ТРИЦИКЛИЧЕСКОЕ СОЕДИНЕНИЕ И ИНГИБИТОР JAK Российский патент 2018 года по МПК C07D471/14 A61K31/519 A61K31/4375 A61P29/00 A61P43/00 A61P19/02 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к новым трициклическим соединениям, обладающим ингибирующим действием в отношении JAK.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Семейство янус-киназ (Janus kinase - JAK) представляет собой семейство тирозинкиназ, включающее четыре представителя, JAK1, JAK2, JAK3 и TYK (тирозин-киназа) 2, и играет важную роль в передаче цитокиновых сигналов фосфорилированием STAT (signal transducers and activators of transcription - STATs).

Исследования JAK1 нокаутных мышей и JAK1-дефицитных клеток дают возможность сделать предположение об участии JAK1 в различных рецептор-опосредуемых путях передачи сигнала, таких как передача сигнала, опосредуемая интерфероном α (IFNα), IFNβ, IFNγ, интерлейкином-2 (IL-2), IL-4, IL-6, IL-7 и IL-15 (Непатентный документ 1). Поэтому регуляция воспалительных реакций через эти пути передачи сигнала является терапевтически перспективной для лечения заболеваний, в которые вовлечена активация макрофагов и лимфоцитов, таких как аутоиммунные заболевания, а также острое и хроническое отторжение трансплантата органа.

Исследования JAK2 нокаутных мышей и JAK2-дефицитных клеток дают возможность сделать предположение об участии JAK2 в различных рецептор-опосредуемых путях передачи сигнала, таких как передача сигнала EPO (эритропоэтин), ТПО (тромбопоэтин), IFNγ, IL-3, GM-CSF (гранулоцито-макрофаго-колониестимулирующий фактор) (Непатентные документы 2, 3 и 4). Считается, что эти пути передачи сигнала проводят дифференциацию клеток-предшественников эритроцитов или тромбоцитов в костном мозге.

Между тем, предполагается, что замещение фенилаланина-617 в JAK2 на валин ассоциируется с миелопролиферативными заболеваниями (Непатентный документ 2). Таким образом, регуляция дифференциации миелоидных клеток-предшественников с помощью этих механизмов является терапевтически перспективной для лечения хронических миелопролиферативных заболеваний.

JAK3 играет важную роль в различных рецептор-опосредуемых путях передачи сигнала, таких как IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 и IL-21 передача сигнала посредством нековалентного связывания с обычной γ цепью (Непатентные документы 5 и 6).

Снижение уровней JAK3 белка или дефекты в гене обычной γ цепи, наблюдаемые у пациентов с иммунодифицитом, называемым X-сцепленным тяжелым комбинированным иммунодефицитом (XSCID), дают возможность предположить, что блокирование JAK3 пути передачи сигнала приводит к иммуносупрессии (Непатентные документы 7 и 8).

Эксперименты на животных показывают важность JAK3 не только в процессе возревания B- и T-лимфоцитов, но также и в поддержании функций T-лимфоцитов. Поэтому регуляция иммунных реакций посредством этого механизма является перспективной терапией для Т-клеточных лимфопролиферативных заболеваний, таких как отторжение трансплантанта органа и аутоиммунные заболевания.

В клетках лейкоза и лимфомы и клетках многих солидных опухолей JAK и STAT активированы постоянно (Непатентный документ 9). Это показывает, что ингибиторы JAK, как ожидается, лечат рак и лейкоз подавлением роста раковых клеток.

Сообщалось, что JAK ингибитор CP-690, 550 улучшает патологию ревматоидного артрита и псориаза в клинических испытаниях (Непатентные документы 10 и 11) и подавляет отторжение трансплантата почки в модели обезьяны и воспаление дыхательных путей в модели астмы мыши (Непатентные документы 12 и 13).

На основании этих результатов исследований считается, что иммуносупрессия ингибиторами JAK может применяться для профилактики или лечения отторжения трансплантата органа и посттрансплантационной реакции «трансплантат против хозяина», а также аутоиммунных и аллергических заболеваний. Хотя и были описаны соединения, обладающие ингибирующим действием в отношении JAK, помимо CP 690, 550 (Патентные документы с 1 по 15), существует потребность в разработкн большего количества таких соединений.

В Патентном документе 15 описываются некотрые трициклические гетероциклические соединения, обладающие JAK-ингибирующей активностью, однако нет конкретного описания соединений по настоящему изобретению.

ДОКУМЕНТЫ ПРЕДШЕСТВУЮЩЕГО УРОВНЯ

ПАТЕНТНЫЕ ДОКУМЕНТЫ

Патентный документ 1: WO 2001/042246 Патентный документ 2: WO 2007/007919 Патентный документ 3: WO 2007/077949 Патентный документ 4: WO 2008/084861 Патентный документ 5: WO 2009/152133 Патентный документ 6: WO 2010/119875 Патентный документ 7: WO 2011/045702 Патентный документ 8: WO 2011/068881 Патентный документ 9: WO 2011/068899 Патентный документ 10: WO 2011/075334 Патентный документ 11: WO 2011/086053 Патентный документ 12: WO 2012/085176 Патентный документ 13: WO 2012/127506 Патентный документ 14: WO 2012/149280 Патентный документ 15: WO 2013/024895

НЕПАТЕНТНЫЕ ДОКУМЕНТЫ

Непатентный документ 1: J. Immunol., 2007, 178, pp. 2623-2629 Непатентный документ 2: Pathol. Biol., 2007, 55, pp. 88-91 Непатентный документ 3: Cancer Genet. Cytogenet., 2009, 189, pp. 43-47 Непатентный документ 4: Semin. Cell. Dev. Biol., 2008, 19, pp. 385-393 Непатентный документ 5: Cell, 2002, 109, pp. S121-131 Непатентный документ 6: Science, 2002, 298, pp. 1630-1634 Непатентный документ 7: Nature, 1995, 377, pp. 65-68 Непатентный документ 8: Science, 1995, 270, pp. 797-800 Непатентный документ 9: JAK-STAT., 2013, 2, e23828 Непатентный документ 10: Arthritis Rheum., 2009, 60, pp. 1895-1905 Непатентный документ 11: J Invest. Dermatol., 2009, 129, pp. 2299-2302 Непатентный документ 12: Science, 2003, 302, pp. 875-878 Непатентный документ 13: Eur. J. Pharmacol., 2008, 582, pp. 154-161

ОПИСАНИЕ ТЕХНИЧЕСКОЙ ЗАДАЧИ, КОТОРУЮ РЕШАЕТ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Целью настоящего изобретения является предоставление новых лекарственных соединений, обладающих превосходной ингибирующей активностью в отношении JAK и применимых для предотвращения, лечения или достижения положительной динамики аутоиммунных, воспалительных и аллергических заболеваний.

РЕШЕНИЕ ТЕХНИЧЕСКОЙ ЗАДАЧИ

В результате обширных исследований в поисках новых низкомолекулярных соединений, обладающих ингибирующей активностью в отношении JAK, авторы настоящего изобретения обнаружили, что соединения по настоящему изобретению обладают высокой ингибирующей активностью в отношении цитокиновой передачи сигнала JAK семейством в цельной крови крыс или цельной крови человека, и достигли цели настоящего изобретения. Таким образом, настоящее изобретение предоставляет описанные далее предметы изобретения.

(1) Соединение, представленное формулой (I):

[где А¹ представляет собой С_3-7 циклоалкиленовую группу, L¹ представляет собой С_1-6 алкиленовую группу, Х¹ представляет собой O или NH, и когда Х¹ представляет собой О, R¹ представляет собой C_1-6 галогеналкильную группу, циано-С_1-6 галогеналкильную группу или циано-С_1-6 алкильную группу, и когда Х¹ представляет собой NH, R¹ представляет собой циано-C_1-6 галогеналкильную группу или циано-С_1-6 алкильную группу], таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(2) Соединение по пункту (1), в котором L¹ представляет собой метиленовую группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(3) Соединение по пункту (1) или (2), в котором А¹ представляет собой циклогександиильную группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(4) Соединение по любому из пунктов с (1) по (3), в котором Х¹ представляет собой О, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(5) Соединение по пункту (4), в котором R¹ представляет собой С_1-4 галогеналкильную группу, таутомер указанного соединения,. его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(6) Соединение по пункту (4), в котором R¹ представляет собой 3,3,3-трифторпропильную группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(7) 1-{транс-4-[(3,3,3-Трифторпропокси)метил]циклогексил}-1Н-пирроло[3',2':5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3H,7H)-дион, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(8) Соединение по любому из пунктов с (1) по (3), в котором Х¹ представляет собой NH, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(9) Соединение по пункту (8), в котором R¹ представляет собой циано-С_1-4 галогеналкильную группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(10) Соединение по пункту (8), в котором R¹ представляет собой 3-циано-1,1,1-трифтор-2-ильную группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(11) 3-({[транс-4-(2,4-Диоксо-2,3,4,7-тетрагидро-1H-пирроло[3',2':5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4- трифторбутаннитрил, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(12) (R)-3-({[транс-4-(2,4-Диоксо-2,3,4,7-тетрагидро-1H-пирроло[3',2':5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4-трифторбутаннитрил, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(13) Соединение, представленное формулой (II):

[где А² представляет собой С_3-7 циклоалкиленовую группу, L² представляет собой С_1-6 алкиленовую группу, R² представляет собой 5-10-членную ароматическую гетероциклическую группу (гетероциклическая группа может быть замещенной одним или двумя одинаковыми или различными заместителями, независимо выбранными из группы, включающей атомы галогенов, C_1-4 алкильные группы и С_1-4 галогеналкильные группы)], таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(14) Соединение по пункту (13), в котором L² представляет собой метиленовую группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(15) Соединение по пункту (13) или (14), в котором А² представляет собой циклогександиильную группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(16) Соединение по любому из пунктов с (13) по (15), в котором R² представляет 5-6-членную ароматическую азотсодержащую гетероциклическую группу (гетероциклическая группа может быть замещенной одним или двумя одинаковыми или различными заместителями, независимо выбранными из группы, включающей атомы галогенов, метильные группы и трифторметильные группы), таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(17) Соединение по любому из пунктов с (13) по (16), в котором R² представляет собой пиразолильную группу (пиразолильная группа может быть замещенной одним или двумя одинаковыми или различными заместителями, независимо выбранными из группы, включающей атомы галогенов, метильную и трифторметильную группы), таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(18) 1-{транс-4-[(4-Метилпиразол-1-ил)метил]циклогексил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(19) Соединение, представленное формулой (III):

[в котором А³ представляет собой С_3-7 циклоалкиленовую группу, L³ представляет собой С_1-6 алкиленовую группу, Х³ представляет собой O или NH, и когда Х³ представляет собой О, R³ представляет собой C_1-6 галогеналкильную группу, циано-С_1-6 галогеналкильную группу или циано-C_1-6 алкильную группу, и когда Х³ представляет собой NH, R³ представляет собой циано-С_1-6 галогеналкильную группу или циано-C_1-6 алкильную группу], таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(20) Соединение по пункту (19), в котором L³ представляет собой метиленовую группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(21) Соединение по пункту (19) или (20), в котором А³ представляет собой циклогександиильную группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(22) Соединение по любому из пунктов с (19) ио (21), в котором Х³ представляет собой О, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(23) Соединение по пункту (22), в котором R³ представляет С_1-4 галогеналкильную группу или циано-С_1-6 галогеналкильную группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(24) Соединение по пункту (22), в котором R³ представляет собой 2,2,2-трифторэтильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(25) Соединение по пункту (22), в котором R³ представляет собой 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу или 2-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(26) 1-{транс-4-[(2,2,2-Трифторэтокси)метил]циклогексил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(27) 1-{транс-4-[(3,3,3-Трифторпропокси)метил]циклогексил}-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин - 4(7H) - ВКЛ, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(28) 4,4,4-Трифтор-3-{[транс-4-(4-оксо-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метокси}бутаннитрил, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(29) (R)-4,4,4-Трифтор-3-{[транс-4-(4-оксо-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метокси}бутаннитрил, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(30) Соединение по любому из пунктов с (19) по (21), в котором Х³ представляет собой NH, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(31) Соединение по пункту (30), в котором R³ представляет собой циано-С_1-4 галогеналкильную группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(32) Соединение по пункту (30), в котором R³ представляет собой 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(33) 4,4,4-Трифтор-3-({[транс-4-(4-оксо-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метил}амино)бутаннитрил, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(34) (R)-4,4,4-Трифтор-3-({[транс-4-(4-оксо-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метил}амино)бутаннитрил, таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

(35) Ингибитор JAK, содержащий соединение, которое определено в любом из пунктов с (1) по (34), таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемую соль или сольват в качестве активного ингредиента.

(36) Профилактическое, терапевтическое средство или средство для облегчения заболеваний, для лечения которых ингибирование JAK является эффективным, которое содержит соединение по любому из пунктов с (1) по (34), таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемую соль или сольват.

(37) Терапевтическое средство для лечения ревматоидного артрита, которое содержит соединение по любому из пунктов с (1) по (34), таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемую соль или сольват.

(38) Лекарственное средство, содержащее соединение по любому из пунктов с (1) по (34), таутомер указанного соединения, его фармацевтически приемлемую соль или сольват.

ПОЛЕЗНЫЙ(Е) ЭФФЕКТ(Ы) ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение позволило получить новые трициклические соединения, которые обладают превосходным JAK-ингибирующим действием и которые особенно полезны в профилактике, лечении или достижении положительной динамики аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний и аллергических заболеваний.

ОПИСАНИЕ ВАРИАНТА(ОВ) ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно.

В настоящем изобретении «н-» означает нормальный, «i-» означает изо, «s-» и «втор» означают вторичный, ʺt-ʺ и ʺтрет-ʺ означают третичный, ʺц-ʺ означает цикло, ʺo-ʺ означает орто, ʺм-ʺ означает мета, ʺп-ʺ означает пара, ʺцис-ʺ означает цис-изомер, ʺтранс-ʺ означает транс-изомер, ʺрац-ʺ и "рацематʺ означают рацемат, ʺPhʺ означает фенил, ʺPyʺ означает пиридил, ʺMeʺ означает метил, ʺEtʺ означает этил, ʺPrʺ означает пропил, ʺBuʺ означает бутил, ʺBocʺ означает третичный бутоксикарбонил, ʺMsʺ означает метансульфонил, ʺTfʺ означает трифторметансульфонил, ʺTsʺ означает п-толуолсульфонил, ʺSEMʺ означает [2-(триметилсилил)этокси]метил, ʺTIPSʺ означает триизопропилсилил, ʺTMSʺ означает триметилсилил, и ʺAcʺ означает ацетил.

Сначала будут объяснены значения терминов, используемых в данном описании.

«Атом галогена» представляет собой атом фтора, атом хлора, атом брома или атом йода.

«C_1-4 алкильная группа» представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, н-бутильную группу, изобутильную группу, втор-бутильную группу или трет-бутильную группу.

«C_1-6 алкильная группа» представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, содержащую от одного до шести атомов углерода, и, в дополнение к указанным выше конкретным примерам «C_1-4 алкильной группы», могут быть упомянуты н-пентильная, н-гексильная группа и т.п.

«Циано-C_1-6 алкильная группа» представляет собой группу, полученную из вышеупомянутой «C_1-6 алкильной группы» замещением одного или нескольких атомов водорода в произвольном(ых) положении(ях) одной или несколькими цианогруппами. В качестве конкретных примеров могут быть указаны цианометильная группа, 2-цианоэтильная группа, 1-цианопропан-2-ильная группа, 2-цианопропан-2-ильная группа, 3-цианопропильная группа, 1,3-дицианопропан-2-ильная группа, 1-цианобутан-2-ильная группа, 4-цианобутильная группа, 5-цианопентильная группа, 6-цианогексильная группа и т.п.

«C_1-4 галогеналкильная групп» представляет собой группу, полученную из вышеупомянутой «C_1-4 алкильной группы» замещением одного или нескольких атомов водорода в произвольном(ых) положении(ях) одним или несколькими одинаковыми или различными атомами галогенов, выбранными из группы, включающей атом фтора, атом хлора, атом брома и атом йода. В качестве конкретных примеров могут быть упомянуты трифторметильная группа, пентафторэтильная группа, 2,2,2-трифторэтильная группа, 3,3,3- трифторпропильная группа, 4,4,4-трифторбутильная группа, 4,4,4-трифторбутан-2-ильная группа, 2,2-дифторэтильная группа, 2,2-дифторпропильная группа, 2-хлорэтильная группа, 3-бромпропильная группа, 4-йодбутильная группа и т.п.

