СРЕДСТВО ДЛЯ СОБАК, ОБЛАДАЮЩЕЕ РЕГЕНЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2018 года по МПК A61K35/28 A61K47/18 A61P43/00 

Область техники

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к ветеринарной терапии, и может быть использовано для стимуляции регенеративных процессов в организме собаки - в послеоперационный период, при дегенеративных заболеваниях органов и систем органов, острых и хронических заболеваниях кожи, улучшает качество жизни стареющих животных.

Уровень техники

Известны синтетические аналоги, обладающие регенеративной активностью, такие как натрия нуклеинат, метилурацил и прочие. Подобные лекарственные средства обладают восстановительными свойствами, улучшают гемапоэз, однако обладают относительно низкой эффективностью и узконаправленностью действия, при этом обладают рядом противопоказаний, связанных с риском угнетения нервной системы, возникновения брадикардии, обострения онкологических патологий системы крови, возникновения аллергических реакций.

Существует регенеративный препарат «Лаураболин 50» (другие названия - ретаболил, нандролона деканоат для собак), представляющий собой инъекционный анаболический стероид (нандролон лаурат), который применяют в качестве общеукрепляющего средства, при лечении терапевтических и хирургических заболеваний с существенным повреждением тканей. Недостатком данного препарата является его стероидная природа, что в совокупности с длительным курсом лечения, может оказать негативное, опасное влияние на весь организм (особенно почки, печень и мозг) и отрицательно сказаться на синтезе собственных гормонов организма животного.

Также известен гомеопатический препарат системного воздействия на организм на растительной основе «Лиарсин», в состав которого входит три компонента - растительное сырье Lycopodium и минеральные соединения - Arsenicum и Phosphorus. Лиарсин используется для восстановления водно-солевого баланса организма собак после перенесенных кишечных инфекций или воспалительных заболеваний ЖКТ. К недостаткам известного средства можно отнести невысокую биологическую активность препарата и ограниченную сферу применения, так как используется только при заболеваниях ЖКТ.

Прототипом изобретения является препарат «Гамавит» - комплексный препарат, основу которого составляют плацента, денатурированная эмульгированная и нуклеинат натрия. Препарат выпускается в жидкой форме на основе ростовой питательной среды, содержащей сбалансированный раствор солей, аминокислот и витаминов [Патент РФ №2005475 С1, 01.10.91]. Для данного прототипа описаны следующие эффекты для собак: нормализует обменные процессы, обладает биостимулирующим, дезинтоксикационным, иммуномодулирующим и адаптогенным действием.

Указанный прототип обладает рядом недостатков. Один из основных компонентов средства - плацента - может нести риск развития аллергической реакции. Указанное сырье, используемое для получения данного препарата, не стандартизировано, поэтому и несет опасность развития нежелательной микрофлоры, что несет угрозу инфицирования животных при применении препарата. Также использование «Гамавита» длительно и требует введения большого количества препарата (при профилактике в дозе 0,1 мл на 1 кг массы тела, в ходе лечения - по 0,3-0,5 мл в течение 2-4 недель). Кроме того, препарат выпускается в жидкой форме, что значительно сокращает срок его хранения.

Стратегия регенеративной медицины, основанная на стимулировании собственного восстановительного потенциала, применяется при создании лекарственных средств для человека, например, кондиционная среда, обладающая лечебным эффектом при термических ожогах [патент RU №2292212, 27.01.07], однако не используется в ветеринарии.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение ставит перед собой задачу обеспечения стимуляции регенеративных процессов в организме собаки при широком спектре дегенеративных заболеваний и расширения арсенала лекарственных средств, применяемых в восстановительной ветеринарии для собак.

Технический результат достигается путем разработки ветеринарного препарата для собак, обладающего регенеративной активностью, и, как следствие, - терапевтическим эффектом - в отношении широкого спектра заболеваний собак.

