Способ оценки эффективности терапии инфекции вызванной вирусом герпеса человека 6 типа у детей Российский патент 2018 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, педиатрии, инфекционным болезням и может быть использовано для оценки эффективности терапии инфекции, вызванной вирусом герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6), у детей.

Вирус герпеса человека 6-го типа является широко распространенным β-герпес-вирусом, который обладает широким клеточным тропизмом, способен к длительной персистенции в организме человека. Инфекция, вызываемая ВГЧ-6 типа, является антропонозом. Все штаммы по способности расти на первичных культурах и на перевиваемых клеточных линиях делятся на две группы - А и В. Вирусы различаются по эпидемиологии, строению, последовательности нуклеотидов, вызванная ими инфекция - по времени инфицирования, клиническим проявлениям. Как и другие представители подсемейства Beta-herpesviridae, ВГЧ-6 проникает в клетку и реплицируется, он обладает также способностью к персистенции и латенции в организме. Персистенция представляет собой способность герпесвирусов непрерывно циклично размножаться в инфицированных клетках, латенция - пожизненное сохранение вирусов в неявной форме в ганглиях.

На сегодняшний день считается, что инфицирование происходит преимущественно в раннем детском возрасте. После первичного заражения ребенка возможно несколько вариантов развития болезни: от классической Roseola infantum до недифференцируемого заболевания, сопровождающегося лихорадочным состоянием, раздражительностью, отитом, судорожными приступами, сыпью.

Согласно опубликованным данным ВГЧ-6 часто встречается у детей, начиная с раннего возраста, но в большинстве случаев не дает клинической картины, характерной для данного заболевания (внезапная экзантема). По данным отечественных авторов частота носительства антител к ВГЧ-6 у детей раннего возраста в РФ варьирует от 72 до 95%.

Известен способ контроля эффективности терапии при помощи иммуноферментного анализа венозной крови (ИФА) с определением титра IgM, IgG и индексом авидности (ИА) в динамике (Современные аспекты герпесвирусных инфекций. Эпидемиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика: методические рекомендации / Правительство Москвы, Департамент Здравоохранения [сост. Каражас Н.В. и др.]. - М.: Спецкнига, 2012. - с. 113).

Недостатки метода: данный инвазивный метод не является прямым и недостаточно чувствительный - он косвенный и результат определяется индивидуальной иммунореактивностью, а иммуноглобулины не являются вируснейтрализующими. Метод не позволяет оценить степень репликативной активности вирусов.

Технический результат: объективность, повышение чувствительности способа, неинвазивность.

Указанные задачи достигаются путем определения вирусной нагрузки (количества ДНК) вируса герпеса 6 типа у ребенка до начала терапии, через один и три месяца от начала лечения в соскобе из эпителия ротоглотки методом полимеразной цепной реакции (тест-система РеалБест ДНК ВГЧ-6 (Вектор-Бест, Россия).

Для оценки эффективности терапии ВГЧ-6 инфекции у детей данный метод ранее не использовался.

Способ осуществляется следующим образом. При первичном обращении пациенту с установленным диагнозом инфекции, вызванной ВГЧ-6, методом ПЦР определяют вирусную нагрузку (ВН), ранжированную по предлагаемой схеме:

1. Высокая (4 и более) log₁₀, т.е. более 10.000 копий ДНК ВГЧ-6/10⁵ клеток.

2. Низкая (менее 4) log₁₀, т.е. менее 10.000 копий ДНК ВГЧ-6/10⁵ клеток.

Высокая ВН - показание для назначения противовирусных препаратов системного действия.

Через 1 и 3 месяца от начала терапии проводят оценку эффективности лечения с помощью количественной ПЦР соскоба эпителия ротоглотки на основании степени снижения показателя ВН (N log₁₀ копий ДНК ВГЧ-6/10⁵ клеток):

- высокая эффективность - снижение ВН на 2 log₁₀ и более;

- умеренная эффективность - снижение на 1 log₁₀.

При высокой эффективности и достижении низкой ВН системную противовирусную терапию завершают и проводят реабилитационные мероприятия в целях профилактики хронического течения ВГЧ-6 в режиме «антигенного щажения»: предотвращение интеркуррентных заболеваний и временный отвод от профилактических прививок.