«C_1-6 галогеналкильная группа» представляет собой группу, полученную из вышеупомянутой «C_1-6 алкильной группы» замещением одного или нескольких атомов водорода в произвольном(ных) положении(ях) одинаковыми или различными атомами галогенов, выбранных из группы, включающей атом фтора, атом хлора, атом брома и атом йода. В качестве конкретных примеров, в дополнение к упомянутым выше конкретным примерам «C_1-4 галогеналкильной группы», могут быть упомянуты 5,5,5-трифторпентильная группа, 6,6,6-трифторгексильная группа, 5-хлорпентильная группа, 6-бромгексильная группа и т.п.

«Циано-C_1-4 галогеналкильная группа» представляет собой группу, полученную из вышеупомянутой «C_1-4 галогеналкильной группы» замещением одного или нескольких атомов водорода в произвольном(ых) положении(ях) одной или несколькими цианогруппами. В качестве конкретных примеров могут быть упомянуты 1-циано-2,2,2-трифторэтильная группа, 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильная группа, 2-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильная группа, 4-циано-1,1,1-трифторбутан-2-ильная группа и т.п.

«Циано C_1-6 галогеналкильная группа» представляет собой группу, полученную из вышеупомянутой «C_1-6 галогеналкильной групп» замещением одного или нескольких атомов водорода в произвольном(ых) положении(ях) одной или несколькими цианогруппами. В качестве конкретных примеров, в дополнение к упомянутым выше конкретным примерам «циано-C_1-4 галогеналкильной группы», могут быть упомянуты 5-циано-1,1,1-трифторпентан-2-ильная группа, 6-циано-1,1,1-трифторгексан-2-ильная группа и т.п.

«C_3-7 циклоалкан» представляет собой моноциклический конденсированный, мостиковый или спиро-алифатический углеводородный цикл, содержащий от 3 до 7 атомов углерода, образующих кольцо. В качестве конкретных примеров могут быть упомянуты циклопропан, циклобутан, циклопентан, циклогексан, циклогептан, бицикло[2.2.1]гептан и т.п.

«C_3-7 циклоалкильная группа» представляет собой моновалентную группу, полученную из вышеупомянутого «C_3-7 циклоалкана» удалением атома водорода в произвольном положении. В качестве конкретных примеров могут быть упомянуты циклопропильная группа, циклобутильная группа, циклопентильная группа, циклогексильная группа, циклогептильная группа, бицикло[2.2.1]гептан-1-ильная группа, бицикло[2.2.1]гептан-2-ильная группа, бицикло[2.2.1]гептан-7-ильная группа и т.п.

«C_1-6 алкиленовая группа» представляет собой бивалентную группу, полученную из вышеупомянутой «C_1-6 алкильной группы» удалением атома водорода в произвольном положении. В качестве конкретных примеров могут быть упомянуты метилeновая группа, этиленовая группа, пропан-1,3-ильная группа, пропан-1,2-диильная группа, 2,2-диметилпропан-1,3-диильная группа, гексан-1,6-диильная группа, 3-метилбутан-1,2-диильная группа и т.п.

«C_3-7 циклоалкиленовая группа» представляет собой бивалентную группу, полученную из вышеупомянутой «C_3-7 циклоалкильной группы» удалением атома водорода в произвольном положении. В качестве конкретных примеров могут быть упомянуты циклопропан-1,2-диильная группа, циклобутан-1,3-диильная группа, циклопентан-1,3-диильная группа, циклогексан-1,4-диильная группа, циклогексан-1,3-диильная группа, циклопентан-1,4-ильная группа и т.п.

«5-10-членное ароматическое гетероциклическое кольцо» представляет собой моноциклическую или конденсированную ароматическую гетероциклическую группу, содержащую от 5 до 10 атомов, образующих кольцо, включая атомы углерода и один или несколько гетероатомов (таких как атомы азота, атомы кислорода или атомы серы). В качестве конкретных примеров могут быть упомянуты фуран, тиофен, пиррол, имидазол, триазол, тетразол, тиазол, пиразол, оксазол, изоксазол, изотиазол, тиадиазол, оксадиазол, пиридин, пиразин, пиридазин, пиримидин, триазин, пурин, птеридин, хинолин, изохинолин, нафтилидин, хиноксалин, циннолин, хиназолин, фталазин, имидазопиридин, имидазотиазол, имидазооксазол, бензотиазол, бензоксазол, бензимидазол, индол, пирролопиридин, тиенопиридин, фуропиридин, бензотиадиазол, бензоксадиазол, пиридопиримидин, бензофуран, бензотиофен, тиенофуран и т.п.

В случае, когда 5-10-членное ароматическое гетероциклическое кольцо содержит двойную связь C=N, оно может быть в форме N-оксида.

«5-10-членная ароматическая гетероциклическая группа» представляет собой моновалентную группу, полученную из вышеупомянутого «5-10-членного ароматического гетероциклического кольца» удалением атома водорода в произвольном положении.

«5-6-членное ароматическое гетероциклическое кольцо» представляет собой среди вышеупомянутых групп «5-10 членного ароматического кольца» группу, содержащую 5 или 6 атомов, образующих кольцо. В качестве конкретных примеров могут быть упомянуты пиррол, пиразол, имидазол, триазол, тетразол, пиридин, пиридазин, пиримидин, пиразин, триазин, фуран, тиофен, тиазол, изотиазол, оксазол, изоксазол, оксадиазол, тиадиазол и т.п.

«Азотсодержащее 5-6-членное ароматическое гетероциклическое кольцо» представляет собой среди вышеупомянутых групп «5-6-членного ароматического гетероциклического кольца» группу ароматического гетероциклического кольца, содержащего один или несколько атомов азота в качестве атомов, образующих кольцо. В качестве конкретных примеров могут быть упомянуты пиррол, пиразол, имидазол, триазол, тетразол, пиридин, пиридазин, пиримидин, пиразин, триазин, тиазол, изотиазол, оксазол, изоксазол, оксадиазол, тиадиазол и т.п.

«Азотсодержащая 5-6-членная ароматическая гетероциклическая группа» представляет собой моновалентную группу, полученную из вышеупомянутой группы «азотсодержащего 5-6-членного ароматического гетероциклического кольца» удалением атома водорода в произвольном положении.

Далее будут показаны предпочтительные структуры соответствующих заместителей согласно настоящему изобретению.

A¹ предпочтительно представляет собой циклопентандиильную группу, циклогександиильную группу или циклогептандиильную группу, более предпочтительно циклогександиильную группу, еще более предпочтительно - циклогексан-1,4-диильную группу.

L¹ предпочтительно представляет собой метиленовую группу или этилeновую группу, более предпочтительно метиленовую группу.

X¹ предпочтительно представляет собой O или NH.

Когда X¹ представляет собой O, R¹ предпочтительно представляет собой 2,2,2-трифторэтильную группу, 3,3,3-трифторпропильную группу, 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу или 2-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу, более предпочтительно 3,3,3-трифторпропильную группу.

Когда X¹ представляет собой NH, R¹ предпочтительно представляет собой 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу или 1-цианопропан-2-ильную группу, более предпочтительно 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу.

A² предпочтительно представляет собой циклопентандиильную группу, циклогександиильную группу или циклогептандиильную группу, более предпочтительно циклогександиильную группу, еще более предпочтительно циклогексан-1,4-диильную группу.

L² предпочтительно представляет собой метиленовую группу или этиленовую группу, более предпочтительно метиленовую группу.

R² предпочтительно представляет собой пирролильную группу, тиенильную группу, фурильную группу, пиразолильную группу, имидазолильную группу, тиазолильную группу, изотиазолильную группу, оксазолильную группу, изоксазолильную группу, 1H-1,2,4-триазолильную группу, 4H-1,2,4-триазолильную группу, пиридильную группу, пиридазинильную группу, пиримидинyю группу, пиразинильную группу или 1,3,5-триазинильную группу (каждая из упомянутых групп от пирролильной группы до 1,3,5-триазинильной группы может быть замещенной одним или двумя одинаковыми или различными заместителями, независимо выбранными из группы, включающей атомы галогенов, метильные группы и трифторметильные группы), более предпочтительно пиразолильную группу, имидазолильную группу, тиазолильную группу, изотиазолильную группу, оксазолильную группу или изоксазолильную группу (каждая из упомянутых групп от пиразолильной группы до изоксазолильной группы может быть замещенной одним или двумя одинаковыми или различными заместителями, независимо выбранными из группы, включающей атомы галогенов, метильные группы и трифторметильные группы), еще более предпочтительно пиразолильную группу (пиразолильная группа может быть замещенной одним или двумя одинаковыми или различными заместителями, независимо выбранными из группы, включающей атомы галогенов, метильные группы и трифторметильные группы), особенно предпочтительно пиразолильную группу, замещенную метильной группой.

A³ предпочтительно представляет собой циклопентандиильную группу, циклогександиильную группу или циклогептандиильную группу, более предпочтительно циклогександиильную группу, еще более предпочтительно циклогексан-1,4-диильную группу.

L³ предпочтительно представляет собой метиленовую группу или этилeновую группу, более предпочтительно метиленовую группу.

X³ предпочтительно представляет собой O или NH.

Когда X³ представляет собой O, R³ предпочтительно представляет собой 2,2,2-трифторэтильную группу, 3,3,3-трифторпропильную группу, 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу или 2-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу.

Когда X³ представляет собой NH, R³ предпочтительно представляет собой 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу или 1-цианопропан-2-ильную группу, более предпочтительно 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу.

В качестве подходящих соединений по настоящему изобретению для применения в качестве JAK ингибиторов и в качестве профилактических, терапевтических средств или средств достижения положительной динамики заболеваний, для которых ингибирование JAK является эффективным, могут быть упомянуты следующие соединения.

(1) Соединения, представленные формулой (I), где A¹ представляет собой циклопентандиильную группу или циклогександиильную группу,

L¹ представляет собой метиленовую группу или этиленовую группу,

X¹ представляет собой O, и

R¹ представляет собой C_1-6 галогеналкильную группу, циано-C_1-6 галогеналкильную группу или циано-C_1-6 алкильную группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(2) Соединения по пункту (1), в которых R¹ представляет собой 2,2,2-трифторэтилгруппу, 3,3,3-трифторпропильную группу, 4,4,4-трифторбутильную группу, 3,3-дифторпропильную группу или 2-цианоэтильную группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(3) Соединения, представленные формулой (I), где A¹ представляет собой циклопентандиильную группу или циклогександиильную группу,

L¹ представляет собой метиленовую группу или этиленовую группу,

X¹ представляет собой NH, и

R¹ представляет собой циано-C_1-6 галогеналкильную группу или циано-C_1-6 алкильную группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(4) Соединения по пункту (3), где R¹ представляет собой 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу, 4-циано-1,1,1-трифторбутан-2-ильную группу, 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу, 2-циано-1,1,1-трифторпропан-3-ильную группу, 2-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу, 2-цианоэтильную группу или 1-цианопропан-2-ильную группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(5) Соединения по любому из пунктов с (1) по (4), в которых L¹ представляет собой метиленовую группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(6) Соединения по любому из пунктов с (1) по (5), в которых A¹ представляет собой циклогександиильную группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(7) Соединения, представленные формулой (II), где A² представляет собой циклопентанильную группу или циклогексанильную группу,

L² представляет собой метиленовую группу или этиленовую группу, и

R² представляет собой 5-10-членнную ароматическую гетероциклическую группу (гетероциклическая группа является замещенной атомом галогена, метильной группой, этильной группой, трифторметильной группой или 2,2,2-трифторэтильной группой), таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(8) Соединения по пункту (7), в котором A² представляет собой циклогександиильную группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(9) Соединения по пункту (7) или (8), в которых L² представляет собой метиленовую группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(10) Соединения по любому из пунктов с (7) по (9), в которых R² представляет собой пирролильную группу, тиенильную группу, фурильную группу, пиразолильную группу, имидазолильную группу, тиазолильную группу, изотиазолильную группу, оксазолильную группу, изоксазолильную группу, 1H-1,2,4-триазолильную группу, 4H-1,2,4-триазолильную группу, пиридильную группу, пиридазинильную группу, пиримидинильнyю группу, пиразинильную группу или 1,3,5-триазинильную группу (каждая из упомянутых групп от пирролильной до 1,3,5-триазинильной является замещенной атомом фтора, атомом хлора, атомом брома, метильной группой или трифторметильной группой), таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(11) Соединения, представленные формулой (III), в которых A³ представляет собой циклопентанильную группу или циклогексанильную группу,

L³ представляет собой метиленовую группу или этиленовую группу,

X³ представляет собой O, и

R³ представляет собой C_1-6 галогеналкильную группу, циано-C_1-6 галогеналкильную группу или циано-C_1-6 алкильную группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(12) Соединения по пункту (11), в которых R³ представляет собой 2,2,2-трифторэтильную группу, 3,3,3-трифторпропильную группу, 4,4,4-трифторбутильную группу, 2,2-дифторэтильную группу, 3,3-дифторпропильную группу, 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу, 2-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу, 2-цианоэтильную группу или 1-цианопропан-2-ильную группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(13) Соединения, представленные формулой (III), где A³ представляет собой циклопентандиильную группу или циклогександиильную группу,

L³ представляет собой метиленовую группу или этиленовую группу,

X³ представляет собой NH, и

R³ представляет собой циано-C_1-6 галогеналкильную группу или циано-C_1-6 алкильную группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(14) Соединения по пункту (13), где R³ представляет собой 3-циано-1,1,1-трифторпропан- 2-ильную группу, 2-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу, 2-цианоэтильную группу или 1- цианопропан-2-ильную группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(15) Соединения по любому из пунктов с (11) по (14), в которых A³ представляет собой циклогександиильную группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(16) Соединения по любому из пунктов с (11) до (15), в которых L³ представляет собой метиленовую группу, таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(17) Лекарственные средства, содержащие соединения по любому из пунктов с (1) по (16), таутомеры указанных соединений, их фармацевтически приемлемые соли или сольваты в качестве активного ингредиента.

В настоящем изобретении соединения по настоящему изобретению, представленные формулой (I), формулой (II) или формулой (III), могут быть представлены в виде таутомеров или геометрических изомеров, которые подвергаются эндоциклической или экзоциклической изомеризации, смесей таутомеров или геометрических изомеров или их смесей. Когда соединения по настоящему изобретению содержат асимметрический центр, являющийся или не являющийся результатом изомеризации, соединения по настоящему изобретению могут быть представлены в виде разделенных оптических изомеров или в виде смесей, содержащих их в определенных соотношениях. Кроме того, когда соединения по настоящему изобретению содержат два или более асимметрических центров, соединения по настоящему изобретению могут быть представлены в форме диастереомеров, которые являются результатом оптической изомерии.

Соединения по настоящему изобретению могут быть представлены в виде смеси всех этих изомеров в определенных соотношениях. Например, диастереомеры могут разделяться методами, хорошо известными специалистам в данной области техники, такими как фракционная кристаллизация, и оптические изомеры могут быть получены с помощью методик, хорошо известных в данной области органической химии для этой цели.

Настоящее изобретение охватывает фармацевтически приемлемые соли соединений по настоящему изобретению, представленных формулой (I), формулой (II) или формулой (III).

Соединения по настоящему изобретению, представленные формулой (I), формулой (II) или формулой (III), могут подвергаться превращению в их фармацевтически приемлемые соли или, при необходимости, могут быть высвобождаться из полученных солей.

Фармацевтически приемлемые соли по настоящему изобретению могут представлять собой, например, соли щелочных металлов (таких как литий, натрий и калий), щелочно-земельных металлов (таких как магний и кальций), аммония, органических оснований, аминокислот, неорганических кислот (таких как соляная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота и серная кислота) и органических кислот (таких как уксусная кислота, лимонная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, бензолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота и п-толуолсульфоновая кислота).

Соединения по настоящему изобретению, представленные формулой (I), формулой (II) или формулой (III), или их фармацевтически приемлемые соли могут быть представлены в форме произвольных кристаллов в зависимости от условий получения. Настоящее изобретение охватывает и эти кристаллы.

Соединения по настоящему изобретению, представленные формулой (I), формулы (II) или формулой (III), или их фармацевтически приемлемые соли могут быть представлены в форме произвольных гидратов или сольватов с органическими растворителями, такими как ацетон, этанол, 1-пропанол и 2-пропанол, и настоящее изобретение охватывает эти гидраты, сольваты и их смеси.