Патогенез дегенеративных заболеваний связан с нарушением способности отдельных тканей организма к восстановлению и компенсации путем реализации собственного регенераторного потенциала. Существующие прототипы обладают фармакологическим действием, на стимуляции либо замещении функций сохранившихся клеточных элементов. Однако концепция компенсации нарушений деятельности и повреждений органов-мишеней за счет указанных приспособительных процессов в значительном числе случаев оказывается несостоятельной.

МСК обладают способностью секретировать широкий спектр хемокинов и ростовых факторов и быстро реагировать на изменение гомеостаза ткани модификацией профиля их секреции. Таким образом, с участием мезенхимальных клеток осуществляется природный механизм регуляции регенерации тканей. Мезенхимальные клетки присутствуют во всех органах взрослого организма и могут быть выделены и культивированы in vitro.

Реализация данного подхода может быть обеспечена использованием препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры МСК костного мозга и жировой ткани, регенеративная активность которого обусловлена действием комплекса цитокинов, секретируемых МСК в культуральную среду.

Изобретение представляет собой экстракт и кондиционную среду (КС) культуры мезенхимальных стволовых клеток (МСК) (как выделенных de novo, так и деконсервированных) из костного мозга и/или жировой ткани собак.

Изготовление заявленного препарата выполняется в следующие этапы:

1. Накопление клеточной массы и формирование кондиционной среды. Для этого выполняют деконсервирование полученных ранее или непосредственное выделение мезенхимальных стволовых клеток из костного мозга либо жировой ткани собак. МСК собаки культивируют в ростовой среде на основе DMEM с 10% содержанием фетальной бычьей сыворотки (ФБС) до образования кондиционной среды, приемлемость которой оценивается по содержанию интерлейкинов (концентрация ИЛ-1β - не менее 2 пг/мл, ИЛ-2 - не менее 2 пг/мл, ИЛ-6 - не менее 10 пг/мл, ИЛ-10 - не менее 2 пг/мл).

2. Приготовление полупродукта на основе кондиционной среды и экстракта МСК. На данном этапе осуществляют сбор кондиционной среды, удовлетворяющей критериям приемлемости по концентрации интерлейкинов, снятие с подложки и диспергирование монослоя мезенхимальных стволовых клеток, получение экстракта клеток путем замораживания-оттаивания клеточной суспензии, объединение экстракта с кондиционной средой, полученной в ходе культивирования МСК собаки.

3. Изготовление конечного продукта. Полученный на предыдущем этапе полупродукт стабилизируют посредством добавления глицина в концентрации 20 мг на 1 мл раствора для лиофилизации, подвергают стерилизующей фильтрации, осуществляют розлив во флаконы в асептических условиях и сублимационную сушку.

Краткое описание иллюстративного материала

Изобретение поясняется, графиками и таблицами:

График 1. Влияние препарата на основе экстракта и кондиционной среды мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (КС МСК КМ), (КС+МСК ЖТ) и деконсервированных МСК костного мозга (СК+МСК КМ деконс) на пролиферативный индекс культур клеток первичных дермальных фибробластов собак.

График 2. Влияние препарата на основе экстракта и кондиционной среды мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (КС+МСК КМ), жировой ткани (КС+МСК ЖТ) и деконсервированных МСК костного мозга (СК+МСК КМ деконс) на активность АлТ в сыворотке крови крыс при моделировании острой патологии печени (ОПП).

График 3. Влияние препарата на основе экстракта и кондиционной среды мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (КС+МСК КМ), жировой ткани (КС+МСК ЖТ) и деконсервированных МСК костного мозга (СК+МСК КМ деконс) на активность АсТ в сыворотке крови крыс при моделировании острой патологии печени (ОПП).

График 4. Влияние препарата на основе экстракта и кондиционной среды мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (КС+МСК КМ), жировой ткани (КС+МСК ЖТ) и деконсервированных МСК костного мозга (СК+МСК КМ деконс) на содержание белка в сыворотке крови крыс при моделировании острой патологии печени (ОПП).

Таблица 1. Значение ИП первичной культуры дермальных фибробластов при добавлении разных концентраций регенеративного препарата.

Таблица 2. Биохимические параметры поражения печени в исследуемых группах животных.

