НОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ТРИАЗОЛОПИРАЗИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2018 года по МПК C07D487/04 A61K31/4985 A61K31/5377 A61P35/00 

Область техники

Данное изобретение относится к новым производным триазолопиразина, имеющим ингибирующую активность в отношении тирозинкиназ, и к фармацевтической композиции, содержащей их в качестве активного ингредиента, для профилактики и лечения различных гиперпролиферативных нарушений.

Уровень техники

Протеинкиназы (protein kinase, РК) представляют собой ферменты, которые катализируют фосфорилирование гидроксигрупп на остатках белков тирозине, серине и треонине. Протеинкиназы играют ключевую роль в сигналинге факторов роста, индуцирующих рост, дифференцировку и пролиферацию клеток, и, таким образом, активность протеинкиназ влияет почти на все аспекты клеточной жизни.

Аномальные пути клеточного сигналинга из-за мутаций или сверхэкспрессии протеинкиназ тесно связаны с заболеваниями стромы, включая как заболевания, которые сравнительно не опасны для жизни, такие как псориаз, так и токсичные (патогенные) заболевания, такие как рак.

Протеинкиназы могут быть классифицированы на тирозинкиназы (tyrosine kinase, ТК) и серин-треонин-киназы (serine-threonine kinase, STK).

Одним из главных аспектов тирозинкиназ является их вовлеченность в рецепторы факторов роста. Рецепторы факторов роста представляют собой белки клеточной поверхности. При связывании с лигандами факторами роста рецепторы факторов роста переходят в активные формы, которые взаимодействуют с белками на внутренней поверхности клеточных мембран. Это приводит к фосфорилированию тирозиновых остатков рецептора и других белков и к образованию комплексов с различными цитоплазматическими сигнальными молекулами внутри клетки, что, в свою очередь, приводит к многочисленным клеточным ответам, таким как рост, дифференцировка и пролиферация клеток, а также к метаболическим влияниям на внеклеточное микроокружение и т.д. (Schleessinger and Ullrich, Neuron. 9: 303-391 (1992)).

Рецепторы факторов роста с тирозинкиназной активностью известны как рецепторные тирозинкиназы (receptor tyrosine kinase, RTK). Рецепторные тирозинкиназы включают большое семейство трансмембранных рецепторов, демонстрирующих различные виды биологической активности.

В настоящее время было идентифицировано по меньшей мере 19 подсемейств рецепторных тирозинкиназ, подсемейство, названное "HER RTK", включает рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), HER2, HER3, HER4 и т.п. Эти рецепторные тирозинкиназы состоят из внеклеточного гликозилированного лиганд-связывающего домена, трансмембранного домена и внутриклеточного цитоплазматического домена, который может фосфорилировать тирозиновые остатки в белках.

Другое подсемейство рецепторных тирозинкиназ состоит из рецептора инсулина (insulin receptor, IR), рецептора инсулиноподобного фактора роста I (insulin-like growth factor I receptor, IGF-1R) и рецептора, родственного рецептору инсулина (insulin receptor related receptor, IRR). IR и IGF-1R взаимодействуют с инсулином, IGF-I и IGF-II, образуя гетеротетрамер из двух полностью внеклеточных гликозилированных субъединиц α и двух субъединиц β, которые проходят через клеточную мембрану и содержат тирозинкиназный домен.

Еще одно подсемейство рецепторных тирозинкиназ относится к группе рецепторов тромбоцитарного фактора роста (platelet derived growth factor receptor, PDGFR), которая включает PDGFRα, PDGFRβ, CSFIR, c-Kit и c-Fms. Эти рецепторы состоят из гликозилированных внеклеточных доменов, содержащих переменное число иммуноглобулинподобных петель и внутриклеточный домен. Известно подсемейство рецепторов фетальной печеночной киназы (fetus liver kinase, Flk), которое входит в группу PDGFR из-за его сходства с подсемейством PDGFR. Подсемейство Flk состоит из рецептора домена киназной вставки фетальной печеночной киназы-1 (kinase insert domain-receptor fetal liver kinase-1, KDR/FLK-1), Flk-1R, Flk-4 и Fms-подобной тирозинкиназы 1 или 3 (flt-1).

MET, который является типом семейства тирозинкиназных рецепторов факторов роста, называется c-Met и, по-видимому, играет определенную роль в росте первичного рака и метастазировании в качестве рецепторной тирозинкиназы человеческого фактора роста гепатоцитов (human hepatocyte growth factor receptor, hHGFR) (Plowman et al., DN&P, 7 (6):334-339(1994)).

Помимо рецепторных тирозинкиназ (RTK) существует также особое семейство полностью внутриклеточных ТК под названием "нерецепторные тирозинкиназы" или "клеточные тирозинкиназы (cellular tyrosine kinase, СТК)". Нерецепторные тирозинкиназы не содержат внеклеточных и трансмембранных доменов и состоят из подсемейств Src, Frk, Btk, Csk Abl, Zap70, Fes, Fak, Jak и Ack. Из них подсемейство Src включает Src, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr, AUR1 (Aurora-B), AUR2 (Aurora-A), AUR3 (Aurora-C), Yrk и т.п. (Bolen, Oncogene. 8: 2025-2031 (1993)).

Патогенные заболевания, связанные с рецепторными тирозинкиназами и нерецепторными тирозинкиназами, включают псориаз, цирроз печени, диабет, ангиогенез, рестеноз, глазные заболевания, ревматоидный артрит, аутоиммунные заболевания, атеросклероз, проблемы с почками и т.п.

Из РК, описанных выше, такие рецепторные тирозинкиназы, как Brc-AbI, EGFR и VEGFR, были в значительной степени изучены в качестве благоприятных мишеней противораковых лекарственных средств, и противораковые препараты, такие как Gleevec или Iressa, были разработаны и выпущены на рынок.

Кроме того, были разработаны многие противораковые лекарственные средства, нацеленные на c-Met (рецептор фактора роста гепатоцитов, HGFR), который является рецептором фактора роста гепатоцитов/фактора рассеяния (HGF/SF) в RTK, изученным в качестве мишеней противоракового препарата (J.G. Christensen, J. Burrows et al., Cancer Letters, 2005, 225, 1-26; WO 2004/076412; WO 2006/021881 A; WO 2006/021886; WO 2007/064797).

c-Met сверхэкспрессируется или активируется при многих раковых заболеваниях человека, таких как рак легких, рак желудка, рак кожи, рак почек, рак толстой кишки и рак поджелудочной железы, участвует в прогрессии и метастазировании опухолей при образовании опухолей и увеличивает клеток и инвазивность подвижность (J.G. Christensen et al., Cancer Letters, 225: 1-26 (2005); W. G. Jiang et al., Critical Reviews in Oncology/Hematology, 53: 35-69 (2005)). c-Met и его лиганд HGF экспрессируются во многих тканях, но в обычных случаях их экспрессия ограничена в основном эпителиальными и мезенхимальными клетками-предшественниками. c-Met и HGF/SF необходимы для нормального роста млекопитающих, и было установлено, что они важны для клеточного метастазирования, пролиферации и выживания клеток, морфогенетической дифференциации и организации трехмерных трубчатых структур (клетки почечных канальцев и образование линий). HGF/SF является фактором ангиогенеза, и сигналинг c-Met в эндотелиальных клетках индуцирует клеточные ответы, необходимые для ангиогенеза (пролиферации, подвижности и инвазии).

Было установлено, что c-Met и его лиганд HGF коэкспрессируются с повышенными уровнями в различных раковых опухолях человека. Тем не менее, так как рецепторы и лиганды обычно экспрессирутся в зависимости от различных типов клеток, сигналинг c-Met в большинстве случаев, как правило, регулируется взаимодействием "опухоль-строма".

Кроме того, в различных злокачественных опухолях человека наблюдалась амплификация гена, мутации и перегруппировка c-Met. Семьи с зародышевыми мутациями, которые активируют c-Met киназу, склонны к множественным опухолям почек, а также опухолям в других тканях.

Было установлено, что экспрессия c-Met и/или HGF/SF коррелирует с состоянием прогрессирования заболевания при различных типах рака (рака легких, толстой кишки, молочной железы, предстательной железы, печени, поджелудочной железы, головного мозга, почек, яичников, желудка, кожи и кости), а сверхэкспрессия c-Met и/или HGF/SF коррелирует с плохими прогнозами и исходами заболевания при многих основных раковых заболеваниях человека, включая рак легких, печени, желудка и молочной железы. Сообщалось, что c-Met непосредственно участвует в развитии раковых заболеваниях, для которых не существует успешного режима лечения, таких как рак поджелудочной железы, глиома и гепатоцеллюлярный рак, и также сообщалось, что рак легких, вызванный активацией сигнального пути ERBB3, имеет резистентность к гефитинибу (название продукта: Iressa) за счет сверхэкспрессии c-Met (J.A. Engelman, К. Zejnullahu et. al. Science, 316: 1039-1043 (2007)).

HGF/SF связывается с внеклеточным доменом c-Met, активируя его, и активация c-Met индуцирует фосфорилирование тирозина и последующий сигналинг через активацию Р13-киназы и Ras/MAPK, опосредованный GaM и Grb2, соответственно, индуцируя таким образом подвижность и пролиферацию клеток.

Было установлено, что c-Met взаимодействует с другими белками, индуцирующими активацию рецептора, трансформацию и инвазию, и сообщалось, что c-Met взаимодействует с интегрином α6β4 (рецептор к внеклеточному матриксу (extracellular matrix, ЕСМ), такому как ламинин), усиливая HGF/SF-зависимый инвазивный рост.

Таким образом, авторы данного изобретения во время проведения исследований по разработке ингибиторов протеинкиназ экспериментально наблюдали, что морфолино-пиримидиновые соединения с определенными структурами имеют превосходный эффект в ингибировании протеинкиназ, таких как c-Met, Ron, KDR, Lck, Flt1, Flt3, Tie2, TrkA, TrkB, b-Raf и Aurora-A, и, таким образом, могут быть использованы для профилактики и лечения гиперпролиферативных нарушений.

На протяжении всего описания представлены многие статьи и патентные документы, которые цитируются и на которые имеются ссылки. Раскрытие процитированных статей и патентных документов полностью включены посредством ссылки в данное описание, а уровень технической области, в пределы которой попадает данное изобретение, и детали данного изобретения поясняются более четко.

Подробное описание изобретения

Техническая проблема

Авторы данного изобретения попытались разработать композицию для эффективной профилактики или лечения различных гиперпролиферативных нарушений, вызванных активностью аномальной тирозинкиназы, путем поиска соединений, обладающих ингибирующей активностью в отношении тирозинкиназ. В результате авторы данного изобретения обнаружили, что новые производные триазолопиразина с химической формулой 1, приведенной ниже, которые не были известны до сих пор, связываются с фактором роста гепатоцитов (HGF), активируя фосфорилирование, таким образом, значительно ингибируя c-Met-киназную активность, провоцирующую клетки к пролиферации, миграции, инвазии и ангиогенезу, и, таким образом, осуществили данное изобретение.

Таким образом, данное изобретение было сделано с учетом вышеуказанных проблем, и одним из аспектов данного изобретения является создание нового производного триазолопиразина или его фармацевтически приемлемой соли.

Другой аспект данного изобретения заключается в создании фармацевтической композиции, содержащей новое производное триазолопиразина или его фармацевтически приемлемую соль или сольват в качестве активного ингредиента, для ингибирования c-Met-тирозинкиназной активности.

Еще один аспект данного изобретения заключается в создании фармацевтической композиции, содержащей новое производное триазолопиразина или его фармацевтически приемлемую соль или сольват в качестве активного ингредиента, для профилактики или лечения гиперпролиферативных нарушений.

Другие цели и преимущества данного изобретения станут ясны из последующего подробного описания изобретения, формулы изобретения и графических материалов.

Техническое решение

В соответствии с одним аспектом данного изобретения предлагается производное триазолопиразина, представленное химической формулой 1:

Химическая формула 1

,

или его фармацевтически приемлемая соль, где:

среди R₁-R₃ каждый независимо представляет собой водород, галоген, 5-6-членный гетероциклоалкил, 5-6-членный гетероциклоалкенил, C₁-С₃-алкокси, замещенный 5-6-членным гетероциклоалкилом, C₁-С₅-алкил, замещенный 5-6-членным гетероциклоалкилом, С₁-С₃-алкокси, замещенный 5-6-членным гетероциклоалкилом, фенил, замещенный галогеном, ацетилпиперазином или пиперазинилкарбонилом, или 5-6-членный гетероарил, замещенный 5-6-членным гетероциклоалкилом, гидрокси-С₁-С₅-алкилом или C₁-C₅-алкилом; где по меньшей мере один из R₁-R₃ не является водородом;

среди R₄ и R₅ каждый независимо представляет собой водород, 5-6-членный гетероарил, незамещенный или замещенный C₁-C₅-алкилом, или фенил, замещенный циано, галогеном или С₁-С₅-алкилом; где по меньшей мере один из R₄ и R₅ не является водородом; и

X представляет собой кислород или углерод.

Авторы данного изобретения попытались разработать композицию для эффективной профилактики или лечения различных гиперпролиферативных нарушений, вызванных активностью аномальной тирозинкиназы, путем поиска соединений, обладающих ингибирующей активностью в отношении тирозинкиназы. В результате авторы данного изобретения обнаружили, что новые производные триазолопиразина с химической формулой 1, приведенной ниже, которые не были известны до сих пор, значительно ингибируют c-Met-киназную активность.

В соответствии с данным изобретением соединения химической формулы 1 данного изобретения связываются с фактором роста гепатоцитов (HGF), активируя фосфорилирование, таким образом, значительно ингибируя c-Met-киназную активность, провоцирующую клетки к пролиферации, миграции, инвазии и ангиогенезу. Таким образом, соединения согласно данному изобретению могут быть использованы для лечения или профилактики различных гиперпролиферативных нарушений, опосредованных гиперпролиферативной активацией клеток и избыточным ангиогенезом.

Используемый в данном описании термин "галоген" относится к галогеновым элементам, например, включает фтор, хлор, бром и йод.

Используемый в данном описании термин "гетероциклоалкил" относится к насыщенному углеродному кольцу, содержащему кислород, серу или азот в качестве гетероатома. Предпочтительно гетероатом представляет собой азот или кислород. Число гетероатомов составляет от 1 до 4, предпочтительно от 1 до 2. Термин "5-6-членный гетероциклоалкил" означает, что общее число атомов углерода и гетероатомов, образующих кольцо, составляет от 5 до 6.

Используемый в данном описании термин "алкокси" означает радикал, образованный удалением водорода из спирта, а число атомов углерода в заместителе не включается в тех случаях, когда C₁-С₃-алкокси является замещенным.

Используемый в данном описании термин "алкил" относится к насыщенной углеводородной группе с неразветвленной или разветвленной цепью и, например, включает метил, этил, пропил, изобутил, пентил, гексил и т.п. С₁-C₅-алкил означает алкильную группу, имеющую алкильный блок с 1-5 атомами углерода, и число атомов углерода в заместителе не включается в тех случаях, когда С₁-C₅-алкил является замещенным. В химической формуле 1 С₁-C₅-алкил предпочтительно представляет собой С₁-C₃-алкил, и более предпочтительно С₁-C₃-алкил.

Используемый в данном описании термин "гетероарил" относится к гетероциклической ароматической группе, содержащей кислород, серу или азот в качестве гетероатома. Предпочтительно гетероатом представляет собой азот или кислород, и более предпочтительно азот. Число гетероатомов составляет от 1 до 4, предпочтительно от 1 до 2. В гетероариле арил предпочтительно представляет собой моноарил или биарил.

В соответствии с предпочтительным воплощением данного изобретения в химической формуле 1 R₁-R₃ могут независимо друг от друга представлять собой водород; галоген; пиразол, замещенный метилом, гидроксиэтилом, пиперидином или N-метилпиперидином; тетрагидропиридин, незамещенный или замещенный метилом или гидроксиэтилом; фенил, замещенный галогеном, морфолинэтокси, пиперазинэтокси, пиперазинилметилом, морфолинометилом, ацетилпиперазином или пиперазинилкарбонилом; морфолиноэтокси; пиперазинилэтокси; или пиперидин, незамещенный или замещенный метилом или гидроксиэтилом, где два из R₁-R₃ представляют собой водород.