При умеренной эффективности системную терапию продолжают до подавления репликативной активности ВГЧ-6.

ПРИМЕРЫ КОНКРЕТНОГО ПРИМЕНЕНИЯ

ПРИМЕР 1. Больной А., 5 мес.

Ребенок от 2 беременности, 2 родов, плановое кесарево сечение, вес при рождении 3178, рост 49, Апгар 8/9. Выписан на 5 сутки. На искусственном вскармливании. Период новорожденности без особенностей. Привит по календарю. В 4 мес - гипохромная анемия, назначен Мальтофер. В 5 мес заболел остро, появилась температура до 39°С, снижение аппетита. Лихорадка и катаральные явления отмечались в течение 2 суток. На 3-и сутки болезни на фоне снижения температуры до 37,5°С и улучшения самочувствия одномоментно появилась сыпь на коже, розовая, мелкая, пятнисто-папулезная, без явного зуда.

При осмотре - кожные покровы бледно-розового цвета, чистые. Лимфатические узлы - мелкие, единичные: подчелюстные, заднешейные, подмышечные и паховые. Слизистая ротоглотки ярко гиперемирована, умеренное увеличение миндалин, наложений нет. При риноскопии - умеренный отек с обеих сторон. В легких пуэрильное дыхание, проводится во все отделы, хрипов нет. Живот мягкий, безболезненный. Печень и селезенка не увеличены. Стул и диурез не нарушены. Менингеальной и очаговой симптоматики нет.

Проведено обследование: клинический анализ крови: лейкоциты - 10⋅10*6, нейтрофилы - 3230 кл/мл, лимфоциты - 55%, моноциты - 7%, СОЭ - 20 мм/ч. Общий анализ мочи - норма.

Вирусологическое обследование: специфические антитела IgG к ВГЧ-6 не обнаружены. ДНК ВГЧ-6 обнаружена в соскобе слизистой ротоглотки в высокой концентрации (4,8 log₁₀ копий ДНК ВГЧ - 6/10⁵ клеток). Маркеры других герпесвирусных инфекций - не обнаружены. Полученные лабораторные данные можно рассматривать как показатели первичной инфекции ВГЧ-6 с высокой вирусной нагрузкой.

Диагноз: Roseola infantum, вызванная вирусом герпеса человека 6 типа.

Получал лечение: интерферон альфа-2b 150.000 ME ректальные суппозитории 2 раза в день 3 курса по 10 дней.

На 6 сутки наблюдения произошла полная элиминация экзантемы, без пигментации кожи. Температура тела нормализовалась. Сохранялась незначительная заложенность носа.

Через 1 мес от начала лечения - ПЦР количественно: в соскобе из ротоглотки ДНК ВГЧ-6 не обнаружена.

Заключение: снижение ВН на 2 log₁₀ и более - высокая эффективность терапии. Клинический эффект - положительный, ребенок здоров, жалоб нет.

Через 3 месяца от начала лечения - ПЦР количественно: в соскобе из ротоглотки ДНК ВГЧ-6 не обнаружена.

ПРИМЕР 2.

Больной А., 3 года. Диагноз: хроническая ВГЧ-6 инфекция, реактивация, с поражением ЛОР-органов: хронический рецидивирующий аденоидит. Тонзиллофарингит. ВИН, субкомпенсированная, смешанного типа (нейтропения, лимфоцитопения, гипоиммуноглобулинемия A,G).

Ребенок от 1 родов в 42 недели гестации, вес при рождении 3650. Н грудном вскармливании. На первом году жизни ребенка: в возрасте 2 месяцев манифестация кожной аллергии без выявления виновного аллергена и генетической предрасположенности; 5 эпизодов ОРВИ с 1 месяца жизни длительностью более 10 дней, в том числе с обструктивным бронхитом. На третьем году жизни за последние 6 месяцев - 5 эпизодов ОРВИ, дважды с антибиотикотерапией по поводу бактериальных осложнений острым средним отитом и бронхитом.