Таблица 3. Данные клинических показателей собак при лечении регенеративным препаратом на основе экстракта и кондиционной среды мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (КС+МСК КМ), жировой ткани (КС+МСК ЖТ) и деконсервированных МСК костного мозга (СК+МСК КМ деконс).

Таблица 4. Данные гематологический и биохимический показателей сыворотки крови собак.

Возможность осуществления изобретения и эффективность его применения поясняется примерами.

Пример 1. Получение препарата на основе экстракта МСК жировой ткани собаки (как выделенных de novo, так и деконсервированных) и кондиционной среды, образующейся в процессе роста данных клеток.

Мезенхимальные стволовые клетки получали из подкожной жировой ткани собаки: под местной анестезией делали кожный разрез длиной 2-4 см, из места разреза отбирали небольшой кусок подкожного жира, объемом 0,5-1,0 мл, помещали в пробирку с буферным раствором Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (PBS) (Biowest, USA), содержащем гентамицин (80 мкг/мл, Биолот, Россия). Жировую ткань фрагментировали до однородной массы, используя стерильные инструменты, после чего подвергали ступенчатой ферментативной обработке. Ферментативную обработку выполняли следующим образом: к измельченной жировой ткани добавляли питательную среду DMEM high glucose (Biowest, USA) с добавлением антибиотика и антимикотика, а также фермента трипсина (Biowest, USA) до конечной концентрации 0,1-0,15%, выдерживали 30±5 минут при температуре 37±1°С и постоянном перемешивании на магнитной мешалке, затем среду с клетками фильтровали через нейлоновые мембраны с размером пор 100 мкм (BD) и добавляли 0,2-0,5% ФБС (Sigma-Aldrich, USA), для инактивации трипсина. Повторяли описанную операцию дважды со снижением времени инкубации до 15±5 минут.

После фильтрации клеточную суспензию центрифугировали в течение 10 мин при 1200 об/мин, супернатант полностью удаляли. Полученный осадок ресуспендировали в питательной среде DMEM high glucose (Biowest, USA) с 10% ФБС (Sigma-Aldrich, USA), после чего клетки высевали в культуральные флаконы (70±5 мл клеточной суспензии/флакон) с площадью ростовой поверхности 175 см² (SPL, Корея) с концентрацией 1×10⁶ кл/мл и культивировали при 37°С с 5%-ной концентрацией СО₂.

Спустя сутки после начала культивирования производили ополаскивание средой с антибиотиком для удаления не прикрепившихся клеток и производили замену ростовой среды. В дальнейшем замену среды выполняли раз в 3-4 суток. По достижению конфлюентности монослоя (контролируется визуально при помощи инвертированного микроскопа) не менее 85%, его дезагрегировали диспергирующим раствором (0,05-0,1% трипсина (Biowest, USA) в растворе Версена (ПанЭко, Россия)) и проводили посев в новые культуральные флаконы с коэффициентом пересева 1:3.

Для получения кондиционной среды культуру вели в течение 3-4 пассажей, затем выполняли посев в культуральные флаконы из расчета 5-15×10³ клеток на 1 см² площади ростовой поверхности в 90±5 мл ростовой среды и культивировали в описанных выше условиях до достижения необходимой концентрации интерлейкинов в среде.

При достижения необходимой концентрации биологически активных веществ кондиционную среду, содержащую все продукты секреции МСК, собирали в стерильные центрифужные пробирки, очищали путем центрифугирования при 3000 об/мин и температуре 5±1°С в течение 10 минут от клеточного дебриса.

Полученная кондиционная среда может использоваться непосредственно по назначению или храниться в течение продолжительного времени в определенных условиях (до семи суток - при температуре 3±1°С, более длительно хранение требует температуры не выше минус 20°С).

После сбора кондиционной среды получали экстракт МСК КМ: клеточный монослой, при конфлюентности не менее 90%, дезагрегировали указанным выше диспергирующим раствором, добавляли 0,9%-й раствор хлорида натрия (5-10 мл на 1 культуральный флакон), подвергали замораживанию при температуре минус 20±2°С, после чего выполняли оттаивание при комнатной температуре. Полученный экстракт МСК КМ собирали в стерильные центрифужные пробирки, очищали от клеточного дебриса путем центрифугирования при 3000 об/мин и температуре 5±3°С в течение 10 минут.