Настоящее изобретение охватывает пролекарства соединений по настоящему изобретению, представленных формулой (I), формулой (II) или формулой (III).

Пролекарства являются производными лекарственных соединений, содержащих химически или метаболически разлагаемые группы и дают фармакологически активные лекарственные вещества в результате сольволиза или в физиологических условиях in vivo. Методы отбора или получения подходящих пролекарств описаны, например, в публикации Design of Prodrugs (Elsevier, Amsterdam 1985).

В настоящем изобретении в случае соединения, содержащего гидроксильную группу, в качестве пролекарств могут быть упомянуты, например, ацилокси-производные, полученный путем взаимодействия соединения с подходящими ацилгалогенидами, подходящими ангидридами кислот или подходящими алогеналкилоксикарбонильными соединениями. Структуры, особенно предпочтительные в качестве пролекарств, включают -O-COC₂H₅, -O-CO(t-Bu), -O-COC₁₅H₃₁, -O-CO[m-(CO₂Na)-C₆H₄], -O-COCH₂CH₂CO₂Na, -OCOCH(NH₂)CH₃, -O-COCH₂N(CH₃)₂ или -O-CH₂OCOCH₃ и т.п.

В случае соединения, содержащего аминогруппу, могут быть упомянуты, например, пролекарства, полученные взаимодействием соединения, содержащего аминогруппу, с соответствующими галогенангидридами. Структуры, особенно предпочтительные в качестве пролекарств, включают в себя -СО(CH₂)₂₀OCH₃, -COCH(NH₂)CH₃, -CH₂OCOCH₃ или т.п.

Настоящее изобретение применяется, когда ожидается улучшение патологии заболеваний, связанных с JAK1, JAK2 и JAK3 - отдельно или в комбинации. Среди этих заболеваний ревматоидный артрит связан с JAK1. Среди этих заболеваний JAK1- и JAK3-ассоциированными заболеваниями, помимо ревматоидного артрита, являются воспалительные или пролиферативные дерматозы, такие как псориаз, атопический дерматит, контактный дерматит, экзематоидные дерматиты, себорейный дерматит, красный плоский лишай, пузырчатка, пемфигоид, врожденный буллезный эпидермолиз, крапивница, ангионевротический отек, васкулит, эритема, кожные эозинофилии, красная волчанка, угри и гнездная алопеция, иммуноопосредованные дерматозы, обратимая обструкция дыхательных путей, воспаление слизистой оболочки и васкулит.

Кроме того, указываются астма, болезнь Альцгеймера, атеросклероз, рак, лейкоз, отторжение трансплантатов органа или ткани (таких как сердце, почки, печень, костный мозг, кожа, рога, легкое, панкреатический островок, тонкая кишка, конечности, мышцы, нервы, межпозвоночные диски, трахея, миобласты и хрящ), реакция «трансплантат против хозяина» после трансплантации костного мозга и аутоиммунные заболевания, такие как ревматические заболевания, системная красная волчанка (systemic lupus erythematosus - SLE), болезнь Хашимото, рассеянный склероз, миастения, диабет типа I и диабетические осложнения.

Наряду с указанными заболеваниями, JAK1- и JAK2-ассоциированными заболеваниями являются рак, лейкоз, хронические миелопролиферативные заболевания и миелодиспластический синдром.

В качестве примера применения настоящего изобретения могут быть упомянуты, но без ограничения, лечение, предотвращение или достижение положительной динамики вышеуказанных заболеваний.

Соединения по настоящему изобретению могут быть синтезированы способом, описанным ниже, но получение соединений по настоящему изобретению не ограничивается представленными общими примерами.

Соединения по настоящему изобретению обычно можно очистить с помощью колоночной хроматографии, тонкослойной хроматографии, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и, при необходимости, они с высокой чистотой могут быть получены перекристаллизацией или промывкой растворителями.

В целом, при получении соединений по настоящему изобретению могут использоваться, но без особых ограничений, любые растворители, которые стабильны и инертны в условиях реакции и не препятствуют реакции, и, например, могут быть упомянуты сульфоксидные растворители (такие как диметилсульфоксид), амидные растворители (такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид), простые эфирные растворители (например, этиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, тетрагидрофуран, 1,4-диоксан или циклопентилметиловый эфир), галогенированные растворители (такие как дихлорметан, хлороформ или 1,2-дихлорэтан), нитрильные растворители (такие как ацетонитрил или пропионитрил), ароматические углеводородные растворители (такие, как бензол или толуол), алифатические углеводородные растворители (такие как гексан или гептан), сложноэфирные растворители (такие, как этилацетат), спиртовые растворители (такие как метанол, этанол, 1-пропанол, 2-пропанол или этиленгликоль) и вода. Реакции могут проводиться в произвольной смеси растворителей, указанных выше, или в отсутствие растворителя.

Получение соединений по настоящему изобретению может проводиться при обычном давлении, под давлением, при пониженном давлении или с использованием микроволнового излучения.

Обычно при получении соединений по настоящему изобретению температуру реакции выбирают подходящим образом в интервале от -78°С до температуры кипения растворителя, используемого в реакции.

В качестве кислот, обычно используемых при получении соединений по настоящему изобретению, могут быть упомянуты, например, органические кислоты (такие как уксусная кислота, трифторуксусная кислота или п-толуолсульфокислота) и неорганические кислоты (такие как серная кислота или соляная кислота).

В качестве оснований, обычно используемых при получении соединений по настоящему изобретению, могут быть упомянуты, например, металлоорганические соединения (такие как н-бутиллитий, втор-бутиллитий, диизопропиламид лития или бромид изопропилмагния), органические основания (такие как триэтиламин, N,N-диизопропилэтиламин или N,N-диметиламинопиридин) или неорганические основания (такие как карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, гидроксид натрия, гидроксид калия или гидрид натрия).

Общие способы получения соединений по настоящему изобретению представлены ниже, а формулы промежуточного и конечного продукта в каждой стадии в них концептуально покрывают также их защищенные производные.

При этом защищенные производные определены как соединения, которые могут при необходимости подвергаться превращению в желаемый продукт посредством гидролиза, восстановления, окисления, алкилирования или т.п. и включают в себя соединения, защищенные защитными группами, приемлемыми для химии органического синтеза.

Введение защиты и удаление защиты могут осуществляться с помощью реакций введения и удаления защиты с использованием общеизвестных защитных групп (например, указанных в публикации Protective Groups in Organic Synthesis, Fourth edition, T.W. Greene, John Wiley&Sons Inc. (2006)).

Гидролиз, восстановление и окисление могут осуществляться с помощью общеизвестных превращений функциональных групп (например, как описано в публикации Comprehensive Organic Transformations, Second Edition, R.C.Larock, Wiley-VCH (1999)).

Соединения по настоящему изобретению, представленные формулой (I), формулой (II) и формулой (III), могут быть получены, например, в соответствии с представленной далее схемой (2) или (3).

В соответствии со схемой (2), соединение (2)-2 может быть получено обработкой соединения (2)-1 эквивалентным или избыточным количеством соединения (1)-3 в присутствии основания, такого как N,N-диизопропилэтиламин, в подходящем растворителе или в отсутствии растворителя при температуре в интервале от комнатной до температуры образования флегмы.

Соединение (2)-3 может быть получено обработкой соединения (2)-2 эквивалентным или избыточным количеством 1,1'-карбонилдиимидазола в присутствии основания, такого как N,N-диизопропилэтиламин, в подходящем растворителе или в отсутствии растворителя при температуре в интервале от комнатной до температуры образования флегмы.

В соответствии с представленной далее схемой (3), соединение (3)-2 может быть получено обработкой соединения (3)-1 эквивалентным или избыточным количеством соединения (4)-1 в соответствующем растворителе при температуре в интервале от -78°С до температуры образования флегмы.

Соединение (3)-3 может быть получено обработкой соединения (3)-2 эквивалентным или избыточным количеством соединения (1)-3 в присутствии основания, такого как трикалийфосфат, в подходящем растворителе или в отсутствии растворителя при температуре в интервале от комнатной температуры до температуры образования флегмы.

Соединение (1)-3, используемое в данной схеме, может быть получено, например, в соответствии с представленной далее схемой (1).

В соответствии с представленной далее схемой (1), соединение (1)-2 может быть получено обработкой карбоновой кислоты (1) эквивалентным или избыточным количеством дифенилфосфорилазида в присутствии основания, такого как триэтиламин, в подходящем растворителе или в отсутствие растворителя при температуре в интервале от комнатной до температуры образования флегмы с последующей обработкой эквивалентным или избыточным количеством бензилового спирта или трет-бутилового спирта и может подвергаться превращению в соединение (1)-3 удалением защитной группы подходящим способом.

В представленных далее схемах R^pr представляет собой атом водорода или защитную группу, такую как группа Ts, группа TIPS или группа SEM. Когда R^pr не является атомом водорода, он может подвергаться превращению в атом водорода удалением защитной группы подходящим способом.

А является таким же, как A¹, A² или A³, определенные ранее, и может, например, представлять собой циклопропан-1,2-диильную группу, циклобутан-1,3-диильную группу, циклопентан-1,3-диильную группу, циклогексан-1,4-диильную группу, циклогептан-1,4-диильную группу или т.п.

L является таким же, как L¹, L² или L³, определенные выше, Х представляет собой одинарную связь или является таким же, как X¹ или X³, определенные выше, и R является таким же, как R¹, R² или R³, определенные выше.

R^b представляет собой бензильную группу, трет-бутильную группу или т.п.

Q представляет собой атом водорода или защитную группу, такую как TMS группа. Когда Q не является атомом водорода, он может подвергаться превращению в атом водорода удалением защитной группы подходящим способом.

Т представляет собой группу, образующую карбанион на конечной алкиновой группе, такую как литий или магнийбромид.

Далее настоящее изобретение будет более подробно описано со ссылкой на справочные примеры синтеза, примеры синтеза, фармакологические испытания и примеры препаратов. Однако следует иметь ввиду, что настоящее изобретение не ограничивается этими примерами.

В примерах «ЯМР» означает ядерный магнитный резонанс, «ЖХ/МС» означает высокоэффективную жидкостную хроматографию/масс-спектрометрию, «(об./об.)» означает (объем/объем), «(об./об./об.)» означает (объем/объем/объем), «М» означает моль/л. В таблицах ʺRfʺ означает справочный пример синтеза, «Пример» означает пример синтеза, «Данные» означает «Физические данные», «Выход» означает выход синтезированного соединения, «Колич.» означает количественный, «мин.» означает минуты.

Данные ¹Н-ЯМР показывают химические сдвиги δ (единицы: м.д.) (характеристика расщепления, значение интеграла), измеренные при 300 МГц (JNM-ECP300 производства JEOL (JEOL) Company Ltd. или JNM-ECX300 производства JEOL (JEOL) Ltd.) с использованием тетраметилсилана в качестве внутреннего стандарта, «с» означает синглет, «д» означает дуплет, «т» означает триплет, «кв» означает квартет, «квинт» означает квинтет, «секст» означает секстет, «септ» означает септет, «дд» означает дублет дублетов, «дт» означает дублет триплетов, «тд» означает триплет дублетов, «дкв» означает дублет квартетов, «квд» означает квартет дублетов, «тт» означает триплет триплетов, «ддд» означает дублет дублета дублетов, «м» мультиплет, «уш.» означает уширение, "J" означает константу связывания, "CDCl₃" означает дейтерированный хлороформ, "CD₃OD" означает дейтерированный метанол, «ДМСО-d₆» означает дейтерированный диметилсульфоксид.

Для очистки колоночной хроматографией на силикагеле используют, если особо не оговорено иное, колонку Hi-Flash (зарегистрированная торговая марка) производства Yamazen Corporation, силикагель 60 производства Merck KGaA, Darmstadt (Germany) или колонку PSQ60B производства Fuji Silysia Chemical Ltd.

Для очистки тонкослойной хроматографией на силикагеле используют, если особо не оговорено иное, пластины PLC производства Merck KGaA, Darmstadt (Germany).

В качестве микроволнового реактора используют Initiator Sixty производства Biotage.

Абсолютные конфигурации, если описаны, представляют собой конфигурации известных соединений, конфигурации соединений, полученных из известных соединений, или конфигурации, полученные рентгеноструктурным анализом монокристалла (аппарат: SMART APEX II ULTRA (Bruker AXS, Inc.), Х лучи: CuKα (50 кВ, 24 мА), температура измерения: -50°C ).

ЖХ/МС спектр получают с использованием электрораспылительной ионизации (electrospray ionization - ESI) "ESI⁺" означает режим положительной ESI, "ESI^-" означает режим отрицательной ESI.

ЖХ/МС - условия 1: Аппарат: Колонка: (3,5 мкм, 2,1×20 мм) Темп. колонки: 40°C Элюенты: Жидкость A: 0,1% масс. водная муравьиная кислота Жидкость B: 0,1% масс. муравьиная кислота в ацетонитриле Элюирование: Смесь жидкостей A и B при смесевом соотношении компонентов 90/10 (об./об.) истекает со скоростью 0,4 мл/мин. с линейным изменении соотношения компонентов смеси от 90/10 (об./об.) до 15/85 (об./об.) в течение первых 3 минут, затем скорость истечения линейно изменяется до 0,5 мл/мин. в течение 2 минут при сохранении соотношения компонентов смеси на уровне 15/85 (об./об.). После этого соотношение компонентов смеси линейно изменяется до 90/10 (об./об.) в течение 0,5 минуты и далее сохраняется на уровне 90/10 (об./об.) в течение 2,5 минут. ЖХ/МС - условия 2: Аппарат: Колонка: C18 (1,7 мкм, 2,1×50 мм) Темп. колонки: 40°C Элюенты: Жидкость A: 0,1% масс. водная муравьиная кислота Жидкость B: 0,1% масс. муравьиная кислота в ацетонитриле Элюирование: Смесь жидкостей A и B при смесевом соотношении компонентов 10/10 (об./об.) истекает со скоростью 0,6 мл/мин. в течение первых 0,5 минуты, затем соотношение компонентов смеси линейно изменяется до 10/90 (об./об.) в течение 2,5 минут и сохраняется на уровне 10/90 (об./об.) в течение 0,7 минуты. Далее в течение 0,1 минуты соотношение компонентов смеси и скорость истечения линейно изменяются до 90/10 (об./об.) и 0,8 мл/мин., соответственно, и сохраняются постоянными в течение 1 минуты. ЖХ/МС - условия 3: Аппарат: Колонка: C18 (1,7 мкм, 2,1×50 мм) Темп. колонки: 40°C Элюенты: Жидкость A: 0,1% масс. водная муравьиная кислота Жидкость B: 0,1% масс. муравьиная кислота в ацетонитриле Элюирование: Смесь жидкостей A и B при смесевом соотношении компонентов 80/20 (об./об.) истекает со скоростью 0,6 мл/мин. с линейным изменением соотношения компонентов смеси от 80/20 (об./об.) до 0/100 (об./об.) в течение 2,5 минут, после чего соотношение компонентов смеси 0/100 (об./об.) поддерживается в течение 1,2 минуты. Далее соотношение компонентов смеси и скорость истечения линейно изменяются до 80/20 (об./об.) и 0,8 мл/мин., соответственно, в течение 0,1 минуты и затем поддерживаются постоянными в течение 1,0 минуты. ЖХ/МС - условия 4: Аппарат: Колонка: C18 (1,7 мкм, 2,1×50 мм) Темп. колонки: 40°С Элюенты: Жидкость А: 0,1% масс. водная муравьиная кислота Жидкость В: 0,1% масс. муравьиная кислота в ацетонитриле Элюирование: Смесь жидкостей А и В при смесевом соотношении компонентов 90/10 (об./об.) истекает со скоростью 0,6 мл/мин. с линейном изменением соотношения компонентов смеси от 90/10 (об./об.) до 10/90 (об./об.) в течение 3 минут и последующим сохранением соотношения компонентов на уровне 10/90 (об./об.) в течение 0,7 минуты. Затем соотношение компонентов смеси и скорость истечения линейно изменяются до 90/10 (об./об.) и 0,8 мл/мин., соответственно, в течение 0,1 минуты и далее поддерживаются постоянными в течение 1,0 минуты.

