Способ сбора и первичного посева жидкости назального лаважа от пациентов с муковисцидозом для микробиологического исследования Российский патент 2018 года по МПК G01N33/487 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для сбора и первичного посева жидкости назального лаважа, собранной от пациентов с муковисцидозом для проведения микробиологического исследования.

Уровень техники

Известны способы сбора и первичного посева жидкости назального лаважа от пациентов с муковисцидозом для микробиологического исследования с использованием 10 мл 0,9% раствора NaCl с последующим сбором вытекающей лаважной жидкости в стерильный контейнер и посевом на питательные среды; с использованием 5 мл 0,9% раствора NaCl с последующим сбором вытекающей лаважной жидкости либо ее аспирацией в стерильный контейнер; с использованием эндоскопического забора материала из параназальных пазух с введением 5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl в каждый носовой ход с последующей аспирацией через в стерильный пластиковый контейнер, с последующим посевом на питательные среды: шоколадный агар, кровяной агар с азтреонамом и колистином, селективный агар для Burkholderia cepacia (ВС-агар), CLED-агар и агар Сабуро.

Известен способ сбора и первичного посева жидкости назального лаважа от пациентов с муковисцидозом для микробиологического исследования, основанный на введении в каждую носовую полость пациента по 10 мл 0,9% раствора NaCl с последующим самостоятельным сбором вытекающей жидкости назального лаважа пациентом в стерильный контейнер с последующим посевом на питательные среды в соответствии с немецким стандартом по микробиологической диагностике при муковисцидозе [J.G. Mainz, L. Naehrlich et al. Concordant genotype of upper and lower airways P. aeruginosa and S. aureus isolates in cystic fibrosis / Thorax 2009; 64:535-540].

Недостатками данного способа является малый объем свободно вытекающей промывной жидкости, который может быть недостаточен для проведения исследования, а также изотоничность применяемого раствора, что может не в полной мере отражать микробиологическую картину в параназальных пазухах ввиду отсутствия градиента осмотического давления.

Известен способ сбора жидкости назального лаважа, основанный на введении в каждый носовой ход по 5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl, с последующим нахождением пациента в таком положении в течение 3-5 с; при этом для сбора материала опускают голову пациента вперед, чтобы жидкость вылилась из носовых ходов в стерильный одноразовый контейнер или аспирируют жидкость введением резинового дренажа в каждую ноздрю [МУ 4.2.2039-05. Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории].

Недостатками данного метода является малый объем свободно вытекающей промывной жидкости, который может быть недостаточен для проведения исследования, а также изотоничность применяемого раствора, что может не в полной мере отражать микробиологическую картину в параназальных пазухах ввиду отсутствия градиента осмотического давления с учетом повышенной вязкости отделяемого секрета при муковисцидозе.

За прототип принимается метод сбора и первичного посева жидкости назального лаважа от пациентов с муковисцидозом для микробиологического исследования, основанный на эндоскопическом заборе материала из параназальных пазух с введением 5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl в каждый носовой ход, с последующей аспирацией через 10 с в стерильный пластиковый контейнер, с последующим посевом на питательные среды: шоколадный агар, кровяной агар с азтреонамом и колистином, селективный агар для Burkholderia cepacia (ВС-агар), CLED-агар и агар Сабуро с инкубацией при 37°С до 7 сут с просмотром посевов каждые 8-16 ч [M.C. Berkhout, E. Rijntjes et al. Importance of bacteriology in upper airways of patients with Cystic Fibrosis / Journal of Cystic Fibrosis 12 (2013) 525-529].

Недостатками данного метода является необходимость эндоскопического забора материала, что значительно ограничивает возможности его использования для большинства пациентов с муковисцидозом.

Раскрытие изобретения

Задачей изобретения является получение адекватного по качественному и количественному составу биоматериала из жидкости назального лаважа пациентов с муковисцидозом с последующим получением в первичном посеве максимально возможного по широте спектра выделенных возбудителей с использованием минимального количества питательных сред.

Это достигается тем, что в отличие от известных способов сбора и первичного посева жидкости назального лаважа от пациентов с муковисцидозом для микробиологического исследования используется промывание полостей носа стерильным 1,5-2% раствором NaCl с помощью индивидуального назального душа с последующим сбором свободно вытекающей лаважной жидкости в стерильный одноразовый контейнер, последующим вортексированием и первичным посевом 200 мкл выделенной жидкости на 5 питательных сред, включающих в себя 5% кровяной агар, шоколадный агар, универсальную хромогенную среду, селективную среду для Burkholderia cepacia (OFPBL- агар), а также агар Сабуро.