В соответствии с предпочтительным воплощением данного изобретения в химической формуле 1 каждый из R₄ и R₅ могут независимо представлять собой водород; N-метилпиразол; или фенил, замещенный циано или галогеном, где один из R₄ и R₅ обозначает водород.

В соответствии с предпочтительным воплощением данного изобретения триазолопиразин, представленный химической формулой 1, может быть выбран из группы, состоящей из соединений, представленных химическими формулами 2-50, приведенными ниже:

В соответствии с более предпочтительным воплощением данного изобретения производное триазолопиразина может быть выбрано из группы, состоящей из соединений, представленных химическими формулами 6-9, 11-13, 17, 23, 24, 26-32 и 38.

В соответствии с данным изобретением перечисленные 18 соединений имеют очень низкие значения IC₅₀ ингибирующей активности относительно c-Met-киназы и ингибируют пролиферацию раковых клеток с высокой эффективностью. Таким образом, эти соединения могут быть использованы в качестве очень эффективной терапевтической композиции при различных гиперпролиферативных нарушениях, включая раковые заболевания.

Производное триазолопиразина согласно данному изобретению может быть использовано в виде фармацевтически приемлемой соли, а также может быть использована соль присоединения кислоты, образованная с помощью фармацевтически приемлемой свободной кислоты. В качестве свободной кислоты может быть использована неорганическая кислота и органическая кислота.

Предпочтительно фармацевтически приемлемая соль производного триазолопиразина согласно данному изобретению может быть выбрана из группы, включающей гидрохлорид, бромат, сульфат, фосфат, цитрат, ацетат, трифторацетат, лактат, тартрат, малеат, фумарат, глюконат, метансульфонат, гликонат, сукцинат, 4-толуолсульфонат, глюкуронат, эмбонат, глутамат или аспартат, но не ограничиваясь ими, и, таким образом, включает все соли, образованные с помощью различных неорганических кислот и органических кислот, которые обычно используются в данной области.

Кроме того, производное триазолопиразина согласно данному изобретению может существовать в форме сольвата (например, гидрата).

В соответствии с другим аспектом данного изобретения для ингибирования с-Met-тирозинкиназной активности предлагается фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента описанное выше производное триазолопиразина согласно данному изобретению или его фармацевтически приемлемую соль или сольват.

В соответствии с еще одним аспектом данного изобретения для профилактики или лечения гиперпролиферативного нарушения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента описанное выше производное триазолопиразина согласно данному изобретению или его фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Так как новое производное триазолопиразина, используемое в данном документе, было описано ранее, то его описание будет опущено, чтобы избежать чрезмерного повторения.

Используемый в данном описании термин "гиперпролиферативное нарушение" относится к заболеванию, вызываемому чрезмерным ростом, делением и миграцией клеток, которые не регулируются обычными ограничениями у нормально растущих животных. Иллюстративными гиперпролиферативными заболеваниями, которые предотвращаются или лечатся композицией согласно данному изобретению, являются рак, диабетическая ретинопатия, ретинопатия недоношенных, отторжение трансплантата роговицы, неоваскулярная глаукома, эритема, пролиферативная ретинопатия, псориаз, ревматоидный артрит, остеоартрит, аутоиммунные заболевания, болезнь Крона, рестеноз, атеросклероз, энтероадгезия, язвы, цирроз печени, гломерулонефрит, диабетическая нефропатия, злокачественный нефросклероз, тромботическая микроангиопатия, отторжение трансплантированного органа и гломерулопатия, но не ограничиваясь ими, и, таким образом, они включают все гиперпролиферативные заболевания, вызванные аномальной клеточной пролиферацией и избыточным ангиогенезом.

Более предпочтительно примеры рака, который является одним из гиперпролиферативных заболеваний, которые можно предотвращать или лечить с помощью композиции согласно данному изобретению, включают рак легкого, рак желудка, рак поджелудочной железы, рак толстой кишки, рак яичников, почечно-клеточный рак, рак предстательной железы или опухоль головного мозга.

В тех случаях, когда композицию согласно данному изобретению готовят в виде фармацевтической композиции, фармацевтическая композиция согласно данному изобретению содержит фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтически приемлемый носитель, содержащийся в фармацевтической композиции согласно данному изобретению, является таким, который обычно используется для приготовления составов, и его примеры могут включать, но не ограничиваясь ими, лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмал, аравийскую камедь, фосфат кальция, альгинат, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, сироп, метилцеллюлозу, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло. Фармацевтическая композиция согласно данному изобретению может также содержать, в дополнение к указанным выше ингредиентам, смазывающий агент, смачивающий агент, подсластитель, ароматизатор, эмульгатор, суспендирующий агент, консервант и т.п. Подходящие фармацевтически приемлемые носители и агенты подробно описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995).

Фармацевтическая композиция согласно данному изобретению может быть введена перорально или парентерально, и примеры парентерального введения могут включать внутривенное, подкожное, внутримышечное, внутрибрюшинное и трансдермальное введение.

Подходящая для введения доза фармацевтической композиции согласно данному изобретению может изменяться в зависимости от различных факторов, таких как способ приготовления состава, способ введения, возраст, масса тела, пол и заболевания пациента, диета, путь введения, скорость выведения и чувствительность реакции. Суточная доза фармацевтической композиции согласно данному изобретению может составлять, например, от 0,001 до 100 мг/кг.

Фармацевтическая композиция согласно данному изобретению может быть приготовлена в виде единичной дозы или в многодозовом контейнере, в виде обычной лекарственной формы, с использованием фармацевтически приемлемых носителей и/или эксципиентов в соответствии со способами, известными специалистам в данной области. Лекарственная форма относится, например, к составу для перорального (таблетка, капсула или порошок), интрабуккального, сублингвального, ректального, интравагинального, интраназального, местного или парентерального (включая внутривенное, приготовленное в виде губки, внутримышечное, подкожное и внутрисосудистое) введения. Например, соединение в соответствии с данным изобретением может быть введено перорально, трансбуккально, сублингвально, в форме таблетки, содержащей крахмал или лактозу, капсулы с вспомогательным веществом или без него, или эликсира или суспензионный формы, содержащей подсластители или подкрашивающие химические вещества. Жидкий препарат может быть приготовлен с фармацевтически приемлемыми добавками, такими как суспензии (например, полусинтетический глицерид, такой как метилцеллюлоза или витепсол, или смесь глицеридов, такая как смесь масла абрикосовой косточки и эфира PEG-6 или смесь PEG8 и каприлового/капринового глицерида). В случаях парентерального введения, например, внутривенного, интракавернозного, внутримышечного, подкожного и внутрисосудистого, предпочтительно использовать простерилизованный водный раствор, и в данном случае раствор может содержать другие материалы (например, соли или моносахариды, такие как маннит или глюкоза), чтобы быть изотоническим крови.

В соответствии с еще одним аспектом данного изобретения предложен способ профилактики или лечения гиперпролиферативных нарушений, причем указанный способ включает введение описанного выше производного триазолопиразина согласно данному изобретению или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.

Так как производное триазолопиразина и его фармацевтически приемлемая соль или сольват, которые используются в данном документе, и гиперпролиферативные заболевания, которые могут предотвращаться или лечиться с помощью композиции согласно данному изобретению, были описано ранее, то их описание будет опущены, чтобы избежать чрезмерного повторения.

Благоприятные эффекты

Особенности и преимущества данного изобретения можно резюмировать следующим образом:

(a) Данное изобретение относится к новому производному триазолопиразина или его фармацевтически приемлемой соли, к фармацевтической композиции, содержащей их в качестве активного ингредиента средства для ингибирования с-Met-тирозинкиназной активности, и к фармацевтической композиции, содержащей их в качестве активного ингредиента, для профилактики или лечения гиперпролиферативных нарушений.

(b) Данное изобретение может быть использовано в качестве терапевтического агента при различных гиперпролиферативных нарушениях, связанных с чрезмерной пролиферацией и ростом клеток, вызванным аномальной активностью киназы, таких как рак, псориаз, ревматоидный артрит и диабетическая ретинопатия, путем эффективного ингибирования c-Met-тирозинкиназной активности.

Краткое описание графических материалов

В дальнейшем данное изобретение будет подробно описано со ссылкой на примеры. Эти примеры приведены только для более конкретной иллюстрации данного изобретения, и специалистам в данной области будет очевидно, что объем данного изобретения не ограничивается этими примерами.

ПРИМЕРЫ

Схема для каждого соединения

(S)-(4-бензилморфолин-2-ил)метанол

38,3 мл (270,22 ммоль) 2-(бензиламино)этанола и 25 г (270,22 ммоль) (R)-2-(хлорметил)оксирана растворяли в H₂O/IPA (26 мл+26 мл) и перемешивали при комнатной температуре (room temperature; на схемах - rt) в течение ночи (overnight). После этого медленно по каплям в течение 1 часа добавляли 130 мл Et₃NOH (35%), растворенного в воде, и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. После завершения реакции реакционную смесь доводили до рН 9 с помощью 1 N HCl, затем экстрагировали с помощью H₂O и ЕА, высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:1), получая (S)-(4-бензилморфолин-2-ил)метанол в виде бесцветного масла (50%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δδ 7,36-7,22 (m, 5Н), 3,94-3,85 (m, 1Н), 3,76-3,42 (m, 6Н), 2,68 (d, J=11,2 Hz, 2H), 2,19 (dt, J=3,1 Hz, 11,2 Hz, 1H), 2,00 (t, J=10,9 Hz, 1H)

(S)-(4-бензилморфолин-2-ил)метил-4-метилбензенсульфонат

36 г (173,68 ммоль) (S)-(4-бензилморфолин-2-ил)метанолf растворяли в CH₂Cl₂ (400 мл) и добавляли TsCl (49,6 г, 260,52 ммоль), DMAP (2,12, г, 17,36 ммоль) и Et₃N (36,31 мл, 260,52 ммоль) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O и ЕА, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и. концентрировали при пониженном давлении, и затем осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:4), получая (S)-(4-бензилморфолин-2-ил)метил-4-метилбензенсульфонат в виде белого твердого вещества (62,15 г, 99%).

(S)-трет-бутил-2-((тозилокси)метил)морфолин-4-карбоксилат

(S)-(4-бензилморфолин-2-ил)метил-4-метилбензен сульфонат (62 г, 171,52 ммоль) растворяли в МеОН (500 мл) и добавляли ВОС₂O (44,9 г, 205,83 ммоль) и Pd/C (8 г) с последующим перемешиванием при комнатной температуре при давлении 50 psi H₂ (газ) в течение 12 часов. После завершения реакции реакционную смесь фильтровали через целит, затем высушивали, и затем начинали следующую реакцию.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δδ 7,81 (d, J=8,1 Hz, 2H), 7,36 (d, J=8,1 Hz, 2H), 4,07-3,99 (m, 2H), 3,94-3,75 (m, 2H), 3,67-3,57 (m, 1H), 3,53-3,41 (m, 1H), 2,99-2,81 (m, 1H), 2,76-2,58 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 1,46 (s, 9H)

(S)-трет-бутил-2-(азидометил)морфолин-4-карбоксилат

(S)-трет-бутил-2-((тозилокси)метил)морфолин-4-карбоксилат (63,7 г, 171,52 ммоль) растворяли в DMF (550 мл), и затем добавляли NaN₃ (44,59 г, 686,08 ммоль) и NaI (2,5 г, 17,15 ммоль) с последующим перемешиванием при 70°C в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O и ЕА, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:5), получая (S)-трет-бутил-2-(азидометил)морфолин-4-карбоксилат в виде белого твердого вещества (31,1 г, 75%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δδ 4,00-3,76 (m, 3Н), 3,62-3,48 (m, 2Н), 3,31 (d,.7=3,3 Hz, 2H), 3,04-2,86 (m, 1H), 2,82-2,64 (m, 1H), 1,46 (s, 9H)

(R)-трет-бутил-2-(аминометил)морфолин-4-карбоксилат

(S)-трет-бутил-2-(азидометил)морфолин-4-карбоксилат (31 г, 127,95 ммоль) растворяли в МеОН (400 мл) и добавляли Pd/C (5%, 6 г) с последующим перемешиванием в H₂ (газ) в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь фильтровали через целит, затем высушивали, и затем начинали следующую реакцию.

(R)-трет-бутил-2-(((3-амино-6-бромпиразин-2-ил)амино)метил)морфолин-4-карбоксилат

(R)-трет-бутил-2-(аминометил)морфолин-4-карбоксилат (26 г, 124,83 ммоль) растворяли в DMSO (300 мл) и добавляли 3,5-дибромпиразин-2-амин (37,8 г, 149,79 ммоль) и Et₃N (20,9 мл, 149,79 ммоль) с последующим перемешиванием при 150°C в течение 9 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:1), получая (S)-трет-бутил-2-(((3-амино-6-бромпиразин-2-ил)амино)метил)морфолин-4-карбоксилат (33,9 г, 70%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δδ 7,46 (s, 1Н), 4,78-4,68 (m, 1Н), 4,25 (s, 1H), 4,04-3,44 (m, 4H), 3,39-3,24 (m, 1H), 3,03-2,83 (m, 1H), 2,80-2,63 (m, 1H), 1,47 (s, 9H)

(S)-трет-бутил-2-((6-бром-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин-4-карбоксилат

(R)-трет-бутил-2-(((3-амино-6-бромпиразин-2-ил)амино)метил)морфолин-4-карбоксилат (33,9 г, 87,31 ммоль) растворяли в DMF (300 мл) и медленно по каплям добавляли изоамилнитрил (14 мл, 104,77 ммоль) при 0°C. После этого смесь перемешивали при 70°C в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:2), получая (S)-трет-бутил-2-((6-бром-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин-4-карбоксилат (24,3 г, 70%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,78 (s, 1Н), 4,84 (dd, J=7,5 Hz, J=14,2 Hz, 1H), 4,73 (dd, J=4,1 Hz, 14,2 Hz, 1H), 4,13-4,02 (m, 2H), 3,87-3,75 (m, 2H), 3,42 (dt, J=2,6 Hz, J=11,7 Hz, 1H), 3,05-2,79 (m, 2H), 1,47 (s, 9H)

(S)-трет-бутил-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин-4-карбоксилат

(S)-трет-бутил-2-((6-бром-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин-4-карбоксилат (24,3 г, 60,86 ммоль), 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол (15,1 г, 73,03 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (2,48 г, 3,04 ммоль) и CS₂CO₃ (59,4 г, 182,58 ммоль) растворяли в DME (300 мл): H₂O (150 мл), и смесь дегазировали с помощью N₂ с последующим перемешиванием при 80°C в течение 3 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:1), получая (S)-трет-бутил-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин-4-карбоксилат (21,9 г, 90%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δδ 8,93 (s, 1Н), 8,18 (s, 1Н), 8,16 (s, 1Н), 4,8 (dd, J=7,5 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,73 (dd, J=4,5 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,17 4,11 (m, 2H), 4,05 (s, 3H), 3,923,72 (m, 2H), 3,48 (t, J=11,1 Hz, 1H), 3,02 (t, J=11,1 Hz, 1H), 2,972,85 (m, 1H), 1,47 (s, 9H)

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин

(S)-трет-бутил-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин-4-карбоксилат (21,9 г, 54,69 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (300 мл) и добавляли TFA (5,3 г, 82,04 ммоль) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и начинали следующую реакцию.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δδ 8,93 (s, 1Н), 8,18 (s, 1Н), 8,14 (s, 1Н), 4,87 (dd, J=7,3 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,68 (dd, J=5,1 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,31-4,09 (m, 1H), 4,05 (s, 3H), 3,90-3,86 (m, 1H), 3,57 (dt, J=2,6 Hz, J=11,2 Hz, 1H), 3,07-3,03 (m, 1H), 2,91 (dt, J=1,1 Hz, J=9,0 Hz, 1H), 2,86-2,78 (m, 2H)

(S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (Химическая формула 2)

(S)-трет-бутил-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин-4-карбоксилат (16,4 г, 54,69 ммоль) растворяли в EtOH (500 мл) и добавляли 5-бром-2-хлорпиримидин (12,7 г, 65,62 ммоль) и DIPEA (47,6 г, 273,45 ммоль) с последующей инкубацией при 50°C в течение 9 часов. После завершения реакции реакционную смесь рекристаллизовывали с помощью EtOH, получая (S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (18,7 г, 75%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,93 (s, 1Н), 8,32 (s, 2Н), 8,18 (s, 1Н), 8,14 (s, 1Н), 4,95 (dd, J=7,4 Hz, J=14,2 Hz, 1H), 4,81 (dd, J=4,7 Hz, j=14,2 Hz, 1H), 4,694,63 (m,1H), 4,414,35 (m, 1H), 4,284,21 (m, 1H), 4,07 4,04 (m, 1H), 4,04 (s, 3H), 3,58 (dt, J=2,6 Hz, J=11,4 Hz, 1H), 3,21-3,14 (m, 1H), 3,09 (dd, J=10,1, Hz J=13,1 Hz, 1H)

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(1-(1-метилпиперидин-4-ил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин (Химическая формула 7)

550 мг (0,88 ммоль) (S)-трет-бутил-4-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-1Н-пиразол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 0,5 мл 35% формальдегида и 2,5 мл муравьиной кислоты и загружали азотом с последующим перемешиванием при 90°C в течение 18 часов. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали на ледяной бане, и затем доводили рН примерно до 10 с помощью раствора NaOH с последующим экстрагированием с помощью ЕА и насыщенного солевого раствора, и органический слой сушили над MgSO₄. Колоночная хроматография (метиленхлорид : метанол 10:1) давала 161 мг (34%) продукта.