Для получения регенеративного препарата осадок после центрифугирования, представляющий собой экстракт МСК КМ, объединяли с кондиционной средой, добавляли глицин (до конечной концентрации 20 мг/мл), разливали во флаконы по 1 мл и лиофильно высушивали.

Так, к концу четвертой недели от начала культивирования МСК КМ собаки можно получить до 3000 мл (при посевной концентрации на этапе выделения не менее 1×10⁶ кл/мл) раствора для лиофилизации на основе экстракта и кондиционной среды МСК КМ, который может быть использован для приготовления препарата, стимулирующего регенеративные процессы организма собаки.

Пример 2. Специфическая активность препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры МСК (как выделенных de novo, так и деконсервированных) из костного мозга и/или жировой ткани собак, на модели in vitro.

Для этого первичные дермальные фибробласты собак брали на 3 пассаже, высеивали в 12-луночные культуральные планшеты (SPL, Германия) с добавлением в ростовую среду разной концентрации (1%, 5%, 10%) исследуемого регенеративного препарата, культивировали в течение трех суток в стандартных условиях (инкубировали во влажной камере в CO₂-инкубаторе при 37°С и 5% СО₂) с добавлением 10% ФБС (Sigma-Aldrich, USA) к среде 199 (ГУЛ ИПВЭ им. М.П. Чумакова, Россия). Посевная концентрация клеток - 8-10×10⁴ кл/мл среды. В качестве контроля использовали клетки, выращенные в ростовой среде без добавления регенеративного препарата.

По окончании инкубации проводили снятие культуры дермальных фибробластов собаки с поверхности пластика и определение пролиферативного индекса. Индекс пролиферации определяли как отношение количества клеток в 1 мл суспензии, полученной в результате снятия клеток с подложки по достижению конфлюентности монослоя к посевной концентрации клеток (количество клеток в мл раствора при посеве на культуральные планшеты).

Были получены данные (табл. 1 и график 1), которые свидетельствуют о повышении уровня пролиферативных свойств клеток модельной культуры при добавлении в ростовую среду регенеративного препарата на основе экстракта и кондиционной среды МСК (как выделенных de novo, так и деконсервированных) собаки на 17-90% в зависимости от концентрации, в которой исследуемый препарат добавлялся в ростовую среду, по сравнению с контролем, при этом наблюдалась линейная зависимость между концентрацией препарата и значением индекса пролиферации (ИП).

Пример 3. Исследование гепатопротекторных свойств препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры МСК (как выделенных de novo, так и деконсервированных) из костного мозга и/или жировой ткани собак.

Регенеративное действие препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры мезенхимальных стволовых клеток костного мозга или жировой ткани было изучено на модели острого поражения печени (МОПП) крыс (in vivo). Модель острого поражения печени была выполнена путем однократного введения крысам в желудок через зонд парацетамола (N-(4-гидроксифенил)ацетамида) в виде суспензии в дозе 700 мг на 1 кг массы тела. Процедура лечения после МОПП заключалась в ежедневном внутримышечном введении 0,5 мл исследуемого препарата животным опытной группы в течение 5 дней. В качестве контроля использовали крыс с МОПП, которые не подвергались терапевтическим воздействиям.

Спустя сутки после окончания курса лечения крыс выводили из эксперимента путем декапитации, предварительно обеспечив наркоз за счет внутрибрюшинного введения хлоралгидрата в дозе 400 мг на 1 кг массы тела животного. В сыворотке крови определили активность ферментов аспартат-(АсТ) и аланинаминотрансферазы (АлТ) с помощью стандартного набора Vital и содержание общего белка - биуретовым методом. Исследованные биохимические параметры отражают функциональное состояние печени. Ферменты АсТ и АлТ присутствуют в значительных количествах в печени и почках, поэтому в норме концентрации АсТ и АлТ в крови невелики. При повреждении гепатоцитов происходит потеря ферментов АсТ и АлТ, и концентрация этих биохимических маркеров в крови возрастает. Изменение уровня общего белка (признак грубой патологии печени) не наблюдалось.