Осуществление изобретения

Сущность предложенного метода заключается в следующем: полость носа промывается стерильным 1,5-2% раствором NaCl с помощью индивидуального назального душа с последующим сбором свободно вытекающей лаважной жидкости в стерильный одноразовый контейнер; собранный материал транспортируется в лабораторию не позднее 2 ч после сбора, вортексирируется, после этого производится посев 200 мкл собранного материала стерильным тампоном на 5 питательных сред, включающих в себя 5% кровяной агар, шоколадный агар, универсальную хромогенную среду, селективную среду для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар), а также агар Сабуро с использованием техники посева «газоном». Затем засеянные чашки с 5% кровяным агаром, универсальной хромогенной средой инкубируются в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 ч с ежедневным просмотром посевов. Чашки с шоколадным агаром инкубируются при 35°С в атмосфере 5-7% СО₂ в течение 24-48 ч с ежедневным просмотром посевов. Засеянные чашки с селективной средой для Burkholderia cepacia (OFPBL-arap) и агаром Сабуро инкубируются 24-48 ч при температуре 37°С, далее инкубируются до 14 сут при комнатной температуре с ежедневным просмотром посевов. Затем осуществляется идентификация и пересчет выросших КОЕ на 1 мл лаважной жидкости.

Изобретенная методика позволяет получать точные качественные и количественные характеристики состояния микробиоценоза назальных пазух пациентов с муковисцидозом.

Это может быть необходимо для проведения регулярного микробиологического мониторинга пациентов с муковисцидозом с целью ранней профилактики развития бактериальных осложнений нижних дыхательных путей, а также для статистических исследований в рамках ведения ежегодного единого Регистра больных муковисцидозом в Российской Федерации [проект Регистр больных муковисцидозом Российской Федерации одобрен Комитетов по Этике ФГБНУ «МГНЦ» 20 декабря 2012 г.].

В предложенном способе сбора и первичного посева жидкости назального лаважа от пациентов с муковисцидозом для микробиологического исследования предусмотрены следующие отличия - использование гипертонического раствора NaCl в концентрации 1,5-2% позволяет более эффективно осуществлять сбор биоматериала ввиду создания градиента осмотического давления с учетом повышенной вязкости отделяемого секрета при муковисцидозе, при этом не создает дискомфорта для пациента при осуществлении процедуры; кроме этого, метод сбора материала является доступным и легко воспроизводимым в амбулаторных условиях для большинства пациентов; использование указанного набора питательных сред и способа первичного посева позволяет выявить в исследуемом образце максимальное количество микроорганизмов, а также определить их количественное содержание в 1 мл.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для сбора и первичного посева жидкости назального лаважа пациентов с муковисцидозом для проведения микробиологического исследования. Для этого полость носа промывается стерильным 1,5-2% раствором NaCl с помощью индивидуального назального душа с последующим сбором свободно вытекающей лаважной жидкости в стерильный одноразовый контейнер. Собранный материал транспортируется в лабораторию не позднее 2 ч после сбора и вортексирируется. Посев 200 мкл собранного материала производят стерильным тампоном на 5 питательных сред, включающих 5% кровяной агар, шоколадный агар, универсальную хромогенную среду, селективную среду для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар), а также агар Сабуро с использованием техники посева «газоном». Чашки с 5% кровяным агаром, универсальной хромогенной средой инкубируются в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 ч с ежедневным просмотром посевов. Чашки с шоколадным агаром инкубируются при 35°С в атмосфере 5-7% СО₂ в течение 24-48 ч с ежедневным просмотром посевов. Засеянные чашки с селективной средой для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) и агаром Сабуро инкубируются 24-48 ч при температуре 37°С, далее инкубируются до 14 сут при комнатной температуре с ежедневным просмотром посевов, их последующей идентификацией и пересчетом КОЕ на 1 мл лаважной жидкости. Изобретение обеспечивает адекватное получение биоматериала из жидкости назального лаважа больных муковисцидозом с последующей качественной и количественной оценкой микробиоценоза назальных пазух пациента. 1 пр.

Способ сбора и первичного посева жидкости назального лаважа от пациентов с муковисцидозом для микробиологического исследования. отличающийся тем, что полость носа промывается стерильным 1,5-2% раствором NaCl с помощью индивидуального назального душа с последующим сбором свободно вытекающей лаважной жидкости в стерильный одноразовый контейнер; собранный материал транспортируется в лабораторию не позднее 2 ч после сбора, вортексирируется, после этого производится посев 200 мкл собранного материала стерильным тампоном на 5 питательных сред, включающих в себя 5% кровяной агар, шоколадный агар, универсальную хромогенную среду, селективную среду для Burkholderia cepacia (OFPBL- агар), а также агар Сабуро с использованием техники посева «газоном»; затем засеянные чашки с 5% кровяным агаром, универсальной хромогенной средой инкубируются в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 ч с ежедневным просмотром посевов; чашки с шоколадным агаром инкубируются при 35°С в атмосфере 5-7% СО₂ в течение 24-48 ч с ежедневным просмотром посевов; засеянные чашки с селективной средой для Burkholderia cepacia (OFPBL- агар) и агаром Сабуро инкубируются 24-48 ч при температуре 37°С, далее инкубируются до 14 сут при комнатной температуре с ежедневным просмотром посевов; затем осуществляется идентификация и пересчет выросших КОЕ на 1 мл лаважной жидкости.