LCMS: рассчитано для C₂₆H₃₁N₁₃O=541,28; найдено=542,1

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(1-(пиперидин-4-ил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолина HCl соль (Химическая формула 4)

463 мг (0,74 ммоль) (S)-трет-бутил-4-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-1Н-пиразол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 20 мл метиленхлорида и добавляли 4 М HCl (избыток), растворенной в 20 мл 1,4-диоксана, и затем загружали азотом с последующим перемешиванием при 90°C в течение 18 часов. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления метиленхлорида и диоксана, получая таким образом 493 мг (100%) желтого твердого вещества.

LCMS: рассчитано для C₂₅H₂₉N₁₃O=527,26, найдено=528,1

(S)-2-(4-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-1Н-пиразол-1-ил)пиперидин-1-ил)этанол (Химическая формула 8)

20 мг (0,04 ммоль) (S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(1-(пиперидин-4-ил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолина HCl соли растворяли в 1 мл диметилформамида и добавляли 6,6 мг (0,05 ммоль) 2-бромэтанола и 15 мг (0,11 ммоль) K₂CO₃, и затем загружали азотом с последующим перемешиванием при 60°C в течение 4 часов. После реакции реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления диметилформамида с последующим экстрагированием с помощью ЕА и насыщенного солевого раствора, и органический слой сушили над MgSO₄. Разделение путем колоночной хроматографии (метиленхлорид : метанол = 10:1) 33 мг (65%) давало продукта.

LCMS: рассчитано для C₂₇H₃₃N₁₃O₂=571,29, найдено = 572,1

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиримидин-2-ил)морфолин (Химическая формула 14)

15 мг (0,03 ммоль) (S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолина растворяли в 1 мл диоксана и добавляли 16,5 мг (0,05 ммоль) 4-(2-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенокси)этил)морфолина, 98 мкл (0,09 ммоль) 1М Na₂CO₃ и 2 мг (0,001 ммоль) Pd(pph₃)₄, и затем загружали азотом с последующим перемешиванием при 105°C в течение 18 часов. После реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью ЕА и насыщенного солевого раствора, и органический слой сушили над MgSO₄. Колоночная хроматография (метиленхлорид : метанол = 20:1) давала 6 мг (31%) продукта.

LCMS: рассчитано для C₂₉H₃₃N₁₁O₃=583,28, найдено=583,8

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(4-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)фенил)пиримидин-2-ил)морфолин (Химическая формула 15)

15 мг (0,03 ммоль) (S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолина растворяли в 1 мл диоксана и добавляли 17 мг (0,05 ммоль) 1-метил-4-(2-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенокси)этил)пиперазина, 98 мкл (0,09 ммоль) 1М Na₂CO₃ и 2 мг (0,001 ммоль) Pd(pph₃)₄, и затем загружали азотом с последующим перемешиванием при 105°C в течение 18 часов. После реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью ЕА и насыщенного солевого раствора, и органический слой сушили над MgSO₄. Колоночная хроматография (метиленхлорид : метанол = 20:1) давала 0,7 мг (4%) продукта.

LCMS: рассчитано для C₃₀H₃₆N₁₂O₂=596,31, найдено=597,2

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(4-(морфолинометил)фенил)пиримидин-2-ил)морфолин (Химическая формула 18)

40 мг (0,08 ммоль) (S)-4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)бензальдегида растворяли в 3 мл метиленхлорида и добавляли 14 мкл (0,17 ммоль) морфолина, 5,7 мкл (0,09 ммоль) уксусной кислоты и 26,5 мг (0,12 ммоль) NaBH(OAc)₃, и затем загружали азотом с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 18 часов. После реакции реакционную смесь охлаждали и доводили рН до 8 с помощью K₂CO₃ (водн.) с последующим экстрагированием с помощью МС и воды, и органический слой сушили над MgSO₄. Колоночная хроматография (метиленхлорид : метанол = 20:1) давала 18,7 мг (41%) продукта.

LCMS: рассчитано для C₂₈H₃₁N₁₁O₂=553,27, найдено=554,0

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(1-метилпиперидин-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин (Химическая формула 20)

75 мг (0,16 ммоль) (S)-4-(5-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолина растворяли в 3 мл метанола и 2 мл метиленхлорида и добавляли избыток оксида платины. Смесь дегазировали и соединяли с баллоном с водородом, после чего реакция протекала при комнатной температуре в течение 1 дня. После реакции оксид платины удаляли с помощью целитного фильтра и проводили разделение путем PLC (метиленхлорид : метанол = 5:1), получая 13,3 мг (18%) желтого твердого вещества.

LCMS: рассчитано для C₂₃H₂₉N₁₁О₂=475,26, найдено = 475,82

(S)-2-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)этанол (Химическая формула 21)

54 мг (0,11 ммоль) (S)-2-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-ил)этанола растворяли в 3 мл метанола и 2 мл метиленхлорида и добавляли избыток оксида платины. Смесь дегазировали и соединяли с баллоном с водородом, после чего реакция протекала при комнатной температуре в течение 1 дня. После реакции оксид платины удаляли с помощью целитного фильтра, и разделение путем PLC (метиленхлорид: метанол = 5:1) давало 7,7 мг (14%) желтого твердого вещества.

LCMS: рассчитано для C₂₄H₃₁N₁₁O₂=505,27, найдено = 506,28

(S)-трет-бутил-4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилат

В герметизированной пробирке (S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (70 мг, 0,15 ммоль), трет-бутил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилат (57 мг, 0,18 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (6,3 мг, 0,0078 ммоль) и K₂CO₃ (64 мг, 0,46 ммоль) растворяли в диоксане (2 мл) + H₂O (0,5 мл), и проводили дегазацию с помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 2:1), получая (S)-трет-бутил-4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилат (71 мг, 83%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,34 (s, 2Н), 8,16 (s, 1Н), 8,12 (s, 1Н), 5,92 (brs, 1Н), 4,95 (d, J=7,5 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,80 (dd, J=4,5 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,75-4,66 (m, 1H), 4,47-4,38 (m, 1H), 4,32-4,20 (m, 1H), 4,10-3,93 (m, 3H), 4,03 (s, 3H), 3,69-3,52 (m, 3H), 3,25-3,03 (m, 2H), 2,48-2,38 (m, 2H), 1,49 (s, 9H)

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин гидрохлорид (Соль химической формулы 9)

(S)-трет-бутил-4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-5,6-гидропиридин-1(2Н)-карбоксилат (33 мг, 0,06 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (2 мл) и добавляли 4 N HCl в диоксане (1 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, получая (S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолина гидрохлорид (29 мг, 99%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,34 (s, 2Н), 8,16 (s, 1Н), 8,12 (s, 1Н), 5,92 (brs, 1Н), 4,95 (d, J=7,5 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,80 (dd, J=4,5 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,75-4,66 (m, 1H), 4,47-4,38 (m, 1H), 4,32-4,20 (m, 1H), 4,10-3,93 (m, 3H), 4,03 (s, 3H), 3,69-3,52 (m, 3H), 3,25-3,03 (m, 2H), 2,48-2,38 (m, 2H)

(S)-4-(5-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропириди-4-ил)пиримидин-2-ил)-2-((6-91-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (Химическая формула 10)

(S)-трет-бутил-4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилат (36 мг, 0,06 ммоль) растворяли в 35% НСНО (0,1 мл) и уксусной кислоте (0,5 мл) с последующим перемешиванием при 95°C в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь доводили до pH 11-12 с помощью NaOH (водн.) и экстрагировали с помощью H₂O и ЕА, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС = 1:10), получая (S)-4-(5-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (16,9 мг, 56%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,93 (s, 1Н), 8,37 (s, 2Н), 8,18 (s, 1Н), 8,14 (s, 1Н), 5,96 (brs, 1Н), 4,97 (d, J=7,7 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,81 (dd, J=4,2 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,74-4,68 (m, 1H), 4,46-4,40 (m, 1H), 4,31-4,23 (m, 1H), 4,04 (s, 3H), 4,02-3,97 (m, 1H), 3,59 (dt, J=2,8 Hz, J=11,4 Hz, 1H), 3,23-3,16 (m, 1H), 3,16-3,07 (m, 3H), 2,71 (t, J=5,6 Hz, 2H), 2,55-2,50 (m, 2H), 2,44 (s, 3H)

(2S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)этил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин

300 мг (0,66 ммоль) (S)-4-(5-бромлиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолина растворяли в 12 мл диметоксиметана и добавляли 450 мг (1,39 ммоль) 1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)этил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола. 641 мг (1,97 ммоль) цезия карбоната растворяли в 3 мл дистиллированной воды и затем добавляли его в реакционный раствор. Добавляли 27 мг (0,03 ммоль) PdCl₂(dppf)₂ и смесь продували N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 4 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью этилацетата и насыщенного солевого раствора, и органический слой сушили над Na₂SO₄. Препаративная LC с 5% МеОН/МС давала 290 мг (77%) продукта.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,43 (s, 2Н), 8,16 (s, 1Н), 8,12 (s, 1Н), 7,68 (s, 1Н), 7,67 (s, 1Н), 4,99-4,91 (m, 1Н), 4,83-4,77 (m, 1Н), 4,70 (d, J=12,4 Hz, 1Н), 4.55 (s, 1Н), 4,44 (s, 1Н), 4,36 (t, J=5,2 Hz, 2H), 4,28-4,24 (m, 1H), 4,12-4,05 (m, 1H), 4,01 (s, 3H), 4,00 (d, J=12,4 Hz, 1H), 3,83-3,75 (m, 1H), 3,69-3,59 (m, 2H), 3,48-3,43 (m, 1H), 3,24-3,07 (m, 2H), 2,01 (s, 1H), 1,75 (s, 1H), 1,57-1,49 (m, 4H)

(S)-2-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-1Н-пиразол-1-ил)этанол гидрохлорид (Соль химической формулы 11)

290 мг (0,51 ммоль) (2S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)этил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолина растворяли в 20 мл МС и добавляли 4 М HCl в 2 мл диоксана. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, и когда реакция завершалась, реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. МС и 4 М HCl в диоксане удаляли и добавляли эфир для осаждения твердого вещества с последующим декантированием, получая 236 мг (89%) продукта.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,20 (s, 1Н), 8,65 (s, 2Н), 8,63 (s, 1Н), 8,30 (s, 1Н), 8,11 (s, 1Н), 7,85 (s, 1Н), 4,93-4,88 (m, 2Н), 4,65 (d, J=12,1 Hz, 1H), 4,31 (d, J=12,1 Hz, 1H), 4,12 (t, J=5,1 Hz, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,92-3,87 (m, 1H), 3,75 (t, J=5,1 Hz, 1H), 3.56 (s, 1H), 3,07-3,03 (m, 2H), 2,72 (s, 1H), 2,27 (s, 1H)

(S)-трет-бутил-4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилат

500 мг (1,09 ммоль) (S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолина растворяли в 8 мл диметоксиметана и затем добавляли 406 мг (1,31 моль) трет-бутил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-карбоксилата. 453 мг (3,28 ммоль) калия карбоната растворяли в 2 мл дистиллированной воды и затем добавляли его в реакционный раствор. Добавляли 45 мг (0,0547 ммоль) PdCl₂(dppf)₂ и смесь продували N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью этилацетата и насыщенного солевого раствора, и органический слой сушили над Na₂SO₄. 3% МеОН/МС хроматография давала 478 мг (78%) продукта.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,34 (s, 2Н), 8,16 (s, 1Н), 8,11 (s, 1Н), 5,91 (s, 1Н), 4,98-4,90 (m, 1Н), 4,80-4,72 (m, 1Н), 4,70 (d, J=12,7 Hz, 1Н), 4,42 (d, J=12,7 Hz, 1H), 4,31-4,23 (m, 1H), 4,06 (s, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,02-3,93 (m, 1H), 3,69-3,53 (m, 3H), 3,23-3,06 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,95 (s, 1H), 1,48 (s, 9H)

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолина HCl соль (Соль химической формулы 9)

472 мг (0,84 ммоль) (S)-трет-бутил-4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-5,6-гидропиридин-1(2Н)-карбоксилата растворяли в 15 мл МС и добавляли 4 N HCl в диоксане (2,5 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение ночи. Когда реакция завершалась, реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления МС и 4 М HCl в диоксане и добавляли эфир для осаждения твердого вещества, получая таким образом 330 мг (79%) указанного в заголовке соединения.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1H), 8,35 (s, 2H), 8,16 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 4,99-4,93 (m, 1H), 4,86-4,77 (m, 1H), 4,75 (d, J=12,4 Hz, 1H), 4,48 (d, J=12,4 Hz, 1H), 4,37-4,29 (m, 1H), 4,08 (s, 2H), 4,04 (s, 3H), 4,02-3,93 (m, 1H), 3,72-3,58 (m, 3H), 3,32-3,15 (m, 2H), 2,45 (s, 2H), 1,99 (s, 1H)

(S)-2-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-ил)этанол (Химическая формула 12)

330 мг (0,67 ммоль) (S)-2-((6-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолина HCl соли растворяли в 10 мл DMF и добавляли 276 мг (1,99 ммоль) калия карбоната, 71 мкл (0,99 ммоль) бромэтанола и 1 мл TEA с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение ночи. Когда реакция завершалась, реакционную смесь экстрагировали несколько раз с помощью этилацетата и насыщенного солевого раствора, и органический слой сушили над Na₂SO₄. 7% МеОН / МС хроматография давала 210 мг (62%) продукта.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,35 (s, 2Н), 8,16 (s, 1Н), 8,11 (s, 1Н), 5,95 (s, 1Н), 4,98-4,95 (m, 1Н), 4,93-4,76 (m, 1Н), 4,70 (d, J=12,9 Hz, 1Н), 4,42 (d, J=12,9 Hz, 1H), 4,25 (brs, 1H), 3,98-3,93 (m, 1H), 3,70 (t, J=4,5 Hz, 2H), 3,56 (d, J=12,9 Hz, 1H), 3,23 (s, 2H), 3,15 (d, J=12,9 Hz, 1H), 3,08 (d, J=12,9 Hz, 1H), 2,80 (t, J=5,2 Hz, 2H), 2,69 (d, J=4,8 Hz, 2H), 2,49 (s, 2H)

(S)-4-(5-(3-фтор-4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (Химическая формула 13)