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 1

Метил-транс-4-{[(бензилокси)карбонил]амино}циклогексанкарбоксилат

Коммерчески доступную транс-4-(метоксикарбонил)циклогексанкарбоновую кислоту (15,7 г, 84,3 ммоль) в толуоле (160 мл) перемешивают с триэтиламином (35,0 мл, 253,0 ммоль) при 100°С и в течение 30 минут по каплям добавляют дифенилфосфорилазид (20,0 мл, 92,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 часов при 110°С, затем в течение 10 минут по каплям добавляют бензиловый спирт (11,3 мл, 109,6 ммоль) и перемешивание продолжают в течение 1 часа 30 минут. Смеси дают возможность остыть до комнатной температуры, к смеси добавляют 10% масс. раствора лимонной кислоты и полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток промывают смеcью растворителей гексан/этилацетат (= 9/1 (об./об.)), с получением смеси, содержащей указанное в заголовке соединение в виде твердого белого вещества (18,0 г).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 2

транс-4-{[(Бензилокси)карбонил]амино}циклогексанкарбоновая кислота

1 М водный раствор гидроксида натрия (100 мл) добавляют к раствору смеси (18,0 г) метил-транс-4-{[(бензилокси)карбонил]амино}циклогексанкарбоксилата, полученного в справочном примере синтеза 1 синтеза, в метаноле (180 мл), полученную реакционную смесь перемешивают в течение 1 суток и подкисляют концентрированной соляной кислотой. Осажденное твердое вещество промывают этилацетатом и водой с получением смеси, содержащей указанное в заголовке соединение в виде твердого белого вещества (13,0 г). Фильтрат дополнительно экстрагируют этилацетатом, органический слой промывают насыщенным раствором водного раствора хлорида аммония, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении с получением смеси, содержащей указанное в заголовке соединение в виде твердого белого вещества (6,7 г). Полученные твердые белые вещества объединяют и используют в следующей стадии без дополнительной очистки.

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 3

Бензил-[транс-4-(гидроксиметил)циклогексил]карбамат

Боран-тетрагидрофурановый комплекс (8,5% масс. в тетрагидрофуране, 30 мл) по каплям добавляют к раствору транс-4-{[(бензилокси)карбонил]амино}циклогексанкарбоновой кислоты (6,0 г), полученной в справочном примере синтеза 2, в тетрагидрофуране (30 мл) при охлаждении льдом, полученную реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 суток, затем добавляют уксусную кислоту и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Полученное твердое вещество промывают смесью растворителей гексан/этилацетат (= 10/1 (об./об.)) с получением смеси, содержащей указанное в заголовке соединение в виде твердого белого вещества (6,0 г).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 4

Бензил-{транс-4-[(3,3,3-трифторпропокси)метил]циклогексил}карбамат

Раствор бензил-[транс-4-(гидроксиметил)циклогексил]карбамата (630 мг, 2,39 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 3, в дихлорметане (5 мл) перемешивают с 1,1,1-трифтор-3-йодпропаном (250 мкл, 2,20 ммоль), 2,6-ди-трет-бутилпиридином (500 мкл, 2,27 ммоль) и трифторметансульфонатом серебра (500 мг, 1,99 ммоль) в течение 5 часов, затем добавляют 1,1,1-трифтор-3-йодпропан (100 мкл, 0,880 ммоль), 2,6-ди-трет-бутилпиридин (200 мкл, 0,909 ммоль) и трифторметансульфонат серебра (200 мг, 0,797 ммоль) и перемешивание продолжают в течение 1 суток. После добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии с силикагелем (гексан/этилацетат=10/1→3/1 (об./об.)) с получением смеси, содержащей указанное в заголовке соединение в виде белого аморфного вещества (478 мг).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 5

транс-4-[(3,3,3-Трифторпропокси)метил]циклогексанамин

Смесь (478 мг), содержащую бензил-{транс-4-[(3,3,3-трифторпропокси)метил]циклогексил}карбамат, полученный в справочном примере синтеза 4, и метанол (5 мл), перемешивают с 10% масс. палладия на угле (50% масс. водный раствор, 200 мг) в атмосфере водорода в течение 2 часов и затем фильтруют. Осадок на фильтре промывают этилацетатом и фильтрат концентрируют при пониженном давлении с получением смеси, содержащей указанное в заголовке соединение в виде серого аморфного вещества (308 мг).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 6

1-{транс-4-[(Бензиламино)метил]циклогексил}-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3H,7H)-дион

Смесь транс-4-(2,4-диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1H-пирроло[3',2':5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексанкарбольдгида (300 мг, 0,678 ммоль), полученного в справочном примере синтеза^b 168 в WO2013/024895, метанола (10 мл) и уксусной кислоты (1 мл) перемешивают с бензиламином (141 мкл, 2,03 ммоль) при комнатной температуре в течение 1 часа, затем добавляют 2-пиколинборан (109 мг, 1,02 ммоль) и продолжают перемешивание при комнатной температуре в течение 1 суток. После добавления воды реакционный раствор экстрагируют хлороформом, органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (хлороформ/метанол=100/1 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого белого вещества (274 мг, выход 76%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 7

1-[транс-4-(Аминометил)циклогексил]-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[3',2':5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3H,7H)-дионацетат

Смесь 1-{транс-4-[(бензиламино)метил]циклогексил}-7 -{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3H,7H)-диона (270 мг, 0,506 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 6, 5% масс. палладия на угле (50% масс. водный раствор, 27 мг), метанола (3 мл), тетрагидрофурана (3 мл) и уксусной кислоты (0,1 мл) перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 1 суток. Реакционную смесь фильтруют и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток промывают уксусной кислотой и гексаном с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого белого вещества (232 мг, выход 90%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 8

({[транс-4-(2,4-Диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4-трифторбутаннитрил

Раствор 1-[транс-4-(аминометил)циклогексил]-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3H,7H)дионацетата (52,5 мг, 0,1 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 7, в ацетонитриле (1,2 мл) перемешивают с 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-еном (15,6 мкл, 1,0 ммоль) и 4,4,4-трифторкротононитрилом (50,0 мг, 0,5 ммоль) при комнатной температуре в течение 3 дней. После добавления воды реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (колонка HiFlash (зарегистрированная торговая марка) аминного типа производства Yamazen Corporation, элюирование с градиентом: гексан/этилацетат=2/1 (об./об.) → этилацетат → этилацетат/метанол=10/1 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества светло-коричневого цвета (25,2 мг, выход 43%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 9

(R)-3-({[транс-4-(2,4-Диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4-трифторбутаннитрил

3-({[транс-4-(2,4-Диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4-трифторбутаннитрил (126,8 мг, 0,2 ммоль), полученный в справочном примере синтеза 8, очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (хиральная колонка среднего давления; CHIRALFLASH (зарегистрированный товарный знак) IA, элюирование с градиентом: гексан/этанол=9/1 → 7/3 (об./об.)), фракции, элюированные при времени удерживания 49-58 минут, концентрируют с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества светло-коричневого цвета (35,4 мг, выход 28%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 10

[транс-4-(2,4-Диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6lпиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил-1Н-имидазол-1-карбоксилат

Раствор 4-{[транс-4-(гидроксиметил)циклогексил]амино}-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-карбоксамида (6,03 г, 14,4 ммоль), полученного в соответствии со справочным примером синтеза^b 166 в WO2013/024895, и 1,1'-карбонилдиимидазола (11,7 г, 72,0 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (30 мл) перемешивают с N,N-диизопропилэтиленамином (30 мл) при 120°С в течение 2 часов 20 минут. Реакционный раствор оставляют охлаждаться до комнатной температуры, затем экстрагируют этилацетатом (150 мл), насыщенным водным раствором хлорида аммония (30 мл) и водой и водный слой экстрагируют этилацетатом. Полученные органические слои объединяют, трижды промывают насыщенным водным раствором хлорида аммония, а затем насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток фильтруют, собранное твердое вещество промывают гексаном и сушат при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (7,56 г, выход 97%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 11

1-[транс-4-(Гидроксиметил)циклогексил]-3,7-бис{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[3',2':5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3Н,7Н)-дион

Раствор [транс-4-(2,4-диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3',2':5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил-1H-имидазол-1-карбоксилата (7,56 г, 14,0 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 10, в N,N-диметилформамиде (140 мл) охлаждают до 0°С и перемешивают с гидридом натрия (55% масс. дисперсия в минеральном масле, 760 мг, 18,2 ммоль) и [2-(хлорметокси)этил]триметилсиланом (3,50 мл, 19,6 ммоль) в течение 2 часов. После добавления воды и насыщенного водного раствора хлорида аммония реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток перемешивают с 1,4-диоксаном (100 мл) и 1М водным раствором гидроксида натрия (30 мл) при комнатной температуре в течение 2 часов. После добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование с градиентом: гексан/этилацетат=70/30 → 47/53 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде аморфного вещества желтого цвета (5,87 г, выход 73%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 12

1-{транс-4-[(3,3,3-Трифторпропокси)метил]циклогексил}-3,7-бис{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[3',2':5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3H,7H)-дион

Раствор 1-[транс-4-(гидроксиметил)циклогексил]-3,7-бис{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3H,7H)-диона (1,35 г, 2,35 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 11, в дихлорметане (14 мл) перемешивают с 1,1,1-трифтор-3-йодпропаном (1,34 мл, 11,8 ммоль), 2,6-ди-трет-бутилпиридином (2,38 мл, 10,8 ммоль) и трифторметансульфонатом серебра (2,60 г, 10,1 ммоль) в течение 113 часов. Реакционную смесь фильтруют и фильтрат экстрагируют добавлением хлороформа и воды. Полученный органический слой сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле три раза (первый прогон: гексан/этилацетат=1/0 → 78/22 (об./об.), второй прогон: гексан/этилацетат=1/0 → 4/1 (об./об.), третий прогон: гексан/этилацетат=1/0 → 4/1 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного аморфного вещества (1,34 г, выход 85%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 13

3-Хлор-N-метокси-N-метил-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-карбоксамид

Раствор 4-хлор-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-карбоновой кислоты (27,7 г, 84,8 ммоль), полученной в соответствии со справочным примером синтеза^b 87 в WO2013/024895, в дихлорметане (280 мл) перемешивают с N,N-диизопропилэтиламином (43,2 мл, 254 ммоль) и N-гидроксибензотриазолом (4,58 г, 33,9 ммоль) в течение 15 минут, затем добавляют гидрохлорид N,O-диметилгидроксиламина (24,8 г, 254 ммоль) и гидрохлоридом 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (48,7 г, 254 ммоль) и перемешивание продолжают при комнатной температуре в течение 18 часов. После добавления воды реакционную смесь дважды экстрагируют хлороформом. Органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование с градиентом: гексан/этилацетат=4/1 → 3/1 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла желтого цвета (30,5 г, выход 97%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 14

1-(4-Хлор-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)проп-2-ин-1-он

Раствор 4-хлор-N-метокси-N-метил-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-карбоксамида (47,4 г, 128 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 13, в тетрагидрофуране (150 мл) перемешивают при 50-53°С, затем добавляют раствор бромида этинилмагния (0,5 М раствор в тетрагидрофуране, 310 мл, 153 ммоль) при температуре 46°С или выше, реакционную смесь перемешивают в течение 3 часов, охлаждают воздухом до 30°С и выливали в смесь лед - 1М соляная кислота (300 г - 300 мл). Полученную смесь перемешивают в течение 15 минут и экстрагируют этилацетатом. Выделенный органический слой промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток фильтруют, собранное твердое вещество промывают гексаном и сушат при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества светло-коричневого цвета (35,4 г, выход 83%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 15

1-[транс-4-(Гидроксиметил)циклогексил]-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он

К 1-(4-хлор-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)проп-2-ин-1-ону (35,3 г, 105 ммоль) полученному в справочном примере синтеза 14, добавляют (транс-4-аминоциклогексил)метанол (16,4 г, 126 ммоль), полученный в соответствии со справочным примером синтеза^b 122 в WO2013/024895, трикалийфосфат (44,7 г, 210 ммоль) и диметилсульфоксид (175 мл) и перемешивают реакционную смесь при температуре 100-110°С в течение 2 часов 30 минут, после чего смеси дают возможность остыть до 50°С. К реакционной смеси добавляют воду, образующееся твердое вещество собирают фильтрацией, промывают этилацетатом и сушат при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (32,1 г, выход 71%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 16

Смесь 1-(4-хлор-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)проп-2-ин-1-она и 1-(4-хлор-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)-3-[метокси(метил)амино]проп-2-ен-1-она

Бромид этилмагния (0,5 М раствор в тетрагидрофуране, 180 мл, 90,1 ммоль) перемешивают с раствором 4-хлор-N-метокси-N-метил-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-карбоксамида (27,8 г, 75,1 ммоль), полученным в справочном примере синтеза 13, в тетрагидрофуране (84,0 мл) при комнатной температуре в течение 30 минут, затем нагревают до 50°С и перемешивают в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждают льдом и после добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток сушат при температуре 50°С при пониженном давлении в течение 1 часа с получением масла коричневого цвета, содержащего указанное в заголовке соединение (29,7 г). Коричневое масло используют в следующей стадии без дополнительной очистки.

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 17

1-[транс-4-(Гидроксиметил)циклогексил]-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он

Раствор смеси (29,7 г) 1-(4-хлор-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)проп-2-ин-1-она и 1-(4-хлор-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)-3-[метокси(метил)амино]проп-2-ен-1-она, полученного в справочном примере синтеза 16, в диметилсульфоксиде (300 мл) перемешивают с трикалийфосфатом (31,9 г, 150 ммоль) и (транс-4-аминоциклогексил)метанолом (11,6 г, 90,1 ммоль), полученным в соответствии со справочным примером синтеза^b 122 в WO2013/024895, при 90°С в течение 3 часов, а затем при 110°С в течение 4 часов. Реакционную смесь оставляют охлаждаться до комнатной температуры и добавляют воду и гексан. Выпавшее в осадок твердое вещество собирают фильтрацией, промывают последовательно водой, смесью растворителей гексан/этилацетат (= 1/1 (об./об.)) и этилацетатом и сушат при 50°С в течение 5 часов при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединение в виде твердого вещества светло-коричневого цвета (24,1 г, выход 75%). (Альтернатива справочному примеру синтеза 15).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 18

транс-4-(4-Оксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексанкарбальдегид

Смесь 1-[транс-4-(гидроксиметил)циклогексил]-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-она (1,07 г, 2,49 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 15, диметилсульфоксида (21 мл) и дихлорметана (21 мл) перемешивают с 2-йодоксибензойной кислотой (1,05 г, 3,74 ммоль) при 40°С в течение 1 часа 30 минут. После добавления насыщенного водного раствора тиосульфата натрия и насыщенного водного раствора гидрокарбоната натрия реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Полученный органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование с градиентом: этилацетат → этилацетат/метанол=10/1 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества серого цвета (827 мг, выход 78%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 19

1-{транс-4-[(Бензиламино)метил]циклогексил}-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он

Бензиламин (384 мкл, 3,52 ммоль) и 2-пиколинборан (188 мг, 1,78 ммоль) добавляют к смеси транс-4-(4-оксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексанкарбальдегида (500 мг, 1,17 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 18, метанола (10 мл) и уксусной кислоты (1,0 мл), полученную реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 суток, добавляют 1М соляную кислоту и экстрагируют этилацетатом. Водный слой смешивают с 1М водным раствором гидроксида натрия и экстрагируют смесью растворителей хлороформ/2-пропанол (= 1/1 (об./об.)). Органический слой сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Колонка HiFlash (зарегистрированная торговая марка) аминного типа производства Yamazen Corporation, элюирование с градиентом: гексан/этилацетат=1/1 (об./об.) → этилацетат → этилацетат/метанол=10/1 ( об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла бледно-желтого цвета (390 мг, выход 65%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 20

1-[транс-4-(Аминометил)циклогексил]-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он

Смесь 1-{транс-4-[(бензиламино)метил]циклогексил}-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7Н)-она (390 мг, 0,755 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 19, метанола (5 мл), тетрагидрофурана (5 мл) и уксусной кислоты (1 мл) перемешивают с 10% масс. палладия на угле (50% масс. водн., 59,0 мг) в атмосфере водорода в течение 1 суток, затем фильтруют. Осадок на фильтре промывают этилацетатом, фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Колонка HiFlash (зарегистрированная торговая марка) аминного типа производства Yamazen Corporation, элюирование с градиентом: этилацетат/метанол=10/1 → хлороформ/метанол=10/1 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединение в виде твердого белого вещества (271 мг, выход 84%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 21

4,4,4-Трифтор-3-({[транс-4-(4-оксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метил}амино)бутаннитрил