Жалобы на субфебрильную температуру в течение последнего месяца, затруднение носового дыхания, ночной «храп», увеличение лимфоузлов.

При осмотре: лимфузлы подчелюстные и переднешейные II порядка, в зеве - ГНМ III степени с умеренной гиперемией и отеком, гранулезный фарингит. Дыхание везикулярное. Печень и селезенка не увеличены.

ВИН, субкомпенсированная, смешанного типа поставлена на основании клинической картины; нейтропении с абсолютным числом нейтрофилов 1380 кл/мл (менее 1500 кл/мл), лимфоцитопении (1900 клеток в мл); гипоиммуноглобулинемии А - 6,6 мг/дл (N - 21-291) и G - 210 мг/дл (N-350-1400).

Методом ИФА: анти-ВГЧ-6 IgG в титре ≥1:500. Методом количественной ПЦР в соскобе из ротоглотки: 4,0 log₁₀ копий ДНК ВГЧ - 6/10⁵ клеток, в крови - 5,3 log₁₀ копий ДНК ВГЧ - 6/10⁵ клеток. Заключение: высокая вирусная нагрузка, виремия, реактивация хронической ВГЧ-6.

Лечение: ректальные суппозитории Кипферона (иммуноглобулиновый комплексный препарат (КИП) - 0,2 г; интерферон альфа-2b человеческий, рекомбинантный - 500000 ME) по 1 свече в день 3 курса по 10 дней, Acyclovirum 0,2 по 1 таб. 3 раза в день в течение 10 дней подряд, затем по 1 таб. 2 раза в день 1 месяц.

Через 1 месяц от начала терапии - положительный клинический эффект: субфебрилитет купирован, носовое дыхание восстановилось в полном объеме, перестал храпеть ночью, уменьшились подчелюстные лимфоузлы.

Положительный лабораторный эффект: повышение количества нейтрофилов до 1500 кл/мл и IgG до 360 (нижняя граница нормы - 350 мг/дл), методом количественной ПЦР в соскобе из ротоглотки 3,0 log₁₀ копий ДНК ВГЧ - 6/10⁵ клеток. Заключение: низкая вирусная нагрузка, умеренная эффективность лечения. Специфическая терапия не назначена, рекомендован домашний режим на 1 мес.

Через 3 месяца от начала лечения состояние с положительной динамикой, посещает детский сад, не болел. Произошла нормализация показателей общего анализа крови и гуморального иммунитета (повышение IgA и IgG до возрастной нормы). Методом количественной ПЦР в соскобе из ротоглотки: 1,3 log₁₀ копий ДНК ВГЧ - 6/10⁵ клеток. Заключение: низкая вирусная нагрузка, в лечении не нуждается.

Положительный эффект данной методики - возможность объективной оценки контроля эффективности терапии ВГЧ-6-инфекции по показателям вирусной нагрузки, отражающим активность инфекционного процесса, с помощью неинвазивного экспресс-метода - количественной ПЦР со 100% специфичностью и высокой чувствительностью.

Изобретение относится к области медицины, педиатрии, инфекционным болезням и касается способа оценки эффективности терапии инфекции, вызванной вирусом герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6), у детей. Сущность способа: у ребенка до начала терапии, затем через один и три месяца от начала лечения определяют вирусную нагрузку (ВН) ДНК ВГЧ-6 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в соскобе из эпителия ротоглотки и при снижении ВН через указанные промежутки времени на 2 log₁₀ и более делают вывод о высокой эффективности терапии; при снижении ВН на 1 log₁₀ - об умеренной эффективности лечения. Технический результат: объективность, повышение чувствительности способа, неинвазивность. 2 пр.

Способ оценки эффективности терапии инфекции, вызванной вирусом герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6), у детей с помощью лабораторной диагностики в динамике, отличающийся тем, что у ребенка до начала терапии, затем через один и три месяца от начала лечения определяют вирусную нагрузку (ВН) ДНК ВГЧ-6 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в соскобе из эпителия ротоглотки и при снижении ВН через указанные промежутки времени на 2 log₁₀ и более делают вывод о высокой эффективности терапии; при снижении ВН на 1 log₁₀ - об умеренной эффективности лечения.