15 мг (0,033 ммоль) (S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолина растворяли в 1 мл диоксана и добавляли 17 мг (0,049 ммоль) 4-(2-(2-фтор-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенокси)этил)морфолина и 98,4 мкл (0,098 ммоль) 1 М натрия карбоната. Добавляли 2 мг (0,0016 ммоль) Pd(PPh₃)₄ и смесь продували N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 105°C в течение 4 часов. Когда реакция завершалась, реакционную смесь экстрагировали с помощью этилацетата и насыщенного солевого раствора, и органический слой сушили над Na₂SO₄. Препаративная LC с 4% МеОН/МС давала 7,8 мг (40%) продукта.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,92 (s, 1Н), 8,48 (s, 2Н), 8,17 (s, 1Н), 8,12 (s, 1Н), 7,71-7,64 (m, 1Н), 7,57-7,48 (m, 1Н), 7,16 (d, J=12,1 Hz, 1H), 7,07-7,01 (m, 1H), 4,99-4,92 (m, 1H), 4,85-4,72 (m, 2H), 4,46 (d, J=12,1 Hz, 1H), 4,22 (t, J=5,4 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,37 (s, 4H), 3,63-3,56 (m, 2H), 3,26-3,09 (m, 3H), 2,86 (t, J=4,8 Hz, 2H), 2,62 (s, 4H)

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиримидин-2-ил)морфолин

100 мг (0,22 ммоль) (S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолина растворяли в 3 мл диоксана и добавляли 83 мг (0,33 ммоль) 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолана) и 85 мг (0,87 ммоль) калия ацетата с последующим сильным введением N₂ (газ) для дезаэрации. Добавляли 11 мг (0,013 ммоль) PdCl₂(dppf)₂ и 7 мг (0,013 ммоль) dppf, и смесь продували N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение ночи. Когда реакция завершалась, реакционную смесь экстрагировали с помощью этилацетата и насыщенного солевого раствора, и органический слой сушили над Na₂SO₄, получая 109 мг (100%) неочищенного соединения.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,16 (s, 1Н), 8,11 (s, 2Н), 8,10 (s, 1Н), 4,95-4,90 (m, 1Н), 4,80-4,75 (m, 1Н), 4,56 (d, J=12,4 Hz, 1H), 4,31-4,25 (m, 2H), 4,02 (s, 3Н), 3,94 (d, J=12,4 Hz, 1H), 3,59-3,53 (m, 1H), 3,13-2,99 (m, 2H), 1,28 (s, 12H)

(S)-2-(2-((6-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ол

109 мг (0,22 ммоль) (S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиримидин-2-ил)морфолина растворяли в 3 мл THF и добавляли 3 мл дистиллированной воды и 65 мг (0,651 ммоль) NaBO₃. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Когда реакция завершалась, реакционную смесь экстрагировали с помощью МС и воды, и органический слой сушили над Na₂SO₄. Препаративная LC с 4% МеОН/МС давала 54 мг (63%) продукта.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,16 (s, 1Н), 8,12 (s, 2Н), 8,11 (s, 1Н), 4,98-4,93 (m, 1Н), 4,82-4,77 (m, 1Н), 4,56 (d, J=12,2 Hz, 1H), 4,33-4,26 (m, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,96 (d, J=12,2 Hz, 1H), 3,60-3,55 (m, 1H), 3,15-3,00 (m, 2H)

(S)-4-(5-(2-хлорэтокси)пиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин

15 мг (0,04 ммоль) (5)-2-(2-((6-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил) морфолино)пиримидин-5-ола растворяли в 2 мл DMF и добавляли 16 мкл (0,19 ммоль) 1-бром-2-хлорметана и 16 мг (0,11 ммоль) калия карбоната с последующим перемешиванием при 60°C в течение ночи. Когда реакция завершалась, реакционную смесь экстрагировали несколько раз с помощью этилацетата и насыщенного солевого раствора, и органический слой сушили над Na₂SO₄. Препаративная LC с 4% МеОН/МС давала 9,7 мг (53%) продукта.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,16 (s, 1Н), 8,12 (s, 2Н), 8,11 (s, 1Н), 4,96-4,91 (m, 1Н), 4,80-4,76 (m, 1Н), 4,57 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,30-4,24 (m, 2H), 4,20 (t, J=3,3 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,97 (d, J=7,6 Hz, 1H), 3,78 (t, J=3,3 Hz, 2H), 3,61-3,55 (m, 1H), 3,15-3,01 (m, 2H)

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)пиримидин-2-ил)морфолин (Соединение 16)

9 мг (0,019 ммоль) (S)-4-(5-(2-хлорэтокси)пиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолина растворяли в 1 мл DMF и добавляли 4 мкл (0,39 ммоль) 1-метилпиперазина и 4 мг (0,022 ммоль) KI. Смесь перемешивали при 75°C в течение ночи. Когда реакция завершалась, реакционную смесь экстрагировали несколько раз с помощью этилацетата и насыщенного солевого раствора, и органический слой сушили над Na₂SO₄. Препаративная LC с 7% МеОН/МС давала 7,8 мг (76%) продукта.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,16 (s, 1Н), 8,11 (s, 1Н), 8,10 (s, 2Н), 4,98-4,93 (m, 1Н), 4,81-4,74 (m, 1Н), 4,56 (d, J=12,1 Hz, 1H), 4,27 (d, J=12,1 Hz, 2H), 4,07 (t, J=5,6 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,97 (d, J=12,1 Hz, 1H), 3,66-3,54 (m, 2H), 3,06-2,98 (m, 1H), 2,78 (t, J=5,5 Hz, 2H), 2,62 (brs, 4H), 2,52 (brs, 4H), 2,31 (s, 3H)

LCMS: рассчитано для C₂₄H₃₂N₁₂O₂ LCMS=520,28, найдено = 520,97

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиримидин-2-ил)морфолин

В пробирке под давлением 50 мг (0,11 ммоль) (S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолина, 42 мг (0,16 ммоль) 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолана), 43 мг (0,44 ммоль) калия ацетата, 5,4 мг (0,007 ммоль) Pd(dppf)2Cl2 и 3,7 мг (0,007 ммоль) dppf растворяли в 3 мл диоксана и дегазировали с помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 3 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O и ЕА, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении и начинали следующую реакцию.

(S)-2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ол

55 мг (0,11 ммоль) (S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиримидин-2-ил)морфолина растворяли в 2 мл THF и 2 мл H₂O, а затем добавляли NaBO₃ 16 мг (0,16 ммоль) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС = 1:10), получая 29 мг (S)-2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ола (два этапа: 67%).

¹H-NMR (300 MHz, DMSO) δ 9,30 (brs, 1H), 9,14 (s, 1H), 8,58(s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,01(s, 2H), 4,88-4,77 (m, 2H), 4,46-4,34 (m, 1H), 4,19-4,01 (m, 2H), 3,90 (s, 3Н), 3,86-3,77 (m, 1H), 3,47-3,34 (m, 1H), 2,94-2,74 (m, 2H)

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(2-морфолиноэтокси)пиримидин-2-ил)морфолин (Химическая формула 16)

26 мг (0,066 ммоль) (S)-2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ола растворяли в 2 мл DMF и добавляли 14,8 мг (0,079 ммоль) 4-(2-хлорэтил)морфолингидрохлорида и 28 мг (0,19 ммоль) калия карбоната с последующим перемешиванием при 80°C в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС = 1:10), получая 5 мг (15%) (S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(2-морфолиноэтокси)пиримидин-2-ил)морфолина.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,17 (s, 1Н), 8,12 (s, 1Н), 8,11 (s, 2Н), 4,95 (dd, J=7,5 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,78 (dd, J=4,5 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,61-4,51 (m, 1H), 4,33-4,21 (m, 2H), 4,10 (t, J=4,5 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,00-3,93 (m, 1H), 3,76 (t, J=3,7 Hz, 4H), 3,58 (dt, J=2,8 Hz, J=11,4 Hz, 1H), 3,17-3,07 (m, 1H), 3,03 (dd, J=10,1 Hz, J=13,1 Hz, 1H), 2,79 (t, J=4,5 Hz, 2H), 2,64-2,54 (m, 4H)

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)пиримидин-2-ил)морфолин

16 мг (0,033 ммоль) (S)-2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-карбоальдегида растворяли в 2 мл CH₂Cl₂ и добавляли 7,4 мкл (0,066 ммоль) 1-метилпиперазина, 2,3 мкл АсОН и 11 мг (0,05 ммоль) NaBH(OAc)₃ с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь доводили до pH 8 с помощью водн. K₂CO₃ (5%) и экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС=1:10), получая 14,1 мг, (76%) (S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)пиримидин-2-ил)морфолина.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,55 (s, 2Н), 8,17 (s, 1Н), 8,12 (s, 1Н), 7,46-7,35 (m, 4Н), 4,96 (dd, J=7,5 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,84 (dd, J=4,5 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,81-4,74 (m, 1H), 4,52-4,41 (m, 1H), 4,34-4,23 (m, 1H), 4,01 (s, 3H), 4,01-3,95 (m, 1H), 3,63 (dt, J=2,5 Hz, J=11,5 Hz, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,29-3,21 (m, 1H), 3,16 (dd, J=10,1 Hz, J=13,1 Hz, 1H), 2,59-2,38 (m, 8H), 2,31 (s, 3H)

3-(1-(((2S)-4-(5-(1-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил

В канальный реактор под давлением вносили 50 мг (0,10 ммоль) (S)-3-(1-((4-(5-бромпиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]-триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрила, а затем 43 мг (0,31 ммоль) калия карбоната. Затем добавляли 4 мг (0,005 ммоль) Pd(dppf)₂Cl₂, 2 мл 1,4-диоксана и 40 мг (0,13 ммоль) 1-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола, и затем добавляли 0,5 мл H₂O. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут в атмосфере азота, а затем перемешивали при 80°C в течение 2 часов. Когда реакция завершалась, органический слой экстрагировали с помощью этилацетата и воды, лишнюю воду удаляли с помощью сульфата натрия, затем проводили концентрирование при пониженном давлении. Колоночная хроматография с помощью 50% этилацетата/гексана давала 48 мг (0,08 ммоль) 3-(1-(((2S)-4-(5-(1-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрила с выходом 70%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,23(s, 1Н), 8,51 (s, 1Н), 8,45(s, 2Н), 8,38 (d, J=7,9 Hz 1H), 7,83 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,69 (d, J=7,5 Hz, 3H), 5,09-5,01 (m, 1H), 4,95-4,89 (m, 1H), 4,76 (d, J=12,9 Hz, 1H), 4,56 s, 1H), 4,45-4,26 (m, 5H), 4,13-4,05 (m, 2H), 4,00-3,96 (m, 1H), 3,83-3,74 (m, 2H), 4,00-3,96 (m, 1H), 3,83-3,74 (m, 2H), 3,68-3,55 (m, 3H), 3,74-3,43 (m, 2H), 3,22-3,08 (m, 2H), 2,09-2,04 (m, 1H), 1,78-1,42 (m, 9H), 1,31-1,23 (m, 2H)

(S)-3-(1-((4-(5-(1-(2-гидроксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (Химическая формула 31)

48 мг (0,08 ммоль) 3-(1-(((2S)-4-(5-(1-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрила растворяли в 1 мл МеОН и добавляли 4 М HCl в 1,4-диоксане (3 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 13 часов. Когда реакция завершалась, реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя, получая таким образом 46 мг (0,084 ммоль) (S)-3-(1-((4-(5-(1-(2-гидроксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрила с выходом 100%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,23 (s, 1Н), 8,51 (s, 1Н), 8,45 (s, 2Н), 8,38 (d, J=7,9 Hz 1H), 7,83 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,69 (d, J=7,5 Hz, 3H), 5,09-5,01 (m, 1H), 4,95-4,89 (m, 1H), 4,76 (d, J=12,9 Hz, 1H), 4,56 (s, 1H), 4,45-4,26 (m, 5H), 4,13-4,05 (m, 2H), 4,00-3,96 (m, 1H), 3,83-3,74(m, 2H), 4,00-3,96 (m, 1H), 3,83-3,74 (m, 2H), 3,68-3,55 (m, 3H), 3,74-3,43 (m, 2H), 3,22-3,08 (m, 2H), 2,09-2,04 (m, 1H)

2-фтор-5-(1-(((2S)-4-(5-(1-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-1Н-пиразол-4-ил)-пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил

В канальный реактор под давлением вносили 50 мг (0,10 ммоль) ((S)-5-(1-((4-(5-бромпиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)-2-фторбензонитрила, и затем добавляли 41 мг (0,30 ммоль) калия карбоната. Затем добавляли 4 мг (0,005 ммоль) Pd(dppf)₂Cl₂, затем 2 мл 1,4-диоксана, 38 мг (0,12 ммоль) 1-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола, и затем 0,5 мл H₂O. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут в атмосфере азота, а затем перемешивали при 80°C в течение 2 часов. Когда реакция завершалась, органический слой экстрагировали с помощью этилацетата и воды, лишнюю воду удаляли с помощью сульфата натрия, затем проводили концентрирование при пониженном давлении. Колоночная хроматография с помощью 60% этилацетата/гексана давала 49 мг (0,08 ммоль) 2-фтор-5-(1-(((2S)-4-(5-(1-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)-метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрила с выходом 80%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,20 (8, 1Н), 8,51 (d, J=5,8 Hz, 1Н), 8,45-8,39 (m, 3Н), 7,69 (d, J=7,9 Hz 2H), 7,57 (s, 1H), 7,45 (t, J=8,4 Hz, 1H), 5,07-5,00 (m, 1H), 4,94-4,88 (m, 1H), 4,76 (d, J=13,0 Hz, 1H), 4,56 (brs, 2H), 4,45-4,28 (m, 5H), 4,15-4,06 (m, 2H), 3,97 (d, J=11,5 Hz, 1H), 3,83-3,74 (m, 2H), 3,68-3,55 (m, 2H), 3,47-3,44 (m, 1H), 3,23-3,07 (m, 2H), 2,04 (s, 1H), 1,78-1,49 (m, 9H), 1,25 (t, J=7,2 Hz, 2H)

(S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(1-(2-гидроксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (Химическая формула 32)

49 мг (0,08 ммоль) 2-фтор-5-(1-(((2S)-4-(5-(1-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)-метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрила растворяли в 1 мл МеОН и добавляли 4 М HCl, растворенной в 3 мл 1,4-диоксана, с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 13 часов. Когда реакция завершалась, реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя, получая таким образом 46 мг (0,084 ммоль) (S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(1-(2-гидроксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрила с выходом 100%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,20 (s, 1Н), 8,51 (d, J=5,8 Hz, 1H), 8,45-8,39 (m, 3H), 7,69 (d, J=7,9 Hz 2H), 7,57 (s, 1H), 7,45 (t, J=8,4 Hz, 1H), 5,07-5,00 (m, 1H), 4,94-4,88 (m, 1H), 4,76 (d, J=13,0 Hz, 1H), 4,56 (brs, 2H), 4,45-4,28 (m, 5H), 4,15-4,06 (m, 2H), 3,97 (d, J=11,5 Hz, 1H), 3,83-3,74 (m, 2H), 3,68-3,55 (m, 2H), 3,47-3,44 (m, 1H), 3,23-3,07 (m, 2H)

(S)-трет-бутил4-(2-(2-((6-(3-циано-4-фторфенил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилат

В канальный реактор под давлением вносили 100 мг (0,20 ммоль) ((S)-5-(1-((4-(5-бромпиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)-2-фторбензонитрила и добавляли 83 мг (0,60 ммоль) калия карбоната. Затем добавляли 8 мг (0,01 ммоль) Pd(dppf)₂Cl₂, затем 3 мл 1,4-диоксана, 74 мг (0,24 ммоль) трет-бутил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилата и 0,5 мл H₂O. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут в атмосфере азота, а затем перемешивали при 80°C в течение 2 часов. Когда реакция завершалась, органический слой экстрагировали с помощью этилацетата и воды, лишнюю воду удаляли с помощью сульфата натрия, затем проводили концентрирование при пониженном давлении. Колоночная хроматография с помощью 50% этилацетата/гексана давала 104 мг (0,17 ммоль) (S)-трет-бутил-4-(2-(2-((6-(3-циано-4-фторфенил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилата с выходом 87%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,19 (s, 1Н), 8,50 (d, J=5,8 Hz, 1H), 8,41-8,36 (m, 3Н), 7,44 (t, J=8,4 Hz, 1H), 5,06-4,99 (m, 1H), 4,92-4,86 (m, 1H), 4,77 (d, J=13,4 Hz, 1H), 4,44 (d, J=13,3 Hz, 1H), 4,26 (brs, 2H), 4,15-4,10 (m, 1H), 4,06 (brs, 2H), 3,96 (d, J=10,7 Hz, 1H), 3,65-3,61 (m, 2H), 3,57-3,53 (m, 1H), 3,20-3,06 (m, 2H), 2,43 (brs, 2H), 2,04 (s, 2H), 1,56 (s, 1H), 1,49 (s, 9H), 1,25 (t, J=7,1 Hz, 2H)

