или основ включают пропилен гликоль, полиэтилен гликоль, растительные масла (например, оливковое масло) и предназначенные для инъекций органические эфиры (например, этилолеат), и могут содержать такие требуемые для получения лекарственного состава агенты, как консерванты, увлажнители, эмульсификаторы, или суспендирующие, стабилизирующие или диспергирующие агенты. Альтернативно, активный ингредиент может принимать форму порошка, получаемого путем асептического выделения стерильного твердого вещества или путем лиофилизации из раствора, и предназначенного для восстановления раствора с помощью подходящего носителя, например, стерильной апирогенной воды.

Соединения по изобретению можно смешивать для топического применения к эпидермису в виде мазей, кремов или лосьонов, или в виде трансдермальных пластырей. Мази или кремы могут, например, быть приготовлены на водной или масляной основе с добавлением подходящих уплотнителей и/или гелеобразующих веществ. Лосьоны могут быть приготовлены на водной или масляной основе и, обычно, содержат еще один или более эмульсификаторов, стабилизаторов, диспергирующих, суспендирующих и уплотняющих агентов, а также красителей. Составы, удобные для топического применения во рту, включают таблетки для рассасывания, содержащие активные агенты в ароматизированной основе, обычно, сахарозе и камеди или трагаканте; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и камедь; а также полоскания для рта, содержащие активный ингредиент в подходящем водном носителе.

Соединения изобретения можно приготовить для введения в виде суппозиториев. Сначала плавится легкоплавкий воск, такой как смесь глицеридов жирных кислот и кокосового масла, и затем активный компонент гомогенно диспергируется в расплаве, например, посредством перемешивания. Расплавленную гомогенную смесь затем выливают в формы подходящих размеров, охлаждают и переводят в твердое состояние.

Соединения изобретения можно приготовить для вагинального введения. Для этой цели подходят маточные кольца, тампоны, кремы, гели, пасты, пены и аэрозольные баллончики, содержащие, помимо активного ингредиента, такие носители, которые, в соответствии с уровнем техники, считаются приемлемыми. Соединения изобретения можно приготовить для назального введения. Растворы или суспензии вводят непосредственно в носовую полость обычными средствами, например, с помощью капельницы, пипетки или аэрозольного баллончика. Составы могут быть в виде формы для однократного или многократного применения. В случае капельницы или пипетки последнее достигается путем введения пациенту соответствующего, заранее заданного объема раствора или суспензии. При использовании аэрозольного баллончика этого можно достичь с помощью мелкокапельного распрыскивателя, снабженного дозатором.

Соединения изобретения можно приготовить для введения посредством аэрозолей, конкретно, в дыхательные пути и включая интраназальное введение. Обычно, размер частиц соединения будет небольшим, например, порядка пяти (5) микрон или меньше. Такой размер частиц можно получить средствами, известными в уровне техники, например, микроионизацией. Активный ингредиент поставляется в упаковке под давлением совместно с подходящим пропеллентом, таким как хлорфторуглерод (ХФУ), например, дихлордифторметан, трихлорфторметан или дихлортетрафторэтан, или двуокись углерода или другой подходящий газ. Аэрозоль может содержать также поверхностно-активное вещество, такое как лецитин. Дозу лекарства можно контролировать мерным клапаном. Альтернативно, активный ингредиент можно поставлять в форме сухого порошка, например, смеси порошка соединения и порошка подходящего основания, такого как лактоза, крахмал, производные крахмала, например, гидроксипропилметил целлюлоза и поливинилпирролидин (ПВП). Порошкообразный носитель формирует гель в носовой полости. Порошковая композиция может выпускаться в форме единичной дозировки, например, в виде капсул, или картриджей, например, из желатина, или блистерных упаковок, из которых порошок можно вводить посредством ингалятора.

При необходимости, составы можно окружать оболочкой, растворимой в кишечнике, адаптированной для задержанного или контролируемого высвобождения активного ингредиента. Например, соединения настоящего изобретения можно включать в устройства для трансдермальной или подкожной доставки лекарства. Такие системы удобны, когда необходимо обеспечить задержанное высвобождение соединения, и когда решающим фактором в схеме лечения является соблюдение больным режима лечения. Соединения в системах трансдермальной доставки часто сорбируют на твердой подложке, адгезивной к коже. Интересующие соединения можно также комбинировать с усилителями проницаемости, например, Азоном (azone, 1-додецилазациклогептан-2-он). Системы доставки с задержанным высвобождением вводят подкожно в подкожный слой путем хирургической операции или инъекции. Подкожные имплантаты инкапсулируют соединение в жиро-растворимые мембраны, например, силиконовую резину, или в биодеградируемый полимер, например, полимолочную кислоту.

Подходящие лекарственные составы, а также фармацевтические носители, разбавители и эксципиенты, описаны в работе Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Наука и практика фармацевтики) 1995, edited by E.W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvania. Опытный специалист по приготовлению лекарственных составов может, оставаясь в рамках спецификации, изменять состав, получая многочисленные другие составы, предназначенные для конкретных маршрутов введения, не ухудшая стабильности или терапевтической активности композиций по настоящему изобретению.

Модификацию соединений по настоящему изобретению с целью повысить их растворимость в воде или других носителях можно, например, легко осуществить путем незначительных изменений (например, преобразовав соединение в соль, этерифицировав и т.д.), которые вполне соответствуют компетенции обычного специалиста в уровне техники. К числу компетенций обычного специалиста в уровне техники относится также умение изменить маршрут введения и схему дозирования конкретного соединения, чтобы добиться таких фармакокинетических свойств соединений по настоящему изобретению, которые приносят максимальную терапевтическую выгоду пациентам. Термин "терапевтически эффективное количество" в настоящем документе означает количество соединения, требуемое для снижения у индивидуума симптомов заболевания. Доза препарата уточняется в соответствии с индивидуальными требованиями в каждом конкретном случае. Такая дозировка может меняться в широких пределах, в зависимости от таких многочисленных факторов, как тяжесть заболевания, подлежащего излечению, возраст и относительное состояние здоровья пациента, другие принимаемые лекарства, маршрут и форма введения, а также предпочтения и опыт участвующего в лечении врача. В случае орального введения суточная доза в интервале, приблизительно, от 0,01 до 1000 мг/кг веса тела в день может быть достаточной при монотерапии и/или совместной терапии. Предпочтительная суточная доза колеблется в интервале, приблизительно, от 0,1 до 500 мг/кг веса тела, более предпочтительно, приблизительно, от 0,1 до 100 мг/кг веса тела, и наиболее предпочтительно, приблизительно от 1,0 до 10 мг/кг веса тела в день. Так, для пациента весом 70 кг суточная доза будет находиться в интервале, приблизительно, от 7 мг до 0,7 г в день. Суточную дозу препарата можно вводить как единичную дозу или в виде нескольких доз, как правило, от 1 до 5 введений в день. В общем случае, лечение начинают с небольших дозировок, ниже оптимальной дозы соединения. Затем дозировку понемногу повышают, пока не будет достигнут оптимальный эффект для конкретного пациента. Обычный специалист в лечении описанных в настоящем документе заболеваний сможет, без ненужного экспериментирования и опираясь на личные знания, опыт и информацию из настоящей заявки, определить терапевтически эффективное количество соединений настоящего изобретения для данного заболевания и пациента.

Лекарственные препараты, предпочтительно, содержатся в единичных формах дозировки. В такой форме препарат распределяют по единичным дозам, содержащим соответствующие количества активного компонента. Единичная форма дозировки может поставляться в упакованном виде, каждая упаковка в таком случае будет содержать определенное количество препарата, например, это могут быть пакетированные таблетки, капсулы и порошки во флаконах или ампулах. Кроме того, единичная форма дозировки может сама по себе представлять собой капсулу, таблетку, облатку или таблетку для рассасывания, или это может быть упаковка, содержащая соответствующее количество таких упакованных объектов.

Лекарственные составы

В следующих таблицах показано, как формулируют лекарственные средства для доставки различными маршрутами. "Активный ингредиент" или "активное соединение" в таблицах означает одно или более соединение формулы I.

Состав для введения орально

Ингредиенты перемешивают и распределяют по капсулам, содержащим около 100 мг каждого из них; одна капсула содержит, приблизительно, общую суточную дозу.

Состав для введения орально

Ингредиенты смешивают и гранулируют с использованием такого растворителя, как метанол. После этого состав сушат и при помощи подходящей машины для таблетирования формируют из него таблетки (содержащие, приблизительно, 20 мг активного вещества).

Состав для введения перорально

Ингредиенты перемешивают с образованием суспензии для орального применения.

Состав для парентерального применения

Активный ингредиент растворяют в воде для инъекций. После этого при перемешивании добавляют достаточное количество хлорида натрия, чтобы сделать раствор изотоническим. Раствор доводят до требуемого веса остальной водой для инъекций, фильтруют через мембранный фильтр 0,2 микрона и упаковывают в стерильных условиях.

Состав для приготовления суппозиториев

Ингредиенты сплавляют вместе и перемешивают на паровой бане, после чего выливают в формы, содержащие по 2,5 г общего веса.

Состав для топического применения

Все ингредиенты, кроме воды, смешивают и нагревают, приблизительно, до 60ºC при перемешивании. Затем при интенсивном перемешивании и при той же температуре добавляют воду в количестве, достаточном для эмульсификации ингредиентов, после чего добавляют еще воды, приблизительно, до 100 г общего веса.

Приготовление аэрозолей для назального введения

Водные суспензии, содержащие, приблизительно, от 0,025 до 0,5 процента активного соединения, можно приготовить в виде аэрозолей для назального введения. Составы могут дополнительно содержать такие неактивные ингредиенты, как, например, микрокристаллическая целлюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия, декстроза и подобные им. Для доведения рН можно добавить соляную кислоту. Аэрозольные составы для назального применения можно вводить через аэрозольный баллончик, снабженный дозатором, как правило, позволяющий впрыснуть около 50-100 микролитров лекарственного состава при одном нажатии. Типичная схема дозирования включает 2-4 впрыскивания каждые 4-12 часов.

Показания и методы лечения

Описанные в настоящем документе соединения представляют собой киназные ингибиторы, в частности, ингибиторы SYK. Эти ингибиторы могут применяться для лечения одного или более заболеваний, отвечающих на ингибирование киназ, включая SYK, и/или ингибирование пролиферации В-клеток, у млекопитающих. Не стремясь связывать себя с конкретное теорией, можно считать, что взаимодействие соединений по изобретению с SYK приводит к ингибированию SYK-активности и, следовательно, к возможности фармацевтического использования этих соединений. Соответственно, изобретение включает способ лечения млекопитающих, например, человека, страдающего от заболевания, которое реагирует на ингибирование SYK-активности и/или ингибирование пролиферации В-клеток, предполагающий введение млекопитающему с таким заболеванием эффективного количества, по меньшей мере, одного предлагаемого в данном описании химического соединения. Эффективную концентрацию можно установить экспериментально, например, анализируя концентрацию соединения в крови, или теоретически, рассчитав биодоступность. Другие киназы, на которые, помимо SYK, может влиять соединение по изобретению, включают, но не ограничиваются ими, другие тирозиновые киназы и серин-треониновые киназы.

Киназы играют заметную роль в сигнальных путях, контролирующих фундаментальные происходящие в клетках процессы, такие как пролиферация, дифференциация и гибель (апоптоз). Нарушения киназной активности могут участвовать в развитии большого количества заболеваний, включая много видов рака, аутоиммунные и/или воспалительные заболевания и острые воспалительные реакции. Многогранная роль киназ в ключевых сигнальных путях в клетке предполагает существенную возможность найти новые лекарства, влияющие на киназы и сигнальные пути.