По результатам исследования было показано, что применение регенеративного препарата на основе экстракта и кондиционной среды МСК как костного мозга, так и жировой ткани и деконсервированных, в течение пяти дней у животных с ОПП происходило значительное улучшение состояния, судя по исследованным маркерам повреждения печени (показатели уровней АсТ, АлТ) в группе животных, получавших регенеративный препарат, значимо не отличались от показателей в группе интактных крыс (табл. 2 и графики 2-4).

Таким образом, регенеративный препарат на основе экстракта и кондиционной среды МСК обладал в наших опытах выраженным терапевтическим эффектом при остром поражении печени животных. Существенных различий в эффективности препарата на основе кондиционной среды и экстракта мезенхимальных стволовых клеток, полученных из различных источников, также не было выявлено.

Пример 4. Влияние регенеративного препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры МСК (как выделенных de novo, так и деконсервированных) из костного мозга и/или жировой ткани собаки на ранозаживление на модели механической раны у мышей in vivo.

Другая модель, использованная для изучения регенеративной активности препарата in vivo, представляет собой модель глубокой механической раны, края которой для предупреждения стягивания были подшиты к пластиковому кольцу. Препарат вводили на ранних этапах раневого процесса (в течение первых пяти дней после моделирования раны) в виде подкожных инъекций. Исследование проводили на 30 белых беспородных мышах (15 мышей - группа контроля (без лечения), 15 мышей - опытная группа, которой подкалывали исследуемый препарат).

Спустя пять дней, после моделирования ран, у животных опытной группы в ране отсутствовал фибрин, экссудация и гиперемия окружающих тканей были слабо выражены, отмечалось набухание краев раны, что свидетельствовало о стихании воспаления. Смещение пика фазы воспаления в опытной группе на более ранний срок наиболее вероятно связано с действием факторов роста и цитокинов, содержащихся в исследуемом препарате. К концу фазы пролиферации на 14 сутки от начала эксперимента в контрольной группе наблюдали продолжающийся процесс эпителизации раневой поверхности, тогда как у животных опытной группы отмечали полное заживление раны и признаки процесса ремоделирования тканей, что указывало на более высокие темпы регенерации при использовании исследуемого препарата.

Пример 5. Исследование аномальной токсичности изобретения.

Испытания на аномальную токсичность исследуемого препарата проводили на белых мышах массой от 19 до 21 г. Препарат, подогретый до 37°С, вводили внутрибрюшинно в количестве 0,5 мл 20-ти мышам. Наблюдение за состоянием здоровья животных осуществляли в течение 7 суток. Считали, что образец выдерживает испытание, если в течение срока наблюдения не погибнет ни одно животное.

Заявленный препарат не вызывал у животных признаков токсичности или других побочных признаков.

Пример 6. Клинические исследования регенеративного препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры мезенхимальных стволовых клеток (как выделенных de novo, так и деконсервированных) из костного мозга и/или жировой ткани собак при гепатозах.

Согласно предлагаемому изобретению заявляемый препарат вводили 11 собакам с признаками гепатозов разного возраста и пола, принадлежащим частным лицам.

Заявляемый препарат вводили собакам по 0,2 мл (предварительно растворив содержимое флакона в 1,0 мл физиологического раствора) на 1 кг веса животного внутримышечно ежедневно в течение 5 суток.

За больными животными проводили клиническое наблюдение. Для оценки состояния здоровья брали пробы крови для лабораторных исследований в день поступления, на третьи, шестые и двенадцатые сутки с начала терапии.

При клиническом наблюдении обращали внимание на общее состояние животных, изменение аппетита, наличие рвоты, изменение приема жидкости, состояние кожи и слизистых оболочек (желтушность), проводили макроскопическую оценку физиологических экскрементов.