(S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (Химическая формула 30)

104 мг (0,17 ммоль) (S)-трет-бутил-4-(2-(2-((6-(3-циано-4-фторфенил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)-5,6-гидропиридин-1(2Н)-карбоксилата растворяли в 1 мл МеОН и добавляли 4 М HCl, растворенной в 1,4-диоксане (3 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов, и когда реакция завершалась, реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя, и затем экстрагировали два раза с помощью дихлорметана и NaHCO₃. Лишнюю воду удаляли с помощью сульфата натрия, затем проводили концентрирование при пониженном давлении. Колоночная хроматография с помощью 5% дихлорметана/метанола давала 44 мг (0,09 ммоль) (S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрила с выходом 51%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,19 (s, 1Н), 8,50 (d, J=5,8 Hz, 1H), 8,41-8,36 (m, 3Н), 7,44 (t, J=8,4 Hz, 1H), 5,06-4,99 (m, 1H), 4,92-4,86 (m, 1H), 4,77 (d, J=13,4 Hz, 1H), 4,44 (d, J=13,3 Hz, 1H), 4,26 (brs, 2H), 4,15-4,10 (m, 1H), 4,06 (brs, 2H), 3,96 (d, J=10,7 Hz, 1H), 3,65-3,61 (m, 2H), 3,57-3,53 (m, 1H), 3,20-3,06 (m, 2H), 2,43 (brs, 2H), 2,04 (s, 2H), 1,56 (s, 1H), 1,25 (t, J=7,1 Hz, 2H)

(S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(1-(2-гидроксиэтил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (Химическая формула 38)

44 мг (0,09 ммоль) (S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрила растворяли в 1 мл DMF. Добавляли 36 мг (0,26 ммоль) калия карбоната и 0,009 мл (0,13 ммоль) 2-бромэтанола, а затем добавляли Et₃N (2 капли) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 13 часов в атмосфере азота. Когда реакция завершалась, реакционную смесь экстрагировали два раза или более с помощью этилацетата и воды и концентрировали при пониженном давлении. PCL с помощью 10% дихлорметана/метанола давала 9 мг (0,017 ммоль) (S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(1-(2-гидроксиэтил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрила с выходом 19%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,19 (s, 1Н), 8,50 (d, J=5,8 Hz, 1H), 8,40-8,37 (m, 3Н), 7,44 (t, J=8,4 Hz, 1H), 5,06-4,97 (m, 1H), 4,92-4,86 (m, 1H), 4,76 (d, J=13,2 Hz, 1H), 4,43 (d, J=12,6 Hz, 1H), 4,26 (brs, 1H), 3,96 (d, J=10,9 Hz, 1H), 3,74-3,69 (m, 2H), 3,57 (t, J=11,0 Hz, 1H), 3,49 (s, 1H), 3,24 (brs, 2H), 3,17-3,06 (m, 2H), 3,82-3,27 (m, 2H), 2,71-2,68 (m, 2H), 2,50 (brs, 2H)

4-бром-1-(бромметил)-2-фторбензен

NBS (1,07 г, 6,05 ммоль) и AIBN (83 мг, 0,50 ммоль) растворяли в CCl₄ (10 мл) и добавляли 1-бром-2-фтор-4-метилбензен (1 г, 5,04 ммоль) с последующим нагреванием при 100°C в условиях обратного холодильника в течение 13 часов. Когда реакция завершалась, реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, а образованное твердое вещество отфильтровывали, и затем проводили экстракцию с помощью CCl₄ и воды два раза или более. Органический слой обрабатывали сульфатом натрия для удаления лишней воды с последующим концентрированием при пониженном давлении, получая 4-бром-1-(бромметил)-2-фторбензен (1,2 г, 4,47 ммоль) с выходом 89%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7,51-7,41 (m, 1Н), 7,09 (d, J=9,0 Hz, 1H), 6,99 (d, J=8,2 Hz, 1H), 4,34 (s, 2H)

4-(4-бром-2-фторбензил)морфолин

4-бром-1-(бромметил)-2-фторбензен (600 мг, 2,24 ммоль) растворяли в DMF (8 мл) и добавляли KI (400 мг, 2,46 ммоль) и морфолин (0,78 мл, 8,96 ммоль) с последующим перемешиванием при 60°C в течение 13 часов. Когда реакция завершалась, реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления DMF и проводили экстракцию два раза или более с помощью этилацетата и насыщенного солевого раствора. Органический слой обрабатывали сульфатом натрия для удаления лишней воды и затем концентрировали при пониженном давлении с последующей колоночной хроматографией с 30% этилацетатом/гексаном, получая 4-(4-бром-2-фторбензил)морфолин (278 мг, 1,01 ммоль) с выходом 45%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7,47 (t, J=7,2 Hz, 1H), 7,15 (d, J=9,4 Hz, 1H), 6,99 (d, J=8,0 Hz, 1H), 3,70 (brs, 4H), 3,44 (s, 2H), 2,43 (brs, 4H)

4-(2-фтор-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолин

В канальный реактор под давлением вносили 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) (2,22 г, 8,75 ммоль) и добавляли Pd(dppf)₂Cl₂ (285 мг, 0,35 ммоль), затем добавляли КОАС (2,28 г, 23,3 ммоль) и DMF (20 мл). 4-(4-бром-2-фторбензил)морфолин (1,6 г, 5,83 ммоль), и смесь перемешивали при 85°C в течение 13 часов в атмосфере азота. Когда реакция завершалась, реакционную смесь экстрагировали два раза или более с помощью этилацетата и воды, и органический слой обрабатывали сульфатом натрия для удаления лишней воды с последующим концентрированием при пониженном давлении. Колоночная хроматография с помощью 30% этилацетата/гексана давала 4-(2-фтор-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолин (1,8 г, 5,6 ммоль) с выходом 96%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7,47 (t, J=7,2 Hz, 1H), 7,15 (d, J=9,4 Hz, 1H), 6,99 (d, J=8,0 Hz, 1H), 3,70 (brs, 4H), 3,44 (s, 2H), 2,43 (brs, 4H), 1,35 (s, 12H)

(S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(3-фтор-4-(морфолинометил)фенил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (Химическая формула 41)

В канальный реактор под давлением вносили ((S)-5-(1-((4-(5-бромпиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)-2-фторбензонитрил (40 мг, 0,08 ммоль), и затем добавляли K₂CO₃ (33 мг, 0,24 ммоль). Затем добавляли Pd(dppf)₂Cl₂ (3 мг, 0,004 ммоль), а затем 1,4-диоксан (2 мл) и воду (0,5 мл). Добавляли 4-(2-фтор-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолин (12 г, 0,13 ммоль) и затем перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 10 минут, а затем перемешивали при 85°C в течение 2 часов. Когда реакция завершалась, органический слой экстрагировали с помощью этилацетата и воды, лишнюю воду удаляли с помощью сульфата натрия, затем проводили концентрирование при пониженном давлении. Колоночная хроматография с помощью 5% дихлорметана/метанола давала (S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(3-фтор-4-(морфолинометил)фенил)-пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (46 мг, 0,075 ммоль) с выходом 46%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,19 (s, 1Н), 8,53-8,49 (m, 2Н), 8,45-8,38 (m, 1Н), 7,44 (t, J=8A Hz, 1H), 7,33-7,26 (m, 2H), 7,19-7,17 (m, 2H), 5,08-5,11 (m, 1H), 4,94-4,88 (m, 1H), 4,83 (d, J=12,9Hz, 1H),4,50 (d, J=13,6 Hz, 1H), 4,29 (brs, 1H), 4,15-4,08 (m, 1H), 3,98 (d, J=11,7 Hz, 1H), 3,73 (brs, 4H), 3,63-3,55 (m, 1H), 3,52 (s, 2H), 3,26-3,12 (m, 2H), 2,47 (brs, 4H)

(S)-4-(5-(3-фтор-4-(морфолинометил)фенил)пиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (Химическая формула 42)

В канальный реактор под давлением вносили (S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (40 мг, 0,08 ммоль), а затем добавляли K₂CO₃ (36 мг, 0,26 ммоль). Затем добавляли Pd(dppf)₂Cl₂ (4 мг, 0,004 ммоль), затем 1,4-диоксан (2 мл) и воду (0,5 мл). Добавляли 4-(2-фтор-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолин (42 мг, 0,13 ммоль) и затем перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 10 минут с последующим перемешиванием при 85°C в течение 2 часов. Когда реакция завершалась, органический слой экстрагировали с помощью этилацетата и воды, лишнюю воду удаляли с помощью сульфата натрия, затем проводили концентрирование при пониженном давлении. Колоночная хроматография с помощью 50% этилацетата/гексана давала (S)-4-(5-(3-фтор-4-(морфолинометил)фенил)пиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (51 мг, 0,089 ммоль) с выходом 46%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,52 (s, 1Н), 8,15 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,32-7,26 (m, 2H), 7,20-7,16 (m, 2H), 5,08-4,92 (m, 1H), 4,84-4,76 (m, 2H), 4,49 (d, J=12,9 Hz, 1H), 4,28 (brs, 1H), 4,02 (s, 3H), 3,74-3,71 (m, 4H), 3,64-3,56 (m, 1H), 3,51 (s, 2H), 3,27-3,10 (m, 2H), 2,47 (brs, 4H)

2-фтор-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензальдегид

В канальный реактор под давлением вносили 4-бром-2-фторбензальдегид (500 мг, 2,46 ммоль) и добавляли 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) (938 мг, 3,69 ммоль), а затем добавляли Pd(dppf)₂Cl₂ (120 мг, 0,15 ммоль). Затем добавляли dppf (78 мг, 0,15 ммоль) и КОАС (965 мг, 9,84 ммоль), и затем 1,4-диоксан (8 мл) с последующим перемешиванием при 85°C в атмосфере азота в течение 13 часов. Когда реакция завершалась, реакционную смесь экстрагировали два раза или более с помощью этилацетата и воды, а органический слой обрабатывали сульфатом натрия для удаления лишней воды. После концентрирования при пониженном давлении колоночная хроматография с помощью 20% этилацетата/гексана давала 2-фтор-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензальдегид с выходом 96%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 10,38 (s, 1Н), 7,85-7,81 (m, 1Н), 7,67-7,65 (m, 1Н), 7,57 (s, J=10,4 Hz, 1H), 1,35 (s, 12H)

(S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(3-фтор-4-формилфенил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил

В канальный реактор под давлением вносили ((S)-5-(1-((4-(5-бромпиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)-2-фторбензонитрил (50 мг, 0,10 ммоль), а затем добавляли 1М Na₂CO₃ (0,31 мл, 0,31 ммоль). Затем добавляли Pd(PPh₃)₄ (6 мг, 0,005 ммоль), и затем 1,4-диоксан (1 мл) и 2-фтор-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензальдегид (38 мг, 0,15 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут в атмосфере азота, а затем перемешивали при 105°C в течение 3 часов. Когда реакция завершалась, органический слой экстрагировали с помощью этилацетата и воды, лишнюю воду удаляли с помощью сульфата натрия, затем проводили концентрирование при пониженном давлении. Твердое вещество получали с помощью эфира и гексана, затем фильтровали, получая (S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(3-фтор-4-формилфенил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (49 мг, 0,091 ммоль) с выходом 90%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 10,36 (s, 1H), 9,19 (s, 1H), 8,53-8,45 (m, 1H), 8,61 (s, 2H), 7,97-7,92 (m, 1H), 7,49-7,39 (m, 3Н), 5,08-5,01 (m, 1H), 4,94-4,88 (m, 1H), 4,56 (d, J=12,9 Hz, 1H), 4,27 (brs, 1H), 4,01-3,93 (m, 1H), 3,67-3,56 (m, 1H), 3,27-3,09 (m, 2H)

(S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(3-фтор-4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)фенил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (Химическая формула 39)

(S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(3-фтор-4-формилфенил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (49 мг, 0,09 ммоль) растворяли в дихлорметане (3 мл), и затем добавляли АсОН (0,006 мл, 0,11 ммоль) и 1-метилпиперазин (0,011 мл, 0,10 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут, а затем добавляли NaBH(OAC)₃ (29 мг, 0,14 ммоль) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 13 часов. Когда реакция завершалась, реакционную смесь доводили до рН 8 с помощью 5% K₂CO₃, затем проводили экстракцию с помощью дихлорметана и воды два раза или более. Органический слой экстрагировали с помощью этилацетата и воды, лишнюю воду удаляли с помощью сульфата натрия, затем проводили концентрирование при пониженном давлении. PLC с использованием 10% дихлорметана/метанола давала (S)-2-фтор-5-(1-((4-(5-(3-фтор-4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)фенил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)6ензонитрил (24 мг, 0,038 ммоль) с выходом 45%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,19 (s, 1H), 8,54-8,50 (m, 3Н), 8,43-8,38 (m, 1H), 7,49-7,41 (m, 1H), 7,22 (d, J=8,04 Hz, 2H), 7,14 (d, J=10,8 Hz, 1H), 5,08-5,01 (m, 1H), 4,94-4,81 (m, 2H), 4,50 (d, J=12,9 Hz, 1H), 4,30 (brs, 1H), 3,98 (d, J=10,8 Hz, 1H), 3,63-3,55 (m, 3H), 3,28-3,11 (m, 2H), 2,54 (brs, 8H), 2,30 (s, 3H)

(S)-2-фтор-4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)бензальдегид

В канальный реактор под давлением вносили (S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (50 мг, 0,11 ммоль), а затем добавляли 1 М Na₂CO₃ (0,33 мл, 0,33 ммоль). Затем добавляли Pd(PPh₃)₄ (6 мг, 0,005 ммоль), и затем 1,4-диоксан (1 мл) и 2-фтор-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензальдегид (41 мг, 0,16 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут в атмосфере азота, а затем перемешивали при 105°C в течение 13 часов. Когда реакция завершалась, органический слой экстрагировали с помощью этилацетата и воды, лишнюю воду удаляли с помощью сульфата натрия, затем проводили концентрирование при пониженном давлении. Твердое вещество получали с помощью эфира и гексана, затем фильтровали, получая (S)-2-фтор-4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)-метил)морфолино)пиримидин-5-ил)бензальдегид (41 мг, 0,087 ммоль) с выходом 76%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 10,36 (s, 1Н), 8,92 (s, 1Н),8,59 (s, 2Н), 8,17 (s, 1Н), 8,12 (s, 1Н), 7,94 (t, J=7,56 Hz, 1H), 7,36 (d, J=8,1 Hz, 1H), 4,99-4,92 (m, 1H), 4,85-4,79 (m, 1H), 4,54(d, J=12,9 Hz, 1H), 4,27 (brs, 1H), 4,02 (s, 3H), 3,64-3,56 (m, 1H), 3,28-3,13 (m, 2H)

(S)-4-(5-(3-фтор-4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)фенил)пиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (Химическая формула 40)

(S)-2-фтор-4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)-метил)морфолино)пиримидин-5-ил)бензальдегид (41 мг, 0,09 ммоль) растворяли в дихлорметане (3 мл), а затем добавляли АсОН (0,006 мл, 0,10 ммоль) и 1-метилпиперазин (0,02 мл, 0,17 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут, а затем добавляли NaBH(OAC)₃ (28 мг, 0,13 ммоль) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 13 часов. Когда реакция завершалась, реакционную смесь доводили до pH 8 с помощью 5% K₂CO₃, затем проводили экстракцию с помощью дихлорметана и воды два раза или более. Органический слой экстрагировали с помощью этилацетата и воды, лишнюю воду удаляли с помощью сульфата натрия, затем проводили концентрирование при пониженном давлении. PLC с использованием 10% дихлорметана/метанола давала (S)-4-(5-(3-фтор-4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)фенил)пиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (20 мг, 0,034 ммоль) с выходом 46%.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,92 (s, 1Н),8,52 (s, 2Н), 8,17 (s, 1Н), 8,12 (s, 1Н), 7,21 (t, J=7,56 Hz, 1H), 7,13 (d, J=8,1 Hz, 1H), 4,85-4,75 (m, 2H), 4,49 (d, J=12,9 Hz, 1H), 4,27 (brs, 1H), 4,02 (s, 3H), 3,64-3,56 (m, 1H), 3,28-3,13 (m, 2H), 2,53 (brs, 8H), 2,30 (s, 3H)