Заявка относится к способу лечения воспалительных и аутоиммунных состояний, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Заявка относится к описанному выше способу, дополнительно включающему введение еще одного терапевтического агента, выбранного из числа химиотерапевтических или анти-пролиферативных агентов, противовоспалительных агентов, иммуномодуляторов или иммуносупрессоров, нейротропного фактора, агентов для лечения сердечнососудистых заболеваний, диабета или заболеваний, связанных с иммунодефицитом.

Заявка относится к способу лечения воспалительного состояния, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Заявка относится к способу лечения ревматоидного артрита, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Заявка относится к способу лечения астмы, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Заявка относится к способу лечения иммунных расстройств, включая волчанку, множественный склероз, ревматоидный артрит, псориаз, диабет I типа, осложнения после трансплантации органов, ксенотрансплантацию, диабет, рак, астму, атопический дерматит, аутоиммунные расстройства щитовидной железы, язвенный колит, болезнь Крона, болезнь Альцгеймера и лейкемию, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Заявка относится к способу лечения воспалительного состояния, включающему совместное введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества противовоспалительного соединения совместно с соединением формулы I.

Заявка относится к способу лечения иммунного расстройства, включающему совместное введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества иммуносупрессора совместно с соединением формулы I.

Примеры

Сокращения

Распространенные сокращения включают следующие: ацетил (acetyl, Ac), азо-бис-изобутирилнитрил (azo-bis-isobutyrylnitrile, AIBN), атмосферы (атм), 9-борбицикло[3.3.1]нонан (9-borabicyclo[3.3.1]nonane, 9-BBN или BBN), 2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинайтил (2,2'-bis(diphenylphosphino)-1,1'-binaphthyl, BINAP), трет-бутоксикарбонил (tert-butoxycarbonyl, Boc), ди-трет-бутил пирокарбонат или Вос ангидрид (di-tert-butyl pyrocarbonate, BOC₂O), бензил (benzyl, Bn), бутил (butyl, Bu), регистрационный номер в базе данных Chemical Abstracts (Chemical Abstracts Registration Number, CASRN), бензилоксикарбонил (benzyloxycarbonyl, CBZ или Z), карбонил диимидазол (carbonyl diimidazole, CDI), 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан (1,4-diazabicyclo[2.2.2]octane, DABCO), трифторид диэтиламиносеры (diethylaminosulfur trifluoride, DAST), дибензилиденацетон (dibenzylideneacetone, dba), 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен (1,5-dia3abicyclo[4.3.0]non-5-ene, DBN), 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундек-7-ен (1,8-dia3abicyclo[5.4.0]undec-7-ene, DBU), N,N'-дициклогексилкарбодиимид (N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, DCC), 1,2-дихлорэтан (1,2-dichloroethane, DCE), дихлорметан (dichloromethane, DCM), 2,3-дихлор5,6-дициано-1,4-бензохинон (2,3-Dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone, DDQ), диэтил азодикарбоксилат (diethyl azodicarboxylate, DEAD), ди-изо-пропилазодикарбоксилат (di-iso-propylazodicarboxylate, DIAD), ди-изо-бутилалюмогидрид (di-iso-butylaluminumhydride, DIBAL или DIBAL-H), ди-изо-пропилэтиламин (di-iso-propylethylamine, DIPEA), N,N-диметилацетамид (N,N-dimethyl acetamide, DMA), 4-N,N-диметиламинопиридин (4-N,N-dimethylaminopyridine, DMAP), N,N-диметилформамид (ДМФ, N,N-dimethylformamide), диметилсульфоксид (ДМСО), 1,1'-бис-(дифенилфосфино)этан (1,1'-bis-(diphenylphosphino)ethane, dppe), 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен (1,1'-bis-(diphenylphosphino)ferrocene, dppf), 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид (1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDCI), 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин (2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline, EEDQ), этил (ethyl, Et), этил ацетат (ethyl acetate, EtOAc), этанол (ethanol, EtOH), 2-этокси-2Н-хинолин-1-карбоновой кислоты этиловый эфир (2-ethoxy-2H-quinoline-1-carboxylic acid ethyl ester, EEDQ), диэтиловый эфир (Et₂O), этил изопропиловый эфир (EtOiPr), O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N, N,N'N'-тетраметилурония гексафторфосфата уксусная кислота (O-(7-a3abenzotriazole-1-yl)-N, N,N'N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate acetic acid, HATU), уксусная кислота (acetic acid, HOAc), 1-N-гидроксибензотриазол (1-N-hydroxybenzotriazole, HOBt), высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), изо-пропанол (iso-propanol, IPA), изопропилмагний хлорид (isopropylmagnesium chloride, iPrMgCl), гексаметил дисилазан (hexamethyl disilazane, HMDS), жидкостная хроматография с масс-спектрометрической детекцией (ЖХМС), литий гексаметил дисилазан (lithium hexamethyl disilazane, LiHMDS), мета-хлорпероксибензойная кислота (meta-chloroperoxybenzoic acid, (m-CPBA), метанол (MeOH), температура плавления (т.пл.), MeSO₂- (месил или Ms), метил (methyl, Me), ацетонитрил (MeCN), m-хлорпербензойная кислота (m-chloroperbenzoic acid, МСРВА), масс-спектр (мс), метилтрет-бутиловый эфир (methyl t-butyl ether, МТВЕ), метил тетрагидрофуран (МеТГФ), N-бромсукцинимид (N-bromosuccinimide, NBS), N-Бутиллитий (N-Butyllithium, nBuLi), N-карбоксиангидрид (N-carboxyanhydride, NCA), N-хлорсукцинимид (N-chlorosuccinimide, NCS), N-метилморфолин (N-methylmorpholine, NMM), N-метилпирролидон (N-methylpyrrolidone, NMP), хлорхромат пиридиния (pyridinium chlorochromate, PCC), дихлор((бис-дифенилфосфино)ферроценил) палладий(II) (Dichloro-((bis-diphenylphosphino)ferrocenyl) palladium(II), Pd(dppf)Cl₂), палладия(II) ацетат (palladium(II) acetate, Pd(OAc)₂), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (tris(dibenzylideneacetone)dipalladium(0), Pd₂(dba)₃), дихромат пиридиния (pyridinium dichromate, PDC), фенил (phenyl, Ph), пропил (propyl, Pr), изо-пропил (iso-propyl, i-Pr), фунтов на квадратный дюйм (pounds per square inch, psi), пиридин (pyridine, pyr), 1,2,3,4,5-пентафенил-1'-(ди-трет-бутилфосфино)ферроцен (1,2,3,4,5-Pentaphenyl-1'-(di-tert-butylphosphino)ferrocene, Q-Phos), комнатная температура (температура окружающей среды, кт или КТ), втор-бутиллитий (sec-Butyllithium, sBuLi), трет-бутилдиметилсилил или TpeT-BuMe₂Si (tert-butyldimethylsilyl или t-BuMe₂Si, TBDMS), тетра-н-бутиламмония фторид (tetra-n-butylammonium fluoride, TBAF), триэтиламин (triethylamine, TEA или Et₃N), 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил (2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl, TEMPO), трифлат или CF₃SO₂- (triflate или CF₃SO₂-, Tf), трифторуксусная кислота (trifluoroacetic acid, TFA), 1,1'-бис-2,2,6,6-тетраметилгептан-2,6-дион (1,1-bis-2,2,6,6-tetramethylheptane-2,6-dione, TMHD), O-бензотриазол-1-ил-N,N,N',N'-тетраметилурония тетрафторборат (O-benzotriazol-1-yl-N,N,N',N'-tetramethyluronium tetrafluoroborate, TBTU), тонкослойная хроматография (TCX), тетрагидрофуран (ТГФ), триметилсилил или Me₃Si (trimethylsilyl или Me₃Si, TMS), п-толуолсульфоновой кислоты моногидрат (p-toluenesulfonic acid monohydrate, TsOH или pTsOH), 4-Me-C₆H₄SO₂- или тосил (tosyl, Ts), а также N-уретан-N-карбоксиангидрид (N-urethane-N-carboxyanhydride, UNCA). Традиционная номенклатура, включающая префиксы н- (нормальный), изо-, вторичный (втор-), третичный (трет-) и нео (пео), используется в своем традиционном значении при описании алкильных групп.(J. Rigaudy и D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry (Номенклатура в органической химии), IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford.).

Общие условия

Если не сказано иначе, все температуры, включая температуры плавления (то есть, т.пл.), выражены в градусах по Цельсию (°C). Следует понимать, что реакция, при которой образуется указанный и/или желательный продукт, не обязательно происходит при непосредственном смешении двух первоначально добавленных реагентов, то есть, в смеси может первоначально образоваться один или больше интермедиатов, окончательно ведущих к получению указанного и/или желательного продукта. В разделе описания синтезов и примеров могут использоваться приведенные выше сокращения. Все названия были сгенерированы с использованием программ Autonom или ChemDraw.

Следующие примеры и описания синтезов приводятся для того, чтобы дать возможность специалистам в уровне техники более ясно понимать и практиковать настоящее изобретение. Не следует считать, что они ограничивают объем изобретения, они просто иллюстрируют и представляют его.

Примеры синтеза

Пример 1

(6-Этил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

2-Хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорид

Раствор 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,050 г, 0,235 ммоль) в тионил хлориде (2 мл) 3 часа кипятили с обратным холодильником. Растворитель сконцентрировали в вакууме, после чего продукт высушили в вакууме с получением неочищенного 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,054 г, 0,231 ммоль, 99,5%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

Этап 2

(6-Этил-пиридин-2-ил)-амид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,054 г, 0,233 ммоль) и 2-амино-6-этилпиридина (0,029 г, 0,233 ммоль) в метилен хлориде (2 мл) при перемешивании добавили пиридин (0,057 мл, 0,7 ммоль). Реакционную смесь один час перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота, после чего разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия и соляным раствором, после чего высушили (Na₂SO₄), профильтровали и сконцентрировали в вакууме с получением неочищенного (6-этил-пиридин-2-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,060 г, 0,189 ммоль, 80,8%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=319.

Этап 3

Трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(6-этил-пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К раствору (6-этил-пиридин-2-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,060 г, 0,19 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,081 г, 0,38 ммоль) в диоксане (3 мл) добавили DIPEA (0,099 мл, 0,57 ммоль). Реакционную смесь в течение ночи выдерживали при 110°C. Затем ее охладили, разбавили EtOAc, промыли водным карбонатом натрия и затем соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, 10-60% EtOAc в гексане) с получением трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(6-этил-пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,040 г, 0,080 ммоль, 42,6%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=499.

Этап 4

(6-Этил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(6-этил-пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,038 г, 0,076 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (3 мл) 30 минут перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, после чего добавили EtOAc и водный раствор карбоната натрия. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, 0-20% МеОН в дихлорметане) с получением (6-этил-пиридин-2-ил)-амида 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,028 г, 0,070 ммоль, 92,2%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=399. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,79 (s, 1Н), 9,17 (s, 1Н), 9,06 (s, 1Н), 8,16 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7,80 (t, J=7,8 Гц, 1Н), 7,39 (br. s., 1Н), 7,09 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 4,37 (br. s., 1Н), 3,74-3,93 (m, 1Н), 3,69 (d, J=3,3 Гц, 2Н), 3,48-3,64 (m, 1Н), 3,06 (d, J=3,0 Гц, 1Н), 2,77 (q, J=7,6 Гц, 2Н), 1,70-2,10 (m, 4Н), 1,28 (t, J=7,7 Гц, 3Н).