Улучшение общего состояния животных констатировали при уменьшении или исчезновении желтушной окраски кожи и видимых слизистых оболочек, диспепсических явлений, снижении болезненности при пальпации печени, нормализации общего клинико-физиологического состояния собак, а также появлении положительной динамики в биохимическом исследовании проб сыворотки крови.

Анализ полученных клинических данных при лечении собак выявил следующее: к третьим суткам, прошедшим с начала проведения лечения заявляемым препаратом, улучшение общего состояния наступило у восьми животных. Они стали более активными, появился аппетит. Особой динамики клинических симптомов не наблюдали.

К шестым суткам, общее состояние улучшилось у всех одиннадцати животных, у девяти собак значительно уменьшилась желтушность видимых слизистых оболочек, посветлела моча, кал принял обычную естественную окраску.

К 9-12 суткам все животные выздоровели. Полученные данные представлены табл. 3.

Из данных, представленных в табл. 4, видно, что к шестому дню наблюдения, у собак показатели активности АсТ, концентрации билирубина в сыворотке крови нормализовались, показатели активность АлТ характеризуются тенденцией к снижению, что свидетельствует о репаративных процессах в печени данных животных. Нормализация показателей СОЭ и концентрации лейкоцитов у животных свидетельствуют об ослаблении воспалительного процесса в печени к этому дню. К 12 дню заболевания на фоне проводимой терапии у собак нормализовались все показатели крови.

Пример 7. Клинические исследования регенеративного препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры мезенхимальных стволовых клеток (как выделенных de novo, так и деконсервированных) из костного мозга и/или жировой ткани собак при заживлении травм (ран, ожогов, растяжений связок).

1. Собака породы пекинес по кличке «Алиса», 5 лет, была укушена в области шеи. При обследовании: рваная рана с сильным отеком, кровотечение. Лечение проводили заявленным препаратов в виде внутримышечных инъекций в дозе 1 мл 1 раз в день. Через 3 дня после начала лечения наступили значительные улучшения: отек и болезненность практически исчезли, появилась грануляции, началась краевая эпителизация раны. На 5-6-й день лечения наступило полное заживление раны.

2. Собака породы лабрадор по кличке «Феликс», 3 года. Диагноз: ожоги II-IIIA степени в области холки размером с ладонь. Было назначено следующее лечение: место ожога протирать хлоргексидином, мазать «Спасателем» и раз в день внутримышечные инъекции заявленного препарата по 1 мл в течение 4 дней. На 3-и сутки после начала лечения значительно уменьшался отек краев раневого дефекта, снижались гиперемия и инфильтрация тканей, от края раны начинал нарастать эпителий. На 5-е сутки ожоговая рана заполнилась грануляционной тканью, происходило частичное отторжение струпа. Полностью рана эпитализировались к 7 суткам.

3. Собака породы китайская хохлатая по кличке «Тильда», 3,5 года. Диагноз: долго незаживающая гнойная рана в области бедра (полученная в результате укуса). Проводимое ранее лечение (левомиколь) не дало результатов. Было назначено заявляемое средство внутримышечно по 1 мл 1 раз в день. После первой инъекции уменьшились гнойные выделения, уменьшился отек. На 2-й день лечения признаки воспаления и гнойные выделения исчезли, наблюдаются активная грануляция и эпителизация пораженного места. Всего было сделано 3 инъекции препарата, после чего наступило полное заживление раны уже на 4-5 день, после начала лечения.

4. Собака породы кане-корсо, 11 месяцев, кличка «Леон». Диагноз: растяжение связок в коленном суставе. Назначено заявленное средство в дозе 1 мл внутримышечно, 1 раз в день. Уже после первой инъекции наблюдалось улучшение состояния (уменьшение отека, болезненности), после 3-й инъекции - прошла хромота.