Трет-бутил-3-(азидометил)пиперидин-1-карбоксилат

трет-бутил-3-((тозилокси)метил)пиперидин-1-карбоксилат (8,85 г, 24 ммоль) растворяли в DMF (100 мл), а затем добавляли NaN₃ (6,24 г, 96 ммоль) и NaI (0,36 г, 2,40 ммоль) с последующим перемешиванием при 70°C в течение 4 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:10), получая трет-бутил-3-(азидометил)пиперидин-1-карбоксилат (5,38 г, 92%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4,09-3,82 (m, 2Н), 3,27-3,16 (m, 2Н), 2,95-2,54 (m, 2Н), 1,88-1,62 (m, 3Н), 1,52-1,42 (m, 1Н), 1,47 (s, 9Н), 1,30-1,20 (m, 1Н)

Трет-бутил-3-(аминометил)пиперидин-1-карбоксилат

трет-бутил-3-(азидометил)пиперидин-1-карбоксилат (5,38 г, 22,40 ммоль) растворяли в МеОН (50 мл), а затем добавляли Pd/C (5% моль) с последующим перемешиванием в H₂ (газ) в течение 9 часов. После завершения реакции реакционную смесь фильтровали через целит, затем фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, и затем начинали следующую реакцию без очистки.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4,02-3,73 (m, 2Н), 2,94-2,73 (m, 1Н), 2,72-2,33 (m, 3Н), 1,90-1,02 (m, 5Н), 1,44 (s, 9Н)

Трет-бутил3-(((3-амино-6-бромпиразин-2-ил)амино)метил)пиперидин-1-карбоксилат

трет-бутил-3-(аминометил)пиперидин-1-карбоксилат (4,97 г, 22,40 ммоль) растворяли в DMSO (80 мл), а затем добавляли 3,5-дибромпиразин-2-амин (8,5 г, 33,60 ммоль) и Et₃N (6,3 мл) с последующим перемешиванием при 130°C в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:1), получая трет-бутил-3-(((3-амино-6-бромпиразин-2-ил)амино)метил)пиперидин-1-карбоксилат (2,19 г, два этапа: 26%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7,39 (s, 1Н), 4,64-4,23 (m, 2Н), 3,79-2,92 (m, 5Н), 2,25-1,19 (m, 4Н), 1,46 (s, 9Н)

Трет-бутил-3-((6-бром-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат

трет-бутил-3-(((3-амино-6-бромпиразин-2-ил)амино)метил)пиперидин-1-карбоксилат (2,19 г, 5,70 ммоль) растворяли в DMF (15 мл) и медленно по каплям добавляли изоамилнитрил (0,92 мл, 6,84 ммоль) при 0°C. После этого смесь перемешивали при 70°C в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:8), получая трет-бутил-3-((6-бром-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (1,39 г, 62%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,78 (s, 1Н), 4,63 (q, J=7,3 Hz, J=14,1 Hz, 2H), 3,96-3,67 (m, 2H), 3,05-2,74 (m, 2H), 2,47-2,31 (m, 1H), 1,81-1,67 (m, 2H), 1,56-1,14 (m, 2H), 1,40 (s, 9H)

Трет-бутил-3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат

трет-бутил-3-((6-бром-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (0,5 г, 1,26 ммоль), 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол (0,32 г, 1,51 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (82 мг, 0,06 ммоль) и Cs₂CO₃ (1,24 г, 3,78 ммоль) растворяли в DME (3 мл) + H₂O (1 мл), и смесь дегазировали с помощью N₂ с последующим перемешиванием при 80°C. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex=1:1), получая трет-бутил-3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (0,45 г, 89%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,87 (s, 1Н), 8,17-8,07 (m, 2Н), 4,59 (q, J=7,3 Hz, J=14,1 Hz, 2H), 4,00 (s, 3H), 3,96-3,68 (m, 2H), 3,06-2,69 (m, 2H), 2,45-2,27 (m, 1H), 1,82-1,62 (m, 2H), 1,53-1,17 (m, 2H), 1,36 (s, 9H)

6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-(пиперидин-3-илметил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин

3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (0,45 г, 0,89 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл), а затем добавляли TFA (5 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и начинали следующую реакцию без очистки.

1-((1-(5-бромпиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (Химическая формула 3)

6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-(пиперидин-3-илметил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (0,26 г, 0,89 ммоль) растворяли в EtOH (15 мл), а затем добавляли 5-бром-2-хлорпиримидин (0,33 г, 1,33 ммоль) и DIPEA (0,77 мл, 4,43 ммоль) с последующим перемешиванием при 50°C в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:1), получая (1-((1-(5-бромпиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (0,28 г, 70%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,92 (s, 1Н), 8,19 (s, 2Н), 8,15 (s, 1Н), 8,08 (s, 1Н), 4,78 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,64 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,34 (dd, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,22 (dt, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,05 (s, 3H), 3,40-3,32 (m, 1H), 3,23 (dd, J=9,0 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 2,59-2,50 (m, 1H), 1,91-1,82 (m, 2H), 1,62-1,44 (m, 2H)

Трет-бутил-4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-карбоксилат

1-((1-(5-бромпиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (0,2 г, 0,44 ммоль), 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин (0,17 г, 0,53 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (18 мг, 0,02 ммоль) и K₂CO₃ (0,19 г, 1,32 ммоль) растворяли в диоксане (4 мл) + H₂O (1 мл), а затем смесь дегазировали с помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:1), получая трет-бутил-4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилат (0,2 г, 82%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,26 (s, 2Н), 8,14 (s, 1Н), 8,08 (s, 1Н), 5,89-5,82 (m, 1Н), 4,79 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,65 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,44 (dd, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,30 (dt, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,08-4,04 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 3,63 (t, J=4,7 Hz, 2H), 3,40-3,33 (m, 1H), 3,25 (dd, J=9,0 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 2,59-2,51 (m, 1H), 2,42-2,35 (m, 2H), 1,92-1,82 (m, 2H), 1,71-1,43 (m, 2H), 1,51 (s, 9H)

1-((1-(5-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b] пиразин (Химическая формула 34)

трет-бутил-4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилат (71 мг, 0,13 ммоль) растворяли в 35% НСНО (0,2 мл) + HCO₂H (1 мл) с последующим перемешиванием при 95°C в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь доводили до pH 11-12 с помощью NaOH (водн.) и экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС = 1:10), получая (1-((1-(5-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (10 мг, 16%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,92 (s, 1H), 8,28 (s, 2H), 8,15 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 5,91-5,88 (m, 1H), 4,79 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,65 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,44 (dd, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,30 (dt, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,03 (s, 3H), 3,39-3,32 (m, 1H), 3,24 (dd, J=9,0 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 3,13-3,07 (m, 2H), 2,66 (t, J=5,3 Hz, 2H), 2,59-2,50 (m, 1H), 2,49-2,43 (m, 2H), 2,42 (s, 3H), 1,91-1,41 (m, 4H)

6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-((1-(5-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)иримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразингидрохлорид (Химическая формула 33)

1-((1-(5-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (125 мг, 0,22 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл), а затем добавляли 4 N HCl, растворенной в диоксане (1 мл), с последующим перемешиванием при комнатной температуре. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, а затем очищали с помощью эфира, получая 6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-((1-(5-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразина гидрохлорид (90 мг, 82%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,26 (s, 2Н), 8,14 (s, 1Н), 8,08 (s, 1Н), 5,89-5,82 (m, 1Н), 4,79 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,65 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,44 (dd, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,30 (dt, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,08-4,04 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 3,63 (t, J=4,7 Hz, 2H), 3,40-3,33 (m, 1H), 3,25 (dd, J=9,0 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 2,59-2,51 (m, 1H), 2,42-2,35 (m, 2H), 1,92-1,82 (m, 2H), 1,71-1,43 (m, 2H)

2-(4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-ил)этанол (Химическая формула 35)

6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-((1-(5-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразина гидрохлорид (71 мг, 0,14 ммоль) растворяли в DMF (2 мл), а затем добавляли 2-бромэтанол (16 мкл, 0,22 ммоль), K₂CO₃ (100 мг, 0,72 ммоль) и Et₃N (100 мкл, 0,72 ммоль) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС=1:10), получая 2-(4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-ил)этанол (10 мг, 13%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,92 (s, 1Н), 8,27 (s, 2Н), 8,14 (s, 1Н), 8,06 (s, 1Н), 5,92-5,87 (m, 1Н), 4,79 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,64 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,40 (dd, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,27 (dt, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,08-4,04 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 3,71 (t, J=5,3 Hz, 2H), 3,43-3,36 (m, 1H), 3,27 (dd, J=9,0 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 3,22-3,19(m, 2H), 2,77(t, J=5,3 Hz, 2H), 2,60-2,52 (m, 1H), 2,45-2,40 (m, 2H), 1,91-1,82 (m, 2H), 1,63-1,44 (m, 2H)

6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-((1-(5-(1-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-1Н-пиразол-3-ил)пиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин

1-((1-(5-бромпиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (30 мг, 0,066 ммоль), 1-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол (32 мг, 0,099 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (2,7 мг, 0,003 ммоль) и K₂CO₃ (28 мг, 0,20 ммоль) растворяли в диоксане (1,2 мл) + H₂О (0,3 мл), и смесь дегазировали с помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС = 1:20), получая 6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-((1-(5-(1-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-1Н-пиразол-3-ил)пиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (28 мг, 78%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,90 (s, 1Н), 8,32 (d, J=3,2 Hz, 2H), 8,13 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,64-7,61 (m, 2H), 4,64 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 (m, 2H), 4,58-4,55 (m, 1H), 4,43-4,38 (m, 1H), 4,36-4,23 (m, 1H), 4,13-4,06 (mm, 2H), 49 (d, s, 2H), 486-3,76 (m, 1H), 3,69-3,63 (m, 1H), 3,49-3,35 (m, 2H), 3,30-3,23 (m, 1H), 2,61-2,52 (m, 1H), 1,92-1,43 (m, 10H)

2-(3-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)-1Н-пиразол-1-ил)этанолгидрохлорид (Химическая формула 36)

6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-((1-(5-(1-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-1Н-пиразол-3-ил)пиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (28 мг, 0,049 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл), а затем добавляли 4 N HCl диоксан (1 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь очищали с помощью эфира, получая 2-(3-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)-1Н-пиразол-1-ил)этанолгидрохлорид (21,5 мг, 83%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,90 (s, 1Н), 8,32 (d, J=3,2 Hz, 2H), 8,13 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,64-7,61 (m, 2H), 4,64 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,43-4,38 (m, 1H), 4,30-4,23 (m, 1H), 4,13-4,06 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,86-3,76 (m, 1H), 3,69-3,63 (m, 1H), 3,49-3,35 (m, 2H), 3,30-3,23 (m, 1H), 2,61- 2,52 (m, 1H), 1,92-1,43 (m, 4H)

Трет-бутил-4-(3-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло-[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)-1Н-пиразол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат

1-((1-(5-бромпиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (20 мг, 0,0434 ммоль), трет-бутил-4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат (20 мг, 0,053 ммоль), Pd(PPh₃)₄ (2,6 мг, 0,0022 ммоль) и Na₂CO₃ (17 мг, 0,13 ммоль) растворяли в THF (1 мл) + H₂O (0,6 мл), а затем смесь дегазировали с помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС = 1:20), получая трет-бутил-4-(3-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)-1Н-пиразол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат (25 мг, 90%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,32 (s, 2Н), 8,13 (s, 1Н), 8,05 (s, 1Н), 7,63 (s, 1Н), 7,51 (s, 1Н), 4,80 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,64 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,40 (dd, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,33-4,23 (m, 3H), 3,98 (s, 3H), 3,43-3,36 (m, 1H), 3,27 (dt J=9,0 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 2,98-2,84 (m, 1H), 2,61-2,52 (m, 1H), 2,19-2,13 (m, 2H), 2,11-2,07 (m, 1H), 2,01-1,80 (m, 4H), 1,63-1,44 (m, 2H), 1,49 (s, 9H)

6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-((1-(5-(1-(пиперидин-4-ил)-1Н-пиразол-3-ил)пиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразингидрохлорид (Химическая формула 37)

4-(3-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)-1Н-пиразол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат (25 мг, 0,04 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл), а затем добавляли 4 N HCl в диоксане (1 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, а затем очищали с помощью эфира, получая 6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-((1-(5-(1-(пиперидин-4-ил)-1Н-пиразол-3-ил)пиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразина гидрохлорид (18 мг, 75%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,91 (s, 1Н), 8,32 (s, 2Н), 8,13 (s, 1Н), 8,05 (s, 1Н), 7,63 (s, 1Н), 7,51 (s, 1Н), 4,80 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,64 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,40(dd, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,33-4,23(m, 3H), 3,98 (s, 3H), 3,43-3,36 (m, 1H), 3,27 (dt J=9,0 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 2,98-2,84 (m, 1H), 2,61-2,52 (m, 1H), 2,19-2,13 (m, 2H), 2,11-2,07 (m, 1H), 2,01-1,80 (m, 4H), 1,63-1,44 (m, 2H)

(S)-1-трет-бутил-3-этил пиперидин-1,3-дикарбоксилат

(S)-этил-пиперидин-3-карбоксилат (3 г, 19,08 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (50 мл), а затем добавляли ВОС₂O (5 г, 22,90 ммоль) и Et₃N (4 мл, 28,62 ммоль) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 3 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex=1:10), получая (S)-1-трет-бутил-3-этил-пиперидин-1,3-дикарбоксилат (4,27 г, 87%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4,14 (q, J=7,1 Hz, J=14,3 Hz, 2H), 4,30-4,05 (m, 1H), 3,92 (d, J=12,1 Hz, 1H), 3,11-2,87 (m, 1H), 2,85-2,77 (m, 1H), 2,44 (t, J=10,0 Hz, 1H), 2,09-2,00 (m, 1H), 1,75-1,51 (m, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,26 (t, J=7,1 Hz, 3H)

(S)-трет-бутил-3-(гидроксиметил)пиперидин-1-карбоксилат

(S)-1-трет-бутил-3-этилпиперидин-1,3-дикарбоксилат (4,27 г, 16,59 ммоль) растворяли в THF (100 мл), а затем добавляли LiAlH₄ (1,26 г, 33,19 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали в течение 1 часа и затем снова при комнатной температуре в течение 2 часов. Когда реакция завершалась, медленно добавляли H₂O (1,26 мл) и медленно добавляли NaOH (15%, 1,26 мл). После этого добавляли H₂O (4 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь фильтровали через целит и сушили над MgSO₄ с последующей фильтрацией и концентрированием при пониженном давлении, получая (S)-трет-бутил-3-(гидроксиметил)пиперидин-1-карбоксилат (3,5 г, 99%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3,91-3,51(m, 2Н), 3,50(d, J=5,9 Hz, 2H), 3,24-2,75 (m, 2H), 2,62-2,08 (m, 2H), 1,86-1,18 (m, 4H), 1,45 (s, 9H)

(S)-лтрел7-бутил-3-((тозилокси)метил)пиперидин-1-карбоксилат

(S)-трет-бутил-3-(гидроксиметил)пиперидин-1-карбоксилат (3,5 г, 16,59 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (60 мл), а затем добавляли TsCI (3,8 г, 19,91 ммоль), Et₃N (3,47 мл, 24,87 ммоль) и DMAP (0,21 г, 1,66 ммоль) с последующей инкубацией при комнатной температуре в течение 3 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, МС и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:5), получая (S)-трет-бутил-3-((тозилокси)метил)пиперидин-1-карбоксилат (6 г, 97%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7,78 (d, J=8,0 Hz, 2H), 7,35 (d, J=8,0 Hz, 2H), 3,88 (d, J=6,4 Hz, 2H), 3,85-3,75 (m, 2H), 2,81 (t, J=11,0 Hz, 1H), 2,74-2,50 (m, 1H), 2,45 (s, 3H), 1,91-1,15 (m, 5H), 1,43 (s, 9H)