Пример 2

(8-Метил-хинолин-6-ил)-амид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

2-Хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорид

Раствор 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,150 г, 0,70 ммоль) в тионил хлориде (6 мл) 3 часа кипятили с обратным холодильником. Растворитель сконцентрировали в вакууме, после чего продукт высушили в вакууме с получением 0,16 г неочищенного 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,163 г, 0,70 ммоль, 100%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

Этап 2

2-Хлор-N-(8-метилхинолин-6-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамид

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,10 г, 0.43 ммоль) и 8-метилхинолин-6-амина (0,068 г, 0,43 ммоль) в метилен хлориде (4 мл) добавили пиридин (0,10 мл, 1,29 ммоль). Реакционную смесь один час перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота. Затем ее разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали с получением 0,15 г неочищенного 2-хлор-N-(8-метилхинолин-6-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,15 г, 0,42 ммоль, 98,5%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=355.

Этап 3

Трет-бутиловый эфир {(1S,2R)-2-[7-(8-метил-хинолин-6-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты

К раствору 2-хлор-N-(8-метилхинолин-6-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,15 г, 0,42 ммоль) и N-Вос-1(S),2(R)-диаминоциклогексана (0,14 г, 0,63 ммоль) в диоксане (4 мл) добавили DIPEA (0,22 мл, 1,27 ммоль). Реакционную смесь в течение ночи выдерживали при 115°C. Затем ее охладили, разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, 80% EtOAc в гексане) с получением трет-бутилового эфира {(1S,2R)-2-[7-(8-метил-хинолин-6-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты (0,15 г, 0,28 ммоль, 66,6%) в виде светло-желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=533.

Этап 4

(8-Метил-хинолин-6-ил)-амид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(1S,2R)-2-[7-(8-метил-хинолин-6-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты (0,150 г, 0,28 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (6 мл) 30 мин перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, после чего добавили EtOAc и водный раствор карбоната натрия. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, 10-30% МеОН в дихлорметане) с получением (8-метил-хинолин-6-ил)-амида 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,094 г, 0,22 ммоль, 77,2%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=433. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,63 (br. s., 1Н), 9,16 (s, 1H), 9,03 (s, 1H), 8,85 (dd, J=4,1, 1,6 Гц, 1H), 8,44 (br. s., 1H), 8,30 (dd, J=8,4, 1,4 Гц, 1H), 7,76 (br. s., 1H), 7,54 (dd, J=8,3, 4,0 Гц, 1H), 7,36 (d, J=7,5 Гц, 1H), 4,14 (br. s., 1H), 3,23 (br. s., 1H), 2,76 (s, 3H), 2,14 (br. s., 1H), 1,51-1,90 (m, 5H), 1,38 (br. s., 2H)

Пример 3

(8-Этил-хинолин-6-ил)-амид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

N-(2-Этил-4-нитрофенил)ацетамид и N-(2-этил-5-нитрофенил)ацетамид

Серную кислоту (30 мл, 563 ммоль) охладили до 0°C, после чего несколькими порциями добавили N-(2-этилфенил)ацетамид (2 г, 12,3 ммоль). К полученному раствору добавили нитрат калия (1,24 г, 12,3 ммоль). Реакционной смеси позволили нагреться до комнатной температуры, после чего перемешивали одну ночь. Затем смесь медленно вылили на лед. Полученное твердое вещество собрали фильтрованием, получив смесь твердых N-(2-этил-4-нитрофенил)ацетамида и N-(2-этил-5-нитрофенил)ацетамида (2,0 г, 9,61 ммоль, 78,4%), которые сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

Этап 2

2-Этил-5-нитроанилин и 2-этил-4-нитроанилин

Раствор смеси N-(2-этил-4-нитрофенил)ацетамида и N-(2-этил-5-нитрофенил)ацетамида (2 г, 9,61 ммоль) 8 часов выдерживали в концентрированной бромоводородной кислоте (40 мл) при 110°C. Затем смесь охладили до комнатной температуры. После частичного удаления растворителя смесь разбавили EtOAc и ледяной водой. Медленно добавили насыщенный водный раствор карбоната натрия. Органическую фазу промыли карбонатом натрия и соляным раствором, высушили над Na₂SO₄, профильтровали и сконцентрировали в вакууме с получением неочищенной смеси 2-этил-5-нитроанилина и 2-этил-4-нитроанилина (1,5 г, 9,03 ммоль, 94,0%) в виде желтого твердого вещества, которую сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

Этап 3

8-Этил-6-нитро-хинолин

К раствору серной кислоты (4 мл, 75.0 ммоль) и воды (4 мл) добавили 3-нитробензолсульфонат натрия (1,35 г, 6,02 ммоль) и глицерин (1,77 мл, 24,1 ммоль). Полученный раствор перемешали при 100°C и добавили смесь 2-этил-5-нитроанилина и 2-этил-4-нитроанилина (1,00 г, 6,02 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 3 часа при 150°C. После охлаждения до комнатной температуры к ней медленно добавили лед. Смесь осторожно нейтрализовали насыщенным раствором карбоната натрия и проэкстрагировали EtOAc. Органическую фазу промыли насыщенным раствором карбоната натрия и соляным раствором, высушили над Na₂SO₄, профильтровали и сконцентрировали в вакууме с получением неочищенного продукта, содержащего 8-этил-5-нитро-хинолин и 8-этил-6-нитро-хинолин. Неочищенный продукт очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 5-50% EtOAc в гексане) с получением 8-этил-6-нитро-хинолина (0,17 г, 0,84 ммоль, 14%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=203.

Этап 4

8-Этилхинолин-6-амин

Смесь 8-этил-6-нитрохинолина (0,16 г, 0,79 ммоль) и 10% палладия на углероде (0,16 г) в EtOH (5 мл) 4 часа встряхивали в аппарате Парра в атмосфере водорода (50 psi). Смесь профильтровали через целит, и фильтрат сконцентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 5-50% EtOAc в гексане) с получением 8-этилхинолин-6-амина (0,023 г, 0,13 ммоль, 16,9%) в виде твердого вещества серого цвета. LCMS m/z [М+Н]=173.

Этап 5

2-Хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорид

Раствор 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,150 г, 0,70 ммоль) и тионил хлорида (6 мл) 3 часа кипятили с обратным холодильником. Растворитель сконцентрировали в вакууме, после чего полученный остаток высушили в вакууме с получением 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,163 г, 0,70 ммоль, 100%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

Этап 6

2-Хлор-N-(8-этилхинолин-6-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамид

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,030 г, 0,129 ммоль) и 8-этилхинолин-6-амина (0,022 г, 0,129 ммоль) в метилен хлориде (2 мл) добавили пиридин (0,031 мл, 0,31 ммоль). Реакционную смесь 1 час перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре. Затем смесь разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия и соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄ и, наконец, сконцентрировали с получением неочищенного 2-хлор-N-(8-этилхинолин-6-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,047 г, 0,128 ммоль, 99%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=369.

Этап 7

Трет-бутиловый эфир {(1S,2R)-2-[7-(8-этил-хинолин-6-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты

К раствору 2-хлор-N-(8-этилхинолин-6-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,047 г, 0,128 ммоль) и N-Вос-1(S),2(R)-диаминоциклогексана (0,041 г, 0,19 ммоль) в диоксане (4 мл) добавили DIPEA (0,067 мл, 0,38 ммоль). Реакционную смесь одну ночь выдерживали при температуре 115°C. Смесь затем охладили, разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, EtOAc) с получением трет-бутилового эфира {(1S,2R)-2-[7-(8-этил-хинолин-6-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты (0,040 г, 0,073 ммоль, 57,4%) в виде светло-желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=547.

Этап 8

(8-Этил-хинолин-6-ил)-амид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(1S,2R)-2-[7-(8-этил-хинолин-6-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты (0,038 г, 0,070 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (6 мл) 30 минут перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, после чего добавили EtOAc и водный раствор карбоната натрия. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали, сконцентрировали в вакууме и, наконец, очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 10-30% МеОН в дихлорметане) с получением (8-этил-хинолин-6-ил)-амида 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,019 г, 0,43 ммоль, 61,2%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=447. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,62 (s, 1Н), 9,16 (s, 1Н), 9,03 (s, 1Н), 8,85 (dd, J=4,0, 1,8 Гц, 1Н), 8,44 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 8,30 (dd, J=8,4, 1,4 Гц, 1Н), 7,76 (br. s., 1Н), 7,53 (dd, J=8,3, 4,3 Гц, 1H), 7,35 (d, J=7,5 Гц, 1H), 4,13 (br. s., 1H), 3,35-3,42 (m, 1H), 3,18-3,28 (m, 2H), 1,49-2,01 (m, 8H), 1,34 (t, J=7,5 Гц, 3H).

Пример 4

(5-Циано-6-метил-пиридин-2-ил)-амид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

2-Хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорид

Раствор 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,050 г, 0,235 ммоль) в тионил хлориде (2 мл) 3 часа кипятили с обратным холодильником. Смесь охладили, после чего сконцентрировали и высушили в вакууме с получением неочищенного 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,054 г, 0,231 ммоль, 99,5%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

Этап 2

2-Хлор-N-(5-циано-6-метилпиридин-2-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамид

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,10 г, 0,429 ммоль) и 6-амино-2-метилникотинонитрила (0,057 г, 0,429 ммоль) в метилен хлориде (4 мл) добавили пиридин (0,10 мл, 01,29 ммоль). Смесь 1 час перемешивали при комнатной температуре. Затем ее разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄ и, наконец, сконцентрировали с получением неочищенного 2-хлор-N-(5-циано-6-метилпиридин-2-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,12 г, 0,36 ммоль, 84,8%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=330.

Этап 3

Трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(6-этил-пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К суспензии 2-хлор-N-(5-циано-6-метилпиридин-2-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,120 г, 0,36 ммоль) и N-Вос-1(S),2(R)-диаминоциклогексана (0,12 г, 0,55 ммоль) в диоксане (4 мл) добавили DIPEA (0,19 мл, 1,09 ммоль). Реакционную смесь одну ночь выдерживали при температуре 115°C. Смесь затем охладили, разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, EtOAc) с получением трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(6-этил-пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,12 г, 0,24 ммоль, 65%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=508.

Этап 4

(5-Циано-6-метил-пиридин-2-ил)-амид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутил-(1S,2R)-2-(7-(5-циано-6-метилпиридин-2-илкарбамоил)тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино)циклогексилкарбамата (0,12 г, 0,24 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (6 мл) 30 минут перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, после чего добавили EtOAc и водный раствор карбоната натрия. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, 5-30% МеОН в дихлорметане) с получением (5-циано-6-метил-пиридин-2-ил)-амида 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,077 г, 0,19 ммоль, 79,9%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=408. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 9,14 (s, 1Н), 9,10 (s, 1Н), 8,22-8,34 (m, 2Н), 7,27-7,43 (m, 1Н), 4,12-4,25 (m, 1Н), 3,07-3,20 (m, 1Н), 2,65 (s, 3Н), 1,28-1,85 (т, 8Н).

Пример 5

(6-[1,2,3]Триазол-2-ил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-амин и 6-(2Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиридин-2-амин

Смесь 6-(ди-boc-амино)-2-бромпиридина (0,40 г, 1,07 ммоль), 2Н-1,2,3-триазола (0,74 г, 10,7 ммоль), гидроксида калия (0,12 г, 2,14 ммоль) и меди (0,41 г, 2,14 ммоль) одну ночь перемешивали в цилиндре под давлением при 150°C. После охлаждения системы при перемешивании добавили EtOAc. После того, как твердый осадок удалили фильтрованием, органический слой промыли водным раствором карбоната натрия и соляным раствором, высушили над Na₂SO₄ и сконцентрировали в вакууме. Неочищенное вещество очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, 40-60% EtOAc в гексане) с получением 6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-амина (0,080 г, 0,50 ммоль, 46,3%) в виде белого твердого вещества и 6-(2Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиридин-2-амина (0,071 г, 0,44 ммоль, 41,1%) в виде белого твердого вещества.