Реакции, описанные в справочном примере синтеза 8, выполняют по существу, каким же способом, за исключением того, что 1-[транс-4-(аминометил)циклогексил]-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-н][1,6]нафтиридин-4(7Н)-он (50,0 мг, 0,117 ммоль), полученный в справочном примере синтеза 20, используют вместо 1-[транс-4-(аминометил)циклогексил]-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3Н,7Н)-дионацетата, полученного в справочном примере синтеза 7, с получением указанного в заголовке соединения в виде масла коричневого цвета (54,5 мг, выход 85%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 22

(R)-4,4,4-Трифтор-3-({[транс-4-(4-оксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-4,7-дигидро-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метил}амино)бутаннитрил

4,4,4-Трифтор-3-({[транс-4-(4-оксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метил}амино)бутаннитрил (129 мг, 0,236 ммоль), полученный в справочном примере синтеза 21, очищают с помощью препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии (CHIRALPAK (зарегистрированная торговая марка) IE 5 мкм Ø20×250 мм: гексан/этанол/диэтиламин=70/30/0,1 (об./об./об.), скорость истечения 8 мл/мин.), и фракции, элюированные при времени удерживания 74,64 мин. и содержащие один оптический изомер, концентрируют с получением указанного в заголовке соединения в виде масла светло-коричневого цвета (53,9 мг, выход 42%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 23

[транс-4-(4-Оксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метилметансульфонат

К раствору 1-[транс-4-(гидроксиметил)циклогексил]-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-она (1,50 г, 3,51 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 15, в дихлорметане (35 мл), охлажденному до 0°С, добавляют триэтиламин (1,47 мл, 10,5 ммоль), а затем по каплям постепенно добавляют метансульфонилхлорид (326 мкл, 4,21 ммоль). Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 1 часа, охлаждают льдом, а затем смешивают с водой и экстрагируют этилацетатом. Полученный органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование с градиентом: этилацетат → этилацетат/метанол=10/1 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде аморфного вещества желтого цвета (1,53 г, выход 86%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 24

1-{транс-4-[(4-Метил-1Н-пиразол-1-ил)метил]циклогексил}-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он

К раствору [транс-4-(4-оксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-4,7-дигидро-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метилметансульфоната (1,53 г, 3,03 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 23, в N,N-диметилформамиде (30 мл), охлажденному до 0°С, добавляют 4-метил-1Н-пиразол (500 мкл, 6,06 ммоль), а затем постепенно добавляют гидрид натрия (55% масс. дисперсия в минеральном масле, 264 мг, 6,06 ммоль). Затем реакционную смесь нагревают до комнатной температуры, перемешивают в течение 12 часов и после добавления воды при охлаждении льдом экстрагируют этилацетатом. Полученный органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование с градиентом: этилацетат → этилацетат/метанол=10/1 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного аморфного вещества (1,33 г, выход 89%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 25

1-{транс-4-[(2,2,2-Трифторэтокси)метил]циклогексил}-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он

К раствору 1-[транс-4-(гидроксиметил)циклогексил]-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7Н)-она (20 мг, 0,047 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 15, в тетрагидрофуране (2 мл) добавляют 2,2,2-трифторэтилтрифторметансульфонат (50 мкл, 0,35 ммоль) и гидрид натрия (55% масс. дисперсия в минеральном масле, 10 мг, 0,23 ммоль) и перемешивают реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем добавляют 2,2,2-трифторэтилтрифторметансульфонат (50 мкл, 0,35 ммоль) и гидрид натрия (55% масс. дисперсия в минеральном масле, 10 мг, 0,23 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение дополнительных 2 часов. После добавления насыщенного водного раствора хлорида натрия реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Полученный органический слой сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование с градиентом: гексан/этилацетат=5/1 → 0/1 → этилацетат/метанол=5/1 (об./об.)) с получением смеси, содержащей указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла ( 9,2 мг). Смесь, содержащую указанное в заголовке соединение, используют в следующей стадии без дополнительной очистки.

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 26

1-{транс-4-[(3,3,3-Трифторпропокси)метил]циклогексил}-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он

Раствор 1-(4-хлор-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)проп-2-ин-1-она (279 мг, 0,83 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 14, в диметилсульфоксиде (175 мл) перемешивают с транс-4-[(3,3,3-трифторпропокси)метил]циклогексанамином (255 мг, 1,00 ммоль), полученным в справочном примере синтеза 5, и трикалийфосфатом (528 мг, 2,49 ммоль) при 100°С в течение 1 часа, затем добавляют транс-4-[(3,3,3-трифторпропокси)метил]циклогексанамин (51 мг, 0,2 ммоль) и перемешивание проводжают при 100°С в течение 2 часов. После добавления воды реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Полученный органический слой сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Полученное масло красноватого цвета (550 мг), содержащее указанное в заголовке соединение, растворяют в метаноле (5,5 мл) и перемешивают с 5% масс. палладием на угле (50% масс. водн., 100 мг) в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 22 часов. Реакционную смесь фильтруют и концентрируют фильтрат при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование с градиентом: гексан/этилацетат=2/1 → 1/1 → 0/1 (об./об.)), с получением указанного в заголовке соединения в виде масла бледно-желтого цвета (323 мг, выход 74%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 27

4,4,4-Трифтор-3-{[транс-4-(4-оксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метокси}бутаннитрил

Раствор 1-[транс-4-(гидроксиметил)циклогексил]-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-она (14,5 г, 33,9 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 15, в дихлорметане (290 мл) перемешивают с 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-еном (20,3 мл, 135 ммоль) при 40°С в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют 4,4,4-трифторкротононитрил (7,13 мл, 67,7 ммоль) и перемешивание продолжают при 30°С в течение дополнительных 5 часов. К смеси добавляют этилацетат, полученную смесь концентрируют при пониженном давлении и после добавления к остатку 10% масс. водной лимонной кислоты экстрагируют этилацетатом. Полученный органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида аммония и насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток дважды очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (колонка HiFlash (зарегистрированная торговая марка) производства Yamazen Corporation, элюирование с градиентом: этилацетат/гексан=1/1 → 2/1 → 1/0 (об./об.), а затем этилацетат/метанол=35/1 (об./об.)). Полученное твердое вещество дополнительно очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (PSQ60B производства Fuji Silysia Chemical Ltd., элюирование с градиентом: этилацетат/гексан=1/1 → 2/1 → 1/0 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества желтого цвета (15,7 г, выход 85%).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 28

Смесь 1-(4-хлор-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)-3-(триметилсилил)проп-2-ин-1-она и 1-(4-хлор-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)проп-2-ин-1-она

н-Бутиллитий (1,5 М нормальный раствор в гексане, 1,1 мл, 1,67 ммоль) по каплям добавляют к раствору триметилсилилацетилена (0,26 мл, 1,83 ммоль) в тетрагидрофуране (2,8 мл) при температуре -15°С и полученный реакционный раствор перемешивают в течение 15 минут. Затем добавляют раствор 4-хлор-N-метокси-N-метил-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-карбоксамида (564 мг, 1,52 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 13, в тетрагидрофуране (2,8 мл) при температуре -15°С, полученный реакционный раствор перемешивают при 0°С в течение 30 минут, выливают в смесь лед-1М соляная кислота (10 г-10 мл), затем перемешивают в течение 15 минут и экстрагируют этилацетатом. Полученный органический слой сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении с получением смеси, содержащей указанные в заголовке соединения в виде масла желтого цвета (572 мг). Смесь, содержащую указанные в заголовке соединения, используют в следующей стадии без дополнительной очистки.

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР СИНТЕЗА 29

1-[транс-4-(Гидроксиметил)циклогексил]-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он

Раствор смеси (572 мг) 1-(4-хлор-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)-3-(триметилсилил)проп-2-ин-1-она и 1-(4-хлор-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)проп-2-ин-1-она, полученной в справочном примере синтеза 28, в диметилсульфоксиде (5 мл) перемешивают с трикалийфосфатом (645 мг, 3,04 ммоль) и (транс-4-аминоциклогексил)метанолом (237 мг, 1,82 ммоль), полученным в соответствии со справочным примером синтеза^b 122 в WO2013/024895, при 110°С в течение 3 часов и после добавления воды перемешивают при 50°С в течение 2 часов. Осажденное твердое вещество собирают фильтрацией, промывают последовательно водой и этилацетатом и сушат при 50°С в течение 5 часов при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (340 мг, выход 52%). Отдельно, промывные воды концентрируют при пониженном давлении, полученное твердое вещество коричневого цвета промывают этилацетатом и сушат при 50°С в течение 3 часов с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (68 мг, выход 10%). (Альтернатива справочному примеру синтеза 5).

ПРИМЕР СИНТЕЗА 1

(R)-3-({[транс-4-(2,4-Диоксо-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4-трифторбутаннитрил

Раствор (R)-3-({[транс-4-(2,4-диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4-трифторбутаннитрила (662 мг, 1,2 ммоль), полученного в справочном примере синтеза 9, в дихлорметане (13 мл) перемешивают с трифторуксусной кислотой (1,3 мл) при комнатной температуре в течение 1 суток, а затем добавляют трифторуксусную кислоту (0,7 мл) и перемешивание продолжают при комнатной температуре в течение дополнительных 3 часов. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении с получением масла бледно-желтого цвета, содержащего (R)-4,4,4-трифтор-3-[({транс-4-[7-(гидроксиметил)-2,4-диоксо-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил]циклогексил}метил)амино]бутаннитрил в качестве промежуточного продукта (ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=1,88 мин., ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 465 [М+H]⁺). Промежуточный продукт перемешивают с метанолом (13 мл) и этилендиамином (1,3 мл) при комнатной температуре в течение 1 суток. После добавления воды и метанола реакционную смесь фильтруют. Собранное твердое вещество промывают метанолом и сушат при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого бесцветного вещества (405 мг, выход 80%).

ПРИМЕР СИНТЕЗА 2

1-{транс-4-[(3,3,3-Трифторпропокси)метил]циклогексил}-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3Н,7Н)-дион

Реакции, описанные в примере синтеза 1, проводят по существу таким же способом, за исключением того, что 1-{транс-4-[(3,3,3-трифторпропокси)метил]циклогексил}-3,7-бис{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3H,7H)дион (790 мг, 1,18 ммоль), полученный в справочном примере синтеза 12, используют вместо (R)-3-({[транс-4-(2,4-диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1H-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)трифторбутаннитрила, полученного в справочном примере синтеза 9, и 3,7-бис(гидроксиметил)-1-{транс-4-[(3,3,3-трифторпропокси)метил]циклогексил}-1H-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3Н,7Н)-дион (ЖХ/МС: условие 3, время удерживания=1,31 мин, ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 471[М+Н]+) получают в качестве промежуточного продукта и затем реакционную смесь фильтруют. Собранное твердое вещество промывают этилацетатом с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого белого вещества (416 мг, выход 86%).

ПРИМЕР СИНТЕЗА 3

(R)-4,4,4-Трифтор-3-({[транс-4-(4-оксо-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексилметил}амино)бутаннитрил

Реакции, описанные в примере синтеза 1, проводят по существу таким же способом, за исключением того, что (R)-4,4,4-трифтор-3-({[транс-4-(4-оксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метил}амино)бутаннитрил (1,11 г, 1,85 ммоль), полученный в справочном примере синтеза 22, используют вместо (R)-3-({[транс-4-(2,4-диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4-трифторбутаннитрила, полученного в справочном примере синтеза 9, и (R)-4,4,4-трифтор-3-[({транс-4-[7-(гидроксиметил)-4-оксо-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил]циклогексил}метил)амино]бутаннитрил (ЖХ/МС: условие 4, время удерживания=1,76 мин, ЖХ/МС (ESI⁺)m/z; 448[М+Н]⁺) получают в качестве промежуточного продукта, а реакционную смесь экстрагируют добавлением смеси растворителей хлороформ/изопропанол (= 1/1 (об./об.)) и воды. Органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (хлороформ/метанол=1/0 → 1/1 (об./об.), затем колонка HiFlash (зарегистрированная торговая марка) аминного типа производства Yamazen Corporation, элюирование с градиентом: этилацетат/метанол=1/0 → 10/1 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого белого вещества (634 мг, выход 82%).

ПРИМЕР СИНТЕЗА 4

1-{транс-4-[(4-Метил-1Н-пиразол-1-ил)метил]циклогексил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-она

Реакции, описанные в примере синтеза 1, проводят по существу таким же способом, за исключением того, что 1-{транс-4-[(4-метил-1Н-пиразол-1-ил)метил]циклогексил}-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-она(1,33 г, 2,70 ммоль), полученный в справочном примере синтеза 24, используют вместо (R)-3-({[транс-4-(2,4-диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4-трифторбутаннитрила, полученного в справочном примере синтеза 9, и качестве промежуточного продукта получают 7-(гидроксиметил)-1-{транс-4-[(4-метил-1Н-пиразол-1-ил)метил]циклогексил}-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7Н)-он (ЖХ/МС: условие 2, время удерживания=1,64 минуты, ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 392 [М+Н]⁺). Затем реакционную смесь экстрагируют добавлением этилацетата и воды, органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток дважды очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (колонка HiFlash (зарегистрированная торговая марка) аминного типа производства Yamazen Corporation: этилацетат). Полученное твердое вещество промывают этилацетатом с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого белого вещества (521 мг, выход 53%).

ПРИМЕР СИНТЕЗА 5

1-{транс-4-[(2,2,2-Трифторэтокси)метил]циклогексил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он

Реакции, описанные в примере синтеза 1, проводят по существу таким же способом, за исключением того, что смесь (9,2 мг), содержащую гидрохлорид 1-{транс-4-[(2,2,2-трифторэтокси)метил]циклогексил}-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7Н)-он (138 мг, 0,271 ммоль), полученный в справочном примере синтеза 25, используют вместо (R)-3-({[транс-4-(2,4-диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3',2':5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4-трифторбутаннитрила, полученного в справочном примере синтеза 9, и в качестве промежуточного продукта получают 7-(гидроксиметил)-1-{транс-4-[(2,2,2-трифторэтокси)метил]циклогексил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7Н)-он (ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=1,95 мин., ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 410[М+Н]⁺). Затем реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, остаток очищают тонкослойной хроматографией на силикагеле (этилацетат/гексан=5/1 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого белого вещества (3,8 мг, выход 21% (две стадии)).

ПРИМЕР СИНТЕЗА 6

1-{транс-4-[(3,3,3-Трифторпропокси)метил]циклогексил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-она

Реакции, описанные в примере синтеза 1, проводят по существу таким же способом, за исключением того, что 1-{транс-4-[(3,3,3-трифторпропокси)метил]циклогексил}-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он (1,47 г, 2,80 ммоль), полученный в справочном примере синтеза 26, используют вместо (R)-3-({[транс-4-(2,4-диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4-трифторбутаннитрила, полученного в справочном примере синтеза 9, и в качестве промежуточного продукта получают 7-(гидроксиметил)-1-{транс-4-[(3,3,3-трифторпропокси)метил]циклогексил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7Н)-он (ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=1,94 мин., ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 424 [М+Н]⁺). Затем реакционную смесь экстрагируют добавлением хлороформа и воды, органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование с градиентом: этилацетат/метанол=1/0 → 95/5 (об./об.), затем хлороформ/метанол=95/5 → 20/80 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого белого вещества (1,09 г, выход 98%).

ПРИМЕР СИНТЕЗА 7

(R)-4,4,4-Трифтор-3-{[транс-4-(4-оксо-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метокси}бутаннитрил

4,4,4-Трифтор-3-{[транс-4-(4-оксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-4,7-дигидро-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метокси}бутаннитрил (1,29 г, 2,35 ммоль), полученный в справочном примере синтеза 27, очищают с помощью препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии (Chiralpak (зарегистрированная торговая марка) IB 5 мкм Ø20×250 мм; элюирование с градиентом: гексан/этанол=80/20 → 50/50 (об./об.); скорость истечения 12 мл/мин.), фракцию, содержащую единый оптически активный изомер, элюированный при времени удерживания 27,49 мин., концентрируют с получением (R)-4,4,4-трифтор-3-{[транс-4-(4-оксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метокси}бутаннитрила (490 мг). Затем реакции, описанные в примере синтеза 1, проводят по существу таким же способом, за исключением того, что (R)-4,4,4-трифтор-3-{[транс-4-(4-оксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-4,7-дигидро-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метокси}бутаннитрил (490 мг, 0,893 ммоль), полученный выше, используют вместо (R)-3-({[транс-4-(2,4-диоксо-7-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-2,3,4,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3ʹ,2ʹ:5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4-трифторбутаннитрила, полученного в справочном примере синтеза 9, и в качестве промежуточного продукта получают (R)-4,4,4-трифтор-3-({транс-4-[7-(гидроксиметил)-4-оксо-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил]циклогексил}метокси)бутаннитрил (ЖХ/МС: условия 4, время удерживания=1,92 мин., ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 449 [М+H]⁺). Затем реакционную смесь экстрагируют добавлением этилацетата и воды, органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (колонка HiFlash (зарегистрированная торговая марка) аминного типа производства Yamazen Corporation, элюирование с градиентом: этилацетат/метанол=1/0 → 92/8 (об./об.)) с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого белого вещества (299 мг, выход 30% (две стадии)). Структуры соответствующих соединений, полученных в справочном примере синтеза показаны ниже.