(S)-трет-бутил-3-(азидометил)пиперидин-1-карбоксилат

(S)-трет-бутил-3-((тозилокси)метил)пиперидин-1-карбоксилат (8,85 г, 24 ммоль) растворяли в DMF(100 мл), а затем добавляли NaN₃ (6,24 г, 96 ммоль) и Nal (0,36 г, 2,40 ммоль) с последующим перемешиванием при 70°C в течение 4 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:10), получая (S)-трет-бутил-3-(азидометил)пиперидин-1-карбоксилат (5,38 г, 92%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4,09-3,82 (m, 2Н), 3,27-3,16 (m,2H), 2,95-2,54 (m, 2H), 1,88-1,62 (m, 3Н), 1,52-1,42 (m, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,30-1,20 (m, 1H)

(R)-трет-бутил-3-(аминометил)пиперидин-1-карбоксилат

(S)-трет-бутил-3-(азидометил)пиперидин-1-карбоксилат (5,38 г, 22,40 ммоль) растворяли в МеОН (50 мл), а затем добавляли Pd/C (5% моль) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в атмосфере H₂ (газ) в течение 9 часов. После завершения реакции реакционную смесь фильтровали через целит, затем фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, и затем начинали следующую реакцию без очистки.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4,02-3,73 (m, 2Н), 2,94-2,73 (m, 1Н), 2,72-2,33 (m, 3Н), 1,90-1,02 (m, 5Н), 1,44 (s, 9Н)

(R)-трет-бутил-3-(((3-амино-6-бромпиразин-2-ил)амино)метил)пиперидин-1-карбоксилат

(R)-трет-бутил-3-(аминометил)пиперидин-1-карбоксилат (4,97 г, 22,40 ммоль) растворяли в DMSO (80 мл), а затем добавляли 3,5-дибромпиразин-2-амин (8,5 г, 33,60 ммоль) и Et₃N (6,3 мл) с последующим встряхиванием при 130°C в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:1), получая (R)-трет-бутил-3-(((3-амино-6-бромпиразин-2-ил)амино)метил)пиперидин-1-карбоксилат (2,19 г, два этапа: 26%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7,39 (s, 1Н), 4,64-4,23 (m, 2Н), 3,79-2,92 (m, 5Н), 2,25-1,19 (m, 4Н), 1,46 (s, 9Н)

(S)-трет-бутил-3-((6-бром-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат

(R)-трет-бутил-3-(((3-амино-6-бромпиразин-2-ил)амино)метил)пиперидин-1-карбоксилат (2,19 г, 5,70 ммоль) растворяли в DMF (15 мл), а затем медленно по каплям добавляли изоамилнитрил (0,92 мл, 6,84 ммоль) при 0°C. После этого смесь перемешивали при 70°C в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:8), получая (S)-трет-бутил-3-((6-бром-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (1,39 г, 62%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,78 (s, 1Н), 4,63 (q, J=7,3 Hz, J=14,1 Hz, 2H), 3,96-3,67 (m, 2H), 3,05-2,74 (m, 2H), 2,47-2,31 (m, 1H), 1,81-1,67 (m, 2H), 1,56-1,14 (m, 2H), 1,40 (s, 9H)

(S)-трет-бутил-3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат

(S)-трет-бутил-3-((6-бром-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (0,5 г, 1,26 ммоль), 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол (0,32 г, 1,51 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (82 мг, 0,06 ммоль) и Cs₂CO₃ (1,24 г, 3,78 ммоль) растворяли в DME (3 мл) + H₂O (1 мл), а затем дегазировали с помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:1), получая (S)-трет-бутил-3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (0,45 г, 89%).

¹H-NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 8,87 (s, 1H), 8,17-8,07 (m, 2H), 4,59 (q, J=7,3 Hz, J=14,1 Hz, 2H), 4,00 (s, 3H), 3,96-3,68 (m, 2H), 3,06-2,69 (m, 2H), 2,45-2,27 (m, 1H), 1,82-1,62 (m, 2H), 1,53-1,17 (m, 2H), 1,36 (s, 9H)

(S)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-(пиперидин-3-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин

(S)-тррет-бутил-3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (0,45 г, 0,89 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл), а затем добавляли TFA (5 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и начинали следующую реакцию без очистки.

(S)-1-((1-(5-бромпиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин

(S)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-(пиперидин-3-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (0,26 г, 0,89 ммоль) растворяли в EtOH (15 мл), а затем добавляли 5-бром-2-хлорпиримидин (0,33 г, 1,33 ммоль) и DIPEA (0,77 мл, 4,43 ммоль) с последующим перемешиванием при 50°C в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (ЕА:Hex = 1:1), получая (S)-1-((1-(5-бромпиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (0,28 г, 70%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,92 (s, 1Н), 8,19 (s, 2Н), 8,15 (s, 1Н), 8,08 (s, 1Н), 4,78 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,64 (dd, J=6,9 Hz, J=13,8 Hz, 1H), 4,34 (dd, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,22 (dt, J=3,7 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 4,05 (s, 3H), 3,40-3,32 (m, 1H), 3,23 (dd, J=9,0 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 2,59-2,50 (m, 1H), 1,91-1,82 (m, 2H), 1,62-1,44 (m, 2H)

(S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)фенил)пиримидин-2-ил)морфолин (Химическая формула 17)

(S)-1-((1-(5-бромпиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (250 мг, 0,55 ммоль), 1-метил-4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)пиперазин (210 мг, 0,66 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (23 мг, 0,027 ммоль) и K₂CO₃ (228 мг, 1,65 ммоль) растворяли в диоксане (6 мл) + H₂O (1,5 мл), а затем дегазировали с помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС = 1:10), получая (S)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)-4-(5-(4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)фенил)пиримидин-2-ил)морфолин (210 мг, 71%).

(S)-1-(4-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанон (Химическая формула 45)

(S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (50 мг, 0,11 ммоль), 1-(4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанон (45 мг, 0,13 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (4,5 мг, 0,005 ммоль) и K₂CO₃ (45 мг, 0,33 ммоль) растворяли в диоксане (4 мл) + H₂O (1 мл), а затем дегазировали с помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС = 1:10), получая (S)-1-(4-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанон (58 мг, 90%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,92 (s, 1Н), 8,55 (s, 2Н), 8,17 (s, 1Н), 8,13 (s, 1Н), 7,55-7,28 (m, 2Н), 4,96 (dd, J=7,7 Hz, J=14,2 Hz, 1H), 4,86-4,71 (m, 2H), 4,48 (d, J=13,2 Hz, 1H), 4,34-4,23 (m, 1H), 4,02 (s, 3H), 4,02-3,97 (m, 1H), 3,68-3,59 (m, 3H), 3,56 (s, 2H), 3,47 (t, J=4,3 Hz, 2H), 3,29-3,08 (m, 2H), 2,51-2,40 (m, 4H), 2,11 (s, 3H)

(S)-1-(4-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанона гидрохлорид

(S)-1-(4-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанон (58 мг, 0,084 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл), а затем добавляли 4 N HCl в диоксане (1 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь очищали с помощью эфира, получая (S)-1-(4-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанона гидрохлорид (47 мг, 90%).

(S)-1-(4-(4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанон (Химическая формула 46)

(S)-1-((1-(5-бромпиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (50 мг, 0,11 ммоль), 1-(4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанон (45 мг, 0,13 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (4,5 мг, 0,0054 ммоль) и K₂CO₃ (45 мг, 0,33 ммоль) растворяли в диоксане (4 мл) + H₂O (1 мл), и затем дегазировали с помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС = 1:10), получая (S)-1-(4-(4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанон (48 мг, 74%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,90 (s, 1Н), 8,45 (s, 2Н), 8,13 (s, 1Н), 8,05 (s, 1Н), 7,27 (s, 1Н), 4,80 (dd, J=7,0 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,46 (dd, J=3,3 Hz, J=13,1 Hz, 1H), 4,38-4,27 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,63 (t, J=4,3 Hz, 2H), 3,55 (s, 2H), 3,47 (t, J=4,3 Hz, 2H), 3,44-3,33 (m, 1H), 3,27 (dd, J=8,7 Hz, 13,4 Hz, 1H), 2,63-2,50 (m, 1H), 2,50-2,39 (m, 4H), 2,08 (s, 3H), 1,94-1,80 (m, 2H), 1,66-1,44 (m, 2H)

(S)-1-(4-(4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанона гидрохлорид

(S)-1-(4-(4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанон (48 мг, 0,08 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл) и добавляли 4 N HCl в диоксане (1 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь очищали с помощью эфира, получая (S)-1-(4-(4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанона гидрохлорид (46 мг, 90%).

(S)-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)фенил)(4-метилпиперазин-1-ил)метанон (Химическая формула 47)

(S)-4-(5-бромпиримидин-2-ил)-2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолин (50 мг, 0,11 ммоль), (4-метилпиперазин-1-ил)(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метанон (45 мг, 0,13 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (4,5 мг, 0,0054 ммоль) и K₂CO₃ (45 мг, 0,33 ммоль) растворяли в диоксане (4 мл) + H₂O (1 мл), а затем дегазировали с помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС = 1:10), получая (S)-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)фенил)(4-метилпиперазин-1-ил)метанон (62 мг, 98%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,92 (s, 1Н), 8,56 (s, 2Н), 8,17 (s, 1Н), 8,13 (s, 1Н), 7,55-7,45 (m, 4Н), 4,97 (dd, J=7,7 Hz, J=14,2 Hz, 1H), 4,87-4,73 (m, 2H), 4,50 (d, J=13,1 Hz, 1H), 4,34-4,23 (m, 1H), 4,02 (s, 3H), 4,02-3,97 (m, 1H), 3,90-3,69 (m, 2H), 3,61 (dt, J=2,4 Hz, Hz, 1H), 3,30-3,09 (m, 2H), 2,58-2,36 (m, 4H), 2,34 (s, 3H)

(S)-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)фенил)(4-метилпиперазин-1-ил)метанона гидрохлорид

(S)-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)фенил)(4-метилпиперазин-1-ил)метанон (62 мг, 0,11 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл) и добавляли 4 N HCl в диоксане (1 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь очищали с помощью эфира, получая (S)-(4-(2-(2-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)морфолино)пиримидин-5-ил)фенил)(4-метилпиперазин-1-ил)метанона гидрохлорид (59 мг, 90%).

(S)-(4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)фенил)(4-метилпиперазин-1-ил)метанон (Химическая формула 48)

(S)-1-((1-(5-бромпиримидин-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)-6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин (50 мг, 0,11 ммоль), (4-метилпиперазин-1-ил)(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метанон (45 мг, 0,13 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (4,5 мг, 0,0054 ммоль) и K₂CO₃ (45 мг, 0,33 ммоль) растворяли в диоксане (4 мл) + H₂O (1 мл), а затем дегазировали помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕA и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночно хроматографии (МеОН:МС = 1:10), получая (S)-1-(4-(4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)бензил)пиперазин-1-ил)этанон (48 мг, 74%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,89 (s, 1Н), 8,45 (s, 2Н), 8,12 (s, 1Н), 8,04 (s, 1Н), 7,50-7,40 (m, 4Н), 4,80 (dd, J=7,7 Hz, J=14,2 Hz, 1H), 4,64 (dd, J=7,7 Hz, J=14,2; Hz, 1H), 4,48 (dd, J=2,4 Hz, J=13,2 Hz, 2H), 4,37-4,26 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,90-3,70 (m, 2H), 3,61-3,37 (m, 3H), 3,30 (dd, J=9,2 Hz, J=13,1 Hz, 1H), 2,65-2,37 (m, 5H), 2,3 (s, 3H), 1,95-1,78 (m, 2H), 1,67-1,40 (m, 2H)

(S)-(4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)фенил)(4-метилпиперазин-1-ил)метанона гидрохлорид

(S)-(4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)фенил)(4-метилпиперазин-1-ил)метанон (48 мг, 0,083 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл) и добавляли 4 N HCl в диоксане (мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь очищали с помощью эфира получая (S)-(4-(2-(3-((6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)пиримидин-5-ил)фенил)(4-метилпиперазин-1-ил)метанона гидрохлорид(46 мг, 90%).

(S)-3-(1-((4-(5-(4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)фенил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (Химическая формула 49)

(S)-3-(1-((4-(5-бромпиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (30 мг, 0,063 ммоль), 1-метил-4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)пиперазин (24 мг, 0,094 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (2 мг, 0,003 ммоль) и Cs₂CO₃ (62 мг, 0,18 ммоль) растворяли в диоксане (4 мл) + H₂O (1 мл), а затем дегазировали с помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС = 1:10), получая (S)-3-(1-((4-(5-(4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)фенил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (12,1 мг, 33%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,25 (s, 1Н), 8,58 (s, 2Н), 8,54 (s, 1Н), 8,40 (d, J=7,2 Hz, 1H), 7,86 (d, J=7,2 Hz, 1H), 7,73 (t, J=7,9 Hz, 1H), 7,48-7,39 (m, 4H), 5,08 (dd, J=7,9 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,95 (dd, J=4,3 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,87-4,80 (m, 1H), 4,54-4,48 (m, 1H), 4,37 4,29 (m, 1H), 4,05-3,98 (m, 1H), 3,63 (dt, J=2,5 Hz, J=11,4 Hz, 1H), 3,28-3,21 (m, 1H), 3,18 (dt, J=10,8 Hz, J=14,4 Hz, 1H), 2,62-2,35 (m, 8H), 2,31 (s, 3H)

(S)-3-(1-((4-(5-(4-((4-ацетилпиперазин-1-ил)метил)фенил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (Химическая формула 50)

(S)-3-(1-((4-(5-бромпиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (30 мг, 0,063 ммоль), 1-метил-4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)пиперазин (24 мг, 0,094 ммоль), Pd(dppf)₂Cl₂ (2 мг, 0,003 ммоль) и Cs₂CO₃ (62 мг, 0,18 ммоль) растворяли в диоксане (4 мл) + H₂O (1 мл), а затем дегазировали с помощью N₂ (газ) с последующим перемешиванием при 80°C в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали с помощью H₂O, ЕА и насыщенного солевого раствора, затем высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, а осадок очищали путем колоночной хроматографии (МеОН:МС = 1:10), получая (S)-3-(1-((4-(5-(4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)фенил)пиримидин-2-ил)морфолин-2-ил)метил)-1Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиразин-6-ил)бензонитрил (15,1 мг, 41%).

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,25 (s, 1Н), 8,58 (s, 2Н), 8,54 (s, 1Н), 8,40 (d, J=7,2 Hz, 1H), 7,86 (d, J=7,2 Hz, 1H), 7,73 (t, J=7,9 Hz, 1H), 7,48-7,39 (m, 4H), 5,08 (dd, J=7,9 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,95 (dd, J=4,3 Hz, J=14,1 Hz, 1H), 4,87-4,80 (m, 1H), 4,54-4,48 (m, 1H), 4,37-4,29 (m, 1H), 4,05-3,98 (m, 1H), 3,69-3,59 (m, 3H), 3,58 (s, 2H), 3,55-3,48 (m, 4H), 3,29-3,20 (m, 1H), 3,18 (dd, J=10,5 Hz, J=13,3 Hz, 1H), 2,53-2,40 (m, 4H), 2,11 (s, 3H)

Примеры составов

Пример состава 1: Таблетка (прямое прессование)

5,0 мг активного ингредиента просеивали и затем смешивали с 14,1 мг лактозы, 0,8 мг кросповидона USNF и 0,1 мг магния стерата с последующим прессованием, формируя таблетку.

Пример состава 2: Таблетка (влажный состав)

5,0 мг активного ингредиента просеивали и затем смешивали с 16,0 мг лактозы и 4,0 мг крахмала. Затем полисолват 80 (0,3 мг) растворяли в чистой воде, добавляли подходящее количество этого раствора, а затем атомизировали. После высушивания мелкие гранулы просеивали, а затем смешивали с 2,7 мг диоксида кремния и 2,0 мг стерата магния. Мелкие гранулы прессовали, формируя таблетку.

Пример состава 3: Порошок и капсула

5,0 мг активного ингредиента просеивали и затем смешивали с 14,8 мг лактозы, 10,0 мг поливинилпирролидона и 0,2 мг стеарата магния. С помощью подходящего аппарата заполняли смесью твердые желатиновые капсулы №5.