Этап 2

2-Хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорид

Раствор 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,050 г, 0,235 ммоль) в тионил хлориде (2 мл) 3 часа кипятили с обратным холодильником. Растворитель удалили в вакууме, после чего остаток высушили в вакууме с получением неочищенного 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,054 г, 0,231 ммоль, 99,5%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

Этап 3

N-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-ил)-2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамид

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,10 г, 0,43 ммоль) и 6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-амина (0,69 г, 0,43 ммоль) в метилен хлориде (4 мл) добавили пиридин (0,10 мл, 1,29 ммоль). Реакционную смесь 1 час перемешивали при комнатной температуре. Затем смесь разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия и соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали, сконцентрировали и очистили (диоксид кремния, 40 г, 80% EtOAc в гексане) с получением N-(6-(2H-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-ил)-2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,09 г, 0,25 ммоль, 58,6%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=358.

Этап 4

трет-Бутил-(3R,4R)-4-(7-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-илкарбамоил)тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат

К суспензии N-(6-(2H-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-ил)-2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,09 г, 0,25 ммоль) и трет-бутил (3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,11 г, 0,50 ммоль) в диоксане (3 мл) добавили DIPEA (0,13 мл, 0,76 ммоль). Реакционную смесь одну ночь выдерживали при температуре 115°C. Смесь затем охладили, разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, EtOAc) с получением трет-бутил-(3R,4R)-4-(7-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-илкарбамоил)тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,085 г, 0,16 ммоль, 62,9%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=538.

Этап 5

(6-[1,2,3]Триазол-2-ил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутил-(3R,4R)-4-(7-(6-(2Н-1,2,3-триазол-2-ил)пиридин-2-илкарбамоил)тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,085 г, 0,16 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (6 мл) 30 минут перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, после чего добавили EtOAc и водный раствор карбоната натрия. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 5 to 30% МеОН в дихлорметане) с получением (6-[1,2,3]триазол-2-ил-пиридин-2-ил)-амида 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,065 г, 0,15 ммоль, 94,0%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=438. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,74-12,30 (m, 1Н), 9,18 (s, 1Н), 9,11 (s, 1Н), 8,39 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 8,20 (s, 2Н), 8,14 (s, 1Н), 7,79 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7,30-7,55 (m, 1Н), 4,37 (br. s., 1Н), 3,41-3,73 (m, 4Н), 3,12 (br. s., 1Н), 1,60-2,08 (m, 4Н)

Пример 6

(6-[1,2,3]Триазол-1-ил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

2-Хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорид

Раствор 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,050 г, 0,235 ммоль) в тионил хлориде (2 мл) 3 часа кипятили с обратным холодильником. Смесь затем охладили, сконцентрировали и высушили в вакууме с получением неочищенного 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,054 г, 0,231 ммоль, 99,5%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

Этап 2

N-(6-(2Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиридин-2-ил)-2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамид

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,10 г, 0,43 ммоль) и 6-(2Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиридин-2-амина (0,69 г, 0,43 ммоль) в метилен хлориде (4 мл) добавили пиридин (0,10 мл, 1,29 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре в течение часа. Затем смесь разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄ и, наконец, сконцентрировали с получением неочищенного N-(6-(2Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиридин-2-ил)-2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,13 г, 0,38 ммоль, 87,3%) в виде белого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=358.

Этап 3

трет-Бутил-(3R,4R)-4-(7-(6-(2Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиридин-2-илкарбамоил)тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат

К суспензии N-(6-(2H-1,2,3-триазол-1-ил)пиридин-2-ил)-2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,13 г, 0,38 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,12 г, 0,56 ммоль) в диоксане (3 мл) добавили DIPEA (0,20 мл, 1,12 ммоль). Реакционную смесь одну ночь выдерживали при температуре 115°C. Смесь затем охладили, разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, после чего высушили над безводным Na₂SO₄. Органическую фазу сконцентрировали и очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, EtOAc) с получением трет-бутил-(3R,4R)-4-(7-(6-(2Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиридин-2-илкарбамоил)тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,065 г, 0,12 ммоль, 32,3%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=538.

Этап 4

(6-[1,2,3]Триазол-1-ил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутил-(3R,4R)-4-(7-(6-(2Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиридин-2-илкарбамоил)тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино)тетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,060 г, 0,11 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (6 мл) 30 минут перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, после чего добавили EtOAc и водный раствор карбоната натрия. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, 5-30% МеОН в дихлорметане) с получением (6-[1,2,3]триазол-1-ил-пиридин-2-ил)-амида 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,018 г, 0,041 ммоль, 36,9%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=438. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,77-12,31 (m, 1Н), 9,19 (s, 1Н), 9,13 (s, 1Н), 8,88 (br. s., 1Н), 8,38 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 8,20 (t, J=8,0 Гц, 1Н), 8,06 (s, 1Н), 7,84 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 7,24-7,56 (m, 1Н), 4,26 (br. s., 1Н), 3,50 (br. s., 2Н), 3,11-3,24 (m, 1H), 3,03 (br. s., 1H), 1,55-2,00 (m, 4H).

Пример 7

[1,6]Нафтиридин-2-иламид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

2-Хлор-N-(1,6-нафтиридин-2-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамид

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,10 г, 0,47 ммоль) и 1,6-нафтиридин-2-амина (0,068 г, 0,47 ммоль) в пиридине (5 мл) медленно добавили POCl₃ (0,13 мл, 1,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре в течение часа. Затем смесь разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, EtOAc) с получением 2-хлор-N-(1,6-нафтиридин-2-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,080 г, 0,24 ммоль, 50,2%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=342.

Этап 2

трет-Бутил-(1S,2R)-2-(7-(1,6-нафтиридин-2-илкарбамоил)тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино)циклогексилкарбамат

К суспензии 2-хлор-N-(1,6-нафтиридин-2-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,080 г, 0,24 ммоль) и N-Вос-1(S),2(R)-диаминоциклогексана (0,10 г, 0,47 ммоль) в диоксане (4 мл) добавили DIPEA (0,12 мл, 0,70 ммоль). Реакционную смесь одну ночь выдерживали при температуре 115°C. Смесь затем охладили и разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, EtOAc) с получением трет-бутил-(1S,2R)-2-(7-(1,6-нафтиридин-2-илкарбамоил)тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино)циклогексилкарбамата (0,067 г, 0,013 ммоль, 55,1%) в виде светло-желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=520.

Этап 3

[1,6]Нафтиридин-2-иламид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутил-(1S,2R)-2-(7-(1,6-нафтиридин-2-илкарбамоил)тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино)циклогексилкарбамата (0,067 г, 0,13 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (5 мл) 30 минут перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, после чего добавили EtOAc и водный раствор карбоната натрия. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, 10-30% МеОН в дихлорметане) с получением [1,6]нафтиридин-2-иламида 2-((1R,2S)-2-aMHHO-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,017 г, 0,041 ммоль, 31,4%) в виде белого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=420. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 9,31 (s, 1Н), 9,17 (s, 1Н), 9,15 (s, 1Н), 8,60-8,76 (m, 3Н), 7,64 (d, J=6,0 Гц, 1Н), 7,34-7,46 (m, 1Н), 4,35 (br. s., 1Н), 3,26 (br. s., 1Н), 1,37-1,94 (m, 8Н).

Пример 8

Бензотиазол-2-иламид 2-(цис-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

N-(БензоИтиазол-2-ил)-2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамид

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,050 г, 0,23 ммоль), 2-аминобензотиазола (0,035 г, 0,23 ммоль), диизопропилэтиламина (0,12 мл, 0,7 ммоль) и диметилформамида (2 мл) добавили гексафторфосфат О-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-бис(тетраметилен)урония (0,12 г, 0,28 ммоль). Смесь один час перемешивали при комнатной температуре. Затем смесь разбавили EtOAc, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме с получением неочищенного N-(бензо[d]тиазол-2-ил)-2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,081 г, 0,23 ммоль, 100%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=347.

Этап 2

Бензотиазол-2-иламид 2-(цис-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Суспензию смеси N-(бензо[d]тиазол-2-ил)-2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,081 г, 0,23 ммоль) и цис-1,2-диаминоцикпогексана (0,084 мл, 0,70 ммоль) в ТГФ (3 мл) один час перемешивали при 65°C. Смесь охладили, разбавили EtOAc, органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Неочищенное вещество очистили хроматографией (диоксид кремния, 40 г, 5%-30% МеОН в CH₂Cl₂) с получением бензотиазол-2-иламида 2-(цис-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,014 г, 0,032 ммоль, 14,1%) в виде светло-желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=425. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 9,25 (s, 1Н), 9,23 (s, 1Н), 8,06 (d, J=7,8 Гц, 1Н), 7,66-7,82 (m, 2Н), 7,49 (t, J=7,7 Гц, 1Н), 7,30-7,41 (m, 1Н), 4,21-4,36 (m, 1Н), 3,59-3,72 (m, 1Н), 1,75 (m, 8Н)

Пример 9

(1Н-Бензоимидазол-2-ил)-амид 2-(цис-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

N-(Бензо[d]тиазол-2-ил)-2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамид

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,050 г, 0,23 ммоль), 2-аминобензимидазола (0,031 г, 0,23 ммоль), диизопропилэтиламина (0,12 мл, 0,7 ммоль) и диметилформамида (2 мл) добавили гексафторфосфат 2-(7-аза-1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (0,11 г, 0,28 ммоль). Смесь 12 часов перемешивали при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавили EtOAc и промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме с получением неочищенного М-(бензо[d]тиазол-2-ил)-2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,080 г, 0,12 ммоль, 50%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=330.

Этап 2

(1Н-Бензоимидазол-2-ил)-амид 2-(цис-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Суспензию смеси неочищенного N-(1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)-2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,080 г, 0,12 ммоль) и цис-1,2-диаминоциклогексана (0,044 мл, 0,36 ммоль) в диоксане (3 мл) перемешивали 30 минут при 50°C. Смесь затем охладили, разбавили EtOAc, органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Неочищенное вещество очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 1%-20% МеОН в CH₂Cl₂) с получением (1Н-бензоимидазол-2-ил)-амида 2-(цис-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,010 г, 0,024 ммоль, 20.2%) в виде светло-желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=408. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 12,33 (br. s., 1Н), 9,28 (s, 1Н), 9,22 (s, 1H), 7,69-7,84 (m, 1H), 7,37-7,61 (m, 2H), 7,28-7,35 (m, 1H), 7,14 (d, J=3,5 Гц, 2H), 4,28-4,47 (m, 1H), 3,75-3,93 (m, 1H), 1,43-2,03 (m, 8H).

Пример 10

[1,6]Нафтиридин-2-иламид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

2-Хлор-N-(1,5-нафтиридин-2-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамид

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,050 г, 0,23 ммоль), 1,5-нафтиридин-2-амина (0,034 г, 0,23 ммоль), диизопропилэтиламина (0,12 мл, 0,7 ммоль) и диметилформамида (2 мл) добавили гексафторфосфат 2-(7-аза-1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (0,11 г, 0,28 ммоль). Смесь 12 часов перемешивали при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавили EtOAc и промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме с получением неочищенного 2-xnop-N-(1,5-нафтиридин-2-ил)тиено[3,2-d^]пиримидин-7-карбоксамида (0,081 г, 0,23 ммоль, 100%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=342.