Структуры соответствующих соединений, полученных в справочных примерах синтеза, представлены ниже.

Структуры соответствующих соединений, полученных в примерах синтеза, представлены ниже.

Ниже приведены физические данные каждого соединения справочных примеров синтеза и примеров синтеза.

Rf 1

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,25 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 292 [М+Н]⁺

Rf 2

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=1,92 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 278 [М+Н]⁺

Rf 3

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=1,93 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 264 [М+Н]⁺

Rf 4

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,66 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z;; 360 [М+Н]⁺

Rf 5

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=1,29 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z;; 226 [М+Н]⁺

Rf 6

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0,00 (с, 9H), 0,98 (т, J=8,2 Гц, 2H), 1,09-1,29 (м, 2H), 1,36-1,87 (м, 2H), 1,94- 2,19 (м, 4H), 2,61 (д, J=6,5 Гц, 2H), 2,68-2,88 (м, 2H), 3,60 (т, J=8,4 Гц, 2H), 3,86 (с, 2H), 4,66-4,81 (м, 1H), 5,78 (с, 2H), 6,73 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,36-7,41 (м, 5H), 7,46 (д, J=3,7 Гц, 1H), 9,09 (с, 1H).

Rf 7

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆) δ: -0,07 (с, 9H), 0,84 (т, J=8,0 Гц, 2H), 1,05-1,21 (м, 2H), 1,27-1,45 (м, 1H), 1,88-1,97 (м, 4H), 2,35-2,69 (м, 4H), 3,54 (т, J=8,2 Гц, 2H), 4,51-4,68 (м, 1H), 5,69 (с, 2H), 6,69 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,79 (д, J=3,7 Гц, 1H), 8,79 (с, 1H).

Rf 8

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆) δ: -0,07 (с, 9H), 0,84 (т, J=8,0 Гц, 2H), 1,05-1,21 (м, 2H), 1,37-1,52 (м, 1H), 1,86-2,03 (м, 4H), 2,51-2,65 (м, 2H), 2,82 (дд, J=16,8, 8,2 Гц, 2H), 2,92 (дд, J=16,8, 5,3 Гц, 2H), 3,54 (т, J=8,2 Гц, 2H), 3,67-3,80 (м, 1H), 4,54-4,67 (м, 1H), 5,69 (с, 2H), 6,69 (д, J=4,1 Гц, 1H), 7,79 (д, J=4,1 Гц, 1H), 8,79 (с, 1H), 11,53 (уш.с, 1H).

ЖХ/МС: условия 1, время удерживания=4,59 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 565 [М+Н]⁺

ЖХ/МС (ESI^-) m/z; 563 [М-Н]^-

Rf 9

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,05 (с, 9H), 0,87-0,98 (м, 2H), 1,10-1,28 (м, 3H), 1,96-2,06 (м, 2H), 2,07-2,20 (м, 2H), 2,56-2,89 (м, 6H), 3,39-3,48 (м, 1H), 3,52-3,59 (м, 2H), 4,64-4,76 (м, 1H), 5,73 (с, 2H), 6,69 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,43 (д, J=4,1 Гц, 1H), 8,06 (с, 1H), 9,04 (с, 1H).

Rf 10

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,04 (с, 9H), 0,94 (т, J=8,3 Гц, 2H), 1,20-1,41 (м, 2H), 1,60-1,72 (м, 1H), 1,98-2,19 (м, 4H), 2,81 (кв, J=11,9 Гц, 2H), 3,56 (т, J=8,3 Гц, 2H), 4,34 (д, J=6,3 Гц, 2H), 4,67-4,82 (м, 1H), 5,74 (с, 2H), 6,66 (д, J=4,2 Гц, 1H), 7,09-7,10 (м, 1H), 7,44-7,45 (м, 2H), 8,13 (уш. с, 1H), 8,16 (с, 1H), 9,05 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,47 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 539 [М+Н]⁺

Rf 11

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,05 (с, 9H), 0,00 (с, 9H), 0,88-1,07 (м, 4H), 1,14-1,40 (м, 2H), 1,64-1,79 (уш. м, 1H), 1,94-2,15 (м, 4H), 2,70-2,89 (м, 2H), 3,51-3,65 (м, 4H), 3,73 (т, J=8,3 Гц, 2H), 4,62-4,77 (уш. м, 1H), 5,52 (с, 2H), 5,73 (с, 2H), 6,68 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,41 (д, J=3,6 Гц, 1H), 9,08 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 3, время удерживания=2,41 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 575 [М+Н]⁺

Rf 12

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,05 (с, 9H), -0,01 (с, 9H), 0,87-1,03 (м, 2H), 1,16-1,30 (м, 4H), 1,71-1,84 (уш. м, 1H), 1,93-2,06 (м, 4H), 2,33-2,50 (м, 2H), 2,68-2,84 (м, 2H), 3,34 (д, J=6,0 Гц, 2H), 3,51-3,60 (м, 2H), 3,62-3,76 (м, 4H), 4,60-4,74 (уш. м, 1H), 5,51 (с, 2H), 5,72 (с, 2H), 6,67 (д, J=3,9 Гц, 1H), 7,40 (д, J=3,9 Гц, 1H), 9,07 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,85 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 671[М+Н]⁺

Rf 13

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,06 (с, 9H), 0,89-0,94 (м, 2H), 3,40-3,56 (м, 8H), 5,68 (с, 2H), 6,68 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,44 (д, J=3,6 Гц, 1H), 8,29 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,62 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 370 [М+Н]⁺

Rf 14

¹Н-ЯМР (CD₃OD) δ: -0,05 (с, 9H), 0,91 (т, J=8,5 Гц, 2H), 3,51 (с, 1H), 3,54 (т, J=8,5 Гц, 2H), 5,69 (с, 2H), 6,78 (д, J=3,8 Гц, 1H), 7,44 (д, J=3,8 Гц, 1H), 9,14 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,93 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 335 [М+Н]⁺

Rf 15

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,14 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 428 [М+Н]⁺

Rf 16

Rf 16-1

ЖХ/МС: условия 4, время удерживания=2,75 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 335 [М+Н]⁺

Rf 16-2

ЖХ/МС: условия 4, время удерживания=3,12 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 396 [М+Н]⁺

Rf 17

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,06 (с, 9H), 0,90-0,96 (м, 2H), 1,41 (квд, J=12,3, 3,3 Гц, 2H), 1,66-1,71 (м, 1H), 1,86 (квд, J=12,3, 3,3 Гц, 2H), 2,12-2,17 (м, 2H), 2,30-2,33 (м, 2H), 3,53-3,59 (м, 2H), 3,63 (д, J=6,0 Гц, 2H), 4,93 (тт, J=12,3, 3,3 Гц, 1H), 5,80 (с, 2H), 6,43 (д, J=8,1 Гц, 1H), 6,78 (д, J=3,9 Гц, 1H), 7,43 (д, J=3,3 Гц, 1H), 7,76 (д, J=8,1 Гц, 1H), 9,40 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,16 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 428 [М+Н]⁺

Rf 18

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,06 (с, 9H), 0,90-0,96 (м, 2H), 1,67 (квд, J=12,9, 3,3 Гц, 2H), 1,91 (квд, J=12,9, 3,3 Гц, 2H), 2,34-2,52 (м, 5H), 3,53-3,60 (м, 2H), 4,94 (тт, J=11,8, 2,9 Гц, 1H), 5,80 (с, 2H), 6,44 (д, J=8,1 Гц, 1H), 6,74 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,44 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,73 (д, J=8,1 Гц, 1H), 9,40 (с, 1H), 9,78 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,30 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 426 [М+Н]⁺

Rf 19

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,06 (с, 9H), 0,88-0,96 (м, 2H), 1,33 (квд, J=12,6, 3,3 Гц, 2H), 1,57-1,71 (м, 1H), 1,84 (квд, J=12,6, 3,3 Гц, 2H), 2,11-2,21 (м, 2H), 2,23-2,33 (м, 2H), 2,62 (д, J=6,6 Гц, 2H), 3,52-3,59 (м, 2H), 3,83 (с, 2H), 4,91 (тт, J=11,9, 3,3 Гц, 1H), 5,80 (с, 2H), 6,43 (д, J=7,9 Гц, 1H), 6,77 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,32-7,37 (м, 5H), 7,42 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,76 (д, J=7,9 Гц, 1H), 9,40 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 1, время удерживания=3,19 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 517 [М+Н]⁺

Rf 20

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,06 (с, 9H), 0,89-0,96 (м, 2H), 1,29-1,56 (м, 3H), 1,85 (квд, J=12,3, 2,9 Гц, 2H), 2,10-2,19 (м, 2H), 2,26-2,35 (м, 2H), 2,71 (д, J=6,1 Гц, 2H), 3,53-3,59 (м, 2H), 4,92 (тт, J=11,9, 3,3 Гц, 1H), 5,79 (с, 2H), 6,42 (д, J=8,2 Гц, 1H), 6,77 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,42 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,75 (д, J=8,2 Гц, 1H), 9,40 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 1, время удерживания=2,89 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 427 [М+Н]⁺

Rf 21

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,06 (с, 9H), 0,90-0,96 (м, 2H), 1,33-1,46 (м, 3H), 1,53-1,63 (м, 1H), 1,78-1,93 (м, 2H), 2,14-2,23 (м, 2H), 2,27-2,36 (м, 2H), 2,58-2,96 (м, 4H), 3,40-3,51 (м, 1H), 3,53-3,60 (м, 2H), 4,88-4,99 (м, 1H), 5,80 (с, 2H), 6,44 (д, J=8,3 Гц, 1H), 6,77 (д, J=4,0 Гц, 1H), 7,43 (д, J=4,0 Гц, 1H), 7,75 (д, J=8,3 Гц, 1H), 9,41 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 1, время удерживания=4,40 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 548 [М+Н]⁺

Rf 22

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,06 (с, 9H), 0,89-0,97 (м, 2H), 1,30-1,48 (м, 3H), 1,54-1,67 (м, 1H), 1,77-1,94 (м, 2H), 2,14-2,23 (м, 2H), 2,26-2,36 (м, 2H), 2,58-2,96 (м, 4H), 3,40-3,51 (м, 1H), 3,52-3,61 (м, 2H), 4,93 (тт, J=11,8, 2,9 Гц, 1H), 5,80 (с, 2H), 6,43 (д, J=8,1 Гц, 1H), 6,77 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,43 (д, J,=3,7 Гц, 1H), 7,75 (д, J=8,1 Гц, 1H), 9,40 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,68 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 548 [М+Н]⁺

Rf 23

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,06 (с, 9H), 0,93 (т, J=8,4 Гц, 2H), 1,41-1,56 (м, 2H), 1,82-1,97 (м, 3H), 2,15-2,20 (м, 2H), 2,32-2,36 (м, 2H), 3,07 (с, 3H), 3,56 (т, J=8,4 Гц, 2H), 4,18 (д, J=6,0 Гц, 2H), 4,94 (тт, J=12,0, 3,3 Гц 1H), 5,80 (с, 2H), 6,43 (д, J=7,8 Гц, 1H), 6,73 (д, J=3,9 Гц, 1H), 7,43 (д, J=3,9 Гц, 1H), 7,72 (д, J=8,1 Гц, 1H), 9,39 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 4, время удерживания=2,42 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 506 [М+Н]⁺

Rf 24

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,06 (с, 9H), 0,90-0,95 (м, 2H), 1,39 (квд, J=12,3, 2,4 Гц, 2H), 1,83 (квд, J=12,3, 3,0 Гц, 2H), 1,95-2,07 (м, 3H), 2,09 (с, 3H), 2,26-2,30 (м, 2H), 3,53-3,59 (м, 2H), 4,02 (д, J=6,9 Гц, 2H), 4,91 (тт, J=12,0, 3,0 Гц, 1H), 5,80 (с, 2H), 6,42 (д, J=8,1 Гц, 1H), 6,74 (д, J=3,9 Гц, 1H), 7,17 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 7,43 (д, J=3,9 Гц, 1H), 7,70 (д, J=8,1 Гц, 1H), 9,39 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 4, время удерживания=2,62 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 492 [М+Н]⁺

Rf 25

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,80 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 510 [М+Н]⁺

Rf 26

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,05 (с, 9H), 0,93 (т, J=8,5 Гц, 2H), 1,33-1,45 (м, 2H), 1,76-1,91 (м, 3H), 2,11-2,15 (м, 2H), 2,27-2,31 (м, 2H), 2,43 (квт, J=10,5, 6,0 Гц, 2H), 3,39 (д, J=6,0 Гц, 2H), 3,56 (т, J=8,5 Гц, 2H), 3,68 (т, J=6,6 Гц, 2H), 4,88-4,96 (м, 1H), 5,81 (с, 2H), 6,43 (д, J=8,1 Гц, 1H), 6,78 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,44 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,76 (д, J=8,1 Гц, 1H), 9,41 (с, 1H).

Rf 27

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,06 (с, 9H), 0,93 (т, J=8,2 Гц, 2H), 1,37-1,57 (м, 2H), 1,78-1,95 (м, 3H), 2,12-2,23 (м, 2H), 2,26-2,37 (м, 2H), 2,77 (д, J=6,6 Гц, 2H), 3,56 (т, J=8,3 Гц, 2H), 3,65-3,76 (м, 1H), 3,77-3,87 (м, 1H), 4,01 (дт, J=6,0, 12,1 Гц, 1H), 4,85-4,99 (м, 1H), 5,80 (с, 2H), 6,43 (д, J=8,1 Гц, 1H), 6,77 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,43 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,74 (д, J=8,1 Гц, 1H), 9,40 (с, 1H).

Rf 28

Rf 28-1

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,93 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 335 [М+Н]⁺

Rf 28-2

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=3,45 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 406 [М+Н]⁺

Rf 29

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: -0,06 (с, 9H), 0,90-0,96 (м, 2H), 1,41 (квд, J=12,6, 3,3 Гц, 2H), 1,66-1,71 (м, 1H), 1,86 (квд, J=12,3, 3,3 Гц, 2H), 2,12-2,17 (м, 2H), 2,30-2,33 (м, 2H), 3,53-3,59 (м, 2H), 3,64 (д, J=6,0 Гц, 2H), 4,93 (тт, J=12,3, 3,3 Гц, 1H), 5,80 (с, 2H), 6,44 (д, J=8,1 Гц, 1H), 6,79 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,43 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,77 (д, J=8,1 Гц, 1H), 9,40 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=2,15 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 428 [М+Н]⁺

Пример 1

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆) δ: 1,00-1,21 (м, 2H), 1,34-1,52 (м, 1H), 1,80-2,07 (м, 4H), 2,48-2,69 (м, 4H), 2,72-2,98 (м, 2H), 3,63-3,81 (м, 1H), 4,55-4,72 (м, 1H), 6,62 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,59 (д, J=3,6 Гц, 1H), 8,73 (с, 1H), 10,80 (уш. с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=1,91 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 435 [М+Н]⁺

ЖХ/МС (ESI^-) m/z; 433[М-Н]^-

Пример 2

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆) δ: 1,16 (д, J=11,8 Гц, 2H), 1,52-1,68 (уш.м, 1Н), 1,89 (д, J=10,2 Гц, 4H), 2,49-2,63 (м, 4H), 3,22-3,43 (м, 2H), 3,60 (т, J=6,0 Гц, 2H), 4,55-4,69 (т, J=12,0 Гц, 1H), 6,59 (д, J=3,6 Гц,, 1H), 7,59 (д, J=3,6 Гц, 1H), 8,72 (с, 1H), 12,35 (уш. с, 1H).