5. Собака породы немецкая овчарка по кличке «Барон», 7 лет. Диагноз: мокнущая экзема (долго не заживала). Лечение: ежедневные инъекции заявляемого препарата по 1 мл в комплексе с (уже применяемыми ранее) повязками с левомеколем. Уже на 2-й день лечения покраснение пораженной поверхности заметно уменьшилось, уменьшился зуд, после 3-го дня лечения - стадия «мокнутия» перешла в корковую - на месте повреждений кожи образовались корки, участки кожи вокруг них стали сухими и начали покрываться чешуйками. К 6-7 дню лечения наблюдалось выздоровление.

Таким образом, заявляемый препарат показывает терапевтический эффект во всех наблюдаемых случаях применения, обладает выраженными регенеративной, тонизирующей, противовоспалительной, иммуностимулирующей активностью и предназначен для терапии в послеоперационный период, улучшения уровня жизни стареющих животных, а также для лечения дегенеративных заболеваний (цирроза печени, фиброза легких и др.), острых и хронических заболеваний кожи.

Рекомендации по применению предлагаемого препарата:

заявленный препарат рекомендовано применять путем внутримышечных или внутривенных инъекций один раз в день в течение 3-7 дней ежедневно. При необходимости курс повторить через 3-4 дня.

Источники информации

1. Иммуномодулятор-метаболик-детоксикант-адаптоген-радиопротектор. Патент на изобретение №2194502. Приор. 27.12.2000.

2. Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. Клеточная терапия: новые подходы // Наука в России. - Москва: Изд-во «Наука», 2009. - Том 169. - №1. С. 4-8.

3. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В., Зюзьков Г.Н., Мирошниченко Л.А., Симанина Е.В., Ставрова Л.А., Удут Е.В., Фонима Т.Н., Ветошкина Т.В., Хричкова Т.Ю., Ермакова Н.Н., Плотников М.Б., Алиев О.И., Чернышова Г.А. Фармакологические аспекты регенеративной медицины // Бюл. эксперим. биол. и медицины. - 2008. - Приложение 2. - С. 14-21.

4. Патофизиология: Учебник для медицинских ВУЗов. / Под ред. В.В. Новицкого, Е.Д. Гольдберга. - Томск: Изд-во Томского ун-та, 2001. - 681-687.

5. Дыгай A.M., Зюзьков Т.Н., Жданов В.В., Мадонов П.Г., Артамонов А.В., Бекарев А.А., Удут В.В. Иммобилизированный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор. Фармакологические свойства и перспективы использования. - Томск: Изд-во: ООО «Печатная мануфактура», 2011. - 149 с.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к ветеринарной терапии, и может быть использовано для стимуляции регенеративных процессов в организме собаки. Средство состоит из экстракта мезенхимальных стволовых клеток (МСК) и кондиционной среды, получаемой в процессе культивирования МСК, при этом средство получено с использованием следующих этапов: выделение de novo или деконсервирование культуры МСК из костного мозга или жировой ткани собаки, культивирование и накопление МСК, получение и сбор кондиционной среды, получение экстракта МСК путем замораживания-оттаивания клеточной суспензии, добавление глицина в концентрации 20 мг/мл к смеси экстракта МСК и кондиционной среды, стерилизация, розлив во флаконы, лиофильная сушка. Изобретение может быть использовано в клинической практике при лечении травм кожи и опорно-двигательного аппарата, при поражениях печени собаки, в послеоперационный период и для улучшения уровня жизни стареющих животных. При этом средство стабильно за счет добавления указанной концентрации глицина, удобно в применении за счет лекарственной формы. 4 ил., 4 табл., 7 пр.

Средство для собак, обладающее регенеративной активностью, состоящее из экстракта мезенхимальных стволовых клеток (МСК) и кондиционной среды, получаемой в процессе культивирования МСК, при этом средство получено с использованием следующих этапов: выделение de novo или деконсервирование культуры МСК из костного мозга или жировой ткани собаки, культивирование и накопление МСК, получение и сбор кондиционной среды, получение экстракта МСК путем замораживания-оттаивания клеточной суспензии, добавление глицина в концентрации 20 мг/мл к смеси экстракта МСК и кондиционной среды, стерилизация, розлив во флаконы, лиофильная сушка.