Этап 2

[1,5]Нафтиридин-2-иламид 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К суспензии 2-хлор-N-(1,5-нафтиридин-2-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,080 г, 0,23 ммоль) в ТГФ (3 мл) добавили цис-циклогексан-1,2-диамин (0,085 мл, 0,071 ммоль). Смесь 3 часа выдерживали при 60ºС. Смесь затем охладили, разбавили EtOAc, и органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Неочищенное вещество очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 5%-30% МеОН в CH₂Cl₂) с получением 2-((1R,2S)-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты [1,5]нафтиридин-2-иламид (0,020 г, 0,048 ммоль, 20,1%) в виде светло-желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=420. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 9,25 (s, 1Н), 9,19 (s, 1Н), 8,87-8,97 (m, 1Н), 8,80 (d, J=9,2 Гц, 1Н), 8,54 (d, J=9,2 Гц, 1Н), 8,22 (d, J=8,5 Гц, 1Н), 7,81 (dd, J=8,5, 4,1 Гц, 1Н), 7,64 (br. s., 1Н), 4,50-4,68 (m, 1Н), 3,62-3,81 (m, 1Н), 2,95-3,13 (m, 1Н), 1,75 (m, 8Н)

Пример 11

Гидрохлорид (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

(1-Метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,050 г, 0,233 ммоль) в диметилформамиде (2 мл) добавили 1-метил-1Н-бензо[d]имидазол-4-амина (0,068 г, 0,466 ммоль), DIPEA (0,122 мл) и гексафторфосфат(V) 1-((1Н-бензо[d][1,2,3]триазол-1-илокси)(пирролидин-1-ил)метилен)пирролидиния (0,111 г, 0,256 ммоль). Реакционную смесь одну ночь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре. Затем ее разбавили водой и дихлорметаном. Органический слой отделили, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 50-90% EtOAc в гексане) с получением (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,037 г, 0,107 ммоль, 46%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=344.

Этап 2

Трет-бутиловый эфир 2-{(3R,4R)-4-[7-(1-метил-1Н-бензоимидазол-4-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К раствору (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,037 г, 0,108 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,035 г, 0,161 ммоль) в диоксане (3 мл) добавили триэтиламин (0,075 мл, 0,538 ммоль). Смесь одну ночь выдерживали при температуре 100°С. Затем ее охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 0-5% 0,7 Н аммиак в МеОН в дихлорметане) с получением трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(1-метил-1Н-бензоимидазол-4-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,050 г, 0,095 ммоль, 88,8%) в виде светло-оранжевого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=524.

Этап 3

Гидрохлорид (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты Раствор трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(1-метил-1Н-бензоимидазол-4-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,050 г, 0,096 ммоль) в 4М HCl в диоксане (2 мл) одну ночь перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, после чего неочищенный остаток дважды промыли эфиром, сконцентрировали и высушили с получением (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты, гидрохлорида (0,048 г, 0,104 ммоль, 100%) в виде коричневого твердого вещества.

¹Н ЯМР (ДМСО) d: 11,54 (br. s., 2Н), 9,26 (s, 1Н), 9,11 (s, 1Н), 8,63 (br. s., 4H), 8,17 (br. s., 3H), 7,72 (br. s., 1H), 7,45 (br. s., 1H), 4,98 (br. s., 1H), 1,94-2,14 (m, 3H), 1,76-1,92 (m, 3H). LCMS m/z [M+H]=424.

Пример 12

Гидротрифторацетат (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-(2-амино-этиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Гидротрифторацетат (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-(2-амино-этиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,035 г, 0,102 ммоль) в диоксане (2 мл) добавили этан-1,2-диамин (0,0367 г, 0,611 ммоль). Реакционную смесь 3 часа выдерживали при температуре 80°C, после чего сконцентрировали в вакууме. Остаток растворили в ацетонитриле (2 мл) и воде (1 мл), HCl (2 капли) и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очистили препаративной ВЭЖХ (0-50% ацетонитрила в воде с 0,05% TFA) с получением гидротрифторацетата (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-(2-амино-этиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,025 г, 0,052 ммоль, 51%) в виде желтого твердого вещества.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,69 (br. s., 1Н), 9,20 (s, 1Н), 9,09 (s, 1Н), 8,34 (br. s., 2Н), 7,84 (br. s., 3Н), 7,68 (br. s., 1H), 7,37-7,46 (m, 1H), 7,26-7,35 (m, 1H), 4,15 (br. s., 2H), 3,90 (s, 3H), 3,17 (d, J=4,8 Гц, 2H); LCMS m/z [M+H]=482.

Пример 13

Гидрохлорид (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-(азетидин-3-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

Трет-бутиловый эфир 3-[7-(1-метил-1Н-бензоимидазол-4-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-азетидин-1-карбоновой кислоты

К раствору (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,043 г, 0,125 ммоль) и 1-boc-3-(амино)азетидина (0,129 г, 0,750 ммоль) в диоксане (3 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,044 мл,0,250 ммоль). Реакционную смесь 3 часа выдерживали при 100°C. Затем ее охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток очистили хроматографией (диоксид кремния 12 г, 50-90% этилацетата в гексане) с получением трет-бутилового эфира 3-[7-(1-метил-1Н-бензоимидазол-4-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-азетидин-1-карбоновой кислоты (0,039 г, 0,081 ммоль, 65%) в виде светло-желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=480.

Этап 2

Гидрохлорид (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-(азетидин-3-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира 3-[7-(1-метил-1Н-бензоимидазол-4-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-азетидин-1-карбоновой кислоты (0,036 г, 0,075 ммоль) в 4М HCl в диоксане (2 мл) одну ночь перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, после чего неочищенный остаток дважды промыли эфиром, сконцентрировали и высушили с получением гидрохлорида (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-(азетидин-3-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,030 г, 0,072 ммоль, 96%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=380.

Пример 14

Гидрохлорид (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амид 2-(2-метиламино-этиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

Трет-бутиловый эфир метил-{2-[7-(1-метил-1Н-бензоимидазол-4-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-этил}-карбаминовой кислоты

К раствору (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,080 г, 0,233 ммоль) и трет-бутил 2-аминоэтил(метил)карбамата (0,0812 г, 0,466 ммоль) в диоксане (3 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,122 мл, 0,699 ммоль). Реакционную смесь одну ночь выдерживали при температуре 90°C. Смесь затем охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 12 г, 50-90% этилацетата в гексане) с получением трет-бутилового эфира метил-{2-[7-(1-метил-1Н-бензоимидазол-4-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-этил}-карбаминовой кислоты (0,034 г, 0,071 ммоль, 30%) в виде желтого вязкого масла. LCMS m/z [М+Н]=482.

Этап 2

Гидрохлорид (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амид 2-(2-метиламино-этиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира метил-{2-[7-(1-метил-1Н-бензоимидазол-4-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-этил}-карбаминовой кислоты (0,031 г, 0,0644 ммоль) в 4М HCl в диоксане (3 мл) одну ночь перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, неочищенный остаток дважды промыли эфиром, сконцентрировали и высушили в вакууме с получением гидрохлорида (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-(2-метиламино-этиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,028 г, 0,067 ммоль, 104%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=382.

Пример 15

Гидротрифторацетат (6-фтор-1-метил-1Н-индазол-3-ил)-амид 2-(цис-2-ммино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

(6-Фтор-1-метил-1Н-индазол-3-ил)амид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

При перемешивании к раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,050 г, 0,233 ммоль) в ДМФ (2 мл) добавили 6-фтор-1-метил-1Н-индазол-3-амин (0,077 г, 0,466 ммоль), DIPEA (0,0468 г, 0,362 ммоль) и гексафторфосфат 0-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-бис-(тетраметилен)урания (0,043 г, 0,100 ммоль). Смесь 2 часа перемешивали при комнатной температуре, затем разбавили дихлорметаном и водой. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, после чего высушили над безводным Na₂SO₄, и, наконец, сконцентрировали в вакууме. Остаток очистили хроматографией (диоксид кремния 12 г, 40-80% этил ацетат в гексане) с получением (6-фтор-1-метил-1Н-индазол-3-ил) амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,031 г, 0,086 ммоль, 36,8%) в виде светло-желтого полутвердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=362

Этап 2

Трет-бутиловый эфир {цис-2-[7-(6-фтор-1-метил-1Н-индазол-3-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты

К раствору (6-фтор-1-метил-1Н-индазол-3-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,029 г, 0,080 ммоль) и трет-бутил-2-аминоциклогексилкарбамата (0,0344 г, 0,160 ммоль) в диоксане (3 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,042 мл, 0,240 ммоль). Смесь в течение ночи выдерживали при 90°C. Затем ее охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 12 г, 50-90% этилацетата в гексане) с получением трет-бутилового эфира {цис-2-[7-(6-фтор-1-метил-1Н-индазол-3-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты (0,017 г, 0,032 ммоль, 39,3%) в виде желтого вязкого масла. LCMS m/z [М+Н]=540.

Этап 3

Гидротрифторацетат (6-Фтор-1-метил-1Н-индазол-3-ил)-амида 2-(цис-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору трет-бутилового эфира {цис-2-[7-(6-фтор-1-метил-1Н-индазол-3-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-циклогексил}-карбаминовой кислоты (0,010 г, 0,0185 ммоль) в дихлорметане (2 мл) добавили TFA (0,400 мл, 5,19 ммоль). Реакционную смесь одну ночь перемешивали при комнатной температуре, после чего сконцентрировали в вакууме. Остаток дважды промыли эфиром. Неочищенный продукт очистили препаративной ВЭЖХ (10-80% ацетонитрила в воде с 0,05% TFA) с получением гидротрифторацетата (6-фтор-1-метил-1Н-индазол-3-ил)-амида 2-цис-2-амино-циклогексиламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,002 г, 0,003 ммоль, 15,5%) в виде белого твердого вещества.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,48 (br. s., 1Н), 9,22 (s, 1Н), 9,03 (s, 1Н), 7,79 (br. s., 3Н), 7,68 (dd, J=8,7, 7,9 Гц, 1H), 7,44 (br. s., 1H), 6,89 (d, J=13,1 Гц, 1H), 6,79 (br. s., 1H), 4,37 (br. s., 2H), 3,38 (s, 3H), 1,55-1,85 (m, 6H), 1,42 (br. s., 2H). LCMS m/z [M+H]=440.

Пример 16

Нафталин-2-иламид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

Нафталин-2-иламид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,050 г, 0,233 ммоль) в ДМФ (2 мл) при перемешивании добавили нафталин-2-амид (0,067 г, 0,466 ммоль), DIPEA (0,163 мл, 0,932 ммоль), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (0,048 г, 0,349 ммоль) и HATU (0,133 г, 0,349 ммоль). Смесь 2 часа перемешивали при комнатной температуре, после чего разбавили дихлорметаном и водой. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, после чего высушили над безводным Na₂SO₄, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Остаток в течение ночи сушили под высоким вакуумом с получением нафталин-2-иламида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,105 г, 0,309 ммоль, 133%) в виде полутвердого вещества коричневого цвета, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=340

Этап 2

Трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(нафталин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К раствору нафталин-2-иламида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,0792 г, 0,233 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,0756 г, 0,350 ммоль) в диоксане (3 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,122 мл, 0,699 ммоль). Реакционную смесь в течение ночи выдерживали при 120°C. Смесь затем охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 0-60% этилацетата в гексане) с получением трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(нафталин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,063 г, 0,121 ммоль, 52%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=520.