ЖХ/МС: условия 3, время удерживания=1,30 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 411[М+Н]⁺

ЖХ/МС (ESI^-) m/z; 409[М-Н]^-

Пример 3

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆) δ: 1,23-1,39 (м, 2H), 1,45-1,59 (м, 1H), 1,84-1,99 (м, 2H), 2,00-2,14 (м, 4H), 2,56-2,69 (м, 2H), 2,79-2,98 (м, 2H), 3,66-3,79 (м, 1H), 4,83-4,95 (м, 1H), 6,20 (д, J=8,1 Гц, 1H), 6,80 (дд, J=3,3, 1,8 Гц, 1H), 7,58 (т, J=3,3 Гц, 1H), 8,17 (д, J=8,1 Гц, 1H), 9,02 (с, 1H), 12,32 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=1,83 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 418 [М+Н]⁺

ЖХ/МС (ESI^-) m/z; 416 [М-Н]^-

Пример 4

¹Н-ЯМР (CD₃OD) δ: 1,41-1,55 (м, 2H), 1,86-2,05 (м, 5H), 2,10 (с, 3H), 2,23-2,28 (м, 2H), 4,06 (д, J=7,2 Гц, 2H), 5,05-5,15 (м, 1H), 6,45 (д, J=7,8 Гц, 1H), 6,94 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,32 (с, 1H), 7,44 (с, 1H), 7,56 (д, J=3,6 Гц, 1H), 8,27 (д, J=8,1 Гц, 1H), 9,20 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=1,72 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 362 [М+Н]⁺

Пример 5

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,35-1,47 (м, 2H), 1,75-1,91 (м, 3H), 2,10-2,22 (м, 2H), 2,30-2,40 (м, 2H), 3,58 (д, J=5,9 Гц, 2H), 3,87 (кв, J=8,6 Гц, 2H), 4,92-5,06 (м, 1H), 6,47 (д, J=7,9 Гц, 1H), 6,77-6,82 (м, 1H), 7,47-7,50 (м, 1H), 7,79 (д, J=8,3 Гц, 1H), 9,44 (с, 1H), 11,90 (уш. с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=1,97 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 380 [М+Н]⁺

Пример 6

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=1,99 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 394 [М+Н]⁺

Пример 7

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆) δ: 1,29-1,49 (м, 2H), 1,67-2,16 (м, 7H), 2,95-3,24 (м, 2H), 3,64 (дд, J=6,5, 2,3 Гц, 2H), 4,47-4,61 (м, 1H), 4,82-4,97 (м, 1H), 6,21 (д, J=7,8 Гц, 1H), 6,80 (д, J=3,3 Гц, 1H), 7,58 (д, J=2,7 Гц, 1H), 8,16 (д, J=8,4 Гц, 1H), 9,01 (с, 1H), 12,31 (с, 1H).

ЖХ/МС: условия 2, время удерживания=1,88 мин.

ЖХ/МС (ESI⁺) m/z; 419 [М+Н]⁺

ЖХ/МС (ESI^-) m/z; 417 [М-Н]^-

Фармакологическая оценка

Далее будут описаны фармакологические испытания соединений по настоящему изобретению.

1. Ферментный анализ

Проводят количественное определение JAK ингибиторной активности соединений по настоящему изобретению.

Ферменты (JAK1, JAK2, JAK3 и Tyk2) приобретают в Carna Biosciences Inc.

В качестве субстрата для ферментов (далее упоминаемого как субстрат) используют LANCE Ultra ULight-JAK-1 (Tyr1023) Peptide (производства PerkinElmer Co. Ltd.).

В качестве антитела для обнаружения фосфорилирования субстрата используют антитело LANCE Ultra Europium-антифосфотирозин (PT66) (производства PerkinElmer Co. Ltd.).

Другие реагенты приобретают у следующих поставщиков.

Аденозинтрифосфата (АТФ): Sogma-Aldrich

4-(2-Гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота (HEPES): DOUJINDO LABORATORIES

Простой гликовевый эфир диаминтетрауксусно кислоты (glycol ether diamine tetraacetic acid - EGTA): DOUJINDO LABORATORIES

Хлорид магния (MgCl₂): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Дитиотреитол (dithiothreitol - DTT): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Tween 20: Sigma-Aldrich

Этилендиаминтетрауксусная кислота (ethylenediaminetetraacetic acid - EDTA): DOUJINDO LABORATORIES.

Соединения по настоящему изобретению, ферменты (JAK1, JAK2, JAK3 и Tyk2), субстрат и АТФ используют в испытаниях после разбавления буфером для анализа.

Композиция буфера для анализа представлена ниже.

HEPES (рН 7,5): 50 мМ

EGTA: 1 мм

MgCl₂: 10 мМ

DTT: 2 мM

Tween 20: 0,01 (масс./масс.)

Разбавляют до таких концентраций с переносом на луночный микропланшет, которые будут описаны ниже, в таких объемах, при которых указанные ниже конечные концентрации будут достигнуты на луночном планшете.

Каждое соединение используют в шести последовательных концентрациях соединений, среди которых следующие 11 значений: 1 мкМ, 0,3 мкM, 0,1 мкМ, 0,03 мкМ, 0,01 мкМ, 0,003 мкМ, 0,001 мкМ, 0,0003 мкМ, 0,0001 мкМ, 0,00003 мкМ и 0,00001 мкМ.

Концентрации ферментов и концентрации АТФ в соответствующем ферменте (JAK1, JAK2, JAK3 и Tyk2) в анализе являются следующими:

Фермент анализа JAK1; концентрация фермента равна 0,5 мкг/мл, концентрация АТФ равна 70 мкМ.

Фермент анализа JAK2; концентрация фермента равна 0,013 мкг/мл, концентрация АТФ равна 10 мкМ.

Фермент анализа JAK3; концентрация фермента равна 0,020 мкг/мл, концентрация АТФ равна 3 мкМ.

Фермент анализа Tyk21; концентрация фермента равна 0,25 мкг/мл, концентрация АТФ равна 20 мкМ.

Концентрация субстрата для ферментов равна 25 нМ.

Концентрация EDTA равна 15 мМ.

Концентрация PТ66 равна 2 нМ.

Разбавленные растворы соединений и ферментов распределяют в лунки 384-луночного черного планшета (производства Greiner bio-one) и предварительно инкубируют при комнатной температуре в течение 5 минут.

Затем последовательно добавляют раствор субстрата и разбавленный раствор АТФ и инкубируют планшет при комнатной температуре в течение 30 минут.

Затем последовательно добавляют разбавленный раствор EDTA и РТ66 и инкубируют планшет при комнатной температуре в течение 1 часа.

Количественное определение флуоресценции проводят с помощью ARVO-HTS, и из графика логарифм концентрации соединения - ингибиторная активность вычисляют значение IC₅₀.

Результаты биологических испытаний соединений примеров синтеза с 1 по 7 в отношении JAK1, JAK2, JAK3 и Tyk2 представлены в таблице 1.

Как показано ниже в таблице 1, соединения по настоящему изобретению обладают подходящей ингибиторной активностью в отношении JAK ферментов.

[Таблица 1]

Прим. № IC₅₀ (мкМ) JAK1 IC₅₀ (мкМ) JAKl IC₅₀ (мкМ) JAK3 IC₅₀ (мкМ) Tyk 2 1 0,00099 0,0046 0,015 0,022 2 0,00035 0,0015 0,0029 0,026 3 0,0017 0,0051 0,010 0,018 4 0,00041 0,0019 0,071 0,039 5 0,00059 0,0020 0,0027 0,010 6 0,00068 0,0016 0,0025 0,019 7 0,00074 0,0020 0,0051 0,011

2. Количественное определение передачи сигнала в цельной крови крысы

Ингибирующую активность соединений по настоящему изобретению, полученных в примерах синтеза 1 и 2, в отношении цитокиновой передачи сигнала с помощь JAK количественно определяют посредством количественного определения STAT фосфорилирования с использованием цельной крови крысы.

Самок крыс Льюиса (Lewis) приобретают в CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN, INC.

Крыc IL-6 приобретают в PeproTech.

FITC (флуресцеинизотиоцианат)-меченное анти-CD3 антитело (FITC-CD3) приобретают в eBioscience.

BD Phosflow Lyse/Fix Buffer, BD Phosflow Perm Buffer III, BD Pharmingen Stain Buffer и BD Phosflow STAT-1 (pY701) PE (R-Phycoerythrin)-флуоресцентно меченое антитело (далее по тексту BD Phosflow STAT-1) приобретают в BD (Becton, Dickinson and Company).

Разбавляют при таких концентрациях с переносом в пробирки, которые будут описаны ниже, в таких объемах, при которых указанные ниже конечные концентрации будут достигнуты в пробирках.

Каждое соединение используют в трех последовательных концентрациях, выбранных из 1 мкМ, 0,1 мкМ и 0,01 мкМ или 10 мкМ, 1 мкМ и 0,1 мкМ.

Концентрация IL-6 крысы равна 100 нг/мл.

Концентрация FITC-CD3 равна 1 мкг/мл.

Кровь забирают из нижней полой вены самок крыс Льюиса. Кровь и соединение вводят в каждую пробирку блока анализа Костара (Costar) и инкубируют при 37°С в течение 15 минут, затем инкубируют с FITC-CD3 при 37°С в течение 15 минут, инкубируют с IL-6 крысы при 37°С в течение 15 минут и инкубируют не менее 10 раз с BD Phosflow Lyse/Fix Buffer в качестве крови при 37°С в течение 12 минут. Центробежное разделение проводят при 5,884 м/с² в течение 6 минут с помощью центробежного сепаратора для осаждения клеток и супернатант удаляют.

Клеточные пеллеты промывают 1 мл фосфатно-буферного раствора (PBS), затем инкубируют с 0,6 мл BD Phosflow Perm Buffer III на льду в течение 30 минут, центрифугируют при 5,884 м/с2 в течение 6 минут с помощью центробежного сепаратора для осаждения клеток и супернатанты удаляют.

Клеточные пеллеты промывают 0,3 мл BD Pharmingen Stain буфера и инкубируют с 0,1 мл BD Pharmingen Stain Buffer и 10 мкл BD Phosflow STAT-1 при комнатной температуре в течение 30 минут. После добавления 0,1 мл BD Pharmingen Stain Buffer клетки центрифугируют при 5,884 м/с² в течение 6 минут с помощью центробежного сепаратора для осаждения клеток и супернатанты удаляют.

Клеточные пеллеты промывают 0,3 мл BD Pharmingen Stain Buffer и добавляют 0,12 мл BD Pharmingen Stain Buffer. Ингибирование цитокиновой передачи сигнала количественно определяют с помощью FACS Cantoll (производства BD) обнаружением FITC-меченых CD3 положительных Т-лимфоцитов и определением количества фосфатированного STAT-1 белка в клетках при РЕ флуоресценции. Из графика логарифм концентрации соединения-ингибиторная активность рассчитывают значение IC₅₀. Результаты испытания ингибиторной активности соединений примеров синтеза 1 и 2 в отношении передачи сигнала в испытаниях на цельной крови крыс представлены в таблице 2.

[Таблица 2]

Прим. № IC₅₀ (мкМ) 1 0,39 2 0,27

Превосходная ингибиторная активность в цельной крови крыс является подходящей для высокой эффективности в отношении заболеваний, для лечения которых ингибирование JAK является эффективным, в частности для ревматоидного артрита.

Соединения по настоящему изобретению показывают превосходную ингибиторную активность в отношении JAK-передачи сигнала цитокиновой стимуляцией в цельной крови крыс посредством JAK-ингибирующей активности.

Кроме того, в таблице 3 представлены результаты испытания соединения А (пример^b 120), соединения B (пример^b 116), соединения С (пример^b 122) и соединения D (пример^b 127), раскрытых в WO 2013/024895, в цельной крови крысы.

[Таблица 3]

Соединение IC₅₀ (мкМ) A 2,4 B 1,3 C 1,1 D 2,7

3. Количественное определение передачи сигнала в цельной крови человека

Ингибирующую активность соединений по настоящему изобретению, полученных в примерах синтеза с 3 по 7, в отношении цитокиновой передачи сигнала с помощь JAK количественно определяют с помощью STAT анализа фосфорилирования с использованием цельной крови человека.

Цельную кровь человека собирают от здоровых людей.

IL-6 человека приобретают в компании R&D Systems.

FITC (флуресцеинизотиоцианат)-меченное анти-CD3 антитело человека (FITC-hCD3) приобретают в BD (Becton, Dickinson and Company).

BD Phosflow Lyse/Fix Buffer, BD Phosflow Perm Buffer III, BD Pharmingen Stain Buffer и BD Phosflow STAT-1 (pY701) PE (R-Phycoerythrin)-флуоресцентно меченое антитело (далее - BD Phosflow STAT-1) приобретают в BD (Becton, Dickinson and Company).

Разбавления проводят до таких концентраций и распределяют в пробирки, которые будут описаны позже, и в таких объемах, при которых в пробирках будут достигнуты указанные ниже конечные концентрации.

Каждое соединение используют в шести концентрациях: 3 мкМ, 1,5 мкМ, 0,75 мкМ, 0,38 мкМ, 0,19 мкМ и 0,093 мкМ; в шести концентрациях: 2 мкМ, 1 мкМ, 0,5 мкМ, 0,25 мкМ, 0,13 мкМ и 0,063 мкМ, или в шести концентрациях: 10 мкМ, 5 мкМ, 2,5 мкМ, 1,25 мкМ, 0,63 мкМ и 0,31 мкМ.

Концентрация IL-6 человека равна 100 нг/мл.

Кровь человека и соединение вводят в каждую пробирку блока анализа Костара и инкубируют при 37°С в течение 30 минут, затем инкубируют с IL-6 человека при 37°С в течение 15 минут и инкубируют не менее 10 раз с BD Phosflow Lyse/Fix Buffer в качестве крови при 37°С в течение 12 минут. Центробежное разделение проводят при 5,884 м/с² в течение 6 минут с помощью центробежного сепаратора для осаждения клеток и супернатанты удаляют.

Клеточные пеллеты промывают 1 мл фосфатно-буферного раствора (PBS), затем инкубируют с 0,6 мл BD Phosflow Perm Buffer III на льду в течение 30 минут, центрифугируют при 5,884 м/с² в течение 6 минут с помощью центробежного сепаратора для осаждения клеток и супернатанты удаляют.

Клеточные пеллеты промывают 0,3 мл BD Pharmingen Stain Buffer и инкубируют с 0,1 мл BD Pharmingen Stain Buffer, 10 мкл BD Phosflow STAT-1 и 5 мкл FITC-hCD3 при комнатной температуре в течение 30 минут. После добавления 0,1 мл BD Pharmingen Stain Buffer клетки центрифугируют при 5,884 м/с² в течение 6 минут с помощью центробежного сепаратора для осаждения клеток и супернатанты удаляют.

Клеточные пеллеты промывают 0,3 мл ВD Pharmingen Stain Buffer и добавляют 0,12 мл BD Pharmingen Stain Buffer. Ингибирование цитокиновой передачи сигнала количественно определяют с помощью FACS Cantoll (производства BD) обнаружением FITC-меченных CD3 положительных Т-лимфоцитов и обнаружением количества фосфатированного STAT-1 белка в клетках по PE флуоресценции. Из графика логарифм концентрации соединения-ингибиторная активность вычисляют значение IC₅₀. Результаты испытания ингибиторной активности в отношении передачи сигнала в цельной крови человека соединений примеров синтеза с 3 по 7 представлены в таблице 4 ниже.

[Таблица 4]

Пример № IC₅₀ (мкМ) 3 0,44 4 0,30 5 0,17 6 0,13 7 0,13

Превосходная ингибиторная активность в цельной крови человека в испытании передачи сигнала является подходящей высокой эффективности для лечения заболеваний, при которых ингибирование JAK является эффективным, в частности ревматоидного артрита.

Соединения по настоящему изобретения показывают превосходную ингибирующую активность в отношении в отношении JAK-передачи сигнала цитокиновой стимуляцией в цельной крови человека посредством JAK-ингибирующей активности.

Кроме того, в таблице 5 представлены результаты исследования ингибирования передачи сигнала в цельной крови человека соединения Е (пример^b 20), соединения F (пример^b 69), соединения G (пример^b 70), соединения H (пример^b 106), соединения I (пример^b 107) и соединения J (пример^b 86), раскрытых в WO 2013/024895.

[Таблица 5]

Соединение IC₅₀ (мкM) E 1,3 F 5,9 G 6,5 H >10 I >10 J 7,6

4. Ингибирование полиферации клеточной линии эритролейкоза

Ингибиторная активность соединений по настоящему изобретению на клеточную пролиферацию, проводимую JAK сигналом, может оцениваться с использованием клеточной линии эритролейкоза человека TF-1.