Пример состава 4: инъекционный раствор

Инъекционный раствор формировали, добавляя к 100 мг активного ингредиента 180 мг маннитола, 26 мг Na₂HPO₄2H₂O и 2974 мг дистиллированной воды.

Примеры анализов

Пример анализа 1: ингибирующая активность в отношении c-Met-киназы

Для определения ингибирующей активности производных триазолопиразина или их фармацевтически приемлемых солей согласно данному изобретению в отношении аномальной пролиферации клеток на клеточном этапе был проведен следующий эксперимент.

Ингибирующая активность в отношении c-Met-киназы была проанализирована с помощью диссоциативного усиленного лантанидного флуоресцентного иммуноанализа (dissociation enhanced lanthanide fluoro-immunoassay, DELFIA, Perkin Elmer), который является своего рода флуоресценцией с временным разрешением (time-resolved fluorescence, TRF). В 96-луночный планшет с V-образным дном от Greiner в качестве анализируемого соединения помещали 10 мл соединения, полученного в данном изобретении, и добавляли к нему тирозинкиназный буфер (20 мл), смешанный с ферментом c-Met, а затем фермент и анализируемое соединение перемешивали в течение 15 минут, и затем проводили культивирование. Добавляли раствор АТФ (10 мл), чтобы киназная реакция продолжалась при комнатной температуре в течение 30 минут, а затем добавляли 50 мМ раствор этилендиаминуксусной кислоты (EDTA, 40 мл), чтобы остановить реакцию. После этого реакционную смесь переносили в планшет, покрытый стрептавидином, и проводили культивирование в условиях встряхивания. Через 2 часа культивируемый материал трижды промывали буфером PBS-T (PBS 0,05% Tween 20).

Меченное европием антитело против фосфотирозина разводили 1:2500 и в каждую лунку вносили 100 мл разбавителя с последующим культивированием в условиях встряхивания. Через 1 час культивируемый материал трижды промывали буфером PBS-T (PBS 0,05% Tween 20). Добавляли 100 мл усиливающего раствора с последующим культивированием в условиях встряхивания в течение 5 минут, а затем реакционный материал регистрировали при длине волны 615/665 нм с помощью устройства Wallac Envision 2103. Значение IC₅₀ для анализируемого соединения определяли по двум наборам данных и получали с помощью программного обеспечения Prism (версия 5.01, Graphpad).

Значения IC₅₀ для соединений, при которых активность киназы c-Met снижалась до 50%, приведены в таблице 1.

[Таблица 1]

Значение IС₅₀ (мкМ) в отношении c-Met для каждого соединения

Большинство новых соединений показали значения IC₅₀ 0,01 мкМ или менее, и, таким образом, они имеют превосходную активность in vitro в отношении c-Met. Следовательно, можно видеть, что новые производные триазолопиразина или их фармацевтически приемлемые соли согласно данному изобретению имеют превосходный ингибирующий эффект в отношении c-Met-киназы.

Пример анализа 2: анализ ингибирования пролиферации раковых клеток

Для определения ингибирующей активности производных триазолопиразина или их фармацевтически приемлемых солей согласно данному изобретению в отношении пролиферации раковых клеток был проведен следующий анализ.

<2-1> Материалы

Среда для культивирования клеток RPMI 1640, фетальная бычья сыворотка (fetal bovine serum, FBS) и трипсин были приобретены у фирмы Gibco (Grand Island, NY), а также были использованы продукты от Sigma Chemical: гидрокарбонат натрия, амфотерицин B и гентамицин. Кроме того, у Sigma Chemical Co были приобретены такие реагенты как сульфородамин B (sulforhodamine В, SRB), Tris-основание (Trisma) и трихлоруксусная кислота (trichloroactic acid, ТСА). Для анализа MTS у фирмы Promega Со. был приобретен набор CellTiter 96R AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay. Кроме того, для культивирования клеток были использованы продукты от Palcon co. (Линкольн Парк, Нью-Джерси): колбы для культивирования Т-25, 96-луночные планшеты и другие одноразовые изделия из стекла и флаконы, необходимые для культивирования клеток.

В качестве ридера Elizar (ридера для микротитровальных планшетов) для измерения цитотоксичности был использован Е-тах или SpectraMax250 от Molecular Devices Co. (Саннивейл, Калифорния).

<2-2> Способ

Препарат, используемый в анализе, разводили до нужной концентрации в среде для анализа, и конечная концентрация диметилсульфоксида составляла 0,5% или менее.

Все клеточные линии рака, используемые в анализе, имеют человеческое происхождение; были использовали клеточные линии рака желудка Hs746T и MKN-45. Культивирование проводили в инкубаторе в атмосфере с 5% углекислым газом при температуре 37°C с использованием RPMI 1640, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), и субкультивирование выполняли через каждые 3-4 дня.

5×10³ клеток Hs746T помещали в каждую лунку 96-луночного микротитровального плоскодонного планшета. MKN-45 помещали по 1×10⁴ клеток на лунку. Клетки культивировали в течение 24 часов, так что клетки прикреплялись к дну, а затем культуральную жидкость удаляли. Вносили культуральную жидкость, содержащую каждое из соединений согласно данному изобретению, и затем проводили культивирование в течение 72 часов. После того как культивирование с соединением завершалась, измеряли цитотоксичность с помощью реагента для окрашивания белка SRB или MTS.

Более конкретно, после того как культивирование с соединением согласно данному изобретению завершалась, культуральную жидкость удаляли. Каждую лунку обрабатывали холодным раствором ТСА и оставляли при 4°C на 1 час, чтобы зафиксировать клетки. Раствор ТСА удаляли, сушили при комнатной температуре, затем добавляли окрашивающий раствор, содержащий 0,4% SRB, растворенного в 1% растворе уксусной кислоты, и затем смесь оставляли на 30 минут, чтобы окрасить клетки. Лишний SRB, не связавшийся с клетками, удаляли промыванием 1% раствором уксусной кислоты, и к окрашенным клеткам добавляли 10 мМ Трис-основание (небуферизованное) с pH 10,3-10,5 для элюирования SRB. Абсорбцию в каждой лунке измеряли при длине волны 520 нм с помощью ридера Eliza (ридера для микротитровальных планшетов).

Цитотоксичность препарата определяли по значению OD для лунки без препарата (С), лунки с препаратом (Т), а также для лунки с первоначальным добавлением препарата (Tz):

[(T-Tz)/(C-Tz)]×100 для Tz=T; или

[(T-Tz)/(Tz)]×100 для Tz>Т.

Измерение ингибирующей активности в отношении раковых клеток с помощью анализа MTS проводили следующим образом. Более конкретно, после того как культивирование с соединением согласно данному изобретению завершалось, смешивали раствор PMS и раствор MTS, содержащий продукт CellTiter 96^R AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay от Promega Co., и 20 мкл вносили в каждую лунку. Затем клетки помещали в инкубатор на 4 часа, а затем их извлекали и оставляли при комнатной температуре на 10 минут. Оптическую плотность при 490 нм измеряли с использованием SpectraMax250 от Molecular Devices Co., а затем вычисляли значение IC₅₀.

Значения IC₅₀ для соединений, при которых пролиферация раковых клеток (Hs746T) ингибировалась до 50%, приведены в таблице 2.

[Таблица 2]

Ингибирование пролиферации раковых клеток (Hs746T) для каждого соединения [IC₅₀ (мкМ)]

Как показано в таблице 2, значения IC₅₀ для всех соединений на раковых клетках Hs746T составляли 0,01 мкМ или менее. В частности, соединения с химическими формулами 6-9, 11-13, 17, 23, 24, 26-32 и 38 показали очень низкие значения IC₅₀, которые составляли 0,001 мкМ или менее. Следовательно, можно видеть, что новые производные триазолопиразина или их фармацевтически приемлемые соли в соответствии с данным изобретением имеют превосходный эффект ингибирования пролиферации раковых клеток и т.п.

Далее проиллюстрированы примеры изготовления композиции согласно данному изобретению.

<Пример изготовления 1> Изготовление фармацевтического препарата

<1-1> Изготовление порошка

Производное триазолопиразина 2 г

Лактоза 1 г

Указанные выше ингредиенты смешивают, а затем помещают в герметичную упаковку, получая таким образом порошок.

<1-2> Изготовление таблетки

Производное триазолопиразина 100 мг

Кукурузный крахмал 100 мг

Лактоза 100 мг

Стеарат магния 2 мг

Указанные выше ингредиенты смешивают, а затем формуют согласно стандартному способу, получая таким образом таблетку.

<1-3> Изготовление капсулы

Производное триазолопиразина 100 мг

Кукурузный крахмал 100 мг

Лактоза 100 мг

Стеарат магния 2 мг

Указанные выше ингредиенты смешивают, а затем заполняют ими желатиновую капсулу согласно стандартному способу, получая таким образом капсулу.

<1-4> Изготовление инъекционного раствора

Производное триазолопиразина 10 мг/мл

Разбавленная соляная кислота BP до pH 3,5

Инъекционный хлорид натрия BP максимум 1 мл

Производное триазолопиразина согласно данному изобретению растворяли в соответствующем объеме инъекционного хлорида натрия BP, и pH полученного раствора доводили до 3,5 с помощью разбавленной соляной кислоты BP. Затем объем раствора доводили с помощью хлорида натрия для инъекций BP, и раствор тщательно перемешивали. Полученный раствор разливали в ампулы из прозрачного стекла типа I объемом 5 мл, и стекло плавили, чтобы запечатать ампулу в потоке воздуха. Ампулы стерилизовали путем автоклавирования при 120°C в течение 15 минут или дольше, получая инъекционный раствор.

Хотя данное изобретение было подробно описано со ссылкой на специфические детали, специалистам в данной области будет очевидно, что это описание дано только для предпочтительного воплощения и не ограничивает объем данного изобретения. Таким образом, значительный объем данного изобретения будет определяться прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентами.

Изобретение относится к производному триазолопиразина, представленному химической формулой 1:

в которой R₁-R₃ каждый независимо представляет собой водород, галоген; 6-членный гетероциклоалкил с одним гетероатомом, представляющим собой азот, незамещенный или замещенный С₁-С₅-алкилом, гидрокси-С₁-С₅-алкилом; 6-членный гетероциклоалкенил с одним гетероатомом, представляющим собой азот, незамещенный или замещенный С₁-С₅-алкилом, гидрокси-С₁-С₅-алкилом; С₁-С₃-алкокси, замещенный 6-членным гетероциклоалкилом с двумя гетероатомами, каждый из которых независимо представляет собой азот, кислород, который необязательно замещен С₁-С₅-алкилом; С₁-С₅-алкил, замещенный 6-членным гетероциклоалкилом с двумя гетероатомами, каждый из которых независимо представляет собой азот, кислород, который необязательно замещен С₁-С₅-алкилом; фенил, замещенный галогеном; С₁-С₅-алкилом, замещенным 6-членным гетероциклоалкилом с двумя гетероатомами, каждый из которых независимо представляет собой азот, кислород, который необязательно замещен С₁-C₅-алкилом; С₁-С₃-алкокси, замещенным 6-членным гетероциклоалкилом с двумя гетероатомами, каждый из которых независимо представляет собой азот, кислород, который необязательно замещен С₁-С₅-алкилом; ацетилпиперазин-С₁-С₅-алкилом или метилпиперазинилкарбонилом; или 5-членный гетероарил с двумя гетероатомами, представляющими собой азот, замещенный 6-членным гетероциклоалкилом с одним гетероатомом, представляющим собой азот, гидрокси-С₁-С₅-алкилом или С₁-С₅-алкилом; где по меньшей мере один из R₁-R₃ не является водородом; среди R₄ и R₅ каждый независимо представляет собой водород, 5-членный гетероарил, содержащий два гетероатома, представляющих собой азот, незамещенный или замещенный С₁-С₅-алкилом, или фенил, замещенный циано или галогеном; где по меньшей мере один из R₄ и R₅ не является водородом; и X представляет собой кислород или углерод. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям и к способу профилактики или лечения гиперпролиферативных нарушений, опосредованных c-Met-тирозинкиназой. Технический результат: получены новые соединения, обладающие ингибирующей активностью в отношении c-Met-тирозинкиназы. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 2 табл., 7 пр.

1. Производное триазолопиразина, представленное химической формулой 1:

или его фармацевтически приемлемая соль,

где:

R₁-R₃ каждый независимо представляет собой водород, галоген;

6-членный гетероциклоалкил с одним гетероатомом, представляющим собой азот, незамещенный или замещенный С₁-С₅-алкилом, гидрокси-С₁-С₅-алкилом;

6-членный гетероциклоалкенил с одним гетероатомом, представляющим собой азот, незамещенный или замещенный С₁-С₅-алкилом, гидрокси-С₁-С₅-алкилом;

С₁-С₃-алкокси, замещенный 6-членным гетероциклоалкилом с двумя гетероатомами, каждый из которых независимо представляет собой азот, кислород, который необязательно замещен С₁-С₅-алкилом;

С₁-С₅-алкил, замещенный 6-членным гетероциклоалкилом с двумя гетероатомами, каждый из которых независимо представляет собой азот, кислород, который необязательно замещен С₁-С₅-алкилом;

фенил, замещенный галогеном; С₁-С₅-алкилом, замещенным 6-членным гетероциклоалкилом с двумя гетероатомами, каждый из которых независимо представляет собой азот, кислород, который необязательно замещен С₁-C₅-алкилом; С₁-С₃-алкокси, замещенным 6-членным гетероциклоалкилом с двумя гетероатомами, каждый из которых независимо представляет собой азот, кислород, который необязательно замещен С₁-С₅-алкилом; ацетилпиперазин-С₁-С₅-алкилом или метилпиперазинилкарбонилом; или

5-членный гетероарил с двумя гетероатомами, представляющими собой азот, замещенный 6-членным гетероциклоалкилом с одним гетероатомом, представляющим собой азот, гидрокси-С₁-С₅-алкилом или С₁-С₅-алкилом;

где по меньшей мере один из R₁-R₃ не является водородом;

среди R₄ и R₅ каждый независимо представляет собой водород, 5-членный гетероарил, содержащий два гетероатома, представляющих собой азот, незамещенный или замещенный С₁-С₅-алкилом, или фенил, замещенный циано или галогеном; где по меньшей мере один из R₄ и R₅ не является водородом; и

X представляет собой кислород или углерод.

2. Производное триазолопиразина по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый из R₁-R₃ независимо представляет собой водород; галоген; пиразол, замещенный метилом, гидроксиэтилом или пиперидином; фенил, замещенный галогеном, пиперазинилметилом или морфолинометилом; или пиперидин, незамещенный или замещенный метилом или гидроксиэтилом, где два из R₁-R₃ представляют собой водород.

3. Производное триазолопиразина по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый из R₄ и R₅ независимо представляет собой водород; N-метилпиразол; или фенил, замещенный циано или галогеном, где один из R₄ и R₅ представляет собой водород.

4. Производное триазолопиразина по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где триазолопиразин, представленный химической формулой 1, выбран из группы, состоящей из соединений, представленных химическими формулами 2-50, приведенными ниже:

.

5. Производное триазолопиразина по п. 4 или его фармацевтически приемлемая соль, где производное триазолопиразина выбрано из группы, состоящей из соединений, представленных химическими формулами 6-9, 11-12, 17, 23, 24, 26-32 и 38.

6. Фармацевтическая композиция для ингибирования c-Met-тирозинкиназной активности, которая содержит в качестве активного ингредиента производное триазолопиразина по любому из пп. 1-5 или его фармацевтически приемлемую соль.

7. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения гиперпролиферативного нарушения, опосредованного c-Met-тирозинкиназой, которая содержит в качестве активного ингредиента производное триазолопиразина по любому из пп. 1-5 или его фармацевтически приемлемую соль.

8. Фармацевтическая композиция по п. 7, где гиперпролиферативное нарушение, опосредованное c-Met-тирозинкиназой, представляет собой рак желудка.

9. Способ профилактики или лечения гиперпролиферативных нарушений, опосредованных c-Met-тирозинкиназой, который включает введение производного триазолопиразина по любому из пп. 1-5 или его фармацевтически приемлемой соли.

10. Способ по п. 9, где гиперпролиферативное нарушение, опосредованное c-Met-тирозинкиназой, представляет собой рак желудка.