Этап 3

Нафталин-2-иламид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(нафталин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,063 г, 0,121 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение часа. Смесь сконцентрировали в вакууме, к остатку добавили дихлорметан и насыщенный раствор карбоната натрия. Водный слой промыли дихлорметаном (3х). Органический слой промыли соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄ и сконцентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очистили хроматографией (диоксид кремния 4 г, 0-10% МеОН в дихлорметане) с получением нафталин-2-иламида 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,027 г, 0,064 ммоль, 53,1%) в виде светло-желтого твердого вещества. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,56 (s, 1Н), 9,20 (s, 1Н), 9,06 (s, 1Н), 8,41 (br. s., 1Н), 8,02 (d, J=8,8 Гц, 1Н), 7,87-7,96 (m, 2Н), 7,84 (br. s., 1Н), 7,52-7,59 (m, 1Н), 7,40-7,51 (m, 2Н), 4,30 (br. s., 1H), 3,87 (br. s., 1H), 3,76 (d, J=8,3 Гц, 1H), 3,62 (dd, J=11,5, 2,0 Гц, 1H), 3,44-3,55 (m, 1H), 3,17 (br. s., 1H), 2,68 (s, 1H), 2,34 (s, 1H), 2,05-2,14 (m, 2H), 1,75-2,01 (m, 2H). LCMS m/z [M+H]=420

Пример 17

(5-Метил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

(5-Метил-4,5-дигидро-пиридин-2-ил)-амид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,050 г, 0,233 ммоль) в ДМФ (2 мл) при перемешивании добавили 5-метилпиридин-2-амин (0,0504 г, 0,466 ммоль), DIPEA (0,163 мл, 0,932 ммоль), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (0,048 г, 0,349 ммоль) и HATU (0,133 г, 0,349 ммоль). Смесь 2 часа перемешивали при комнатной температуре, после чего разбавили дихлорметаном и водой. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, после чего высушили над безводным Na₂SO₄, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Остаток высушили в течение ночи в условиях высокого вакуума, получив (5-метил-4,5-дигидро-пиридин-2-ил)-амид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,097 г, 136%) в виде коричневого полутвердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=305.

Этап 2

Трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(5-метил-4,5-дигидро-пиридин-2-ил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К раствору (5-метил-4,5-дигидро-пиридин-2-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,071 г, 0,233 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,0756 г, 0,350 ммоль) в диоксане (3 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,122 мл, 0,699 ммоль). Реакционную смесь в течение ночи выдерживали при 120°C. Затем ее охладили и разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄, профильтровали и сконцентрировали. Очистка методом хроматографии (диоксид кремния 40 г, 0-50% этилацетат в гексане) позволила получить трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(5-метил-4,5-дигидро-пиридин-2-ил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,047 г, 0,097 ммоль, 41,6%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=485.

Этап 3

(5-Метил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(5-метил-4,5-дигидро-пиридин-2-ил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,047 г, 0,97 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (2 мл) один час перемешивали при комнатной температуре. Реакционную смесь сконцентрировали в вакууме, к остатку добавили дихлорметан и насыщенный раствор карбоната натрия. Водный слой промыли дихлорметаном (3х). Органический слой промыли соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄, и сконцентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очистили хроматографией (диоксид кремния 4 г, 0-10% МеОН в дихлорметане) с получением (5-метил-пиридин-2-ил)-амида 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,017 г, 0,044 ммоль, 45,6%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 12,09 (br. s., 1Н), 9,16 (s, 1Н), 9,04 (s, 1Н), 8,08-8,37 (m, 2Н), 7,69 (dd, J=8,4, 1,9 Гц, 1Н), 7,31-7,52 (m, 1Н), 4,19-4,47 (m, 1Н), 3,89 (d, J=11,0 Гц, 1Н), 3,77 (br. s., 2Н), 3,60 (t, J=10,8 Гц, 1H), 3,16 (br. s., 1H), 2,67-2,99 (m, 2H), 2,29 (s, 3Н), 1,66-2,01 (m, 2H). LCMS m/z [M+H]=385.

Пример 18

п-Толиламид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

п-Толиламид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,075 г, 0,349 ммоль) в ДМФ (3 мл) при перемешивании добавили п-толуидин (0,075 г, 0,699 ммоль), DIPEA (0,244 мл, 1,4 ммоль), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (0,0713 г, 0,349 ммоль) и HATU (0,199 г, 0,524 ммоль). Реакционную смесь 2 часа перемешивали при комнатной температуре, после чего разбавили дихлорметаном и водой. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Остаток высушили в течение ночи в условиях высокого вакуума с получением п-толиламида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,322 г) в виде коричневого полутвердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=304.

Этап 2

Трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(4-метил-циклогекса-1,5-диенилкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К раствору п-толиламида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,106 г, 0,349 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,113 г, 0,524 ммоль) в диоксане (4 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,183 мл, 1,05 ммоль). Реакционную смесь в течение ночи выдерживали при 120°C. Смесь затем охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 0-50% этилацетата в гексане) с получением трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(4-метил-циклогекса-1,5-диенилкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,085 г) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=484.

Этап 3

п-Толиламид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(4-метил-циклогекса-1,5-диенилкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,085 г, 0,176 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (3 мл) 2 часа перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, к остатку добавили дихлорметан и насыщенный раствор карбоната натрия. Водный слой промыли дихлорметаном (3х). Органический слой промыли соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄ и сконцентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очистили хроматографией (диоксид кремния 4 г, 0-15% МеОН в дихлорметане) с получением п-толиламида 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,036 г, 0,094 ммоль, 53,4%) в виде желтого твердого вещества. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,31 (s, 1Н), 9,17 (s, 1Н), 8,99 (s, 1Н), 7,66 (br. s., 2Н), 7,39 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 7,25 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 4,19 (d, J=3,3 Гц, 1Н), 3,84 (d, J=10,8 Гц, 1Н), 3,72 (dd, J=11,3, 3,0 Гц, 1Н), 3,52-3,62 (m, 1Н), 3,39-3,49 (m, 2Н), 3,06 (br. s., 1Н), 2,32 (s, 3Н), 1,91-2,01 (m, 2Н). LCMS m/z [М+Н]=384.

Пример 19

(1-Метил-1Н-пиразол-3-ил)-амид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

(1-Метил-1Н-пиразол-3-ил)-амид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,075 г, 0,349 ммоль) в ДМФ (3 мл) добавили 1-метил-1Н-пиразол-3-амин (0,051 г, 0,524 ммоль), DIPEA (0,244 мл, 1,4 ммоль), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (0,0713 г, 0,524 ммоль) и HATU (0,199 г, 0,524 ммоль). Реакционную смесь 2 часа перемешивали при комнатной температуре, после чего разбавили дихлорметаном и водой. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Остаток высушили в течение ночи в условиях высокого вакуума с получением (1-метил-1Н-пиразол-3-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,123 г, 119%) в виде коричневого полутвердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=294.

Этап 2

Трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(1-метил-1Н-пиразол-3-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К раствору (1-метил-1Н-пиразол-3-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,103 г, 0,349 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,113 г, 0,524 ммоль) в диоксане (4 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,183 мл, 1,05 ммоль). Реакционную смесь в течение ночи выдерживали при 120°C. Смесь затем охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 0-15% МеОН в дихлорметане) с получением трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(1-метил-1Н-пиразол-3-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,127 г, 0,268 ммоль, 76,8%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=474.

Этап 3

(1-Метил-1Н-пиразол-3-ил)-амид 2-(3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(1-метил-1Н-пиразол-3-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,085 г, 0,176 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (3 мл) 2 часа перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, к остатку добавили дихлорметан и насыщенный раствор карбоната натрия. Водный слой промыли дихлорметаном (3х). Органический слой промыли соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄ и сконцентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очистили хроматографией (диоксид кремния 4 г, 0-15% МеОН в дихлорметане) с получением (1-метил-1Н-пиразол-3-ил)-амида 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,037 г, 0,099 ммоль, 36,9%) в виде желтого твердого вещества.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 12,01 (br. s., 1Н), 9,16 (s, 1Н), 8,97 (s, 1Н), 7,66 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 7,39 (br. s., 1Н), 6,62 (d, J=2,3 Гц, 1H), 4,10-4,22 (m, 1Н), 3,72-3,92 (m, 7Н), 3,08 (br. s„ 1H), 1,73-1,96 (m, 4H); LCMS m/z [M+H]=374.

Пример 20

Тиазоло[4,5-b]пиридин-2-иламид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

N-Тиазоло[4,5-с]пиридин-2-ил-бензамид

К раствору аммония тиоцианата (1,18 г, 15,6 ммоль) в ацетоне (10 мл) в течение 10 минут добавили бензоил хлорид (1,81 мл, 15,6 ммоль). Реакционную смесь 30 минут выдерживали при 60ºС, после чего в течение 10 минут добавили 4-хлорпиридин-3-амин (2,0 г, 15,6 ммоль) в ацетоне (10 мл). Реакционную смесь 2 часа перемешивали при 60°C. В смесь вылили холодную воду (100 мл). Твердый осадок профильтровали, промыли водой и высушили в высоком вакууме с получением N-тиазоло[4,5-с]пиридин-2-ил-бензамида (2,21 г, 8,66 ммоль, 55,6%) в виде светло-коричневого твердого вещества. Это вещество сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=256.

Этап 2

Тиазоло[4,5-с]пиридин-2-иламин

Раствор N-тиазоло[4,5-с]пиридин-2-ил-бензамида (2,21 г, 8,66 ммоль) в серной кислоте (12 мл) 4 часа перемешивали в атмосфере азота при 110°C. Смесь затем охладили до 0°C, добавили NaOH (50%), выпавший осадок профильтровали, промыли водой, высушили в течение ночи в условиях высокого вакуума с получением тиазоло[4,5-с]пиридин-2-иламина (1,78 г, 136%) в виде белого твердого вещества. Это вещество сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=152.

Этап 3

2-Хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорид

Раствор 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,100 г, 0,466 ммоль) в тионил хлориде (3 мл) 4 часа кипятили с обратным холодильником. Избыток растворителя удалили, после чего систему 2 часа сушили в условиях высокого вакуума с получением 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,109 г, 0,466 ммоль, 100%) в виде желтого твердого вещества которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=234

Этап 4

Тиазол[4,5]b]пиримидин-2-иламид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбонил хлорида (0,109 г, 0,466 ммоль) в дихлорметане (4 мл) добавили тиазоло[4,5-с]пиридин-2-иламин (0,106 г, 0,699 ммоль) и пиридин (0,113 мл, 1,4 ммоль). Реакционную смесь одну ночь перемешивали при комнатной температуре. Затем смесь разбавили EtOAc, промыли насыщенным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над сульфатом натрия, профильтровали, сконцентрировали и высушили в условиях высокого вакуума с получением тиазол[4,5]b]пиримидин-2-иламида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,162 г, 0,466 ммоль), которую сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=348

Этап 5

Трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(тиазоло[4,5-b]пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К раствору 2-хлор-N-(тиазоло[4,5-b]пиридин-2-ил)тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоксамида (0,162 г, 0,466 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,151 г, 0,699 ммоль) в диоксане (4 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,244 мл, 1,4 ммоль). Реакционную смесь в течение ночи выдерживали при 120°C. Смесь затем охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 0-15% МеОН в дихлорметане) с получением трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(тиазоло[4,5-b]пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,118 г, 0,224 ммоль, 48%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=528.

Этап 6

Тиазоло[4,5-b]пиридин-2-иламид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(тиазоло[4,5-b]пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,118 г, 0,224 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (4 мл) в течение часа перемешивали при комнатной температуре. Смесь сконцентрировали в вакууме, и к остатку добавили дихлорметан и насыщенный раствор карбоната натрия. Водный слой промыли дихлорметаном (3х). Органический слой промыли соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄, и сконцентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очистили препаративной ВЭЖХ (10-90% ацетонитрила в воде) с получением тиазоло[4,5-b]пиридин-2-иламида 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,008 г, 0,019 ммоль, 8%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=428.