TF-1 клетки (ATCC - Американская коллекция типовых культур) могут распространяться в RPMI1640 среде, содержащей 5% фетальной бычьей сыворотки (далее по тексту FBS) и 1 нг/мл GM-CSF (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор), с использованием СО₂ инкубатора (5% об. СО₂, 37°С). При анализе TF-1 клетки, промытые PBS (фосфатно-буферный раствор), снова суспендируют в RPMI 1640 среде, содержащей 5% FBS, и высевают на 96-луночный культуральный планшет при 1×10⁴ клеток/лунка. Затем в каждую лунку планшета добавляют соединение и клетки инкубируют при 37°С в течение 30 минут. Затем добавляют цитокин, такой как IL-4 или IL-6, и клетки инкубируют в СО₂ инкубаторе (5% об. CO₂, 37°С) в течение 3-х дней.

Пролиферацию клеток можно анализировать с использованием WST-8 реагента (Kishida Chemical Co., Ltd.) в соответствии с инструкциями производителя. WST-8 реагент добавляют в каждую лунку культурального планшета и инкубируют клетки в СО₂-инкубаторе (5% об. CO₂, 37°С) в течение 4-х часов. Образованный формазановый пигмент обнаруживают измерением оптической плотности при 450 нм с помощью микропланшет-ридера. Из графиков логарифм концентрации соединения-ингибиторная активность вычисляют значения IC₅₀ соединений.

5. Свойства абсорбции при пероральном введении

Соединение, обладающее свойством пероральной абсорбции, является предпочтительным для лечения заболеваний, при которых ингибирование JAK является эффективным, и свойство пероральной абсорбции соединений по настоящему изобретению может количественно определяться с использованием крыс следующим образом.

Соединение суспендируют в 0,5% растворе метилцеллюлозы в концентрации 0,6 мг/мл, и суспензию принудительно вводят перорально самкам крыс Льюиса (Charles River Laboratories JAPAN INC.) с помощью иглы для введения питания в дозе 3 мг/кг/5 мл. Затем после введения соединения (спустя от 0,5 до 8 часов) производят забор крови через яремную вену с использованием гепарина в качестве антикоагулянта. Собранную кровь центрифугируют при 17,652 м/с² в течение 10 минут с помощью центробежного сепаратора для получения плазмы. Плазму анализируют с помощью метода жидкостной хроматографии тандемной масс-спектрометрии (ЖХ/МС/МС, производства Waters) вычисления изменения концентрации соединения в плазме после перорального введения (спустя от 0,5 до 8 часов).

6. Влияние на коллаген-индуцированную модель артрита у крыс

Для подтверждения терапевтического активности конкретно в отношении ревматоидного артрита среди заболеваний, для лечения которых эффективно ингибирование JAK в экспериментальной модели на животных, можно использовать модель коллаген-индуцированного артрита у крыс (Prostaglandin & other Lipid Mediators, 2001,66, pp. 317-327) следующим образом.

Раствор бычьего коллагена (Bovine II types collagen) (Chondrex, Inc.) и неполный адъювант Фрейнда (Difco) смешивают в равных количествах и эмульгируют для получения иммунного раствора. Затем иммунный раствор внутрикожно вводят самкам крыс Льюиса (CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN INC.) в 4 порциях на спине и в одной порции на корневой части хвоста в дозе 100 мкл/части с помощью шприца Гамильтона. Через 7 дней после введения иммунного раствора аналогичным образом снова внутрикожно вводят иммунный раствор.

Соединение, подлежащее введению, суспендируют в 0,5% растворе метилцеллюлозы в концентрации, необязательно определяемой значением IC₅₀ ингибирования цитокиновой передачи сигнала, полученной выше в анализе передачи сигнала в цельной крови крыс (пункт 2) и концентрацией соединения в плазме крови, полученной в опыте определения свойства абсорбции при пероральном введении (пункт 5). Суспензию соединения, полученную таким образом, вводят перорально ежедневно после второго введения иммунного раствора.

Толщину опухания задних лапы в период от 2 до 3 недель после второго введения иммунного раствора измеряют штангельциркулем для расчета степени ингибирования артрита соединением.

Далее представлены примеры препаратов соединений по настоящему изобретению. В примерах препаратов с 1 по 5 термин «Соединение (А)» означает соединение, представленное формулой (I), формулой (II) или формулой (III).

ПРИМЕР ПРЕПАРАТА 1

Получают гранулированный препарат, содержащий следующие ингредиенты:

Ингредиенты Соединение (А) 10 мг Лактоза 700 мг Кукурузный крахмал 274 мг HPC-L 16 мг Всего 1000 мг

Соединение (A) и лактозу просеивают через сито 60 меш. Кукурузный крахмал просеивают через сито 120 меш. Указанные компоненты смешивают в блендере V-типа. Порошкообразную смесь замешивают с водным раствором гидроксипропилцеллюлозы низкой вязкости (low-viscosity hydroxypropylcellulose - HPC-L), гранулируют (экструзионное гранулирование, размер гранул 0,5-1 мм) и сушат. Полученные гранулы просеивают через вибрационное сито (12/60 меш) с получением гранулированного препарата.

ПРИМЕР ПРЕПАРАТА 2

Получают порошкообразный препарат для капсулирования, содержащий следующие ингредиенты.

Ингредиенты Соединение (А) 10 мг Лактоза 79 мг Кукурузный крахмал 10 мг Стеарат магния 1 мг Всего 100 мг

Соединение (А) и лактозу просеивают через сито 60 меш. Кукурузный крахмал просеивают через сито 120 меш. Указанные компоненты смешивают со стеаратом магния в блендере V-типа. 10% порошок вводят в твердые желатиновые капсулы № 5 массой 100 мг каждая.

ПРИМЕР ПРЕПАРАТА 3

Получают гранулированный препарат для капсулирования, содержащий следующие ингредиенты.

Ингредиенты Соединение (А) 15 мг Лактоза 90 мг Кукурузный крахмал 42 мг HPC-L 3 мг Всего 150 мг

Соединение (А) и лактозу просеивают через сито 60 меш. Кукурузный крахмал просеивают через сито 120 меш. Указанные компоненты смешивают в блендере V-типа. Порошкообрбазную смесь замешивают с водным раствором гидроксипропилцеллюлозы низкой вязкости (HPC-L), гранулируют и сушат. Полученные сухие гранулы просеивают через вибрационно сито (12/60 меш). Гранулы вводят в твердые желатиновые капсулы № 4 массой 150 мг каждая.

ПРИМЕР ПРЕПАРАТА 4

Получают препарат в форме таблетки, содержащий следующие ингредиенты.

Ингредиенты Соединение (А) 10 мг Лактоза 90 мг Микрокристаллическая целлюлоза 30 мг Стеарат магния 5 мг СМС-Na 15 мг Всего 150 мг

Соединение (А), лактозу, микрокристаллическую целлюлозу и СМС-Na (Na соль карбоксиметилцеллюлозы) просеивают через сито 60 меш и смешивают. Порошкообразную смесь смешивают со стеаратом магния с получением объемной порошкообразной смеси. Порошкообразную смесь прессуют непосредственно в таблетки массой 150 мг.

ПРИМЕР ПРЕПАРАТА 5

Препарат для внутривенного введения приготавливают следующим образом.

Соединение (А) 100 мг Насыщенный раствор глицерида жирной кислоты 1000 мл

Растворы представленной выше композиции обычно вводят пациенту внутривенно со скоростью 1 мл в минуту.

ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ

Соединения по настоящему изобретению обладают превосходной ингибирующей активностью в отношении JAK и могут применяться для предотвращения, лечения или достижения положительной динамики аутоиммунных заболеваний, в особенности ревматоидного артрита, воспалительных заболеваний, аллергических заболеваний, рака и лейкоза.

Полное описание Заявки на Патент Японии № 2014-100712, заявленной 14 мая 2014 года, включая описание, формулу изобретения и сущность изобретения, включено в данное описание во всей полноте в виде ссылки.

Изобретение относится к новому трициклическому соединению (вариантам), соответствующему общей формуле I, II или III, или его фармацевтически приемлемой соли, которое обладает ингибирующей активностью в отношении JAK. Соединения могут быть использованы в качестве профилактического, терапевтического средства или средства для облегчения заболеваний, для которых эффективным является ингибирование JAK, в частности, для лечения ревматоидного артрита. Трициклическое соединение соответствует формуле (I), (II) или (III)

. В соединении формулы (I) А¹ представляет собой С_3-7 циклоалкиленовую группу, L¹ представляет собой С_1-6 алкиленовую группу, Х¹ представляет собой O или NH, и когда Х¹ представляет собой О, R¹ представляет собой C_1-6 галогеналкильную группу, циано-С_1-6 галогеналкильную группу или циано-С_1-6 алкильную группу, и когда Х¹ представляет собой NH, R¹ представляет собой циано-C_1-6 галогеналкильную группу или циано-С_1-6 алкильную группу. В соединении формулы (II) А² представляет собой С_3-7 циклоалкиленовую группу, L² представляет собой С_1-6 алкиленовую группу, R² представляет собой 5-членную гетероароматическую группу, содержащую 2 атома азота в кольце (гетероциклическая группа может быть замещенной одним или двумя одинаковыми или различными заместителями, независимо выбранными из группы, включающей атомы галогенов, C_1-4 алкильные группы и С_1-4 галогеналкильные группы)]. В соединении формулы (III) А³ представляет собой С_3-7 циклоалкиленовую группу, L³ представляет собой С_1-6 алкиленовую группу, Х³ представляет собой O или NH, и когда Х³ представляет собой О, R³ представляет собой C_1-6 галогеналкильную группу, циано-С_1-6 галогеналкильную группу или циано-C_1-6 алкильную группу, и когда Х³ представляет собой NH, R³ представляет собой циано-С_1-6 галогеналкильную группу или циано-C_1-6 алкильную группу]. 14 н. и 24 з.п. ф-лы, 5 табл., 41 пр.

1. Соединение, представленное формулой (I):

[где А¹ представляет собой С_3-7 циклоалкиленовую группу,

L¹ представляет собой С_1-6 алкиленовую группу,

Х¹ представляет собой O или NH, и

когда Х¹ представляет собой О, R¹ представляет собой C_1-6 галогеналкильную группу, циано-С_1-6 галогеналкильную группу или циано-С_1-6 алкильную группу, и

когда Х¹ представляет собой NH, R¹ представляет собой циано-C_1-6 галогеналкильную группу или циано-С_1-6 алкильную группу], или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п. 1, в котором L¹ представляет собой метиленовую группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

3. Соединение по п. 1 или 2, в котором А¹ представляет собой циклогександиильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

4. Соединение по любому из пп. 1-3, в котором Х¹ представляет собой О, или его фармацевтически приемлемая соль.

5. Соединение по п. 4, в котором R¹ представляет собой С_1-4 галогеналкильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

6. Соединение по п. 4, в котором R¹ представляет собой 3,3,3-трифторпропильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

7. 1-{транс-4-[(3,3,3-Трифторпропокси)метил]циклогексил}-1Н-пирроло[3',2':5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(3H,7H)-дион, или его фармацевтически приемлемая соль.

8. Соединение по любому из пп. 1-3, в котором Х¹ представляет собой NH, или его фармацевтически приемлемая соль.

9. Соединение по п. 8, в котором R¹ представляет собой циано-С_1-4 галогеналкильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

10. Соединение по п. 8, в котором R¹ представляет собой 3-циано-1,1,1-трифтор-2-ильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

11. 3-({[транс-4-(2,4-Диоксо-2,3,4,7-тетрагидро-1H-пирроло[3',2':5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4- трифторбутаннитрил, или его фармацевтически приемлемая соль.

12. (R)-3-({[транс-4-(2,4-Диоксо-2,3,4,7-тетрагидро-1H-пирроло[3',2':5,6]пиридо[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклогексил]метил}амино)-4,4,4-трифторбутаннитрил, или его фармацевтически приемлемая соль.

13. Соединение, представленное формулой (II):

[где А² представляет собой С_3-7 циклоалкиленовую группу,

L² представляет собой С_1-6 алкиленовую группу,

R² представляет собой 5-членную гетероароматическую группу, содержащую 2 атома азота в кольце (гетероциклическая группа может быть замещенной одним или двумя одинаковыми или различными заместителями, независимо выбранными из группы, включающей атомы галогенов, C_1-4 алкильные группы и С_1-4 галогеналкильные группы)], или его фармацевтически приемлемая соль.

14. Соединение по п. 13, в котором L² представляет собой метиленовую группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

15. Соединение по п. 13 или 14, в котором А² представляет собой циклогександиильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

16. Соединение по любому из пп. 13-15, в котором R² представляет 5-членную гетероароматическую группу, содержащую два атома азота в кольце (гетероциклическая группа может быть замещенной одним или двумя одинаковыми или различными заместителями, независимо выбранными из группы, включающей атомы галогенов, метильные группы и трифторметильные группы), или его фармацевтически приемлемая соль.

17. Соединение по любому из пп. 13-16, в котором R² представляет собой пиразолильную группу (пиразолильная группа может быть замещенной одним или двумя одинаковыми или различными заместителями, независимо выбранными из группы, включающей атомы галогенов, метильную и трифторметильную группы), или его фармацевтически приемлемая соль.

18. 1-{транс-4-[(4-Метилпиразол-1-ил)метил]циклогексил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он, или его фармацевтически приемлемая соль.

19. Соединение, представленное формулой (III):

[где А³ представляет собой С_3-7 циклоалкиленовую группу,

L³ представляет собой С_1-6 алкиленовую группу,

Х³ представляет собой O или NH, и

когда Х³ представляет собой О, R³ представляет собой C_1-6 галогеналкильную группу, циано-С_1-6 галогеналкильную группу или циано-C_1-6 алкильную группу, и

когда Х³ представляет собой NH, R³ представляет собой циано-С_1-6 галогеналкильную группу или циано-C_1-6 алкильную группу], или его фармацевтически приемлемая соль.

20. Соединение по п. 19, в котором L³ представляет собой метиленовую группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

21. Соединение по п. 19 или 20, в котором А³ представляет собой циклогександиильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

22. Соединение по любому из пп. 19-21, в котором Х³ представляет собой О, или его фармацевтически приемлемая соль.

23. Соединение по п. 22, в котором R³ представляет С_1-4 галогеналкильную группу или циано-С_1-6 галогеналкильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

24. Соединение по п. 22, в котором R³ представляет собой 2,2,2-трифторэтильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

25. Соединение по п. 22, в котором R³ представляет собой 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу или 2-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

26. 1-{транс-4-[(2,2,2-Трифторэтокси)метил]циклогексил}-1Н-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он, или его фармацевтически приемлемая соль.

27. 1-{транс-4-[(3,3,3-Трифторпропокси)метил]циклогексил}-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-4(7H)-он, или его фармацевтически приемлемая соль.

28. 4,4,4-Трифтор-3-{[транс-4-(4-оксо-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метокси}бутаннитрил, или его фармацевтически приемлемая соль.

29. (R)-4,4,4-Трифтор-3-{[транс-4-(4-оксо-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метокси}бутаннитрил, или его фармацевтически приемлемая соль.

30. Соединение по любому из пп. 19-21, в котором Х³ представляет собой NH, или его фармацевтически приемлемая соль.

31. Соединение по п. 30, в котором R³ представляет собой циано-С_1-4 галогеналкильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

32. Соединение по п. 30, в котором R³ представляет собой 3-циано-1,1,1-трифторпропан-2-ильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль.

33. 4,4,4-Трифтор-3-({[транс-4-(4-оксо-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метил}амино)бутаннитрил, или его фармацевтически приемлемая соль.

34. (R)-4,4,4-Трифтор-3-({[транс-4-(4-оксо-4,7-дигидро-1H-пирроло[2,3-h][1,6]нафтиридин-1-ил)циклогексил]метил}амино)бутаннитрил, или его фармацевтически приемлемая соль.

35. Соединение по любому из пп.1-34 или его фармацевтически приемлемая соль, обладающее свойствами ингибитора JAK, для применения в качестве активного ингредиента для получения лекарственного средства.

36. Соединение по любому из пп.1-34 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве профилактического, терапевтического средства или средства для облегчения заболеваний, для лечения которых ингибирование JAK является эффективным.

37. Соединение по любому из пп.1-34 или его фармацевтически приемлемая соль для лечения ревматоидного артрита.

38. Лекарственное средство, обладающее свойствами ингибитора JAK, содержащее соединение по любому из пп. 1-34 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.