Пример 21

(1-Метил-1Н-пиразол-4-ил)-амид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

(1-Метил-1Н-пиразол-4-ил)-амид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,100 г, 0,466 ммоль) в ДМФ (4 мл) при перемешивании добавили 1-метил-1Н-пиразол-4-амин (0,068 г, 0,699 ммоль), DIPEA (0,325 мл, 1,86 ммоль), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (0,095 г, 0,699 ммоль) и HATU (0,266 г, 0,699 ммоль). Реакционную смесь 2 часа перемешивали при комнатной температуре, после чего разбавили дихлорметаном и водой. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Остаток высушили в течение ночи в условиях высокого вакуума с получением (1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,157 г, 115%) в виде коричневого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=294.

Этап 2

Трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(1-метил-1Н-пиразол-4-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К раствору (1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,137 г, 0,349 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,111 г, 0,513 ммоль) в диоксане (4 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,244 мл, 1,4 ммоль). Реакционную смесь в течение ночи выдерживали при 120°C. Смесь затем охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 0-15% МеОН в дихлорметане) с получением трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(1-метил-1Н-пиразол-4-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,116 г, 0,244 ммоль, 52,6%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=474

Этап 3

(1-Метил-1Н-пиразол-4-ил)-амид 2-(3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(1-метил-1Н-пиразол-4-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,116 г, 0,245 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (3 мл) один час перемешивали при комнатной температуре. Реакционную смесь сконцентрировали в вакууме. К остатку добавили дихлорметан и насыщенный раствор карбоната натрия. Водный слой промыли дихлорметаном (3х). Органический слой промыли соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄ и сконцентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очистили хроматографией (диоксид кремния 4 г, 0-15% МеОН в дихлорметане) с получением (1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-амида 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,034 г, 0,091 ммоль, 37,2%) в виде желтого твердого вещества.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,20 (br. s., 1Н), 9,12-9,20 (m, 1Н), 8,93 (s, 1Н), 8,09 (br. s., 1Н), 7,37 (d, J=7,3 Гц, 1H), 4,15 (br. s., 1H), 3,86 (s, 3Н), 3,41-3,75 (m, 4H), 3,07 (d, J=2,3 Гц, 1H), 1,83-2,11 (m, 3Н). LCMS m/z [M+H]=374.

Пример 22

Пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-иламид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

Пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-иламид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,100 г, 0,466 ммоль) в ДМФ (4 мл) при перемешивании добавили пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-амин (0,094 г, 0,699 ммоль), DIPEA (0,325 мл, 1,86 ммоль), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (0,095 г, 0,699 ммоль) и HATU (0,266 г, 0,699 ммоль). Реакционную смесь 2 часа перемешивали при комнатной температуре. Затем смесь разбавили дихлорметаном и водой. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Остаток высушили в течение ночи в условиях высокого вакуума с получением пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-иламида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,159 г, 103%) в виде желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=331.

Этап 2

Трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(пиразоло[1,5-а]пиридин-3-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К раствору пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-иламида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,154 г, 0,466 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,111 г, 0,513 ммоль) в диоксане (4 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,244 мл, 1,4 ммоль). Реакционную смесь в течение ночи выдерживали при 120°C. Смесь затем охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 0-15% МеОН в дихлорметане) с получением трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(пиразоло[1,5-а]пиридин-3-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,137 г, 0,268 ммоль, 57%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=511.

Этап 3

Пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-иламид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(пиразоло[1,5-а]пиридин-3-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,137 г, 0,268 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (4 мл) один час перемешивали при комнатной температуре. Реакционную смесь сконцентрировали в вакууме, к остатку добавили дихлорметан и насыщенный раствор карбоната натрия. Водный слой промыли дихлорметаном (3х). Органические слои объединили, промыли соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄ и сконцентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очистили хроматографией (диоксид кремния 4 г, 0-15% МеОН в дихлорметане) с получением пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-иламида 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,055 г, 134 ммоль, 50%) в виде желтого твердого вещества.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,57 (br. s., 1Н), 9,16 (s, 1Н), 9,12 (dd, J=7,2, 1,4 Гц, 1Н), 9,01 (s, 1Н), 8,82 (br. s., 1Н), 8,58 (dd, J=3,9, 1,4 Гц, 1Н), 7,33 (br. s., 1Н), 7,10 (dd, J=7,0, 4,0 Гц, 1H), 3,48-3,78 (m, 4Н), 3,06 (br. s., 1H), 1,91 (d, J=8,3 Гц, 2H). LCMS m/z [М+Н]=411.

Пример 23

Имидазол[1,2-b]пиридазине-3-иламид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

Имидазол[1,2-b]пиридазин-3-иламид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,100 г, 0,466 ммоль) в ДМФ (4 мл) при перемешивании добавили имидазол[1,2-b]пиридазин-3-амин (0,094 г, 0,699 ммоль), DIPEA (0,325 мл, 1,86 ммоль), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (0,095 г, 0,699 ммоль) и HATU (0,266 г, 0,699 ммоль). Реакционную смесь 2 часа перемешивали при комнатной температуре. Затем смесь разбавили дихлорметаном и водой. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Остаток высушили в течение ночи в условиях высокого вакуума с получением имидазол[1,2-b]пиридазин-3-иламида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,171 г, 111%) в виде желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=331.

Этап 2

Трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(имидазол[1,2-b]пиридазин-3-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К раствору имидазол[1,2-b]пиридазин-3-иламида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,154 г, 0,466 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,121 г, 0,559 ммоль) в диоксане (4 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,244 мл, 1,4 ммоль). Реакционную смесь в течение ночи выдерживали при 120°C. Смесь затем охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 0-15% МеОН в дихлорметане) с получением трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(имидазол[1,2-b]пиридазин-3-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,163 г, 0,319 ммоль, 68.5%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=511.

Этап 3

Имидазол[1,2-b]пиридазине-3-иламид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(имидазол[1,2-b]пиридазин-3-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,163 г, 0,319 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (4 мл) один час перемешивали при комнатной температуре. Реакционную смесь сконцентрировали в вакууме, к остатку добавили дихлорметан и насыщенный раствор карбоната натрия. Водный слой промыли дихлорметаном (3х). Органический слой промыли соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄ и сконцентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очистили хроматографией (диоксид кремния 4 г, 0-15% МеОН в дихлорметане) с получением имидазол[1,2-b]пиридазине-3-иламида 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,030 г, 0,073 ммоль, 22,9%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=411. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 9,20 (s, 1Н), 9,09 (s, 1Н), 8,69 (d, J=3,5 Гц, 1Н), 8,19 (d, J=9,3 Гц, 1Н), 8,11 (br. s., 1Н), 7,26 (dd, J=9,2, 4,4 Гц, 1Н), 4,59 (br. s., 1Н), 3,57-3,77 (m, 4Н), 3,06 (br. s., 1H), 1,80 (d, J=4,3 Гц, 3Н).

Пример 24

(4,6-Диметил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

(4,6-Диметил-пиридин-2-ил)-амид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,100 г, 0,466 ммоль) в ДМФ (4 мл) при перемешивании добавили 4,6-диметилпиридин-2-амин (0,085 г, 0,699 ммоль), DIPEA (0,325 мл, 1,86 ммоль), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (0,095 г, 0,699 ммоль) и HATU (0,266 г, 0,699 ммоль). Реакционную смесь 2 часа перемешивали при комнатной температуре. Затем смесь разбавили дихлорметаном и водой. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Остаток высушили в течение ночи в условиях высокого вакуума с получением (4,6-диметил-пиридин-2-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,222 г, 149%) в виде желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=319.

Этап 2

Трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(4,6-диметил-пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К раствору (4,6-диметил-пиридин-2-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,149 г, 0,466 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,121 г, 0,559 ммоль) в диоксане (4 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,244 мл, 1,4 ммоль). Реакционную смесь в течение ночи выдерживали при 120°C. Смесь затем охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 0-15% EtOAc в гексане) с получением трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(4,6-диметил-пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,104 г, 0,209 ммоль, 44.8%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=499.

Этап 3

(4,6-Диметил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(4,6-диметил-пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,102 г, 0,205 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (4 мл) один час перемешивали при комнатной температуре. Реакционную смесь сконцентрировали в вакууме, к остатку добавили дихлорметан и насыщенный раствор карбоната натрия. Водный слой промыли дихлорметаном (3х). Органический слой промыли соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄ и сконцентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очистили хроматографией (диоксид кремния 4 г, 0-15% МеОН в дихлорметане) с получением (4,6-диметил-пиридин-2-ил)-амида 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,045 г, 0,113 ммоль, 55,2%) в виде желтого твердого вещества.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,76 (br. s., 1Н), 9,15 (s, 1Н), 9,02 (s, 1Н), 8,00 (s, 1Н), 7,38 (br. s., 1Н), 6,89 (s, 1Н), 4,34 (br. s., 1H), 3,58-3,85 (m, 4H), 3,04 (br. s., 1H), 2,45 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 1,69-1,93 (m, 4H). LCMS m/z [M+H]=399.

Пример 25

(5,6-Диметил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Этап 1

(5,6-Диметил-пиридин-2-ил)-амид 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

К раствору 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,100 г, 0,466 ммоль) в ДМФ (4 мл) при перемешивании добавили 5,6-диметилпиридин-2-амин (0,085 г, 0,699 ммоль), DIPEA (0,325 мл, 1,86 ммоль), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (0,095 г, 0,699 ммоль) и HATU (0,266 г, 0,699 ммоль). Реакционную смесь 2 часа перемешивали при комнатной температуре. Затем смесь разбавили дихлорметаном и водой. Органический слой промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Остаток высушили в течение ночи в условиях высокого вакуума с получением (5,6-диметил-пиридин-2-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты в виде желтого твердого вещества, которое сразу использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. LCMS m/z [М+Н]=319.

Этап 2

Трет-бутиловый эфир {(3R,4R)-4-[7-(5,6-диметил-пиридин-2~илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты

К раствору (5,6-диметил-пиридин-2-ил)-амида 2-хлортиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,149 г, 0,466 ммоль) и трет-бутил-(3R,4R)-4-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (0,121 г, 0,559 ммоль) в диоксане (4 мл) добавили диизопропилэтиламин (0,244 мл, 1,4 ммоль). Реакционную смесь в течение ночи выдерживали при 120°C. Смесь затем охладили, разбавили дихлорметаном, промыли водным раствором карбоната натрия, соляным раствором, высушили над безводным сульфатом натрия, профильтровали и сконцентрировали в вакууме. Полученный остаток затем очистили хроматографией (диоксид кремния 40 г, 0-15% EtOAc в гексане) с получением трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(5,6-диметил-пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,105 г, 0,210 ммоль, 45%) в виде желтого твердого вещества. LCMS m/z [М+Н]=499.

Этап 3

(5,6-Диметил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты

Раствор трет-бутилового эфира {(3R,4R)-4-[7-(5,6-диметил-пиридин-2-илкарбамоил)-тиено[3,2-d]пиримидин-2-иламино]-тетрагидро-пиран-3-ил}-карбаминовой кислоты (0,102 г, 205 ммоль) в 20% TFA в дихлорметане (4 мл) один час перемешивали при комнатной температуре. Реакционную смесь сконцентрировали в вакууме, к остатку добавили дихлорметан и насыщенный раствор карбоната натрия. Водный слой промыли дихлорметаном (3х). Объединенные органические фазы промыли соляным раствором, высушили над безводным Na₂SO₄ и сконцентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очистили хроматографией (диоксид кремния 4 г, 0-10% МеОН в дихлорметане) с получением (5,6-диметил-пиридин-2-ил)-амида 2-((3R,4R))-3-амино-тетрагидро-пиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты (0,041 г, 0,103 ммоль, 50,3%) в виде желтого твердого вещества.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ: 11,73 (br. s., 1Н), 9,15 (s, 1Н), 9,02 (s, 1Н), 8,05 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7,59 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7,38 (br. s., 1Н), 4,35 (br. s., 1H), 3,54-3,87 (m, 4H), 3,06 (br. s., 1H), 2,44 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,71-1,93 (m, 2H). LCMS m/z [M+H]=399.

Биологические примеры

Информация по анализу активности SYK

Определение IC₅₀ ингибирования тирозин киназы селезенки (SYK):

Определение активности киназы SYK представляет собой стандартный киназный анализ, адаптированный для 96-луночного формата планшета. Для определения IC₅₀ анализ выполняется в 96-луночном формате, при этом берут 8 образцов, которые представляют 10 полулогарифмических разведений, объем реакции составляет 40 мкл. В процессе анализа измеряют включение меченого ³³Р gATP в биотинилированный по N-окончанию пептидный субстрат, полученный из природной фосфоакцепторной консенсунсной последовательности (Biotin-11аа DY*E). Детекцию фосфорилированных продуктов определяют после остановки реакции под действием ЭДТА и добавления покрытых стрептавидином шариков. Репрезентативные результаты приведены выше в таблице II.

Планшет для анализа: 96-луночные планшеты для фильтрования Multiscreen ("Миллипор" (Millipore), каталожный № MADVNOB10).

Покрытые стрептавидином шарики: Streptavidin Sepharose™, суспензия 5,0 мл, в 50 мМ ЭДТА/фосфатный буфер (разведение 1:100), ("Амершам" (Amersham), каталожный №17-5113-01).

Соединения: 10 мМ в 100% диметилсульфоксиде (ДМСО), финальная концентрация: соединения 0,003 - 100 мкМ в 10% ДМСО.

Фермент: рекомбинантный человеческий SYK-протеин полной длины ("Инвитроген" (каталожный № PV4089), дефосфорилированный протеиновой тирозин фосфатазой РТР1В, концентрация рабочего раствора 8,89 нМ, финальная концентрация 0,004 мкМ.

Пептид 1: биотинилированный пептид получают из природного фосфор-акцепторной консенсунсной последовательности (Biotin-EPEGDYEEVLE), специальный заказ из QCB, маточный раствор 20 мМ, финальная концентрация 10 мкМ.

АТФ: аденозин-5'-трифосфат 20 мМ ("Рош" (ROCHE), каталожный №93202720), финальная концентрация 20 мкМ.

Буфер: HEPES: 2-Гидроксиэтил пиперазин-2-этансульфоновая кислота ("Сигма" (Sigma), каталожный № Н-3375), финальная концентрация 50 мМ HEPES pH 7,5. БСА (бычий сывороточный альбумин, BSA: Bovine Serum Albumin) фракция V, без жирных кислот ("Рош Диагностике ГмбХ" (Roche diagnostics GmbH), каталожный №9100221), разбавленный до финальной концентрации 0,1%.

ЭДТА: маточный раствор ЭДТА 500 мМ ("ГИБКО" (GIBCO), каталожный №15575-038), финальная концентрация 0,1 мМ.

ДТТ: 1,4-дитиотрейтол ("Рош Диагностике ГмбХ" (Roche diagnostics GmbH), каталожный №197777), финальная концентрация 1 мМ).

MgCl₂×6H₂O: ("Мерк" (MERCK), каталожный №105833.1000, финальная концентрация 10 мМ.

Буфер для разбавления при анализе (Assay dilution Buffer (ADB)): 50 мМ HEPES, 0,1 мМ EGTA, 0,1 мМ ванадата Na, 0,1 мМ β-глицерофосфата, 10 мМ MgCl₂, 1 мМ DTT, 0,1% BSA, рН 7,5.

Буфер для отмывки шариков: 10 г/л PBS (Phosphate buffered saline, физиологический раствор на фосфатном буфере), 2 М NaCl + 1% фосфорной кислоты.

Экспериментальный метод:

18 мкл рекомбинантной человеческой SYK полной длины [8,89 nM] смешали с 2 мкл 10Х концентраций исследуемых соединений (общий объем 20 мкл). Обычно, это диапазон концентраций от 100 мкМ до 0,003 мкМ в 10% ДМСО. Смесь инкубировали 15 минут при комнатной температуре.

Киназную реакцию инициировали добавлением 20 мкл 2х субстратного коктейля, содержащего биотин-пептидный субстрат (20 мкМ), АТФ (40 мкМ) и ³³РγАТФ [2μCi/rxn]. По завершении 30-минутной инкубации при комнатной температуре реакцию остановили переносом 25 мкл образца в 96-луночный 0,65 мкм мембранный планшет Millipore MADVNOB, содержащую 100 мкл 5 мМ ЭДТА и 10% покрытых стрептовидином шариков в PBS.

Несвязавшиеся радионуклиды отмыли под вакуумом 3×250 мкл 2М NaCl; 2×250 мкл 2М NaCl + 1% фосфорной кислоты и 1×250 мкл H₂O. После последней промывки мембранный планшет перенесли в адапторный планшет, высушили тепловой сушкой в течение 1 часа минуты при 60°C, в каждую лунку добавили по 60 мкл сцинтилляционного коктейля, и радиоактивность была измерена счетчиком радиоактивности (top counter).

Процент ингибирования рассчитали на основании доли незаингибированного фермента.

% ингибирования = (1-((Тест - Положительный контроль)/(отрицательный контроль - положительный контроль)))*100.

IC₅₀ рассчитали по методу нелинейного построения кривой с использованием программного обеспечения XLfit ("Ай Ди Бизнес Сольюшнс Лтд" (ID Business Solution Ltd.), Гилфорд, Суррей, Великобритания).

Анализ усиления активности клеток CD69 в цельной человеческой крови

Человеческую кровь собирали у здоровых добровольцев в вакутейнеры (вакуумные контейнеры) ("БД Биосайенс" (BD Biosciences), Сан-Хосе, Калифорния), содержащие гепарин натрия. Исследуемые соединения суспендировали в ДМСО, после чего сделали девять полу-логарифмических последовательных разведений. Концентрация ДМСО в среде составляла 0,5%. 100 мл цельной крови предварительно инкубировали с соединениями в течение 30 минут, после чего 20 часов стимулировали анти-человеческим IgM козы (50 мкг/мл, "Соусерн Биотек" (Southern Biotech)). По завершении 20-часов инкубации образцы 30 минут инкубировали с флюорохром-конъюгированными антителами, РЕ мышиными анти-человеческими CD20 и АРС мышиными анти-человеческими CD69 ("БД Биосайенс"). Образцы лизировали лизирующим раствором (БД) и промыли PBS, содержащим 2% фетальной бычьей сыворотки (fetal bovine serum (FBS)). Флуоресценцию регистрировали на проточном цитометре LSR II (БД), а данные анализировали с помощью системы Flow Jo. Процент активированных (CD69hi) лимфоцитов В-клеток (CD20+) определили с использованием данных от нестимулированных (отрицательный контроль) и стимулированных (положительный контроль) лунок в качестве сравнения. Расчет процента ингибирования и построение кривой IC50 производили с использованием Xfit в Microsoft Excel с приближением сигмоидной кривой. Репрезентативные данные представлены в следующей таблице.

Представленное выше изобретение было с определенной степенью детализации описано с помощью иллюстраций и примеров. Это сделано для достижения ясности и понимания. Специалисту в уровне техники очевидно, что в объеме прилагаемой далее формулы изобретения можно практиковать изменения и модификации. Таким образом, следует понимать, что приведенное выше описание является иллюстративным, а не ограничивающим. Таким образом, объем изобретения следует определять по ссылке не на приведенное выше описание, а на следующую далее формулу изобретения, совместно с полным объемом эквивалентов для этой формулы.

Все процитированные в настоящей заявке патенты, патентные заявки и публикации, таким образом, включены путем ссылки во всей своей полноте для всех целей, в той же степени, как если бы каждый индивидуальный патент, патентная заявка или публикация были бы указаны индивидуально.

Изобретение относится к соединению формулы I:

где группа А независимо представляет собой моноциклический или бициклический арил или гетероарил, возможно замещенный одной или более А'; каждая группа А' независимо представляет собой C_1-6 алкил, галоген, циано или гетероарил; группа R¹ представляет собой тетрагидропиранил, замещенный аминогруппой; или его фармацевтически приемлемым солям, которые представляют собой ингибиторы SYK и используются при лечении аутоиммунных и воспалительных заболеваний. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 2 табл., 25 пр.

1. Соединение формулы I

где группа А независимо представляет собой моноциклический или бициклический арил или гетероарил, возможно замещенный одной или более А';

каждая группа А' независимо представляет собой C_1-6 алкил, галоген, циано или гетероарил;

группа R¹ представляет собой тетрагидропиранил, замещенный аминогруппой;

где гетероарил представляет собой пиридинил, пиримидинил, пиразинил, оксазинил, пирролил, пиразолил, имидазолил, оксазолил, 4,5-дигидро-оксазолил, 5,6-дигидро-4Н-[1,3]оксазолил, изоксазол, тиазол, изотиазол, триазолин, тиадиазол, оксадиаксолин, хинолинил, изохинолинил, бензофурил, бензотиофенил, бензоксазол, бензизоксазол, бензотиазол, нафтиридинил, 5,6,7,8-тетрагидро-[1,6]нафтиридинил или бензизотиазол;

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п. 1, где А представляет собой пиридил, возможно замещенный одной или более А'.

3. Соединение по п. 1, где А представляет собой бициклический гетероарил, возможно замещенный одной или более А'.

4. Соединение по п. 1, где А представляет собой гетероарил, возможно замещенный одной или более А'.

5. Соединение по п. 1, где А представляет собой бициклический гетероарил, возможно замещенный одной или более А'.

6. Соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих:

(6-[1,2,3]триазол-2-ил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(6-[1,2,3]триазол-1-ил-пиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

гидрохлорид (1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-амида 2-((3R,4R)-3-амино-тетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

нафталин-2-иламид 2-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(5-метилпиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

п-толиламид 2-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(1-метил-1Н-пиразол-3-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

тиазоло[4,5-b]пиридин-2-иламид 2-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-иламид 2-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

имидазо[1,2-b]пиридазин-3-иламид 2-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты;

(4,6-диметилпиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты; и

(5,6-диметилпиридин-2-ил)-амид 2-((3R,4R)-3-аминотетрагидропиран-4-иламино)-тиено[3,2-d]пиримидин-7-карбоновой кислоты.

7. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью ингибитора тирозинкиназы селезенки (SYK), содержащая соединение по любому из пп. 1-6 в эффективном количестве, смешанное по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, эксципиентом или разбавителем.

8. Фармацевтическая композиция по п. 7, также содержащая дополнительный терапевтический агент, выбранный из числа химиотерапевтических или антипролиферативных агентов, противовоспалительных агентов, иммуномодуляторов или иммуносупрессоров, нейротропного фактора, агентов для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, агентов для лечения диабета или агентов для лечения расстройств, связанных с иммунодефицитом.

9. Соединение по любому из пп. 1-6 для применения в лечении иммунных расстройств, включая волчанку, множественный склероз, ревматоидный артрит, псориаз, диабет I типа, осложнения после трансплантации органов, ксенотрансплантацию, диабет, рак, астму, атопический дерматит, аутоиммунные расстройства щитовидной железы, язвенный колит, болезнь Крона, болезнь Альцгеймера и лейкемию.

10. Применение соединения по любому из пп. 1-6 для изготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения иммунных расстройств, включая волчанку, множественный склероз, ревматоидный артрит, псориаз, диабет I типа, осложнения после трансплантации органов, ксенотрансплантацию, диабет, рак, астму, атопический дерматит, аутоиммунные расстройства щитовидной железы, язвенный колит, болезнь Крона, болезнь Альцгеймера и лейкемию.